IT8467103A1

IT8467103A1 - Tampone reattivo e metodo per rilevare sangue occulto.

Info

Publication number: IT8467103A1
Application number: ITTO1984A067103A
Authority: IT
Original assignee: Helena Laboratories Corp
Priority date: 1983-09-29
Filing date: 1984-02-01
Publication date: 1985-08-01
Also published as: GB8400830D0; FR2557300B1; JPH0430547B2; DE3406847C2; CA1223184A; IT1179581B; GB2147416A; US4541987A; DE3406847A1; IT8467103A0; GB2147416B; FR2557300A1; JPS6073462A

Description

DOCUMENTAZIONE

RILEGATA

DESCRIZIONE J.B.ll .?Jnvm^ion.B Dad.u.sixi-ai?--event.e_p.ex._t italo..; _ _ _ E .3.3.31_?_

_ " lampone -reattivo _e .metodo -.per\_rileva.r-e. -.sangue-occulta!.?.. _ . -

?a_nomBi. Jielana-Labor.atories -Cor-poration.,? di nazionaltt?...siatuni_

? tense.,.-con_.sede-in _1530-tindbeEgh? Dr-ivef-Beaumont-,-_Xaxas -.27-7114 ?

.?U-S.D..J _ _ , _ _ a _ -

Phi l i p AngRl n ?1 ??? AGI\iO? _ di _ nazionali! ?_s tal unitensa, _ realdenteJ-

I , Ui rinr, TP.XRP? 77RR7 (II.R

????^? tata i l ! 1 FEB. 1984 al N .

67113 ????

EU EN ROBBA RIASSUNTO (IN GLI ALTRI)

Tampone reattivo dotato di un reagente attivato rial 1 '?equa P Hi

un composto perossi di co _at t i va t o da li '_a_c_qua__c.be_subisce

zione cromoqena in una soluzione acquosa comprendente emoglobina.

.11 reagente ? quaiacolsolfonato di pota ssio, un sostituto della _

_resi.naJdi guaiacp^? Ii_cQqip.q.s.t.Q_pero?sid i.co ? un monopersolfato co- _

__sti .tuito_da_ due__m.oli _d i_.m_oaape.rs o.l.f a t o __pp.tas si co.,__u na ._mole ..di ^ _

so lf a t o acido di . ,p.o_ta.s.sit?__e_una_nipl.e _di_sol?a to-.di_poia.ss.ia.,. il _

_ tampone _,.r e a 11 i v o. .me t te. _in._e v.i.dexi z.a_ unia rea _ d i ..pxava-contenerite.? .

CO?

i ..suddett.i_.mat.ejii a li-in _fpr.ma._p.olv.?juleat a. _e._pud..xiactie includere.

tl

.control.! i _per_ y.e.ri fica r_e._L_ xi.s.ul.taii_del-?e si.._ \/i eo?_aQche_illu- _

s t r a t o._gn . rne.tod OD et. u sare. il -tempo ne_r_ea ttiy.o..

DESCRIZIONE

. ._ La.presenteinvenzione si riferisce.in.-generale .ajjn_metodo_

e apparecchiatura,per.rilevare la presenza di sangue inuma_solu-_ __

..zione acquosa. Pi? specificamente, la presente-invenzione-.si-ri-? _

'ferisce a un metodo e.apparecchiatura in cui un reagente sercn

|e un composto perossidico secco vengono_confezionaii_in_un_tarapo- .

ne reattivo per la.valutazione domest.ica__di materiale?fecale,n

orina nei servizi igieni rJ...

La scoperta precoce dei tumori gastrointestinali ? vitale

L.il -trattamento -possa -avere? successa..

_ .gastx.oin.testinale_?

ne_lllDrioa.__5pesso__quando__?l_sangue ? visihile h gi? giunto arijuno _

st ad? o. t roppo ?av.a rizat o. _ I __? Es.t_p e x_ri.v tUatrTu rruDDH i (IN PROPRIO ? PER GLI ALT la p re s enz a_di_saogue prima -che?i

ut-ili _ ma._

11 brevetto LISA n. -283B1X7-, _ rilasciato? a

nn metnrin per ri' ;nza rii _ sangue? occulte, _ invisibile.,

nelle_f.eci_e_nell'..orina..-Secondo?Eonner-,?un involucro di_materia=_

le in -foglio -contiene-un_reagente -seccato? che _si .ada tta? in ano do ?

|

;-da essere -immraex-so--nella? tazza -del -bagno-contenente? acqua _e_ feci,

.-orina o entrambi., -cambi ando-il? reagente? colore? se_nella_soluzio.- ?

-U-ne-? presente sangue.-Le -miscele?di?reagenti_sanD._scelie_dal? ,

-. gruppo comprendente-o^tolidina, -benzidina-o .o-toluidina. Lo? svan-Itaggio pi?-consistente -del -test -di- Fonner? ?-che-i -xeagentisono-agenti cangerogeni?sospetti.0-ben-conosciuti.._Un-altro?pro=

blema col test di F.onner _ ?. la. mancanza di specificit? che

- :_spesso .porta ..ad-_uD_risultato positivo ..del.test anche .se nel cam-. . .pione noo _?.-.a.fL?.at_to. presente del .sangue . ,

- - 11 .brevetto-USA n. 3996006., ..rilasciato a Pagano , illustra !

- ;un vetrino -testologico .costituito _da_un imballo di .cartone .ripiega-- ? . ? -to .provvisto- di un foglio di. carta -reattiva impregnata di .un _..

? (

- _ - (reagente -a -base_resina -di -guaiaco?ivi_compreso^ il? test .si .effettua ..

^applicando? Gampi-oni? di ? feci _su_un_lato~della_caria? reattiva- dopo

ave r? aperto -u na ? 1 -inguetta -iacee te -pa r t e de 1-vetrino testologico, -?-inviando? il vetrino? testQlogicQ-ad-un?Laboratox?Q-per?llanalls.L?

-l-f-fanalisi? di? laboratorio-si? conduce? applicando _al?lata_oppos.to.

-della -caria -reattiva -una? soluzione? perossidica-e? osservando? la _

-earta -reattiva? per? determinare se si verifica -una? reazione? eroina--t-ie e? prevaca la - dalla -presenza -di? sangue-.? t-a?necess it? _di_raa ne g gia=-EUGEf'fO ROBBA--re?materi-e-le- fecale e di ?inv-iar-e-i? campioni ad un laboratorio (?N PR?PRiO-rrar-Gn-OTT -per?l-^-analisi? successiva? rappresenta? un- -seria -svantaggi o-del? test

-dilagano .

il hrevettn USA n. 4175923 rilasciato a Frie nd, illustra un

_met odo _pex_ dei ermi na r.e_l_a__pr_e_senza_di sangue oc cu11o ne 11a tazza

.. di un gabinetto -spruzzar! do..in_pj'imo . 1uo.go_y na soluzione di svilup-PI

?p? di alcool-etilico, e. -ac.qua_Qs,aigenata__su _.un foglio di carta

_ rea 11 i va -impre gnat a ..di _re s i na..di _gu ajjjco e quind i i mme r ge ndo 1 a _

. carta - reattiva _nella? tazza . _U.ri _prob] e ma con il brevetto .di _ ; _

_ Friend ?. che ...i__pazienti_sono__ril.u.tt an_Li_abusare reagenti 1J.quidi .

_i Inoltre. la soluzione di alcool etilico e acqua ossigenata ? _

1

- caustica-e -pu? quindi -provocare? irritazioni se. viene._a contatto _

;

con_13 pelle del paziente._Anche_se i_suddetti__probiemi__si..fanno_

sentire quando si applica a un tampone .reattivo una soIndinne at

tivatrice di acqua ossigenata, Fr.iend_.rhia_ri_s.ce,che.detta-soluzio-_ne ? essenziale per un test che facaciajjsojJi_uo_reaqente_.a..base_ _

di resina di guaiaco in un ambiente di.acqua fredda.._ ..

_ Sono siati proposti vari altri_te_st_p_ex._v.erificare la presenza di sangue occulto in campioni di materiale fecale e nrina, ma_

nessuno ha conseguito i vantaggi delia presente iavenzJ.one^_se?ondo la quale si pub opportunamente saggiare un paziente per la _ _

presenza di sangue occulto nella tazza di un gabine??o_-?eQzo_lin^?

?iegare_ sostanze cancerogenfi_e_S.enza necessit? di soluzioni__attivanti. _

La presente invenzione si riferisce a un metodo-o..apparecchia

-tura per determinare la presenza di sangue -in una.soluzione -acquo-EUGENIO ROBBA

sa contenente un campione da

di un composto perossidico solido e di un sostituto solido della

.resina di.guaiac_o_fl.ptta__&ullfi_snp_er_fieie_d.eil.a_so_luziooe_e_uie-_

??? osservaLq.per.verifi.car.e.una_e.ven.tual.e reazione_c.romogena._

. Il progresso decisivo .coosegui.to_grazie_alla chimica prefer?ta della presente invenzione.?._co-s_tii.ui.to__dal.fatto__cbe._i.xeagenr.

ti sono solubili e funzionali...in ?un_amb.i.e.nte di ac.qua..fredda..senza impiego,di.una soluzione attivante..e..senza 1'uso di.sostanze

.cancerogene note... _ _ _ _ _ ._ _ ._

.11. .reagente sostituti v_o__de.l la resi ria....di ?g u a ia c o ?__di_ pre.fe-._

.renza guaiaco solfonato e _il_.composto _perossidico ?. di ..pr.eferfinra [monopersolfato di potassio. Il reagente sostitutivo della resina _ _

;di guaiaco e il composto perossidico sono entrambi idrosolubili

;e si attivano per contatto con la soluzione acquosa. La reazione

jcromogena si verificher? anche se nel campione ? presente soltanto

:una piccola quantit? di sangue. Detta reazione ? perci? assai .. . . _ isensibile. I reagenti preferiti non vengono facilmente catalizzati.. ... _ ?

da ossidanti diversi da sostanze a base_di_emoglobina.o .emina,i_Ll_ _ ._ che rende il test molto specifico.

j

_ Secondo la presente invenzione, il test per il sangue ocm l- _ _ ._ to non richiede la manipolazione di reagenti.o_soluzioni attivan-_ _ _ _ |ti. Il test si effettua completamente nella tazza del gabinetto_ _ __ e non l'impiego di campioni ad un laboratorio per un'ulteriore . . . . .

1

analisi o valutazione,,. - 1 - EUGEN IO ROBBA -; (IN PROPRIO E PER GLI ALTRI) Un altro aspetto della presente invenzione,?-la_fomitiiral_ :_ :_ _ _

I

di controlli su un tampone reattivo per verificare la precisione_

I

i

del test. Un sito positivo di confronto (controllo positivolpu?_

! ;

essere incluso sul tampone reattivo che comprenderebbe lo_stesso_ - . . reagente e lo.stesso compostg_peros.sidico usati,nella zona di .test ... _ dei.tampone reattivo., pi? una.piccola quantit? di catalizzatore

..che__dpvrebbe sempre assicurare _i_.risultati positivi .del .test. _

Se sul controllo_positivo._v.lene..segnalato-un risultato negativo,.,

il test dovrebbe essere ripetuto.con un .altro tampone reattivo, ...

p^ r.\ _in_guanto_.il.primo,tampone,reattivo-ha falsamente indicato_un...... A /

*n

.risultato,negativo.del test_quan.dD_._nel._tarapone_r.ea.ttivo erano

presenti .tutti.! componenti.validi.per-un test positivo.

Un sito negativo _di__confronto (controllo negatilo) pu?.altr.e-_

's? essere incluso nel tampone reattivo per indicare risultati_

]

|falsamente positivi e per consentire un raffronto con l'area di_

Ij

iprova se detta area di prova indica 1'assenza di sangue..Il_cg_n-_

trollo negativo dovrebbe_includere una sostanzadi aspetto simi^__

le ai contenuti dell'area di prova, come ad esempio la polvere_

secca perossidica, senza inclusione del reagente sostitutivo della resina di quaiaco. Dal momento che il reagente sostitutivo ideila resina di quaiaco non fe presente nel controllo negativo, in

nessuna circostanza doyrebbe verificarsi una reazione cromoqena.

i

Il controllo negativo consente inoltre di confrontare 1'area di

prova con il controllo negativo, in modo che, in assenza di r?azione cromatica, le due aree debbano presentare lo stesso aspetto.

|

-?L?invenzione verr?-meglio -compresa -analizzando la seguente -i EUGENIO ROBBA descrizione dettagliata con riferimento ai disegni. _ (IN PROPRIO EPERGLIALTRI) La figura 1 ? una pianta di un tampone reattivo disposto !in

un involucro sigillato con Io strato superiore dell'involucro I

:sigillato parzialmente rimosso per consentire la visione del tam-:pone reattivo. _ _ _

. .- La figura..2. ?..una pianta del tampone reattivo dotato di una

j

'area reattiva, un sito positivo di confronto e un sito negativo_ _

di confronto. _ _ _

I

La figura 3 ? una vista in sezione trasversale considerata

I

jlungo la linea 3-3 in figura 2._ _ _

La figura 4 ? un tampone reattivo avente un unico deposito

di reagente nell'area reattiva. _ _ _ _ _

_ La figura 5 ? un.tampone reattivo dotato di un'area reatti-.

va e un sito positivo di confronto.

La figura 6 ? un tampone reattivo.dotato di una molteplici-,

t? di aree reattive.intervallate, un sito positivo di.cpnfr.on.to_

? e un sito neqativo di confronto.

Riferendosi ora alla figura 1. si nota che il corredo per

i

il test 10 comprende un tampone reattivo 12 racchiuso nell'invg-1

lucro 13. L'involucro assicura una tasca ermeticamente siaillata

. . ? . ? ?

al tampone reattivo, cos? da proteqqerlo dalla contaminazione ?

dalla esposizione all'umidit? durante la spedizione e l'immaoazzij

naqqio. Il tampone reattivo 12 comprende uno strato superiore di

un materiale assorbente, di preferenza carta, e uno strato infe-!

riore 16 analoaamente ?costituito da um nateriale assorbenteOu?le "

11

carta. Tra gli strati superiore e inferiore 15 e 16 si formano!

EUGENIO ROBBA delle tasche per racchiudere una sostanza in polvere secca. (IN PROPRIO E PER GLIAITRIJ E' presente un'area reattiva 17 che comprende un materiale

reagente e un composto perossidico secco. L'area reattiva 17

ife l'area del tampone reattivo 12 che subisce una reazione cromo- .

gena quando il tampone reattivo 12 viene posto nella tazza di _

T

_gabinetto contenente acqua e materiale fecale in cui_sia presen-.te.del.sangue. .Se ? presente sangue occulto, anche in piccole_

I

!quantit?., dovrebbe verificarsi la reazione croniogena._

J_ L 'a_rea.reattiva 17 di preferenza contiene un composto peros-I

jsidico .solido,_guale monopersolfato potassico, e un reagente, di_

preferenza quaiacofsolfonato. La cornilinazione -dei__ma.teriali...vie-_

ne attivata dall'acqua nella tazza del .gabinetto .ed._?_mol.to_sensibile alla presenza di sangue nella soluzi_one_.__S_i...? scoperto,.che. .

i1 guaiacpisolfonato e il_monoperso1fato potassico sono altamente

specifici e nella,maggior parte..dei.casi non forni.scono fase indicazionipositive quando nella soluzione ? assente_il..sangue.*..

11 tampone reattivo 12 galleggia sulla_SJUp.erfirie della

tazza del gabinetto, grazie alla carta leggera e ai selezinhati

adesivi del tampone reattivo, cosi da facilitare.ltanalisi_del?sL

i

prova. Il tampone reattivo 12 ? di preferenza biodegradabile per

permettere l'eliminazione del tampone reattivo.12 per .semplice.!_

azionamento dello sciacquone dopo aver compJetaio.JLl_iest?_ ;

j

_ Si preferisce che lo strato superiore 1?Ljde1__tamp.one_j.e.aJLtl-_

i

,vo includa una pigmentazione-blu-verde per-garantire -un iauon eani

trasto col composto di colore rosso-arianciato formatosi quando_

il laiacolsolfonato e il monopersolfato potassico ve ogonoLca t? -EUGENIO ROBBA lizzati dal sangue. ['PROPRIO- E d>?R~Stl ALTRI)-_ Gli strati superiore e interiore-15.e_16._del_tampone_reatti-_ _ _ _ _ vo 12 sono di preferenza_un.iti_iosieme__mediaQte._un_ade.siv.o._Q_un__ _ _ _ procedimento di sigilla.tur_a_a__c.aldo.,_?efficac.e._per_mantener.e_sul. . . . _ posto i reagenti sul tampone ?reattivo. .12. _ _ _ _ . .. _ _ Si p.u? anche inserire.jjn -controllo ..positivo_18._sul tampone _ _ _ _ reattivo.12_per.indicare quando.J.l_pisulta.t.o_del.test_?_f.alsamen-_ _ __ fe_negativo?.1.1__controllo..positiyo_18 comprende_.il.composto_peros-_

sidico solido e il reagente nonch? una piccola quantit? di un _ __

catalizzatore. ad esempio emoglobina, che in ogni caso far? si

che il controllo positivo 18 subisca la.reazione cromogena dando

un compostu.colorato in rosso araneiato se il reagente e il comjjerossidico sono presenti e funzionano nel modo previsto.

La guantit? di catalizzatore nel controllo positivo 18 doyrebbe

essere limitata in modo che tutto il catalizzatore sia consumato

?dal reagente nel controllo 18 e non possa migrare all'area reat-I

!tiva 17. Se il controllo positivo 1B non subisce la reazione cro-; ' t

! i

moqena i risultati del test doyrebbero essere scartati, dal momento

che nel controlloJJOSitivo sono presenti tutti i componenti per

un risultato posi.tivo del test.

Il controllo positivo 18 comprende anche un esempio per conreazio

- f

-ne -cromQQena EUG EiCI O RO BEJA j (IN PROPRIO E PER GLI ALTRI) ? Pu? essere anche presente un controllo negativo 19 che nori

dovrebbe subii la reazione Il controllo negativo

doyrebbe contenere una sostanza di aspetto simile alla sostanza

contenuta.ne11.'are.a._reattiv_a__l_7?..La._sostanza .nel_controllonegat_i_-_.

vo.l.?..pu? essere ilcomposto_pergssidic_q_.sglidq senza alcuno dei

materi.ali reagenti,solidi. Il composto perossidico._npn__doyrebbe

subire_la_reazione cromogena a meno che il tampone reattivo sia

i

contaminato, fabbricatp_in...maniera..incongrua,._o_ch_e_.nella.taz?a t?W co.

del.gabinetto sia presente una sostanza interferente.

_11.contro11o negativo_19_p.u?__e.ssere _anche usato come punto .?/_

_di riferirnento per l'area reattiva 17 quando in detta area reat-

'?rx*'

.tiya 17.non.si verifica.alcuna reazione cromogena^iieil-control^-lo negativo19 e l'area,reattiva 17 hanno.lo stesso .aspettodopo?

ila realizzazione del set il .paziente pud .supporre ragionevolmen^-j

Ite che il.test fosse negativa.. . . . ..

J .Come indicata.nelle figure -1^2 e .il tampone.negativo -pu? -comprendere-controlli-positivi .e..negativi.J.8.e?1.9 -oltre alItareai

reattiva 17- -In via -alternativa-,? come? iliustrato-in -figura .4, _il ?

tampone? reattivo pu? includere? sol-tanto? ltarea? reattiva-! 7-.? Qvve--ro,?come raffigurato-in-figura?5-,?il?tampone-reattivo-pu?-inelu--dere -Itarea-r-eattiva -17--e il-controllo-positivo.-18? Secondo-unae-ltra?alternativa,-indicata-in?figura?6-,?si-pu??fomire-pi?-di;-unaa rea re at-t i v a -17- su -un? ta impone -12- -per- co nsen tire la ve r i f i ca -di

un? test? eon -un -unico -tampone 12-. ? I? eont-rGl-l-i? positiv i-e -oegativie-4-9? sono? al t-res?-pr?sent i - a -titolo -di? ddnfronto? se&ondo? quanfo-I EUGENIO ROBBA desc ritto? in -precedenza . jCINl PROPRIO E PER GLI ALTRI) -Un-esempio-di?una?eombinazione?di?reagente?e?composto-peros---sidico?solido -pu? essere?costitu?to-da-parti uguali di guaiaG-ol--solfonato-potassico-{PG5 -un-sost-ituto della-resina di-guaiacoconosciuto anche come acido?1?-idrossi?2?metossibenzen-4(o ?5}?sol-? -:I

? rtonicof_e il monopersolfato?di?potassio?(-MPS)venduto?da11a-Du-Pont

?con il marchio registrato-^-Gxone"-e-costituito dadue -moli--?di monopersolfato di potassio?;?una-mele-di-solfato acido di--pot-as- -T-gio e ?una ?mole- di solfato -di -potassio i ? In -reiezione -alia? pure z-za -' ? resistenza del PCS , il -campo~di? mi-sceie-aceet-tebi-le-pu?-varia - ?

? ; re da 1/3 PGS e 2/3 Oxone a ?2/3 -PGS e i/3 Oxone. -5ia -il? composte - -lo

perossidico che il reagente sono noti prodotti chimici industriali,_ _ _ _ __

_ Usati insieme in un tampone reattivo, il compostoj)erossidic11 E il reaqente preferito assicurano sensibilit? e specificit?

non realizzate nei prodotti della tecnica precedente._Il PGS ha

formula chimica C^H^KO^S___o, nel complesso dipotassico in acqua.

la formula C_H_K_0_S.H_0 con la se struttura:

H C ??

\-0CH_ ^ ^"s-OChL

sojL

EUGENIO ROBBA

X_H_KQ_S _ ..?7H6K205S, J^O.. ? tlN PROPRIO E PER GLI ALTRI) l i 0

Un vantaggio importante del PG5 fe la sua rapida solubilit?

_ in ^-acqua entro un'ampia -gamma- di -temperature^. Un altro vantaggio ?

? che il PGS non fe sospettato di essere un agente cancerogeno. Il

I PG5 ? un cromoqeno che fornisce un colore rosso aranciato quando

? esposto a un? opportuna sostanza ossidante . Il PGS ? sicuro nel-1'impiego ed elimina la necessit? per il paziente di adoperare_

soluzioni_caustichedi perossidi alcoliCJL, come pretendono i_test

secondo.la.tecnica..precedenteL._ __ _

11 mopop.e rsolfato preferito (NP5) ha f g.rmula chimica ' _

2KHSD .KHSO .K 50 , in cui il componente.principale corrisponde

5 ? 2 4

alla struttura

?

??

Il

0

L1Oxone solubile in acqua e libera attivamente ossigeno,

L 'Dxone ? un sale triplo che si ? dimostrato superiore nei risultati alla combinazione dei suoi tre sali componenti. L'Oxone non

? sensibile a tracce di impurezze rnetalliche come la maggior pari

te dei composti perossidici e, laddove la presenza di ioni cobalto, nichelio, rame e manganese catalizza la decomposizione dell'O-xone con evoluzione di ossigeno, tale catalisi non interferisce

|

con il test per il sangue occulto nei livelli di norma riscontrati

nella tazza di un gabinetto._ :

Specificit? _ EUGENIO ROBBA pN-PRQPRIO' ? n-R GL1 ALTRI)" _La miscela^di_polv-ere -di -EGS e MPS ^in -un -tampone -reat-tivoi

mostra inoltre una specificit? superiore nel rilevare la presenza

?

di sangue in una soluzione. La miscela proposta dalla presente

invenzione ha meno probabilit? di portare a test falsamente pobitivi, in quanto non viene influenzata da ioni metallici e altri

contaminanti comunemente presenti nella tazza d_i_ungabinetto.

Il diagramma che segue rappresenta un'analisi della presente invenzione, contrassegnata MP5/PG5, a fronte di carta impregnata di

resina di guaiaco attivata con una soluzione alcolica di acqua

ossigenata. Il sistema usato, costituito da carta impregnata di

resina di guaiaco e acqua ossigenata alcolica, viene normalmente

venduto dai Helena Laboratories col marchio registrato ColoScreen.

Nel test il sistema MP5/PG5 e il corredo ColoScreen furono esposti a varie soluzioni comprendenti le sostanze elencate nellJPJ...

?colorina di sinistra._I resultati deLIa_prova sono riepilogati.

? nella tabella I. j

Campione ColoScreen MPS/PGS

Acqua

Perossidasi di rafano +++

r-+3

Fe - - -r 2

Fe

Orina

CuCl U D ?

CaCl

Cu(OH)

-2 - EUG E-MG-RGBBA (IN PROPRIO L PER GLI ALTR non ..in soluzione-} -

?+++?? i

Pb(C?H

?3?-2^2

Na HDC1 +++

(5.25S)

Detersivo

Na.2..C0^..

TABELLARI

J_Leggenda:_ JNe3sun_c.amb.iame.n.t.D _di..cjolore

._C?a m bi.arn e n t.o. di . ? al o re .

vi h f Cambiamento di colore iato

Cambiamento di colore intenso

-M-++ Cambiamento di colore molto intenso

+-M-+ Massimo cambiamento di colore

Sensibilit?

_ La miscela di polvere di PGS e MPS nel .tampone reattivo __

presenta una eccellente sensibilit? alla.presenza di san.gue_pqc.uln_

to in quantit? piccolissime. Si fe accertato che la sensibilit?

viene relativamente non influenzata dai contaminanti normalmeoifL

presenti nella tazza di un gabinetto.

La sensibilit? all1emoqlobina del sistemaJ1PS/PG_S__yenne_

sperimentata in soluzioni aventi differenti concentra zi pjii_di

Fe50 . Lo scopo del test consisteva nel determinare l'effetto Idei

4 !

FeSO sulla reazione cromogena catal.i.zzata dall'emog1ob.ina. I_!L?-sultati -del -te s_t ^sg no -r-iepil ogati -nella -tabella I I , UGEWJO ROBBA ;iN PROPRIO E PER GLI ALTRI)

Concentrazione di

emoglobina. _Acigua_ 1 2 mg ? A mg ?

emogl. emogl.

Concentrazione di

esn;-

600 mg %

-3

(1,5 x_10 moli.!?)

AGO mg ?

(1,? x 10 moli ?? )

200 mg lo"

(3,1 x 10 moli ?)

100 mg ?

(2,1? x 10 moli'?)

0 mg

1A

TABELLA II

Leggenda: Lievi tracce

J racce _ _ _

Lieve cambiamento di colore

Cambiamento di colore

11 test indica dunque che la sensibilit? non viene inficiata dalla presenza in soluzione di composti del ferro. A concentra-I

i

zioni estreme, comprese tra A00 e 600 mg per cento",'quando;fe osservabile un precipitato di ferro, nell'acqua circostante il tampone pu? verificarsi un cambiamento cromatico, ma comunque non:nel

sito di reazione. Detta reazione si registra dopo due minuti e:non

dovrebbe essere confusa con un test positivo. Tuttavia, il tesi

? sensibile a piccolissime concentrazioni di emoglobina (1 mq K) indipendentemente-dalla^quantit?-di?ferro-nel-campione. ?EUGENIO BOB BA QN PROPRIO E PER GU ALTRI) ?Qu-esto aspetto ? importante in quanto spesso il ferro ? prejj

sente nell'acqua della tazza dei gabinetti di vecchi edifici olpu?

!

essere presente nelle feci o nell'orina di un paziente. Si ? accer- _ tato che ilj?istema MPG/PGS non subisce cambiamenti cromatici _ approssimativamente sino alla presenza in soluzione di 1 X 10 -l

M. di Fe+Z o ilx 102 H. di Fe+^,

Quando nel tampone reattivo della presente invenzione sono

associati il monopersolfato (MPS) e_il guaiacolsolfonato di potassio (PGS), la sensibilit? dei prodotti chimici al sangue in una

soluzione ? equivalente a quella della combinazione proposta da_

Friend nel suo brevetto^. 4175923 che richiede 1/impiego di.una._

soluzione alcolica fortemente caustica di acqua ossigenata._

_ La sensibilit? del sistema MPSZPGS._ye_nne valutata_in_.soluzioni contenenti solfaio di ferro e quantit? _yariabili_di....e.fnoglobina. Si accert? che la sensibilit? non veniva alterata._ L_

_ L [invenzione ? stata descritta in relazione a una_rqal.i.zZB-...

zione specifica, ma vi sono ovviamente molte alternative, modifiche e variazioni che risulteranno evidenti agli esperti nel ramo

alla luce della descrizione precedente. Di conseguenza si intende

che l'invenzione abbracci tutte le dette alternative, modifirh

it

e variazioni che cadono nella portata delle rivendicazioni all?gate.

EUGENIO ROBBA

Rivendicazioni: v? * 1

1. Composizione reattiva in forma solida per la rilevazione

-in-una soluzione-.aequosa.?earat-t-eri-zzata-da1?fatio checomprende un agente ossidante idrosolubile e un sostituto dellfc

!

1resina di guaiaco idrosolubile in modo che il sangue nella soluzione acquosa determini la riduzione catalitica dell'agente oss I \ -!

dante con sussequente produzione di un donatq_re__ossidato che de-.

termina una reazione cromoqena.

_ 2. Composizione reattiva secondo la rivendicazione 1, caratterizzata dal fatto che detto agente ossidante_idroso!ubiJe__? un... monopersolfato e detto sostituto idrosolubile della resina di._gua.-iaco ? guaiacolsqlfonato._ __ _

_ 3._Cpmposizione.reattiva secondo la rivendicazione 2, car.et-? I

terizzata dal fatto che il monupersolfato e_...cqstitui.Lo.?da.due_mo_

? di mpnopersolfato potassico , .una .mole., di ..solfato -acido ..di p?-. -l.tassio e. ung mole di. solfat.o.. .di_p.ot.ass io. . . .

_ 4. Composizione secondo, .la ..rivendicazione 1 ,_caratterizzata

dal. fatto che Ingente .ps.sidanJt.e e il. sostituto ..della. .resina di .

guaiacp _sono ..miscelati su un _sub.stra.to .e .immersi _nella .soluzione

acquosa . _ _ _ . . .

_la_ri_vendicaz?Dne_L,__carat-.

terizzata dal fatto che 1 1agente ossidante je_J.l _sp.atiiui.o_deila.

resina di guaiaco sono depositati come miscela in polvere nella

soluzione acquosa.

_6....C.omposizi.one_r.e.at.tiva_secondo_la-.ri.vendicaz?Dne 2, car.a.t^. i.e.r.iz^;a_ta_ijal?fai:?P_ch.e_jLl_jr).QQoper_so.l?a?p_e_il_jguaiacQlsoi_Co.naio_

. . . . , . . . . . . EUGENIO ROBBA sono-fiu s.c.e lat.i__su. .un_-Sub.S-tr.a.to_e__rmmarsi_Deila_soiuziQne acquosa^, ? p?R G1-r?rr i,--.-carat t-.-Jter.iz za ta dal fatto che il monopersoi-fato e il guaiacols-Pifpn ajp .

spno__dep.os.LLa ti__cc.mEPni.sc.ela in .polv.exe__nella__SQluzion?__a c qu osa

_ R. Corredo reattivo per rilevare_lle_sistenza:_di_sangue_in

.una soluzione, acquosa., _cara.ti.er.izzato_.da] _ f.at.to._c]ie._compr.ende :_ ...

un .primo _e_un__seCDndQ_straio_Xissat.i_insi.e.me.._per .costituire

... _ i_un ..tampone ; _

!

_ ? _ un sostituto _idrosoluhiie_solido__della_nesina_di_guaiac.o _

I

^ confinato in una _zona reaitiva?fQrmata-Jiza detti^pri/iio .e .secondo ?

i

_ _ .j strato; .e _ ? - - - - - - -_ _ | _ una_sosian za__per ossidic a_s ol id a_id ros olnb ile. mi s ce lai a _co ? _

_ ;detto_sostituto_deila_cesina_dj _ guaiaco in. detto .punto, reattivo,

i 17

in modo che l?eventuale sangue nella _sq.lu_zione acquos.a catalizzi.

|la riduzione della sostanza perossidica con successiva ossidazione

I

Idel sostituto della resina di guaiaco che determina la costituzio-I

I ;

!ne di una reazione cromogena. . _ _ :. .

i

!

; 9. Corredo reattivo secondo la rivendicazione ?, caratteriz-,_

i . " . ' . ' . :

zato dal fatto che ? presente un controllo positivo tra_dett_i_^_

primo e secondo strato in un punto intervallato dal punto reattivo, includendo detto controllo positivo il sostituto solido idrosolubile della resina di guaiaco e la sostanza perossidica sol!ida

idrosolubile, e una sostanza catalitica per ossidare il sosti?Jtuto

i della resina di guaiaco in presenza della sostanza perossidica

EUGENIO ROBBA

prima del contattq.con la soluzione acquosa. j C|N PROPRIO E PER GLI ALTR

10. Corredo reattivo secondo la rivendicazione_94 caratterizzata-dal?f-at-to-Ghe-fe-presente-un-Controls negat-i-vo-tr-a-detti-primo e secondo strato_ in una posizione intervallata dal punto del

controllo positivo e dal punto reattivo, comprendendo detto contxoL!l.Q_o.e.ga.t?.VP,,una sostanza solida non ada11ata per subire uria

j.reazione croniogena e di aspetto simile all'area reattiva quando _

_j_detto.tampone viene_posto in.un_8_soluzione.acquosa non contenen-_

te.sangue. __ _ , _..._ :_

.11..Corredo reattivo_s.econda_la._x.ivendicazione 8, caratterizzato dal .fatto che detto sostituto idrosolubile solido della re-_sina di guaiaco .? guaiaco1solf_Qna.tg._di.potassio,_ ;

12.-Corredo reattivo secondo la rivendicazione 8, caratteriz-_zato_dal.Tatto che detta sostanza.perossidica.solida idrosoiuhile..

fe un monapersolfato.

_ 13. Corredo reattivo secondo la rivendicazione 12, caratteriz-_

zato dal fatto che detto rnonopersolfato ? un composto costituito _

da due moli di rnonopersolfato potassico,_una mole di solfato aci-1

do di potassio e una mole di solfato di potassio._ _ _

14. Corredo reattivo secondo la rivendicazione 8, caratt?riz-:zato dal fatto che detto strato inferiore del tampone reattivo

?

!

:comprende una pigmentazione che contrasta col colore della reazione cromogena. i

15. Corredo reattivo secondo la rivendicazione 8, caratterizzato dal fatto che detto tampone reattivo ? sigillato in un involucro per la spedizione e l'immagazzinaggio.

16. Metodo per determinare la presenza di sangue in una I

_soluzione acquosa, caratterizzato dal_fattj3jdie_compreode.?le,fi?s?

seguenti: j EUGENIO ROBBA pN PROPRIO C f*CR GLI ALTRI) rimuovere un tampone reattivo dotato di un sostituto solido

della resina di guaiaco, attivato dall'acqua, e di una sostanza

perossidica solida, attivata dall'acqua, ivi disposti da un involucro sigillato;

collocare detto tampone reattivo nella tazza di un gabinetto

contenente acqua e materiale fecale; e

osservare il tampone reattivo per determinare se si verifica

una reazione cromogena.

17. Metodo secondo la rivendicazione 16, caratterizzato dal

fatto che detto tampone reattivo ? posto sulla superficie di det

ta acqua e ivi lasciato galleggiare._

1B. Metodo secondo ia rivendicazione 16,..caratterizzato-dal

fatto che detto tampone reattivo ? costituito da un primo p?un .sgcondo foglio di carta assorbente avente detto sostituto irimanicibile della resina di quaiaco e detta.SQgtanza^perossidica-J-dr-oso^-iubile miscelati in un'area reattiva formataJtr.a detti primo P .

i

condo strato di carta,_ !

19. Metodo secondo la rivendicazione 16, caratteri7?atn dii

fatto che detto tampone reattivo ? immerso in acqua ed pgtratt-r_

_ 2D. Metodo secondo la rivendicazione 16T caratteri77atn dii

fatto che comprende inoltre la fase costituita dall?elimina7inriP

do detto tampone reattivo biodeoradabile.

(? /N'"EtI?sW M>BB AALTRI)

??

/ Traduzione

UTILIT?' REGOLARE

flo.Prow . 537213

Data di deposito: 29.9.1983 - Classe 424 -i

I

Unit? di gruppo tecnico: 125

T

Richiedente: Philip A. GUADAGNO, Vidor, Tx. omissis

Indirizzo: Cullen, Sloman, Cantor, Grauer, Scott & t

5

Rutherford

3200 Penobscot Bldg.

Detroit, MI 48226-4282

+Titolo: Tampone reattivo e metodo per rivelare sang-u?e occulto

Si dichiara che la copia allegata ? una copia r

conforme dai registri dell'Ufficio Brevetti e Marchi t degli Stati Uniti della domanda come originariamente 1

depositata e qui identificata.

Per autorizzazione del Commissario per i Brevetti e Marchi

4 f.to funzionario addetto alle autentiche ! - I i Data 16 Novembre 1983 ?

| i - . *

?+ i f 4 .!_ La presente_invenzione_si.ri.ferisce..in generale .a.uri._rne.todo. .e apparecchiatura per rilevare la_presenza di sangue in..una.soiu-Jzione acquosa. Pi? specificamente, la presente invenzione,si.ri-^ferisce a un.metodo e apparecchiatura in cui un reagente_secco: .e un composto .perossidico secco.vengono..confezionati,in.un..Lampo?ne reattivo perJ a..valutazioqe...domestica_di materiale ferale orina..De1_servizi_i_grem cj.

L a _ scope r ta _p.r.e.cQce_de.i.-tunooxjL? .gastrointestinali-? v/i tal e i

!perch?.J.I trattamento possa avere sunressn. ?ln segno di tumore _jgast.r.ointe.s.tinale??_Ja-prcsenza.di_sanguE nel-materiale fecale;o_ jnell'orina. Spesso quando ? sangue e uisihile k gi? giunto ari1unn !

i ! .istadio troppo..avanzato.. I test per rivelare in detti campioni I .presenza..di-sangue._prima_che_quesi_i_sia_manifesto

1?1??7?,

i .fLonnex-, -illustra un metodo ra Hi sangue nonnitn,_inuisihi1p7 ..Lnel ie . :.f_e c i -e -ne 11 1 n rina._Se co nd ? -Ennner , un_ involucro di-ma te ria--! i : i .;le-in foglio?contiene-un?reagente-seccato?ohe_si.adatta_in modo-?da essere-immmersa.-nell-a-tazza-del-bagno-contenente -acqua-e?feb-L, ? orina-o-entrambi,-cambiand?-il-reagente?colora _se_nella._snluzib? -ne-? presente sangue--te-miscele?di?reagenti-sono-scelte dal- ? -gruppo comprendente -a-toLidina,--benz.idina_o o--toluidina..Lo . svan--taggio -pi? consistente -del-test-di-Fonner -? -che? i -reagenti-usati rsono -agenti cangerogeni -sospett i -o -ben? conosciuti., . -Un? altro-prubiema col .test, di Fennec _ A Ja mancanza di specif icit? che . ispesso, porta ~ad_jjn_risul.tato_posl.ti va. del tesi-anche se nel cam-.ipione non ? _af_f atto.. presente del sangue .

r

i _ . Il .hrsvetto--U.SA n. 3996006., rilasciato a Pagano, illustra . i

?4-un .uetri.no .testologico costituito da? un . imbai lo di cartone .ripiega-Jto .provvisto di un faglia~di carta -reattiva impregnata di . un .. . - xeagente_a -base? resina-di_gua iaco- i vi-compreso- il_iest .si. .effettua

I applicando-caropioni? di? feci? su-un_la.to_ della -carta -reattiva -dopo _..

I

1 ente-parte del?vatrino? testologici)-,. ? e? invia rido? 1 ?? labora torio _pain_ 1 lanalisi-. U__iana li-si? di? laboratorio-si? conduce-applicando-al-lato-oppostoi _ -carta rea 11 i v a una? soluzione? peross id ica-e -osservando? lai -carta -reatti-va? par? determinare -se-si_ veri f ica . una reazione. .-cromabie8? preveeata? dalia-presenza? di? sangue-.- La? necessit?? di ?maneggia i^-campioni? ad? un -laboratorio

per l 'ena-J un-serio -svantaggi o-del t si

-di- Pagano-;

T I hr-ovett r> USA n. 4175923 rilasciato a Friend, illustra un _ metndn per determinare la presenza di sangue occu Ito ne 11a tazza _ _ di un gabinettn.spr.uzzando in primo luogo una soluzione di svilup-?.p? di.alcool? etilico? e--ac.qua_..o.s.sijg.eQata_su.jjn_ fogli o di carta ._ ...reattiva impre gnata_ di _r.e.sina . di guaiaco e quind i immerge n do_J.a . carta reattiva nella_tazza. Un_pr_Q_bIema con il brevetto di _

-i r-iend ? ohe i pazienti sono riluttanti a usare reagenti liquidi. ; Inoltre, la snlii7innR rii alcool etilico e acqua ossigenata ? -f-Gau sti ca-e ~pu?_quindi -pr? v a ca re-irri tazimi-Se _ v i e ? e_a?c on t a .tio_ ! 3 ! con_la pelle del paziente. Anche se i suddetti;.problemi.si._f_anno_ sentire quando si applica a un tampone reattiva una soluzione ,attivatrice di acqua ossigenata. Friend,chiarisce..che-detta.soluzioni^..?_?s.sfn^?3ls_per_un test che__facci.a_uso_di.un_re.agente.a..base di resina dijguaiaco in un ambiente.di ac.qua.fredda..

5p_no_stati proposti vari altri test.per.__v:erif.irare la presenza di sangue occulto in campioni di ma i-fecale..e._urina-,ma nessuno ha conseguito i vantaggi indo la e si pu? opportunamente saggiare un paziente per la presenza di sangue occulto nella tazza di un gabinetto spn7a impiegare sostanze cancerogene e senza necessit? di ; _ai.tivanti.

_ La presente invenzione si riferi.sce_.ajjQ_metodoe .appaiiecnhiat tura per determinare la presenza di sangue in una soluzione ar.gtinsa contenente un

di un composto perossidico solido e di un sostituto solido della resina di guaiaco flotta sulla_s.upe.rfi-Ci.e_della.._saluzione_e-vie-. ne psservat_o_p.er_v_e.r_if.ic.a.re_uria_.e.ven.t.uale.reazione.cromogena._ ...._..I1 prpgressp_dec.isiv.q..conseguito_grazie..alla chimica_pref.er.i-.. _ta della_pr_e_sen_te_.invenzione..?_c.os.ti.tuito.-.da1 fatt.o_ciie..i..reagen-;.. ti..sono solubili e funzion.a.1i?in_u.n_ambifin.t.e..-di..acjqua_??ejdda_se.n-. za .impiego di_una soluzione_att.iv0ote_e_j5enzaJ.?uso._di__sostanze. ,cancerpgene..no_te_._ __ __ - _ __I1.reagente._so.stitu.tiv.o della,resina di guaiaco_?..di..prete-. renza guaiaco soffogato ..e .il..composi.o..perossidico_?.di_prefer_enra jmonopersolfato di potassio. Il reagente sostitutive della resina

e il composto perossidico sono entrambi idrosolubili ;e si attivano per contatto con la soluzione acquosa. La reazione eromogena si verificher? anche se nel campione ? presente soltanto una piccola quantit? di sangue. Detta reazione ? perci? assai .sensibile. I reagenti preferitajTgn_vengono facilmente catalizzati, (da ossidanti diversi da sostanze a base di emoglobinaJJ emina, il_

{che rende il test molto specifico.

Secondo la presente invenzione, il .test_per_il_sangue_QccuI-jto non richiede la manipolazione di reagenti.0?s.o.iuzinni attiwan-|ti. Il test si effettua completamente nella,tazza_del..gabinettoe non l'impiego di campioni ad un laboratorio per un'ulteriore

analisi o valutazione.

Un altro -aspetto,della presente.invenzione..? -la fornitura:

di controlli su un tampone reattivo per verificare la precisione

del test. Un sito positivo di confronto (controllo positivolpn?essere incluso sul tampone reattivo che comprendexebbe lo stesso_ reagente e lo stesso composto perossidico usati nella_zona__di_test _ jde.l tampone reattivo, pi? una.piccola quantit? di.catalizzatore. .. . _cde_dqv.rebbe sempre_assir_uxate_.i..risulta.ti_positivi_del test.._ .. _ Se.sul..controllo.positivo viene .segnalato....un.risultato negativo.,^ _ _ il__tgst.dovrebbe essere_ripetu.to con.un ailtro tampone reattivo,_ _ in quanto il.primo,tamp.one__r.eatti.vo_.ba falsamente..indica.to .un_ _ i_su1Lato_negatiy.o_d.e1...test_quan.do.jnel_tampone_r.eatti.vo_ex.ano_ presenti lutti.i.componenti_validi_per.un test positivo.?

5

_ Un sito negativo di confronto (controllo negativo) pu? altre-I I

I

js? essere incluso nel tampone reattivo per indicare risultati..

I

!falsamente positivi e per consentire un raffronto con l'area di.

prova se detta area di prova indica l'assenza^di__sanpue..Il__cg_n-

trulla negativo dovrebbe includere una sostanza di aspetto simi-

---. . le ai contenuti dell'area di prova, come ad esempio la polvere

secca perossidica, senza inclusione del reaqente sostitutivo del-

1

la resina di quaiaco.Dal momento che il reaqente sostitutivo'del-

i

la resina di quaiaco non ? presente nel controllo neqativo. in

l

!

nessuna circostanza dovrebbe verificarsi una reazione cromoqena.

i

Il controllo neqativo consente inoltre di confrontare l'area di

prova con il controllo ne-qat_ivo,.in modo che, in assenza di re?aj

zione cromatica, le due aree debbano presentare lo stesso aspetto.

i

-- LIIi?nvenzi?one-verr?-meglio-compresa analizzando la-seauent1e - - -

descrizione dettagliata con riferimento ai diseqni. i

i

!

La figura 1 ? una pianta di un tampone reattivo disposto [in

1

un involucro sigillato con lo strato superiore dell'involucro '

1sigillato parzialmente rimosso per consentire la visione del tam-

jpone reattivo. _ _ _

La figura 2 ? una pianta del tampone reattivo dotato di una

'area reattiva, un sito positivo di confronto e un sito negativo

di confronto.

t

! _ La_figura 3 una vista in sezione trasversale considerata

i

g iungo la linea 3-3 in f igura 2. _

j La figura k ? un tampone reattivo avente un unico deposito

!I

6

di reagente nell'area reattiva.

_ La figura 5 ? un tampone reattivo dotato di un_'_area.reattiva eun sito positivo di_cqnfronto. _ _ _ La figura 6 ? un tampone_reatt.ivo dotato di una molteplicit? di aree reattive intervallate, un sito positivo di confronto _ e un sito negativo di confronto._ L_

Riferendosi ora alla figura 1, si nota che il c_orredo per; il test 10 comprende un tampone reattivo 12 racchiuso nell'involucro 13. L'involucro assicura una tasca ermeticamente sigiliat1a al tampone reattivo, cos? da proteggerlo dalla contaminazione ? dalla esposizione all'umidit? durante la spedizione e 1'immaqazzii nagqio. Il tampone reattivo 12 comprende uno strato superiore di un materiale assorbente, di preferenza carta, e uno strato infe-Tiore 16 -costituito da un-materiale assorbente quale carta. Tra gli strati superiore e inferiore 15 e 16 si formano delle tasche per racchiudere una sostanza in polvere secca.

E1 presente un'area reattiva 17 che comprende un materiale !reagente un composto perossidico secco. L?area reattiva 17 _ !fe l?area del tampone reattivo 12 che subisce una reazione cromo-Iqena quando il tampone reattivo 12 viene posto nella tazza di igabinetto contenente acqua e materiale fecale in cui sia presen-Ij

! te de 1 sangu e. Se ? 43 resente sangue occulto, anche in piccol e iquantit?. doyrebbe verificarsi la reazione cromogena. _

L'area reattiva 17 di preferenza contiene un composto perossidico solido_,_guale monopersolfato potassico, e un reagente, di

7

preferenza guaiacolisolfonato. La combinazione dei.materiali.__vie-. ne attirata dall'acqua nella tazza del gabinetto ed._?_mol?a_sensi- _ bile alla presenza di sangue nella soluzione. Si ? scoperto che .. il guaiacolsolfonato e il monopersolfato potassico sono altamente _ specifici e nella_maggior parie dei casi non forniscono fase_io-.

dicazioni.positive quando nella soluzione ? assente il sangue._

Il tampone reattivo 12 galleggia sulla superficie della_ .

Stazza del gabinetto, grazie alla carta leggera e ai selezionati

* adesivi del tampone reattivo, cos? da facilitar.e..l_'.analisi della. prova. Il tampone reattivo 12 ? di preferenza biodegradahile per permettere 1'eliminazione del tampone reattivo 12 per semplice azionamento dello sciacquone dopo aver comp?e_tatp_il_._te.s.t.._ ;

Si preferisce che lo strato superiore 15 del tampone reattivo includa una pigmentazione-blu^-verde-per-garantire un-buon cantfasto col composto di colore rosso-arianciatn formatosi qnandn

il guaiacolsolfonato e il monopersolfato potassico vengono catalizzati dal sangue.

Clip trati superior.e._e__iafexi_or.e_ _1.6_del _tampone..reatii--.--VQ--12_sgap_dij3refe.renz.a_uni_y._jla5?.eroe_me.diaote.un.adesivo..?..un . _ ..... _ procedi mento _d.i__sigilla.tuxa_.aJdaijdOL,?p f.ficace per _mantenere_sul _ _ . _pgsto _i _r e age n ti _su 1..tampone _r e a t.ti vo..12. _ _ _ _

_ Sipub.anche,inserire_un_con.txpllo_positiv.Oji8..sul_lampo.ne_ reattivo 12per.indiea.r.e__.qusn.do_J.l?risul.tat.0-del._test_?_falsamen-_ te_ne.gativp._11__contr.ollo__p.ositiv_o J.8._.comprende_il._cofnposLopero?-_ sidico solido e il reagente nonch?jjna piccola quantit? di un _

8 catalizzatore, ad esempio emoglobina, che in ogni caso far? s? che il controlio_positivo 18 subisca la reazigne cromoqena dando un composto colorato in rosso aranciato se il reagente e il composto perossidico sono presenti e funzionano nel modo previsto._ La quantit? di_ catalizzatore nel controllo positivo 18 doyrebbe essere limitata in modo che tutto il catalizzatore sia consumato dal reagente nel controllo 18 e non possa migrare all'area reattiva 17. Se il controllo positivo 18 non subisce la reazione eromoqena i risultati del test dovrebbero essere scartati, dal momento che nel controllo positivo sono presenti tutti i componenti per un risultato del test

Il controllo positivo 1B comprende anche un esempio per confronto con 1'area reattiva se l'area reattiva subisce una reazione oromogena.

Pu? essere anche un controllo negativo 19 che noli dovrebbe subire la reazione cromogena. Il controllo negativo 19 dovrebbe contenere una sostanza di aspetto simile alla sostanza c.o.ntenuta nell'.area reattiva 17. La sostanza_.ne1 controlloneqativo 1.9..pu?..essere il.composto perossidico solido senza alcuno_dei materi3li Leagenti solidi. Il composto perossidico non doyrebbe _ ^subire la.,reazione cromogena a meno che il tampone reattivo sia_ . c.o n t ami n a t.o , _ _ f a b.b ri c a to _i n maniera incongruaj__o che nella tazza .del .gabinetto . si a _p re sente una sostanza interferente,

_ 11_c.on.trolio,negativo .19 pub essere anche usato come punto_ _di__riferimento per l?area reattiva 17 quando in detta area reat

9

itiya 17 non si veri fica .alcuna .reazione .cromogena Se .il control^.

.lo negativo 19...e 1' area.reattiva .17. hanno lo stesso .aspetto -dopo .-. . .

. Ila realizzazione del set risaziente pu? .supporre ragionevolmen- .

.Lte che il .test fosse negativo.- . . .. ... . . -_ - .

.Come . indicato nelle figure -L, 2 -e._3-, -il tampone negativo pu? .. _ - (comprendere .controlli-positivi -e -negativi -18 .e 19 olire all ' area -i

i

- reattiva - 17. - In via-alte rna t iva-,? come -i 1 lustra to -in? figu ra -4 il -I

- - tampone? reattiva -^?? -include re --sol-tarvta--l-tar-ea -reattiva - 17 _ Ouve- - - - -J

- r-Q,? come? raffigurato? in -figura -5-,-H?tampone -reattiva-pu?-inclu-? -I

i

t

- dere-l-fa rea -reattiva -17? e? i-1? controllo -positi vo? 18.?Secondo -una - -1

- al-tra-al ternati va -indicata -in? figura -6-,? si pu?-fornire-pi? di ? una -! !

- lare a? re attiva -17- au -un? tampone 12 -per-conse n tire -la -ve rifi ca -di - -- un? testr-eon-un -unico? tampone -12-. ? I? oont-ro 14 i? positivi -e-negatijvi -!

- ? ---gg ~e -19? sono? ai-t-resi? presenti - -a -titolo? di confronto? secondo? guanto ? ? - ? - ? j

- deseri-tto in-pr-eeedenz-a ? - ; - J- - - - - - - -- ??-e gempi o ? di ? uno combina zione ? di ? reage n te? e? -compos to ? pe ms ? - ? -i

- s ih i co so li do pu ? -es s e re? eoa ti-tui-to ?da pa rti -ugua li- di- gua iacol- - - -? - t-solfonat?- potassico ~(PG5~)~y~ttn a o sti-tu t-o -della? resina -di -guaiaoo - - ? ?

"conosciuto anche come acido- l-idrossi? 2? met-essibenzen-4(o ? -5-)-tSol- - - - ? - -- - ? - fonico, ? e ?il'? monopersolf ato? di ? potassle?OlPSl -venduto-dalla-Ou-font - - - ? ? - -~Co xon- il- marchio? registrato?JLexorteu? e? costituito -da-due -moli--? -" di monopersolfato di potassio^? urta-mole-di-sol fato acido di? potas - - . ? ? ~ l_S?io -e_ona? mo?e di^solfato'-di?- potassio; ? In? reiezione? alla? purezza -"o- re siste nz a ~de1 PG5, ' il -campo?di?miscelo? acce tt ebi l-e-pu? -va ria-! re da 1/3 PGS'e 2/3 Gxone-a- 2/3-?65-??./3 Gxone.- Sia ^.l-oomposto

perossidico che il reagente sono noti prodotti chimici industriali.

_ Usati insieme in un tampone reattivo, il composto perossidico_e_il reagente preteri_tq a.ssicurano sensibilit? e specificit? non realizzate nei prodotti della tecnica precedente. Il PGS ha_ formula chimica C^H^KO^S_ o, nel complesso dipotassico in acqua. la formula C^H^K^O^S.H^0 con la seguente struttura:

UH"

-0CH? ^ ????3

?K-..JC-iLKlLS_ X7H6X205S,._.H20.

/ / 3

Uh vantaggio importante del PGS fe la sua rapida solubilit? _in -acqua _ent raduniamola gamma -di -temperature. -Un -altro ?/antagg io [ fe che il PGS non ? sospettato di essere un agente cancerogeno.?Il 1 PGS fe un croniogeno che fornisce un colore rosso aranciato quando fe esposto a un'opportuna sostanza ossidante. 11 PG5 ? sicuro nelimpiego ed elimina la necessiti per il paziente di_a_dop.erare so_luzioni caustiche_di__perossidi alcolici. come pretendono i test secpndo la tecnica precedente.

Il monopersolfato preferito (MP5) ha formula chimica ZKHSO^.KH5P ,K^SO^, in cui il componente principale corrisponde alla struttura:

11

__ __ _ 0_ __

II

_ -li-_ ___

II

_ _ __ 0_

L 'Oxone ? solubile inacqua e libera attivamente ossigeno. L?Qxone ? unjale triplo__c_he_si ? dimostrato superiore nei risultati alla combinazione dei suoi tre sali componenti. L'Oxone non_ ? sensibile a tracce di impurezze metalliche come la maggior parte dei composti perossidici e, laddove la presenza di ioni cobalto, nichelio, rame e manganese catalizza la decomposizione dell'O-xone con evoluzione di ossigeno, tale catalisi non interferisce con il test per il sangue occulto nei livelli di norma riscontrati nella tazza di un gabinetto._

Specificit? _ __ ____ _

_ La_miscela -di-polvere-di_PC5 e-MP-5 in -un -tampone -reattivo:-mostra inoltre una specificit? superiore nel rilevare la presenza di sangue in una soluzione. La miscela proposta dalla presente invenzione ha meno probabilit? di portare a test falsamente positivi, in quanto_non_viene influenzata da ioni metallici e aItri_ contaminanti comunemente presenti nella tazza di un gabinetto._ Il diagramma che segue rappresenta un?analisi della presente in-_ venzione^ contrassegnata MPS/PG5, a fronte di carta impregnata di resina di guaiaco at.tivata_con una soluzione alcolica di acqua_ ossigenata. Il sistema usato, costituito da carta impregnata di resina di guaiaco e acqua ossigenata alcolica, viene normalmente venduto dai Helena Laboratories col marchio registrato ColoScreen.

12

f

Nel test il sistema MPS/PGS e il corredo ColoScreen furono esoo-I ' ~ ~ ? ? . "

sti a varie soluzioni comprendenti le sostanze elencate nella;_

i

|colonna di sinistra. I risultati della_prqva sono riepilogati

nella tabella I.

Campione ColoScreen MPS/PGS

Acqua - -Perossidasi di rafano +++

rre+3

rre+2

Orina

CuCl ++++

CaCl^

Cu(OH)^

(non.in soluzione).. ? - -...- ? -Cu(C H 0 ) ++++

2 3 22

Pb(C H 0 ) ? ++

Z 322

Na H0C1 +++

(5.25%)

Detersivo - ?

Na CO^

2 3

_ J1&BELLA_I.

ILeggenda;

i i_colorje

i!

Cambiamento di colore pronunciaio_.

13

_ ++ _ _ Cambiamento di colore_intenso

|_ +++ Cambiamento di colore molto intenso

!?

j_ ??iiii Massimo cambiamento di colore

|Sensibilit?

I_ La^miscela di polvere di.PGS e MPS_nel tampone,reattivo j_

presenta una eccellente sensibilit? alla presenza di sangue,oc.cul-| to in quantit? piccolissime.5i ? accertato che la sensibilit?_

viene relativamente non influenzata dai contaminanti normalmente

presenti nella tazza di un gabinetto.

La sensibilit? all'emoglobina del sistema MPS/PGS venne !.

sperimentata in soluzioni aventi differenti concentrazioni di;

FeSO^.Lo scopo del test consisteva nel determinare 1_'effettojdel

FeSQ^ sulla reazione cromogena catalizzata dall?emoglobina? Iiri?

sultati ^del -test-sono riepilogati -nella -tabella l i. - I ! -

Concentrazione di I

1 emoqlobina Acqua 1 ma % 2 mg % 4 mg % i

\ emogl. emogl. j Concentrazione di

FeStT

4

600 mg

-M-

11_,5 x 10 moli %)

]

t400 mg % ^ 1 1+

_ -1

1

!(?^?? ?' "molT )

i

_ J

1200 mg %

I

i(5,1 x IO-4 moli S)

? - - -100 mg % ^ -

t2p5 x 1X1 ? moXTX?)

|

0 mgj 4*

14

TABELLA II

Leggenda _Lievi_tracce

Tracce

Lieve cambiamento di colore

Cambiamento di colore

_ Il test indica dunque che la sensibilit? non viene inficiata dalla presenza in soluzione di composti del ferro. A concentrazioni estreme, comprese tra 400 e 600 mg per cento^quando-? osservabile un precipitato di ferro, nell'acqua circostante il tami pone pu? verificarsi un cambiamento cromatico, ma comunque non^nel r sito di reazione. Detta reazione si registra dopo due minuti e'non i i dovrebbe essere confusa _con_un test positivo. Tuttavia, il test ? sensibile a piccolissime concentrazioni di emoglobina (1 mq ?) ! I

;indipendeotemente dalla_quantit?_di_?erro-nel-campione._ L Questo aspetto ? importante in quanto spesso il ferro ? pr?sente nell'acqua della tazza dei gabinetti di vecchi edifici o'pu? , j essere presente nelle feci o nell?orina di un paziente. Si ? accertato che il sistema MPG/PGS non subisce cambiamenti cromatici -2 approssimativamente sino alla presenza in soluzione di 1 X 1G M. di Fe+2 o 4 x 102 M. di Fe+^. 1

Quando nel tampone reattivo della presente invenzione sono associati il monopersolfato (MPS) e il quaiacolsolfonato di potassio (PGS), la sensibilit? dei prodotti chimici al sangue in una soluzione ? equivalente a quella della combinazione proposta da Friend nel suo brevetto n. 4175923 che richiede 1_|_impiego d_i_una

15

soluzione alcolica fortemente caustica di acqua. J3S s igena La _ La sensibilit? del sistema MPS/PGS venne v/alutata_io_so?,?.?-. zioni contenenti solfato di ferro e quantit? variabili di emoq'lnbina. Si accert? che la sensibilit? non veniva alterata._

_ L'invenzione fe stata descritta in relazione a una realizzpzione specifica. ma vi sono ovviamente molte alternative,modifiche e variazioni che risulteranno evidenti aoli esperti nel rano alla luce della descrizione precedente.Di conseouenza si inteide . che l'invenzione abbracci tutte le dette alternative

e variazioni che cadono nella portata delle rivendicazioni allegate.

Rivendicazioni:

1. Composizione reattiva in forma solida per la rilevazione

-di -sangue ^in -una -so luziene-acquosai-ea ratte rizzata -dal -fatto -pfre -comprende un agente ossidante idrosolubile e sostituto i resina di quaiaco idrosolubile in modo che il sangue nella soluj zione acquosa determini la riduzione catalitica dell'agente ossidante con susseguente produzione di un donatore ossidato che determini^una reazione croniogena._

_ 2. Composizione reattiva secondo la rivendicazione 1, caratterizzata dal fatto che detto agente ossidante idrosolubile fe un mqnofjersolfato_e_detto sostituto idrosolubilejjplla resina_.di__guar iaco fe quaiacolsolfonato._ __ :_

_ 3.Compusizione reattiva secondo la rivendicazione 2j..car.atterizzaia dal fattoche il monopersolfato fe costituito da due mo-16

li d.i monoper.solfatg.pc.tassico.,__una_mo1e .di_so.lfato_acido._di_pp-_L.tas.sio e una mole di solfato di potassio._ _ :_ j

J_ 4,_Composiz_ione_?ep.ondQ..la.riveadicazione_1, caratterizzata |

i

J.dal fatto che l'agente.ossidante e_._il.__sosti.tuto_.della_.resiria.di_ 1guaiaco sono miscelati su un_s.ubstr.ato .e .immersi_nella._soluziope acquosa.

5. Compqsizion_e.r.e.a-t.tiva...seco.nd.o_la._riiiendicaziDne_l-,__caxatterizzata dal fatto che l'agente ossidante e il sostituto della resina di guaiaco sono depositati come miscela in_qolvere,neIla soluzione acquosa.

6._C.omposizi.OQe_re.attiva__secondo._Ia^ri\/.endicazione._2,_raratterizzata dal fatto che il monoperso.l.fato._e.__il_guaiac_o.lso.llo.naio_ sono miscelati su un substrato e immersi nella soluzione acquosa.

-7.-Composi-7ione reattiva-seronrin-1-a-ri-venri i-??? ~2z;r^ar^L?-.

^nlsolfonalo ) depositati come miscela in polvere nella osa. IL Corredo reattivo per--rilevare__lle-sistenza: di sangue in;

. jjj n a... so 1 u z i o ne _a c.q u o.s a, _.caral te rizza to .dal. fa Ito. che..compre n d e : : _ j _ un qrimo..e. .un_secondQ?S.trata._fissa.ti_insiefne_. per...costituire _ _cn _t a mp one4 _ ; _ i _ un_sosiiiutD__idrQS.Q.lubile_solida_della_r.e.sina_di_guaiacD _ _ j confinalo_J.n._una _zona__c?.attiv.a_?Qmata._?ra_de.tli__primo e .secondu. .istrato:__e.

_una sostanza parnssidica solirta irirnsnluhi1e miscelata

_jjelto_-sos.titu?o_delIa_rea?Da__di_guaiacQ-J.n_det?-Q._punto_r?attivoi

17

iin modo che l'eventuale sangue nella soluzione.acguosa.catalizzi_ i

,la riduzione della sostanza perossidica con successiva ossidazione J deljsostituto della resina di guaiaco che determina la costitrizioj

! ! .!j.Qe _di una. rea.zione cr.oniogena. !; _? ;. 9. Corredo reattivo secondo la rivendicazione 8, caratterizi

zato dal fatto che ? presente un controllo positivo tra detti ._ primo e secondo strato in un punto intervallato dal punto rea Tttivo, includendo detto controllo positivo il sostituto solido idrosolubile della resina di auaiaco e la sostanza perossidica solida idrosolubile, e una sostanza catalitica per ossidare il sostituto della resina di guaiaco in presenza della sostanza perossidica prima del contatto con la soluzione acquosa.

10. Corredo reattivo secondo la rivendicazione 9, caratteriz--zato dal-faito-che-?-presenteun controlIo-negaiivo^tna-detti-^rimo e secondo strato in una posizione intervallata dal punto del controllo positivo e dal punto reattivo, comprendendo detto controllo negativo una sostanza solida non adattata per subire uria _!..reazione croniogena e di aspetto simile all'area reattiva quando detto tampone viene posto_in_una_soluzione acquosa non contenen-_iie sangue.

_ 11._Corxe.do__r.eatiivo secondo la rivendicazione.8, caratteriz-Lzato-dal.latto che.detto sosti.tutoidrosolubile.solido della re-_ I

.i.sina.di?guaiaco ? guaiaco1sol.f_o_nato.di_po.ta.ssio _

_ _ 12. Corredo reati i vo secondo la rivendieaz ione _8 ,_ca ra tter i z -_ !_zato _dal_Jatto che detta...sostanza _p e.r_os si dica solida idrosolubile .

I 18

? un monopersolfato.

13. Corredo reattivo secondo la rivendicazione 12, caratterizzato dai fatto che detto monopersolfato ? un composto costituito da due_rnol_i_di monopersoliato potassico, una mole di solfato ?cido di potassio e una mole di solfato di potassio._ _ _ _ 14. Corredo reattivo secondo la rivendicazione 8, caratteriz-! zato dal fatto che detto strato inferiore del tampone reattivo

1 \ comprende una pigmentazione che contrasta col colore della reazione cromogena.

13. Corredo reattivo secondo la rivendicazione 8, caratterizzato dal fatto che detto tampone reattivo ? sigillato in un involucro per la spedizione e l'immagazzinaggio.

16. Metodo per determinare la presenza di sangue in una i soluzione acquosa, caratterizzato dal_fatto che_c_omprende_le_fiasi ! seguenti:_ _ _ j

i - rimuo:-vere un tampone reattivo dotato di un sostituto solij-do della resina di guaiaco, attivato dall'acqua, e di una sostanza

?: perossidica solida, attivata dall'acqua, ivi disposti da un invoi lucro sigillato;

collocare detto tampone reattivo nella tazza di un gabinetto contenente acqua e materiale fecale; e

osservare il tampone reattivo per determinare se si verifica una reazione cromogena.

17. Metodo secondo la rivendicazione 16, caratterizzato dal fatto che detto tampone reattivo ? posto sulla superficie di det-19

ta acqua e ivi lasciato galleggiare.

_ 18. Metodo secondo,.la.rivendicazione 16, raralterizzato Hei_

fatto che detto tampone reattivo fe costituito _da_un-.prima p un'secondo foglio di carta assorbente avente detio sostituto idrosnjui

bile della resina di quaiaco_e detta sostanza?_per.ossidira irirosoj

1

lubile miscelai i in un' area reattiva formata Jtr a _d e.t?i_p??mo_e_Ue

condo strato di carta.

19. Metodo secondo la rivendicazione 16, carattpri7?al-n dii

fatto che detto tampone reattivo fe immerso in acqua eri estratto.

_ 20. Metodo secondo la rivendicazione 16, caratterizzato rigl

fatto che comprende inoltre la fase fis 7 ? nnp

del tampone reattivo mediante azionamento dello sciacquone, RSSen

do detto tampone reattivo biodearadabile.

/

20

DICHIARAZIONE COMBINATA E PROCURA IN DOMANDA ORIGINALE PHILIP ANGELO GUADAGNO

un cittadino degli Stati Uniti d'America,domiciliato a

1 Ccncord Road,-Vidor,Texas 77662

dichiara che:

Io ritengo di essere l'originale,primo ed unico inventore 'invenzione intitolata

TjlAMPONE REATTIVO E METODO PER RILEVARE SANGUE OCCULTO descritta e rivendicata nell'allegata descrizione,che_io pemprendo il contenuto dell'allegata descrizione, che io non sono a conoscenza e non ritengo che la stessa fosse nota od usata negli Stati Uniti d'America prima della mia invenzione, 0 brevettata o descritta in qualsiasi pubblicazione in.qualsiasi paese prima della mia invenzione o pi? di un anno prima di questa demanda,che la stessa non era in uso pubblico o in vendita liegli Stati Uniti d'America pi? di un anno prima di questa demanda, che l'invenzione non ? stata brevettata o fatta oggetto di un certificato d'inventore rilasciato.prima della data di questa domanda in qualsiasi paese fuori degli Stati Uniti d'America su una demanda depositata da me o dai miei rappresentanti legali o cessionari pi? di dodici mesi prima di questa demanda, che io riconosco mio dovere divulgare informazioni di cui sono a conoscenza che siano pertinenti all'esame di questa demanda, e che nessuna domanda di brevetto o certificato d'inventore su questa demanda ? stata depositata in alcun paese |fuori degli.Stati Uniti.d1America,prima.di questa demanda da Ime o dai miei rappresentanti legali o cessionari tranne quanto I

|segue:^nessuno . ? -- - ? Io qui nomino CHARLES R. RUTHERFORD-,-No.Reg. 18,933,.mio procuratore con facolt? di proseguire questa domanda e di --? fare tutte le pratiche presso 1'Ufficio Brevetti e Marchi ac essa inerenti. Pregasi indirizzare tutta la corrispondenza e le telefonate a:

CULLEN,SLOMAN,-CANTOR,.GRADER, SOOTT & RUTHERFORD,P.C.

3200 Pencbscot Building,Detroit,Michigan 48226-4282 .(313) 964-0400

Claims

Dichiaro inoltre che tutte le dichiarazioni qui fatte per quanto ? a mia conoscenza sono vere e che tutte le dichiarazioni fatte dietro Informazione e convinzione sono ritenute vere, ed Inoltre che queste dichiarazioni sono state fatte sapendo che dichiara-! . . ? zioni false volontarie e slmili sono pimibili con ?L'ammenda o la reclusione, o entrambe, ai sensi del??art. 1001 del Titolo 18 del Codice degli Stati Uniti e che tali dichiarazioni false volontarie possono pregiudicare la validit? della domanda o di qualsiasi brevetto su di essa rilasciato. __

- ^.-Firma dell ' inventore - , . .. . . .. . ... ? ???

. PHILIP ANGELO GUADAGNO' ~ ^ - - - - - ' ? j Data 21.9.1983 .

Indirizzo postale cane sopra ...

PER TRADUZIONE CONFORME

k 1 FEB. 1984 ^EUGmiK BBA

(IN PROPR^l E1 LI ALTRI)