HUT51643A - Process for producing antiviral agents and pharmaceutical compositions comprising same as active ingredient - Google Patents

Description

Találmányunk tárgya eljárás antivirálls szerek, elsősorban nukleozid-bázisu antivirálls szerek, s ezek közül különösen S’-deoxi-V-azido-szubsztituált nukleozidok előállítására. Találmányunk oltalmi körébe tartozik az ezen vegyületeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítása is, amelyeket virusos fertőzések elleni gyógykezelésre alkalmazhatunk.

A vírusokról régóta tudjuk, hogy a legköltségesebb, legkellemetlenebb és pusztító fertőzések okozói lehetnek. Az utóbbi években ezt a megállapítást támasztja alá az AIDS (Acquired Immuné Deficiency Syndrome) szerzett immunhiány szindróma elterjedése, amelyet a HÍV (Humán Immunodeficiency vírus) fertőzés okoz.

Az AIDS és hasonló betegségeket okozó vírusok elleni kezelésre sokféle hatóanyagot javasoltak. Ezeknek az aktiv hatóanyagoknak azonban kedvezőtlen a terápiás indexük, vagyis aktivitásuk és toxicitásuk aránya (más szavakkal: kedvező hatásukat háttérbe szorítja toxikus természetük)·

Az AZT (3’-azidotimidin) hatóanyagot például a 86307071.0 számú európai szabadalmi bejelentés Ismerteti, amely anyagot jelenleg az AIDS kezelésére alkalmazzák, de a betegség meggyógyitása nem érhető el vele. Az AZT meglehetősen toxikusán hat a csontvelőre, igy a kezelés alatt álló betegeknek gyakran kell vérátömlesztést adni és bár a kezelés a betegség tüneteit enyhíti és az élettartamot meghosszabtitja, mégis az AIDS okozta elhalálozás elkerülhetetlen.

- 3 Másik példaként említendő vegyület a DDC (2*,3’-dideoxi-citidin), amelyet a 86/01626 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés (PCT) ismertet, nemzetközi bejelentési napja 1986. augusztus 8. és az igényelt elsőbbség 1905» augusztus 26. a 769 017 számú amerikai egyesült államokbeli bejelentés alapján. Ennek a hatóanyagnak a HÍV fertőzés elleni kezelésének vizsgálata folyamatban van. az anyag hatékonyabb, mint az AZT, de nagyon toxikus és gyakran súlyos perifériális neuropátiához vezet.

4’-szubsztituált nukleozidokat ismertet az Ann. Ν.Ϊ. Acad. Sci., 255. 151 (1975) közlemény. Különböző 4’-metoxi-purin- és 4*-metoxi-pirimidin-ribonukleozidokat, továbbá 4*-azido-citidint szintetizáltak és megvizsgálták vírusellenes hatásukat, azonban etekintetben semmilyen hasznosítható aktivitást nem mutattak. A 4’-azido-citidin például citotoxikus és HIV-ellenes aktivitást nem mutat.

Kívánatos tehát olyan vírusellenes hatóanyagot találni, amelynek magas terápiás indexe van, vagyis kedvező gyógyító hatással rendelkezik, de toxikus hatása csekély vagy nincs is. A jelen találmány ilyen kedvező hatású, csekély toxicitásu vegyületekre irányul.

Találmányunk az (I) általános képletű 2*-deoxi-4*-azido-nukleozidok - ebben a képletben

- 4 B jelentése guanin-, adenin-, 5-metil-uracil-, (timiil·) uracil-, citozin-n hipoxantin-, xantin-, 5-metil-citozin-, 4-etoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin-, 4-izopropoxi-5-metil-2-oxo-plrimidin vagy 5-metil-2-oxo-pirimidin-gyürüből levezethető csoport,

Σ jelentése hidrogénatom vagy fluoratom,

Y’ jelentése hidrogénatom, hidroxilcsoport, metoxicsöpört vagy fluoratom és

Z jelentése (IV) vagy (V) általános képlett! csoport, ahol n jelentése 0, 1 vagy 3 és mindkét R’ jelentése hidrogénatom vagy rövidszénláncu alkilcsoport, vagy

Y* és Z együttesen ciklusos foszfát-észtert jelentenek és ezek gyógyászatilag elfogadható észterei, éterei és sói előállítására irányul.

Találmányunk oltalmi köre kiterjed az (I) általános képletű vegyületeket vagy ezek gyógyászatilag elfogadható észtereit vagy sóit hatóanyagként hatásos mennyiségben tartalmazó gyógyszerkészítményeknek legalább egy gyógyászatilag elfogadható segédanyaggal történő összekeverés utján történő előállítására is.

A találmány szerinti vegyületek emberek és emlős állatok fertőzéseinek kezelésére alkalmazhatók.

Találmányunk oltalmi körébe tartozik továbbá az (I) általános képletű vegyületek, ezek gyógyászatilag elfogadható sói és észterei előállítására szolgáló (II) általános képletű prekurzorok - ebben a képletben

- 5 B’ jelentése egyezik az (I) általános képlet* értelmezésénél megadott B jelentésével vagy ennek acilezett alakja,

R jelentése metil- vagy acilcsöpört, előnyösen anizoil-, benzoil-, acetil- vagy furán-2-karbonil-csöpört,

X jelentése hidrogén- vagy fluoratom és

Z jelentése egy kilépőcsoportot, előnyösen jódatomot vagy brómatomot tartalmazó metiléncsoport előállítása is·

A találmány szerinti (I) általános képletü vegyületeket - ebben a képletben

B jelentése guanin-, adenin-, timin-, uracil-, citozin-, hipoxantin-, xantin-, 5-metil-citozin-, 4-etoxi-5-metil-2-oxo-primidin-, 4-izopropoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin- vagy 5-metil-2-oxo-pirimidin-gyürüből levezethető csoport,

X jelentése hidrogén- vagy fluoratom,

Y’ jelentése hidrogénatom, hidroxilcsoport, metoxicsoport vagy fluoratom és

Z jelentése (IV) vagy (V) általános képletü csoport, ahol n jelentése 0, 1 vagy 3 és mindkét R* jelentése hidrogénatom vagy rövidszénláncu alkilcsoport vagy

Ϊ’ és Z együttesen egy ciklusos foszíát-észter-csoportot alkotnak • · ·· ♦ • · · ·

- 6 és ezek gyógyászatilag elfogadható észtereit, étereit és sóit az alábbiak szerint állítjuk elő:

a) valamely (II) általános képletü vegyületet ebben a képletben

B’ jelentése egyezik az (I) általános képletü vegyületek értelmezésénél megadott B jelentésével vagy ezek acilezett alakjai,

R jelentése metil- vagy acilcsoport, előnyösen anizoil-, benzoil-, acetil- vagy furán-2-karbonil-csöpört,

X jelentése hidrogén- vagy fluoratom és

Z jelentése egy kilépőcsoportot, előnyösen jódvagy brómatomot tartalmazó metiléncsöpört valamilyen oxidálószerrel reagáltatunk, majd egy bázist addicionálunk rá; vagy

b) valamely (13) általános képletü vegyületet

- ebben a képletben

B jelentése guanin-, adenin-, timin-, uracil-, citozin-, hipoxantin-, xantin-, 5-metil-citozin-, 4-etoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin-, 4-izopropoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin- vagy 5-metil-2-oxo-pirimidin-gyürüből levezethető csoport,

X jelentése hidrogén- vagy fluoratom,

Y’ jelentése hidrogénatom, hidroxilcsoport, metoxicsoport vagy fluoratom, jelentése rövidszénláncu alkilcsoport és

R^ jelentése hidroxilcsoport vagy triszubsztituált szilil-oxi-csoport -

1) az helyén hidroxilcsoportot tartalmazó vegyületek esetében egy szililező szerrel és egy bázissal, majd ezt követően egy aziddal és egy Lewis-sav-katalizátorral reagáltatunk) vagy

2) az helyén egy triszubsztituált szilil-oxi-csoportot tartalmazd vegyület esetében egy aziddal és egy Lewis-sav-katalizátorral reagáltatunkj vagy

c) valamely olyan (I) általános képletű vegyületet, ahol az n Jelentése 0, egy foszforilezőszerrel reagál tatunk, igy olyan (I) általános képletű vegyületeket kapunk, ahol n Jelentése 1 vagy 3» vagy

d) valamely (II) általános képletű vegyületet foszfonsavval vagy egy di-(rövidszénláncu alkil)-foszfonát-sóval reagáltatunk, igy a Z helyén (R’O^PCoJCHgáltalános képletű csoportot tartalmazó (I) általános képletü vegyületet kapunk) vagy

e) valamely (I) általános képletű vegyületet, ahol az n Jelentése 1, valamilyen ciklizáló ágenssel reagáltatunk, igy a megfelelő olyan (I) általános képletű vegyületet kapjuk, ahol Y’ és Z együttesen ciklusos foszfát-csoportot alkotnak) vagy

f) valamely (I) általános képletű vegyületet egy védőcsoport kialakitására alkalmas vegyülettel, utána egy erős bázissal, ezt követően egy alkil-halogeniddel reagáltatunk, majd a védőcsoportot eltávolítjuk, igy az Y* helyén egy étercsoportot tartalmazó (I) általános képle tű vegyületet kapunk; vagy

g) valamely (I) általános képletű vegyületet egy piridin-katalizátorral és egy sav-kloriddal reagáltatunk, igy a megfelelő (I) általános képletű észterhez jutunk; vagy

h) valamely (I) általános képletű vegyületet egy gyógyászatilag alkalmas bázissal történő reagáltatás utján a megfelelő (I) általános képletű bázikus addiciós sójává alakítjuk; vagy

i) valamely.(I) általános képletű bázikus addiciós sóból egy savval történő reagáltatás utján a megfelelő (I) általános képletű szabad vegyületet felszabadítjuk; vagy

j) valamely (I) általános képletű gyógyászatilag elfogadható bázikus addiciós sót az (I) általános képletű vegyület egy másik, gyógyászatilag elfogadható bázikus addiciós sójává alakítjuk át; vagy

k) az (I) általános képletű vegyület valamely észteréből vagy éteréből a megfelelő (I) általános képlett! szabad vegyületet felszabadítjuk·

Az alábbiakban ismertetjük a találmányunk leírásakor használt kifejezések pontos jelentését és értelmezését.

Az alkilcsoport” kifejezés ciklikus, elágazóvagy egyenesláncu, egyértékű, 1-20 szénatomos alkilcsoportokat jelent. Ilyen csoportok például a metil-, etil-, η-propil-, izopropil-, η-butil-, terc-butil-, izobutil-, 2-metil-2-propil-, n-oktil-, η-decil-, n-tetradecil- vagy n-nonadecil-csöpörtök. A rövidszénláncú alkilcsoport

- 9 kifejezés ciklikus-, elágazó- vagy egyenesláncu, egyértékü, 1-4 szénatomos alkilcsoportokát jelent. Példaként említhetjük a metil-, etil-, η-propil-, izopropil-, n-butil-, terc-butil- vagy izobutil-csoportot.

A rövidszénláncú alkoxicsoport” kifejezés olyan -0-K* általános képletű csoportot jelent, ahol az R’ jelentése rövidszénláncú alkilcsoport.

Az acilcsoport olyan -C(»O)-W általános képletű csoportot jelent, ahol W jelentése 1-20 szénatomos alkilcsoport, adamantil-, aril-, aminocsoport, alkil-amino-, dialkil-amino-csöpört, 1-20 szénatomos alkoxicsoport, -CH^-O-CH^, -CHg-NHg vagy (VI) általános képletű csoport, ahol A jelentése hidrogénatom, rövidszénláncu alkilcsoport vagy arilcsoport.

Az arilcsoport elnevezés alatt egyértékű, telítetlen, aromás szénhidrogéncsoportokat értünk, amelyek egyetlen gyűrűt (például fenilcsoport) vagy két kondenzált gyűrűt (naftilcsöpört) tartalmaznak és adott esetben egy, két vagy három szubsztituenssel, igy hidroxilcsoporttal, rövidszénláncú alkilcsoporttal, rövidszénláncu alkoxicsoporttal, klóratommal, fluoratommal és/vagy cianocsoporttal helyettesítve lehetnek.

A halogénétom fluor-, klór-, bróm- vagy jódatomot jelent.

A heterociklusos csoport clyan egyértékü, telítetlen vugy aromás szénhidrogén-csoportot jelent, amelyben egy heteroatom, például nitrogén-, oxigén- vagy kénatom van a gyűrűben és a gyűrűk adott esetben szubszti

- 10 tuálva lehetnek például hidroxil-, oxo-, amino-, imino-, rövidszénláncu alkil-, rövidszénláncu alkoxicsoporttal, bróm-, klór- vagy fluoratommal és/vagy cianocsoporttal· Előnyösek ezek közül a purinok és a pirimidinek·

A purin kifejezés nitrogéntartalmú, két-gyürüs heterociklusos rendszert jelent, beleértve a természetben előforduló purinokat, ilyen az adenin (6-amino-purin), hipoxantin (6-hidroxi-purin), guanin (2-amino-6-oxo-purin) és a xantin (2,6-dihidroxi-purin). Ezek a vegyületek természetes és szintetikus eredetűek is lehetnek, izoláljuk vagy előállítjuk ezeket kémiai, biokémiai vagy enzimológiai módszerek segítségével vagy ezek kombinációja utján.

A pirimidin-csoport kifejezés nitrogéntartalmú, egy-gyürüs, heterociklusos gyűrűt jelent, beleértve a természetben előforduló pirimidineket is, ilyen a citozin (4-amino-2-oxo-pirimidin), uracil (2,4-dioxo-pirimidin), 5-metil-citozin (4-amino-5-metil-2-oxo-pirimidin) és a timin (5-metil-2,4-dioxo~pirimidin). A pirimidin kifejezés azokat a részeket is magában foglalja, amelyeket az anyaváz szubsztituálása utján módosítunk, ilyen például a 4-etoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin, 4-izopropoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin és az 5-metil-2-oxo-pirimidin és hasonlók. Ezek a vegyületek lehetnek természetes eredetűek is és szintetizálni is lehet őket, előállításuk izolálás vagy gyártás vagy ezek kombinálása utján történhet kémiai, biokémiai vagy enzimológiai módszerekkel.

A timidin l-(2-deoxi- b-D-eritro-pentofuranozil)-timint jelent· A vegyületet a konvenció szerint nem 2*-deoxi-timidin-nek nevezzük» annak ellenére, hogy az (I) és (XI) általános képletekben a 2-helyzetben nincs hidroxilcsoport·

A nukleozid olyan vegyületeket jelent, amelyekben egy pentoz-rész kapcsolódik a purin 9-helyzetéhez vagy a pirimidin 1-helyzetéhez vagy pedig egy analógban az ekvivalens helyzethez·

A nukleotid” kifejezés a nukleozid 5’-helyzetében szubsztituált foszfát-észtert jelent· A nukleotidok egy, két vagy három foszforilosoportot tartalmazhatnak. Ilyen módon bármelyik nukleozidnak létezik mono-, divagy trifoszfátja. Továbbá a mono-foazforil-rész a pentozhoz két helyzetben is kapcsolódhat, igy 3’,5’-ciklusos foszfát keletkezik·

Találmányunk szerinti vegyületek elnevezésekor a furanozil-gyürü számozását a (VII) általános képlet szerint végezzük.

A p úrin okát a (Vili) általános képletben alkalmazott számozás alapján nevezzük el, például a guanin a 2-helyzetben aminocsoporttal és a 6-helyzetben oxocsoporttal van helyettesítve.

A pirimidineket a (IX) általános képletben használt számozás alapján nevezzük el, igy például a 2-helyzetben oxocsoporttál, a 4-helyzetben oxocsoporttal és az 5-helyzetben metilcsoporttál helyettesített vegyületet timinnek hivjuk.

A purinban és a pirimidinben a kettőskötések helyzete a szakember számára nyilvánvalóak· A purin- vagy a pirimidin-gyürü hidroxil- vagy aminocsoporttal történő szubsztitúciója esetén a tautomer exo- vagy imino-alakok is beleértendők·

A 3’,5’-ciklikus foszfát-észterek számozását a (X) általános képlet mutatja·

A találmány szerinti vegyületeket a fenti számozási rendszer szerint mint 4’-szubsztituált nukleozidokat és ezek származékait nevezzük el. Az alábbi példákban néhány vegyület elnevezését mutatjuk be·

A B helyén 5-metil-uracil-csoportot, az X helyén hidrogénatomot, az Y* helyén hidroxilcsoportot tartalmazó (1) általános képletű vegyületet, ahol n jelentése u, az alábbiak szerint nevezzük el: 4’-azido-timidin vagy l-(4-azido-2-deoxi- rí -D-eritro-pentofuranozil)-timin vagy l-(4-azido-2-deoxi--D-eritro-pento-furazonil)-5-metil-2,4-dioxo-pirimidin.

A B helyén 2-amino-purin-csoportot, az X helyén hidrogénatomot, az Y* helyén hidroxilcsoportot tartalmazó (I) általános képletű vegyület, ahol az n jelentése 0, elnevezése: 9-(4-azido-2-deoxi- -D-eritro-pentofurazonil)-2-amino-purin.

A találmány szerinti vegyületek közül néhány aszimmetrikus szénatomot tartalmaz és előállíthatok optikailag aktív alakban, igy (b-D vagy ok-L alakban vagy racemátként is. Ha másképpen nem jelöljük, akkor az itt ismertetett valamennyi vegyület ft-D-furanozil-konfigu

- 13 rációju. A találmány oltalmi köre azonban nem korlátozódik erre az alakra, hanem a vegyületek valamennyi optikai izomerjeit és ezek elegyeit is magában foglalja·

A hullámos vonallal jelölt kémiai kötés az aszimmetrikus szénatomok, például a furanozil-gyürü 4’-helyzetében, térbeli helyzetét nem határozza meg (v.ö. [B] reakcióvázlat)·

A gyógyászatilag elfogadható észterek és éterek” olyan (I) általános képlettl vegyületeket jelentenek, ahol az oxigén- vagy nitrogénatomot módosítottuk, például acilezéssel egy -C(«O)-W általános képletű csoportot alakítottunk ki, ahol a W jelentése 1-20 szénatomos alkilcsoport, adamantil-, aril-, amino-, alkil-aminovagy dialkil-amino-csoport, 1-20 szénatomos alkoxicsoport, -CHg-O-CH^ vagy -CHg-NHg csoport vagy (VI) általános képletű csoport, ahol az A jelentése hidrogénatom, rövid szénláncu alkilcsoport vagy arilcsoport (ilyen vegyületeket lehet előállítani az N. Bodor és munkatársai: Pharmac. Ther., 12, 337-386 [19831 közleményben ismertetett módszer szerint), amikoris az ilyen részeket tartalmazó vegyületek fokozott vér-liquorgát pexmeábilitást idéznek elő· Különösen előnyös észterek az adamantoát-, palmitoát- és dihidropiridil-észterek. Találmányunk tehát az ismertetett (I) általános képletű észterekre és egyidejűleg ezek gyógyászatilag elfogadható sóira is irányul. Ugyancsak az oltalmi körbe tartoznak az (I) általános képletű vegyületek izopropil- és benzil-éterei.

A gyógyászatilag elfogadható sók” kifejezés bármilyen, szervetlen vagy szerves savakból vagy bázisokból levezethető sókat jelent. A gyógyászatilag elfogadható anion” kifejezés az ilyen savaddiciós sók anionjait jelenti. A gyógyászatilag elfogadható kation kifejezés ilyen bázisos addiciós sók kationjait jelenti. Az ilyen módon kiválasztott só, anion és/vagy kation biológiai vagy más szempontból nem-kivánatos tulajdonságokkal nem rendelkezhet.

Az anionok szervetlen savakból vezethetők le, ilyenek például a klór-hidrogén-eev, bróm-hictrogén-sav, kénsav (szulfát- és hidrogén-szulfát-sók), salétromsav, foszforsav és hasonlók, vagy szerves savak anionjai, például ecetsav, propionsav, glikolsav, piroszőlősav, oxálsav, almasav, malonsav, borostyánkősav, maiéinsav, fumársav, borkősav, citromsav, benzoesav, fahéj sav, mandulasav, metánszulfonsav, etánszulfonsav, szalicilsav, p-toluol-szulfonsav és hasonlók anionjai.

A kationok bázisokból vezethetők le, ilyenek például az alkáli földfémek hidroxidjai, mint a kalcium-hidroxid, kálium-hidroxid, nátrium-hidroxid, litium-hidroxid és hasonlók, előnyösen a nátrium-hidroxid·

Az inért szerves oldószer vagy az inért oldószer kifejezések azt jelentik, hogy ezek az oldószerek az adott reakciókörülmények között inertek, példaként említendő a benzol, toluol, aceto-nitril, tetrahidrofurán, dimetil-formamid, kloroform, metilén-klorid (vagy

- 15 diklór-metán), dietil-éter, piridin és hasonlók· Ha másképpen nem határozzuk meg, akkor a találmány szerinti reakciókban alkalmazott oldószerek inért szerves oldószerek.

A szükséges mennyiségű” kifejezésen azt a menynyi séget értjük, amennyi a kívánt cél eléréséhez szükséges, igy egy oldatot a kívánt térfogatra, például 100 ml-re feltölteni.

Ha másképpen nem jelöljük, akkor a reakciót atmoszférikus nyomáson, -20 és 100 °C közötti, előnyösen 10 és 50 °C közötti, még előnyösebben szobahőmérséklet körüli hőmérsékleten, például 20 °C-on folytatjuk le.

A vegyületek és köztitermékek izolálása és tisztítása adott esetben bármilyen alkalmas szétválasztási vagy tisztítási módszerrel történhet, ilyenek például a szűrés, extrahálás, kristályosítás, oszlopkromatográfia, vékonyréteg-kromatográfia vagy vastagréteg-kromatográfia vagy ezen módszerek kombinációja. A megfelelő elválasztási és izolálási eljárásokat a példákban szemléltetjük. Természetesen ezektől eltérő, más ekvivalens szétválasztási eljárásokat is alkalmazhatunk·

A gyógykezelés” kifejezés emberek és emlős állatok betegségeinek kezelését jelenti, beleértve az alábbi eseteket:

1) a betegség megelőzése, vagyis a betegség bármelyik klinikai tünetének elkerülései

2) a betegség megakadályozása, vagyis a klinikai tünetek kifejlődésének és erősödésének megfékezése;

3) a betegség csökkentése, vagyis a klinikai tünetek enyhítése.

A hatékony mennyiség olyan adagolást jelent, amely a betegség adott állapotának kezelésére elegendő és a betegtől, a betegségtől és a kezelés módjától függően különbözik·

Az (I) általános képletű vegyületek előállítása:

A reakcióvázlatokban használt jelölések, igy a B, B’, R, X, Y’, z és n jelentése egyezik a találmány leírásában és az igénypontokban megadott jelentésekkel·

Az Ϊ* helyén hidroxilcsöpörtot tartalmazó (I) általános képletű vegyületek az (A) reakcióvázlat szerint állíthatók elő. Az (A) reakcióvázlat szerint alkalmazott (1) általános képletű kiindulási anyagok a 2’-deoxi-eritro-pentofuranozil-nukleozidok, ribofuranozil-nukleozidok és arablno-furanozil-nukleozidok, vagy!· a B jelentése például adenin (6-amino-purin), guanin (2-amino-6-oxo-purin), uracil (2,4-dioxo-pirimidin), timin (5-metil-2,4-dioxo-pirimidin), citozin (4-amino-2-oxo-pirimidin), hipoxantin (6-hidroxi-purin), xantin (2,6-dihidroxi-purin), 5-metil-citozin, 4-etoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin, 4-izopropoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin és 5-metil-2-oxo-pirimidin. Ezen anyagok legtöbbje a kereskedelemben hozzáférhető, beszerezhető például az Aldrieh Chemioal Company vagy a Sigma Chemioal Company cégektől, de szükséges esetben könnyen

- 1Ί előállithatók a szakember számára ismert eljárásokkal vagy a szakirodalomban ismertetett módszerekkel·

A (2) általános képletű köztitermék előállítása:

Az )A) reakcióvázlat szerinti (1) általános képletű vegyületet trifenil-foszfin, jód és piridin elegyével jódozzuk, de alkalmazhatunk más jódozószert is, például metil-trifenoxi-foszfónium-jodid valamilyen oldószerrel, például dioxánnal, tetrahidroíuránnal vagy diklőr-metánnal készített oldatát. A reakcióelegyet szobahőmérséklet és 50 °C közötti hőmérsékleten, előnyösen szobahőmérséklet körüli hőmérsékleten tartjuk 4-16 óra hosszat, előnyösen 8 óra hosszat, majd a kapott (2) általános képletű köztiterméket izoláljuk oly módon, hogy az oldószert elpárologtatjuk és a maradékot extraháljuk, utána kristályosítunk vagy kromatografálunk.

A (3) általános képletű köztltermékek előállítása

A (2) általános képletű vegyületet egy oldószerben, például metanolban vagy más alkoholban vagy dioxánban, tetrahidrofuránban, dimetil-fozmamidban, dimetil-szulíoxidban, előnyösen metanolban oldjuk vagy szuszpendáljuk és egy bázist, például nátrium-metoxidot, kálium-terc-butoxidot, előnyösen nátrium-metoxidot vagy hasonlót adunk hozzá. A kapott oldatot 50-100 °C-on, előnyösen 65 °C körül 12-24 óra hosszat, előnyösen 16 óra hosszat melegítjük. Egy savval, például ecetsavval történő semlegesítés után az oldószert elpárologtatjuk és a kapott (3) általános képletű vegyületet a maradékból

- 18 krietályoéltjük vagy kromatográfiásan izoláljuk.

A (3) általános képletű vegyületet úgy is előállíthatjuk, hogy a (2) általános képletű vegyületet egy oldószerben, például dimetil-formamidban, dlmetil-szulfoxidban, N-metil-2-pirrolidonban eloszlatjuk, majd egy bázist, például l,8-diazabiciklo[5,4,0]undek-7-én-t vagy 1,5~diazabiciklo[4,3,0]non-5-én-t adunk hozzá és a reakcióelegyet 12-24 óra hosszat, előnyösen 16 óra hosszat szobahőmérsékleten tartjuk. Az oldószert elpárologtatjuk, majd a kapott (3) általános képletű vegyületet kromatográfiásan tisztítjuk.

A (4) általános képletű köztitermék előállítása

A (4) általános képletű vegyületeket úgy állítjuk elő, hogy a megfelelő (3) általános képletű vegyület dimetil-formamiddal vagy N-metil-2-pirrolidon-nal vagy hasonló oldószerrel, előnyösen dimetil-formamiddal készített oldatát egy alkálifém-azidnak, például nátrium- vagy litium-azidnak, előnyösen nátrium-azidnak egy jódozószer, például jódos monoklorid vagy jód, előnyösen jódos monoklorid valamilyen oldószerrel, előnyösen az azonos oldószerrel készített elegyéhez adjuk. Az igy kapott reakcióelegyet 5 perc - 2 óra hosszat, előnyösen 1 óra hosszat 0 °C - 50 °C között, előnyösen szobahőmérsékleten keverjük, majd a kapott vegyületet extrahálással, majd előnyösen ezt követő zromatografálással vagy kristályositással izoláljuk.

- 19 A (II) általános képletű vegyületek előállítása

A (4) általános képletű vegyület sav-kloriddal vagy sav-anhidriddel, például benzoil-kloriddal, anizoil-kloriddal, ecetsavanhidriddel vagy hasonlókkal készített oldatát egy oldószerben, például pírídínben 20-50 °C-on, előnyösen szobahőmérsékleten tartjuk 6-24 óra hosszat, előnyösen 16 óra hosszat· A (II) általános képletű vegyületet az oldószer elpárologtatása, majd kromatográfiás vagy kristályosítás utján történő tisztítással kapjuk meg·

Az (I) általános képletű vegyületek előállítása Valamely (II) általános képletű vegyületet egy oldószerben, például vízzel telített diklór-metánban oldunk v$gy szüszpendálunk, majd ezt követően egy oxidálószerrel, például karbonsavas peroxi-savval, így peroxi-benzoesavval, perecetsavval, 3-klór-peroxi-benzoeI savval vagy hasonlókkal reagáltatunk. A reakció melléktermékeit extrakcióval eltávolítjuk és a maradékot bázissal, például vizes nátrium-hidroxiddal, nátrium-metoxiddal, metanolos nátrium-metoxiddal, metanolos ammóniával, aramon!um-hidroxiddal, vizes dimetil-aminnal vagy hasonlókkal reagáltatjuk. A kapott (I-A) általános képletű vegyületet az oldószer elpárologtatása utján izoláljuk és például kromatografálással tisztítjuk.

A fent ismertetett, találmány szerinti módszerrel előállított (I-A) általános képletű vegyületeket kimutatható mennyiségű (II) általános képletű vegyület vagy

— 20 — a só vagy a reakció során alkalmazott peroxi-savból levezethető sav jelenlétével azonosíthatjuk. Ismeretes, hogy a gyógyszerkészítményeknek ki kell elégíteniük a gyógyszerkönyvi standard, előírásokat ahhoz, hogy engedélyeztetni és/vagy piacra lehessen hozni ezeket, továbbá, hogy a prekurzoroknak (ebben az esetben a /11/ általános képletű vegyületeknek) vagy a melléktermékeknek (például savaknak vagy a sóknak) nem szabad a gyógyszerkönyvben előírt mennyiséget meghaladniuk, azonban a jelen találmány szerinti eljárással előállított végtermékek kis mennyiségű, de kimutatható Ilyen anyagokat tartalmazhatnak, például 1 rész/milllőtól 2 % menynyi ségig. Ezt a mennyiséget HPLC-tömegspektroszkópiai módszerrel ki lehet mutatni· Fontos, hogy a hatóanyagok tisztaságát ezekre az anyagokra nyomonkövessük, mivel ezek jelenlétének kimutatásával lehet igazolni a találmány szerinti eljárás alkalmazását·

A (III) általános képletű vegyületeket, különösen az Y* helyén hidroxilcsoportot tartalmazó vegyületeket a (B) reakcióvázlat szerinti eljárással lehet előállítani.

Kiindulási anyagok előállítása

A (B) reakcióvázlat szerinti (5) általános képletü vegyületek a 2*-deoxi-eritro-pentofuranozil-nukleozidok, ribofuranozil-nukleozidok és arabino-furanozil-nukleozidok, aholis a B jelentése például guanin-, adenin-, timin-, uracil-, citozin-, hipoxantin-, xantin-, 5-metil-

- 21 -citozin-, 4-etoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin-, 4-izopropoxi-5-metil-2-oxo-pirimid.in- vagy 5-metil-2-oxo-pirimidin-gyürüből levezethető csoport. Ezeknek az anyagoknak a többsége a kereskedelemben kapható, például az Aldrich Chemical Company vagy a Sigma Chemical Company cégek hozzák forgalomba. Előállíthatok azonban a szakember számára Ismert módszerekkel vagy a szakirodalomban ismertetett eljárásokkal is. Például ilyen módszert ismertet a Synthetic Procedures in Nucleic Acid Chemistry, 1. kötet, Zorbach és Tipson, Eds., Wiley Interscience (1968); és Nucleic Acid Chemistry, 1-3 rész, Townsend and Tipson, Ede., Wiley Interscience (1978, 1978, 1986).

A £6) általános képlett! köztitermékek előállítása

Valamely (5) általános képlett! vegyületet egy szelénezőszerrel, például egy aril-szelenil-halogeniddel vagy szeleno-cianáttal, előnyösen orto-nitro-fenil-szeleno-cianáttal reagáltatunk egy foszfin, például trifenil-foszfin, tri-n-butil-foszfin jelenlétében valamilyen oldószerben, például tetrahidrofuránban, diklőr-metánban vagy dioxánban. A reakcióelegyet 0-50 °C-on, előnyösen szobahőmérsékleten tartjuk 30 perc-24 óra hosszat, előnyösen 1 óra hosszat, a kapott (6) általános képletű vegyületet extrakció, lepárlás utján izoláljuk, majd például kromatográfálássál tisztítjuk.

··» ♦ · · ·· · ··· · · * ··· • · · « · ··· *· *«····

- 22 A (7) általános képletű köztitexmék előállítása Az előzőekben kapott (6) általános képlett! vegyületot egy oldószerben, például diklór-metánban, kloroformban vagy hasonlókban oldjuk és egy oxidálószerrel, például hidrogén-peroxiddal vagy karbonsavas peraciddal, például peroxi-benzoesavval, 3-klór-peroxi-benzoesavval, perecetsavval vagy hasonlókkal reagáltatjuk. Adott esetben egy semlegesítő szert, például nátrium-hidrogén-karbonátot vagy hasonlót adhatunk hozzá. A reakcióelegyet 0-50 °C-on, előnyösen szobahőmérsékleten 5 perc - 24 óra hosszat, előnyösen 30 percig keverjük. A kapott (7) általános képletű vegyületet extrahálás és lepárlás utján izoláljuk, majd adott esetben szilikagélen kromátografálva tisztítjuk. A (7) általános képletű vegyületet előnyösen tisztítás nélkül közvetlenül a megfelelő (8) általános képletű vegyületté alakítjuk át.

A (8) és (9) általános képletű köztitexmékek előállitása

A kapott (7) általános képletű vegyületet egy oldószerben, például toluolban, benzolban vagy hasonlókban egy bázis jelenlétében, például egy trialkil- vagy trialil-amin, előnyösen trietil-amin jelenlétében 50-150 °C közötti hőmérsékleten melegítjük 10 perc - 5 óra hosszat, előnyösen 1 óra hosszat. A kapott (8) általános képletű vegyületet izoláljuk, az oldószert elpárologtatjuk, tisztítjuk és szükséges esetben kristá

- 23 ·« y ·«·· i · · ·♦ · ··· · · · «·« • · « « « ··· ♦· ··· ··· lyositjuk. Az Y* szubsztituens természetétől függően a (9) általános képletű vegyület izomerjét is izolálhatjuk a reakcióélégyből.

A (III) általános képletű vegyületek előállítása

A kapott (8) általános képlétü vegyületet egy persavval, például peroxi-benzoesavval, 3-klór-peroxibenzoesavval, perecetsavval vagy hasonlókkal egy alkoholos oldószer, például primer rövidszénláncu alkoholok, előnyösen metanol, etanol vagy hasonlók jelenlétében reagáltatjuk. A kapott oldatot az Y’ csoporttól függően -40 °C - 50 °C hőmérsékleten néhány perc - 4θ óra hoszszat keverjük. Ha az Y’ például hidrogénatomot jelent, akkor az oldatot előnyösen -10 °C és 0 °C között keverjük 1-42 percig. Amennyiben az Y* helyén fluoratomot tartalmazó vegyületről van szó, akkor az oldatot előnyösen szobahőmérsékleten keverjük 1-48 óra hosszat. A reakcióban használt primer rövidszénláncu alkoholnak megfelelően az helyén rövidszénláncu alkilcsoportot tartalmazó (III) általános képletű vegyületeket extrakció utján izoláljuk, bepároljuk és kristályosítjuk· Szükséges esetben kromatográfiás tisztítást is lefolytatunk.

Más (I) általános képletű 4*-azido-vegyületeket a (C) reakcióvázlat szerint 4*-metoxi-vegyületekből állíthatunk elő.

»··· ··

- 24 A (13) általános képletü vegyületek előállítása

A (III) általános képletü vegyületet egy szilile ző szerrel, például triszubsztituált szilil-kloriddal, igy trimetil-szilil-kloriddal, terc-butil-dimetil-szilil-kloriddal vagy hasonlókkal reagáltatunk egy oldószer, például diklór-metán, kloroform, tetrahidrofurán, dimetil-f ormamid, dioxán és hasonlók, továbbá egy bázis, például trietil-amin, piridin, imidazol vagy hasonlók jelenlétében 0 °C - 60 °C-on, előnyösen szobahőmérsékleten 10 perc - 10 óra hosszat, előnyösen 3 óra hosszat· Az R^ helyén rövidszénláncu alkilcsöpörtot tartalmazó (13) általános képletü vegyületek (ahol Y*, amely a /111/ általános képletben hidroxilcsoport volt, jelentése előnyösen R^ és R^ jelentése triszubsztituált szilil-oxi-csoport) lepárlással, extrakcióval és szükség esetén kromatografálással izolálhatók.

Az (I-D) általános képletü vegyületek előállítása A (III) vagy (13) általános képletü vegyületek oly módon alakíthatók át (I-D) általános képletü vegyület ékké, hogy valamely (III) vagy (13) általános képletü vegyületet egy oldószerben, például diklór-metánban, kloroformban vagy hasonlókban oldunk, majd egy azidot, például azido-trimetil-szilánt, nátrium-azidot, litium-azidot vagy hasonlót adunk a reakcióelegyhez egy Lewis-sav katalizátor, például trimetil-szilil-trifluor-metán-szulfonát, triizopropil-szilil-trifluor-metán-szulfonát vagy hasonlók jelenlétében és a reakciót

- 25 0 °C - 100 °C-on, előnyösen szobahőmérsékleten 10 perc - 100 óra hosszat, előnyösen 24-50 óra hosszat folytatjuk· A kapott (I) általános képletü vegyületet lepárlás utján izoláljuk, kívánt esetben vizes bázissal vagy fluoriddal reagáltatjuk. Végül extrahálunk, majd szilikagélen történő kromatográfálássál és kristályosítással tisztítunk·

Az (I) általános képletü vegyületek foszfonát-sóinak előállítása

Az (I) általános képletü vegyületek foszfonát-sóit úgy állítjuk elő, hogy a (II) általános képletü vegyületeket foszfonsavval vagy egy di-(rÖvidszénláncu) alkil-foszfonát sójával reagáltatjuk a szakirodalomból ismert eljárás szerint.

Az (I) általános képletü vegyületek foszfát-sóinak előállítása

A foszfát-sók előállítására alkalmazható főszforilezőszerek, például a foszforil-klorid, pirofoszforil-klorid és hasonlók, a szakember számára ismert vegyületek·

A nukleozidok 5’-monoioszfát-éf“tereit az anya-nukleozidokból állítjuk elő, például az Imái és munkatársai: Journal of Organic Chemistry, 34« 1547 (1969) közlemény szerint·

A nukleozidok 5’-difoszfát-észtereinek és az 5*-trifoszfát-észtereinek előállítását monofoszfátokból kiindulva folytatjuk le, például a Hoard és munkatársai;

- 26 Journal of the American Chemical Society, 87. 1785 (1965) közleményben ismertetett eljárás szerint.

A nukleozidok 3’,5’-ciklifoszfát-észtereinek előállítását a megfelelő monofoszfátokból folytatjuk le például a Smith és munkatársai: Journal of the Americun Chemical Bociety, 63« 698 (1961) közleményben ismertetett eljárás szerint.

Az (I) általános képlett! vegyületek sóinak előállítása

Az (I) általános képletű vegyületek gyógyászatilag elfogadható sóit az (I) általános képletű vegyűletékből állítjuk elő oly módon, hogy a vegyületet egy alkalmas oldószerben, például vízben oldjuk, majd 1-3 mólekvivalens mennyiségű, előnyösen egy mólekvivalens mennyiségű savat, például klór-hidrogén-savat vagy bázist, például alkálifém-hidroxLdot, igy litium-hidroxidot, kalcium-hidroxidot, kálium-hidroxidot, nátrium-hidroxidot vagy hasonlókat, előnyösen nátrium-hidroxidot adunk hozzá és a kapott elegyet keverjük. A keletkezett sót liofilizálással vagy kicsapással izoláljuk a szakember számára ismert módszerrel.

Az (I) általános képletű vegyületek észtereinek előállítása

Az (I) általános képletű vegyületek gyógyászatilag elfogadható észtereit úgy állítjuk elő, hogy valamely (I) általános képletű vegyület és egy katalizátor, például 4-dimetíl-amino-piridin piridinnel készített elegyét a kialakítandó acil-csoportnak megfelelő sav-klo ···· ·

- 27 ridhoz, például adamantán-karbonsav-kloridhoz, palmitinsav-kloridhoz, N-metil-dihidro-pirid-3-il~karbonsav-kloridhoz vagy izopropionsav-kloridhoz vagy ennek oldószerrel, például metilén-kloriddal, diklór-etánnal vagy hasonlókkal készített oldatához csepegtetjük· A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 10-24 óra hosszat, előnyösen 12-18 óra hosszat keverjük· A kapott terméket a szakember számára ismert módszerek segítségével izoláljuk, például kromatografálás utján.

Előnyös eljárások és az utolsó reakciőlépések A találmány szerinti vegyületeket az alábbi reakciólépésekkel lehet előállítani (az eljárás ismertetésekor a nem lényeges szubsztituenseket nem említjük meg, azok a szakember számára a reakciók ismertetésekor úgyis nyilvánvalóak):

valamely 4’-azido-5 *-deoxi-5’-jód-nukleozidot egy sav-halogeniddel reagáltatva a megfelelő (II) általános képletű vegyület keletkezik;

valamely 3^,-0-acil-4^,-azido-2*,5*-dideoxi-5*-jód-nukleozidot vagy 2’ ,3’-di-0-acil-4*-azido-5*--deoxi-5*-jód-nukleozidot egy persavval, majd egy bázissal reagáltatva a megfelelő (I) általános képletű vegyület keletkezik;

a Z’ helyén metoxLcsoportot tartalmazó (IIJ) általános képletű vegyületet egy Lewis-sav katalizátor jelenlétében valamilyen aziddal reagáltatva a megfelelő (I) általános képletű vegyület keletkezik;

valamely (I) általános képletü vegyületet, ahol n jelentése 0, egy foszforilezőszerrel reagáltatunk, igy a megfelelő (I) általános képletü vegyület keletkezik, ahol n jelentése 1} valamely (I) általános képletü vegyületet, ahol n jelentése 1, egy foszforilezőszerrel reagáltatunk, igy a megfelelő (I) általános képletü vegyület keletkezik, ahol n jelentése 3} valamely (I) általános képletü vegyületet, ahol n jelentése 1, egy ciklizáló ágenssel, például diciklohexil-karbo-diimiddel reagáltatunk, akkor olyan (I) általános képletü vegyületet kapunk, ahol az Y’ és Z együttesen egy ciklikus foszfát-észtert alkotnak} valamely (II) általános képletü vegyületet foszfonsawal vagy egy di-(rÖvidszénláncu)-alkil-foszfonsavval reagáltatva a Z helyén egy (R’OjgPÍOjCHg- általános képletü csoportot tartalmazó (I) általános képletü vegyületet kapunk} valamely (I) általános képletü vegyületben a purin- vagy pirimidin-gyiirü heterociklusos reaktív nitrogénatomjait acilezés utján, például benzoilezéssel megvéd jük, majd egy erős bázissal, például nátrium-hidriddel reagáltatjuk, ezt követően pedig egy alkil-halogenidet, például benzil-bromidot vagy 2-jőd-propánt addicionálunk rá, igy deacllezés után a megfelelő (I) általános képletü étert kapjuk;

valamely (I) általános képletü vegyületet piridin-katalizátorral és egy sav-kloriddal reagáltatunk, ·«·· ··» ··· *··· • e ·· · • * · ··· • · · · ·· ··· ···

- 29 igy a megfelelő észtert kapjuk;

valamely (1) általános képletű vegyületet egy gyógyászatilag elfogadható bázissal reagáltatunk, igy a megfelelő (I) általános képletű bázikus addiciós sót kapjuk;

valamely (I) általános képletű gyógyászatilag elfogadható bázikus addiciós sót egy másik gyógyászatilag elfogadható bázissal szubsztituálunk; és valamely ζΐ) általános képletű bázikus addiciós sót egy savval való reagáltatás utján a megfelelő (I) általános képletű szabad savvá alakitjuk át·

Előnyös vegyületek:

A találmányunk szerinti (I) általános képletű vegyületek közül előnyösek azok, ahol a B jelentése guanin-, adenin-, timin-, uracil-, citozin-, hipoxantin-, xantin-, 5-metil-citozin-, 4-etoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin-, 4-izopropoxi-5“metil-2-oxo-pirimidin- vagy 5-metil-2-oxo-pirimidin-gyürüből levezethető csoport, előnyösen adenin-, guanin-, uracil-, timin- vagy citozin-gyűrűből levezethető csoport.

A találmány szerinti vegyületek közül előnyösek azok az (I) általános képletű vegyületek is, ahol az X jelentése hidrogénatom, s különösen előnyösek az Y’ helyén hidroxilcsoportot tartalmazó vegyületek és ahol B jelentése timin-, uracil-, citozin-, guanin- vagy adenin-gyűrűből levezethető csoport, továbbá az Y* helyén hidrogénatomot tartalmazó vegyületek, ahol a B jelentése

- 30 timin-gyürüből levezethető csoport.

Ugyancsak előnyösek más olyan (I) általános képlett! vegyületek, ahol a B jelentése timin-gyürüből levezethető csoport.

A legelőnyösebb találmány szerinti vegyület a 4*-azido-timidin.

A találmány szerinti vegyületek vírusok, baktériumok és gombák által okozott fertőzések kezelésére alkalmasak.

Általában a találmány szerinti vegyületek emberek és emlős állatok, például egerek, majmok és hasonlók kezelésére használhatók.

A találmány szerinti vegyületek és ezek gyógyászatilag elfogadható sói és észterei, valamint az ezeket a vegyületeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények vírusellenes szerekként, különösen a HIV-okozta immunhiányos betegségek kezelésére alkalmasak.

In vitro körülmények között HIV-ellenes antivirális vizsgálatokat végeztünk például a Chen és munkatársai: Biochemical Pharmacology, 36 (24), 4361-4362 (19Θ7) közleményben Ismertetett módszerrel vagy ennek változatai szerint.

A reverz transzkriptáz és a humán polimeráz gátlásának vizsgálatát a Chen és munkatársai: Molecular Pharmacology, 25. 441-445 (1984) és a Wang és munkatársai: Biochemistry, 21, 1597-1608 (1982) közleményekben ismertetett módszerek vagy ezek változatai szerint végeztük el.

- 31 A toxikológiai vizsgálatokat Diainiak és munkatársai: British Journal of Haematology, 69. 229-304 (1988) vagy Sommadossi és munkatársai: Agents and Chemotherapy, 31 (3), 452-454 (1987) közleményekben ismertetett módszerek vagy ezek változatai szerint végeztük el.

Az in vivő vizsgálatokat a találmány szerinti vegyületek antivirális hatásának igazolására például a Jones és munkatársai: Journal of Virology, 62 (2), 511-518 (1988) közleményben ismertetett módszer vagy ennek módositása szerint végeztük el*

A találmány szerinti vegyületek adagolása terápiásán hatékony mennyiségben történik, vagyis olyan mennyiségben, hogy az adagolás a korábbiakban ismertetett kórképek kezelésére alkalmas legyen. A hatóanyaggal vagy annak sójával történő kezelés minden olyan ismert módon történhet, amelyet a hasonló felhasználású szereknél elfogadottnak lehet tekinteni.

Általában a napi adag mintegy 0,01-150 mg/testtömeg, előnyösen 1,5-75 mg/kg testtömeg és még előnyösebben 5-30 mg/kg testtömeg. Ez azt jelenti, hogy egy 75 kg testtömegű beteg esetében a napi adag mintegy 0,7 mg - 10,5 g, előnyösen 105 mg - 5»25 g és még előnyösebben 350 mg - 2,0 g.

A kezelés történhet báimelyik elfogadott szisztémiás vagy helyi kezelési módszerrel, igy parenterális, orális, intravénás, nazális, transzdermális vagy topikális kezelési módokat alkalmazhatunk. A hatóanyagok szilárd, fél-szilárd vagy folyékony adagolási egységek alak-jajában készíthetők, például tabletták, végbélkúpok, pilulák, kapszulák, porok, oldatok, szuszpenziók, aeroszolok, emulziók vagy hasonlók alakjában alkalmazhatók· A gyógyszerkészítmények szokásos gyógyszerészeti vivőanyagokat vagy segédanyagokat tartalmaznak a hatóanyaggal összekeverve, továbbá más hatóanyagokat, hordozóanyagokat és gyógyhatású anyagokat is tartalmazhatnak.

Az AIDS fertőzés kezelése során például, ha a beteg más vírusos fertőzéstől is szenved, például herpesztől, akkor az (I) általános képletű hatóanyagon felül a vírusos fertőzést enyhítő egy vagy több más hatóanyagot is alkalmazhatunk, ilyenek például az acyclovir, ganciclovlr és foscamet, amelyek a herpeszes vírusos fertőzéseket csökkentik. Az együttes kezelés történhet egyetlen gyógyszer formájában, például úgy, hogy az (I) általános képletű vegyületet és a ganciclovirt gyógyászatilag elfogadható segédanyagokkal összekeverjük, adott esetben a két hatóanyagot különböző segédanyagokkal elegyítjük, hogy a hatás időtartamát egymástól függetlenül tudjuk szabályozni, vagy pedig úgy, hogy a két hatóanyagot külön-külön tartalmazó gyógyszerkészítményekkel egymástól függetlenül végezzük el a kezelést.

Ha szükséges, akkor a gyógyszerkészítmények kis mennyiségű, nem-toxikus segédanyagokat is tartalmazhatnak, például nedvesítőszereket vagy emulgeálószereket, pH-pufferoló szereket és hasonlókat, mint a nátrium-acetát, szorbit-monolaurát, trietanol-amin, stb.

- 33 A találmány szerinti vegyületeket általában olyan gyógyszerkészítmények alakjában alkalmazzuk a kezelésekhez, amelyek valamilyen (I) általános képletű vegyületet és gyógyszerészeti segédanyagokat tartalmaznak· A gyógyszerkészítmények hatóanyagtartalma tág határok között változhat, igy 0,01 tömeg# és 99,99 tömeg# között mozoghat a készítmény teljes tömegére vonatkoztatva, és 0,01 tömeg# és 99,99 tömeg# segédanyagot tartalmazhat. A készítmény előnyösen 3,5-60 tömeg# hatóanyagot tartalmaz, míg a maradék tömeg alkalmas gyógyszerészeti segédanyag.

Az intravénás injekciókkal történő kezelés igen fontos módszer a vírusellenes kezelések sorában. A találmány szerinti vegyületeket is lehet ilyen módon alkalmazni, például úgy, hogy az adott vegyületet, sót, észtert vagy étert egy alkalmas oldószerben, például vízben vagy só-oldatban oldjuk vagy liposzom formulát készítünk belőle, infúziós folyadékként is alkalmazható. A találmány szerinti vegyület napi adggját infúziós utón egyetlen alkalommal is beadhatjuk vagy pedig periodikus időközökben egy infúziós sorozatban végezzük a beadagolást.

Az orális kezelés során az (I) általános képletü vegyületet egy alkalmas napi adagban adagolhatjuk, amely a betegség súlyosságától függ és az egyidejűleg adagolt más gyógyszerek toxikus hatásától. Orális kezelésre alkalmas, gyógyászatilag elfogadható, nem-toxikus

- 34 készítmény bármilyen általában elfogadott segédanyagot tartalmazhat, például ilyen a mannoz, tejcukor, keményítő, magnézium-sztearát, nátrium-szacharóz, talkum, cellulóz, glükóz, zselatin, szukróz, megnézi luxi-karbonát és hasonlók. Ilyen készítmények például a különböző oldatok, szuszpenziók, tabletták, pilulák, kapszulák, porok, fokozatosan kioldódó formulák, stb. Ezek a készítmények 0,01 tömeg/tömeg% és 99,99 tömeg/tömegei (I) általános képletű vegyületet, előnyösen 25 tömeg/tömeg% - 80 tömeg/tömeg% (I) általános képletü vegyületet tartalmaznak.

A készítményeket előnyösen kapszulák, pilulák vagy tabletták alakjában készítjük el és igy ezek a készítmények a hatóanyag mellett higitóanyagokat, például tejcukrot, szukrózt, dikalcium-foszfátot és hasonlókat, továbbá eloszlató anyagokat, például keményítőt vagy származékait, kenőanyagokat, például magnézium-sztearátot és hasonlókat, végül köt ©adagokat, például keményítőt, polivinil-pirrolidont, gumiakáciumot, zselatint, cellulózt és ezek származékait tartalmazzák. Csecsemők részére orális kezelés céljára folyékony készítmény ajánlatos, ilyen a szirup vagy szuszpenzió.

Liposzom gyógyszerkészítmények az utóbbi időkben hódítottak teret a humán terápiában. Előnyük abban nyilvánul meg, hogy a szövetekben történő eloszlást és a farmakokinetikai paramétereket kedvezően befolyásolják.

Á gyógyszerformula kiválasztásakor vagy a betegség szempontjából a hatóanyagot vesszük figyelembe (v.ö. Lopez-Berestein és munkatársai, J. Infect. Dis., 151. 704-710 (1985); Gotfredsen és munkatársai, Biochemical Pharmacology, 32, 3389-3396 (1983); vagy a retikulc-ndotheliális rendszert vizsgáljuk (v.ö. Eppstein és munkatársai, Int· J· Immunotherapy, 2, 115-126 [1986]), a hatóanyag hatásának időtartamát növeljük (v.ö. Gabizon és munkatársai, Cancer Rés., 42. 4734 (1982); Eppstein és munkatársai, Delivery Systems fór peptide Drugs, Eds.

S.S. Davis, L. Illum és E. Tomlinson, Plenum Pub. Corp., New York, pp. 277-283; C. A. Hunt, Biochemica et Biephysica Acta, 719. 450-463 (1982); és Senior és munkatársai, Biochemica et Biophysica Acta, 839. 1-8 (1985), vagy a hatóanyagot eltereljük azokból a szervekből, amelyek különösen érzékenyek annak toxikus hatására (v.ö. Weinstein és munkatársai, Pharmac. Ther., 24. 207-233 (1983); Olson és munkatársai, Eur. J. Cancer Clin. Oncol., 18. 167-176 (1982) és Gabizon és munkatársai, ld. fent).

Injekciózásra vagy orális kezelésre alkalmas lipeszomális folyékony, a hatóanyagot fokozatosan leadó gyógyszerkészítményt ismertet a 4 016 100 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás. Liposzomális kezelésre alkalmas orális készítményként használható liofilizált liposzoma/peptid hatóanyag-elegyet tartalmazó intesztinális kapszulát ismertet a 4 348 384 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás. A szem

vírusos fertőzésének, igy a herpesz keratitisz és HÍV retinitisz kezelésére alkalmas, a hatóanyagot fokozatosan leadó gyógyszerkészítményt ismertet a 4 217 898 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás.

Végbélkúpok

Szisztémiás kezeléshez végbélkúpok alkalmazhatók, amelyek hagyományos kötőanyagokat és hordozóanyagokat, például polialkáli-glikolt, vagy triglicerideket (ilyen a 9í> %-os PEG 1000 és a 4 %-os PEG 4^00) tartalmaznak. Ezeket a végbélkúpokat az aktiv hatóanyagokat tartalmazó elügyekből készítjük, amelyek 0,5 tömeg/tömeg% - 10 tömeg/tömeg%, előnyösen 1 tömeg/tömeg% - 2 tömeg/ törne g/j.

Folyadékok

A gyógykezelésre alkalmas folyadékokat például oldással, diszpergálással és hasonló módokon készíthetjük úgy, hogy mintegy 0,5-20 % fenti hatóanyagot és gyógyászatilag elfogadható segédanyagokat egy hordozóanyagban, például vízben, ső-oldatban, vizes dextrózban, glicerinben, etanolban vagy hasonlókban eloszlatunk, igy oldatok vagy szuszpenziók keletkeznek.

Az ilyen adagolási egységek készítésére szolgáló módszerek a szakember számára ismertek, vagy a szakiroda lomból hozzáférhetők, ld. Remington’s Pharmaceutical Sciences, IJack Publishing Company, Easton, Pennsylvania, 16th Ed., 1980. A kezelésre alkalmazandó készítmény

- 37 gyógyászatilag hatékony mennyiségű hatóanyagot tartalmaz a találmány szerinti kitanításnak megfelelően.

Találmányunkat az alábbi példákkal szemléltetjük, amelyek lehetővé teszik a szakember számára, hogy még világosabban megértse a jelen találmány gyakorlati alkalmazhatóságát. Találmányunkat azonban nem korlátozzuk a szemléltetésként ismertetett példákra.

1. köztitexmék-előállitási példa

IA) A B helyén 5-metil-uracil-csoportot és az X helyén hidrogénatomot tartalmazó (II) általános képletű vegyületek előállítása

0*968 g (4*0 mmól) timidin és 0,65 ml (8,u mmól) piridin 20 ml dioxánnal készített szuszpenziőjához 1,57 g (6,0 mmól) trifenil-foszfint és 1,52 g (6,0 mmól) jódót adunk. A kapott reakcióelegyet 7 óra hosszat keverjük 21 °C-on, majd 1,0 ml metanolt adunk hozzá és az oldószert elpárologtatjuk. A maradék 150 ml etil-acetáttal készített oldatát egymásután 30 ml vízzel, 30 ml 10 %-os vizes nátrium-tio-szulfát-oldattal és 30 ml nátrium-klorid-oldattal extraháljuk· Az etil-acetátos fázist vákuumban sziruppá besűrítjük, majd ezt 50 ml etanollal ebsziatjük és szűrjük· A szürletet 15 ml-re besűrítjük. Hűtés után 5*-deoxi-5*-jód-timidin kristályosodik ki. A kristályokat szűrjük, etil-acetáttal mossuk, majd szárítjuk, igy termékként 0,806 g (2) általános képletű 5*-deoxi-5*-jód-timidint kapunk.

• ·

B) a B helyén különböző szubsztituenseket tartalmazó (2) általános képletű vegyületek előál? -tása

Az 1. köztitermék-előállitási példa A) szakasza szerinti eljárást követjük, azonban a timidin helyett az alábbi kiindulási anyagokat alkalmazzuk:

2*-deoxi-adenozin,

2*-deoxi-quááozin,

2’-deoxi-uridin, *-deoxi-citidin, l-(2-deoxi- ; -D-eritro-pentofuranozil)-4-amino-5-metil-2-oxo-pirimidin, l-(2-deoxi-b-D-eritro-pentofuranozil)-4-etoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin,

1—(2-deoxi- b-B-eritro-pentofuranozil)-4~izopropoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin, l-(2-deoxi- : -D-eritro-pentofuranozil)-5-metil-2-oxo-pirimidin,

9-(2-deoxi- -D-eritro-pentofuranozil)-6-hidroxi-purin és

9-(2-deoxi- .-D-eritro-pentofuranozil)-2,6-dihidroxi-purin;

igy az alábbi vegyületeket kapjuk:

2*,5’-di-deoxi-5’-jód-adenozin,

2*,5*-di-deoxi-5’-jód-quanozin, *,5’-di-deoxi-5’-jód-uridin,

2»^’-di-deoxi-S’-jód-citidin, l-(2,5-di-deoxi-5-jód- h-D-eritro-pentofuranozil)-4-amino-5-metil-2-oxo-piiimidin, • ♦

- 39 1-(2,5-di-deoxi-5-jód- b-D-eritro-pentofuranozil)-4-etoxi-5-metil-2-oxo-piximidin, l-(2,5-di-deoxi-5-jód- ύ-Β-eritxo-pentoXuranozil)-4-izopropoxi-5-metil-2-oxo-piximidin,

1-( 2,5-di-deoxi-5-jód- > -B-eritxo-pentofuxanozil)-5-metil-2-oxo-pirimi(iin,

9-(2,5-di-deoxi-5-jód- -B-exitro-pentofuranozil)-6-hidroxi-puxin és

9-(2,5-di-deoxi-5-jód- - -B-exitxo-pentofuranozil)-2,6-dihidroxi-purin.

2. köztitermék-előállitási példa

A) A B helyén 5-metil-uracil-csoportot és az X helyén hidrogénatomot tartalmazó (3) általános képletü vegyületek előállítása

Nátrium-metoxid 0,85 ml metanollal készített 1 n oldatát 100 mg (0,284 mmól) 5’-deoxi-5’-jód-timidin (előállítása például az 1. köztitenuék-előállitási példa A/ szakasza szerinti eljárással történik) 5 ml vízmentes metanollal készített szuszpenziójához adjuk. A kapott oldatot 16 óra hosszat viaszaiolyatás mellett forraljuk, majd szob hőmérsékletre lehűtjük és jégecet hozzáadásával semlegesítjük. Az oldószernek lepárlás utján történő eltávolítása után a maradékot etanolból átkristályositjuk, igy 58 mg (3) általános képletü 5*“deoxi-timidin-4*-én-t kapunk. Op.: 208-210 °C.

- 4ü -

B) A B helyén különböző szubsztituenseket tartalmazó (3) általános képletű vegyületek előáll!t cl £3 3,

Az 1. köztitermék-előállítási példa A) szakasza szerinti eljárást követjük, azonban kiindulási anyagként az 5’-deoxi-5*-jód-timidin helyett az alábbi vegyületeket alkalmazzuk:

2’ ,5*-dideoxi-5*-j<5d-adenozln,

2’, 5*-did.eoxi-3*-jód-quanozin,

2*,5*-dideoxi-5*-jód-uridin,

2’,5^,-dideoxi-5’-jód-citidin, l-(2,5-dideoxi-5~jód- p-D-eritro-pentofuranozil)-4-amino-5-me til-2-oxo-pirimidin, l-(2,5-dideoxi-5-jód- -D-eritro-pentofuranozil)-4-e t oxi-5-me ti1-2-oxo-pr imidin, l-(2,5-dideoxi-5~jód- ib-D-eritro-pentofuranozil)-4-izopropoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin, l-(2,ö-dideoxi-5-jód- (b -D-eritro-pentofuranozil)-5-metil-2-oxo-pirimidin,

9-(2,5-dideoxi-5-jód- p-D-eritro-pentofuranozil)-G-hidroxi-purin és

9-(2,5-dideoxi-5“jód- -D-eritro-pentofuranozil)-2,u-dihidroxi-purin;

igy az alábbi vegyületeket kapjuk:

* 5 *-dideoxi-adenozin-4-én,

2’5*-dideoxi-guanozin-4-én,

2*5’-dideoxi-uridin-4-én, ···

- 41 - ·

2’5* -dideoxi-ci widin-4-én,

1-(2,5-dideoxi- b-D-eritro-pent-4-eno-fuxanozil)-4-amino-5-me til-2-oxo-pirimidin;

l-(2,5-dideoxi- j-D-eritro-pent-4-eno-furanozil)-4-etoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin, l-(2,5-dideoxi- [- -D-eritro-pent-4-eno-furanozil)-4-izopropoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin, l-(2,5-dideoxi- [b -D-eritro-pBnt-4-eno-furanozil)-5-metil-2-oxo-pirimidin,

9-(2,5-dideoxi- -ű-eritro-pent-4-eno-furanozil)-6-hidroxi-purin és

9-(2,5-dideoxi-j-D-eritro-pent-4-eno-furanozil)-2,6-dihidroxi-purin.

3· köztitexmék-előállitási példa

A) A B helyén 5-metil-uracil-csoportot és az a. helyén hidrogénatomot tartalmazó (3) általános képletű vegyületek előállítása

8,70 g (134 mmól) nátrium-azid 60 ml dimetil-formamiddal készített szuszpenziójához keverés közben nitrogén-atmoszférában 10,8 g (67 mmól) jód-monokloridot adunk· perc eltelte után 6,00 g (26,8 mmól) 5*-deoxi-timidin-4»-en (előállítása a 2. köztitermék-előállitási példa szerint) 600 ml dimetil-formamiddal készített oldatát csepegtetjük hozzá 30 perc alatt. A kapott elegyet °C-on további 1 óra hosszat keverjük, majd 200 ml vizes, telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldatot adunk hozzá, ezt követően annyi telitett, vizes nátrium-tioszulíát-oldatot adunk hozzá, hogy az oldat elszintelenedjen. Az elegyet szűrjük és a szürletet olajjá besűrítjük· Az olaj 300 ml vízzel készített oldatát 250-250 ml etil-acetáttal négyszer extraháljuk. Az egyesitett extraktumokat magnézium-szulfáttál szárítjuk és az oldószert ezután elpárologtatjuk, igy a (4) általános képletü 4*-azido-5*-deoxi-5*-jód-timidint kapjuk termékként 12 g viszkózus szirup alakjában, amely elegendő tisztaságú a következő reakciólépéshez·

B) A B helyén különböző szubsztituenaeket tartalmazó (4) általános képletü vegyületek előállítása

A 3· köztitermék-előállitási példa A) szakasza szerinti eljárást követjük, azonban kiindulási anyagként a timidin-4*-én helyett az alábbi vegyületeket alkalmazzuk:

2*,5’-dideoxi-adenozin-4*-én, ’ 5 *-dideoxi-quanozin-4*«én>, 2’5* -dideoxi-uridin-4·* -én, 2*5*-dideoxi-citidin-4’~én,

1—( 2,5-dideoxi- '>-D-eritro-pent-4-eno-furanozil)-4-amino-5-me ti1-2-oxo-pirimidin, l-(2,5-dideoxi- ?:-D-eritro-pent-4-eno-furanozil)-4-etoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin,

1—(2,5-dideoxi- 6-D-eritro-pent-4-eno-furanozil)-4-izopropoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin,

• ·· ·

1-(2,5-dideoxi- , ,-D-eritro-pent-4-eno-furanozil)-5-meti1-2-oxo-pirimidin,

9-(2,5-dideoxi- -D-eritro-pent-4-eno-furanozil)-6-hidroxi-purin és

9-(2,5-dideoxi- -D-eritro-pent-4-eno-fuxanozil)-2,6-dihidroxi-purin;

igy az alábbi termékeket kapjuk:

*-azido-2·,5 *-dideoxi-5-j ód-adeno zin, *-azido-2’, 5 *-dideoxi-5 *-jód-quanozin,

4*-azido-2’,5 *-dideoxi-5*-jód-uxidin,

4’-azido-2’,5*-dideoxi-5*-jód-citidin, l-(4-azido-2,5-dideoxi-5-jód-3-D-eritro-pento1' ur ano zi 1) -4-amino-5-me t il- 2-oxo-pirimidin, l-(4-azicLo-2,5-dideoxi-5-jód- 6 -D-eritro-pento£uranozil)-4-etoxi55-metil-2-oxo-pirimidin, l-(4-azido-2,5-dideoxi-5-jód-.,-D-eritro-peuto-

1. uranozil)-4-izopxopoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin, l-(4-azido-2,5-dideoxi-5-jód- p-D-eritro-pentofuxanozil)-5-metil-2-oxo-pirimidin,

9-(4-azido-2,5-dideoxi-5-jód- ρ-D-eritro-pentofuxanozil)-6-hidroxi-purin és

9-(4-azido-2,5-dideoxi-5-jód-3-D-eritro-pentoíuranozil)-2,6-dihidroxi-purin·

- 44 4· köztitermék-előállitási példa

A) A B helyén S-metil-uracil-csoportot, az Ϊ* helyén fluoratomot és az X helyén hidrogénatomot tartalmazó (6) általános képletű vegyületek előállítása

2,04 g (8,34 mmól) 3’-deoxi-3’-fluor-timidint és 2,10 g (9,20 mmól) o-nitro-fenil-szeleno-cianátot nitrogén-áramban egy lombikba teszünk· Ezt követően 30 ml száraz tetrahidrofuránt, majd 2,2 ml (8,83 mmól) tri-n-butil-foszfint adunk a lombikba· A kapott elegyet szobahőmérsékleten 1,3 óra hosszat keverjük, majd 200 ml etil-acetáttal hígítjuk és utána 200 ml telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, majd 200 ml nátrium-klorid-oldattál mossuk· Az extraktumot magnézium-szulfáttal szárítjuk és utána csökkentett nyomáson sárga olajjá bepároljuk· Hozam: 6,3 g· A sárga olajnak szilikagéllel töltött oszlopon történő kromatográfiás tisztítása illetőleg hexán és etil-acetát 4:1 térfogat/térfogat arányú elegyével történő eluálása után eluátűmként 2,79 g (6,51 mmól, 78 %) 3’,5’-dideoxi-3’-fluor-5’-[(2-nitro-fenil)-szelenil]-timidint kapunk sárga amorf szilárd termékként.

B) A B helyén különböző szubsztituenseket tartalmazó (6) általános képletű vegyületek előállítása

A 4· köztitermék-előállitási példa A) szakasza szerinti eljárást követjük, azonban kiindulási anyagként

- 45 a 3*-deoxi-3’-fluor-timidin helyett az alábbi vegyületeket alkalmazzuk:

2’,3’-dideoxi-3’-fluor-adenozin, *,3 *-dideoxi-3’-fluor-uridin,

2’,3*-dideoxi-3*-fluor-citidin,

2’,3*-dideoxi-3*-íluor-guanozin, l-(2,3-dideoxi-3-fluor* β-D-eritro-pentofuranozil)-4-amino-5-meti1-2-oxo-pirimidin, l-(2,3-dideoxi-3-fluor- -D-eritro-pentofuranozil)-4-etoxi-5-mötil-2-oxo-pirimidin, l-(2,3-dideoxi-3-fluor- A-D-eritro-pentofuranozil)-4-izopropoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin, l-(2,3-dideoxi-3-fluor- (S -D-eritro-pentofuranozil)-5-metil-2-oxo-pirimidin,

9-(2,3-dideoxi-3-fluor- -D-eritro-pentofuranozil)-6-hidroxi-purin és

9-(2,3-dideoxi-3-fluor- p-D-eritro-pentofuranozil)-2,6-dihid.roxi-purin;

igy termékként az alábbi vegyületeket kapjuk:

2’,3*,5*-trideoxi-3*-fluor-5*-[(2-nitro£enil)-szeleniljadenozil,

2*,3’,5*-trideoxi-3*-fluor-5*-[(2-nitro-fenil)-szelenilluridin,

2’,3* »5*-trideoxi-3’-fluor-5*-[(2-nitro-íenil)-szeleniljcitidin,

2*,3’,5*-trideoxi-3*-fluor-5’-[(2-nitro-fenil)-szeleni1]quano zin,

- 46 1-(2,3,5-trideoxi-3-fluor-5-[ (2-nitro-fenil)-azelenil]- -D-eritro-pentofuranozil)-4-amino-5-metil-2-oxo-pirimidin,

1—(2,3»5-trideoxi-3-fluor-5-[(2-nitro-fenil)-azelenil]- , -D-eritro-pentofuranözil)-4-etoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin,

1-(2,3,5-trideoxi-3-fluor-5-[(2-nitro-fenil)-azelenil]- -D-eritro-pentofuranozil]-4“izopropoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin,

1—( 2,3 * 5-trideoxi-3-fluor-5-[ ( 2-nitro-fenil)-szelenil]- >-D-eritro-pentofuranozil)-5-metil-2-oxo-pirimidin,

9-(2,3» 5-trideoxi-3-fluor-5~í(2-nitro-fenil)-szelenil]- -D-eritro-pentofueanozil)-6-hidroxi-purin és

9-(2,3,5-trideoxi-3-fluor-5-[(2-nitro-f enil)-azelenil]- -D-eritro-pentofuranozil)-2,6-dihiuroxi-purin.

5« köztitermék-előállitási példa

A) A B helyén 5-metil-uracil-csoportot, aa I* helyén fluoratomot éa az X helyén hidrogénatomot tartalmazó (8) általános képletü vegyületek előállítása

2,79 g (6,51 mmól) 3*,5’-dideoxi-3*-fluor-5*-[(2-nitro-fenil)-azelenil]-timidint 53 ml metilén-kloridban oldunk· EzAÉán 17,8 ml telitett nátrium-hidrogén-karbonát-oldatot, majd 1,37 g (6,83 mmól) 85 %-os 3-klór-perbenzoesavat adunk hozzá erőteljes keverés közben. A kapott elegyet 1 óra hosszat szobahőmérsékleten

- 47 keverjük, utána nátrium-tio-szulfát 200 ml 10 tömeg/téríogat%-os vizéé oldatát adjuk hozzá· Az elegyet 200-200 ml 10 %-os n-butanol/kloroform eleggyel kétszer extraháljuk· Az extraktumokat nátrium-klorid-oldattal mossuk, az egyesitett oldatokat magnézium-szulfáttal szárítjuk, majd csökkentett nyomáson bepároljuk, igy 2,90 g szelén-oxicLot kapunk sárga szilárd termék alakjában·

A 2,90 g nyers szelén-oxidot 100 ml toluolban szuszpendáljuk, majd 3,0 ml (21,5 mmól) trietil-amint adunk hozzá· A kapott elegyet 1 óra hosszat 100 °C-on melegítjük, majd szobahőmérsékletre lehűtjük és csökkentett nyomáron fél-szilárd termékké bepároljuk· A maradékot szilikagéllel töltött oszlopon kromatografáljuk, miközben eluálószerként etil-acetát és hexán 4:1 téríogatarányú elegyét használjuk· A kapott anyagot etil-aoetát és hexán elegyebői krittályositjuk, igy 650 mg (2,87 mmól, 44%) 3’ ,5*-dideoxi-3*-íluor-timidin-4’-ént kapunk; op·: 167-169 °C·

B) A B helyén különböző szubsztituenseket tartalmazó (8) általános képletü vegyületek előállítása

Az 5· köztitexmék-előállitási példa A) szakasza szerinti eljárást követjük, azonban kiindulási anyagként a 3’,5’-dideoxi-3*-fluor-5’(2-nitro-fenil)-szelenil]-timidin helyett az alábbi vegyületeket alkalmazzuk:

*,3 *,5 *-trideoxi-3*-fluor-5’-[(2-ni tro-f enil)-szeleniljadenozin,

- 48 2’,3’,5*-trideoxi-3*-fluor-5*-t(2-nitro-fenil)-azelenil]uridin,

2*,3*,5’-trideoxi-3*-fluor-5*-[(2-nitro-fenil)-szelenil]citidin,

2·,3*,5*-trideoxi-3*-fluor-5*-[(2-nitro-fenil)-szelenil]quanozin,

1—(2,3,5-trideoxi-3-fluor-5-[(2-nitro-fenil)-szelenil]-p-D-eritro-pentofuranozil)-4-amino-5-metil-2-oxo-pirimidin,

1-(2,3,5-trideoxi-3-fluor-5-[(2-nitro-fenil)-azelenil]- S-D-eritro-pentofuranozil)-4-etoxi-5-Mietil-2-oxo-pirimidin,

1-(2,3,5-trideoxi-3-fluor-5-[(2-nitro-fenil)-azelenil]- -D-eritro-pentofuranozil)-4-izopropoxi-5-me ti1-2-oxo-pirimidin,

1-(2,3,5-trideoxi-3-fluor-5-[(2-nitro-fenil)-szelenil]- ; -D-eritro-pentofuranozil)-5-metil-2-oxo-pirimidin,

9-(2,3,5-trideoxi-3-fluor-5-t(2-nitro-fenil)-azelenil]- j-D-eritro-pentofuranozil)-6-hidroxi-purin, és

9-r (2,3,5-trideoxi-3-f luor-5-[ (2-nitro-f enil) -szelenilj- -D-eritro-pentof uranozil )^2V6-dihidroxi-: -purinj igy az alábbi termékeket kapjuk:

2’,3’,5’-trideoxi-3’-fluor-adenozin-4*-én,

2* ,3*, 5’-trideoxi-3’-fluor-úri din-4 ’Γθ*¹» ♦♦· · · · ··· • · · · · ··· ·· ·«· ···

- 49 2*,3’,5*-trideoxi-3^,-fluor-citidin-4*-én,

2* ,3’,5*-trideoxi-3*-fluor-quanozin-4^,-én,

1-(2,3,5-trideoxi-3-íluor- ' -D-eritro-pent-4-enofuranozil)-4-amino-5“metil-2-oxo-pirimidin,

1~(2,3» 5-trideoxi-3~íluor- -D-eritro-pent-4-enofuranozil)-4-etoxi-5-metil-2-oxo-pirimídin, l-(2,3,5-trideoxi-3-fluor- fj -D-eritro-pent4-s>nofuranozil)-4-izopropoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin,

1~(2,3»5-trideoxi-3-fluor-j j-D-eritro-pent-4-enofuranozil)-5--metil-2-oxo-pirimidin,

9-(2,3» 5-trideoxi-3-fluor- -D-eritro-pent-4-ennfuranozil)-6-hidroxi-piirin, és

9-(2,3,5-trideoxi-3-fluor- j-D-eritro-pent-4-enofuranozil)-2,6-dihidroxi-purin.

6. köztitermék-előállítási példa

A) A B helyén 5-metil-uracil-csoportot és az X és Y* helyén hidrogénatomot tartalmazó (6) általános képletü vegyületek előállítása

2,0 g (8,84 mmól) 3*-deoxi-timidint és 2,16 g (9,51 mmól) o-nitro-fenil-szeleno-cianátot nitrogén-áramban egy lombikba teszünk, majd 5θ ml száraz tetrahidrofuránt, ezt követően 2,4 ml (9»63 mmól) tri-n-butil-foszfint adunk a lombikba. A kapott elegyet szobahőmérsékleten 1 óra hoazszat keverjük, majd 250 ml etil-acetáttal hígítjuk és utána 250 ml telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, ezt követően pedig 250 ml nátrium-klorid-oldattal mossuk.

.: :··· • ··· • ♦ ··· ··· «ν· ··· ·· ···

5υ λ szerves fázist magnézium-szulfáttal szárítjuk és csökkentett nyomáson sárga olajjá bepároljuk: 6,3 g. A nyers olajat szilikagéllel töltött oszlopon, hexán és etil-acetát 1:10 tériogatarányu elegyének eluálószérként történő alkalmazása mellett kromatografáljuk, rgy termékként 3,15 g (7»67 mmól, 87 %) 3*»5’-dideoxi-5*-[(2-nitro-fenil)-szelenil]-timidint kapunk sárga amorf szilárd anyag alakjában.

B) A B helyén különböző szubsztituenseket tartalmazó (6) általános képletü vegyületek előállítása

A 6. köztitermék-előállitási példa A) szakasza szerinti eljárást követjük, azonban kiindulási anyagként a 3’-deoxi-timidin helyett az alábbi vegyületeket alkalmazzuk:

*,3 *-dideoxi-adenozin,

2’,3*-dideoxi-uridin,

2*,3*-dideoxi-citidin,

2’,3’-dideoxi-guanozin, l-(2,3-dideoxi-f -D-eritro-pentofuranozil)-4-amino-5-meti1-2-oxo-pirimidin, l-(2,3-dideoxi- -D-eritro-pentofuranozil)-4-e toxi-5-me ti1-2-oxo-pirimidin,

1—(2,3-dideoxi- _H-D-eritro-pentofuranozil)-4-izopropoxi-5-nietil-2-oxo-pirimidin, • ♦

- 51 1-(2,3-d.ideoxi- > -D-eritro-pentofuranozil) -5-metil-2-oxo-pirimidin,

9-(2,3-dideoxi- -D-eritxo-pentofuranozil)-G-hidroxi-purin és

9-(2,3-dideoxi- -D-eritro-pentofuranozil)-2,6-dihidroxi-purinj igy az alábbi termékeket kapjuk:

5*-[(2-nitro-fenil)-szelenil]-2*,3* »5*-trideoxi-adenozin,

5»-[(2-nitro-fenil)-szelenil]-2’,3’»5*-trideoxi-uridin,

5*-[(2-nitro-fenil)-szelenil]-2’,3’,5*-trideoxi-citidin,

5*-((2,-nitro-fenil)-szelenil]-2*,3’,5*-trideoxi-guanozin, l-(5-[ ( 2-nitro-f enil)-széléül]-2,3,5-trideoxi-

- -D-eritro-pentofuranozil)-4-amino-5-metil-2-oxo-pirimidin,

1-(5-((2-nitro-f enil)-szelenil] -2,3»5-trideoxi-

- j-D-eritro-pentofuranozil)-4-etoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin,

1-(5-((2-nitro-fenil)-szelenil]-2,3 * 5-trideoxi-

- fi-D-eritro-pentofuranozil)-4-izopropoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin,

1-(5-((2-nitro-fenil)-szelenil]-2,3»5-trideoxi-

- Λ -D-eritro-pentofuranozil)-5-metil-2-oxo-pirimidin,

9-(5-( (2-nitro-fenil)-szelenil]-2,3,5-trideoxi- -D-eritro-pentofuranozil)-6-hidroxi-purin és

9-(5-((2-nitro-fenil)-szelenil]-2,3,5-trideoxi-í> -D-eritro-pentofuranozil)-2,6-cLihidroxi-purin.

7« köztitermék-előállitási példa

A) A B helyén 5-metil-uracil-csoportot, az X és Y*helyén hidrogénatomot tartalmazó (8) és (9) általános képletű vegyületek előállítása

3,04 g (7,41 mmól) 3*,5’-dideoxi-5’-[(2-nitro-fenil)-szelenil]-timidint 20 ml metilén-kloridban eloszlatunk, majd 20 ml telitett nátrium-hidrogén-karbonátot és utána erőteljes keverés közben 1,58 g (7,78 mmól) 85 %-os 3-klór-peroxi-benzoesavat adunk hozzá· A kapott elegyet 20 percig szobahőmérsékleten keverjük, majd 20 ml 10 térfogat/térfogat%-os nátrium-tio-szulfát és viz elegy é be öntjük· Az elegyet 200-200 ml metilén-kloriddal kétszer mossuk, majd utána 200-200 ml kloroformmal kétszer és 100 ml kloroformmal egyszer mossuk· A kapott extraktumokat nátrium-klorid-oldattal mossuk és az egyesitett oldatokat magnézium-szulfáttal szárítjuk. Az oldószer elpárologtatása után 3,06 g szelén-oxidot kapunk sárga szilárd anyag alakjában·

A 3,00 g nyers szelén-oxidot 100 ml toluolban szuszpendáljuk, majd 3*0 ml (21,5 mmól) trietil-amint adunk hozzá· A kapott elegyet 1 óra hosszat visszafolyatás közben forraljuk, utána szobahőmérsékletre lehűtjük

- 53 és fél-szilárd maradékká bepároljuk· A maradékot szilikagéllel töltött oszlopon, etil-acetát és hexán 6:4 térfogatarányu eluálószer alkalmazásával kromatografáljuk, utána etil-acetát és hexán elegyéből kristályositunk, igy 646 mg (44 %) 3*,5’-dideoxi-timidin-4*-ént (op.: 149-153 °C) és 286 mg 3’,5’-dideoxi-timidin-3’-ént kapunk C19»5 %» op·: 155-156 °C).

B) A B helyén különböző szubsztituenseket tartalmazó (8) általános képletű vegyületek előállítása

A 7· köztitermék-előállitási példa A) szakasza szerinti eljárást követjük, azonban kiindulási anyagként a 3*,5’-dideoxi-5*-[(2-nitro-fenil)-szelenil]-timidin helyett az alábbi vegyületeket alkalmazzuk:

5*-[(2-nitro-fenil)-szelenil]-2*,3’,5’-trideoxi-adenozin,

5*-[(2-nitro-fenil)-szelenil]-2*,3’,5’-trideoxi-uridin,

5’-[(2-nitro-fenil)-szelenil]-2’,3*,5*-trideoxi-citidin,

5’-[(2-nitro-fenil)-szelenil]-2*,3*,5*-trideoxi-guanozin, l-(5-[(2-nitro-fenil)-szelenil]-2,3,5-trideoxi- (b -D-eritro-pentofuranozil)-4-amino-5-metil-2-oxo-pirimidin,

1-( 5-( (2-nitro-íenil)-szelenil]-2,3, 5-trideoxi-

- j\ -L-exitro-pentofuranozil)-4-etoxi-5-metil-2-oxo-

-pirimidin,

1-(5-[(2-nitro-fenil)-szelenil]-2,3,5-trideoxi-

- pi-i)-eritro-pentofuranozil)-4-izopropoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin,

1-(5-((2-nitro-fenil)-szelenil1-2,3,5-trideoxi-

- -L>-eritro-pentof uranozil)-5-metil-2-oxo-pirimidin,

9-(5-((2-nitro-fenil)-s zelenil]-2,3,5-trideoxi-

- ?; -D-eritro-pentof uranozil)-!o-hidroxi-purin és

9-(5-((2-nitro-fenil)-szelenil]-2,3,5-trideoxi-ü-eritro-pentofuranozil)-2,6-dihidroxi-purinj igy az alábbi termékeket kapjuk:

2’ ,3’,5’-trideoxi-ad.enozin-4’-én, *, 3 *, 5’-trideoxi-uridin-4’-én,

2’ ,3’ ,5’-trideoxi-citiclin-4*-én,

2*,3’,5*-trideoxi-guanozin-4*-én, l-(2,3,5-trideoxi-p -pent-4-enofuranozil)-4-amino-5-metil-2-oxo-pirimidin,

1-(2,3,5-trideoxi- , -pent-4-enofuranozil)-4-etoxi-b-metil-2-oxo-pirimidin, l-(2,3,5-trid.eoxi- . -pent-4-enofuranozil)-4-izopropoxi-5-metil-2-oxo-pirimid.in,

- 1-(2,3,5-trideoxi- C~ -pent-4-enofuranozil)-5-metil-2-oxo-pirimid.in,

9-(2,3,5-trideoxi->pent-4-enofuranozil)-6-hidxoxi-purin,

- 55 9-(2,3,5-trideoxi- f) -pent-4-®nofuranozil)-2,6-dihidroxi-purin,

2’,3’,5*-trideoxi-adenozin-3*-én,

2’,3*,5*-trideoxi-uridin-3*-én,

2’,3*,5*-trideoxi-citidin-3*-én,

2’,3*,5’-trideoxi-guanozin-3*-én,

1-(2,3,5-trideoxi- j'j -pent-3-enofuranozil)-4-amino- 5-me til-2-oxo-pirimidin,

1-(2,3,5-trideoxi- -pent-3-enofuranozil)-4-etoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin,

1-(2,3,5-trideoxi- ;-pent-3-enofuranozil)-4-izopropoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin,

1-(2,3,5-trideoxi- ^-pent-3-enofuranozil)-5»metil-2-oxo-pirimidin,

9-(2,3,5-trideoxi- - -penx-3-enofuranozil)-6-hidroxi-purin és

9-(2,3,5-trideoxi- ί-pent-3-enofuranozil)-2,6-dihidroxi-purin.

1. példa

3>-O-p-anizol-4’-azido-5’-deoxi-5*-jód-timidin előállítása

I A) A B helyén 5-metil-uracil-csoportot, a Σ helyén jód-metil-csoportot, az Y* helyen O-p-anizol-csoportot és az X helyén hidrogénatomot tartalmazó (II) általános képletű vegyületek előállítása

II g (28 mmól) 4*-azido-5*-deoxi-5*-jód-timidin, valamely (4) általános képletű, például a 3) köztitermék-előállitási példa A) szakasza szerint előállított vegyület és 5,3 g (31 mmól) p-anizoil-klorid

100 ml piridinnel készített oldatát 16 óra hosszat 21 °C-on tartjuk. Ezután 10 ml metanolt adunk hozzá és az oldatot viszkózus sziruppá besűrítjük. A szirupot 800 g szilikagéllel töltött oszlopon, 2 % metanolt tartalmazó diklór-metán eluálószer alkalmazása mellett kromatografáljuk. Termékként 13 g cim szerinti, tiszta 3 *-0-p-ani zoil-4 *-azido-5 *-deoxi-5 * -jód-timidint kapunk (95 %) hab alakjában, etanolból kristályosítjuk; op.: 153-154 °C.

B) A B helyén különböző szubsztituenseket tartalmazó (II) általános képletű vegyületek előállítása

Az 1. példa A) szakasza szerinti eljárást követjük, azonban kiindulási anyagként a 4*-azido-5*-deoxi-5* -jód- timi din helyett az alábbi vegyületeket alkalmazzuk:

4’-azido-2 *,5*-dideoxi-5 * -jód-adenozin,

4’-azido-2’, 5 *-áideoxi-5*- j ód-guanozin, *-azido-2 *,5 *-dideoxi-5 *-jód-uridin,

4*-azido-2*, 5 *-dideoxi-5 *-jód-citidin,

1- (4-azido-2,5-dideoxi-5-j ód- |,v -D-eritro-pentofuranozil)-4-amino-5-m6til-2-oxo-pirimidin,

1—(4-azido-2,5-dideoxi-5-jód- >-D-eritro-pentofuranozil)-4-etoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin,

1—(4-azido-2,5-dideoxi-5-jód-\ -D-eritro-pentofuranezil)-4-izopropoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin,

1—(4—azido—2,5—dideoxi—5—jód— -D-eritro-pentofuranozi1)-5-metil-2-oxo-pirimidin,

9-(4-azido-2,5-dideoxi-5-jód- _-D-eritro-pentofuranozil)-6-hidroxi-purin és

9-(4-azido-2,5-dideoxi-5-j ód- -D-eritro-pentofuranozil)-2,6-dihidroxi-purin;

igy az alábbi termékeket kapjuk:

1P,(P -di-p-anizoil-4*-azido-2*,5*-dideoxi-5’-jód-adenozin,

-tri-p-anizoil-4*-azido-2*,5*-dideoxi-5 *-j ód-adeno zin,

-di-p-anizoil-4*-azido-2*,5*-dideoxi-5*-jód-guanozin,

-tri-p-anizoil-4*-azido-2*,5*-dideoxi-5’-jód-guanózin, íP -p-anizoil-4’-azido-2*,5*-dideoxi-5*-jód-urid.in, 223-225 °C (bomlik),

N^o^-di-p-anizoil^’-azldo-^*, 5*-dídeoxi-5’-jód-citidin, ,,0·^-tri-p-ani zoil-4 *-azido-2’, 5 ’-dideoxi-5’-jód-citidin,

N^-p-anizoil-l-(0^-p-anizoil-4-azido-2,5-dideoxi-b-jód- -jJ-eritro-pentofuranozil)-4-amino-5-meti|-2-oxo-piriioidin,

N²*·, U^-di-p-anizoil-1- ( ü^-p-ani zoil-4-azido-2,5-dideoxi-5-jód- |4 -D-eritro-pentofuranozil)-4-amino-5-metil-2-oxo-pirimidin, l-( (P-p-anizoil-4-azido-2,5-dideoxi-5-j ód- (b-D-eritro-pentofuranozil)-4-etoxi-5-metil-2-oxo-piriiiiidin, l-( (P-p-anizoil-4-azido-2,5-dideoxi-5-jód- [b -B-eritro-pentofuranozil)-4-izopropoxi-5-metilA2-oxo-pirimidin, o6-p-anizoil-9-((P-p-anizoil-4-azido-2,5-dideoxi-5-jód-^ -D-eritro-pentoíuranozil)-6-hidroxi-purin cs

O^, 0^-di-p-anizoil-9-(0^-p-anizoil-4-azid.o-2,5-dideoxi-5-jód--D-eritro-pentofuranozil)-2,6-dihidroxi-purin és l-(0^-p-anizoil-4-azido-2,5-dideoxi-5-jód-£> -D-eritro-pentofuranozil)-5-jód-5-metil-2-oxo-pirimidin.

IC) Az Ϊ’ helyén O-benoil-csoportot tartalmazó (II) általános képletü vegyületek előállítása

Az 1. példa A) szakasza szerinti eljárást követjük, azonban kiindulási anyagként a p-anizoil-klorid helyett ekvivalens mennyiségű benzoil-kloridot alkalmazunk, • ·

- 33 igy termekként 4*-azido-3’-ú-benzoil-5’-deoxi-5*-jód.-t mai din, B ,H ,0** -tribenzoil-4’-azido-2’,5’-deoxi-5’-jód-ádenozin és más, az A) szakaszban megjelölt megíelelő vegyületek állíthatók elő.

2. példa

4’-azido-timidin előállítása

2A) A B helyén 5-metil-uracil-csoportot, az Y’ helyén hidroxilcsoportot és az Σ helyén hidrogénatomot tartalmazó (I) általános képletü vegyületek előállítása, ahol az n ® 0

21,0 g (103 mmól) 85 %-os 3-klór-peroxi-benzoesav diklór-metannal készített és vízzel telített (150 ml) oldatát keverés közben 12,0 g (22,8 mmól) 3’-0-p-anizoil“4’-azído-5^,-deoxi-5^,-jód-timidin (előállítható például az 1. példa szerinti eljárással) vízzel (150 ml) telített diklór-metános oldatához adjuk. A reakcióelegyet 21 °C-on 3 óra hosszat állni hagyjuk, majd 2üo ml diklór-metánnal és 50 ml n-butanollal hígítjuk, majd az elegyet egymásután 100 ml telített, vizes nátrium-hidrogén-ssuliittál, 100 ml telített, vizes nátrium-hidrogén-kurbonáttal és 100 ml vízzel extraháljuk. A szerves i'ázist ezután vákuumban viszkózus sziruppá bepároljuk. jx szirup 250 ml metanollal és 250 ml koncentrált aramóniimi-hidroxiddal készített oldatát 16 óra hosszat 21 °C-on tartjuk, majd az oldószert elpárologtatjuk. A maradékot 500 g szilikagéllel töltött oszlopon, 8 % me60 tanolt tartalmazó diklór-metán eluálószer alkalmazása mellett kromatografáltuk. A kapott terméket etanolból kristályosítjuk, igy a cim szerinti 4*-azido-timidin vegyületet kapjuk. Hozam: 1,46 g (23 %), op.: 175-176 °C.

B) A B helyén különböző szubsztituenseket tartalmazó (I) általános képletü vegyületek előállítása

A 2. példa A) szakasza szerinti eljárást követjük, azonban kiindulási anyagként a 3*-0-p-anizoil-4’-azido-5’-deoxi-5’-jód-timidin helyett az alábbi vegyületeket alkalmazzuk:

,0^ *-di-p-anizoil-4 *-azido-2’,5 *-dideoxi-5 *-Jód-adenozin, ₁cP*-tri-p-anizoil-4*-azido-2 ’, 5 *-dideoxi-5 * -jód-adenozin,

-di-p-anizoil-4*-azido-2’,5*-dideoxi-5*-jód-guanozin,

Ν²,Ν²,0·3 -tri-p-anizoil-4*-azido-2* ,5*-dideoxi-5 *-jód-guanozin, (P -p-anizoil-4*-azido-2’,5*-dideoxi-5*-jód-uridin,

Cp-di-p-anizoil-4’-azido-2’,5*-dideoxi-5’-jód-citidin,

Ν^,ΐί^,0^-tri-p-anizoil-4*-azido-2’, 5 *-dideoxi-5’-j ód-citidin,

N^-p-anizoil-l-(0^-p-anizoilr4-azido-2,5-dideoxi-5-jód- (b -D-eritro-pentofuranozil)-4»~Bmino-5-metil-2-oxo-pirimidin,

- 61 IÍ^,Ii^-di-p-anizoil-l-(ü^-p-anizoil-4“azia.o-2,5-dideoxi-5-jód-(b -D-eri tro-pentofuran,ozil)-4-aininQ-5-metil-2-oxo-piriniidin, _t l-(0^-p-anizoil-4-azido-2,5-dideoxi-5-jód- í> -D-eritro-pentofuranozil)~4-etoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin, l-(0^-p-anizoil-4-azido-2,5-dideoxi-5-jód- : -D-eritro-pentofuranozil)-4-izopropoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin, z 3

-p-anizoil-9-(0 -p-anizoil-4-azido-2,5-dideoxi-5-jód- --D-eritro-pentofuranozil)-6-hidroxi-purin éa

O²,0^-di-p-anizoil-9-(O^-p-ani zoil-4-azido-2,5-dideoxi-5-jód- [ -D-eritro-pentofuranozil)-2,6-dihidroxi-purin és l-(0^-p-anizoil-4-azido-2,5-dideoxi-5-jód--D-eritro-pentofuranozil)-5-jód-5-metil-2-oxo-pirimidinj igy az alábbi vegyületeket kapjuk: 4’-azido-2*-deoxi-adenozin (op·: 92-105 °C), 4*-azido-2’-deoxi-guanozin (op.: 250 °C, bőrt

4’-azido-2*-deoxi-uridin (op.: 272-273 °C), 4*-azido-2*-deoxi-citidin (op·: 84-85 °C),

1—(4-azido-2-deoxi- ,-D-eritro-péntofuranozil)-4-amino-5-me til-2-oxo-pirimidin, l-(4-azido-2-deoxi- -D-eritro-pentofuranozil)-4-etoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin, l-(4-azido-2-deoxi- -D-eritro-pentofuranozil)4-izopropoxi-5-inetil-2-oxo-piriiaidin,

- 62 1-(4-azido-2-deoxi--D-eritro-pentofuranozil)-5-metil-2-oxo-pirimidin,

9-( 4-azid.o-2-d.eoxi- ₍·> -D-eritro-pentofuranozil)-6-hidroxi-purin éa

9-(4-azido-2-deoxi- π-D-eritro-pentofuranozil)-2,6-dihidroxi-purin.

c) Az Y’ helyén O-benzoil-csöpörtót tartalmazó (II) általános képletű vegyületekből előállított (I) általános képletű vegyületek készítése

A 2. példa A) szakasza szerinti eljárást követjük, azonban kiindulási anyagként a 3*-O-p-anizol-4’-azido-5’-deoxi-5*-jód-timidin helyett ekvivalens mennyiségű 4’-azido-3 *-O-benzoil-5’-deoxi-5 *-jód-timidint (előállítása a 4*-azldo-tlmldlnből történik) alkalmazunk·

3« példa l-(3-deoxi-4-metoxi-á-L-glicero-pentoíurazonil)-timidin előállítása

A) Az R? helyén metilcsoportot, a B helyén 5-metil-uracil-csoportot, az X és Y’ helyén hidrogénatomot tartalmazó (III) általános képletű vegyületek előállítása mg (0,144 mmól) 3*,5’-d.ideoxi-timidin-4’-én ml metanollal készített oldatát nitrogén-áramban tartjuk, majd 36 mg (0,36 mmól) szilárd kálium-hidrogén-karbonátot adunk hozzá és a kapott elegyet jeges-vizes fürdőn lehűtjük. Ezt követően 0,214 mmól 3-klór-peroxi-benzoesavat adunk hozzá és a kapott elegyet 3 percig keverjük

- 63 majd a reakciót 2,0 ml telitett nátrium-hidrogén-karbonát és 10 %-os vizes (tömeg/térfogat) nátrium-tio-szulfát líl arányú elegyének hozzáadásával megszakítjuk. A kapott elegyet 50-50 ml ^til-acetát és kloroform 1:3 térfogatarányú elegyével kétszer extraháljuk. Az extraktumokat 2,0 ml nátrium-klorid-oldattal mossuk, majd egyesítés után az oldatokat magnézium-szulfáttal szárítjuk és vákuumban besűrítjük. A 31 mg maradékot szilikagél-lapon kromatografáljuk, igy 8 mg l-(3-deoxi-4-metoxi- '-L-glicero-pentofurazonil)-timidint kapunk olaj alakjában (31 /umól, 22 %).

B) A B helyén különböző szubsztituenseket tartalmazó (III) általános képletü vegyületek előállítása

A 3· példa A) szakasza szerinti eljárást követjük» azonban kiindulási anyagként a 3*,5*-dideoxi-timidin-4’-én helyett az alábbi vegyületeket használjuk:

2’,3*,5*-trideoxi-adenozin-4*-én,

2*,3*,5*-trideoxi-uridin-4’-én, 2’,3’,5’-trideoxi-citidin-4*~én, 2’,3*,5’-trideoxi-guanozin-4*-én, 1-(2,3,5-trideoxi- -pent-4-enofuranozil) -4-amino-5-metil-2-oxo-pirimidin,

1-(2,3,5-trideoxi- _H-pent-4-eno£uranozil)-4-etoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin,

1-(2,3,5-trideoxi- -pent-4-enofuranozil)-4-izopropoxi-5-metil-2-oxo-p±rimidin,

- 64 1-(2,3,5-trideoxi- i\ -pent-4-enofuranozil)-5-metil-2-oxo-pirimidin,

9-(2,3,5-trideoxi- -pent-4-enofuranozil)-6-hidroxi-purin cs

9-(2,3,5-trideoxi- -pent-4-enofuranozil)-2,6-dihidroxi-purinj igy az alábbi termékeket kapjuk:

9-(2,3-dideoxi-4-metoxi- \-L-glicero-pentofuranozil)-adenin, l-(2,3-dideoxi-4-metoxi- <-L-glicero-pentofuranozil)-uracil, l-(2,3-d.ideoxi-4-metoxi- ' -L-glicero-pentofuranozil)-citozin,

9-(2,3-dideoxi-4-metoxi- -L-glicero-pentofuranozil) -guanin, l-(2,3-dideoxi-4-metoxi- \-L-glicero-pentof ur an ο z i 1) - 4-amino - 5-me t i 1-2-oxo-p i r imi di n, l-( 2,3-dideoxi-4-metoxi- ·. -L-glicero-pentofuranozil)-4-etoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin, l-(2,3-dideoxi-4-metoxi- \ -L-glicero-pentofuranozil)-4-izopropoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin, l-(2,3-dideoxi-4-metoxi- -L-glicero-pentofuranozil)-5-metil-2-oxo-pirimidin,

9-(2,3-dideoxi-4-metoxi- .-L-glicero-pentofuranozil)-6-hidroxi-purin és

9-(2,3-dideoxi-4-metoxi- *-L-glicero-pentοι* uranozil )-2,6-dihidroxi-purin.

4. példa

4’-azido-3*-deoxi-timidin előállítása

A) A B helyén 5-metil-uracil-csoportot, az X és Ϊ* helyén hidrogénatomot tartalmazó (I) általános képletű vegyületek előállítása, ahol n 0 mg (74 yumól) l-(2,3-dideoxi-4-metoxi- \-L-glicero-pentofuranozil)-timint 2 ml dimetil-foxmamidban nitrogén-áramban eloszlatunk, majd. 31 mg (0,45 imaói) imidazolt és 31 mg (0,21 mmól) terc-butil-dimetil-szilil-kloridot adunk hozzá· A kapott elegyet szobahőmérsékleten 3 óra hosszat keverjük, majd 2 csepp metanol hozzáadásával a reakciót leállítjuk· Az elegyet 30 ml telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldatba öntjük, majd 50-50 ml etil-acetáttal kétszer extraháljuk· Az extraktumokat nátrium-klorid-oldattal mossuk és utána magnézium-szulfáttal szárítjuk, ezt követően pedig vákuumban bepároljuk· A kapott 40 mg olajos maradékot szilikagél-lapon kromatográfáljuk, miközben eluálószerként 4 % metanolt tartalmazó kloroformot alkalmazunk. A termék izolálása után 24 mg (65 /umól, 89 %) dideoxi-5-0-(1,1-dimetil-etil)-dimetil-szilil-4-metoxi- \ -L-glicero-pentofuranoziD-timint kapunk olaj alakjában.

A következő lépést kétféle mértékben folytatjuk les 16 mg illetőleg 7 mg szilil-étérből indulunk ki. A két adagot a feldolgozáshoz és tisztításhoz egyesítjük. A nagyobb sarzs előállítása az alábbiak szerint történik:

« · · ·*

..···

- OC 16 mg (yumól) szilil-éter 1,5 ml metilén-kloxicia.il készített oldatához 45 yul azido-trimetil-szildnt éis b yul trimeiilszilil-trifluor-metán-szulfonátűt adunk.

A kapott elegyet 72 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük, majd a reakcióelegyet a 7 mg-os reakcióeléggyel egyesítjük. 50 ml 1:3 térfogatarányu etil-ucotát és kloroform elegyével történő hígítás után az elegyet 5 ml telitett nátrium-hldrogán-karbonát-oldattal, majd > ml nátrium-klorid-oldattíil mossuk és magnézium-szulfát tál szárítjuk. Az ezt követő bepárlás után 16 mg olajat kapunk. Az olajnak szilikagél-lapon történő kromatografálása után etil-acetát és hexán elegyéből átkristalyositunk, igy 5 mg 4*-azido-3’-deoxi-timidint (op.: 55-60 °c, bomlik) és 3 mg l-(4-azido-2,3-dideoxi- ^-L-glicero-pentofuranozil)-timint kapunk (op.: 129-131 °C9.

B) A B helyén különböző szubsztituenseket tartalmazó (I) általános képletű vegyületek előállítása

A 4. példa A) szakasza szerinti eljárást követjük, azonban kiindulási anyagként az l-(2,3-dideoxi-4-metoxi-^-L-glicero-pentofuranozilJ-timin helyett az alábbi vegyületeket alkalmazzuk:

9-(2,3-dide«xi-4-metoxi- á-L-glicero-pentofuranozil)-adenin, l-( 2,3-dideoxi-4-metoxi- χ-L-glicero-pentofuranozil)-uracil,

- 67 1-(2,3-dideoxi-4-metori- \-L-glicero-pentoí'uranozil )-citoBin,

9-(2,3-dideoxi-4-metoxi-x-L-glicero-pentoíuranozil)-guanin, l-(2,3-dideoxi-4-metoxi- \ -L-glicero-pentofuranozil )-4-amino-5-me til-2-oxo-pirimidin, l-(2,3-dideoxi-4-metori- -L-glicero-péntofuranozil )-4-etoxi-5-me til-2-oxo-pirimidin, l-(2,3-dideoxi-4-metori- \ -L-glicero-pentofuranozil)-4-izopropoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin,

1-(2,3-dideoxi-4-metoxi- λ-L-glicero-pentofuranozil ) - 5-me til-2-oxo-pirimidin,

9-(2,3-dideoxi-4-metoxi- \ -L-glicero-pentofuranozil )-6-hidroxi-purin és

9-(2,3-dideoxi-4-metori- - -L-glicero-pentofuranozil )-2,6-dihidroxi-purinj igy az alábbi termékeket kapjuk:

4’-azido-2’,3 *-dideoxi-adenozin,

4*-azido-2*,3’-dideoxi-uridin,

4’-azido-2*,3*-dideoxi-citidin, * -azido-2 *-, 3 * -dideori-guanozin,

1—(4-azido-2,3-dideoxi- >-D-glicero-pentofuranozil )-4-amino-5-metil-2-oxo-pirimidin, l-(4-azido-2,3-dideoxi- -D-glicero-pentofuranozil)-4-etoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin, l-(4-azido-2,3-dideoxi- -D-glicero-pentofuranozil )-4-izopropoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin,

- 68 l-(4-azido-2,3-dideoxi- -D-glicero-pentoíuranozil)-5-metil-2-oxo-pirimidin,

9-(4-azido-2,3-dideoxi- ,>-ü-glicero-pentoíurunozil)-6-hidroxi-purin és

9-(4-azido-2,3-dideoxi-' -D-glicero-pentofuranozil)-2,6-dihidroxi-purin.

5. példa

4*-azido-timidin előállítása *-monofoszfát-dinátrium-só

0,20 g (0,71 mmól) 4’-azido-timidin 12 ml etil-acetáttal készített 0 °C-ra lehűtött szuszpenziójához 0,5 ml (3,7 mmól) pirofoszforil-kloridot adunk. Az elegyet 0 °C-on 4 óra hosszat keverjük, majd az oldatot páséról pH«7-re semlegesítjük telitett, vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldat hozzáadása utján. A szerves fázist elöntjük és a vizes fázist 20 percig 14-60 szemeseméretü aktivszénnel keverjük. Az aktivszenes elegyet szűrjük és a szenet 200 ml vízzel mossuk. Valamennyi szürletet félretesszük. Az aktivszenet ezután 250 ml mennyiségű, 5 % ammőnium-hidroxidot tartalmazó 50 %-os vizes etanollal mossuk. Az igy kapott mosófolyadékokat vákuumban besűrítjük és egy 3 x 23 cm DEAE Sephadex (karbonát-forma) oszlopba töltjük. Az oszlopot 1 liter vizet és 1 liter 0,5 mólos trietil-ammónium-hidrogén-karbonátot tartalmazó (pH«7) eleggyel mossuk. A terméket összegyűjtjük és az oldószert elpárologtatjuk. A maradékhoz vizet adva ismét bepárolunk, majd 0,5 ml metanolban oldjuk. Az ol• *

- 69 dathoz 0,45 mái nátrium-perklorát 2 ml acetonnái készített elegyét adjuk, igy a cim szerinti vegyület csapadék alakjában kiválik· A szilárd anyagot leszűrve és vákuumban szárítva 55 mg 4’-azido-timidin-5’-monoioszfát dinátrium-sója keletkezik. Op.: 185 °C, bomlik.

6. példa

4*-azido-timidin-5’-dif oszfát trinátrium-sójának és a 4’-azido-timidin-5’-trifoszfát tetranátíium-sójának előállítása mg (0,14 mmól) 4*-azido-timidin-5’-monofeszfát dinátrium-sójának 5 ml vízzel készített oldatát egy Dowex 50 (H⁺) gyantával töltött (8 ml) rövid oszlopba töltjük és vízzel eluálunk. Az eluálószer 5 ml-re történő.besűrítése után az elegyhez 32 ml tributil-amint és 5 ml piridint adunk, majd az elegyet vákuumban bepároljuk· A maradékot piridinnel majd dimetil-formamiddal együtt bepároljuk. A maradéknak 1 ml dimetil-formamiddal készített oldatához 0,11 g (0,66 mmól) karbonil-diimidazol 1,5 ml dimetil-formamiddal készített oldatát adjuk. Az elegyet szobahőmérsékleten tartjuk 20 óra hosszat, majd 0,04 ml (1,0 mmól) metanolt adunk hozzá. 30 perc eltelte után 0,675 mmól tributil-ammónium-pirofoszfát 7 ml dimetil-formamiddal készített oldatát adjuk hozzá és a kapott elegyet szobahőmérsékleten 20 óra hosszat erőteljesen keverjük, ázürés után az oldatot azonos mennyiségű metanollal hígítjuk, majd bepároljuk, igy egy szirupot kapunk.

* 70 —

A szirupot 10 ml vizzel eloszlatjuk és egy 3 x 23 cm OEAE Sephadex (karbonátos) oszlopba töltjük, miközben eluálószerként 2 liter viz és 2 liter 0,5 mólos trietil-ammónium-hidrogén-karbonát-oldat lineáris gradiensü elegyet (pH=7) alkalmazzuk: 4’-azido-timidin-5’-difoszfát, majd 4*-azido-timidin-5*-trifoszfát eluálódik. Az oldószer elpárologtatósa és a vizzel történő ismételt elpárologtatós után mindegyik termeket kis mennyiségű metanolban eloszlatjuk. 0,45 mólos nátrium-perklorát acetonos oldatát adjuk hozzá, igy kicsapódnak a nátrium-sók. A csapadékok leszűrése után vákuumban szárítunk, igy termékként 12 mg 4’-azid.o-timidin-5’-difoszfát-trinátrium-sót és 54 mg 4*-azido-timidin-5’-trifoszfát-tetranátrium-sót kapunk (op.: 204 °C).

7. példa

4*-azido-timidin-3’,5*-ciklusos foszfát nátrium-sójónak előállítása

Az 5· példa szerint előállított 4*-azido-timidin-5*-monofoszfát dinátrium-sóját egy Dowex 5O-X8 kation-cserélő gyantát (H⁺ ionos) tartalmazó oszlopba töltjük, miközben eluálószerként vizet alkalmazunk. A viz lepárlása után a maradékot N,N’-di-ciklohexil-4-morfolin-karboxamidint tartalmazó piridin és viz elegyében eloszlatjuk, majd az elegyet vákuumban bepároljuk. A maradékot piridinnel háromszor együtt-desztilláijuk.

• ·· • ·· 9- • · · · · » . · * • · · · · ·

- 71 A kapott szirup piridinnel készített oldatát 1 óra alatt diciklohexil-karbodiimid piridinnel készített oldatához csepegtetjük. Az adagolás befejezése után az elegyet további 2,5 óra hosszat visszafolyatás mellett forraljuk, majd az oldószert vákuumban elpárologtatjuk. A maradék vízzel készített oldatát 10 % butanolt tartalmazó diklór-metannal, majd dietil-éterrel extraháljuk. A vizes oldatot besűrítjük, majd 3 x 23 cm méretű DEAE üephadex oszlopba (karbonátos) töltjük, miközben eluálószerként 1 liter viz és 1 liter o,5 mólos trietil-anmónium-hidrogén-karbonát lineáris gradiensü elegyét alkalmazzuk. A terméket tartalmazó eluátumot vákuumban bepároljuk és a maradékot vízzel ismételten együtt-desztilláljuk. A maradék metanollal készített koncentrált oldatához 0,45 mólos acetonos perklorát-oldatot adunk. A kicsapódott terméket eltávolítjuk és szárítjuk, igy a cim szerinti 4*-azido-timidin-3’,5’-ciklusos foszfát-nátrium-sóját kapjuk. Op.: 155-157 °C.

Hasonló módon alakíthatunk át más (I) általános képletű vegyületeket (ahol n jelentése 1) ciklusos foszfátokká. A nátrium-perklorát kalcium-kloriddal történő helyettesítése révén állítjuk elő a 4’-azido-timidin-3^,,5*-ciklusos foszfát-kalcium-sót.

8. példa

4*-azido-timidin nátrium-sójának előállítása

4*-azido-timidint vízzel eloszlatunk, maja egy mólekvivalens mennyiségű vizes nátrium-hidroxid-oldatot adunk hozzá és az igy kapott oldatot 1 óra hosszat keverjük· Az oldatot ezután liofilizáljuk, igy izoláljuk a 4*-azido-timidin nátrium-sóját.

Hasonló módon alakíthatjuk át azokat az (1) általános képletű vegyületeket, ahol n jelentése 0, bázikus addiciós sókká oly módon, hogy a megfelelő bázissal, igy nátrium-hidroxiddal, kálium-hidroxiddal, lxtiuu-hidroxiddal és hasonlókkal reagáltatjuk ezeket.

9. példa

A) 4’-azido-timidin--3 ’,5’-di-adamantoil-észterének előállítása

280 mg 4’-azido-timidin és 10 mg 4-dimetil-amino-piridin 7 ml piridinnel készített oldatát 2,1 ekvivalens mennyiségű adamantán-karbonsav-klorid 3 ml metilén-kloriddal készített oldatához adjuk. A kapott oldatot 18 óra hosszat 21 °C-on mágneses ke verővel keverjük, majd 1 ml metanolt adunk az elegyhez. Az oldatot besűrítjük és a maradékot kromatográfiásan tisztítjuk, igy a cím szerinti 4*-azádo-timidin-3’,5’-diudamantoátot kapjuk.

• · * • · · ·· ··· · · · Λ « « · ··· · * «·····

- 73 9 Β) 4*-azido-timidin 3’,5’-di-U-acetil-észtere

1,00 g (3,53 mmól) 4’-azido-timidin 10 ml piridinnel készített oldatához 2,0 ml (21 mmól) ecetsav-anhidridet adunk. 2 óra hosszat tartó, 20 °C-on történő keverés után az oldószert elpárologtatjuk. A maradékot szilikagélen kromatografáljuk, miközben eluálószexként 2-4 % metanolt tartalmazó diklór-metánt alkalmazunk. Termékként 0,92 g 4’-azido-3*,5*-di-0-acetil-timidint izolálunk fehér hab alakjában; hozam 71 %· ^H NMK (deutero-kloroform);

8,94 (1H, széles szingulett, NH), 1,17 (1H, dublett, H-6), 6,42 (1H, kettős dublett, H-l*), 4,41 (2H, szingulett, H-5*), 2,55 (2H, multiplett, Η-2»), 2,17 (3H, szingulett, OAc), 2,16 (3H, szingulett, OAc), 1,96 (3H, dublett, CH^)·

C) 4’-azido-2’-deoxi-uridin 3*,5’-di-0-acetil-észtere

269 mg (1,00 mmól) 4’-azido-2*-deoxi-uridin,

1,0 ml (10,6 mmól) ecetsav-anhidrid és 6 ml piridin elegyet 4 óra hosszat szobahőmérsékleten tartjuk, majd vákuumban sziruppá bepároljuk· A szirupot szilikagélen vékonyrétegkromatográfiásan tisztítjuk, miközben eluálószerként 5 % metanolt tartalmazó diklór-metánt alkalmazunk. a terméket etanolból kristályosítjuk, igy 334 mg 4’-azido-2*-deoxi-3*,5*-di-0-acetil-uridint kapunk. Hozam: 95 %· Op.: 136-137 °C.

- 74 ··· ♦ ·· • · ··· ·♦»

D) 4’-azido-timidin i>’-o-benzoil-éüztere

140 mg (0,5 mmól) 4’-azido-timidin, 70 yul (0,6 mmól) benzoil-klorid és 1,0 ml piridin elegyét 3 óra hosszat 20 °C-on tartjuk. 0,1 ml metanol hozzáadása után az oldószert elpárologtatjuk. A kapott maradékot szilikagélen víákonyrétegkromatográfiásan tisztítjuk, miközben eluálószerként 5 % metanolt tartalmazó diklór-metánt alkalmazunk. Termékként 0,10 g 4^,-amido-5’-0-benzoil-timidint kapunk fehér hab alakjában. Hozam: 53 %·

NMR (deutero-kloroform):

11,37 (1H, széles szingulett, NH), 8,05-7,52 (5H, multiplett, lh), 7,44 (1H, dublett, H-6), 6,36 (1H, kettős dublett, H-l’), 5,98 (1H, széles szingulett) OH), 4,73 (1H, multiplett, H-3’), 4,65 (1H, dublett, H-5’), 4,55 (1H, dublett, H-5’)» 2,40 (2H, multiplett, Η-2»), 1,70 (3H, dublett, CH^).

10« példa

A) l-(4’-azid.o-2-deoxi-3»5-di-0-acetil-β-D-eri tro-pentofuranozil)-5-me t il-4-(1,2,4-triazol-l-il)-pirimidin-2(lH)-on előállítása

693 mg (10,0 mmól) triazol 6,0 ml acetonitrillái készített szuszpenziójához 226 /U1 (243 mmól) foszforil-kloridot adunk. A kapott elegyet 0 °C-ra lehűtjük, majd lassan 1,26 ml (9,3 mmól) trietil-amint adunk hozzá. Az elegyet 10 percig 0 °C-on tartjuk és ezután 460 mg (1,26 mmól) 4*-azido-3’ ,5’-di-0-acetil-timidin 4,0 ml acetonitrillel készített oldatát adjuk hozzá és az elegyet szobahőmérsékletre melegítjük. Az elegyet 2 óra hosszat keverjük, majd a szilárd anyagot szűréssel eltávolítjuk és a szürletet bepárláesal besűrítjük. Az oldatot szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás módszerrel tisztítjuk, miközben eluálószerként 5 % metanolt tartalmazó diklór-metánt használunk. Az izllált terméket metanolból kristályosítjuk, igy 474 mg cim szerinti vegyületet kapunk. Hozam: 90 %. Op.: 109-111 °C.

B) l-(4-azido-2-deoxi-p-D-eritro~pentofuranozil)-4-etoxi-5-metil-pirimidin-2-(lH)-on előállítása mg (0,1 mmól) l-(4-azido-2-deoxi-3,5-di-O-acetil- ; -D-eritro-pentofuranozil)-5-metil-4-(l,2,4-triazol-l-il)-pirimidin-2(lH)-on 1,0 ml 1 n etanolos nátrium-etoxiddal készített oldatát 2 óra hosszat szobahőmérsékleten tartjuk. Az oldátot szilikagéles vékonyrétegkromatográfiás módszerrel tisztítjuk, miközben eluálószerként diklór-metán és metanol 9:1 arányú elegyét alkalmazzuk. 26 mg tiszta cim szerinti terméket kapunk fehér hab alakjában· Hozam: 84 %·

NMR. (deutero dimetil-szulfoxid-d^):

7,93 (III, dublett, H-6), 6,30 (1H, kettős dublett, H-l’), 5,74 (1H, dublett, H), 5,64 (1H, triplett, OH), 4,45 (1H, multiplett, H-3’), 4,32 (2H, kvartett, ··· ···

- 76 -CH₂CH₃), 3,66 (2H, multiplett, H-5’), 2,31 (2H, multiplett, Η-2»), 1,89 (3H, dublett, CH^), 1,31 (3H, triplett, OCHgCHj).

C) l-(4-azido-2-deoxi- ^-D-eritro-pentofuranozil)-4-izopropoxi-5-metil-pirimidin-2(lH)-on előállítása

168 mg (0,40 mmól) l-(4-azido-2-deoxi-3,5-di-0-acetil- -D-eritro-pentofuranozil)-5-metil-4-(l,2,4-triazol-l-il)-pirimidin-2(lH)-on 1 n izopropanolos kálium-izopropoxiddal készített oldatát 1,5 óra hosszat szobahőmérsékleten tartjuk. Az oldatot Dowex 50 hidrogén-ionos gyantával semlegesítjük, majd szűrjük. A szűrletet vákuumban besűrítjük és a kapott olajat vékonyrétegkromatográfiás módszerrel tisztítjuk, miközben eluálószerként 10 % metanolt tartalmazó diklór-metánt használunk. Termékként 105 mg cím szerinti vegyületet kapunk fehér hab alakjában. Hozam: 80 %· ^H Niffi. (deutero-dimetil-szulfoxid-d^):

7,91 (IH, dublett, H-6), 6,30 (IH, kettős dublett, H-l’), 5,74 (IH, dublett, OH), 5,63 (IH, triplett, OH), 5,26 (IH, multiplett, 0CH(CH₃)₂), 4,45 (IH, multiplett, xí-3’), 3,66 (2H, multiplett, H-5’), 2,31 (211, multiplett, H-2*), 1,86 (3H, dublett, CH^), 1,30 (3H, szingulett, CH^), 1,28 (3H, szingulett, CH^).

··· · · V ··· • · · · · ··» ·« ··· ···

D) l-(4-azido-2-deoxi-,- -D-eritro-pentofuranozil)-5-metil-pirimidin-2(lH)-on előállítása

335 mg (0,80 mmól) l-(4-azido-2-deoxi-3,5-acetil- ú -D-eritro-pentofuranozil)-5-metil-4-(l,2,4-triazol-l-il)-pirimidin-2(lH)-on, 160 ml (3»2 mmól) hidrazin-hidrát éa 6,0 ml acetonitril elegyét 1 óra hosszat 20 °C-on tartjuk, majd vákuumban bepáraljuk, igy egy szirupot kapunk· A szirupot szilikagélen vékonyrétegkromatográfiásan tisztítjuk, miközben eluálószerként 1 % koncentrált ammónium-hidroxidot tartalmazó diklór-metán és metanol 85:15 arányú elegyét használjuk· A főterméket fehér por alakjában izoláljuk, majd 15 ml etanolban 300 mg ezüst(I)-oxid jelenlétében visszafolyatás mellett forraljuk. 2 óra eltelte után u reakcióelegyet lehűtjük és vákuumban bepároljuk, igy egy szirupot kapunk. A szirupot szilikggéles vékonyrétegkromatográfiás módszerrel tisztítjuk, miközben eluálószerként 1 % koncentrált ammónium-hidroxidot tartalmazó diklór-metán és metanol 85:15 arányú elegyét használjuk. Az izolált terméket etil-acetátból kristályosítjuk, igy 66 mg cim szerinti terméket kapunk. Hozam: 41 %· Op.: 143-144 °C.

E) 4*-azido-2’-deoxi-5-metil-citidin előállítása mg (50 mmól) l-(4-azido-2-deoxi-3,5-di-u-acetil- -D-eritro-pentofuranozil)-5-metil-4-(1,2,4-triazol-l-il)-pirimidin-2(lH)-on, 0,20 ml dioxán és 0,20 ml koncentrált ammónium-hidroxid elegyét 2,5 óra

- 78 hosszat szobahőmérsékleten tartjuk. Az oldatot szillkagéles vékonyrétegkromatográfiás módszerrel tisztítjuk, miközben eluálószerként 1 % koncentrált ammónium-hidroxidot tartalmazó diklór-metán és metanol 85:15 arányú elegyét használjuk. A terméket izoláljuk, majd etanol és etil-acetát elegyéből kristályősitjük, igy termékként 10 mg cim szerinti vegyületet kapunk; op.: 132-134 °C. Hozam: 71

F) 4*-azido-2’-deoxi-citidin előállítása

480 mg (6,96 mmól) tríazol 4,0 ml acetonitríllel készített szuszpenziójához 150 /U1 (1,61 mmól) foszforil-kloridot adunk. A kapott elegyet 0 °C-ra lehűtjük, majd lassan 0,91 ml (6,46 mmól) trletíl-amínt adunk hozzá. 10 perc eltelte után a 0 °C-os elegyhez 300 mg (0,85 mmól) 4’-azido-2*-deoxi-3’,S’-di-O-acetil-uridin 2,5 ml acetonitríllel készített elegyét adjuk és az igy kapott elegyet szobahőmérsékletre melegítjük.

óra hosszat tartó keverés után a szilárd anyagot leszűrjük és a szürletet besűrítjük. A maradékot szilikagéles lemezeken kromatográfáljuk, miközben eluálószerként 4 % metanolt tartalmazó díklór-metánt használunk. A főterméket 240 mg fehér hab alakjában izoláljuk.

A hab 4,0 ml díoxánnal és 8,0 ml koncentrált ammónium-hidroxiddal készített oldatát 16 óra hosszat szobahőmérsékleten tartjuk. Az oldatot vákuumban bepároljuk és szilikagéles vékonyrétegkromatografálással tisztítjuk, miközben eluálószerként etil-acetát, propanol és

- 79 víz 5,5:1,5:3 (szerves fázis) arányú elegyét használj ült. A terméket hab alakjában izoláljuk, ezt etil-acetáttal eldörzsöljük, igy 160 mg 4*-azido-2’-deoxi-citidint kapunk fehér por alakjában· Hozam: 70 %. Op.: 84-85 °C.

Hasonló módon járunk el, azonban az adamantán-karbonsav-klorid helyett a megfelelő sav-kloridnak megfelelő mennyiségű mólekvivalensének alkalmazásával az alábbi vegyületeket kapjuk:

4’-azido-timidin-3 *,5*-dipalmitoát,

4’-azido-timidin-3’,5’-dibenzoát,

1—(4-azido-2,3-dideoxi-a-ii-glicero-pentof urauozil)-timin-5’-acetát vagy l-(4-azido-2,3-dideoxi-a-L-glicero-pentofuranozxl)-timin-5’-anizoát·

11. példa

4’-azido-3’,5 *-di-ü-(3-piridinxl-karbonil)-timidin előállítása

1,05 g (3,71 mmól) 4’-azido-timidint 35 ml száraz piridinnel nitrogén-áramban eloszlatunk, majd 1,45 g (8,15 mmól) nikotinoil-klorid-hidrokloridot, 0,1 g (0,82 mmól) 4-dimetil-amino-piridint és 1,51 ml ($,25 mmól) trietil-amint adunk hozzá keverés közben· A kapott elegyet 5 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük, majd

0,5 ml metanol hozzáadásával a reakciót megszakítjuk· Az elegyet vizes, telitett nátrium-hidrogén-karbonát-oldatba Öntjük, majd etil-acetáttal extraháljuk. A szerves fázisτ nátrium-klorid-oldattal mossuk és magnézium80 -szulfáttal szárítjuk· Az oldószer elpárologtatása után az olajos maradékot szilikagéllel töltött oszlopon kromatografáljuk, miközben eluálószerként etil-acetát és hexán elegyét használjuk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesitjük és bepároljuk. A maradékot etil-acetát és hexán elegyéból kristályosítjuk, igy termékként 4^,-azido-3*,5’-di-O-(3-piridinil-karbonil)-timidint kapunk. Op.: 204-206 °C.

12. példa

4*-azido-5’-0-(l,4-dihidro-l-metil-3~piridinil-karbonil)-timidin előállítása

A) 4*-azido-5’-0-(3-piridinil-karbonil)-timidin

1,05 g (3,7 mmól) 4*-azido-timidint 35 ml száraz piridinben oldunk, majd 0,8 g (4,4 ml) nikotinoil-klorid-hidrokloridot és ezt követően 0,62 ml (4,4 mmól) trietil-amint adunk hozzá. A kapott elegyet 3 óra hoszszat szobahőmérsékleten tartjuk. A piridint vákuumban lepároljuk és a maradékot kromatográfiásan tisztítjuk. A megfelelő frakciókat egyesitjük, majd az eluálószort elpárologtatjuk, igy termékként 4’-azido-5’-0-(3-piridinil-karbonil)-timidint kapunk.

- 81 12 B) 4^,-azido-5*-0-(l-metil-3-piridiniiun-karbonil)-timidin mg (0,18 mmól) 4’-azido-5*-0-(l-metil-3-piridinium-karbonil)-timidint 3 ml acetonban oldunk és 0,1 ml (1,6 mmól) jód-metánt adunk hozzá· Az elegyet 4,5 óra hosszat visszafolyatás közben forraljuk, majd 0,05 ml (0,8 mmól) jód-metánt adunk hozzá· További 2 óra hoszazat tartó melegítés után az elegyet hagyjuk szobahőmérsékletre lehűlni· A kapott maradékhoz 3 ml hexánt adunk, igy további csapadék válik ki· Az anyalug eltávolítása után 4’-azido-5*-0-(l-metil-3-pirimidinium-karbonil)-timidint kapunk sárga szilárd termék alakjában· Op.: 130-134 °C.

C) 4’-azido-5*-0-(l,4-dihidro-l-metil-3-iíridinil-karbonil) -1 imidin

0,2 mól nátrium-hidrogén-szulfltot és 0,2 mól nátrium-hidrogén-karbonátot tartalmazó vizes' oldaton 2 óra hosszat szobahőmérsékleten argon-gázt buborékoltatunk keresztül· A kapott 2,5 ml oldatot argon-atmoszférában szobahőmérsékleten 45 mg (0,085 mmól) 4’-azido-5’-0-(l-metil-3-piridinium-karbonil)-timidinhez adjuk· A kapott elegyet szobahőmérsékleten 30 percig keverjük· A világossárga csapadékot elkülönítjük, majd vákuumban szárítjuk, igy termékként 4’-azido-5*-0-(l,4-dihidro-l-metil-3*-piridinil-karbonil)-timidint kapunk. Op.: 115-127 °C.

C2

13. példa

4*-azido-3‘,5*-di-o-izopropil-timidin előállítása 1 nnnól, az M. Sekine és munkatársai, Synthesis 1119 (19Ö7) közleményben ismertetett módszer szerint elő3 állított 4*-azido-lí -benzoil-timidint 10 ml dimetil-szulfoxidban eloszlatunk és 2,1 ekvivalens mennyiségű nátrium-hidridet adunk hozzá. A kapott elegyet 30 percig szobahőmérsékleten keverjük, majd 10 ekvivalens mennyiségű 2-jód-propánt adunk hozzá és 60 °C-on melegítjük mindaddig, amíg a kiindulási anyag zöme vékonyrétegkromutográfiás követés szerint el nem tűnik. A reakcióelegyet nátrium-klorid-oldat és etil-acetát között megoszlatjuk. A szerves fázist megszáritjuk és szárazra pároljuk. A maradékot telitett metanolos ammóniában eloszlatjuk és 1 óra hosszat szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Az oldószert elpárologtatjuk és a maradékot oszlopkromatografálás utján tisztítjuk. Termékként a cim szerinti 4’-azido-3’,5’-di-0-izopropil-timidint kapjuk.

14· példa

Hz a példa hatóanyagként valamely (I) általános képletű vegyületet, például 4*-azido-timidint tartalmazó, orális kezelésre alkalmas gyógyszerkészítmény előállítását szemlélteti.

Összetevők

Tablettánként! mennyiség, mg

Hatóanyag

200

Laktóz, szárított

148

Llagné zium-sztearát

A fenti komponenseket összekeverjük és kemény-zselatin-kapszulákba töltjük·

A 2-13· példák szerint előállított más (I) általános képletű vegyületeket is alkalmazhatunk hatóanyagként az ezen példa szerinti, orális kezelésre alkalmas készítmények előállításához.

15· példa

A példában hatóanyagként valamely (I) általános képletű vegyületet, például 4*-azido-timicLint tartalmazó különböző gyógyszerkészítmények előállítását szemléltetjük.

Orális kezelésre alkalmas szuszpenzió előállításakor az alábbi komponenseket alkalmazzuk;

\

Összetevők	Mennyiség
Hatóanyag	1,0 g
Fumáxsav	°»5 g
hátrium-klorid	2,0 g
Metil-paraben	0,1 g
Granulált cukor	25,5 g
Szorbit (70 %-os oldat)	12,85 g
Veegum K (Vanderbilt Co.)	1.0 g
Izanyag	0,035 ml
Szinezőanyag	0,5 mg
Desztillált viz	100 ml-ig

A 2-13. példák szerint előállított más (I) általános képletű vegyületeket is alkalmazhatunk hatóanyagként az ezen példa szerinti, orális kezelésre alkalmas készítmények előállítására·

16. példa

Ezen példával a hatóanyagként valamely (1) általános képletű vegyületet, például a 4’-azido-timidint tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítását szemléltetjük.

Injekciózható készítményt az alábbi összetétellel állíthatunk elő:

Összetevők	Mennyiség
Hatóanyag	0,2 g
Viz, desztillált, steril	20,0 ml-ig

- 85 A 2-13. példák szerint előállított más (I) általános képletű vegyületeket is alkalmazhatunk hatóanyagként az ezen példa szerinti, injekciózható készítmények előállítására·

Az (I) általános képletű, vízben rosszul oldódó vegyületékből intravénás injekciót lehet készíteni a liposzomákkal.

17« példa

Ezen példával a hatóanyagként valamely (I) általános képletű vegyületet, például 4*-azido-timiclint tartalmazó, topikális kezelésre alkalmazható gyógyszerkészítmények előállítását szemléltetjük.

Összetevők	Mennyiség, g
Hatóanyag	0,2-10
Span 60	2,0
Tween 60	2,0
Ásványi olaj	5,0
Paraffinolaj	10,0
Metil-paraben	0,15
Propil-paraben	0,05
Hidroxi-anizol-butilát	0,01
Viz	100-ig

Valamennyi fenti összetevőt a viz kivételével összekeverjük és keverés közben 60 °C-ra melegítjük.

- 86 Ezután erőteljes keverés közben megfelelő mennyiségű vizet adunk az elegyhez 60 °C-on, hogy a komponenseket emulgeáljuk, majd ezt követően annyi vizet adunk hozzá, hogy 100 g-ra feltöltsük.

A 2-13. példák szerint előállított más (I) általános képletű vegyületeket is alkalmazhatunk hatóanyagként az ezen példa szerinti, topikális kezelésre alkalmas készítmények előállítására.

18. példa

Ezen példával a hatóanyagként valamely (I) általános képletű vegyületet, például 4*-azido-timidint tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítását szemléltetjük.

2,5 g-os végbélkúpot az alábbi komponensekből készítünk:

Hatóanyag 500 mg

Witepsol H-15* kiegészítve (* telitett növényi eredetű zsírsav trigliceridjeij Riches-Nelson, Inc., New York, Ν.Ϊ. terméke).

A 2-13. példák szerint előállított más (I) általános képletű vegyületeket is alkalmazhatunk hatóanyagként az ezen példa szerinti végbélkúpok előállítására.

- 87 19· példa

Ezen példával a hatóanyagként valamely (I) ál talános képletű vegyületet, például 4*-azido-timidint tartalmazó, orális kezelésre alkalmas gyógyszerkészit menyek előállítását szemléltetjük.

Összetevők

Hatóanyag

Kukor i c aker ér.y i tő

Laktóz

Líagné z i um- s z t e ará t

Tablet tánkénti mennyiség, g

400

145

A fenti komponenseket jól összekeverjük és tablettákká préseljük·

A 2-13. példák szerint előállított más (1) általános képletű vegyületeket is alkalmazhatunk hatóanyagként az ezen példa szerinti, orális kezelésre alkalmas gyógyszerkészítmények előállítására.

20. példa

Liposzom gyógyszerkészítmények előállítása

4*-azido-timidin-5*-monofoszfát tál

100 g tojássárga-foszfolipidekhez annyi vizet adunk, hogy a teljes mennyiség 1 liter legyen. Az elegyet egy homogenizáljál keverjük. Ezután az elegyet 300 kg/cm nyomás alatt 30 percig egy emulgeálószerrel homogenizáljuk, miközben egy vizes foszfolipid-diszper • · ·

- 88 ziót kapunk. 20 g 4*-azido-timidin-5*-monofoezfátot éa lo g nátrium-kloridot annyi vízben oszlatunk el, hogy a teljes mennyiség 1 liter legyen. A 850 ml vizes foszfolipid-diszperziót és a 850 ml 4*-azido-timidin-5’-monofoszfát-oldatot összekeverjük. Az igy kapott vizes diszperziót egy membrán-szűrővel leszűrjük. A szüxletet 20 percig 120 °C-on sterilizáljuk, majd 20 óra hosszat egy hűtőben -20 °C-on állni hagyjuk. Az igy kapott megfagyott diszperziót szobahőmérsékleten állni hagyjuk, igy felolvad. Ilyen módon egy vizes szuszpenziót kapunk, amely a 4*-azido-timidin-5*-monofoszfátot fosziolipid-golyóbisokban tartalmazza.

A 2-13. példák szerint előállított más (I) általános képletű vegyületeket is, előnyösen ezek foazíát-észtereit is alkalmazhatjuk hatóanyagként az ezen példa szerinti gyógyszerkészítmények előállítására.

21. példa

4’-azido-timidin-2 *,3 *-dipalmitoáto t tartalmazó liposzom készítmények előállítása mmól £oszfatidil-kolint, 15 mmól koleszterolt és 5 mmól koleszterol-szulfátot kloroform és metanol 2:1 arányú elegyében eloszlatunk, majd 5 mmól 4*~azido-timidin-3’íS’-dipalmitoátot adunk hozzá és a kapott elegyet gömblombikban keverjük. Az oldószert csökkenteti nyomáson eltávolítjuk, igy a lombik belső falán egy film képződik. A filmet vákuumban megszorítjuk. Ezután 2,5 ml • ·

- 89 nátrium-klorid-oldatot adunk a lombikba és a kapott oldatot nitrogén-áramban rázzuk, igy a filmből egy zsíros szuszpenziót kapunk· A szuszpenziót 10-17 °0-on 50 percig 20 kHz-en, 35 W-on nitrogén-áramban szonikátorral kezeljük· A iapott liposzómák mérete: 22-55 mm átmérő·

Más (I) általános képletü vegyületek, például a 3*,5’-di-adamantoát, előnyösen az (I) általános képletü hosszú szénláncu acíl-száxmazékok az ezen példa szerinti liposzom gyógyszerkészítmények hatóanyagaiként használhatók·

22· példa

Aktivitás meghatározás Alex sejtekkel történő in vitro vizsgálattal

Az eljárás a Chen és munkatársai: Biochemical Iharmacology, 36 (24), 4361-4362 (1987) közleményben ismertetett módszer változata.

A 301 (Alex) sejteket konstans mennyiségű HÍV vírusokkal (LAV törzs) 3 óra hosszat 37 °C-on fertőzünk. A fertőzött sejtekhez teszt-vegyületeket és kontrollként AZT-t (3*-azido~tímidin) adunk két-, három- vagy ötszöri hígításban, négy lemezt screenelésre és nyolc lemezt meghatározásra használunk· Ha másként nem említjük, akkor a legnagyobb koncentráció 200 mmól· A teszt-lemezeket 37 °C-on szén-dioxid-gázban inkubáljuk a vírus titértől függően 12 napig terjedő időtartamig.

·· ·

- 90 A citotoxicitás kiértékelésére a vírusokat nem tartalmazó, fertőzetlen A301 sejteket tartalmazó hígítások szolgálnak.

Az inkubációs periódus végén a reverz transzkriptáz enzim-szintet az alábbiak szerint határozzuk meg annak eldöntésére, hogy antivirális hatás tapasztalható-e.

A HÍV vírussal fertőzött Alex sejteket tartalmazó 55 ml közeget 10 ml 3,2 %-os Triton Χ-100-hoz adunk. Ezt az oldatot 30 percig 37 °C-on inkubáljuk, majd 25 ml 4X tesztanyagot adunk hozzá. A 4X tesztanyag az alábbi összetevőket tartalmazza: poli(A)-oligo(dT), kálium-klorid, magnózium-klorid, ditibthreitol és trisz-HCl-puffer, pH»8,0. Az oldatot további t>0 percig inkubáljuk, majd 20 ml-t Whatman 3 MM papírra csepegtetünk. A papirt 5 %-os TCA-val, 1 >ϋ8 nátrium-pirofoszfáttal háromszor mossuk egyenként 10 percig, majd utána etanollal mossuk 10 percig. A 3 Ak papíron visszamaradt rádioaktivitást szcintillációs számlálóval merjük és ez felel meg a reverz transzkriptáz enzim szintjének.

A találmány szerinti vegyületek ezen módszer szerinti vizsgálatakor az alábbi aktivitást mutatják:

- 91 Vegyület EC_ro Sejt toxicitás részleges teljes

4 *-azido-timidin	0,01 /Ulí	8 yUM	200	yllM
3 *-azido-timidin*	0,01 /UM 825 yUli	3300	/UL!
x kontroll
23· példa
A reverz	transzkriptáz és	a DNS polimeráz	gátlásé-

nak kinetikai vizsgálata

Az eljárás a Chen és munkatársai: Molecular Pharmacology, 25. 4.41-445 (1984)* továbbá a Wang és munkatársai: Biochemistry, 21. 1597-1608 (1982) közleményekben ismertetett módszerek változata·

A 4’-azido-timidin-5*-trifoszfátnak a HÍV reverz transzkriptázzal szembeni és a humán KB cellákból származó a és ö DNS polimerázzal szembeni gátlását vizsgáltuk· A HÍV reverz transzkriptáz teszt templát primerjeként poli(A)oligo(d.T)^2_]_3“^a't alkalmaztunk, mig az a és ö DNS polimerázokhoz aktivált DNS-t alkalmaztunk templát príméiként · Azt találtuk, hogy a 4’-azido-timidin-trifoszfát a timidin-trifoszfáttal szemben kompétitiv gátlóanyagnak bizonyult a HÍV reverz transzkriptáz, az a és ö DNS esetében 0,008 mM, 62,5 mM illetőleg 150 mM K_i értékek mellett· • ·

- 32 24· példa

Toxikus hatások in vitro vizsgálata humán vérképző sejteken

Az eljárás a Diainiak és munkatársai: British Journal of Haematology, 69 229-304 (198&) vagy a Sommadossi és munkatársai: Agents and Chemotherapy, 31 (3), 452-454 (1987) közlemények szerinti eljárások módosításai·

A 4*-azido-timidin és a 3*-azido-timidin (AZT) hatását összehasonlítottuk a prekurzorokból keletkező eritroid és granulocita-makrofág (GM) telepeknek a humán perifériális vérben és csontvelőben prekurzorokból történő keletkezésére és ebből megállapítottuk a 4*-azido-timidin és az AZT gátlását a humán vérképző sejtekre·

A nem-összefüggő mononukleáris sejtek előállítása

Mindegyik vizsgálatban egyedi donoroktól vett vért vagy csontvelőt használtunk· A humán perifériális vér mononukleáris sejtjeit i'icoll”-ban (Pharmacia) sürüség-gradiensü centrifugálás utján a gyógyszermentes donorok heparinnal kezelt vérétől elkülönítjük. A ”Ficoll” tetejére 1:1 arányú Hanks-féle kiegyensúlyozott só-oldattal higitott vért rétegezünk és 30 percig 400 gvel centrifugáljuk. A sejteket a közbülső fázisból öszszegyüjtjük és mosás után 25 mM Hepes-pufferrel (Gibco) RPMI-1640 közeggel a koncentrációt 2x10^ sejt/ml-re

- 93 állítjuk be· A monocitákat a műanyaghoz való tapadásuk alapján távolitjuk el a nagy Petri-csészéből (150 x 15 mm) oly módon, hogy edényenként 20 ml sejt-szuszpenziót adagolunk, majd 37 °C-on 1 óra hosszat inkubálunk· A nem-tapadó mononukleáris sejteket a Petri-csészének meleg (37 °C-os) Hanks-féle kiegyensúlyozott só-oldattal történő erőteljes mosásával távolitjuk el.

Csontvelő-mononukleáris sejtek előállítása

Egészséges donorokból származó csontvelőt heparint tartalmazó fecskendőbe gyűjtöttünk. A teljes mononukleáris sejt-frakciót 30 perc alatt 400 g-vel történő .Ficoll-Paque sürüség-gradiensü centrifugálással elkülönítjük. Az összegyűjtött sejteket a Hanks-féle kiegyensúlyozott só-oldattal háromszor mossuk, majd az alábbiakban ismertetett táptalajban ismét szuszpendáljuk a Cí’U-GLI teszt elvégzéséhez.

CFF-Gm-teszt (mieloid prekurzorok)

1,5 x 10θ sejt/ml mononukleáris sejteket (I«flí) és 1 x 50^ sejt/ml csontvelő mononukleáris sejteket (Blí) az alábbiak szerint kultiválunk; Dulbecco-féle módosított Eagle-közegbe (DMEli, Gibco) 20 % hővel inaktivált magzati (foetalis) borjú-szérumot (Hyclone), 2 mid L-glutarnint, 5 x 10”^ 2 -merkapto—etanolt, 100 U/ml penicillint, 100 mg/ml ^ztreptomicint és 0,3 bacto-agart (uiíco) teszünk. Valamennyi kiegészítő anyag a Gibco-cég-

HV ···

- 94 tői származik, hacsak ettől eltérően nem jelöljük· A sejteket 35 x 100 mm-es szuszpenziós Lux Petri-csészékbe rakjuk és 37 °C-on 5 % szén-dioxidot tartalmazó, 100 %-os nedvességtartalmú levegőben inkubáljuk· Granulocita-makrofág-telepet stimuláló faktort tartalmazó (Glí-CSF) T-sejt-vonal kiegészítőt (Gibco) alkalmazunk 1· /-os koncentráció mellett. A teszt-vegyületeket 1ύ~9 - m koncentrációban adagoljuk a tesztedényekbe, sejteket 5 % szén-dioxidot tartalmazó (100 % nedvességtartalom) levegőben 37 °C-on 14 napig inkubáljuk. A telepeket mikroszkóposán megszámláljuk. A CFU-GM telepet 50 vagy több sejt halmazaként határozzuk meg, axaclyek granulocitákat, monocita-makrofágokat vagy mindkettőjüket tartalmazzák.

BFU-E teszt (korai eritroid prekurzorokhoz) és Cí'U-E teszt (kései eritroid prekurzorokhoz)

Mononukleáris sejteket 3 x 10^ sejt/ml koncentráció mellett kultiválunk. A táptalaj Iscove-féle módosított Eagle közeget (Gibco) tartalmaz, amelyet kiegészítünk 30 % hővel inaktivált magzati borju-szérummal (Hyclone), 100 ml penicillinnel, 100 mg/ml sztreptomicinnel, 1 x 10“4 u 2-merkapto-etanollal, 1 % deionizált marha-szérum-albuminnal (BSA, Sigma), 40 mg/ml LEAE-destránnal (Pharmacia), 0,8 % metil-cellulózzal (4000 Centipose, Fisher) és 2 U/ml eritropoietinnel (Connaught Láborátöri es). A sejteket 96 tálba szétosztjuk (200 ml/tál) és ·«· ···

- 95 37 °C-on 5 % szén-dioxidot tartalmazó levegőben (100 % páratartalom) 7-14 napig inkubáljuk. A CBU-E telepeket a 7-8. napokon megszámláljuk. A 8 vagy több hemoglobinizált sejteket tartalmazó halmazokat tkintjük telepnek.

A BFU-E telepeket a 14. napon számláljuk meg. 50 vagy több sejtből álló halmazt tekintjük egy telepnek. A telepeket benzidinnel festett eritroidként határozzuk meg.

Statisztikai analízis

Valamennyi tesztet háromszor végezzük el. Az értéket, azaz az 50 %-os gátlási koncentrációt mindegyik típusra vonatkozóan az RS 1 program segítségével IBM-személyi számitógépen határozzuk meg.

A találmány szerinti vegyületek a fenti módszerrel történő meghatározás szerint az alábbi táblázat tanúsága alapján az AZT-vei összehasonlítva alacsonyabb toxicitást mutatnak.

• ·

- 96 Granulocita-makroíág-telepek keletkezésére kifejtett hatások összehasonlító vizsgálata (CFU-GM) humán csontvelőn és perifériális vér mononukleáris sejteken

Vegyület	IC50 Perifériális ' mononukleáris sej tek Átlag í SEa	(/UM) vér < 1	Jsontvelő^3 2
1	20,65 í 1,73	21,09	13,61
2	4,83 í 1,42	2,01	0,90

= 4*-azido-timidin

3*-azido-timidin ^a b átlag - öt különböző kísérlet eredménye » két különböző kísérlet eredménye

Eritroid-telepekre, CFU-E és BFU-E telepekre kifejtett hatás összehasonlító vizsgálata humán csontvelőn és perifériális vér mononukleáris sejtekre

Vegyülel	s Sejtek eredete	IC50 (/UM)
CPU-E átlag	BFU-E Átlag - SD
1	Perifériális vér nukleáris sejtek	mono- (3)a	100	66,57 - 9,23
	Csontvelő (1)		' 100	TIT
2	Perifériális vér nukleáris sejtek	mono- (3)	' 100	16,02 i 2,98
	Csontvelő (1)		26,96	ITT

» 4’-azido-timidin » 3*-azido-timidin » az elvégzett kísérletek számát a zárójelbe tett szám jelzi

NT » nem tesztelt

25· példa

Aktivitás meghatározása Friend leukémia vírus alkalmazásával egéren

Az alkalmazott módszer Jones és munkatársai: Journal of Virology, 62 (2), 511-518 (1988) közlemény szerinti eljárás változata.

A vizsgálat során Friend leukémia virus komplexet alkalmazunk. Ez a retrovirus komplex segítő és hátráltató vírus-részeket is tartalmaz.

hetes 18 g-os nőstény Balb/c egereket (Bantín és Kingman) 0,2 ml oldattal (0,002 KI EDTA-t tartalmazó, PBS-ben oldott virus) intravénásán kezelünk, 2u FFU/egér.

A kezelést a fertőzés után 4 órával kezdjük meg és 9 napon át folytatjuk. A kezelést AZT és 4’-azido-timidin anyagokkal végezzük 60 mg/kg dózissal naponta kétszer a 0., 4. és 5· napon, illetőleg 40 mg/kg dózissal az 1-3· és 6-8· napon háromszor· A 0., 4. és 5· napon 120 mg/kg dózissal naponta kétszer 2*,3’-dideoxi-citidint adunk az állatoknak és az 1-3· és 6-8· napokon naponta háromszor 80 mg/kg dózist alkalmazunk· Valamennyi kezelést intraperitoniálisan végezzük, 0,5 ml dózissal. A fertőzést követő 9· napon az állatok lépét eltávolítjuk*, megfestjük — 98 — és Bouin-féle oldatban 2 óra hosszat fixáljuk, majd megmérjük. Standard-t teszttel megmérjük a lép tömegek közötti különbségeket és a fokuszálódó egységek számát a lépben.

A találmány szerinti vegyületek antivirális aktivitást mutatnak a fenti vizsgálat során, amiht ezt a táblázat adatai tanúsítják:

A vegyületek Friend leukémia vírussal szemben mutatott aktivitása egereken

Teszt Vegyü- Napi dózis Virus Lép tömege Lépnagyob- FFU/lép let (mg/kg) (+/-) bodás gátkgnu lása (%)

1	1	120	+	0,153d	90	ld
	1	120	-	ü,119e	-	0
	2	120	+	0,190d	75	> 26
	2	120	-	0,104®	-	0
	3	0		0,435	-	29
	nem	nem	-	0,092	—	0
2	4	240	+	0,256d	69	26
	4	240	-	0,138®	-	0
	3	0	+·	0,473	-	s 30
	nem	nem	-	0,092	-	0
3	5	240	+	0,211d	68	) 16
	5	240	-	0,158®	-	0
	1	120	+	O,172d	76	2d
	1	120	-	0,132e	-	0
	3	0	+	0,265	-	> 30
	nem	nem	-	0,101	00	^30

« 3 *-azido-timidin β 4*-azido-timidin ^c nátrium-klorid-oldat *= 2’,3’-dideoxi-oitidin « 2 *,3’-dideoxi-ino zin ^a ss intraperitoniális kezelés 2 vagy 3 egyforma dózissal napig, indulás 4 órával a fertőzés után

y.

= a fertőzés után 9 nappal mért érték ^c ® százalékos gátlás ^d « 0,05 a nátrium-klirrid-oldattal kezelt, fertőzött kontrollal összehasonlítva *

^Q » 0,05 a kezeletlen, nem fertőzött kontrollal összehasonlítva.

A találmányt az egyes speciális megvalósítási módokra hivatkozva ismertetjük, ugyanakkor magától értetődik, hogy számos változtatás, módosítás, továbbá egyenértékű dolgok egymással való helyettesítése lehetséges; ezek a szakember számára jól ismertek. Az ilyen jellegű módosítás, változtatás és helyettesítés az alkalmazott anyagokat, készítményeket, eljárásokat, módszereket és eljárási lépéseket illetően olyan, hogy alkalmazásukkal sem a találmány terjedelmét, sem annak szellemét nem lépjük túl, ennélfogva mindezeket a jelen találmányi leírás szabadalmi igénypontókbhn meghatározott oltalmi körébe tartozónak tekintjük.

Claims (17)

Szabadalmi igénypontok

1- (4-az idő- 2,3-dideoxi- -i)-gli c e ro-p en t o í urano zi1) -5-metil-2-oxo-pirimidin és

1-(4-azido-2-deoxi- -D-eritro-pentofuranozil)-5-metil-2-oxo-pirimidin,

1-(4-azido-2-deoxi- -D-eri tro-p ént ofurano zil)-4-etoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin, l-(4-azido-2-deoxi- -D-eritro-pentofuranozil)- 4-i zoprop oxi-5-me ΐ ix- 2-oxo-pirimidin,

1) az 11^ helyén hidroxilc söpör tót tartalmazó vegyületek előállítása esetében egy szililezőszerrel és egy bázissal, majd ezt követően egy Lewis-sav katalizátor jelenlétében egy aziddal reagáltatunk; vagy

1’ jelentése hidrogénatom, hidroxilesöpört, metoxicsoport vagy fluoratom, fP jelentése rövidszénláncu alkilcsoport és

R⁴ jelentése hidroxilcsöpört vagy triszubsztituált szilil-oxi-csoport -

1’ Jelentése megegyezik az (I) általános képlet értelmezésénél megadott B Jelentésével vagy ennek egy acilezett megfelelője, ···· ·· · ···· • « · ·· · ··· · · · ··· • · · · · • · · · · ·····«

- 101 L, jelentése metil- vagy acilcsoport, előnyösen anizoil-, benzoil-, acetil- vagy furán-2-karbonil-csoport,

X jelentése hidrogén- vagy fluoratom és

Z jelentése egy kilépőcsoportot, előnyösen jódat omot vagy brómatomot tartalmazó metiléncsöpört egy oxidálószerrel reagáltatunk, majd egy bázist addicionálunk rá; vagy

b) valamely (13) általános képletű vegyületet ebben a képletben

B jelentése guanin-, adenin-, timin-, uracil-, citozin-, hipoxantin-, xantin-, 5-metil-citozin-,

1. Eljárás (I) általános képletü vegyületek ebben a képletben

2. Az 1. igénypont szerinti eljárás az Y* helyén hidroxilcsoportot tartalmazó (I) általános képletű vegyületek - ahol B, X és Z jelentése egyezik az 1. igénypontban megadottakkal - előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási vegyületeket alkalmazzuk az 1. igénypont szerinti eljárásban.

2) i.z R⁴ helyén triszubsztituált szilil-oxi-csoportot tartalmazó vegyületek előállítása esetén egy Lewis-sav katalizátor jelenlétében egy aziddal reagáltatunk; vagy

102 -

c) valamely olyan (I) általános képletű vegyületet, ahol n » 0, egy foszíorilezászcrrel történő reagálta tás utján olyan (I) általános képletű vegyületté alakítunk át, ahol n « 1, vagy 3j vagy

d) valamely (I) általános képletű vegyületet, ahol n * 1, egy ciklizálószerrel történő reagáltatás utján olyan (I) általános képletű vegyületté alakítunk át, ahol Y’ és Z jelentése együttesen egy ciklusos foszfát-csoport; vagy

e) valamely (II) általános képletű vegyületet foszfonsavval vagy egy di-(rövidszénláncú alkil)-foszfonát-sóval történő reagáltatás utján a Z helyén (R’O^HOjCHg- általános képletű csoportot tartalmazó (I) általános képletű vegyületté alakitünk ítj vagy

f) valamely (I) általános képletű vegyületet egy védőcsoport kialakítására alkalmas vegyülettel, majd egy erős bázissal, utána egy alkil-halogeniddel történő reagál tatása és a védőcsoportnak az ezt követő eltávolítása utján az Y’ helyén egy éter-csoportot tartalmazó (I) általános képletű vegyületté alakítunk át; vagy

g) valamely (I) általános képletű vegyületet piridin-katalizátor jelenlétében egy sav-klorideiül történő reagáltatása utján a megfelelő (I) általános képletű éterré alakítunk át; vagy

h) valamely (I) általános képletű vegyületet egy gyógyászatilag elfogadható bázissal történő reagáltatás utján a megfelelő (I) általános képletű bázikus addiciós sójává alakítunk át; vagy ·»·· ·· · ···· ••••·· ··· · · · · · · ♦ · · · · ··· ·· ······

- 103 -

i) valamely (I) általános képlett! bázikus addiciós sót egy savval történő reagáltatás utján a megfelelő szabad vegyületté alakítunk átj

j) valamely (I) általános képletű gyógyászatilag elfogadható bázikus addiciós sót egy másik (I) általános képletű gyógyászatilag elfogadható bázikus addiciós sóvá alakítunk átj vagy

k) valamely (I) általános képletű észtert vagy étert a megfelelő (I) általános képletíi/vegyüle tté alakítunk át·

3 jelentésű (I) általános képletű vegyületek előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási vegyületeket alkalmazzuk a 9· igénypont szerinti eljárásban.

* · · ·· · e·· · · · «·· • · · · · ··» ·« ··· ···

Μ

- 107

3 jelentésű (I) általános képletű vegyületek előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási vegyületeket alkalmazzuk a 4. igénypont szerinti eljárásban.

3» A 2. igénypont szerinti eljárás az X helyén hidrogénatomot tartalmazó (I) általános képletű vegyületek - ahol a B és Z jelentése egyezik az 1. igénypontban megadottakkal - előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási vegyületeket alkalmazzuk a 2. igénypont szerinti eljárásban.

3 jelentése guanin-, adenin-, timin-, uracil-, citozin-, hipoxantin-, xantin-, 5-metil-citozin-, 4-etoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin-, 4-iaopi’opoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin- vagy 5-metil-2-oxo-pirimidin-gyürüből levezethető csoport,

X Jelentése hidrogén- vagy fluoratom,

Y’ Jelentése hidrogénatom, hidroxilesöpört, meioxicsöpört vagy fluoratom és

Z Jelentése (IV) vagy (V) általános képletü csoport, ahol n Jelentése 0, 1 vagy 3 és mindkét K* Jelentése hidrogénatom vagy rövidszénláncú alkil-csöpört, vagy

Y’ és Z együttesen ciklusos foszfát-észtert képviselnek és ezen vegyületek gyógyászatilag elfogadható észterei, éterei és sói előállítására, azzal jellemezve, hogy

a) valamely (II) általános képletü vegyületet ebben a képletben

- 4-amiüo-5-me t i 1-2-oxo-p i rimidi η, l-(4-azido-2,3-dideoxi- -D-glicero-pentoíuranozil)-4-etoxi-5-metil-2-oxo-pirimidin, l-(4-azido-2,3-dideoxi- -D-glicero-pentoiuranozil)-4-izopropoxi-5-me ti1-2-oxo-pirimidin,

4’-azido-2’,3’-dideoxi-guanozin,

4’-azido-2’,5’-dideoxi-citidin*

4 *-azido-2’,3 *-dideoxi-uridin,

4’-azido-2 *,3 *-dideoxi-adeno zin,

4 *-azido-2 *-deoxi-citidin,

4*-azido-2 *-deoxi-guanózin, • · · · · · ··· • · · · · • ·· ·· ···«··

- 104 4 *-azido-2 *-deoxi-uri din,

4*-azido-2*-deoxi-adenozin,

4*-azido-timidin,

4. A 3· igénypont szerinti eljárás az alábbi (I) általános képletű vegyületek - ahol n jelentése 0 -

4-ewxi-5-metil-2-oxo-pirimidin, 4-izopropoxi-5~ -metll-2-oxo-pirimidin- vagy 5-metil-2-oxo-pirimidin-gyürüből levezethető csoport,

X Jelentése hidrogén- vagy fluoratom,

5· Az 1. igénypont szerinti eljárás az Ϊ* helyén hidrogénatomot tartalmazó (I) általános képletü vegyületek - ahol a B, a és Z jelentése egyezik az 1. igénypontbán megadóttokkal - előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási vegyületeket alkalmazzuk az 1. igénypont szerinti eljárásban.

6. az 5. igénypont szerinti eljárás az a helyén hidrogénatomot tartalmazó (I) általános képletü vegyületek - ahol a B és Z jelentése egyezik az 1. igénypontban megadottakkal - előállítására, azzal jellem ez v e, hogy a megfelelő kiindulási vegyületeket alkalmazzuk az 5« igénypont szerinti eljárásban· ··« · ··· · · · ··· • · · · · ··· ·· ·«····

- 105

7· Á 6. igénypont szerinti eljárás az alábbi (I) általános képletü vegyületek - ahol az n jelentése 0 4’-azido-3 *-deoxi-timidin,

8. Az 1. igénypont szerinti eljárás az Y’ helyén fluoratomot tartalmazó (I) általános képletü vegyületek

- ahol a B, X és Z jelentése egyezik az 1. igénypontban megadottakkal - előállítására, azzal jelleme z ve, hogy a megfelelő kiindulási vegyületeket alkalmazzuk az 1. igénypont szerinti eljárásban.

»··· ·· A ···· « · · ·· » ··· · · · ··· • · · · · ··· ·· ·····♦ — 10ό —

9. A 8. igénypont szerinti eljárás az X helyén hidrogénatomot tartalmazó (I) általános képletű vegyüleLek - ahol B és Z jelentése egyezik az 1. igénypontban megadottakkal - előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási vegyületeket alkalmazzuk a 8. igénypont szerinti eljárásban.

9- ( 4-azid.o-2,3-dideoxi- -D-gliu ero-pentoíuraho zil) -2,6-dihidroxi-purin előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási vegyületeket alkalmazzuk a 6. igénypont szerinti eljárásban.

9-(4-azido-2,3-dideoxi- -D-glicero-pentoíuranozil)-6-hidroxi-purin, l-(4-azido-2,3-dideoxi- -D-glicero-pentaxuranozil)-

9-(4-azido-2-deoxi- -D-eritro-pentoíurunozil)-2,6-dihidroxi-purin előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk aj. igénypont szerinti eljárásban.

9-(4-azido-2-deoxi- -D-eritro-pentofuranozil)-6-hidroxi-purin, l-(4-azido-2-deoxi- -D-eritro-pentofuranozil)-4-amino-5-metil-2-oxo-pirimidin,

10. A 9· igénypont szerinti eljárás az n » 0 jelentésű (I) általános képletű vegyületek előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási vegyületeket alkalmazzuk a 9· igénypont szerinti eljárásban.

11. A 4· igénypont szerinti eljárás az η = 1 vagy

12. A 6. igénypont szerinti eljárás az η « 1 vagy 3 jelentésű (I) általános képletű vegyületek előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási vegyületeket alkalmazzuk a 6. igénypont szerinti eljárásban.

13· a 9. igénypont szerinti eljárás az n = 1 vagy

14« Eljárás gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1-13. igénypontok valamelyike szerint előállított (I) általános képletü vegyületet - ahol B, X, Y’ és 2 jelentése egyezik az 1-13. igénypontban adott meghatározás szerintivel - gyógyászati szempontból elfogadható vivőanyaggal és/vagy egyéb gyógyszerészeti segédanyaggal összekeverve gyógyászati készítménnyé alakítunk.

15· Eljárás gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely, az 1-13. igénypontok bármelyike szerint előállított (I) általános képletü vegyületet - ahol B, X, Y’ és 2 jelentése egyezik az 1-13. igénypontban adott meghatározás szerintivel - egy másik antivlrális hatású szer hatékony mennyiségével, továbbá gyógyászati szempontból elfogadható vivőanyaggal és/vagy egyéb gyógyszerészeti segédanyaggal összekeverve gyógyászati készítménnyé alakítunk.

16. A 15. igénypont szerinti eljárás gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy a másik antivirális szerként acyclovir, ganciclovir vagy foscaraet hatóanyagot alkalmazunk a 15. igénypont szerinti eljárásban.

17. A 14. igénypont szerinti eljárás gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy (I) általános képletü hatóanyagként