IT201900008745A1 - Nano-liposomi ingegnerizzati per una terapia mirata di aterosclerosi e loro procedimento di preparazione - Google Patents

Nano-liposomi ingegnerizzati per una terapia mirata di aterosclerosi e loro procedimento di preparazione Download PDF

Info

Publication number
IT201900008745A1
IT201900008745A1 IT102019000008745A IT201900008745A IT201900008745A1 IT 201900008745 A1 IT201900008745 A1 IT 201900008745A1 IT 102019000008745 A IT102019000008745 A IT 102019000008745A IT 201900008745 A IT201900008745 A IT 201900008745A IT 201900008745 A1 IT201900008745 A1 IT 201900008745A1
Authority
IT
Italy
Prior art keywords
poly
liposomes
nano
anions
engineered
Prior art date
Application number
IT102019000008745A
Other languages
English (en)
Inventor
Patrizia Perego
Domenico Palombo
Pier Francesco Ferrari
Roberta Campardelli
Giovanni Pratesi
Original Assignee
Univ Degli Studi Genova
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Univ Degli Studi Genova filed Critical Univ Degli Studi Genova
Priority to IT102019000008745A priority Critical patent/IT201900008745A1/it
Priority to PCT/IB2020/055404 priority patent/WO2020250126A1/en
Priority to US17/616,951 priority patent/US20220168443A1/en
Publication of IT201900008745A1 publication Critical patent/IT201900008745A1/it

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6905—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion
    • A61K47/6911—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion the form being a liposome
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6905—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion
    • A61K47/6911—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion the form being a liposome
    • A61K47/6913—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion the form being a liposome the liposome being modified on its surface by an antibody
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6843—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a material from animals or humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
    • A61K9/1277—Preparation processes; Proliposomes
    • A61K9/1278—Post-loading, e.g. by ion or pH gradient

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

GIORGIO A. KARAGHIOSOFF MANDATARIO ABILITATO 531 BM
DESCRIZIONE dell'Invenzione Industriale dal titolo:
“NANO-LIPOSOMI INGEGNERIZZATI PER UNA TERAPIA MIRATA
5 DI ATEROSCLEROSI E LORO PROCEDIMENTO DI PREPARAZIONE”
appartenente a Università degli Studi di Genova, di nazionalità italiana, con sede in Via Balbi, 5, 16126 Genova GE.
10 Depositato il Al Nr.
* ;;TESTO DELLA DESCRIZIONE ;La presente invenzione ha per oggetto nanoliposomi ingegnerizzati, denominati anche immuno-<15 >nano-liposomi, e il loro procedimento di preparazione, per una terapia mirata di aterosclerosi. ;L’aterosclerosi è una patologia multifattoriale sempre accompagnata da un processo infiammatorio, dal 20 momento di insorgenza della placca a quello di formazione del trombo. Le placche originano dall’accumulo di lipoproteine a bassa densità (low density lipoproteins, LDL) nello strato subendoteliale delle arterie ove si innesca un processo 25 di anomala proliferazione di cellule muscolari, di alterata migrazione leucocitaria e di attivazione macrofagica. Nei macrofagi così attivati, diversi fattori di trascrizione inducono l’espressione di proteine coinvolte nel processo flogistico, quali il 30 fattore di necrosi tumorale α, le metalloproteasi della matrice e diverse interleuchine. Sebbene un blocco completo di tali fattori presenti risvolti positivi nell’aterosclerosi, la loro attività è MANDATARIO ABILITATO 531 BM ;;comunque fondamentale in diversi meccanismi molecolari coinvolti a livello del sistema immunitario e non solo. Da qui, nasce il bisogno di un’inibizione mirata di tali fattori di trascrizione. ;Ad oggi esistono differenti approcci farmacologici alla terapia dell’aterosclerosi. Questi comprendono: (1) inibitori dell’enzima HMG-CoA reduttasi (statine), (2) inibitori dell’assorbimento del colesterolo e (3) fibrati. Tali classi di molecole sono costituite da farmaci che hanno come bersaglio sistemi biochimici coinvolti nel metabolismo del colesterolo, ma nessuno di questi è in grado di aggredire la placca aterosclerotica direttamente dall’interno, agendo sui meccanismi molecolari che vengono innescati durante la formazione della placca stessa. ;Noi ora con l’impiego di nanosistemi di drug delivery possiamo ottenere un’inibizione mirata dei fattori di trascrizione sopra specificati. ;Oggetto della presente invenzione sono nanoliposomi ingegnerizzati (immuno-nanoliposomi), unilamellari e/o multilamellari aventi un diametro preferibilmente compreso tra 10 e 200 nm , che possono essere utilizzati come trattamento nella terapia dell’aterosclerosi, caratterizzati dal fatto di contenere anticorpi monoclonali terapeutici, ossia attivi nei confronti della placca ateromasica, e di presentare sulla superficie esterna di detti nanoliposomi dei poli-anioni e/o poli-cationi. ;Gli anticorpi monoclonali terapeutici possono essere scelti preferibilmente fra quelli in grado di bloccare molecole coinvolte nella trasduzione di segnali pro-infiammatori o anticorpi commerciali con MANDATARIO ABILITATO 531 BM ;;la capacità di ridurre eventi cardiovascolari, come, ad esempio, il Canakinumab sviluppato dalla Novartis. ;In particolare gli anticorpi monoclonali terapeutici sono imprigionati nei nano-liposomi e i poli-anioni e/o poli-cationi sono ancorati alla superficie dei detti nano-liposomi, dove all’attacco terminale dei detti poli-anioni e/o poli-cationi sono innestati anticorpi monoclonali specifici per le placche ateromasiche capaci di guidare detti nanoliposomi ingegnerizzati a livello del tessuto bersaglio. ;;I poli-anioni e/o i poli-cationi da utilizzare sono scelti preferibilmente fra il glicol polietilenico (PEG), i polimeri idrofili e le proteine. ;La scelta degli anticorpi da innestare all’attacco terminale dei detti poli-anioni e/o policationi ricade preferibilmente su anticorpi diretti contro specifici epitopi delle low density lipoproteins ossidate presenti in elevata concentrazione a livello della placca aterosclerotica, così come per domini proteici della fibronectina presente a livello della placca ateromasica così come anticorpi diretti contro epitopi di proteine espresse esclusivamente a livello di placche ateromasiche in fase florida. ;;Ulteriore oggetto della presente invenzione è rappresentato da una composizione farmaceutica per uso sistemico, in particolare per il trattamento nella terapia dell’aterosclerosi, contenente i nanoliposomi ingegnerizzati sopra descritti in miscela GIORGIO A. KARAGHIOSOFF MANDATARIO ABILITATO 531 BM ;;con eccipienti e/o diluenti e/o sistemi di veicolazione. ;Pertanto la novità dell’invenzione è rappresentata da un lato dalla definizione di un 5 sistema di drug delivery per una delle più importanti patologie del sistema vascolare, e dall’altro per il trattamento dell’aterosclerosi con anticorpi terapeutici. ;Nell’ultimo decennio, sempre maggiore attenzione 10 è stata rivolta ai sistemi di drug delivery in quanto consentono di avere un rilascio sito-specifico delle molecole incapsulate e modulabile nel tempo, andando a diminuire gli effetti indesiderati della terapia classica. ;15 L’incapsulamento di molecole bioattive, quali anticorpi terapeutici, presenta il vantaggio di migliorarne la biodisponibilità e la farmacocinetica. I liposomi, grazie ai bassi costi, alla loro alta biocompatibilità ed alla loro capacità di incapsulare <20 >anche molecole chimicamente differenti, rappresentano sistemi di incapsulamento ideali per la sintesi di nanoparticelle da impiegare in protocolli di terapia mirata. ;I nanoliposomi, inoltre, costituiscono un 25 ottimo substrato per l’autoassemblaggio elettrostatico di polianioni/policationi sulle loro superfici. Questi consentono di stabilizzare le nanoparticelle stesse, modulare il rilascio dell’agente incapsulato e consentire 30 l’immobilizzazione di anticorpi sulla loro superficie. ;Dato che le placche aterosclerotiche presentano markers molecolari specifici, un loro epitopo può rappresentare un ottimo target per guidare un sistema MANDATARIO ABILITATO 531 BM ;;nanoparticellare coniugato con uno specifico anticorpo, immobilizzato sulla superficie delle nanoparticelle stesse, a livello del sito patologico. ;Tali immuno-nanoparticelle saranno in grado di modulare il processo infiammatorio che è uno dei processi alla base dell’ostruzione vasale in presenza di placche aterosclerotiche. Tale invenzione permetterà di superare le limitazioni attualmente legate alla terapia classica. ;Infatti, nel complesso, i risultati attesi mirano a sviluppare un approccio terapeutico innovativo per il trattamento delle placche ateromasiche nella fase florida, evitando l’approccio sistemico con farmaci innovativi ma dotati di effetti collaterali evitabili con i bassi dosaggi concentrati sulla placca. ;I nanosistemi alla sua base, ovvero i liposomi, sono di facile sintesi, molto versatili, altamente biocompatibili. ;La terapia mirata proposta va ad annullare completamente gli effetti indesiderati che la somministrazione aspecifica di un inibitore di tali fattori potrebbe avere sull’intero sistema immunitario del paziente. Questo sistema innovativo di drug delivery consente di superare gli svantaggi dovuti alla terapia classica, andando a diminuirne gli effetti collaterali, in quanto l’agente farmacologicamente attivo, verrà trasportato e rilasciato solamente a livello della placca aterosclerotica, nel giusto dosaggio e nei tempi prestabiliti. Un sistema di drug delivery per il trattamento dell’aterosclerosi, come quello sopra descritto, risulta essere, considerata anche la MANDATARIO ABILITATO 531 BM ;;scarsa letteratura presente a tale riguardo, un approccio farmacologico fortemente innovativo. ;Ulteriore oggetto dell’invenzione è rappresentato dalla sintesi di detti nanoliposomi ingegnerizzati (immuno-nanoliposomi) da impiegare nella terapia dell’aterosclerosi dove gli anticorpi monoclonali terapeutici sono imprigionati nei nanoliposomi e il glicol polietilenico, polimeri idrofili o proteine sono ancorati alla superficie dei nanoliposomi. ;In dettaglio l’invenzione prevede la definizione di un semplice ed economico processo di incapsulamento di proteine terapeutiche, gli anticorpi monoclonali diretti verso molecole coinvolte nel processo infiammatorio, in nanoliposomi specifici per la placca ateromasica, vista la presenza sulla loro superficie di un anticorpo che riconosce proteine espresse esclusivamente a tale livello. ;Il procedimento per preparare i nano-liposomi ingegnerizzati sopra specificati comprende essenzialmente le fasi seguenti: ;a) produzione di nano-liposomi caricati con anticorpi monoclonali attivi nei confronti della placca ateromasica mediante idratazione di film lipidico; ;b) modifica superficiale dei detti nanoliposomi mediante poli-anioni e/o policationi; ;c) innesto degli anticorpi monoclonali specifici per le placche ateromasiche capaci di guidare detti nano-liposomi ingegnerizzati a livello del tessuto GIORGIO A. KARAGHIOSOFF MANDATARIO ABILITATO 531 BM ;;bersaglio (cioè diretto contro le placche ateromasiche) all’attacco terminale dei detti poli-anioni e/o poli-cationi . ;;Il processo di incapsulamento effettuato nello 5 stadio a) permette di ottenere nanoliposomi che posseggano idonee caratteristiche chimico-fisiche, di rilascio ed efficacia del principio attivo incapsulato e siano bio- ed emocompatibili. ;Lo stadio (b) riguarda la modifica superficiale <10 >dei liposomi al fine di renderne la superficie più idonea all’attacco di un anticorpo, che avviene nello stadio (c), altamente specifico per le placche ateromasiche capace di guidare le nanoparticelle a livello del tessuto bersaglio. ;;15 La produzione di nano-liposomi caricati con anticorpi monoclonali attivi nei confronti della placca ateromasica mediante idratazione di film lipidico, (stadio a), viene effettuata utilizzando una soluzione a diverse concentrazioni di lipidi 20 preparata con differenti tipi di solvente, che viene fatta evaporare al fine di ottenere la deposizione di uno strato lipidico, che viene sottoposto ad idratazione mediante aggiunta di una soluzione idratante contenente o costituita da acqua e/o buffer 25 salini e/o soluzioni fisiologiche, in cui è stato disperso un anticorpo monoclonale terapeutico, cioè attivo nei confronti della placca ateromasica, da incapsulare, effettuata sotto agitazione fino ad ottenere una sospensione liposomale, la quale viene 30 successivamente sottoposta a sonicazione con ultrasuoni, al fine di ottenere un buon controllo della granulometria, indi sottoposta a MANDATARIO ABILITATO 531 BM ;;centrifugazione e lavaggio, preferibilmente con acqua, eventualmente ripetuti preferibilmente da una a tre volte, al fine di rimuovere l’agente non incapsulato, ottenendo infine il surnatante ed il pellet. ;Il surnatante può essere conservato e riutilizzato eventualmente in un ciclo successivo di produzione. ;Il pellet così ottenuto invece viene normalmente risospeso in un volume di liquido (buffer, soluzione fisiologica) e nuovamente centrifugato e lavato sia al fine del raggiungimento della concentrazione desiderata, preferibilmente fra circa 10<6 >e 10<7 >particelle/mL, sia al fine di rimuovere le eventuali tracce di agente attivo non incapsulato che potrebbero interferire negli step successivi. ;La soluzione viene preparata preferibilmente con un numero di concentrazioni diverse di lipidi uguale o maggiore di 5 comprese fra 1 e 20 mg/mL e preferibilmente con un numero di differenti solventi impiegati uguale o maggiore di 4. ;Nel caso di almeno 4 solventi impiegati detti solventi sono etanolo, metanolo, cloroformio, acetato di etile. ;I lipidi possono essere scelti preferibilmente fra i fosfolipidi, in particolare i derivati dell'acido fosfatidico, nel quale il glicerolo è esterificato in posizione 1 e 2 con acidi grassi e in posizione 3 con acido ortofosforico. L'acido ortofosforico, oltre alla esterificazione con il glicerolo, presenta una seconda esterificazione con MANDATARIO ABILITATO 531 BM ;;un alcol (amminoalcol o un amminoacido con gruppo alcolico o uno zucchero). ;Detti fosfolipidi sono preferibilmente scelti fra fosfatidil-colina, fosfatidil-etanolammina e fosfatidil-inositolo. ;;La soluzione preparata a diverse concentrazioni di lipidi con differenti tipi di solvente viene fatta evaporare preferibilmente a pressione ridotta, per un tempo compreso fra 0,5 e 1,5 h, ad una temperatura di circa 40 °C. L’evaporazione completa del solvente è consigliata per ottenere la deposizione di un doppio strato fosfolipidico dal ridotto spessore. ;L’idratazione del film lipidico avviene preferibilmente a temperature fra 15 e 40°C, per tempi compresi fra 0,5 e 3 ore e sotto blanda agitazione fra 200 e 600 rpm, con un rapporto idratante /lipide compreso fra 5 e 30. ;Gli anticorpi monoclonali terapeutici da incapsulare, cioè attivi nei confronti della placca ateromasica, sono preferibilmente anticorpi in grado di bloccare molecole coinvolte nella trasduzione di segnali pro-infiammatori o anticorpi commerciali con la capacità di ridurre eventi cardiovascolari, come, ad esempio, il canakinumab, sviluppato dalla Novartis, che viene aliquotato e disciolto nella suddetta fase acquosa in modo da avere un loading dell’agente attivo. ;I liposomi formati possono essere unilamellari e/o multilamellari (preparazione liposomale mista), con dimensioni preferibilmente comprese tra 10 e 200 µm. ;La sonicazione con ultrasuoni viene preferibilmente effettuata per un tempo compreso tra GIORGIO A. KARAGHIOSOFF MANDATARIO ABILITATO 531 BM ;;1 e 5 minuti, con intervalli da 10 a 30 secondi, e a temperature comprese fra 15°C e 40°C, l’erogazione degli ultrasuoni potendo eventualmente avvenire in modalità pulsata, impulso on da 1 a 10 secondi, 5 impulso off da 3 a 15 secondi. ;Ad esempio come apparecchiatura può essere utilizzata una sonda, un sonicatore con tip immersa direttamente nella sospensione, con potenze che variano dal 30% al 70% rispetto alla potenza totale di output. ;10 I liposomi ottenuti dopo la sonicazione con ultrasuoni possono essere unilamellari e/o multilamellari, con dimensioni comprese preferibilmente tra 10 e 200 nm e indici di dispersione del 5 fino al 30%. ;<15 >La centrifugazione (o le centrifugazioni) della sospensione liposomale, che segue la sonicazione con ultrasuoni, avviene, preferibilmente, a velocità comprese tra 10000 e 24000 rpm al fine di recuperare i liposomi prodotti e separarli dall’acqua esterna 20 che contiene il farmaco eventualmente non incapsulato. ;La modifica superficiale dei nano-liposomi mediante poli-anioni e/o poli-cationi (stadio b), al fine di rendere la superficie idonea all’attacco 25 dell’anticorpo responsabile dell’effettivo targeting della nanostruttura alla zona bersaglio del trattamento, avviene preferibilmente attraverso uno step di reazione di attacchi di tipo chimico (legami covalenti), di tipo chimico-fisico (adsorbimento) 30 e/o di tipo elettrostatico (legami non covalenti), in modo da ancorare detti poli-anioni e/o i policationi alla superficie dei liposomi stessi. ;MANDATARIO ABILITATO 531 BM ;;I poli-anioni e/o i poli-cationi utilizzati sono scelti preferibilmente fra il glicol polietilenico (PEG), i polimeri idrofili e le proteine. ;La scelta di tali anticorpi potrà ricadere su anticorpi diretti contro specifici epitopi delle low density lipoproteins ossidate presenti in elevata concentrazione a livello della placca aterosclerotica, così come per domini proteici della fibronectina presente a livello della placca ateromasica così come anticorpi diretti contro epitopi di proteine espresse esclusivamente a livello di placche ateromasiche in fase florida. ;L’innesto degli anticorpi monoclonali specifici per le placche ateromasiche, capaci di guidare detti nano-liposomi ingegnerizzati a livello del tessuto bersaglio, all’attacco terminale del poli-anioni e/o poli-cationi (stadio c) può avvenire mediante accoppiamento covalente oppure non covalente. ;;Opportune modifiche ai terminali dei poli-anioni e poli-cationi, , permettono l'accoppiamento covalente di ligandi. ;Per l'accoppiamento non covalente di anticorpi ai liposomi, si possono utilizzare invece anticorpi e lipidi funzionalizzati con proteine o piccole molecole che hanno forti affinità reciproche. ;In entrambi i casi, sia per l’attacco covalente sia per l’attacco non covalente, lo stadio (c) viene preferibilmente effettuato mediante incubazione dei nano-liposomi modificati nello stadio (b), lavorando con un eccesso di anticorpo, ad una specifica temperatura (“phase-transition temperature”, dipendente dal tipo di lipide o fosfolipide GIORGIO A. KARAGHIOSOFF MANDATARIO ABILITATO 531 BM ;;uitlizzato) per tempi di reazione compresi tra 0,5 e 12 ore al fine di ottenere l’integrazione dell’anticorpo target specifico al bilayer lipidico del nanocarrier. ;5 La sospensione ottenuta è centrifugata e lavata, a velocità comprese preferibilmente tra 10000 e 24000 rpm al fine di recuperare i liposomi prodotti e separarli dall’acqua esterna che contiene l’anticorpo non innestato sulla superfice dei liposomi e 10 eventuali intermedi di reazione. ;L’operazione di centrifugazione e lavaggio può essere preferibilmente ripetuta da una ad un massimo di tre volte. L’anticorpo non legato alla superficie potrà essere riciclato per nuove fasi di innesto dello <15 >stesso. ;Ulteriore oggetto dell’invenzione è rappresentato dall’uso dei nano-liposomi ingegnerizzati come sopra descritti come trattamento nella terapia dell’aterosclerosi. ;20 *

Claims (1)

  1. MANDATARIO ABILITATO 531 BM RIVENDICAZIONI 1.Nano-liposomi ingegnerizzati (immunonanoliposomi) caratterizzati dal fatto di contenere anticorpi monoclonali attivi nei confronti della placca ateromasica e di presentare sulla superficie esterna di detti nano-liposomi poli-anioni e/o poli-cationi. 2.Nano-liposomi ingegnerizzati come da rivendicazione 1 dove detti napo-lisomi sono unilamellari e/o multilamellari aventi un diametro compreso tra 10 e 200 nm. 3.Nano-liposomi ingegnerizzati come da rivendicazione 1 o 2 dove gli anticorpi monoclonali attivi nei confronti della placca ateromasica sono imprigionati nei nanoliposomi e i poli-anioni e/o poli-cationi sono ancorati alla superficie dei detti nano-liposomi, dove all’attacco terminale dei detti poli-anioni e/o poli-cationi sono innestati anticorpi monoclonali specifici per le placche ateromasiche capaci di guidare detti nano-liposomi ingegnerizzati a livello del tessuto bersaglio. 4.Nano-liposomi ingegnerizzati come da almeno una delle rivendicazioni precedenti dove i poli-anioni e/o i poli-cationi sono scelti fra il glicol polietilenico (PEG), i polimeri idrofili e le proteine. 5.Composizione farmaceutica per uso sistemico contenente i nano-liposomi ingegnerizzati MANDATARIO ABILITATO 531 BM come da almeno una delle rivendicazioni precedenti in miscela con eccipienti e/o diluenti e/o sistemi di veicolazione. Composizione farmaceutica come da rivendicazione 5 per uso come trattamento nella terapia dell’aterosclerosi. Procedimento per preparare i nano-liposomi ingegnerizzati come da almeno una delle rivendicazioni da 1 a 4 comprendente essenzialmente le fasi seguenti: a) produzione di nano-liposomi caricati con anticorpi monoclonali attivi nei confronti della placca ateromasica mediante idratazione di film lipidico; b) modifica superficiale dei detti nanoliposomi mediante poli-anioni e/o policationi; c) innesto degli anticorpi monoclonali specifici per le placche ateromasiche capaci di guidare detti nano-liposomi ingegnerizzati a livello del tessuto bersaglio all’attacco terminale dei detti poli-anioni e/o poli-cationi . Procedimento come da rivendicazione 7 dove la produzione di nano-liposomi caricati con anticorpi monoclonali attivi nei confronti della placca ateromasica mediante idratazione di film lipidico, stadio (a), viene effettuata utilizzando una soluzione a diverse concentrazioni di lipidi preparata con differenti tipi di solvente, che viene fatto evaporare al fine di ottenere la deposizione di uno strato lipidico, che MANDATARIO ABILITATO 531 BM viene sottoposto ad idratazione mediante aggiunta di una soluzione idratante contenente o costituita da acqua e/o buffer salini e/o soluzioni fisiologiche, in cui è stato disperso un anticorpo monoclonale terapeutico, cioè attivo nei confronti della placca ateromasica, da incapsulare, effettuata sotto agitazione fino ad ottenere una sospensione liposomale, la quale viene successivamente sottoposta a sonicazione con ultrasuoni, indi sottoposta a centrifugazione e lavaggio, preferibilmente con acqua, ottenendo infine il surnatante ed il pellet. 9)Procedimento come da rivendicazione 8 dove il pellet viene risospeso fino al raggiungimento della concentrazione desiderata, preferibilmente fra circa 10<6 >e 10<7 >particelle/mL. 10)Procedimento come da rivendicazione 8 dove i lipidi sono fosfolipidi scelti fra fosfatidil-colina, fosfatidil-etanolammina e fosfatidil-inositolo. 11) Procedimento come da rivendicazione 8 dove l’idratazione del film lipidico avviene a temperature fra 15 e 40°C per tempi compresi fra 0,5 e 3 ore e sotto blanda agitazione fra 200 e 600 rpm, con un rapporto idratante /lipide compreso fra 5 e 30. 12) Procedimento come da rivendicazione 8 dove la sonicazione con ultrasuoni viene effettuata per un tempo compreso tra 1 e 5 minuti, con intervalli da 10 a 30 secondi, GIORGIO A. KARAGHIOSOFF MANDATARIO ABILITATO 531 BM e a temperature comprese fra 15°C e 40°C, l’erogazione degli ultrasuoni potendo eventualmente avvenire in modalità pulsata, impulso on da 1 a 10 secondi, impulso off da 5 3 a 15 secondi. 13) Procedimento come da rivendicazione 8 dove la centrifugazione della sospensione liposomale,che segue la sonicazione con ultrasuoni, avviene a velocità comprese tra 10 10000 e 24000 rpm. 14)Procedimento come da rivendicazione 7 dove la modifica superficiale dei liposomi mediante poli-anioni e/o poli-cationi , avviene attraverso uno step di reazione di <15 >attacchi di tipo chimico (legami covalenti), di tipo chimico-fisico (adsorbimento) e/o di tipo elettrostatico (legami non covalenti). 15)Procedimento come da rivendicazione 7 dove 20 l’anticorpo monoclonale viene innestato all’attacco terminale dei poli-anioni e/o poli-cationi mediante incubazione dei nanoliposomi modificati nello stadio (b), lavorando con un eccesso di anticorpo, ad 25 una temperatura dipendente dal tipo di lipide o fosfolipide utilizzato per tempi di reazione compresi tra 0,5 e 12 ore,essendo poi seguita da una centrifugazione e lavaggio, preferibilmente ripetute da una 30 tre volte, a velocità comprese tra 10000 e 24000 rpm. 16)Uso dei nano-liposomi ingegnerizzati come da almeno una delle rivendicazioni da 3 a 4 GIORGIO A. KARAGHIOSOFF MANDATARIO ABILITATO 531 BM come trattamento nella terapia dell’aterosclerosi. P.I. Università degli studi di Genova. 5 Giorgio A. Karaghiosoff Mandatario Abilitato Iscritto al N. 531 BM
IT102019000008745A 2019-06-12 2019-06-12 Nano-liposomi ingegnerizzati per una terapia mirata di aterosclerosi e loro procedimento di preparazione IT201900008745A1 (it)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IT102019000008745A IT201900008745A1 (it) 2019-06-12 2019-06-12 Nano-liposomi ingegnerizzati per una terapia mirata di aterosclerosi e loro procedimento di preparazione
PCT/IB2020/055404 WO2020250126A1 (en) 2019-06-12 2020-06-09 Engineered nano-lyposomes for a targeted therapy of atherosclerosis and preparation process thereof
US17/616,951 US20220168443A1 (en) 2019-06-12 2020-06-09 Engineered nono-lyposomes for a targeted therapy of atherosclerosis and preparation process thereof

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IT102019000008745A IT201900008745A1 (it) 2019-06-12 2019-06-12 Nano-liposomi ingegnerizzati per una terapia mirata di aterosclerosi e loro procedimento di preparazione

Publications (1)

Publication Number Publication Date
IT201900008745A1 true IT201900008745A1 (it) 2020-12-12

Family

ID=68138672

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
IT102019000008745A IT201900008745A1 (it) 2019-06-12 2019-06-12 Nano-liposomi ingegnerizzati per una terapia mirata di aterosclerosi e loro procedimento di preparazione

Country Status (3)

Country Link
US (1) US20220168443A1 (it)
IT (1) IT201900008745A1 (it)
WO (1) WO2020250126A1 (it)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113967264A (zh) * 2021-10-27 2022-01-25 浙江大学 一种用于动脉粥样硬化治疗的大分子前药纳米载体及其制备方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017105344A1 (en) * 2015-12-17 2017-06-22 Nanyang Technological University Nanoliposomes comprising corticosteroid as medicaments and methods to prepare them

Non-Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
AMIN REZA NIKPOOR ET AL: "Nanoliposome-mediated targeting of antibodies to tumors: IVIG antibodies as a model", INTERNATIONAL JOURNAL OF PHARMACEUTICS, vol. 495, no. 1, 1 November 2015 (2015-11-01), NL, pages 162 - 170, XP055667783, ISSN: 0378-5173, DOI: 10.1016/j.ijpharm.2015.08.048 *
LACY MICHAEL ET AL: "Interactions between dyslipidemia and the immune system and their relevance as putative therapeutic targets in atherosclerosis", PHARMACOLOGY AND THERAPEUTICS, ELSEVIER, GB, vol. 193, 25 August 2018 (2018-08-25), pages 50 - 62, XP085563812, ISSN: 0163-7258, DOI: 10.1016/J.PHARMTHERA.2018.08.012 *
MAHFOOZUR RAHMAN ET AL: "Therapeutic Applications of Liposomal Based Drug Delivery and Drug Targeting for Immune Linked Inflammatory Maladies: A Contemporary View Point", CURRENT DRUG TARGETS, vol. 18, no. 13, 14 September 2017 (2017-09-14), US, XP055667237, ISSN: 1389-4501, DOI: 10.2174/1389450118666170414113926 *
NIKPOOR AMIN REZA ET AL: "Improved tumor accumulation and therapeutic efficacy of CTLA-4-blocking antibody using liposome-encapsulated antibody: In vitro and in vivo studies", NANOMEDICINE: NANOTECHNOLOGY, BIOLOGY AND MEDICINE, vol. 13, no. 8, 1 October 2017 (2017-10-01), pages 2671 - 2682, XP085257008, ISSN: 1549-9634, DOI: 10.1016/J.NANO.2017.08.010 *
SAHEBKAR AMIRHOSSEIN ET AL: "A simple and effective approach for the treatment of dyslipidemia using anionic nanoliposomes", COLLOIDS AND SURFACES. B, BIOINTERFACES, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 122, 12 August 2014 (2014-08-12), pages 645 - 652, XP029063535, ISSN: 0927-7765, DOI: 10.1016/J.COLSURFB.2014.07.045 *
SAHEBKAR AMIRHOSSEIN ET AL: "Apolipoprotein B-100-targeted negatively charged nanoliposomes for the treatment of dyslipidemia", COLLOIDS AND SURFACES. B, BIOINTERFACES, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 129, 7 March 2015 (2015-03-07), pages 71 - 78, XP029158138, ISSN: 0927-7765, DOI: 10.1016/J.COLSURFB.2015.03.012 *
SIQIN ZHAORIGETU ET AL: "Delivery of negatively charged liposomes into the atherosclerotic plaque of apolipoprotein E-deficient mouse aortic tissue", JOURNAL OF LIPOSOME RESEARCH., vol. 24, no. 3, 10 September 2014 (2014-09-10), US, pages 182 - 190, XP055667250, ISSN: 0898-2104, DOI: 10.3109/08982104.2013.863208 *
SMRITI M. KRISHNA ET AL: "Anionic nanoliposomes reduced atherosclerosis progression in Low Density Lipoprotein Receptor ( LDLR ) deficient mice fed a high fat diet", JOURNAL OF CELLULAR PHYSIOLOGY, vol. 233, no. 10, 1 October 2018 (2018-10-01), US, pages 6951 - 6964, XP055667228, ISSN: 0021-9541, DOI: 10.1002/jcp.26610 *
YICONG ZHANG ET AL: "Treatment of atherosclerotic plaque: perspectives on theranostics", JOURNAL OF PHARMACY AND PHARMACOLOGY, vol. 71, no. 7, 25 April 2019 (2019-04-25), GB, pages 1029 - 1043, XP055667386, ISSN: 0022-3573, DOI: 10.1111/jphp.13092 *

Also Published As

Publication number Publication date
US20220168443A1 (en) 2022-06-02
WO2020250126A1 (en) 2020-12-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110536680B (zh) 用于靶向活化cd44分子的树枝状聚合物纳米载体递送系统、其制备方法和用途
CA2722183C (en) Nanostructures suitable for sequestering cholesterol and other molecules
Abesekara et al. Recent advances in surface modification of micro-and nano-scale biomaterials with biological membranes and biomolecules
US20100158994A1 (en) Nanoparticles for Delivery of Therapeutic Agents Using Ultrasound and Associated Methods
Cheng et al. Facile assembly of cost-effective and locally applicable or injectable nanohemostats for hemorrhage control
EP3610859B1 (en) Cerasome delivery system for use in targeted activation of cd44 molecule, preparation method therefor and use
JPWO2005053643A1 (ja) リポソーム
Gafar et al. Applications of peptides in nanosystems for diagnosing and managing bacterial sepsis
Kendre et al. Polymeric nanoparticles: prospective on the synthesis, characterization and applications in nose-to-brain drug delivery
IT201900008745A1 (it) Nano-liposomi ingegnerizzati per una terapia mirata di aterosclerosi e loro procedimento di preparazione
US7981442B2 (en) Ultrasound enhancement of drug release across non-ionic surfactant membranes
JP4771291B2 (ja) Ｐ−セレクチン標的リガンドおよびその組成物
Khan et al. Recent developments in nanomaterial drug delivery and upgrading treatment of cardiovascular disease
Kulabhusan et al. Aptamer-mediated drug delivery system for cardiovascular diseases
CN107519496A (zh) 一类l‑肉毒碱两亲性衍生物及其修饰的纳米粒及其用途
CN105963708A (zh) 一种酶促响应释放的磷脂酰纳米前药及其制备方法和应用
Lepetre-Mouelhi Squalenoylation: An original approach for the treatment of severe diseases.
Nikam et al. Novel approach to improve bioavailability and factors affecting to stability of nanoformulaiton
CN119792545A (zh) 药物载体、胶束、抗炎和/或抗动脉粥样硬化的药物制剂、及其制备方法和应用
Xu Targeted drug delivery with cyclodextrin-based nanocarriers and focused ultrasound triggering