ITMI20121406A1 - Procedimento per la produzione di tiacumicina b - Google Patents
Procedimento per la produzione di tiacumicina b Download PDFInfo
- Publication number
- ITMI20121406A1 ITMI20121406A1 IT001406A ITMI20121406A ITMI20121406A1 IT MI20121406 A1 ITMI20121406 A1 IT MI20121406A1 IT 001406 A IT001406 A IT 001406A IT MI20121406 A ITMI20121406 A IT MI20121406A IT MI20121406 A1 ITMI20121406 A1 IT MI20121406A1
- Authority
- IT
- Italy
- Prior art keywords
- process according
- emulsifier
- production
- tiacumicin
- fermentation
- Prior art date
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 21
- ZVGNESXIJDCBKN-UUEYKCAUSA-N fidaxomicin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)O[C@H]([C@H]([C@H]1O)OC)OCC\1=C/C=C/C[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H]([C@H](/C(C)=C/C(/C)=C/C[C@H](OC/1=O)[C@@H](C)O)O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](OC(=O)C(C)C)C(C)(C)O1)O)CC)C(=O)C1=C(O)C(Cl)=C(O)C(Cl)=C1CC ZVGNESXIJDCBKN-UUEYKCAUSA-N 0.000 claims description 26
- 229960000628 fidaxomicin Drugs 0.000 claims description 26
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 24
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 24
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 claims description 19
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 claims description 12
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 claims description 12
- 241001404671 Dactylosporangium aurantiacum subsp. hamdenensis Species 0.000 claims description 11
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 claims description 9
- 239000013530 defoamer Substances 0.000 claims description 9
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 claims description 8
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 5
- 241001495431 Dactylosporangium aurantiacum Species 0.000 claims description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 4
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 claims description 3
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 claims description 3
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 claims description 3
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 2
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 claims description 2
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 claims description 2
- 240000007817 Olea europaea Species 0.000 claims description 2
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 claims description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 claims description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 19
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 12
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 7
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 7
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 7
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 7
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 7
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 7
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 7
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 7
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 7
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 7
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 6
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 6
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 6
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 6
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 6
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 6
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 4
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 229930187202 Tiacumicin Natural products 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 3
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 3
- 241000183229 Actinoplanes deccanensis Species 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000193163 Clostridioides difficile Species 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001112696 Clostridia Species 0.000 description 1
- 206010022678 Intestinal infections Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- 241000364057 Peoria Species 0.000 description 1
- ZVGNESXIJDCBKN-WUIGKKEISA-N R-Tiacumicin B Natural products O([C@@H]1[C@@H](C)O[C@H]([C@H]([C@H]1O)OC)OCC1=CC=CC[C@H](O)C(C)=C[C@@H]([C@H](C(C)=CC(C)=CC[C@H](OC1=O)[C@@H](C)O)O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](OC(=O)C(C)C)C(C)(C)O1)O)CC)C(=O)C1=C(O)C(Cl)=C(O)C(Cl)=C1CC ZVGNESXIJDCBKN-WUIGKKEISA-N 0.000 description 1
- 229940122277 RNA polymerase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical compound CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 150000007931 macrolactones Chemical class 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000036457 multidrug resistance Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
- C12P19/60—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin
- C12P19/62—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin the hetero ring having eight or more ring members and only oxygen as ring hetero atoms, e.g. erythromycin, spiramycin, nystatin
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Crystals, And After-Treatments Of Crystals (AREA)
- Game Rules And Presentations Of Slot Machines (AREA)
Description
“PROCEDIMENTO PER LA PRODUZIONE DI TIACUMICINA Bâ€
CAMPO DELL’INVENZIONE
La presente invenzione si riferisce a un procedimento migliorato di produzione di Tiacumicina B ed in particolar modo ad un metodo di fermentazione che consente di incrementare la produzione di Tiacumicina B e di prevenirne la sua degradazione nel brodo di coltura.
TECNICA PRECEDENTE
La Tiacumicina B, nota anche come Fidaxomicina, appartiene ad una famiglia di macrolattoni, prodotti da actinomiceti, con una storia complessa.
La Tiacumicina B, infatti, ha la stessa struttura della lipiarmycina che fu isolata e descritta da Lepetit nel 1976 in US3,978,211 come nuovo antibiotico prodotto mediante coltivazione di Actinoplanes deccanensis A/10655 ATCC21983.
Il primo brevetto rivendicava il prodotto lipiarmycina ed un metodo di fermentazione per produrla utilizzando Actinoplanes deccanensis in un terreno nutritivo contenente fonti assimilabili di carbonio, azoto e sali inorganici.
Nel 1986, Abbott Laboratories, depositava un nuovo brevetto US 4,918,174 relativo allo stesso prodotto, che in questo caso era chiamato Tiacumicina B, ottenuto da Dactylosporangium aurantiacum subsp. hamdenensis.
Il ceppo produttore fu depositato all’ARS Patent Collection del Northern Regional Research Center di Peoria, dove gli fu assegnato il numero di accesso NRRL 18085.
Il brevetto rivendicava le Tiacumicine ed un procedimento per produrre Tiacumicine tramite coltivazione di Dactylosporangium aurantiacum subsp. hamdenensis in un terreno nutritivo.
Più recentemente, Optimer Pharmaceutical ha depositato un nuovo brevetto US 7,507,564 che descrive un procedimento migliorato per la produzione di Tiacumicine allo scopo di ottenere una resa superiore a 50 mcg/ml.
Il procedimento descritto da Optimer à ̈ ancora basato sulla fermentazione di Dactylosporangium aurantiacum, ma in un terreno di fermentazione contenente una resina adsorbente in grado di adsorbire la Tiacumicina B.
La Tiacumicina B Ã ̈ un inibitore della RNA polimerasi.
Il grande interesse nei confronti della Tiacumicina B à ̈ dovuto alla sua attività biologica contro il batterio multiresistente (hospital superbug) Clostridium difficile.
Il C. difficile à ̈ un batterio sporigeno anaerobio Gram-positivo che può provocare gravi infezioni intestinali attraverso la produzione di tossine.
La Tiacumicina B à ̈ un antibiotico a spettro ristretto con una buona attività nei confronti dei clostridi e un’attività minima verso la restante microflora intestinale.
La specificità può essere importante per la riduzione del tasso di ricaduta (recidiva) che si osserva con gli antibiotici ad ampio spettro, poiché il mantenimento dell’equilibrio naturale dei batteri intestinali aiuta a fornire resistenza alla ricolonizzazione da parte dei patogeni.
Recentemente à ̈ stato dimostrato che la Tiacumicina B à ̈ efficace contro il Mycobacterium tuberculosis dotato di resistenza multidrug e presenta anche buona attività antitumorale.
DESCRIZIONE DELL’INVENZIONE
La presente invenzione si riferisce ad un procedimento migliorato per la produzione della Tiacumicina B e, particolarmente, all’uso nella fermentazione, di prodotti emulsionanti e/o antischiuma ed opzionalmente oli vegetali.
L’introduzione nel terreno di coltura o nel corso della fermentazione di questi composti, favorisce la produzione di Tiacumicina B e protegge la molecola dal degrado che si verifica naturalmente durante la fermentazione.
Il microorganismo preferibilmente utilizzato à ̈ Dactylosporangium aurantiacum subsp. hamdenensis.
Si osserva frequentemente, nella biosintesi degli antibiotici, un effetto di regolazione feed-back che limita le potenzialità produttive. Allo stesso modo, la bassa resistenza del microrganismo produttore all’antibiotico sintetizzato, può limitare la produttività fermentativa.
Analizzando nello specifico la fermentazione della Tiacumicina B si nota che, con l’aumentare dell’età di fermentazione, una volta raggiunto il picco massimo di produttività , compaiono dei prodotti di degrado e la concentrazione di Tiacumicina B diminuisce in modo proporzionale.
L’ambiente di fermentazione non à ̈ favorevole ai composti chimicamente instabili. La variazione del pH, l’accumulo di cataboliti e la presenza di attività enzimatiche nel mezzo acquoso, sono tutte condizioni che concorrono alla degradazione dei composti instabili.
È stato osservato, sorprendentemente, che l’aggiunta di una miscela costituita da un emulsionante e/o un antischiuma ed opzionalmente un olio vegetale permette di evitare l’instaurarsi di fenomeni di inibizione ed, allo stesso tempo, di preservare il prodotto dalla degradazione.
La Tiacumicina B Ã ̈ un prodotto liposolubile che viene rilasciato, durante la fermentazione, nel terreno di coltura.
È stato sorprendentemente osservato, analizzando il brodo di fermentazione con analisi HPLC, che la produzione di Tiacumicina B nel terreno così modificato, continua ad incrementare nel corso della fermentazione fino a 168h senza che compaiano prodotti di degrado in quantità significativa.
Oggetto della presente invenzione à ̈ un procedimento per la produzione di Tiacumicina B comprendente la fermentazione di un microorganismo della specie Dactylosporangium aurantiacum, preferibilmente Dactylosporangium aurantiacum subsp. Hamdenensis, in un brodo di cultura contenente un emulsionante e/o un antischiuma ed opzionalmente un olio vegetale.
Gli emulsionanti sono costituiti da una componente idrofobica ed una idrofilica. Alcuni derivati dell’olio di ricino, etossilati, vengono utilizzati in formulazioni farmaceutiche per applicazioni orali, topiche o parenterali ed in campo cosmetico e per l’alimentazione animale.
Gli emulsionanti consentono di ottenere delle emulsioni stabili “olio in acqua†ed “acqua in olio†.
L’utilizzo di un emulsionante consente di favorire il passaggio di sostanze idrofobiche in acqua formando delle micelle che presentano all’ambiente acquoso la parte idrofilica e legano, al loro interno, la sostanza non idrosolubile.
È stato osservato, sorprendentemente, che la presenza nel terreno di fermentazione di un emulsionante favorisce la produzione di Tiacumicina B permettendo di ottenere produttività 10 volte superiori rispetto a quelle ottenibili con il terreno base.
In particolar modo risulta positivo l’utilizzo di un emulsionante, derivato etossilato dell’olio di ricino, con un bilancio idrofilico/lipofilico di circa 14 (HLB 14) utilizzato in concentrazioni comprese tra 0,5 e 30 g/L.
Analogamente à ̈ stato osservato che la produzione della Tiacumicina B à ̈ favorita, sebbene in maniera più modesta, dall’addizione al terreno di fermentazione di un antischiuma. Gli antischiuma sono anch’essi costituiti da una componente idrofilica ed una idrofobica.
L’utilizzo di un antischiuma del tipo poli-alchil-glicole ed in particolar modo di un alchil-poli-alcossi-etere, permette di raddoppiare la produttività rispetto al terreno base. Preferibilmente l’antischiuma à ̈ addizionato al terreno in concentrazione 0,5÷30 g/L.
L’utilizzo di prodotti emulsionanti in fermentatore à ̈ limitato dalla difficoltà , in condizioni d’areazione ed agitazione del brodo, di controllare l’elevata formazione di schiuma che essi determinano.
È stato sorprendentemente osservato che, se l’emulsionante viene utilizzato in combinazione con prodotti antischiuma o in combinazione con antischiuma ed oli vegetali, non si incorre in problemi di elevata formazione di schiuma e la produzione della Tiacumicina B risulta ulteriormente favorita.
In particolare l’olio vegetale à ̈ scelto nel gruppo costituito da olio di soia, girasole, oliva, arachidi, particolarmente preferito à ̈ l’olio di soia. Preferibilmente l’olio vegetale ha una concentrazione nel brodo di coltura compresa tra 0,5 g/L e 50 g/L.
L’assenza, o per lo meno l’accumulo minimo, di prodotti di degradazione permette di ottenere una maggiore concentrazione di Tiacumicina B nel brodo.
Inoltre, dato che il brodo contiene come prodotto prevalentemente la
Tiacumicina B, il recupero e la purificazione dello stesso dal brodo di
fermentazione diventa più efficiente.
Appare evidente che la presenza di un prodotto prevalentemente puro
nel brodo semplifichi il processo di recupero e permetta di evitare stadi di
purificazione lunghi e dispendiosi.
L’emulsionante e/o l’antischiuma e opzionalmente l’olio vegetale
possono essere presenti nel terreno di coltura. alternativamente l’emulsionante
e l’antischiuma possono essere aggiunti all’inizio della produzione della
Tiacumicina B in un'unica volta o gradualmente durante la fermentazione.
ESEMPIO 1 (comparativo)
Dactylosporangium aurantiacum subsp. hamdenensis AB718C-41
NRRL18085 fu mantenuto a -180°C (WCB). La coltura stock fu usata per
inoculare una beuta (seed flask) contenente 40 ml di terreno vegetativo VPF-1
(Tabella 1) che fu incubata su un agitatore rotante per 48h a 30°C e 250÷300 rpm.
INGREDIENTE 1 L
Estratto lievito 7,5 g
Destrosio 1 g
Amido solubile 24 g
Peptone di soia 7,5 g
CaCO34 g
pH corretto a 7.3
Sterilizzazione 121C° x 30 min
Tabella 1. terreno vegetativo VPF-1
Al termine dell’incubazione, la coltura vegetativa fu trasferita
asetticamente (0,8% di inoculo) in una beuta contenente 30 ml di terreno produttivo PF-1 (tabella 2) che fu incubata su agitatore rotante a 30°C e
250÷300 rpm per 96h raggiungendo una produttività di 50mcg/ml.
INGREDIENTE 1 L
Destrosio 20 g
Amido 20g
Farina di soia 10 g
Estratto lievito 3 g
Olio di soia 1 g
K2HPO4*7H2O 0,05 g
MgSO4*7H2O 0,05 g
KCl 0,03
CaCO33 g
Senza correzione del pH
Sterilizzazione 121C° x 30 min
Tabella 2. terreno produttivo PF-1
ESEMPIO 2
Dactylosporangium aurantiacum subsp. hamdenensis AB718C-41
NRRL18085 fu mantenuto a -180°C (WCB). La coltura stock fu usata per
inoculare una beuta (seed flask) contenente 40 ml di terreno vegetativo VPF-1
(Tabella 1) che fu incubata su un agitatore rotante per 48h a 30°C e 250÷300
rpm. Al termine dell’incubazione, la coltura vegetativa fu trasferita
asetticamente (0,8% di inoculo) in una beuta contenente 30 ml di terreno
produttivo PF-2 (tabella 3) che fu incubata su agitatore rotante a 30°C e
250÷300 rpm per 96h raggiungendo una produttività di 125 mcg/ml.
INGREDIENTE 1 L
Destrosio 20 g
Amido 20g
Farina di soia 10 g
Estratto lievito 3 g
Olio di soia 1 g
K2HPO4*7H2O 0,05 g
MgSO4*7H2O 0,05 g
KCl 0,03
CaCO33 g
antischiuma 5g
Senza correzione del pH
Sterilizzazione 121C° x 30 min
Tabella 3: terreno produttivo PF-2
ESEMPIO 3
Dactylosporangium aurantiacum subsp. hamdenensis AB718C-41
NRRL18085 fu mantenuto a -180°C (WCB). La coltura stock fu usata per
inoculare una beuta (seed flask) contenente 40 ml di terreno vegetativo VPF-1
(Tabella 1) che fu incubata su un agitatore rotante per 48h a 30°C e 250÷300
rpm. Al termine dell’incubazione, la coltura vegetativa fu trasferita
asetticamente (0,8% di inoculo) in una beuta contenente 30 ml di terreno
produttivo PF-3 (tabella 4) che fu incubata su agitatore rotante a 30°C e
250÷300 rpm per 168h raggiungendo una produttività di 470 mcg/ml.
INGREDIENTE 1 L
Destrosio 20 g
Amido 40g
Farina di soia 10 g
Estratto lievito 3 g
Olio di soia 1 g
K2HPO4*7H2O 0,05 g
MgSO4*7H2O 0,05 g
KCl 0,03
CaCO33 g
emulsionante 15g
Senza correzione del pH
Sterilizzazione 121C° x 30 min
Tabella 4: terreno produttivo PF-3
ESEMPIO 4
Dactylosporangium aurantiacum subsp. hamdenensis AB718C-41
NRRL18085 fu mantenuto a -180°C (WCB). La coltura stock fu usata per
inoculare una beuta (seed flask) contenente 40 ml di terreno vegetativo VPF-1
(Tabella 1) che fu incubata su un agitatore rotante per 48h a 30°C e 250÷300
rpm. Al termine dell’incubazione, la coltura vegetativa fu trasferita
asetticamente (0,8% di inoculo) in una beuta contenente 30 ml di terreno
produttivo PF-4 (tabella 5) che fu incubata su agitatore rotante a 30°C e
250÷300 rpm per 168h raggiungendo una produttività di 750mcg/ml.
INGREDIENTE 1 L
Destrosio 20 g
Amido 40g
Farina di soia 10 g
Estratto lievito 3 g
Olio di soia 1 g
K2HPO4*7H2O 0,05 g
MgSO4*7H2O 0,05 g
KCl 0,03
CaCO33 g
antischiuma 5,5g
emulsionante 5,5g
Senza correzione del pH
Sterilizzazione 121C° x 30 min
Tabella 5: terreno produttivo PF-4
ESEMPIO 5
Dactylosporangium aurantiacum subsp. hamdenensis AB718C-41
NRRL18085 fu mantenuto a -180°C (WCB). La coltura stock fu usata per
inoculare una beuta (seed flask) contenente 40 ml di terreno vegetativo VPF-1
(Tabella 1) che fu incubata su un agitatore rotante per 48h a 30°C e 250÷300
rpm. Al termine dell’incubazione, la coltura vegetativa fu trasferita
asetticamente (0,8% di inoculo) in una beuta contenente 30 ml di terreno
produttivo PF-5 (tabella 6) che fu incubata su agitatore rotante a 30°C e
250÷300 rpm per 168h raggiungendo una produttività di 730mcg/ml.
INGREDIENTE 1 L
Destrosio 20 g
Amido 40g
Farina di soia 10 g
Estratto lievito 3 g
Olio di soia 6,4 g
K2HPO4*7H2O 0,05 g
MgSO4*7H2O 0,05 g
KCl 0,03
CaCO33 g
antischiuma 5,5g
emulsionante 5,5g
Senza correzione del pH
Sterilizzazione 121C° x 30 min
Tabella 6: terreno produttivo PF-5
ESEMPIO 6
Dactylosporangium aurantiacum subsp. hamdenensis AB718C-41
NRRL18085 fu mantenuto a -180°C (WCB). La coltura stock fu usata per
inoculare una beuta (seed flask) contenente 40 ml di terreno vegetativo VPF-1
(Tabella 1) che fu incubata su un agitatore rotante per 48h a 30°C e 250÷300
rpm. Al termine dell’incubazione, la coltura vegetativa fu trasferita
asetticamente (0,8% di inoculo) in una beuta contenente 30 ml di terreno
produttivo PF-1/1 (tabella 7) che fu incubata su agitatore rotante a 30°C e
250÷300 rpm per 72h. A 72h fu aggiunta una soluzione di emulsionante ed
antischiuma in modo da ottenere in terreno produttivo una concentrazione di
11 g/L per entrambi. La fermentazione fu ulteriormente incubata fino a 168h
raggiungendo una produttività di 530 mcg/ml.
INGREDIENTE 1 L
Destrosio 20 g
Amido 40g
Farina di soia 10 g
Estratto lievito 3 g
Olio di soia 1 g
K2HPO4*7H2O 0,05 g
MgSO4*7H2O 0,05 g
KCl 0,03
CaCO33 g
Senza correzione del pH
Sterilizzazione 121C° x 30 min
Tabella 7: terreno produttivo PF-1/1
ESEMPIO 7
Dactylosporangium aurantiacum subsp. hamdenensis AB718C-41
NRRL18085 fu mantenuto a -180°C (WCB). La coltura stock fu usata per
inoculare 6 beute (seed flask) contenenti 40 ml di terreno vegetativo VPF-1
(Tabella 1) che furono incubate su un agitatore rotante per 48h a 30°C e
250÷300 rpm. Al termine dell’incubazione, la coltura vegetativa fu trasferita
asetticamente (1,4% di inoculo) in una fermentatore da 20L contenente 16L di
terreno produttivo PF-5 (tabella 6).
La fermentazione, condotta a 30°C, con areazione 0,75 vvm a
contropressione 0,5 bar ed agitata a 210÷250 rpm, ha portato ad una
produttività di 440 mcg/ml a 120h di fermentazione.
Claims (12)
- RIVENDICAZIONI 1. Un procedimento per la produzione di Tiacumicina B comprendente la fermentazione di un microorganismo della specie Dactylosporangium aurantiacum in un brodo di cultura contenente un emulsionante e/o un antischiuma ed opzionalmente un olio vegetale.
- 2. Il procedimento secondo la rivendicazione 1 in cui il microorganismo à ̈ Dactylosporangium aurantiacum subsp. hamdenensis.
- 3. Il procedimento secondo la rivendicazione 1 o 2 dove l’emulsionante à ̈ un derivato etossilato dell’olio di ricino.
- 4. Il procedimento secondo ciascuna delle rivendicazioni da 1 a 3 in cui l’antischiuma à ̈ un polialchilglicole.
- 5. Il procedimento secondo la rivendicazione 4 in cui l’antischiuma à ̈ un alchil-poli-alcossi-etere.
- 6. Il procedimento secondo ciascuna delle rivendicazioni da 1 a 5 in cui l’olio vegetale à ̈ scelto nel gruppo costituito da olio di soia, girasole, oliva, arachidi.
- 7. Il procedimento secondo la rivendicazioni 6 in cui l’olio vegetale à ̈ l’olio di soia.
- 8. Il procedimento secondo ciascuna delle rivendicazioni da 1 a 7 in cui l’emulsionante ha una concentrazione nel brodo di coltura compresa tra 0,5 g/L e 30 g/L.
- 9. Il procedimento secondo ciascuna delle rivendicazioni da 1 a 8 in cui l’antischiuma ha una concentrazione nel brodo di coltura compresa tra 0,5 g/L e 30 g/L.
- 10. Il procedimento ciascuna delle rivendicazioni da 1 a 9 in cui l’olio vegetale ha una concentrazione nel brodo di coltura compresa tra 0,5 g/L e 50 g/L.
- 11. Il procedimento secondo ciascuna delle rivendicazioni da 1 a 10 in cui l’emulsionante e/o l’antischiuma e opzionalmente l’olio vegetale sono presenti nel terreno di coltura.
- 12. Il procedimento secondo le rivendicazioni 1-10 in cui l’emulsionante e l’antischiuma vengono aggiunti all’inizio della produzione della Tiacumicina B in un’unica volta o gradualmente durante la fermentazione.
Priority Applications (9)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT001406A ITMI20121406A1 (it) | 2012-08-07 | 2012-08-07 | Procedimento per la produzione di tiacumicina b |
| IN928DEN2015 IN2015DN00928A (it) | 2012-08-07 | 2013-07-30 | |
| CN201380041582.1A CN104603279A (zh) | 2012-08-07 | 2013-07-30 | 生产台勾霉素b的流程 |
| US14/419,955 US9970041B2 (en) | 2012-08-07 | 2013-07-30 | Procedure for the production of tiacumicin B |
| HK15110889.6A HK1210225A1 (en) | 2012-08-07 | 2013-07-30 | Procedure for the production of tiacumicin b |
| PCT/EP2013/065994 WO2014023616A1 (en) | 2012-08-07 | 2013-07-30 | Procedure for the production of tiacumicin b |
| CA2881302A CA2881302C (en) | 2012-08-07 | 2013-07-30 | Procedure for the production of tiacumicin b |
| EP13750659.8A EP2882860B1 (en) | 2012-08-07 | 2013-07-30 | Enzymatic production of tiacumicin b (fidaxomicin) |
| DK13750659.8T DK2882860T3 (en) | 2012-08-07 | 2013-07-30 | Enzymatic preparation of thiacumicin B (fidaxomicin) |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT001406A ITMI20121406A1 (it) | 2012-08-07 | 2012-08-07 | Procedimento per la produzione di tiacumicina b |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ITMI20121406A1 true ITMI20121406A1 (it) | 2014-02-08 |
Family
ID=47016770
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| IT001406A ITMI20121406A1 (it) | 2012-08-07 | 2012-08-07 | Procedimento per la produzione di tiacumicina b |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| IT (1) | ITMI20121406A1 (it) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2015127955A1 (en) | 2014-02-25 | 2015-09-03 | Olon S.P.A. | A new polymorph of tiacumicin b and process for preparation thereof |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004014295A2 (en) * | 2002-07-29 | 2004-02-19 | Optimer Pharmaceuticals, Inc. | Tiacumicin production |
-
2012
- 2012-08-07 IT IT001406A patent/ITMI20121406A1/it unknown
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004014295A2 (en) * | 2002-07-29 | 2004-02-19 | Optimer Pharmaceuticals, Inc. | Tiacumicin production |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ERB ET AL: "From natural product to marketed drug: the tiacumicin odyssey", NATURAL PRODUCT REPORTS, vol. 30, 2013, pages 161 - 174, XP002711994 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2015127955A1 (en) | 2014-02-25 | 2015-09-03 | Olon S.P.A. | A new polymorph of tiacumicin b and process for preparation thereof |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2003251902B2 (en) | Tiacumicin production | |
| JP6409133B2 (ja) | スタリマイシンを調製する方法 | |
| CA2474639C (en) | Mutant actinosynnema pretiosum strain with increased maytansinoid production | |
| KR101703989B1 (ko) | 락토바실러스 아시도필러스를 이용한 이소플라본과 균체외 다당류가 증가된 장류 및 그 제조방법 | |
| AU2003238752A1 (en) | Mutant actinosynnema pretiosum strain with increased maytansinoid production | |
| Nanjwade et al. | Production of antibiotics from soil-isolated actinomycetes and evaluation of their antimicrobial activities | |
| US9970041B2 (en) | Procedure for the production of tiacumicin B | |
| ITMI20121406A1 (it) | Procedimento per la produzione di tiacumicina b | |
| Yoon et al. | Talosins A and B: new isoflavonol glycosides with potent antifungal activity from Kitasatospora kifunensis MJM341 | |
| KR20020092899A (ko) | 항생 물질 카프라자마이신류 및 그 제조법 | |
| Verma et al. | Antimicrobial compounds from Actinobacteria: Synthetic pathways and applications | |
| JP2003502052A (ja) | リコペンを製造する方法 | |
| ITMI20130856A1 (it) | Procedimento per la produzione di tiacumicina b | |
| Phongsopitanun et al. | Marine Streptomyces chumphonensis KK1-2 T produces piericidin A1 as the major secondary metabolite. | |
| CN103725728B (zh) | 一种Bacillamide化合物和Bacillamide前体的制备方法 | |
| JP2014505478A (ja) | 環状リポペプチド化合物の製造方法 | |
| Gulyamova et al. | Effect of epigenetic modifiers on fermentation parameters of endophytic fungi from plants growing in Uzbekistan | |
| CN109207536B (zh) | 一种提高米尔贝霉素发酵产物中米尔贝霉素a3含量的方法 | |
| ITMI20120559A1 (it) | Procedimento migliorato per la produzione di tiacumicina b | |
| CN105002106A (zh) | 平板霉素和平板素的高产工程菌株及其发酵和分离纯化工艺 | |
| US12018305B2 (en) | Process for production of nigericin from Streptomyces sp. MCC-0151 | |
| WO2010122669A1 (ja) | 新規化合物アミコラマイシン、その製造方法及びその用途 | |
| Zamir et al. | Screening of Actinomycetes Isolated from soil and their Antimicrobial Activity against Plant Pathogens | |
| KR101327798B1 (ko) | 아글루코반코마이신을 생산하는 미생물 | |
| CN1263762C (zh) | 脱糖和脱氨糖fr－008衍生聚酮抗生素 |