FR3147503A1 - Nouvelles utilisations d’un extrait aqueux de Porphyridium cruentum et composition orale ou sublinguale le comprenant - Google Patents

Abstract

Nouvelles utilisations d’un extrait aqueux de Porphyridium cruentum et composition orale ou sublinguale le comprenant L’invention a pour objet une composition orale ou sublinguale comprenant un extrait aqueux de Porphyridium cruentum . Un autre objet est relatif à l’utilisation d’un extrait aqueux de Porphyridium cruentum ou une composition le comprenant pour augmenter la récupération et/ou l’endurance musculaire et/ou pour augmenter la relaxation musculaire. Un objet concerne encore un extrait aqueux de P. cruentum ou une composition le comprenant pour son utilisation pour diminuer la douleur musculaire et/ou pour diminuer l’anxiété et/ou le stress. Enfin un dernier objet concerne une méthode de traitement nutraceutique non thérapeutique comprenant l’administration par voie orale ou sublinguale à des mammifères en ayant besoin, d’un extrait aqueux de Porphyridium cruentum ou d’une composition le comprenant, pour augmenter la récupération et/ou l’endurance musculaire et/ou pour augmenter la relaxation musculaire.

Description

Nouvelles utilisations d’un extrait aqueux dePorphyridium cruentumet composition orale ou sublinguale le comprenant

La présente invention est relative à de nouvelles utilisations d’un extrait aqueux dePorphyridium cruentumpour augmenter la récupération et/ou l’endurance musculaire, et/ou pour diminuer les courbatures et/ou pour augmenter la relaxation musculaire, ainsi qu’à une composition orale ou sublinguale le comprenant.

En réponse à un exercice physique, les muscles squelettiques en contraction synthétisent et libèrent des cytokines pro-inflammatoires dans l'interstitium ainsi que dans la circulation systémique, dont les interleukines 6 (IL6). Si plusieurs sources d'IL6 sont connues, les muscles contractants contribuent à la majeure partie des IL6 présentes dans la circulation en réponse à l'exercice physique. Différents mécanismes peuvent expliquer leur synthèse en réponse aux contractions musculaires : modifications de l'homéostasie du calcium, altération de la biodisponibilité du glucose, synthèse d'espèces réactives de l'oxygène (ROS). Ces mécanismes sont capables d'activer des facteurs de transcription connus pour réguler la synthèse des IL6. Par ailleurs, via leurs effets sur le foie, le tissu adipeux, l'axe hypothalamo-hypophyso-surrénalien et les leucocytes, les IL6 peuvent moduler la réponse immunologique et métabolique à l'exercice physique. Toutefois, un exercice physique prolongé impliquant une masse musculaire importante dans l'activité contractile s’avère nécessaire pour produire une réponse marquée des IL6. En outre, l'entraînement permet de réduire le niveau de production basal des IL6 de même que l'intensité de la réponse des IL6 à l'exercice physique en neutralisant plusieurs stimuli potentiels des IL6.

L’exercice physique libère par ailleurs d’autres cytokines pro-inflammatoires telles que les IL17, IL10 ou encore IL1-α. Ces interleukines sont elles aussi présentes dans les muscles et le plasma.

A l’inverse, les interleukines IL4 sont des cytokines anti-inflammatoires et une augmentation de leur concentration dans les muscles va permettre d’améliorer la récupération musculaire après l’effort.

Par ailleurs, un effort physique, notamment s’il est intense, va entrainer une augmentation de la production de lactate dans les muscles. Le lactate va alimenter dans un premier temps le métabolisme aérobie en se transformant en pyruvate mais un effort physique prolongé peut entrainer une production trop importante de lactate et par conséquent une acidose musculaire. Cette acidose induit une contractilité musculaire amoindrie, donc une fatigue musculaire.

La conversion du lactate en pyruvate, réversible, est catalysée par la lactate déshydrogénase (LDH). La LDH est une enzyme présente dans de nombreux tissus et organes chez les humains, dont les muscles, y compris le muscle cardiaque, et le foie mais aussi les poumons et le plasma. Elle est relarguée dans le sang suite à une lyse cellulaire ou en cas d’altération d’un tissu. Son augmentation dans le sang est le signe d’un dommage tissulaire.

Avec l’entraînement physique, les muscles sont capables de réduire la production de lactate pour une intensité donnée et de mieux utiliser le lactate pour reformer du glucose (source d’énergie) via notamment une augmentation de l’activité de la LDH (cycle de Cori). Une augmentation de l’activité de la LDH musculaire permet donc d’augmenter l’endurance musculaire. A ce titre, mesurer l’activité de la LDH directement au niveau des muscles squelettiques présente un avantage en comparaison d’une mesure de ladite activité au niveau sanguin, laquelle activité est par ailleurs fonction de l’activité des autres muscles, tels que le muscle cardiaque et les muscles lisses.

Les interleukines pro-inflammatoires IL6, IL17, IL10, IL-α, anti-inflammatoires IL4, de même que la LDH représentent par conséquent des cibles de choix dans le cadre d’une solution d’amélioration des performances physiques et de récupération musculaire chez les sportifs notamment.

Des solutions sous forme de compléments alimentaires chez le sportif existent déjà sur le marché. On citera en premier lieu les acides aminés, base d’un apport alimentaire dédié, ou la créatine. Une supplémentation en magnésium va permettre notamment d’améliorer les performances à l’effort en captant le lactate durant l’effort. Des apports en antioxydants permettraient une récupération plus rapide. La caféine, le ginseng, les acides gras oméga-3 ou encore le curcuma ont aussi montré leur intérêt via leurs propriétés antioxydantes et/ou anti-inflammatoires. Ces solutions sont préconisées en conjonction avec une bonne qualité de sommeil.

Cependant, il existe un besoin important de solutions alternatives dans le domaine du complément alimentaire, en particulier des solutions totalement naturelles, ce domaine n’offrant aujourd’hui que peu d’alternatives aux protéines ou extraits végétaux antioxydants.

La Demanderesse a découvert de manière surprenante qu’un extrait aqueux deP. cruentumavait la capacité d’augmenter la récupération et l’endurance musculaire, de favoriser l’endormissement et la qualité du sommeil, ainsi que de diminuer l’anxiété et le stress. En outre, l’extrait est efficace pour augmenter la relaxation musculaire. Il a la capacité par ailleurs de diminuer la douleur musculaire, en particulier les courbatures.

Un des avantages de l’extrait est qu’il est totalement naturel, il provient d’une biomasse cultivée sans OGM, sans ajout d’hormone, sans utilisation de produit phytopharmaceutique, et sans empiéter sur des terres arables. L’extrait ou la composition le comprenant peuvent être ingérés ou dissouts sous la langue sans danger, sans effet secondaire connu.

L’extrait peut être facilement produit à l’échelle industrielle dans des conditions contrôlées en photobioréacteurs tout au long de l’année, sans contrainte de changement de luminosité ni de température. L’extrait et la composition le comprenant sont par ailleurs aisément obtenus à l’échelle industrielle. Le procédé d’extraction mis en œuvre pour obtenir l’extrait comporte une étape de pasteurisation permettant l’élimination de la flore totale (bactéries), donc sa production à l’échelle industrielle et sa consommation ultérieure sous forme de complément alimentaire.

L’extrait aqueux deP. cruentumselon l’invention provient de la microalguePorphyridium cruentum.Cette microalgue appartenant à la famille des Porphyridiaceae (genre Porphyridium) et à la classe des Rhodophytae. C’est une microalgue rouge.

Des utilisations cosmétiques d’extraits deP. cruentumsont déjà connues de l’art antérieur. On citera la demande KR20160170783 décrivant un extrait éthanolique deP. cruentumdans une composition cosmétique pour promouvoir la différentiation des cellules du derme papillaire. Il s’agit toutefois ici d’un extrait éthanolique et non d’un extrait aqueux tel que celui selon l’invention. Il s’agit en outre d’une composition destinée à un usage topique et cette composition n’est donc pas adaptée à un usage oral ou sublingual.

En outre, des compositions comprenant un extrait dePorphyridium cruentumsont connues pour leurs utilisations par voie topique. Ainsi la demande WO2019055328 décrit une composition topique comprenant une biomasse deP. cruentumqui n’est pas extraite ni séchée ni dénaturée et qui est notamment utilisée pour les cheveux, mais aucun extrait n’est décrit, à fortiori pas d’extrait aqueux deP. cruentum. La Demanderesse commercialise par ailleurs une composition cosmétique à usage topique sous forme de crème comprenant un extrait deP. cruentumsous la dénomination Renouvellance mais cette composition n’est pas adaptée à un usage oral ou sublingual.

Ainsi, aucune des compositions cosmétiques citées ici n’est adaptée à un usage oral ou sublingual.

Des compositions orales comprenant un extrait deP. cruentumsont par ailleurs connues. On citera à ce titre la demande EP2279667 décrivant une composition pouvant être une huile marine pouvant provenir deP. cruentumet comprenant des acides gras omega-3. Cette composition est décrite comme un complément alimentaire pour prévenir ou traiter l’infertilité féminine, une tumeur, un trouble de l’attention ou la maladie d’Alzheimer. Elle est aussi utile en nutrition sportive. Cette composition comprend en revanche des molécules lipophiles et est donc différente d’une composition comprenant l’extrait aqueux selon l’invention qui n’en contient pas.

Les acides gras oméga-3 sont par ailleurs connus pour améliorer les performances sportives, entre autres l’endurance et la récupération post-exercice. Ainsi la demande WO2017204659 décrit une composition comprenant une huile de poisson comprenant des acides gras oméga-3 ayant cette capacité. Cette composition est d’ailleurs décrite comme utile pour réduire la fatigue.

Huang et al. (Tropical Journal of Pharmaceutical Research March 2019; 18 (3): 579-584,) ont par ailleurs également décrit l’efficacité de la microalgueP. cruentumpour ses propriétés anti-fatigues dans le cadre d’une étude pré-clinique chez la souris. Cette publication ne décrit pas en revanche un extrait deP. cruentumet encore moins un extrait aqueux deP. cruentum. En outre la biomasse deP. cruentumcontient des acides gras oméga-3 qui sont donc connus comme ayant un impact positif sur les propriétés testées.

Ainsi à la connaissance de la Demanderesse, aucun art antérieur ne décrit une composition à usage oral ou sublingual comprenant un extrait aqueux deP. cruentum, c’est-à-dire sans substance lipophile.

Aucun art antérieur ne divulgue non plus l’utilisation d’une telle composition, ou d’un extrait aqueux deP. cruentum, pour augmenter la récupération ou l’endurance musculaire, pour augmenter la relaxation musculaire, ni pour diminuer les courbatures, ni pour favoriser l’endormissement et la qualité du sommeil ou encore pour diminuer l'anxiété et le stress.

Or de façon surprenante, les inventeurs ont découvert qu’un extrait aqueux de la microalgueP. cruentumne comprenant donc pas d’acide gras oméga 3 avait également une forte capacité pour augmenter la récupération ou l’endurance musculaire, et même meilleur que la biomasse, à des dosages faibles et pouvait en outre augmenter la relaxation musculaire, ce qui la rend intéressant pour diminuer les courbatures et/ou favoriser l’endormissement et/ou la qualité du sommeil ou encore pour diminuer l'anxiété et le stress.

Un premier objet concerne une composition orale ou sublinguale comprenant un extrait aqueux deP. cruentum. Un autre objet est relatif à l’utilisation non thérapeutique d’un extrait aqueux deP. cruentumou d’une composition le comprenant, avantageusement de la composition selon l’invention, pour augmenter la récupération et/ou l’endurance musculaire. Un autre objet est encore relatif à l’utilisation non thérapeutique dudit extrait ou d’une composition le comprenant pour augmenter la relaxation musculaire. Un autre objet concerne encore un extrait aqueux deP. cruentumou une composition le comprenant pour son utilisation pour diminuer la douleur musculaire, en particulier les courbatures, avantageusement suite à un exercice physique tel que le sport, et/ou pour diminuer l’anxiété et/ou le stress. Un dernier objet concerne une méthode de traitement nutraceutique non thérapeutique comprenant l’administration par voie orale ou sublinguale à des mammifères qui en ont besoin de l’extrait aqueux deP. cruentumou d’une composition le comprenant pour augmenter la récupération et/ou l’endurance musculaire et/ou la relaxation musculaire.

Un objet de l’invention est donc relatif à l’utilisation non thérapeutique d’un extrait aqueux deP. cruentumou d’une composition le comprenant, avantageusement selon l’invention, pour augmenter la récupération et/ou l’endurance musculaire.

Dans le cadre de la présente invention les termes « comprise entre … et … » et « de … à … » signifient que les bornes de la gamme sont incluses.

Au sens de l’invention, l’utilisation non thérapeutique de l’extrait aqueux deP. cruentumest une utilisation non pharmaceutique. Elle n’est donc pas destinée à prévenir ou traiter une pathologie. Elle est avantageusement destinée à des mammifères sains, encore avantageusement des humains sains.

On entend au sens de l’invention par « mammifères sains » tout mammifères ne souffrant pas d’une hyperexcitabilité neuromusculaire ou d’une pathologie musculaire telle que définie ci-dessous ou de douleurs musculaires telles que les courbatures, et ne souffrant pas non plus de dépression ou d’un quelconque trouble du sommeil pathologique, incluant l’insomnie, ou encore de stress ou d’anxiété, tel que l’anxiété généralisée. On entend ici par « mammifères » les humains et les mammifères choisis parmi les chevaux, les vaches, les cochons, les porcs, les animaux domestiques choisis parmi les chats et les chiens, avantageusement les animaux domestiques, encore avantageusement les humains.

Ainsi l’utilisation non thérapeutique selon l’invention n’est pas pour traiter des désordres pathologiques tels qu’une hyperexcitabilité neuromusculaire telle que définie par un médecin, notamment engendrés par une ou plusieurs pathologies musculaires telles que tétanie, spasmophilie, déchirures partielles ou complètes, étirements des fibres musculaires ou élongations. Elle n’est pas non plus pour traiter la douleur. L’utilisation non thérapeutique selon l’invention n’est pas non plus destinée à prévenir et/ou traiter les symptômes de la dépression, ni l’insomnie, ni l’anxiété ou le stress, ni une quelconque pathologie neurologique ou musculaire ou neuromusculaire induisant des difficultés d’endormissement.

On entend par « augmenter la récupération musculaire » diminuer la quantité de marqueurs de l’inflammation choisis parmi les interleukines pro-inflammatoires IL6 et/ou IL10 et/ou IL17 et/ou IL1-α. La quantité d’interleukines 6 notamment étant concomitante à un effort musculaire intense, leur présence post-exercice au niveau des muscles contractiles influence la récupération musculaire via un maintien de l’inflammation altérant le retour à l’état basal des muscles.

Ainsi dans un mode de réalisation avantageux, augmenter la récupération musculaire signifie diminuer d’au moins 50%, très avantageusement d’au moins 70% la quantité d’IL6 en présence de l’extrait aqueux deP. cruentumselon l’invention, en comparaison de la quantité d’IL6 mesurée en l’absence d’extrait (Contrôle avec même exercice). Dans un mode de réalisation avantageux, il s’agit d’une diminution des IL6 mesurée au bout d’une période de 48 heures dans le plasma de souris supplémentés quotidiennement par voie orale avec l’extrait aqueux deP. cruentumselon l’invention, en particulier pendant au moins 4 semaines, la mesure étant effectuée dans les conditions d’un essai pré-clinique chez la souris incluant un protocole d’entrainement et détaillé dans l’exemple 4a). Avantageusement, l’extrait aqueux deP. cruentumest celui tel que préparé selon l’exemple 1a). Très avantageusement, la dose administrée oralement aux souris en équivalent humain de l’extrait est de 250mg ou 500mg, encore plus avantageusement de 500mg. Les résultats sont exposés dans l’exemple 4a) (Tableau 3a)).

Alternativement, on entend par « augmenter la récupération musculaire » diminuer la quantité d’interleukines IL10 et/ou IL17 et/ou IL1-α. Ainsi avantageusement, l’extrait aqueux deP. cruentumest efficace pour augmenter la récupération musculaire lorsque la quantité d’IL10 mesurée est d’au moins 50%, préférentiellement d’au moins 80% en présence de l’extrait aqueux deP. cruentumselon l’invention, en comparaison de la quantité d’IL10 mesurée dans le contrôle (sans extrait mais avec même exercice). Avantageusement encore, la diminution de la quantité d’IL10 est mesurée au bout de la période de 48h après le test de course au niveau du plasma de populations de souris dans le cadre de l’essai pré-clinique détaillé en exemple 4a) (Tableau 4).

Encore alternativement, l’extrait aqueux deP. cruentumest efficace pour augmenter la récupération musculaire lorsque la quantité d’IL17 mesurée au bout de la période de 48 heures après le test de course dans le cadre du même essai pré-clinique de l’exemple 4a) est d’au moins 30%, préférentiellement d’au moins 55%, en particulier de 60% en présence de l’extrait aqueux deP. cruentumselon l’invention, en comparaison de la quantité d’IL10 mesurée dans le contrôle (sans extrait mais avec même exercice). Dans encore un autre mode alternatif, l’extrait aqueux deP. cruentumest efficace pour augmenter la récupération musculaire lorsque la quantité d’IL17 ou d’IL1-α mesurées dans le cadre du même essai pré-clinique de l’exemple 4a) est d’au moins 30%, préférentiellement d’au moins 60% en présence de l’extrait aqueux deP. cruentumselon l’invention, en comparaison de la quantité d’IL10 ou d’IL1-α mesurées dans le contrôle (sans extrait mais avec même exercice) (Tableau 4).

Dans encore un autre mode alternatif de réalisation de l’invention, il est entendu par « augmenter la récupération musculaire » augmenter la quantité d’interleukines anti-inflammatoires IL4. Avantageusement dans ce cas, la mesure de la quantité d’IL4 est effectuée dans le cadre d’un second essai pré-clinique, chez le rat, incluant un protocole d’entrainement et en présence ou non de l’extrait aqueux deP. cruentumdans les conditions décrites à l’exemple 4b). L’extrait aqueux deP. cruentumest ainsi considéré comme efficace lorsque l’augmentation de la quantité d’IL4 est d’au moins 68% en présence de l’extrait aqueux deP. cruentumselon l’invention, en comparaison de la quantité d’IL4 mesurée dans le plasma des rats soumis au protocole d’entrainement sans supplémentation en extrait selon l’invention (Tableau 7). Avantageusement, l’extrait aqueux deP. cruentumest celui tel que préparé à l’exemple 1a). L’extrait aqueux deP. cruentumselon l’invention ou une composition le comprenant peuvent donc être utilisé pour augmenter la récupération musculaire, avantageusement suite à un exercice physique tel que le sport.

L’extrait selon l’invention peut aussi être utilisé pour augmenter l’endurance musculaire.

On entend par « augmenter l’endurance musculaire » augmenter l’activité de la lactate déshydrogénase (LDH) musculaire. La LDH musculaire catalyse la transformation du pyruvate en lactate. Parallèlement, la LDH hépatique va retransformer le lactate en pyruvate pour reconstituer les stocks de glucose, servant ensuite de source d’énergie pour les muscles. De fait, en augmentant l’activité de la LDH musculaire, le métabolisme énergétique glucidique est amélioré, les capacités d’endurance musculaire s’en trouvent améliorées. Ainsi dans un mode de réalisation de l’invention avantageux, on entend par « augmenter l’endurance musculaire» augmenter l’activité de la LDH musculaire chez la souris dans le cadre de l’essai pré-clinique décrit en détail à l’exemple 5b) en présence de l’extrait aqueux deP. cruentumd’au moins 60% et avantageusement d’au moins 90%, encore avantageusement d’au moins 100% par rapport à l’activité de LDH mesurée chez les souris supplémentées sans l’extrait selon l’invention, les deux populations de souris n’ayant pas suivi le protocole d’entrainement décrit à l’exemple 5b). Encore plus avantageusement, il s’agit d’une augmentation de l’activité de LDH musculaire en présence de l’extrait selon l’invention d’au moins 70% et très avantageusement d’au moins 100%, encore avantageusement d’au moins 200% chez des souris ayant suivi le protocole d’entrainement, en comparaison de l’activité de LDH mesurée chez les souris l’ayant suivi aussi mais supplémentées sans l’extrait selon l’invention.

L’extrait selon l’invention potentialise les effets de l’entrainement et vice versa. L’extrait aqueux deP. cruentumest donc particulièrement utile à des mammifères entrainés, avantageusement les humains entrainés, très avantageusement les sportifs.

On entend en outre par « augmenter la relaxation musculaire » diminuer la fréquence des contractions musculaires. Dans un mode de réalisation de l’invention, il est entendu par diminuer la fréquence des contractions musculaires diminuer d’au moins 50%, avantageusement d’au moins 80% la fréquence des contractions musculaires mesurée dans un modèle de co-culture de cellules musculaires humaines et de motoneurones de rats en présence de l’extrait aqueux deP. cruentumselon l’invention et en comparaison de la fréquence des contractions mesurée dans les mêmes conditions en l’absence de l’extrait, dans les conditions telles que décrites dans l’exemple 2. Avantageusement, l’extrait aqueux deP. cruentumest celui tel que préparé en exemple 1a).

L’augmentation de la relaxation musculaire permet en outre de favoriser l’endormissement et la qualité du sommeil, de même qu’elle permet de diminuer l’anxiété et le stress. Ainsi, dans un mode de réalisation de l’invention, l’extrait aqueux deP. cruentumou une composition le comprenant est utilisé pour favoriser l’endormissement et/ou la qualité du sommeil. Cette utilisation est non thérapeutique, et est destinée à des mammifères sains, avantageusement des individus sains. En augmentant la relaxation musculaire, donc en diminuant les contractions musculaires induites par l’influx nerveux, l’organisme des mammifères, avantageusement des humains, avantageusement sains, a tendance à se relâcher, favorisant ainsi des dispositions propices à l’endormissement d’une part et au sommeil d’autre part.

Dans le cadre de l’utilisation suscitée pour augmenter la récupération et/ou l’endurance musculaire, l’extrait aqueux deP. cruentumselon l’invention, est administré seul ou dans une composition le comprenant par voie orale ou sublinguale dans une période comprise entre 8 heures et 30 minutes avant un exercice physique, avantageusement un exercice physique tel que le sport, préférentiellement, entre 4 heures et 1 heure avant ledit exercice ; et/ou dans une période comprise entre immédiatement après l’arrêt de l’exercice physique et 48 heures après cet arrêt.

Pour son utilisation, non thérapeutique, seul ou dans une composition le comprenant pour augmenter la relaxation musculaire, et donc favoriser l’endormissement et/ou la qualité du sommeil, l’extrait aqueux deP. cruentumseul ou dans une composition le comprenant selon l’invention est avantageusement administré par voie orale ou sublinguale dans la période comprise entre la fin de journée et le début de la période d’endormissement, avantageusement encore entre 5 heures et 1 heure avant la période d’endormissement, très avantageusement 2 heures avant ladite période.

L’utilisation peut par ailleurs concerner les sportifs pour favoriser l’endormissement ou la qualité du sommeil suite à un exercice physique tel que le sport, en particulier un exercice physique intense ou prolongé, en plus d’augmenter la récupération et/ou l’endurance musculaire.

Ainsi l’utilisation de l’extrait aqueux deP. cruentumou d’une composition le comprenant est pour améliorer les performances physiques des mammifères, avantageusement les performances sportives, encore avantageusement des individus humains.

Quelle que soit l’utilisation de l’extrait aqueux deP. cruentumou de la composition le comprenant, avantageusement la dose active journalière recommandée de l’extrait aqueux deP. cruentumest comprise entre 20mg et 2500mg en équivalent humain. Avantageusement, elle est comprise entre 30 mg et 1500mg, en particulier entre 40 mg et 750 mg, plus particulièrement entre 50mg et 500mg, y inclus 100mg et 250mg, encore avantageusement elle est comprise entre 250mg et 500mg. Très avantageusement, la dose journalière recommandée en équivalent humain est de 500mg.

Cela correspond donc pour un humain de 70kg à un dosage journalier compris entre 0,29mg/kg et 35,71mg/kg, avantageusement entre 0,42 mg/kg et 21,43mg/kg, en particulier entre 0,57 mg/kg et 10,71 mg/kg, plus particulièrement entre 0,71mg/kg et 7,14mg/kg, y inclus 1,42mg/kg et 3,57mg/kg, encore avantageusement entre 3,57mg/kg et 7,14 mg/kg, en particulier de 7,14 mg/kg.

Au sens de l’invention, on entend par « extrait deP. cruentum» tout extrait issu de toute biomasse de la microalgueP. cruentumobtenu par toute méthode d’extraction connue de l’homme du métier, avantageusement par macération. On entend par « extrait aqueux » un extrait obtenu par extraction dans l’eau comme unique solvant. La biomasse peut être obtenue à partir d’une culture de la microalgue en mode autotrophe, en mode hétérotrophe, ou en mode mixotrophe vis-à-vis du carbone. Avantageusement, le mode autotrophe est mis en œuvre. La microalgue peut être cultivée en conditions contrôlées au sein de systèmes adaptés tels que des bassins de culture ouverts de type « race-ways » ou « open ponds » ou des systèmes fermés de type photobioréacteurs. Les photobioréacteurs utilisés peuvent être de tout type existant tels que des photobioréacteurs tubulaires horizontaux, verticaux tels que des systèmes dits « green wall panel », des photobioréacteurs plans ou en colonne. Préférentiellement, la production de la biomasse s’effectue au sein d’un système de culture fermé de type photobioréacteur. La culture de la microalgue s’effectue selon les modes de conduite de culture de type batch, fed-batch, continu, semi-continu, turbidostat ou chemostat. La biomasse utilisée pour obtenir l’extrait selon l’invention peut être fraiche ou congelée. Avantageusement elle a été congelée et il convient de la décongeler avant extraction. Elle peut être concentrée par élimination de tout ou partie de l’eau en utilisant des procédés tels que la centrifugation, la filtration, la floculation, la sédimentation, couplés, ou non, à des étapes de séchage par lyophilisation, séchage sous vide, séchage tambour, atomisation ou tout procédé permettant de baisser la teneur en eau de la biomasse. Des procédés de lyses cellulaires peuvent ensuite être mis en œuvre tels que l’application de pressions, de flux électriques, de forces de cisaillements, de cycles de congélation-décongélation, de chocs osmotiques, l’utilisation d’enzymes, ou tout autre procédé permettant la déstructuration des tissus, organes, cellules ou organites. On entend ici par « biomasse sèche » une biomasse microalgale déshydratée comprenant moins de 15%, avantageusement moins de 10%, encore avantageusement moins de 5% d’eau. La biomasse obtenue après culture peut être congelée avant séchage. La biomasse peut être préalablement centrifugée puis filtrée pour éliminer l’eau résiduelle avant extraction. La biomasse peut être congelée après récolte, et/ou broyée à l’aide de procédé connu de l’Homme du métier, avant l’étape d’extraction.

Ainsi l’extrait aqueux deP. cruentumest obtenu par tout procédé d’extraction tel qu’une extraction solide-liquide, une macération, en conditions subcritiques, l’extraction pouvant faire intervenir des co-traitements menés en parallèle ou en séquentiel de types micro-ondes, ultrasons, extrusion, pressions, enzymatiques.

On entend par extraction en « conditions subcritiques » une extraction en présence d’eau, dans des conditions de température supérieures à 100°C et de pression inférieure à 221 bars (22,1 MPa), l’eau restant à l’état liquide mais possédant une viscosité et une tension de surface inférieures à celle de l’eau à température ambiante, augmentant sa constante diélectrique. Ainsi, la pression d’extraction est comprise entre 150 bars et 250 bars (15 et 25 MPa), préférentiellement entre 200 et 221 bars (20 et 22,1 MPa), avantageusement dans un autoclave d’extraction sous pression.

L’extraction peut être réalisée à une température comprise entre 4°C et 300°C, avantageusement à une température inférieure à 100°C, en particulier entre 20°C et 80°C, encore avantageusement à 35°C. L’extraction peut être conduite durant une période de 30min à 5 heures, avantageusement de 1h à 3h et très avantageusement de 2 heures. L’extraction peut être mise en œuvre à partir d’une quantité de biomasse deP. cruentumcomprise entre 0,1% et 20% en poids par rapport au poids total du solvant et de la biomasse, avantageusement entre 5% et 15%, très avantageusement entre 10% et 15% et encore avantageusement de 10%, en poids par rapport au poids total du solvant et de la biomasse.

Une étape de centrifugation peut suivre l’extraction afin de concentrer le surnageant. Une fois centrifugé, l’extrait peut être évaporé et/ou stérilisé. La stérilisation peut être effectuée par flash pasteurisation, par hautes pressions hydrostatiques ou encore par filtration stérilisante (0,22µm). La stérilisation est avantageusement effectuée par pasteurisation dans le cadre de l’invention.

L’extrait aqueux deP. cruentumest donc un extrait obtenu par extraction dans l’eau comme unique solvant. Cet extrait est donc hydrosoluble et ne comprend pas de substance lipophile, en particulier pas d’acides gras ni de caroténoïde, ou alors à l’état de traces, de sorte que les effets observés dans le cadre de la présente invention ne sont pas attribuables à ces molécules lipophiles. Ainsi l’extrait selon l’invention ne contient pas d’acide gras oméga-3.

Ainsi, dans un premier mode de réalisation particulièrement avantageux, l’extrait aqueux deP. cruentumest obtenu par extraction à l’eau comme unique solvant (en particulier par macération) durant une période de 2 heures à une température de 35°C d’une quantité de 10% en poids de biomasse par rapport au poids total de la biomasse et du solvant, la biomasse ayant été préalablement centrifugée et décongelée. Après l’étape de centrifugation qui suit l’extraction, le surnageant est concentré puis filtré, dans les conditions de l’exemple 1a).

Dans un second mode particulièrement avantageux de réalisation, l’extrait aqueux deP. cruentumest obtenu par extraction à l’eau comme unique solvant (en particulier par macération) durant une période de 3 heures à une température de 20°C d’une quantité de 10% en poids de biomasse par rapport au poids total de la biomasse et du solvant, la biomasse ayant été préalablement centrifugée et décongelée. Après l’étape de centrifugation qui suit l’extraction, le surnageant est concentré puis l’extrait est stérilisé par pasteurisation, dans les conditions de l’exemple 1b).

Les extraits obtenus sont sous forme liquide et peuvent subir une étape de lyophilisation pour obtenir l’extrait sous forme de poudre.

Les extraits ci-dessus peuvent être utilisés comme tel sous forme liquide pour leur utilisation pour augmenter la récupération et/ou l’endurance musculaire et/ou pour augmenter la relaxation musculaire, ou être incorporés dans une composition orale ou sublinguale. Ils peuvent aussi être séchés par tout procédé de séchage connu de l’homme du métier, notamment par lyophilisation, séchage sous vide, séchage en tambour, ou atomisation, afin d’obtenir une poudre.

Avantageusement, l’extrait aqueux deP. cruentumse présente sous forme de poudre et est destiné à une composition orale ou sublinguale.

Ainsi un second objet de l’invention est relatif à une composition orale ou sublinguale, avantageusement nutraceutique, comprenant un extrait aqueux deP. cruentumselon l’invention. L’extrait peut être présent dans la composition en quantité en poids comprise entre 0,1% et 5%, avantageusement entre 0,3 % et 3%, très avantageusement de 0,5% à 2,5%, par rapport au poids total de la composition.

Alternativement, une composition, avantageusement sous forme de gélule ou de capsule, comprend une quantité en poids de l’extrait aqueux deP. cruentumselon l’invention comprise entre 4% et 90%, avantageusement entre 5 % et 50%, très avantageusement de 10% à 25%, par rapport au poids total de la composition.

On entend par « composition orale » une composition destinée à une administration par voie orale et donc destinée à être ingérée, quelle que soit sa forme. On entend par « composition sublinguale » une composition destinée à une administration sublinguale c’est à dire à être placée sous la langue que l’on laisse dissoudre. La forme de la composition étant dans ce dernier cas orodispersible.

La composition orale selon l’invention peut être à libération immédiate ou prolongée ou encore gastro-résistante.

La composition peut comprendre une ou plusieurs vitamines ou l’un quelconque de leurs sels, choisies parmi la vitamine C, la vitamine B, avantageusement choisie parmi la vitamine B2 ou riboflavine, la vitamine B5 ou acide pantothénique, la vitamine B6, la vitamine B9 ou acide folique, la vitamine B12, très avantageusement il s’agit de la vitamine B9 et/ou B6 ou l’un quelconque de ses sels. La ou les vitamines sont avantageusement présentes dans la composition en quantité en poids par rapport au poids total de la composition comprise entre 0,5% et 3%, avantageusement entre 1% et 3%.

La composition peut comprendre aussi un ou plusieurs minéraux notamment choisis parmi le fer, le magnésium, le potassium, le sodium, le phosphore, le calcium, ou l’un quelconque de leurs sels, et avantageusement le magnésium et/ou le calcium ou l’un quelconque de leurs sels.

On entend ici par « l’un quelconque de leurs sels » un sel dérivé choisi parmi le phosphate, le carbonate, le sulfate, le stéarate, le citrate, le borate, le nitrate, le ferrate, le chromate, l’arsenate. Avantageusement dans le cas du magnésium, il s’agit de citrate ou de stéarate. Dans le cas du calcium, il s’agit de carbonate. Ce ou ces minéraux ou l’un quelconque de leurs sels sont avantageusement présents dans la composition en quantité en poids par rapport au poids total de la composition comprise entre 0,3% et 5%, avantageusement entre 1% et 3%.

La composition peut aussi comprendre un ou plusieurs antioxydants choisis parmi la vitamine E, l’acide ascorbique, un extrait de romarin, l’acide carnosique ou un extrait de polyphénol issue du thé. On entend ici par « vitamine E » un tocophérol choisi parmi l’α-tocophérol, le γ-tocophérol, le β-tocophérol ou le δ-tocophérol, ou un tocotriénol choisi parmi l’α-tocotriénol, le β-tocotriénol, le γ-tocotriénol ou le δ-tocotriénol, avantageusement, l’α-tocophérol. La composition comprend préférentiellement un extrait de romarin ou de la vitamine E, avantageusement en quantité en poids par rapport au poids total de la composition compris entre 0,5% et 3%, plus avantageusement ente 1% et 2%, encore préférentiellement de la vitamine E, très préférentiellement l’α-tocophérol.

Avantageusement, la composition comprend au moins un excipient oralement acceptable choisi parmi les agents de support, les agents de charge, les agents conservateurs, les agents acidifiants, les agents émulsifiants, les agents humectants, les agents gélifiants, les agents lubrifiants, les agents d'enrobage ou d'encapsulation les agents stabilisants ou dispersants, les agents édulcorants. L’excipient est non toxique et inerte. Il peut être ingéré par voie orale ou administré par voie sublinguale en toute sécurité et sans effet secondaire. Parmi les agents de support, on citera la maltodextrine, la gomme d’acacia, la cellulose et ses dérivés (méthylcellulose, éthylcellulose et cellulose microcristalline), le phosphate de calcium, les inulines, les farines (farine de riz, de coco ou autre), les amidons et leurs dérivés, le talc, ou encore la gomme de caroube. Les agents conservateurs sont choisis parmi le sorbate de sodium ou le benzoate de sodium ; les agents acidifiants sont choisis en particulier parmi l’acide citrique ou le citrate de sodium ; les agents émulsifiants sont choisis parmi la lécithine, les phospholipides, les polyethylèneglycols ; les agents humectants sont choisis parmi la glycérine, le sorbitol, le dextrose. A titre d’agent de charge, on citera le mannitol, le lactose, le sorbitol, l’amidon, la microcellulose, l’hydroxypropylméthylcellulose, la crosscarmelose, la polyvinylpyrrolidone, le phosphate de calcium (di et tribasique anhydre ou hydratés), l’acide citrique ou l’acide tartrique, les carbonates de sodium ou de potassium ou de calcium, la cellulose silicée, ou encore la gomme d’acacia. Parmi les agents lubrifiants (anti-agglomérants), on citera le stéarate de magnésium, l’acide stéarique, les lécithines, la silice colloïdale, un extrait de riz, le talc, le dibehenate de glycérol, ou encore un extrait de bambou titré en silice. Les agents d’enrobage ou d’encapsulation peuvent être choisis parmi la gélatine, l’hydroxypropylméthylcellulose, le pululane, la cire d’abeille ou la cire de carnauba. Les agents gélifiants peuvent être choisis parmi les amidons, natifs ou prégélatinisés, les carraghénanes, la pectine, les alginates, l’agar-agar, la gomme de xanthane ou encore la gélatine. On citera au titre d’agent stabilisant ou dispersant, les alginates, la gomme d’acacia, les phospholipides. Enfin, parmi les agents édulcorants, on citera le malitol, le xylitol, le sucralose, le sorbitol, le sirop d’agave, le sirop de glucose, le saccharose, le fructose, un extrait de stévia, le miel, l’isomalt, ou le maltitol. L’excipient est avantageusement présent dans la composition en quantité de 1% à 15% en poids par rapport au poids total de la composition, avantageusement entre 1% et 10%, encore avantageusement entre 1,5% et 5%.

Une huile peut par ailleurs être ajoutée. Elle est avantageusement choisie parmi les huiles végétales, encore avantageusement, il s’agit de l’huile de tournesol, l’huile de colza, les huiles MCT (Medium Chain Trigycerides), l’huile de coco, le beurre de karité ou encore l’huile d’olive. Préférentiellement, l’huile est avantageusement présente dans la composition en quantité comprise entre 5% et 20%, avantageusement entre 5% et 10%, en poids par rapport au poids total de la composition.

La composition selon l’invention peut par ailleurs comprendre un ou plusieurs autres ingrédients actifs possédant un effet complémentaire à celui de l’extrait deP. cruentum, ou induisant un effet synergique avec celui-ci. Des ingrédients actifs ou molécules connus pour favoriser la relaxation musculaire peuvent être choisis parmi la L-carnitine ; un extrait de la microalgueTetraselmis suecica, avantageusement un extrait aqueux ; de l’astaxanthine ou tout extrait de microalgue en comprenant, notammentHaematococcus pluvialis; ou encore un extrait dePhaeodactylum tricornutum,avantageusement un extrait éthanolique riche en acides gras oméga-3.

Pour une utilisation à usage de complément alimentaire à destination des sportifs, des ingrédients à effet complémentaire de celui de la composition selon l’invention tels que les protéines, les acides aminés et en particulier les acides aminés essentiels tels que la leucine, la valine, l’isoleucine, avantageusement en quantité en poids par rapport au poids total de la composition comprise entre 0,25% et 4%, avantageusement entre 0,5% et 2%, très avantageusement de 1%, peuvent être combinés à l’extrait aqueux deP. cruentumselon l’invention.

De même, l’hydroxy-beta-methylbutyrate (HMB), connus sur la synthèse protéique, ou encore le curcumin peuvent être utilisés. Tous ces ingrédients peuvent être combinés à l’extrait aqueux deP. cruentumselon l’invention, notamment dans le cadre d’un programme de récupération sportive.

Pour une utilisation en tant que complément alimentaire pour favoriser l’endormissement, la composition selon l’invention peut comprendre en plus de l’extrait aqueux deP. cruentumselon l’invention un ou plusieurs extraits de plante naturels connus pour leur bénéfice sur le sommeil tels que des extraits deValeriana officinalis L.,Melissa officinalis L, extraits du genre Tilia, ou encore la camomille, la passiflore, Eschscholtzia.

Ainsi, une composition préférée de l’invention comprend au moins, en particulier en poids par rapport au poids total de la composition :
- un extrait aqueux deP. cruentumselon l’invention, avantageusement en une teneur comprise entre 0,1% et 5%, avantageusement entre 0,25 % et 3%, très avantageusement de 0,5% à 2,5%,
- du magnésium ou l’un quelconque de ses sels, avantageusement du citrate ou du stéarate de magnésium, en particulier en une quantité comprise entre 0,3% et 5%, avantageusement entre 1% et 3%, très avantageusement de 1,5% à 2,5%,
- un antioxydant, avantageusement de la vitamine E, encore avantageusement l’α-tocophérol, en particulier en une quantité comprise entre 0,5% et 3%.

Une autre composition préférée comprend au moins encore, en particulier en poids par rapport au poids total de la composition :
- un extrait aqueux deP. cruentumselon l’invention, avantageusement en une teneur comprise entre 0,1% et 5%, avantageusement entre 0,25 % et 3%, très avantageusement de 0,5% à 2,5%,
- du magnésium ou l’un quelconque de ses sels, avantageusement du citrate ou du stéarate de magnésium, en particulier en une quantité comprise entre 0,3% et 5%, avantageusement entre 1% et 3%, très avantageusement de 1,5% à 2,5%,
- de la vitamine B9 et/ou de la vitamine B6 ou l’un quelconque de ses sels, en particulier en une quantité comprise entre 0,5% et 3%, avantageusement entre 1% et 3%,
- un antioxydant, avantageusement de la vitamine E, encore avantageusement l’α-tocophérol, en particulier en une quantité comprise entre 0,5% et 3%.

Une composition particulièrement préférée, sous forme de barre énergétique, comprend, en particulier en quantité en poids par rapport au poids total de la composition :
- un extrait aqueux deP. cruentumselon l’invention, avantageusement sous forme de poudre, avantageusement en une teneur comprise entre 0,1% et 5%, avantageusement entre 0,1% et 3%, en particulier entre 0,3% et 3%, très avantageusement de 0,5% à 2,5%,
- des protéines (riz et/ou poids et/ou chanvre et/ou soja et/ou courge), en particulier en une quantité comprise entre 5-10%,
- du chocolat, en particulier en une quantité comprise entre 5-15%, avantageusement de 25%,
- un édulcorant en une quantité comprise entre 5-10%,
- du sirop d’agave, en particulier en une quantité comprise entre 5-10%,
- un émulsifiant (phospholipides), en particulier en une quantité comprise entre 3% et 10 %,
- de l’huile de tournesol, en particulier en une quantité comprise entre 5% et 10%,
- de l’huile de colza, en particulier en une quantité comprise entre 5% et 10%,
- du polydextrose, en particulier en une quantité comprise entre 3% et 5%,
- de la fibre d’acacia, en particulier en une quantité comprise entre 3% et 5%,
- des vitamines, en particulier en une quantité comprise entre 1% et 3%,
- du tocophérol, en particulier de l’α-tocophérol, en particulier en une quantité comprise entre 0,5% et 2%,
- un arôme, en particulier en une quantité comprise entre 1% et 6%.

Une autre composition particulièrement préférée, sous forme de boisson énergétique, comprend, en particulier en quantité en poids par rapport au poids total de la composition :
- un extrait aqueux deP. cruentumselon l’invention, avantageusement sous forme de poudre, avantageusement en une teneur comprise entre 0,1% et 5%, avantageusement entre 0,1% et 3%, en particulier entre 0,3% et 3%, très avantageusement de 0,5% à 2,5%,
- un isolat de protéine de lait, en particulier en une quantité comprise entre 80% et 95%,
- de la lécithine, en particulier en une quantité comprise entre 5% et 10%,
- un édulcorant, en particulier du sucralose, en particulier en une quantité comprise entre 5% et 10%,
- du sirop d’agave, en particulier en une quantité comprise entre 5% et 10%,
- un arôme, en particulier en une quantité comprise entre 1% et 6%.

Une autre composition particulièrement préférée sous forme de capsule comprend, en particulier en quantité en poids par rapport au poids total de la composition :
- un extrait aqueux deP. cruentumselon l’invention, avantageusement sous forme de poudre, avantageusement en une quantité comprise entre 4% et 89,4% en particulier entre 4% et 89,15%, avantageusement entre 5 % et 50%, très avantageusement de 10% à 25%,
- du stéarate de magnésium, en particulier en une quantité comprise entre 0,25% et 5%, avantageusement entre 0,3% et 5%, en particulier entre 0,3% et 3%, très avantageusement de 0,5% à 2,5%,
- de la maltodextrine, en particulier en une quantité comprise entre 0,1% et 70%,
- de la gomme d’acacia en particulier en une quantité comprise entre 0,1% et 70%,
- de la microcellulose, en particulier en une quantité comprise entre 0,1% et 70%,
- du dioxyde de silicone, en particulier en une quantité comprise entre 0,3% et 5%,
- de l’hydroxyméthylcellulose, en particulier en une quantité comprise entre 10% et 25%.

Une autre composition particulièrement préférée sous forme de tablette comprend, en particulier en quantité en poids par rapport au poids total de la composition :
- un extrait aqueux deP. cruentumselon l’invention, avantageusement sous forme de poudre, avantageusement en une quantité comprise entre 2 et 35%,
- de l’hydroxymethylcellulose en une quantité comprise entre 2 et 6%,
- du phosphate de calcium en une quantité comprise entre 5 et 85,6%,
- de la gomme d’acacia, en une quantité comprise entre 5 et 85,6%,
- de la microcellulose, en une quantité comprise entre 5 et 85,6%,
- du stéarate de magnésium en une quantité comprise entre 0,2 et 4%,
- du dioxyde de silicone, en une quantité comprise entre 0,2 et 4%.

La composition n’est pas adaptée à une application par voie topique, et notamment pas pour un usage cosmétique. Préférentiellement, il s’agit d’une composition à usage de complément alimentaire, préférentiellement à destination des humains, encore préférentiellement à destination des sportifs et/ou d’individus présentant des troubles de l’endormissement et/ou de l’anxiété et/ou du stress.

La composition ne contient avantageusement pas de glycérine.

La composition selon l’invention peut se présenter sous forme solide, en particulier de poudre, plus avantageusement une poudre dispersible à froid dans l’eau, ou sous forme liquide. Elle peut se présenter sous forme d’émulsion eau dans huile. L’extrait aqueux selon l’invention peut donc être dispersé dans une phase huileuse par l’intermédiaire de liposomes ou de microparticules ou nanoparticules. L’extrait aqueux selon l’invention peut donc être encapsulé sous forme de liposomes et la composition selon l’invention peut comprendre de tels liposomes.

Lorsqu’elle se présente sous forme solide, la composition selon l’invention peut être choisie parmi gélule, granule, capsule, tablette, comprimé, bonbon, gomme à mâcher, granule, pastille, barre énergétique.

Sous forme liquide, la composition selon l’invention peut être choisie indifféremment parmi un sirop, spray, ampoule, suspension, émulsion, boisson froide ou chaude tel qu’un jus de fruit, en particulier une boisson énergétique.

Avantageusement, la composition se présente sous la forme de poudre, encore avantageusement sous forme de poudre dispersible à froid dans l’eau.

Ladite composition est ainsi utile pour augmenter la récupération et/ou l’endurance musculaire. De même, elle est utile pour augmenter la relaxation musculaire et permet de favoriser l’endormissement et/ou la qualité du sommeil. La composition est efficace et peut être utilisée pour améliorer les performances physiques des mammifères, avantageusement les performances sportives, encore avantageusement des individus humains, donc des sportifs.

Un troisième objet concerne en outre un extrait aqueux deP. cruentumselon l’invention ou une composition le comprenant pour son utilisation pour diminuer la douleur musculaire, en particulier les courbatures, avantageusement suite à un exercice physique tel que le sport, et/ou pour diminuer l’anxiété et/ou le stress. Avantageusement, la composition est telle que définie précédemment. Augmenter la relaxation musculaire tel que défini dans le cadre de l’invention permet en effet de diminuer la douleur musculaire, en particulier les courbatures.

Alternativement, on entend par « diminuer la douleur musculaire » diminuer la quantité de cytokine pro-inflammatoire IL6 et/ou diminuer la quantité d’interleukines IL10 et/ou IL17 et/ou IL1-α. Dans un mode de réalisation avantageux, l’extrait aqueux deP. cruentumou la composition le comprenant est efficace pour diminuer la douleur musculaire lorsque la diminution des IL6 est d’au moins 50%, très avantageusement d’au moins 70%, en présence de l’extrait aqueux selon l’invention en comparaison de la quantité d’IL6 mesurée en l’absence de l’extrait (Contrôle avec même exercice) (Tableau 4). Préférentiellement, il s’agit d’une diminution de la quantité d’IL6 mesurée au bout d’une période de 48 heures dans le plasma de souris supplémentées quotidiennement par voie orale avec l’extrait aqueux deP. cruentumselon l’invention, en particulier pendant au moins 4 semaines, la mesure étant effectuée dans les conditions d’un essai pré-clinique chez la souris incluant un protocole d’entrainement et détaillé dans l’exemple 4a). Très avantageusement encore, il s’agit de l’extrait aqueux deP. cruentumtel que préparé à l’exemple 1a).

Alternativement, on entend par « diminuer la douleur musculaire » diminuer la quantité d’interleukines IL10 et/ou IL17 et/ou IL1-α. Ainsi avantageusement, l’extrait aqueux deP. cruentumest efficace pour diminuer la douleur musculaire lorsque la quantité d’IL10 mesurée est d’au moins 50%, préférentiellement d’au moins 80% en présence de l’extrait aqueux deP. cruentumselon l’invention, en comparaison de la quantité d’IL10 mesurée dans le contrôle (sans extrait mais avec même exercice). Avantageusement encore, la diminution de la quantité d’IL10 est mesurée au bout de la période de 48 heures après le test de course, au niveau du plasma de populations de souris dans le cadre de l’essai pré-clinique détaillé en exemple 4a) (Tableau 4).

Encore alternativement, l’extrait aqueux deP. cruentumest efficace pour diminuer la douleur musculaire lorsque la quantité d’IL17 mesurée dans le cadre du même essai pré-clinique de l’exemple 4a) est d’au moins 30%, préférentiellement d’au moins 55%, en particulier de 60% en présence de l’extrait aqueux deP. cruentumselon l’invention, en comparaison de la quantité d’IL10 mesurée dans le contrôle (sans extrait mais avec même exercice). Dans encore un autre mode alternatif, l’extrait aqueux deP. cruentumest efficace pour diminuer la douleur musculaire lorsque la quantité d’IL17 ou d’IL1-α mesurées dans le cadre du même essai pré-clinique de l’exemple 4a) est d’au moins 30%, préférentiellement d’au moins 60% en présence de l’extrait aqueux deP. cruentumselon l’invention, en comparaison de la quantité d’IL10 ou d’IL1-α mesurées dans le contrôle (sans extrait mais avec même exercice) (Tableau 4).

En diminuant la quantité des interleukines IL10 et/ou IL17 et/ou IL1-α tel que défini ci-dessus, l’extrait est aussi efficace pour diminuer les courbatures. Les courbatures musculaires désignent une sensibilité, une raideur et/ou des douleurs musculaires diffuses et sont inhérentes à tout effort physique de type sportif, elles s’accompagnent classiquement d’une augmentation de l’inflammation. Ainsi un objet de l’invention concerne l’extrait aqueux selon l’invention ou la composition le comprenant pour son utilisation dans la diminution des courbatures.

Un dernier objet concerne encore une méthode de traitement nutraceutique, non thérapeutique, comprenant l’administration par voie orale ou sublinguale à des mammifères en ayant besoin, d’un extrait aqueux deP. cruentumselon l’invention ou d’une composition le comprenant selon l’invention pour augmenter la récupération et/ou l’endurance musculaire et/ou pour augmenter relaxation musculaire.

Avantageusement au sens de l’invention, cette méthode est destinée à des humains, encore avantageusement les sportifs et/ou les individus présentant des troubles non pathologiques de l’endormissement et/ou du sommeil. Très avantageusement, il s’agit d’individus sains, préférentiellement des sportifs sains ou des individus sains présentant lesdits troubles du sommeil, c’est-à-dire des individus ne souffrant pas d’insomnie ou de dépression, d’anxiété ou de stress ou de douleurs musculaires notamment, tel que défini précédemment dans l’invention.

Préférentiellement, la composition comprenant l’extrait aqueux deP. cruentumutilisée dans le cadre de cette méthode est utilisée sous forme de complément alimentaire.

Cette méthode nutraceutique est efficace pour favoriser l’endormissement et/ou la qualité du sommeil.

EXEMPLES

Exemple 1 : modes de préparation de l’extrait selon l’invention

Exemple 1a): Les souches 161 ou LB 2757 dePorphyridium cruentumde la collection d’algues de l’Université du Texas (UTEX, Austin, USA) ou une souche provenant de France métropolitaine ont été cultivées en conditions contrôlées en photobioréacteurs en mode autotrophe et sous conditions contrôlées de pH, de lumière et de température. La biomasse fraîche a été récupérée, centrifugée puis congelée. L’étape de congélation a permis de rompre les parois cellulaires, de sorte que la biomasse décongelée ne présente plus le caractère gélifié hautement visqueux qu’elle présente normalement. Une quantité de 10% en poids de biomasse par rapport au poids total de la biomasse et du solvant a été extraite par macération avec de l’eau comme unique solvant durant une période de 2 heures à une température de 35°C. L’extrait brut a ensuite été centrifugé, le surnageant a été concentré puis l’extrait a été stérilisé par pasteurisation. L’extrait aqueux deP. cruentumainsi obtenu se présente sous sa forme liquide (47g/L de matière sèche). Une étape supplémentaire de lyophilisation a été mise en œuvre pour obtenir la forme poudre de l’extrait.

Exemple 1b): Les mêmes souches que dans l’exemple 1a ont été cultivées dans les mêmes conditions que celles de l’exemple 1a) et la biomasse fraiche obtenue a été centrifugée puis congelée. L’étape de congélation a permis de rompre les parois cellulaires, de sorte que la biomasse décongelée ne présente plus le caractère gélifié hautement visqueux qu’elle présente normalement. La biomasse ainsi obtenue a été décongelée à basse température puis extraite par macération avec de l’eau comme unique solvant durant une période de 3 heures à une température de 20°C (10% en poids de biomasse par rapport au poids total de la biomasse et du solvant). L’extrait brut a ensuite été centrifugé et le surnageant a été concentré puis l’extrait a été stérilisé par pasteurisation. L’extrait aqueux deP. cruentumainsi obtenu se présente sous sa forme liquide (47g/L matière sèche). Une étape supplémentaire de lyophilisation a été mise en œuvre pour obtenir la forme poudre de l’extrait.

Exemple 2 : Effet d’un extrait aqueux de Porphyridium cruentum selon l’invention sur la relaxation musculaire

Protocole: Des cellules de muscles humaines issues de biopsies de quadriceps d’un patient (individu mâle) de 30 ans ne présentant pas de pathologie neuromusculaire ont été ensemencées en plaques (48 puits) enduites par un film de gélatine 0,1% et maintenues en culture dans un milieu F14 (Gibco, France) comprenant de la glutamine (1% v/v ; Gibco), de l’insuline (0,2% p/v ; Sigma), de l’Epidermal Growth Factor (EGF) (10ng/mL), du facteur de croissance de fibroblastes (FGF) (12,5ng/mL ; Collaborative Research, France), du sérum fœtal bovin (SFB) (10% p/v ; Ficher Scientific) et un mélange de pénicilline et streptomycine (2% v/v ; Panbiotech, ref : P06-07100). Le milieu de culture a été changé tous les 2 à 3 jours. Après transformation des myoblastes en myotubes, des explants de moelle épinière reliés à 4 ganglions rachidiens (DRG) issus d’embryons de rats de 13 jours ont été placés sur la monocouche de cellules musculaires. Les cultures ainsi innervées ont été maintenues à 37°C (5% de CO₂) en milieu minimum (MEM : Minimum Essential Medium Eagle) (75% v/v ; Panbiotech) additionné de 25% (v/v) de milieu 199 (Panbiotech), de FBS (5%), d’insuline (0,2% p/v), du sérum fœtal bovin (SFB) (10% p/v) et du mélange de pénicilline et streptomycine (2% v/v ; Panbiotech, ref : P06-07100). Après 24 heures de co-culture, des neurites croissants à l’extérieur des explants ont été observés. Ces neurites entrent en contact avec les myotubes et induisent les premières contractions spontanées après 8 jours.

Après 21 jours de culture, les plaques ont été placées sous un microscope thermostaté à contraste de phase équipé d’une caméra (Incell2200 ; GE Healthcare). Par puits de culture une fibre musculaire ayant une fréquence de contraction régulière a été identifiée et ses coordonnées stéréotaxiques ont été enregistrées à l’aide d’une platine de microscope motorisée. Les contractions ont alors été enregistrées sur 30 secondes.

Le milieu de culture a alors été remplacé par une solution aqueuse saline contenant l’extrait deP. cruentumselon l’exemple 1a (forme liquide ; 47g/L matière sèche) aux concentrations finales en poids par rapport au volume total du milieu de 0,05µg/mL ou 9µg/mL, ou remplacé par le véhicule (solution saline NaCl à 1,5mg/L). Un contrôle correspondant à la même culture sans ajout de l’extrait d’intérêt et comprenant une solution saline (NaCl) a été mis en œuvre. Les cultures ont été incubées pendant 24 heures. Après 24 heures d’incubation, des enregistrements ont à nouveau été réalisés pendant 1 minute. Au terme de cette acquisition, les cellules ont à nouveau été traitées dans les mêmes conditions puis les cultures ont été incubées pendant 24 heures. Après 24 heures d’incubation (48 heures totales), des enregistrements ont à nouveau été réalisés pendant 1 minute. Au terme de cette acquisition, les cellules ont encore été traitées puis les cultures ont été incubées pendant 24 heures. Après 24 heures d’incubation (72 heures totales), des enregistrements ont à nouveau été réalisés pendant 1 minute. Une culture a été réalisée, 6 puits de culture par condition. Les fréquences de contraction ont été calculées pour chaque temps d’acquisition et comparées à la fréquence de contraction initiale (avant traitement). Une analyse statistique des résultats a été réalisée à l’aide d’un test de Student (6 puits par condition).

Résultats :Les résultats de la diminution moyenne de la fréquence des contractions musculaires sont exprimés dans le tableau 1 et correspondent à la moyenne de 6 réplicas.

fréquence des contractions musculaires mesurées	T0 (MOY)	T24h (MOY)	T72h (MOY)
Contrôle + (NaCl)	100	102,7	100,6
Extrait exemple 1a) (0,05µg/ml final) + NaCl	100	46,3	40,7
Extrait exemple 1a) (9µg/ml final) + NaCl	100	14,2**	0,0***

** p < 0,001 ; *** p<0,0001 vs. contrôle NaCl)

Conclusion :l’extrait aqueux deP. cruentum(0,05µg/ml final) a montré sa capacité à réduire en seulement 24 heures la fréquence des contractions musculaires en comparaison du contrôle (NaCl), et ce de plus de 50%. A concentration plus importante (9µg/ml final), l’extrait a réduit la fréquence des contractions de plus de 80% en 24 heures, démontrant l’effet de l’extrait aqueux deP. cruentumselon l’invention sur la relaxation musculaire.

Exemple 3 : Evaluation de la cytotoxicité de l’extrait aqueux de P. cruentum selon l’invention sur les motoneurones de rat :

Protocole: La cytotoxicité de l’extrait deP. cruentumsur des motoneurones issus de moelles épinières d’embryons de rats de 13 jours, a été étudiée en dénombrant les motoneurones résiduels après une période de 72 heures de culture desdits motoneurones de rat en présence de l’extrait aqueux deP. cruentum(Ex. 1a) sous forme liquide), dans les conditions qui suivent : les moelles épinières isolées ont été placées dans un milieu froid Leibovitz (Dutscher ; référence : P04-27055) et ont ensuite été dissociées par trypsination à 37°C. La réaction a été stoppée par addition de milieu Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM ; Dutscher P04-03600) contenant du sérum de veau fœtal. Les cellules ont été ensemencées en plaques de culture en milieu défini à 37°C (5% de CO₂). Après 6 jours de culture, l’extrait deP. cruentumselon l’exemple 1a à une concentration de 0,05 µg/ml ou 9µg/ml a été ajouté et les cellules ont été incubées durant 3 jours à 37°C. Un contrôle a été réalisé sans ajout de l’extrait deP. cruentum. Après 3 jours de culture, les cellules ont été fixées par une solution de paraformaldehyde (4%) (Fisher Sc. ; référence : J19943) puis incubées en présence d’un anticorps anti-MAP2 (Abcam ab5392). Cet anticorps a été révélé par un anticorps secondaire couplé à un fluorochrome (Fisher Sc. SA510070). Les noyaux ont été marqués par une solution de Hoechst, un marqueur fluorescent nucléaire dans la même solution que l’anticorps secondaire.

Résultats :Les résultats sont présentés dans le Tableau 2 et correspondent à la moyenne de 6 réplicas (MOY). Le pourcentage d’erreur correspond à l’écart-type (sem).

	Nombre moyen de motoneurones au temps T0	Nombre moyen de motoneurones à T 72h (% moyen du contrôle)	SEM
Contrôle + EtOH 0,1%	742	116	7
Contrôle + NaCl 0,1%	642	100	3
Extrait exemple 1a) (0,05µg/ml final)	754	111*	9
Extrait exemple 1a) (9µg/ml final)	712	117**	9

(* p<0,25 ; ** p<0,09)

Conclusion:l’extrait aqueux deP. cruentumpréparé selon l’exemple 1a) n’a pas induit de mortalité des motoneurones de rat après 72 heures de co-culture en comparaison du contrôle (NaCl), démontrant qu’il n’est pas toxique pour les motoneurones

Exemple 4 : Effet de l’extrait aqueux de P. cruentum selon l’invention sur la récupération musculaire, la diminution des courbatures et de la douleur musculaire chez le rat.

Exemple 4a) Diminution de la quantité de marqueurs pro-inflammatoires chez le rat

Protocole :Un essai pré-clinique chez la souris a été conduit comme suit : 3 populations de 9 souris males (modèle C57Bl6J) âgés de 6 semaines ont été acclimatées durant 1 semaine en cage puis ont reçu durant 4 semaines une supplémentation (Régime AIN-936G, SAFE^®U8978 version 22) par voie orale quotidienne consistant en une dose équivalent humain de 250mg (Groupe 1) ou 500mg (Groupe 2) de l’extrait aqueux deP. cruentum(Exemple 1a) sous forme poudre) sous forme de croquettes ou d’un placebo (Contrôle ; Groupe 3) (Croquettes sans extrait, AIN-936G, SAFE^®U8978 version 22). A l’issue de la 4ème semaine, les 3 groupes de souris (Groupes 1, 2 et 3) ont été soumis à un test de course durant 120 minutes (Pente négative -15° ; vitesse progressive jusqu’à 20m/min). Pendant la durée du protocole expérimental, les animaux ont été pesés de manière hebdomadaire. La nourriture a été renouvelée tous les 2/3 jours pour éviter les changements organoleptiques dus à l’oxydation des croquettes ou de ses composants. La prise alimentaire a été mesurée après 1 semaine de régime puis toutes les semaines avant et après une séance d’entrainement. Une collecte de fèces a été réalisée après 1 et 5 semaines de régime. Des prises de sang ont également été réalisées avant le début du protocole (t=0). Lors de la mise à mort, le sang et les muscles (gastrocnémien (GAS), soléaire (SOL) et triceps TRC) ont été prélevés, congelés dans l’azote liquide puis stockés à -80°C. Les interleukines 1α, 6, 10, 17A, ont été dosées à l’issue d’une période de 48heures après le test de course, par dosage multiplex grâce au kit LEGENDplex, Mouse Inflammation Panel, Mix and Match Subpanel (BioLegend, San Diego, USA).

Résultats :les résultats de diminution des marqueurs pro-inflammatoires IL6 (tableau 3) et IL10, IL1-α et IL17 (tableau 4) sont rassemblés dans les tableaux 3 et 4 suivants.

Quantité de marqueurs pro-inflammatoires IL6 mesurée	MOY (pg/ml)
Contrôle Groupe 3 (pas de supplémentation en extrait)	52
Groupe 1 : Extrait deP. cruentumexemple 1a) (250mg)	17*
Groupe 2 : Extrait deP. cruentumexemple 1a) (500mg)	14*

(*One way Anova et test de Dunnett p<0,05)

Conclusion :la quantité d’IL6 a diminué de plus de 50% dans les muscles analysés des souris du groupe 1 ayant reçu la supplémentation orale comprenant l’extrait deP. cruentumselon l’invention (250mg), et de plus de 70% dans les muscles des souris du groupe 2 ayant reçu la dose de 500mg. L’extrait deP. cruentumselon l’invention a donc un effet sur la diminution de la douleur musculaire et sur la récupération musculaire.

Quantité de marqueurs pro-inflammatoires IL10, IL1-α et IL17	MOY (pg/ml)
IL10 Contrôle Groupe 3 (pas de supplémentation en extrait)	461
IL10 Groupe 1 : Extrait deP. cruentumex.1a) 100mg	86**
IL10 Groupe 2 : Extrait deP. cruentumex.1a) 500mg	53**
IL17 Contrôle Groupe 3 (pas de supplémentation en extrait)	28
IL17 Groupe 1 : Extrait deP. cruentumex.1a) 100mg	11**
IL17 Groupe 2 : Extrait deP. cruentumex.1a) 500mg	11**
IL1-α Contrôle Groupe 3 (pas de supplémentation en extrait)	8
IL1-α Groupe 1 : Extrait deP. cruentumex.1a) 100mg	3*
IL1-α Groupe 2 : Extrait deP. cruentumex.1a) 500mg	3*

(One way Anova, test de Dunnett: * p<0,05; ** p< 0,01)

Conclusion :l’extrait aqueux deP. cruentumselon l’invention a montré son efficacité sur la diminution des interleukines pro-inflammatoires en diminuant la quantité mesurée des IL10 d’au moins 80%, celle des IL17 de 60% et celle des IL-α d’au moins 62%. L’extrait selon l’invention est donc efficace pour augmenter la récupération musculaire et diminuer la douleur musculaire.

Exemple 4b) Augmentation de la quantité de marqueurs anti-inflammatoires (IL4) chez le rat

Protocole: un essai pré-clinique chez le rat distinct de celui de l’exemple 4a) a été mis en œuvre comme suit : 4 populations de rats males Wistar (n=8) ont été soumis à une supplémentation quotidienne (produit SAFE^®A04, Baugy, France) enrichi ou non avec l’extrait aqueux deP. cruentumselon l’invention selon l’exemple 1a) sous forme poudre (dose équivalente dose humaine de 2300 mg/jour/humain (70kg) ce qui correspond à une dose de 32,86mg/kg), puis à un protocole d’entrainement durant une période de 7 semaines ou non. Le protocole d’entrainement était le suivant : après 1 semaine d’adaptation consistant à apprendre à courir aux rats, un protocole permettant d’augmenter graduellement le temps de course ainsi que la vitesse, a été mis en œuvre dans le but d’atteindre une vitesse de 33cm/s durant 30minutes, 5 jours par semaine (Pente de 5°). Le Tableau 5 montre le détail de l’augmentation progressive des paramètres de course. Un suivi nutritionnel et un suivi de la prise de poids ont été effectués chaque jour durant les 7 semaines du protocole d’entrainement (Tableau 6). A l’issue de la période de 7 semaines du protocole d’entrainement, les rats ont été euthanasiés puis les parties inférieures des 2 pattes postérieures contenant les muscles soléaire, gastrocnémien et extenseur digital des 4 populations de rats ont été disséquées puis congelées. Un dosage des interleukines IL4 a été effectué dans le plasma des rats par technique ELISA (Kits ab46070, ab100772, ab46073 et ab100765, respectivement (Abcam)). Les résultats sont exprimés en quantité d’IL4 par quantité de plasma (Tableau 7).

Résultats : ils sont rassemblés dans les tableaux 5 à 7 suivants

Suivi nutritionnel quotidien et suivi de la prise de poids corporel après 7 semaines d’entrainement (Moyenne ± Ecart-type).	Prise alimentaire (g/jour/100g poids corporel)	Poids corporel(g)
Contrôle (n=7)	6,62 ± 0,43	508 ± 22
Contrôle & Entrainement (n=5)	6,78 ±0,25	506 ± 22
Extrait deP. cruentumEx. 1a) (n=8)	6,39 ±0,23	508 ± 26
Extrait deP. cruentumEx. 1a) & Entrainement (n=8)	6,09±,17	482 ± 27

Conclusion :la prise alimentaire n’a pas varié entre le contrôle n’ayant pas suivi le protocole d’entrainement et celui l’ayant suivi. La prise alimentaire a varié de manière négligeable parmi les populations de rats supplémentés avec l’extrait selon l’invention, entre ceux ayant suivi le protocole d’entrainement et ceux ne l’ayant pas suivi. La variation de la prise alimentaire entre les rats supplémentés avec l’extrait selon l’invention et ayant suivi le protocole d’entrainement et ceux qui n’ont reçu ni supplémentation en extrait selon l’invention ni protocole d’entrainement est minime et ne peut justifier l’augmentation de la quantité IL4 ci-après. De même, les variations de poids corporel entre les populations est négligeable.

Quantité d’interleukines anti-inflammatoires IL4 mesurée (Moyenne ± Ecart-type)	IL4
Contrôle (n=7)	38,8
Contrôle & Entrainement (n=5)	30,1
Extrait deP. cruentumex.1a (n=8)	47,3
Extrait deP. cruentumex.1a & Entrainement (n=8)	50,8
p	0,0005

Conclusion :la quantité d’interleukines IL4 anti-inflammatoires a augmenté d’au moins 68% en présence de l’extrait aqueux deP. cruentumselon l’invention chez les rats soumis au protocole d’entrainement décrit. L’extrait aqueux selon l’invention est donc efficace pour augmenter la récupération musculaire.

Exemple 5 : Effet d’un extrait aqueux de P. cruentum selon l’invention sur l’endurance musculaire.

Augmentation de l’activité de lactate déshydrogénase (LDH) musculaire chez le rat.

Protocole: Un dosage de lactate déshydrogénase (LDH) a été effectué au niveau des muscles prélevés au sein des 4 populations de rats dans le cadre de l’essai pré-clinique exposé au protocole de l’exemple 4b) et ayant suivi le protocole d’entrainement décrit. Le dosage a été effectué à l’aide du kit de mesure MAK066 (Sigma-Aldrich). La lactate déshydrogénase (LDH) convertit le pyruvate en lactate (et inversement) en présence de nicotinamide adénine dinucléotide (NADH), lequel est oxydé en NAD+. Le dosage effectué a consisté à mesurer au cours du temps la formation de NADH à 450nm. Le poids des muscles gastrocnémien (GAS), long extenseur digital (EDL) et soléaire (SOL) des rats a été mesuré après 7 semaines de protocole (Tableau 8).

Résultats: les résultats sont rassemblés dans les tableaux 8 et 9 suivant

Poids des muscles des différentes populations de rats (Moyenne ± Ecart-type)	GAS/poids corps (%)	EDL/poids corps (%)	SOL/poids corps (%)
Contrôle (n=7)	0,59 ±0,05	0,25 ± 0,05	0,042 ± 0,001
Contrôle & Entrainement (n=5)	0,68 ± 0,02	0,22 ± 0,03	0,071 ± 0,002
Extrait deP. cruentumEx. 1a) (n=8)	0,64 ± 0,05	0,24 ± 0,02	0,051 ± 0,005
Extrait deP. cruentumEx. 1a) & Entrainement (n=8)	0,68 ± 0,02	0,26 ± 0,01	0,054 ± 0,005
p	0,0373 *	0,0480*	0,0629*

*Extrait & entrainement versus Contrôle & entrainement

Conclusion :les résultats ont montré un effet négligeable de l’entrainement sur le poids de tous les muscles analysés, avec une augmentation d’au plus 0,16% entre les 2 contrôles, et d’au plus 0,1% entre les 2 populations de rats supplémentés ou non en extrait deP. cruentumselon l’invention dans le cas du muscle gastrocnémien. L’effet de l’extrait selon l’invention sur le poids des muscles, quels qu’ils soient, est lui aussi négligeable.

Mesure de l’activité LDH musculaire chez le rat (Moyenne ± Ecart-type)	LDH GAS (nmol/min/mg prot)	LDH EDL (nmol/min/mg prot)	LDH soléaire (nmol/min/mg prot)
Contrôle (n=7)	72 ±3	79 ± 11	96 ± 11
Contrôle & Entrainement (n=5)	69 ± 4	68 ± 17	74 ± 6
Extrait deP. cruentumEx. 1a) (n=8) (sans entrainement)	158±31	211±34	268±35
Extrait deP. cruentumEx. 1a) & entrainement (n=8)	150±24	244±41	343±50
p	< 0,0001*	< 0,0001*	< 0,0001*

*Extrait & entrainement versus Contrôle & entrainement

Conclusion :l’entrainement chez la population contrôle de rat n’a pas modifié l’activité de LDH mesurée, quel que soit le muscle squelettique analysé (Contrôle). En revanche, indépendamment de l’entrainement, l’extrait aqueux deP. cruentumselon l’invention a augmenté l’activité de LDH musculaire mesurée : de 69% dans le cas du muscle gastrocnémien (GAS), de plus de 90% dans le cas du muscle long extenseur digital (EDL) et de plus de 100% dans le cas du soléaire (SOL). Dès lors que les rats ont suivis le protocole d’entrainement, l’activité de LDH a augmenté de façon encore plus importante chez les rats supplémentés avec l’extrait selon l’invention : d’au moins 70% du muscle gastrocnémien (GAS), de plus de 130% dans le cas du EDL et de plus de 200% dans le cas du SOL, en comparaison de la population de rats contrôles non supplémentée en extrait et n’ayant pas suivi le protocole d’entrainement. L’extrait aqueux deP. cruentumselon l’invention a donc un effet sur les capacités d’endurance musculaire en favorisant le métabolisme énergétique. En outre les résultats obtenus sont meilleurs que ceux mesurés dans le sang dans l’article de Huang et al. (Tropical Journal of Pharmaceutical Research March 2019; 18 (3): 579-584) alors que le dosage testé était bien plus faible (32,86mg/kg) ce qui montre que l’extrait selon l’invention a une activité amélioré par rapport à la biomasse décrite dans cet article. Ceci et d’autant plus vrai que mesurer l’activité LDH dans les muscles comme dans cet exemple est bien plus fidèle et précis que dans le sang comme dans l’article de Huang et al. car l’activité LDH sanguine est aussi modulée par ailleurs par l’activité des autres muscles que les muscles squelettiques : muscles lisses, muscle cardiaque notamment.

Exemple 6 : Formulations en tant que complément alimentaire de la composition comprenant un extrait aqueux de P. cruentum

Les pourcentages sont exprimés en poids par rapport au poids total de la composition.

Exemple 6a) Formulation sous forme de capsule :

Ingrédient	% poids/poids
Hydroxypropylmethyl cellulose	10-25%
Extrait aqueux deP. cruentumsous forme de poudre	4-89,4%
Maltodextrine	0-70%
Gomme d’acacia	0-70%
Microcellulose	0-70%
Stéarate de magnésium	0,3-5%
dioxyde de Silicone	0,3-5%

Exemple 6b) Formulation sous forme de tablette :

Ingrédient	% poids/poids
Hydroxypropylmethyl cellulose	2-6%
Extrait aqueux deP. cruentumsous forme de poudre	2-35%
Phosphate de calcium	5-85,6%
Gomme d’acacia	5-85,6%
Microcellulose	5-85,6%
Stéarate de magnésium	0,2-4%
dioxyde de Silicone	0,2-4%

Exemple 6c) Formulation sous forme de barre énergétique :

Ingrédient	% poids/poids
Protéines	5-10%
Chocolat	5-15%
Edulcorant	5-10%
Sirop d'agave	5-10%
Emulsifiant	3-10%
Huile de tournesol	5-10%
Huile de colza	5-10%
Polydextrose	3-5%
Fibre d'acacia	3-5%
Vitamines	1-3%
Extrait aqueux deP. cruentumsous forme de poudre	0,1-3%
Tocophérol	0,5-2%
Arôme	1-6%

Exemple 6c) Formulation sous forme de boisson énergétique :

Ingrédient	% poids/poids
Isolat de protéine de lait	80-95%
Lécithine	5-10%
Edulcorant (sucralose)	5-10%
Sirop d'agave	5-10%
Arôme	1-6%
Extrait aqueux deP. cruentumsous forme de poudre	0,1-3%

Claims (15)

1. Composition orale ou sublinguale comprenant un extrait aqueux dePorphyridium cruentum .
2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu’elle comprend au moins un excipient oralement acceptable choisi parmi les agents de support, les agents de charge, les agents conservateurs, les agents acidifiants, les agents émulsifiants, les agents humectants, les agents gélifiants, les agents lubrifiants, les agents d'enrobage ou d'encapsulation, les agents stabilisants ou dispersants, les agents édulcorants et leurs mélanges.
3. Composition selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que sa teneur en extrait aqueux dePorphyridium cruentumest comprise entre 0,1% et 5%, avantageusement entre 0,3% et 3%, très avantageusement entre 0,5% à 2,5%, ou alternativement entre 4% et 90%, avantageusement entre 5 % et 50%, très avantageusement de 10% à 25%, en poids par rapport au poids total de la composition.
4. Composition selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que l’extrait aqueux dePorphyridium cruentumest encapsulé sous forme de liposomes.
5. Composition selon l’une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce qu’elle se trouve sous forme liquide, avantageusement elle est choisie parmi un sirop, un spray, une ampoule, une suspension, une émulsion et une boisson froide ou chaude tel qu’un jus de fruit, en particulier une boisson énergétique.
6. Composition selon l’une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce qu’elle se trouve sous forme solide, avantageusement sous forme d’une poudre, plus avantageusement une poudre dispersible à froid dans l’eau.
7. Composition selon la revendication 6, caractérisée en ce qu’elle est choisie parmi une gélule, capsule, tablette, comprimé, bonbon, gomme à mâcher, granule, pastille, barre énergétique.
8. Composition selon l’une quelconque des revendications 1 à 7 en tant que complément alimentaire, avantageusement à destination des sportifs et/ou d’individus présentant des troubles de l’endormissement et/ou de l’anxiété et/ou du stress.
9. Utilisation non thérapeutique destinée à des mammifères sains d’un extrait aqueux dePorphyridium cruentumou d’une composition le comprenant, avantageusement selon l’une quelconque des revendications 1 à 8, pour augmenter la récupération et/ou l’endurance musculaire et/ou la relaxation musculaire.
10. Utilisation selon la revendication 9 pour augmenter la relaxation musculaire pour favoriser l’endormissement et/ou la qualité du sommeil.
11. Utilisation selon l’une quelconque des revendications 9 ou 10 pour améliorer les performances physiques des mammifères, avantageusement les performances sportives, encore avantageusement des humains.
12. Extrait aqueux dePorphyridium cruentumou composition le comprenant, avantageusement selon l’une quelconque des revendications 1 à 8, pour son utilisation pour diminuer la douleur musculaire, en particulier les courbatures, avantageusement suite à un exercice physique tel que le sport, et/ou pour diminuer l’anxiété et/ou le stress.
13. Méthode de traitement nutraceutique non thérapeutique comprenant l’administration par voie orale ou sublinguale à des mammifères en ayant besoin, d’un extrait aqueux dePorphyridium cruentumou d’une composition le comprenant, avantageusement selon l’une quelconque des revendications 1 à 8, pour augmenter la récupération et/ou l’endurance musculaire et/ou pour augmenter la relaxation musculaire.
14. Méthode selon la revendication 13 pour favoriser l’endormissement et/ou la qualité du sommeil.
15. Méthode selon la revendication 13 ou 14 caractérisée en ce que les mammifères sont des humains, avantageusement des sportifs et/ou des individus présentant des troubles non pathologiques de l’endormissement et/ou du sommeil, et/ou de l’anxiété et/ou du stress.