ITCS20080020A1 - Metodo e kit per la determinazione della concentrazione di perossidi in un liquido organico - Google Patents

Metodo e kit per la determinazione della concentrazione di perossidi in un liquido organico

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ITCS20080020A1
ITCS20080020A1 IT000020A ITCS20080020A ITCS20080020A1 IT CS20080020 A1 ITCS20080020 A1 IT CS20080020A1 IT 000020 A IT000020 A IT 000020A IT CS20080020 A ITCS20080020 A IT CS20080020A IT CS20080020 A1 ITCS20080020 A1 IT CS20080020A1
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IT
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organic liquid
peroxides
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IT000020A
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Giancarlo Garofalo
Settimio Leonetti
Franco Marchese
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Garofalo Alessandro
Giancarlo Garofalo
Settimio Leonetti
Franco Marchese
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    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/52Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements

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Description

Metodo e Kit per la determinazione della concentrazione di perossidi in un liquido organico
Campo della tecnica dell’invenzione.
La presente invenzione riguarda un metodo ed un kit per determinazione della concentrazione di perossidi in un liquido organico, quale per esempio il sangue, la saliva, l’urina ecc. Il kit à ̈ semplice da usare con l’attrezzatura di un normale laboratorio di analisi.
Stato dell’arte
Il perossido di idrogeno (idroperossido) interviene in molte reazioni metaboliche ossigeno dipendendenti e funge da chiave di regolazione per una serie di processi ossidativi e stati connessi.
Il funzionamento avviene attraverso NF-Kappa B e altri fattori.
I percorsi mediati dai perossidi sono stati collegati ad asma, artrite infiammatoria, arteriosclerosi, vasculopatia diabetica, osteoporosi, un certo numero di malattie neuro degenerative e la sindrome di Down.
La determinazione dei perossidi à ̈ anche d’aiuto nella valutazione dei rischi di retinopatia diabetica e di qualche malattia infettiva cronica come l’epatite C, alti valori di perossidi sono stati riscontrati anche nel siero di donne che assumono contraccettivi orali.
La misurazione dei perossidi può concorrere a determinare il modo in cui lo stress ossidativo contribuisce a modulare svariate vie intracellulari.
Alcuni autori avendo verificato, in recenti studi, che i radicali liberi giocano un ruolo importante negli stati infiammatori nelle malattie post - ischemiche dell’apparato digerente, nelle alterazioni del sistema nervoso centrale risultante da disfunzioni vascolari e traumatiche,arteriosclerosi e complicazioni cardiache, malattie renali, artriti deformanti e reumatoidi, malattie provocate dall’alcohol, propongono di misurare le concentrazioni di radicali liberi.
In particolare US-B-6355489 propone di misurare i radicali liberi, purtroppo però i radicali liberi sono instabili e tendono a sottrarre elettroni ad altre molecole per trovare stabilità, la loro esistenza ha vita breve , dell’ordine di pochi secondi. Di conseguenza, la loro misura à ̈ difficile se non impossibile.
Pertanto, il metodo proposto in US-B-6355489 mira a misurare i radicali liberio che sono altamente variabili in tempi molto ristretti.
La presente invenzione si propone lo scopo di superare gli svantaggi e le difficoltà presenti nei metodi proposti dallo stato dell’arte.
Sommario della presente invenzione
La presente invenzione si propone, invece, di misurare la concentrazione di perossidi contenuti in un liquido organico attraverso il riferimento ad una soluzione standard costituita da una soluzione acquosa avente una concentrazione di perossidi pari a 8,9 mgr di H2O2/dl
Lo scopo principale della presente invenzione à ̈ conseguito per mezzo di un metodo per la determinazione della concentrazione di perossidi in un liquido organico caratterizzato dal fatto che si prepara una soluzione di lavoro mescolando una soluzione tampone avente pH 4,5 e un cromogeno indiluito, che si prepara una soluzione campione formata da un campione di liquido organico sciolto nella soluzione di lavoro in un rapporto volumetrico definito tra liquido organico e soluzione di lavoro, che viene utilizzata una soluzione standard formata da acqua ossigenata H2O2in acqua distillata, che viene determinata la densità ottica della soluzione campione e della soluzione standard, che la concentrazione di perossidi nel campione di liquido organico à ̈ data dal prodotto della concentrazione di perossidi contenuti nella soluzione standard per il rapporto tra la densità ottica della soluzione campione e di quella della soluzione standard.
Altra caratteristica à ̈ data dal fatto che la soluzione tampone à ̈ costituita da 136 gr di acetato di sodio e 60 ml di acido acetico in 1.000 ml di acqua distillata.
Altra caratteristica à ̈ data dal fatto che la soluzione di lavoro à ̈ costituita da 1 parte di cromogeno e da 1000 a 6000 parti di soluzione tampone.
Altra caratteristica à ̈ data dal fatto che la soluzione campione à ̈ costituita da liquido organico sciolto nella soluzione di lavoro nel rapporto di 20µl di liquido organico in 1000 µl di soluzione di lavoro e che la soluzione standard, formata da acqua ossigenata H2O2 ,in acqua distillata ha una concentrazione di perossidi pari a 8,9 mgr di H2O2/dl.
Altro obbiettivo principale dell’invenzione à ̈ di fornire un Kit per la esecuzione del metodo per la determinazione della concentrazione di perossidi in un liquido organico caratterizzato dal fatto che esso da à ̈ formato da tre reagenti, un reagente A formato dal cromogeno di sintesi indiluito N-N Dietil 1,4 phenilendiamina; da un reagente B formato da una soluzione tampone costituita da 136 gr di acetato di sodio e 60 ml di acido acetico in 1.000 ml di acqua distillata e da un reagente C formato da H2O2, idroperossido, in acqua distillata avente una concentrazione di perossidi pari a 8,9 mgr di H2O2/dl.
Altre caratteristiche e vantaggi dell'invenzione appariranno chiari dalla descrizione di un modo di realizzazione dell’invenzione, qui appresso, dati a titolo d'esempio non limitativo.
Modo preferito di realizzazione dell’invenzione
Un cromogeno di sintesi indiluito N-N Dietil 1,4 phenilendiamina mescolato con una soluzione tampone per formare una soluzione di lavoro.
Il cromogeno à ̈ costituito da N-N Dietil 1,4 phenilendiamina di sintesi indiluito.
La soluzione tampone à ̈ costituita da 136 gr di acetato di sodio e 60 ml di acido acetico in acqua fino a 1.000 ml, la soluzione tampone ha un pH di circa 4,5.
Per realizzare la soluzione di lavoro occorrono 1 parte di cromogeno e da 1000 a 6000 parti di soluzione tampone.
Viene preparata la soluzione standard di H2O2alla concentrazione di 8,9 mgr di H2O2/dl e la soluzione con il campione costituita da 20µl di campione in 1000 µl di soluzione di lavoro.
Viene misurata la densità ottica della soluzione standard e la densità ottica della soluzione con il campione. E, poiché si conosce la concentrazione di perossidi contenuta nella soluzione standard pari a 8,9 mgr di H2O2/dl, la concentrazione dei perossidi contenuti nella soluzione campione sarà pari a
C<(perossidi in campione)>= C<(perossidi in sol.standard)>x D<(dens.ottica sol.campione)/>D<(dens.ottica sol.standard)>
Il Kit per la determinazione della concentrazione di perossido in un liquido organico à ̈ costituito da tre reagenti:
Reagente A cromogeno di sintesi indiluito N-N Dietil 1,4 phenilendiamina;
Reagente B: 136 gr di acetato di sodio e 60 ml di acido acetico in 1.000 ml di acqua distillata;
Reagente C: H2O2(idroperossido o acqua ossigenata) in acqua distillata alla concentrazione di 8,9 mg di H2O2/dl.
Il vantaggio del metodo e del Kit secondo la presente invenzione à ̈ di utilizzare un reagente di sintesi indiluito così come viene prodotto, di mescolarne una parte con 1000-6000 parti di una soluzione tampone, reagente B, facilmente preparabile e di ottenere una soluzione di lavoro e, quindi, mescolando 20µl di campione in 1000 µl di soluzione di lavoro, di ottenere la soluzione con il campione. Il passo finale à ̈ di misurare la densità ottica della soluzione standard, reagente C, e della soluzione con il campione, ottenendo la concentrazione di perossidi nel campione di liquido organico sapendo che le due densità ottiche sono proporzionali alle rispettive concentrazioni di perossidi.
Il presente metodo à ̈ preciso e consente di determinare in modo semplice la concentrazione di perossidi in qualsiasi liquido organico, non ci sono misurazioni o pesate complicate da eseguire.
Il trovato, bene inteso, non si limita alla rappresentazione data dal modo di realizzazione illustrato ma può ricevere perfezionamenti e modifiche dall'uomo del mestiere senza uscire peraltro dal quadro del brevetto.
La presente invenzione consente numerosi vantaggi e di superare difficoltà che non potevano essere vinte con i prodotti attualmente in commercio.

Claims (5)

  1. Rivendicazioni: 1. Metodo per la determinazione della concentrazione di perossidi in un liquido organico caratterizzato dal fatto che si prepara una soluzione di lavoro mescolando una soluzione tampone avente pH 4,5 e un cromogeno indiluito, che si prepara una soluzione campione formata da un campione di liquido organico sciolto nella soluzione di lavoro in un rapporto volumetrico definito tra liquido organico e soluzione di lavoro, che viene utilizzata una soluzione standard formata da acqua ossigenata H2O2in acqua distillata, che viene determinata la densità ottica della soluzione campione e della soluzione standard, che la concentrazione di perossidi nel campione di liquido organico à ̈ data dal prodotto della concentrazione di perossidi contenuti nella soluzione standard per il rapporto tra la densità ottica della soluzione campione e di quella della soluzione standard.
  2. 2. Metodo per la determinazione della concentrazione di perossidi in un liquido organico secondo la rivendicazione 1 la caratterizzato dal fatto che la soluzione tampone à ̈ costituita da 136 gr di acetato di sodio e 60 ml di acido acetico in 1.000 ml di acqua distillata.
  3. 3. Metodo per la determinazione della concentrazione di perossidi in un liquido organico secondo la rivendicazione 2 la caratterizzato dal fatto che la soluzione di lavoro à ̈ costituita da 1 parte di cromogeno e da 1000 a 6000 parti di soluzione tampone.
  4. 4. Metodo per la determinazione della concentrazione di perossidi in un liquido organico secondo la rivendicazione 3 la caratterizzato dal fatto che la soluzione campione à ̈ costituita da liquido organico sciolto nella soluzione di lavoro nel rapporto di 20µl di liquido organico in 1000 µl di soluzione di lavoro e che la soluzione standard, formata da acqua ossigenata H2O2 ,in acqua distillata ha una concentrazione di perossidi pari a 8,9 mg di H2O2/dl.
  5. 5. Kit per la esecuzione del metodo per la determinazione della concentrazione di perossidi in un liquido organico secondo le rivendicazioni 1, 2, 3 o 4 caratterizzato dal fatto che esso da à ̈ formato da tre reagenti, un reagente A formato dal cromogeno di sintesi indiluito N-N Dietil 1,4 phenilendiamina; da un reagente B formato da una soluzione tampone costituita da 136 gr di acetato di sodio e 60 ml di acido acetico in 1.000 ml di acqua distillata e da un reagente C formato da H2O2, idroperossido, in acqua distillata avente una concentrazione di perossidi pari a 8,9 mg di H2O2/dl.
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