HU190077B - Process for elaborating of enzyme-fluids consisting of nigericin - Google Patents

Process for elaborating of enzyme-fluids consisting of nigericin Download PDF

Info

Publication number
HU190077B
HU190077B HU96483A HU96483A HU190077B HU 190077 B HU190077 B HU 190077B HU 96483 A HU96483 A HU 96483A HU 96483 A HU96483 A HU 96483A HU 190077 B HU190077 B HU 190077B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
nigericin
mycelium
soln
filtered
solution
Prior art date
Application number
HU96483A
Other languages
Hungarian (hu)
Other versions
HUT34546A (en
Inventor
Istvan Melczer
Janos Balint
Peter Dravai
Pal Gyoerke
Istvanne Horvath
Attila Jakab
Csaba Nagy
Karoly Nagy
Barnane Szekely
Original Assignee
Biogal Gyogyszergyar,Hu
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Biogal Gyogyszergyar,Hu filed Critical Biogal Gyogyszergyar,Hu
Priority to HU96483A priority Critical patent/HU190077B/en
Publication of HUT34546A publication Critical patent/HUT34546A/en
Publication of HU190077B publication Critical patent/HU190077B/en

Links

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

The mycelium sped. by filtration from the acidified or neutral fermentation liquors contg. nigericin is extracted using an aliphatic alcohol with a straight or branched chain contg. 2-4C pref. isopropanol, the extract is freed of mycelium dibris, evaporated in vacuo to an alcohol content of 20-50 wt%, the pH of the extract is adjusted with 40 wt% aq. sodium-hydroxide soln. to 8.5-10.0 (pref. 9.5), the soln. is opt. calrified with activated carbon and filtered, then diluted at the same temp. with 0.5-1.0 times its vol. of water. The crystals sepg. from the soln. are filtered, washed and dried. - The prod. is used as a valuable supplement to animal feedstuffs.

Description

Találmányunk tárgy javított eljárás fermentációs úton képződő nigericin kinyerésére, a ferraentléből kiszúrt micélium alkoholos extrakciójával, azt kővető sóképzéssel és kristályositással.It is an object of the present invention to provide an improved process for the recovery of fermentable nigericin by alcoholic extraction of the mycelium extracted from the ferric juice, followed by salt formation and crystallization.

A nigericin régóta ismert antibiotikum, már 1951-ben feltalálták. [Antibiotics and Chemotherapy 1, 594 (1951)].Nigericin has long been a known antibiotic and was invented in 1951. (Antibiotics and Chemotherapy 1, 594 (1951)).

A szakirodalomban a később leírt polieterin A, [J. Antibiotics 21, 402 (1968)], X-464,- és K-178 jelű antibiotikumok, és az azalomycin M,- és helexin C néven leirt antibiotikumok [Biochemical and Biophysical Rés, Commun. 33, 29 (1968)], mint azt a további vizsgálatok bizonyították, a nigericinnel azonosnak bizonyultak.Polyetherine A, [J. Antibiotics 21, 402 (1968)], the antibiotics X-464 and K-178, and the antibiotics known as azalomycin M, and helexin C, Biochemical and Biophysical Sl, Commun. 33, 29 (1968)], as further studies have shown, are identical to nigericin.

A nigericin az állatgyógyászatban coccidiosis elleni szerként használatos (3 555 150 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás). Alkalmazása orálisan takarmányban adagolva, vagy poralakban történik.Nigericin is used in veterinary medicine as an anti-coccidiosis agent (U.S. Patent 3,555,150). It is administered orally in feed or in powder form.

A mikrobiológiai úton termelt nigericint, a 3 794 732 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás szerint a fermentlé szűrése után nyert micéliumból nyerték ki, oly módon, hogy a hatóanyagot metil-alkohollal extraháltak, az extraktumot betöményitették, majd a vizes sűrítményből a nigericint butil-acetáttal extrahálták. Az oldószeres fázist mosták vizes dikálium-hidrogén-foszfát oldattal, vízzel, és a maradék bepárlása után egy olajos terméket nyertek. Az olajos maradékot petroléterrel extrahálták, és az oldószer elpárologtatósa után visszamaradt olajos anyagot két lépésben extraháltak, először metil-alkohol és petroléter elegyével, majd 90%-os metil-alkohollal. Az így nyert extraktumokat egyesítették, bepárolták. A maradékot benzolban oldották, és aktivált alumínium-oxiddal töltött oszlopon adszorbeáltatták. A szelektív leoldáshoz benzolt, benzol és dietil-éter elegyét, illetve dietil-éter és etil-alkohol elegyét alkalmazták.Microbiologically produced nigericin, U.S. Pat. No. 3,794,732. According to U.S. Patent No. 4,198, it was recovered from mycelium obtained after filtration of the fermentation broth by extracting the active ingredient with methanol, concentrating the extract and then extracting the nigericin from the aqueous concentrate with butyl acetate. The solvent phase was washed with aqueous dipotassium hydrogen phosphate solution, water, and after evaporation of the residue an oily product was obtained. The oily residue was extracted with petroleum ether, and the oil which remained after evaporation of the solvent was extracted in two steps, first with a mixture of methanol and petroleum ether and then with 90% methanol. The extracts thus obtained were combined and evaporated. The residue was dissolved in benzene and adsorbed on a column filled with activated alumina. Benzene, a mixture of benzene and diethyl ether and a mixture of diethyl ether and ethyl alcohol were used for selective dissolution.

Más eljárás szerint [J. Antibiotics 21, 402 (1968), és 7 009 235 sz. japán szabadalmi leírás] a nigericint a metil-alkoholos extraktum bepárlása után nyert sűrítményből kloroformos fázisba vitték, majd többszöri metil-alkohol-viz-kloroformos extrakcióval tisztították. A fermentáció sorén képződött olajos melléktermékektől nagy anyagveszteséggel járó, bonyolult oszlopkromatográfiás eljárással szabadultak meg.According to another method [J. Antibiotics 21, 402 (1968), and 7,009,235. Japanese Patent Application No. 4,123,198], nigericin was concentrated from the concentrate obtained after evaporation of the methanolic extract to the chloroform phase and purified several times with methanolic water-chloroform extraction. The oily by-products formed during the fermentation were resolved by complex column chromatography with high material loss.

Ezek az eljárások körülményesek és nagy anyagfelhasználássá! járnak, ipari méretben csak nehezen valósíthatók meg. A leírásokban a szerzők kitermelési adatokat nem adtak meg.These procedures are cumbersome and costly! they are difficult to implement on an industrial scale. The authors did not provide yield data in the descriptions.

A 165 926 és 166 408 sz. magyar szabadalmi leírásokban egy Streptomyces albus törzzsel végrehajtott fermentációt és a képződő nigericin egyszerű módszerrel történő kinyerését Írták le. Találmányuk alapja az a felismerés, hogy ha a micéliumot lúgos metil-alkohollal extrahálják, betóményítik és a sűrítményt vízzel hígítják, a nigeriéin az oldatból kiválik.Nos. 165,926 and 166,408. Hungarian patents describe the fermentation with a strain of Streptomyces albus and the recovery of the resulting nigericin by a simple method. Their invention is based on the discovery that when the mycelium is extracted with alkaline methanol, concentrated and the concentrate is diluted with water, the nigerine is separated from the solution.

Az eljárás előnye egyszerűségében rejlik. Hátránya, hogy a vizes oldatból a nigericinnel együtt kiválnak a fermentáció során képződött olajos melléktermékek, s az igy kinyert nigericin-alkalieó gyógyászati célra közvetlenül nem alkalmas. Átkristályosltással és/vagy oszlopkromatográfiás úton tovább kell tisztítani, a megfelelő minőségű termék előállítása céljából.The advantage of the procedure lies in its simplicity. The disadvantage is that the oily by-products formed during fermentation are separated from the aqueous solution together with the nigericin and the nigericin alkaline thus obtained is not directly suitable for medicinal purposes. It must be further purified by recrystallization and / or column chromatography in order to obtain a product of appropriate quality.

Munkánk célja olyan eljárás kidolgozása volt, amely az állatgyógyászati célra megfelelő minőségű nigericin előállítását az eddig alkalmazott eljárásoknál egyszerűbben iparilag megvalósítható formában gazdaságosabban valósítja meg.The aim of our work was to develop a process which makes the production of high quality nigericin for veterinary purposes in a more economically feasible form than the methods used hitherto.

Találmányunk alapja az a felismerés, hogy a fermentléből a micéliumot szűréssel eltávolítva, és a nedves micéliumból a hatóanyagot alacsony szénatomszámú alkohollal kioldva, az oldatot 20-50% alkohol tartalomig bepárolva, a'*Tiomogén oldatban alkáli-fém-hidroxiddal sót képezve, majd az oldatot kívánt esetben melegen aktív szénnel derítve, (színtelenítés és olajmegkötés céljából) a nyert alkoholos oldatból hűtéssel és kevés ionmentes víz adagolásával a nigeriéin alkálisó leválasztható, és a kiváló termék szűrés és mosás után gyógyászati célra megfelelő tisztaságú. Az olajos melléktermékek, amelyek az eddig ismert eljárásoknál a termék szenynyeződését eredményezik, szürhetőségét is minőségét rontják, eljárásunkat alkalmazva az alkoholos anyalúgban és a kívánt esetben alkalmazott derítő szénben maradnak. Az anyalügból alkohol-mentesítés után kiváló olajos, erősen szennyezett nigericin ismert módon kristályosítással tisztítható.The present invention is based on the discovery that by removing the mycelium from the fermentation broth by filtration and dissolving the active ingredient from the wet mycelium in a lower alcohol, the solution is concentrated to 20-50% alcohol to form a salt in the thiomogenic solution with alkali metal hydroxide. The solution is optionally clarified with hot activated carbon, (for decolorization and oil binding), the resulting alcoholic solution is cooled and the deionized water is added to remove the alkaline salt of the nigerine, and the excellent product after filtration and washing is of pharmaceutical purity. The oily by-products, which by the prior art processes result in soil contamination, also reduce the filterability of the product by using our process in the alcoholic mother liquor and, if desired, in the clarifying coal used. After removal of the alcohol from the mother liquor, the highly oily, highly contaminated nigericin which has been isolated from the mother liquor can be purified by crystallization in known manner.

Felismerésünk szerint a hatóanyag extrakciója alacsony szénatomszámú alifás alkohollal vitelezhetó ki, előnyösen a micélium tömegére számított 2-5-szörős oldószer térfogat használatával. Kísérleteink alapján az extrakcióhoz legelőnyösebbnek az etil- és i-propil-alkohol alkalmazása bizonyult, 'az azeotróp elegy desztillációval történő térfogatcsökkenése hatására sem válnak ki az olajos termékek, mint a metanol alkalmazása esetében.It has been found that the active ingredient can be extracted with a lower aliphatic alcohol, preferably using a solvent volume of 2 to 5 times the volume of the mycelium. According to our experiments, ethyl and i-propyl alcohol were found to be most advantageous for the extraction, and the reduction of the azeotropic mixture by distillation did not result in oily products as in methanol.

Eljárásunk alkalmas különböző mennyiségű (1000-10 000 ag/cm3) nigericint tartalmazó fermentlevek feldolgozására 60-70% kihozatallal.The process is suitable for treating fermentation broths containing different amounts (1000-10,000 bc / cm 3 ) of nigericin in 60-70% yield.

Az eljárás előnye az ismertetett módszerekkel szemben, hogy Így egyszerű módon, egy lépésben állatgyógyászati célnak megfelelő tisztaságú nigericin-alkálisót tudunk kinyerni a fermentléből, és nincs szükség költséges oszlopkromatográfiás tisztítás alkalmazására.The advantage of the process over the described methods is that, in one simple step, a nigericin alkali salt of purity suitable for veterinary purposes can be recovered from the fermentation broth without the need for expensive column chromatography purification.

A találmány szerinti eljárást az alábbi példákban mutatjuk be részletesen anélkül, hogy találmányunkat ezekre korlátoznánk.The invention is illustrated in detail by the following examples, which are not intended to limit the scope of the invention.

1. példaExample 1

200 liter Streptomyces albus törzzsel végrehajtott, 2000 jug/cma nigericint tartalmazó fermentléból oxálsavval, vagy kénsavval végrehajtott savazée utón a micéliuniot szűréssel eltávolítjuk. Az igy kapott 20 kg micéliumot keverövel ellátott készülékben 60 liter i-propil-alkohollal kevertetjük 3 órán át szobahőmérsékleten. A kevertetés befejezése utón a micéliumot kiszűrjük, a szűrőn 6 liter i-propil-alkohollal mossuk.After the addition of 200 µg / cm2 of acidic gel or oxalic acid or sulfuric acid in the fermentation broth containing nigericin, 200 ml of Streptomyces albus strain is removed by filtration. The resulting 20 kg of mycelium was stirred in a stirred apparatus with 60 liters of i-propyl alcohol for 3 hours at room temperature. After completion of mixing, the mycelium is filtered off and washed on the filter with 6 liters of i-propyl alcohol.

Az extraháló és mosó alkoholokat egyesítés után (63 liter) 10 liter térfogatra besűrítjük vákuumbepárlón. A sűrítmény pH-ját 40%-os nátrium-hidroxid oldattal 9,5-re állítjuk, majd az oldatot 70-75 °C-ra melegítjük, és forrón 100 g aktív szénnel félórán át derítjük. Az aktív szenet az oldatból kiszűrjük, majd a meleg oldathoz 8-12 liter forró ionmentes vizet adagolunk. A víz hűtés hatására megindul a nigericin-nátriumsó kristályok kiválása.The extraction and wash alcohols were combined (63 liters) to a volume of 10 liters on a vacuum evaporator. The pH of the concentrate was adjusted to 9.5 with 40% sodium hydroxide solution, then the solution was heated to 70-75 ° C and clarified hot with 100 g of activated carbon for half an hour. The charcoal is filtered off from the solution and 8-12 liters of hot deionized water are added to the warm solution. Upon cooling of the water, crystals of the sodium salt of nigericin begin to precipitate.

A kristályosítási hőmérséklet 3-5 °C, 8 órán át.The crystallization temperature is 3-5 ° C for 8 hours.

A kristályos terméket az oldatból szűréssel nyerjük ki. A szűrőn az anyagot 5 °C-ra hűtött 50%-os vizes i-propil-alkohollal és ionmentes vízzel mossuk, majd 50 °C-on megszáritjuk.The crystalline product is recovered from the solution by filtration. The filter material was washed with 50% aqueous i-propyl alcohol cooled to 5 ° C and deionized water and dried at 50 ° C.

A termék mennyisége 260 g, ami 1300 g/m3 fermentlé, és 65,0% kihozatalnak felel meg. Olvadáspontja 255-260 °C, hatóanyag-tartalma nagyobb, mint 90%, állatgyógyászati célra megfelelő.The amount of product is 260 g, which is 1300 g / m 3 of fermentation broth, which corresponds to a yield of 65.0%. 255-260 ° C, greater than 90% active ingredient, suitable for veterinary use.

2. példa 5Example 2 5

Az eljárás azonos az 1. példában leírtakkal, de extrahélószerként etil-alkoholt alkalmazunk, és az aktivszenes kezelést elhagyjuk.The procedure is the same as in Example 1, but ethyl alcohol is used as the extraction agent and the activated carbon treatment is omitted.

A kihozatal 65%, a termék minősége azonos az 1. példában nyertével.The yield is 65% and the product quality is the same as that obtained in Example 1.

Claims (1)

Eljárás nigericin tartalmú fermentlevek feldolgozására a savanyított, vagy semleges fermentlé szűrésével elkülönített micéliumból, azzal jellemezve, hogy hatóanyagot 2-4 szénatomszámú egyenes, vagy elágazó láncú alifás alkohollal, előnyös i-propil-alkohollal extrabáljuk, a micélium-mentésitett extraktumot vákuumban 20-50% alkohol tartalom eléréséig Lepároljuk, majd a sűrítmény pH-ját 40%-os vizes nátrium-hidroxid oldattal 8,5-10,0 pH értékre, előnyösen 9,5 értékre állítjuk, kívánt esetben az oldatot aktív szénnel derítjük, szűrjük, azonos hőmérsékleten az oldat . térfogatára számított 0,5-1-szeres mennyiségű vizet adagolunk hozzá, a kiváló kristályokat szűrjük, mossuk, és szárítjuk.Process for processing nigericin-containing fermentation broths from mycelium by filtration of acidified or neutral fermentation broth, characterized in that the active ingredient is extracted with straight or branched aliphatic alcohols having 2 to 4 carbon atoms, preferably i-propyl alcohol. Evaporate and adjust the pH of the concentrate to pH 8.5 to 10.0, preferably to 9.5 with 40% aqueous sodium hydroxide solution, clarify if necessary with charcoal, filter at the same temperature. solution. 0.5-1 times by volume of water are added, the precipitated crystals are filtered, washed and dried.
HU96483A 1983-03-23 1983-03-23 Process for elaborating of enzyme-fluids consisting of nigericin HU190077B (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
HU96483A HU190077B (en) 1983-03-23 1983-03-23 Process for elaborating of enzyme-fluids consisting of nigericin

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
HU96483A HU190077B (en) 1983-03-23 1983-03-23 Process for elaborating of enzyme-fluids consisting of nigericin

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUT34546A HUT34546A (en) 1985-03-28
HU190077B true HU190077B (en) 1986-08-28

Family

ID=10952237

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU96483A HU190077B (en) 1983-03-23 1983-03-23 Process for elaborating of enzyme-fluids consisting of nigericin

Country Status (1)

Country Link
HU (1) HU190077B (en)

Also Published As

Publication number Publication date
HUT34546A (en) 1985-03-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5780274A (en) Process for the isolation of clavulanic acid and of pharmaceutically acceptable salts thereof from the fermentation broth of streptomyces sp. P 6621 FERM P 2804
US2658078A (en) Solvent extraction of oxytetracycline
KR100200239B1 (en) Process for preparing salts of clavulanic acid
HU194903B (en) Process for purifying thilosine
DE69633330T3 (en) PROCESS FOR PREPARING PHARMACEUTICALLY COMPATIBLE SALTS OF CLAVLANIC ACID
US4137397A (en) Erythromycin aldobionates
EP0754239B1 (en) Process for natamycin recovery
US5942611A (en) Process for natamycin recovery
US5618936A (en) Process for preparing (S) (+)-4,4'-(1-methyl-1,2-ethanediyl)-bis (2,6-piperazinedione)
EP0450684B1 (en) A process for the preparation of D-(-)-4-hydroxyphenylglycine and L-(+)-4-hydroxyphenylglycine, starting from D.L.-4-hydroxyphenylglycine
HU190077B (en) Process for elaborating of enzyme-fluids consisting of nigericin
US4203903A (en) Process for the recovery of spectinomycin
EP0867515B1 (en) Process for the isolation of a pharmaceutically acceptable alkali metal salt of clavulanic acid
US5684174A (en) Method for purifying O, S-dimethyl N-acetylphosphoramidothioate
DE69724641T2 (en) CLEANING OF FERMENTED CLAVULIC ACID
US4168268A (en) Process for isolating thienamycin
US4495348A (en) Derivative of cephamycin C
US3013074A (en) Tetracycline purification process
US3154537A (en) Neomycin purification
US3300477A (en) Isolation of 5'-guanylic acid by formation of 5'-guanylic acid dioxanate
US2644816A (en) Purification of antibiotics with water insoluble carboxylic acids
JPH0481600B2 (en)
HU214452B (en) Process for producing salts of deferoxamin b with high purity
US2898268A (en) Acid purification of fumagillin
US6812007B1 (en) Process for the isolation and purification of mevinolin

Legal Events

Date Code Title Description
HU90 Patent valid on 900628
HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee