IT8367457A1

IT8367457A1 - Composto 2-isopropilpirido (2-1-b) chinazolina, suoi sali non tossici con attivita' antianafilattica, e procedimento per la loro preparazione

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Publication number: IT8367457A1
Application number: ITTO1983A067457A
Authority: IT
Original assignee: Laboratorio Farmaceutico Quim Lafarquim S A
Priority date: 1982-04-30
Filing date: 1983-04-28
Publication date: 1984-10-28
Also published as: DE3315471A1; ES511866A0; IT8367457A0; ES8306729A1; BE902544Q; IT1160121B; FR2526023B1; FR2526023A1

Description

D.ESCR IZ.I0 N E

della domanda diBreveItto per Invenzione IndustriaIe daltitolo: "COMPOSTO 2-1SOPROPILPIR!DO (2-1-b) CHINAZOLINA, SUOISALINON-, TOSSICICON ATTIVIT?' ANTIANAFILATTICA, E PROCEDIMENTO PER LA-LO-RO PREPARAZIONE"

R I A S S U N T O

L'invenzione si riferisce a composti aventi la formula generale:

[IH

CH.-CH X R-,

X

dove R pu? essere carbossile, carbossiammide, cianogeno o tetrazolile, e ad unaprocedimento per la preparazione di tali composti. L'invenzione ? caratterizzata dal fatto che in una prima fase del procedimento si fa reagire l'acido 5-isopropil antranilico o il suo estere etilico con quantit? equimolecolari

di acido 6-cloronicotinico o del suo sale?estere etilico in un mezzo monoidrossilato o poliidrossilato o in un etere ad elevato punto di ebollizione per la durata di 2 giorni a temperature comprese nel campo da 60 ? 180?C.

La _scoperta .del.cr?moglicolato alla fine degli anni settanta,costitu? .un apporto notevolenel trattamento dell'asma come.mezzo profilattico, sebbene fosse inefficace,negli attacchi..di asma -acuta.

Il icolato agisce a livello del mastocito, evitando la liberazione degli intermediaridella reazione di ipersensibilit? immediata -(SRS^-ArI istamina e via dicendo) che_si verifica .come conseguenza dell'interazione dell'.antigene .con l'anticorpo unito al mastocito, e pertanto.? necessario che esso_sia presente nel momento in cui ha luogo l'interazione e_sia inefficace se quest'ultima ha gi? avuto luogo._

Un altro inconveniente del cromoglicola.to.i disodico consiste nel fatto che esso.non .viene ass?r.-bito nel tubo digerente, cosicch? si deve somministrarlo per inalazione con gli inconvenienti dell'inesattezza del dosaggio, intolleranza. dlfi?colt? di somministrazione,-specialmente nel caso di -bambini, e via di seguito.

Tutti questi inconvenienti hanno dato impulso ad investigazioni al fine di ricercare nuove/mo--lecole .aventi proprit?.simili a quelle del cromogli-icolato disodico,:ma che.vengano-assorbite per.viaorale,

Nella presente intenzione ?.stato sviluppa- _ to un procedimento per.l'ottenimento di composti .aventi la formula:

CH3-CH

dove _R pu? essere un gruppo^carbpssilicp,__carbammidicp, cianogeno p 5-tetrazolilico..

L'oggetto della.presente invenzione ? un procedimento per 1'ottenimento d?i sapradescritti composti, il quale ? caratterizzato,dal fatto che.. in_una prima fase si fa reagire.1.'acido_.5_-isopropil_ antranilico o il suo estere_ etilico., con quantit? equimolecolari di acido 6-clorpnicptinico .o del suo estere ^etilico in un mezzo monoidrossilicp..p poliidrossilico un etere ad elevato di ebollizione -per la durata-di due giorni a temperature che variano da 60 a 180?.

Nel caso che si usi 1'etanolo come mezzo idrossilato, si ottiene una miscela della piridochinazolina.acida e.il suo estere.etilico, e per otte- -nere la forma,acida-si-procede-a idrolizzare -il pr?-? dotto grezzo di reazione -con soda 2N controllando. accuratamente .tempi e temperature al fine di evitare la rottura del legame ammidico dell'anello e .aciduland? successivamente la massa-di reazione a pH=2, -isolando cos? -il -d oridrato della isopropilpiridochi- -nazolina. carbossilica.-che -si.-trasforma-nella-base - -libera per ricristallizzazione in-piridina.

Partendo ..dalla?forma acida-si-ottiene 1-ammide facendo,reagire il cloruro dell-?acido ottenuto mediatite ebollizione con.cloruro -di-tionile in -presenza didimetilformammide e reazione con idrossido di ammo-: nio_ alla..temperatura ambiente...L'.ammide si purifica -per_ri-Cri.stallizzazione .in.piridina-e viene -disidratato il nitrile.per.,ampia.calefazione..con .cloruro di--ionile in dimetilformammide.H el raffreddamento del- -la massa di.reazione precipita .il_nitrile il quale pu? essere ricristallizzato in.piridina.

Per l'ottenimento del..derivato.jtetrazolico-si imnie^a, azide di sodio e cloruro di ammonio in ?imetilformaci-.? ide che mediante reazione con il nitrile alla tempe- --ratura di 115?C per la durata di 20 ore e successivo raffreddamento a 0?C produce il desiderato derivato come prodotto cristallino che si sospende in acqua e.si porta a pH=2 al fine di ottenere.il d ori-. drato che.per .ricristallizzazione in.pir.idina pr?du- __ ce la base libera.

I composti ottenuti .per mezzo del procedi .j . mento che forma 1?oggetto.della presente,invenzione... e che corrispondono alla formula indicata prima, riducono, come ? stato constatato, la .risposta.allergica a.causa dellfaffrontamento con 11antigene mediante . inibizione delle reazioni antigen.e-anticorpo.nei topi.

_ I composti, che formano 1'oggetto^della _pre.- _ sente invenzione, come pure i-suoi_._sa.li__.farmaceut.ica?-mente.accettabili inibiscono 1_'anafilassi..pa_s_siya _J cutanea nei topi, cosicch? essi possono essere efficar ci nelle reazioni allergiche. e nel trattamento,profilattico dell'asma bronchiale.

E' stata studiata 1fattivit? ahtianafilattic?. impiegando il test dell1anafilassi_p_assiya cutanea.. nei topi, che ? il modello farmacologico.sperimenta-_ le pi? simile all'immediata ipersensibilit?..umana del._tLipo_^eattivo (Rosenthale)_ 1975)*

_ Il siero della .femmina del tono che contiene anticorpi reattivi.si prepara ..seguendo la

.tecnica di Mota (1064), immunizzando -femmine-di topo Sprague-Dawley del peso di 180 ? grammi? per-via in? -tramuscolare, con 1,5 grammi di albumina di ugva (Sigma grado.VI), disciolti in adiuvante incompleto di Ereund . e per via _intraperitoneale 1 mi di vaccino Bordetella _pertussis ..contenente approssimativamente 10 .jnicroor- . -ganismi/ml/ Tredici .giorni.pi?.,tardi si cava il .sangue. dei topi al fine di raccogliere il siero._ E'-stato comprovato che l'attivit? reattiva^det .siero era dovuta principalmente alla IgE., poich? riscaldando il .... siero alla temperatura di.56? per la durata di un'.ora_ esso perde la.sua_ capacit? reattiva. . _ .....

_ Si iniettano per vie sottocutanea, in..4 .punti. diversi della spalla di topi,femmina preventivamente.. . rasati, diluizioni propriate delibantisiero .prevenr .._ tlvamente titolato...48_pre_pi? tardi .si mettono .a.fronte, per via endovenosa con 1Vanticene ( 1 mg. di albumina di uova disciolta in 1 mi di soluzione salina . dj. blu di Evans allp 0,25%);

Trascorsi trenta minutigli animali..vengono sacrificati e la pelle della spalla viene..ritirata ;'mi-_ furando l? semisomma dei diametri delle,macchie blu _prodotte nei^punti di iniezioneidelibantisiero,

I composti destinati ad essere studiati vengono somministrati per via endovenosa e per via orale e ad intervalli di tempo differenti prima.dell??ffrontamento con 11antigene al fine di determinare i DI_rt e la durata dell'effetto.

I risultati vengono espressi in percentuale di.inibizione della risposta rispetto a quella che^ viene prodotta dal gruppo,degli animali-di-controllo -che non ricevono alcun trattamento:

. .% =- 1 :- c x 100 _

a = valore medio della semisomma dei diametri ottenuti per il gruppo degli animali di controllo

b = valore medio dlla semisomma dei diametri ottenuti per il gruppo degli,animali trattati..

_ Il trattamento..statistic_o._dei.dati_?_.stato!_ realizzato mediante il test di.Student..I..parametriidi_ Dlj_g e di T. Max._(tempo massimo_della_durata dellleffetto per una_inibiziqne del 50%) sono stati determina--_ ti_ secondo il metodo di.Lichtfiel .(1948).,- modificato,_ propostola Lehman (1980).

I composti somministrati_per.via..endovenosa _ a dosi da 0_,1_mg/kg dij)eso_.nella prova dell'anafilassi _ passiva^cutanea neile femmine del,topo .determinano una_ inibizione superiore all',80% Inoltre, questi .composti _ presentano il vantaggio ?li_essere_dptati.di..un.ecce lente assurbimento per via orale, a differenza_del.

cromoglicolato disodico, inefficace per guesta via

di somministrazione. Nella Tabella I sono riportati -i

risultati ottenuti per i -DI,_Q Per via orale e intra-

venosa .

TABELLA I

N

O

Inibizione dellVanafilassi.passiva -cutanea

Dosi inibitoria cinguanta -espressa in'miIligrammi .J-S

per chiIograriim?.+ intimiti.di _sicurezzaj)erJ L^5l:J _

V IA

R1 R2 Intravenosa ^ Oralfe 2 -OC3H7 -COOH 0102 - 0M3 0*13 - 0'22 -OC^Hy -S^tetrazolil? 0*006 - 0*004 0*04 - 0'05 Cromoglicolato dis?dico 0 195 : >100 ICetotiferie^ . . 0 ?3 i SM

4_ 1. Somministrazione._:_intravenosa cinque minuti..prima..

dell1affrontaroento con l1antigene?

Somministrazione jorale dieci minuti__pr.ima_dell_!-af_

irontamento? con^l-Lantigene,

3. Somministrazione per via orale 60 minuti prima del-11affrontamento con 1*antigene.

E1 stato studiato il tempo della durata dell'effetto contro l'anafilassi passiva cutanea somministrando per via intravenosa una dose di 2,5 mg/kg.di peso e per via.orale una dose di 5 mg^/kg di peso, determinando il tempo massimo,nel quale ? presente una inibizione del 50%; i risultati sono riportati nella. Tabella II.

TABELLA II

Durata dell'effetto di inibizione dell'anafilassi passiva cutanea

T (???? minuti R R

K1 2 Intravenosa Orale

-OC3H7 -COOH 36*3 2815

-OC^Hy -5-tetrazolile 49'3 66

t-Cromoglicolato dis?dico. .16M

_ T. Max (tempo massimo nel quale esiste una inibizione del 50%)

La dose somministrata per via intravelosa fu di 2,5 mg/kg di peso e per via orale fu di 5 mg/kg di peso.

Il meccanismo di azione dei composti che formano J1'oggetto della presente invenzione, pareva essere uguale a quello del cromoglicolatojin una fase. . .. prima della liberazione djll'intermediario, iiiquanto .non si ? osservato antagonismo diretto di fronte all'istamina, alla serotonina, al composto 48/80 o ialoridasi, nel modello "in vivo"ne-i topi femmina dell'aumento di.permeabilit? vascolare che queste sostanT ze autecoidi producono _(i risultati sono riportati nella Tabella III).

TABELLA ITI

Effetto su sostanze che fanno aumentare la permea-... bilit? vascolare.

Somministrazione,per via intravenosa di .una dose di 10 mg/kg di peso.

Diametro d?lla;zona in mm.

15? o

Controlli OC3H7 -COOH ?OCjHy -S-tetrazolile Diametro 14*5-0'66 15*1-0*67 13 '7-0'93 Lstamina

0 3 '5 'D. Diametro 16*9-2*05 16*6-1 *03 16*1-1 ?03 Serotonina

1 ? MI .?'?(?<0'JJ. Diametro 20f7-1'85 17*8-3*4 19*6-2*17 48/80 T. ? .14(11*0-0OD . ??I(?<0.I Diametro 16 -1*1 14*5-1 '27 ?17f5-3e2 Jaluronidasj

9*4 *01 0

La tossicit? acuta dei composti ? indicata nel-

la Tabella IV dopo la somministrazione di una.dosejunica

in topi maschi Swies del peso di 20?2 grammi di peso

v

e in topi femmina Sistar di 90? 10 grammi di peso; la

mortalit? fu osservata durante un periodo di 14 giorni

<??po la somministrazione.

TABELLA IV

Tossicit? acuta

N

O

C0NP6ST0 SPECIE; wm

l.V. i.p. orai R1 . **2_

Topi:

C3H7 -COOH maschi.. 271'4 246*3 804*9 fent?iine 408*9 1000 CjHy -,5-tetrazolil? m?schi 223 354*6 1000 f?mmine 431*9 1000

I risultati farmacologici e tossicologici ottenuti dimostrano che i compost? che formano l'oggetto della presente invenzione presentano un eccellente indice terapeutico e che il loro buon assorbimento per via orale conferisce loro la possibilit? di applicazi:.9n?..clinica in reazioni allergiche dermatologiche, gastrointestinali e polmonari specialmente come profii?1 processi importanti qual? l'asma bronchiale.

ESEMPIO-J _ _

_In_ matraccio da lOOml di capienza, mun?to di agitazione, bagno esterno di calefazione e refrigerante a riflusso, vengono introdotti 1,79 grammi di acido 5-isopropilantranilico e 1,56 grammi di acido 6-cloronicotinico in 60 mi di etanolo che contengono 1,5 mi di acido cloydrico concentrato. La miscela viene riscaldata a riflusso per 40 ore fino a secchezza e il residuo viene disciolto in 21 mi di soda 2N.

La soluzione viene riscaldata a 60?C per la durata di un'ora, lasciata raffreddare .e ' portata a pH=2 con acido cloridrico 6N. Il precipitato che si forma vtehe filtrato, essiccato e cristallizzato in piridina. Si ottiene un prodotto giallo cristallino avente un punto di fusione da 314via 316?C. le cui caratteristiche fisiche e spettroscopiche corrispon-* dono a quelle di 2-isopropil-11-oSSl-1lH-pirido(2-1-b) chinazolin-8carbossilico. .

ESEMPIO'2

2,8 grammi del prodotto ottenuto secondo l'Esempio 1 vengono sospesi in 10 mi di cloruro di tionile, si aggiungono 3 gocce di dimetilformammide come catalizzatore e la miscela viene riscaldata a _ riflusso per la durata di 3 ore. Si distilla l'eccesso di cloruro di tionile e il residuo viene sosp? so in 25 mi. di toluene secco e sirdistilla di nuovo fino ad ottenere un residuo giallo solido^sul quale . si aggiungDono con agitazione 50 mi di idrossido di ammonio. Si agita per mezz'ora a temperatura ambiente e il solido rimanente viene filtrato, lavato con ac-? qua ed essiccato. Pu? ricristallizzarsi in piridina, ottenendosi un prodotto giallo cristallino avente uripunto di fusione di 288?C le cui caratteristiche fisiche e spettroscopiche corrispondono a quelle del 2-isopropil-11-ossi-jlH-pirido (2-1-b) chinazolin-8--carbossi?riunidico.

ESEPMIQ 3'

6 grammi del .prodotto ottenuto secondo l'Esempio 2 viene sospeso in 60 mi di dimetilformammi?-de secco. Alla sospensione si'aggiungono rapidamente a gocce e con agitazione 2,75 mi di - cloruro di tronilg,e la miscela viene riscaldata a |00?C,per

la durata di 42.ore. Si raffredda a 0?C e il solido che precipita viene filtrato e ricristallizzato in piridina; Si ottiene un sostanza solida gialla cristallina avente un punto,di fusione di 207?C, le . cui caratteristiche fisiche e spettroscopiche corrispondono a quelle della 8-ciano-2-isopropil-11-ossi-11H-pirido(2-1-b)chinazolina.

ESEMPIO 4

1 grammo del prodotto ottenuto second? 1?sempio 1 viene sospeso in 50 mi di dimetilformammide anidro. Si aggiungono k,3? grammi di cloruro ammonico e 1,66 grammi di azide di '.sodio e si riscalda la miscela alla temperatura di 115?C per la durata di venti ore. Si lascia raffreddare la soluzione, si ?g- . giu)igong JiOp mi di acqua, si acidula fino a pH=2 con acido .cloridrico 5N e il.precipitato solido viene . filtrato, essiccato e ricristallizzato in piridina.

Si ottiene una sostanza solida gialla cristalo

lina avente un punto di fusione di 275 C, le cui ca- . ratteristiche fisiche e spettroscopiche corrispondono a quelle della 2-isopipil-dd-ossi-ddH-8-(1H tetrazolo-5-:il)p;irido.(2-d-b)chinazolina.

v/ : 'ESEMPIO 5 ._ .

2,7.grammi di 2-i_sopropil-d1^--ossi-11H^pirido (1-1-b)-chinazolina-8-carbossilica ottenuta,secondo . ^"Esempio 1 vengono agitati alla temperatura ambiente_ in 10 mi di acqua, mentre si aggiungono 10 mi di so-, da N. La risultante miscela viene agitata per 30 minuti fino a che la maggior parte della,sostanza,solida .si sia disciolta. La soluzione viene filtrata nel -vu?to al fine di eliminare la parte insolubile ,'e.la soluzione viene liofilizzata ottenendosi una p?lvere gialla che corrisponde al sale di sodio,della_2-isopropil-d 1-?-ossi-d1H-8-(dH-tetrazqlq-5-il).).pir_idq-^(23j:-b)

Claims

RIVENDICAZIONI

1.- Nuovo composto : 2-isopropilpirido (2-1-b)-chinazoline e loro sali non tossici, con attivit? antianafilattica,.garatterizzato dal fatto di avere la formulargenerale :

CH3-CH

dove R pu? essere carbossile, carbossiammide, cianogeno o tfitxazolile. '

2..- Procedimento per la preparazione di 2-isopropilpirido (2-1-b)chinazoline e loro sali non tossici con attivit? anafilattica, della formule geH ;.:.,? -serale

CHj-CH

dove R pu? essere carbossile, carbossiammide, cianogeno o tetrazolile, caratterizzato dal fatto che ? -i -de?ti composti si ottengono a partire da quantit? equimolecolari di acido -5^isopropilantranilico o un derivato attivo, quale l'estere etilico, e di .acido -cloronicotinico o Un derivato attivo, quale l'estere etilico.,.mediante calefazione..a -temperature compr?se .nel campo da 60a 250?C e_in presenza di .un., catalizzatore acido, quale l'acido cloridrico, 1'a- . cido p-toluensolfonico, e.simili; come.solvente potendosi utilizzare un alcole monoidrossilato o poliidrossilato o un etere ad elevato punto di eboll?- . zione, come.l'etere difenilico; dalla massa di reazione.mediante idrolisi in un mezzo-di.soda o potassa acquosa in eccesso, temperature comprese nel campo da O.-a..80?c e.tempi-compresi nel .campo da mezzo'.ra e ... tre ore e successiva aicidulazione della soluzione si isola l'acido 2-isopropil-l1-ossi-HH-pirido (2-.1,b) chinazolina-8-cabossilico.._

3.-Procedimento per la preparazione di

2-isopropilpirido (2-1-b)chinazoline e loro sali non tossici con attivit? antianafilattica, secondo la rivendicazione 2, dove R ? un gruppo carbossilico, caratterizzato dal fatto che si fa reagire la chinazolina acida ottenuta secondo la rivendicazione 2, con un agente'clorurante quale il cloruro di tionile in presenza di dimetilformammide quale catalizzatore a temperature di riflusso, furante tempi che variano da 1 e 5 ore; il cloruro di acido ottenuto mediante reazione con idrossido di ammonio in eccesso a temperatura ambiene producendo la 2-isopropil-8-carbossiammide-11-ossi-1 1H-piride(2-1-b)chinazolina.

4. Procedimento per la preparazione di 2-isopropilpirido (2-1-b)chinazoline e loro sali non tossici con attivit? antianafilattica, secondo .la rivendicazione 2, nelle quali R ? un gruppo cianogeno, caratterizzato dal fatto che sv fa reagire la carbossiammide ottenuta secondo l? rivendicazione 3 con un agente disidratante quale il cloriro di tionile, in un solvente a elevato punto di ebollizione, quale la dimetilformammide, a temperature comprese nel_campo da 80 a 160?C e in tempi compresi nel campo da 20 a 60 ore.

5.- Procedimento per la preparazione di ^ ?-isopropilpirido (2-1-b)chinazoline _e .loro sali non tossici con attivit? antianafilattica, secondo la rivendicazione 2, nelle quali R ? un gruppo tetrazolllico, caratterizzato dal fatto ch4eY>/fa reagire il_nir. trile ottenuto secondo la rivendicazione .4..'con azide di sodio e cloruro di.ammonio in un solvente ad elevato jpunto di ebollizione, quale la dim?tilformammi-: de, durante tempi,compresi nel campo.da .15 a 30.ore..

6.- Procedimento per la preparazione di _ 2-isopropilpirido (.2-1-b)chinazoline e loro sali non... tossici con attivit? antianafilattica, secondo la rivendicazione 2, cara tterizzato dal fatto che i sali di metalli?alcalini o alcalino-terrosi vengono. ottenuti mediante neutralizzazione delle forme acide ottenute secondo^le rivendicazioni da .2 a 5, con il! corrispondente alcossido d? metallo alcalino o a.l?-calinojterroso, in un solvente appropriato a.temperature comprese nel campo da 20 a 100 C e.in tempi compresi nel campo da 5 a 15 minuti; i sali di tipo acido potendosi ottenere mediante trattamento del., sale basico ottenuto, come detto prima, disciolto,in. acqua, e acidulazione della soluzione fino ad pH 1 con un acido appropriato, quale acido cloridrico^;?