ITRM20060460A1 - Uso di acido acetil salicilico in combinazione con inibitori dei canali mrp4 per il trattamento di pazienti resistenti a detto acido acetil salicilico - Google Patents

Uso di acido acetil salicilico in combinazione con inibitori dei canali mrp4 per il trattamento di pazienti resistenti a detto acido acetil salicilico Download PDF

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Description

2 0 0 6 A 0 0 0 4 é 0 Doti. big. Adriana Raimondi
Descrizione dell'Invenzione Industriale avente per titolo: "Uso di acido acetil salicilico in combinazione con inibitori dei canali MRP4 per il trattamento di pazienti resistenti a detto acido acetil salicilico".
a nome: Università degli Studi di Roma LA SAPIENZA di nazionalità: italiana
domiciliata in: Piazzale Aldo Moro, 5 - 00185 Roma (RM) inventori: Fabio Maria Pulcinelli,
Luigi Frati,
Teresa Mattiello
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CAMPO DELL'INVENZIONE
La presente invenzione riguarda l'uso di acido acetilsalicilico in combinazione con inibitori dei canali MRP4 per il trattamento di pazienti resistenti a detto acido acetil salicilico.
ARTE NOTA
Da circa trent’anni è stata messa in luce un’evidenza clinica e di laboratorio particolare, che da subito si è mostrata come una marcata differenza interindividuale nella risposta alla terapia con acido acetilsalicilico (ASA) (nel seguito con il termine ASA verranno indicati l’acido acetilsalicilico, i suoi derivati e i sali corrispondenti fisiologicamente accettabili) (Mason et al. J. Am. Coll. Cardiol. 2006, 46, 986-93 & Hahkey and Eikelboom The Lancet 2006, 367, 606-17), accompagnata da una progressiva riduzione della sua efficacia nella terapia a lungo termine (Pulcinelli et al. J,
Doti. htg. Adriana Raimondi
Am. Coll. Cardiol. 2004, 43, 979-84). Questa evidenza è stata definita “resistenza all’ ASA”, e attualmente è un problema la cui reale entità clinica non è stata ad oggi dimostrata e continua ad occupare il tempo e l’interesse di molti ricercatori.
La “resistenza” all’ ASA si individua come l’incapacità da parte di questa molecola di inibire completamente la produzione di trombossano-A2 o l’attivazione piastrinica dipendente da TxA2 (resistenza biochimica o di laboratorio). Questa resistenza può essere conseguentemente responsabile del fallimento terapeutico nel prevenire eventi cardiovascolari in pazienti in trattamento cronico con ASA (resistenza clinica) (Hankey and Eikelboom, ref. citata).
L’approccio per ridurre tale fenomeno è duplice ed è stato basato su due tipologie di interventi: aumentare le dosi di aspirina giornaliere o associare all’aspirina un altro farmaco ad azione antipiastrinica, ma entrambi gli approcci non si sono rilevati efficaci, infatti nel primo caso è stato dimostrato che aumentando le dosi di aspirina (al di sopra di 150 mg/die) aumenta il rischio di complicanze cardiovascolari rispetto ai pazienti che assumono 75-150 mg/die (ATC Br. Med. J. 2002, 324, 71-86); nel secondo caso è stato verificato che questo approccio terapeutico, mentre è utile in prevenzione secondaria, cioè dopo un evento cardiovascolare, può essere rischioso in prevenzione primaria, cioè in pazienti ad alto rischio di complicanza aterotrombotiche che in precedenza non
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<4>DotLlng. Adriana Raimondi
hanno avuto eventi cardiovascolari, in quanto potrebbe aumentare il rischio di emorragie.
L’aspirina®, il cui principio attivo è l'acido acetil-salicilico (ASA), è il farmaco più venduto al mondo; come analgesico appartiene alla classe dei FANS (Farmaci Antinfiammatori Non Steroidei) ed è il farmaco antiaggregante d’eccellenza nel trattamento di soggetti che hanno avuto sindromi coronariche acute o ad alto rischio di eventi cerebro-cardio-vascolari o nel trattamento delle arteriopatie obliteranti dei vasi periferici. Tra i numerosi studi che indicano l’efficacia dell’ ASA nel ridurre le patologie aterotrombotiche, si può citare una recente metanalisi effettuata su 287 studi randomizzati daU’“Antiplatelet Trialists’ Collaboration” (ATC Br. Med. J. 2002, 324, 71-86): questo studio ha dimostrato che l’assunzione giornaliera di ASA a basse dosi (75-150 mg/die) riduce del 25% il rischio di complicanze cardiovascolari (infarto del miocardio, infarto cerebrale e morte vascolare) in pazienti che hanno avuto in precedenza ima patologia coronarica.
L’ASA è presente in più di trenta specialità farmaceutiche, è preparata in varie forme farmaceutiche ed è somministrabile per diverse vie.
L’importanza delTutilizzo di questo farmaco nel ridurre le complicanze aterotrombotiche nasce dal fatto che tali patologie presentano l’evento ischemico in seguito ad attivazione piastrinica.
Le piastrine sono frammenti cellulari che derivano dalla frammentazione di megacariociti. La morfologia di queste cellule
Doti Ing. Adriana Raimondi
appare complessa, mostrando all’estremità un glicocalice costituito da numerose glicoproteine di membrana. Più internamente microtubuli e microfilamenti costituiscono il citoscheletro, che incastona al suo interno numerosi granuli, distinti in tre gruppi: a, densi e λ. Gli a-granuli, abbondantemente rappresentati, contengono proteine importanti per la coagulazione e per la rigenerazione del tessuto lesionato. I granuli densi contengono al loro interno mediatori chimici quali ADP, ATP, serotonina e adrenalina che mediano ramplificazione della risposta piastrinica. I λ-granuli sono identificabili con i lisosomi. La scarsa presenza dell’RNA determina una ridotta rappresentazione del reticolo endoplasmatico rugoso, mentre il liscio, detto Sistema Tubulare Denso, è abbondantemente rappresentato e risulta responsabile della mobilizzazione del calcio intracellulare.
Le piastrine hanno il ruolo fisiologico di attivarsi in seguito ad un danno vascolare e di formare il primo tappo per arrestare la ressi vascolare. In particolare, in seguito ad un danno endoteliale, le piastrine rapidamente aderiscono alle fibre di collageno neoesposte, si attivano e rilasciano mediatori chimici: ADP, rilasciato dai granuli densi, e trombossano-A2 (TxA2), prodotto dall’attivazione della COX-1, che attivano altre piastrine nella sede della lesione formando l’aggregato piastrinico, che blocca il sanguinamento. Questa cascata di eventi è del tutto simile a quella riscontrabile nell’evento patologico di tale attivazione che è la formazione del trombo piastrinico; infatti, in un vaso il cui lume è ridotto per
Doti. big. Adriana Raimondi
la presenza di un ateroma nel sottoendotelio, eventi ancora ad oggi sconosciuti determinano la fissurazione della placca, con esposizione delle fibre di collageno e attivazione delle piastrine che, formando l’aggregato all’interno del vaso, impediscono il passaggio di globuli rossi a valle della sede della lesione. Tale interruzione del flusso sanguigno sarà pertanto la causa della patologia ischemica, che potrà essere transitoria o determinare necrosi del tessuto portando ad eventi quali angina o infarto del miocardio, se la lesione avviene nel distretto coronario, TIA (Attacco Ischemico Transitorio) o ICTUS, nel caso in cui la lesione avvenga in arterie che irrorano il cervello.
Pertanto la secrezione dei granuli e la produzione di trombossano sono due eventi piastrinici molto importanti per regolare la formazione dell’aggregato/trombo piastrinico. Ed è per questo motivo che i due principali farmaci fino ad oggi utilizzati per ridurre gli eventi cardiovascolari hanno lo scopo di ridurre l’attivazione piastrinica da ADP (tienopiridine) e la produzione di trombossano (ASA).
L’efficacia dell’ ASA nel ridurre la funzionalità piastrinica si basa sull’inibizione dell’attività ciclossigenasica della prostaglandina H sintasi, enzima presente nelle piastrine, comunemente definito COX-1.
Il meccanismo d’azione dell’ASA consiste nell’acetilazione dell’ amminoacido Ser 529 della COX-1, che impedisce l’accesso del substrato, acido arachidonico, al sito catalitico. Si tratta pertanto
' Doti. Ing. Adriana Raimondi
di un’inibizione enzimatica irreversibile.
L’ASA è rapidamente assorbita nello stomaco e neH’intestino tenue dopo somministrazione orale; il picco di concentrazione piasmatica si rileva dopo circa 30-40 minuti. L’emivita è molto breve, appena 15-20 minuti. L’inibizione piastrinica invece si manifesta ad un’ora dalla somministrazione. La biodisponibilità è del 40-50%, ma questo parametro non influenza l’effetto sulle piastrine, essendo la COX-1 acetilata nella circolazione pre sistemica.
Considerando che la piastrina non ha nucleo, essa non è in grado di sintetizzare nuovo enzima; poiché l’ASA inibisce la funzione trombossano-dipendente irreversibilmente, e considerando che la vita media della piastrina è di 10 giorni, a 24 ore dall’assunzione del farmaco solo il 10% delle piastrine presenta COX-1 interamente attiva, per questo motivo l’assunzione giornaliera di ASA riduce la produzione di trombossano quasi completamente.
In ogni caso risulta tuttora incognita la residua attività della COX-1 piastrinica in seguito al trattamento con ASA. E’ presumibile che essa sia variabile da soggetto a soggetto.
Evidenze cliniche e di laboratorio hanno dimostrato che non tutti i pazienti che assumono ASA traggono beneficio dalla terapia; per tale motivo è stata creata l’espressione “resistenza all’ASA”. Un nostro recente lavoro (Pulcinelli et al. J. Thromb. Haemost. 2005, 3, 2784-9) ha dimostrato che alla base di questo fenomeno, in alcuni pazienti in trattamento cronico con ASA, vi sarebbe l’incapacità di questo farmaco di inibire in modo efficace la COX-1
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<8>Dottlng. Adriana Raimondi
piaatrinica, permettendo di sintetizzare basse concentrazioni di TxA2, ma cbe sono comunque sufficienti ad indurre attivazione piastrinica.
A conferma di questa ipotesi si può citare un sotto -studio HOPE, in cui Eitelboom e coll. (Circulation 2002, 105, 1650-5) hanno osservato una correlazione positiva tra la concentrazione di 11-deidro-trombossano-B2 nelle urine di pazienti trattati con ASA, e il relativo rischio di infarto. Inoltre Zimmerman e coll. (Circulation 2003, 108, 542-7) hanno rilevato la presenza di una resistenza transitoria all’ ASA, dovuta ad alterata inibizione della COX-1, in pazienti sottoposti a by-pass coronario, con rischi per questi pazienti di complicazioni cardiovascolari, tuttavia in nessuno di questi studi è stato ipotizzato un protocollo di trattamento capace di ridurre tale fenomeno.
Anche i pazienti diabetici sembrano essere meno sensibili all’azione dell’ASA legata ad una ridotta azione sulla COX-1,<*>infatti, uno studio clinico (PPP study Sacco et al. Diabetes Care 2003, 26, 3264-72) ha dimostrato che i pazienti diabetici in trattamento cronico con ASA hanno più complicanze cardiovascolari rispetto ai non diabetici e recentemente abbiamo dimostrato che la produzione di trombossano piastrinico nei diabetici in trattamento con ASA è circa 5 volte superiore ai pazienti non diabetici (Pulcinelli et al. J.A.C.C. 47(4) supplement A, 364A-365A).
Le Multidrug Resistence Proteine (MRPs) sono ima famiglia di sette glicoproteine di membrana, MRP da 1 a 7 che mediano il
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<9>Dottlng.Àdriam Raimondi
trasporto unidirezionale di anioni organici nelle cellule. Nelle piastrine, è stato dimostrato che sono presenti le MRP di tipo 4 ed hanno la funzione di trasportare nucleotidi adenilici nei granuli densi; infatti le MRP4 appartengono alla famiglia di proteine di membrana chiamate ABC (ATP-Binding Cassette)-transporters (Jedlitschky et al. Blood 2004, 104, 3603-3610) e sono responsabili del trasporto imidirezionale di anioni organici dal citosol o verso l’esterno o verso rintemo dei granuli densi.
Il fatto che pazienti affetti da determinate patologie, diabetici o sottoposti a un intervento chirurgico, ad esempio un bypass coronarico, dimostrassero una resistenza all'ASA ci ha portati ad ipotizzare che la causa di una ridotta capacità di questo farmaco nell’inibire la funzionalità piastrinica potesse dipendere dal ridotto accumulo del farmaco all’interno della cellula perchè trasportato all’esterno del citosol tramite le MRP4 (che fungono quindi da “canali” di passaggio) e che questo fenomeno portasse conseguentemente alla riduzione della sua attività farmacologica.
Il meccanismo di funzionamento degli inibitori dei canali MRP4 è noto (WO 2005/044244) e fra gli inibitori è menzionato il dipiridamolo.
Il dipiridamolo normalmente viene utilizzato in pazienti con insufficienza coronarica accompagnata o no da crisi anginose; coronaropatie; cuore senile e profilassi dell'infarto del miocardio; cardiopatie, come coadiuvante della terapia digitalica; patologie a livello cardiaco, cerebrale e renale da aumentata aggregabilità
Dot. htg. Adriana Raimondi
piastrinica, in quanto dotato di una spiccata attività antiaggregante piastrinica, e quindi antitrombotica, da attribuirsi all'azione inibente la fosfodiesterasi piastrinica che determina aumento dell’AMPc. Non esiste in letteratura alcun suggerimento che il dipiridamolo possa aumentare l’efficacia dell’ ASA nell’inibire la COX-1.
Combinazioni di dipiridamolo e ASA sono note e impiegate nelle terapie correlate a malattie cardiovascolari. In particolare US 4.694.024 descrive un sistema a rilascio in successione prima del dipiridamolo e poi di acido acetilsalicilico. US 6.015.577 descrive invece rimpiego combinato simultaneo di acido acetilsalicilico e dipiridamolo impiegando dosaggi minori di acido acetilsalicilico rispetto a US 4.694.024 e stabilisce il rapporto ideale tra dipiridamolo e ASA per ridurre la formazione del coagulo in topo e pertanto ipotizzando un effetto benefico nella cura delle malattie cardiovascolari.
Entrambi i brevetti si riferiscono a combinazioni di ASA e dipiridamolo o farmaci analoghi e sono volti a determinare quale sia il dosaggio migliore dei due principi farmacologici, quale sia il rapporto tra i due principi e quali siano i sali migliori per determinare un ritardo di assorbimento di entrambi. Tuttavia in nessuno viene menzionato o suggerito il trattamento di pazienti che risultino resistenti ad ASA, né che esista una resistenza causata da ima minore disponibilità di ASA correlata o correiabile all’azione delle MRP4. Viene invece solo detto che la combinazione
ASA-dipiridamolo è utile perché entrambi inibiscono le piastrine, senza nessuna menzione delle MRP4.
SOMMARIO DELL'INVENZIONE
E' stato ora trovato dagli inventori che l’ASA viene trasportata attraverso i canali MRP4; ed è stato anche trovato sperimentalmente che una diversa espressione degli MRP4 è presente nei pazienti sottoposti a by-pass, nei diabetici e nei pazienti in trattamento cronico con ASA rispetto ai volontari sani.
Quindi gli inventori ipotizzano che la cellula, in presenza di dosi massicce di ASA, come quelle somministrate ai pazienti operati di by-pass, o in presenza di condizioni patologiche come il diabete o in pazienti ad alto rischiò per eventi trombotici in trattamento cronico con aspirina, voglia ridurre la concentrazione delle sostanze anioniche organiche nel citosol, esportandone una parte dal citosol verso l'esterno e un'altra parte dal citosol all'interno dei granuli. L'ASA, che a pH fisiologico, si presenta come un anione organico, assumendo una carica netta negativa sulla sua superficie, rappresenterebbe quindi, una molecola obiettivo per gli MRP4.
Questo fenomeno è stato provato dagli inventori che, attraverso la misurazione delle concentrazioni citosoliche o interne ai granuli piastrinici di ASA e del suo metabolita acido salicilico (SA), in una preparazione piastrinica o in una preparazione di granuli piastrinici, effettuata secondo il metodo riportato da (Fukami MH et al. J. Celi. Biol. 1978, 77, 389-99), entrambe trattate con
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ASA (50-100 DM per 10 min. a 37°C o 4°C) o mediante l’uso di ASA marcata (<14>C), avvalendosi dell'uso di inibitori specifici degli MRP4, quali Dipiridamolo ed MK571 (Acido (2J)-3-[[[3-[2-(7-cloro-2-chinolinil)etenil]fenil]-[[3-dimetilammino)-3-ossopropil]tio]-metil]tio]-propanoico), e di metodiche selettive d'investigazione, quali HPLC, per la misurazione di ASA e SA secondo il metodo di Gaspari e Locatelli (Ther Drug Monit. 1987, 9, 243-7) e Beta counter per la misurazione dell’aspirina radioattiva, hanno verificato il coinvolgimento dei canali MRP4 nell'alterazione del "cammino" intracellulare dell'ASA
Gli inventori hanno quindi trovato che inibire il trasporto mediato dagli MRP4 è vantaggioso nel trattamento con ASA in quanto ne riduce l’estrusione dal citosol aumentando conseguentemente la sua capacità di inibire la COX-1. Questa seconda ipotesi è stata verificata mediante il dosaggio del trombossano-A2 (TxA2), marker di attivazione della COX-1, rilasciato delle piastrine, aspirinate e non, attivate con trombina.
Costituisce pertanto oggetto della presente invenzione l'impiego di acido acetilsalicilico, suoi derivati e sali corrispondenti, e di inibitori degli MRP4, in combinazione o successione tra loro, per il trattamento di tutte le patologie correlate alla cosiddetta resistenza all’ASA, come sopra definita. Fra gli inibitori degli MRP4 sono preferiti il Dipiridamolo e ΓΜΚ571.
Altro oggetto dell’invenzione è relativo alle dosi giornaliere e al protocollo di somministrazione che vantaggiosamentente può
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<13>Dottfog. Adriana Raimondi
prevedere dosi giornaliere di circa 40 mg ciascuna di ASA e circa 75 mg di dipiridamolo.
Altro oggetto dell’invenzione è relativo alle quantità relative di ASA e dipiridamolo, variabili rispettivamente negli intervalli 75-150mg/die per ASA e 75-500mg/die, preferibilmente 75-200mg/die per dipiridamolo.
Ancora altro oggetto dell’invenzione è relativo al metodo e relativo kit per la rilevazione di pazienti cosiddetti resistenti ad ASA, ivi comprese le analisi di farmacogenetica medianti studi dei polimorfismi genetici.
Altri oggetti risultano evidenti dalla descrizione dettagliata dell’invenzione.
BREVE DESCRIZIONE DELLE FIGURE
Nelle Figure 1 e 2 sono riportati i risultati ottenuti che sono rappresentativi: dell’eliminazione dell’ASA dalle piastrine mediante gli MRP4, effettuata mediante la misurazione delle concentrazioni di ASA e del suo metabolita acido salicilico nel citosol (Fig. 1) e nei granuli piastrinici (Fig. 2) che erano stati incubati con aspirina dopo differenti trattamenti, quali inibitori del trasporto mediato dagli MRP4 (dipiridamolo e MK571), o sistemi che riducevano il trasporto attivo di tali canali (incubazione a 4°C o con scavenger dell’ATP) e riportando la percentuale ottenuta rispetto alle piastrine o granuli trattati con il solo ASA.
Figura 3 illustra il rilascio di ASA marcato (<14>C) dopo attivazione delle piastrine radiomarcate con trombina.
1Λ/Η. l UVW UIHHIWH
<14>Doti btg. Adriana Raimondi
Figura 4 illustra l’espressione di MRP4 in un lisato proteico piastrinico di volontari sani rispetto a pazienti operati con by-pass a 5 giorni dall’intervento.
Figura 5 illustra esperimenti effettuati mediante la tecnica di immunogold, che evidenzia la localizzazione del canale mediante microscopia elettronica; i pazienti resistenti presentano un’ aumentata concentrazione del canale su un compartimento cellulare differente, sistema canalicolare aperto (quadro B), mentre nei controlli il canale è espresso quasi esclusivamente sui granuli densi (quadro A).
DESCRIZIONE DETTAGLIATA DELL’INVENZIONE
Secondo la presente invenzione una combinazione di acido acetilsalicilico, suoi derivati e sali fisiologicamente accettabili, e inibitori dei canali MRP4, formulabili in co-somministrazione, viene impiegata per il trattamento di pazienti resistenti ad ASA, come sopra definito.
Il medicamento secondo la presente invenzione può essere ottenuto mescolando i principi attivi o corrispondenti derivati e sali farmaceuticamente accettabili con eccipienti adatti alle formulazioni delle composizioni per la somministrazione orale o parenterale, o intramuscolare o venosa o per bocca o nasale. Tutti gli eccipienti, diluenti, veicoli e/o adiuvanti necessari alla preparazione sono quelli noti all’esperto del ramo.
Più specificamente, con il termine "composizione" si intende una combinazione dei principi attivi che sia in grado di produrre
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Doti big. Adriana Raimondi
un effetto farmacologico come sopra indicato. La "composizione" comprende, in aggiunta ai principi attivi, eccipienti, diluenti, veicoli e/o adiuvanti che da soli non in grado di produrre un effetto farmacologico sul soggetto che riceve la composizione. Tali eccipienti, diluenti, veicoli ed adiuvanti sono noti agli esperti nel campo e possono essere scelti fra sostanze quali acqua, soluzione Salina, glicerolo, etanolo, agenti emulsionanti, sostanze tampone, conservanti e simili.
Esempi di composizioni farmaceutiche in cui la combinazione di principi attivi secondo l’invenzione può essere compresa sono quelle in forma solida, semi-solida o liquida sottoforma di: tavolette, capsule, pillole, compresse, pasticche, granulati, sciroppi, fiale, gocce, soluzioni, sospensioni, emulsioni, in forme unitarie o dosi separate, sciroppi, pronti per l’uso o unità estemporanee, creme, gel. Altri esempi di formulazioni sono quelli per uso parenterale, forme iniettabili per somministrazioni intramuscolari, sottocutanee, transdermiche o endovena.
Le composizioni sono somministrabili per via orale oppure, per via parenterale, rettale o cutanea.
Co-somministrazione significa un confezionamento comprendente forme unitarie o distinte di somministrazione dei principi attivi, accompagnate dalle istruzioni per la somministrazione coordinata simultanea o in successione degli ingredienti attivi secondo il dosaggio stabilito dal medico.
<ib>Doti. Ing. Adriana Raimondi
Dosaggi, posologie e protocolli di somministrazione sono determinati dal medico in funzione della propria esperienza, della gravità della patologia e dello stato ed età del paziente.
I pazienti che manifestano resistenza all’ASA secondo la presente invenzione presentano una espressione piastrinica di MRP4 differente rispetto ai controlli sani (Fig. 4). Infatti, mentre nei controlli sani si riscontra quasi esclusivamente una banda dal peso molecolare apparente di circa 190 KDalton, in tutti i pazienti studiati compare una seconda banda dal peso molecolare superiore a 250Kdalton. Questi pazienti sembrano pertanto identificabili attraverso prove specifiche.
Un metodo diagnostico per la rilevazione in vitro di pazienti che manifestano resistenza all’ASA secondo la presente invenzione comprende i seguenti passaggi:
a. Prelevare un campione di fluido biologico dal paziente, in genere sangue periferico venoso purificato da cui si ottiene un lisato proteico piastrinico, e porlo in contatto con anticorpi mono o policlonali anti-MRP4 (disponibili in commercio) in condizioni e per un tempo sufficiente alla formazione di un complesso fra antigene (MRP4) e anticorpo;
b. identificare la presenza della banda caratteristica degli MRP4 di peso molecolare a circa 190 KDalton e la presenza (in soggetti sensibilizzati) o l’assenza (in soggetti sani) della banda a circa 250 KDalton; lidentifivazione può essere fatta mediante Western Blot.
Doti. Ing. Adriana Raimondi
La tecnica Western Blot è nota all’esperto del ramo che, in base alla presente descrizione e alle sue conoscenze può facilmente individuare le condizioni ottimali per mettere in pratica il metodo.
La definizione di "anticorpo policlonale" e di "anticorpo monoclonale" è nota agli esperti nel campo.
Un’altra modalità di identificazione si basa sullo studio dell’RNA messaggero piastrinico deputato alla sintesi di questa proteina (MRP4), che risulta essere maggiore nei soggetti resistenti rispetto ai soggetti sani. In questo caso la determinazione può essere effettuata con la tecnica Southern Blot o Real-Time PCR (RT-PCR), entrambe note al tecnico del ramo, che identifica facilmente i necessari enzimi di restrizione e le successive condizioni per l’elettroforesi.
Un kit di rilevazione secondo la presente invenzione può vantaggiosamente comprendere, oltre al materiale per effettuare il saggiò (provette da saggio, pozzetti di piastre da titolazione, reagenti, etc.) ed alle spiegazioni relative alla metodologia d’impiego, anticorpi anti-MRP4 per un saggio di valutazione mediante Western Blot; oppure enzimi di restrizione specifici per gli MRP4 da analizzare quantitativamente per determinare l’mRNA piastrinico mediante Southern Blot o Real-Time PCR.
Sulla base delle ipotesi fatte, gli inventori hanno dimostrato sperimentalmente che l’ASA può essere veicolata attraverso i canali MRP4 e che l’inibizione del trasporto mediato dagli MRP4 aumenta la capacità terapeutica indotta dall’ASA.
Doti Ing. Adriana Raimondi
Il fatto che l’ASA possa essere trasportata alTinterno dei granuli densi o estrusa dalla cellula attraverso gli MRP4 è dimostrato dai seguenti risultati sperimentali:
1) l’inibizione del trasporto mediato dagli MRP4 aumenta le capacità delle piastrine di trattenere ASA nel citosol; infatti se le piastrine vengono pretrattate con dipiridamolo o MK571 10 min. prima dell’incubazione delle piastrine con ASA 50-lOOmicroM, le concentrazioni citosoliche di acido acetilsalicilico (ASA) o del suo metabolita acido salicilico sono superiori rispettivamente del 285% e del 293% per le piastrine pre-trattate con il dipiridamolo 100 microM, mentre sono rispettivamente del 208% e del 202% per le piastrine pre-trattate con MK571, rispetto alle piastrine trattate con il solo solvente sia del dipiridamolo che del MK571 (DMSO, dimetilsolfossido) (vedi Figura 1). Il dipiridamolo oltre ad inibire il trasporto mediato da questi canali è anche un inibitore dell’attività piastrinica, in quanto aumenta le concentrazioni piastriniche di AMPc, inibendo la isoforma V della fosfodiesterasi (PDE typeV). Gli inventori hanno dimostrato che l’azione del dipiridamolo nell'inibire il trasporto mediato dagli MRP4 non passa attraverso l’inibizione della PDE type V, in quanto un altro inibitore di tale enzima, 1 -(3-mornffim<’>lammino)-4- azinn (MY-5445), formula molecolare C2OH14CIN3, non aumenta le concentrazioni citosoliche di ASA o di salicilato (110% e 120% rispettivamente) vedi Figura 1;
<iM>Doti. Ing. Adriana Raimondi
2) il trattamento delle piastrine con ASA ad una temperatura inferiore a quella corporea (4°C) aumenta le concentrazioni citosoliclie di ASA e di salicilato nelle piastrine del 240% e del 160% rispettivamente; questo dimostra che il trasporto dell’ASA mediato dagli MRP4 è efficiente alla temperatura corporea (circa 37°C) vedi Figura 1;
3) l’ASA viene internalizzata all’interno dei granuli piastrinici attraverso gli MRP4, questo effetto è stato dimostrato dosando l’ASA all’interno dei granuli dopo che tali organelli erano stati trattati con ASA, che il trasporto possa avvenire anche attraverso gli MRP4 è dimostrato dal fatto che è necessario che il trasporto avvenga a 37°C e in presenza di ATP nel mezzo esterno in quanto il trasporto mediato dagli MRP4 è un trasporto attivo. Infatti, la concentrazione massima raggiunta si otteneva se nel mezzo esterno si aggiungeva ATP e l’incubazione con ASA veniva effettuata a 37°C, mentre era notevolmente ridotta se l’incubazione dell’ASA avveniva a 4°C (53,6%), in presenza di apirasi (56,1%), un enzima che degrada ΓΑΤΡ, oppure se le piastrine erano pretrattate con dipiridamolo (41.7%) 10 min prima dell’aggiunta di ASA, vedi Figura 2;
4) le piastrine rilasciano ASA dopo attivazione con trombina, e tale rilascio è assente se si effe tua un pretrattamento con dipiridamolo. Incubando le piastrine con ASA radiomarcata abbiamo potuto verificare che se questa preparazione piastrinica veniva attivata con trombina era possibile dosare il radiomarcato
4 WN/ wruw/m
<20>Doti. btg. Adriana Raimondi
nel mezzo esterno, questo effetto è dovuto al fatto che le piastrine, in seguito ad attivazione, rilasciano il contenuto dei granuli all’esterno delle cellule, quali ADP, ATP Ca2+ etc. La dimostrazione che l’ASA entri nei granuli è dimostrato dal fatto che in caso di pretrattamento delle piastrine con dipiridamolo, il rilascio dell· ASA radiomarcato era assente, mentre era del tutto normale il rilascio degli altri componenti granulari (1,8±0.3 nmoli di ATP rilasciato dalle piastrine pretrattate con dipiridamolo versus 1,9±0.1 nmoli di ATP rilasciato dalle piastrine di controllo), vedi Figura 3;
6) in piastrine provenienti da megacariociti in coltura nei quali l’espressione del canale veniva soppressa bloccando la trascrizione dell’RNA mediante siRNA specifico per MRP4, le piastrine trattate con ASA mostravano valori di ASA e salicilato intracellulari più elevati del 159% e del 144% rispettivamente rispetto ad una popolazione piastrinica analoga ma trattata con il solo veicolo (hpofectamina) e incubato con la stessa concentrazione e per lo stesso tempo con ASA.
Un’altra importante conclusione a cui gli inventori sono pervenuti attraverso gli esperimenti effettuati è quella secondo cui riducendo il trasporto mediato attraverso gli MRP4, è possibile migliorare l’azione dell’ASA nell’inibire la COX-1. Infatti quando si aggiunge dipiridamolo o MK-571 prima del trattamento con ASA, la produzione di trombossano, prostaglandina prodotta dalle piastrine in seguito ad attivazione della COX-1, indotta da
21 Doti big. Adriana Raimondi
trombina, è inferiore a quella delle piastrine aspirinate ma non pretratate con inibitori del trasporto mediato da MRP4. La produzione di trombossano delle piastrine ASAte indotta da trombina era di 343,7 ng/10<8>cells, mentre se veniva inibito il trasporto mediato dagli MRP4 mediante dipiridamolo o MK-571 si passava a 142,7 ng/10<8>cells, riduzione del 58%, e 140,22 ng/10<8>cells, riduzione del 59,2%, rispettivamente.
L'osservazione che le piastrine provenienti da megacariociti in coltura, nelle quali l’espressione del canale era stata soppressa mediante trattamento con siRNA, se aspirinate, presentavano una minore produzione di trombossano del 51% rispetto alle piastrine provenienti da megacariociti in coltura, trattate con il solo veicolo del siRNA, chiaramente dimostra che, se le piastrine non presentano questo canale, l’aspirina inibisce la COX-1 in modo più efficace.
La correlazione tra resistenza all’ ASA e MRP4 è anche evidente per il fatto che i pazienti che sembrano essere più resistenti all’azione dell’ASA cioè, ad esempio, quelli sottoposti a bypass, i diabetici e quelli in trattamento cronico con ASA, hanno una espressione piastrinica di MRP4 differente rispetto ai controlli sani (Fig. 4). Infatti, mentre nei controlli sani si riscontra quasi esclusivamente una banda dal peso molecolare apparente di circa 190 KDalton, dato in accordo con la letteratura (Jedlitschky et al Blood 2004, 104, 3603-3610), in tutti i pazienti studiati compare una seconda banda dal peso molecolare superiore a 250Kdalton. Il
ΔΔ Doti, big, Adriana Raimondi
fatto che sia possibile riscontrare gli MRP4 con bande a differente peso molecolare in alcune categorie di pazienti è la prima volta che viene evidenziato nelle piastrine. Che la banda a più alto peso molecolare appartenga sicuramente all’MRP4 è confermato da un altro lavoro che ha dimostrato l’assenza di entrambe le bande in topi trasgemei knockout per MRP4, mentre nei controlli wild type sono evidenti le bande allo stesso peso molecolare di quelle trovate nel presente lavoro (Leggas et al. Mol. Celi. Biol. 2004, 24, 7612-21).
Possiamo ipotizzare che nelle piastrine dei pazienti resistenti vi sia una maggiore espressione del canale, specialmente di quello a più alto peso molecolare, in un compartimento cellulare differente dalle piastrine di controllo. Questa ipotesi è confermata con gli esperimenti effettuati mediante la tecnica di immunogold (Fig. 5A e 5B), che evidenzia la localizzazione del canale mediante microscopia elettronica, dove abbiamo visto che i pazienti resistenti presentano un’aumentata concentrazione del canale su un compartimento cellulare differente, sistema canalicolare aperto, mentre nei controlli il canale è espresso quasi esclusivamente sui granuli densi. Il sistema canalicolare aperto è un sistema di membrane piasmatiche che, invaginandosi all’interno delle piastrine, serve ad aumentare la superficie di scambio tra l’mterno e l’esterno della cellula. E’ possibile pertanto ipotizzare che la maggior espressione di questi canali sulle membrane del sistema canalicolare aperto riduca l’accumolo di aspirina nelle piastrine.
<ΔΛ>Dottlng. Adriana Raimondi
La conclusione finale è che l’ASA può essere eliminata dalle piastrine mediante il trasporto mediato da MRP4; la maggiore espressione di questi canali sarebbe pertanto responsabile del ridotto accumulo cellulare del farmaco con la consequente riduzione dell’effetto farmacologico. Un elenco illustrativo e non esaustivo di inibitori di MRP4, oltra al dipiridamolo [2,6-bis-(dietanolammino)-4J8-dipiperidino-(5J4-d)-pirimidina] e al mopidamolo [2,6-bis-(dietanolammino)-8-piperidino-(5,4-d)-piriinidina], annovera: ΓΜΚ571; i derivati della pirimido-pirimidina quali quelli descritti nel brevetto US 4694024; derivati della chinolina, quali meflochina, amodiachina, clorochina, primachina, chinidina e chinina, diclofenac, celecoxib, dl-butionina-(S,R)-sulfossimmina (BSO), probenecide, S-(2J4-dinitrofenil)-glutatione (DNP-SG), N-acetil-(2,4-dinitrofenil)cisteina (NAc-DNP-Cys), a-naftil-/?-D-glucoronide, p-nitrofenil-/?-D-glucoronide, flurbiprofene, ibuprofene, indometacina, indoprofene, ketoprofene, diclofenac, celecoxib, rofecoxib, disulfiran; corrispondenti derivati e sali fisiologicamente accettabili di detti composti, e relative miscele.
Essi hanno tutti l’azione di ridurre il trasporto mediato dal MRP4 e quindi aumentare l’effetto inibitorio dell’ ASA sulla COX-1 delle piastrine.
La concentrazione di dipiridamolo necessaria negli studi in vitro è elevata, ma potrebbe essere più bassa in vivo e variare tra 75 e 500 mg, preferibilmente nell'intervallo 75 e 200 mg.
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24 Dott, Ing. Adriana Raimondi
Questo nuovo meccanismo di azione da parte del dipiridamolo o di altri inibitori del trasporto mediato da MRP4 potrà avere diversi vantaggi, quali: ridurre l’effetto chiamato resistenza all’ASA, migliorando l’efficacia terapeutica di tale farmaco nelle patologie sopradescritte; potrà avere anche il grosso vantaggio di poter ridurre le dosi farmacologicamente attive in tutte le patologie che ne richiedano un trattamento cronico, riducendo le complicanze del trattamento con ASA, prima tra tutte la gastrolesività.
Le molecole di nuova generazione che saranno capaci di ridurre il trasporto mediato dagli MRP4, oltre a ridurre il fenomeno della resistenza ai chemioterapici e antivirali nelle patologie oncologiche, avranno anche il vantaggio, dimostrato dagli inventori, di migliorare il trattamento cronico con aspirina in tutte le patologie che richedono tale trattamento.
I vantaggi derivanti dall'uso combinato del trattamento di ASA più inibitori del trasporto mediato da MRP4 sono i seguenti:
1) riduzione di complicanze in patologie cardio e cerebrovascolari, arteriopatie obliteranti dei vasi periferici, retinopatia, fibrillazione atriale, trombosi venosa profonda, patologie del ritmo cardiaco, trombocitosi, gestosi gravidiche, aborti ricorrenti, trattamento con ASA di pazienti con familiarità per vari tipi di tumori, quali quello del colon, per ridurre l’incidenza di tali malattie;
2) riduzione di accidenti cardio o cerebrovascolare (fallimento terapeutico) in pazienti in trattamento con la sola ASA
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25 Doti. Ing. Adriana Raimondi
in prevenzione primaria (pazienti ad alto rischio per patologie aterotrombotiche); in prevenzione secondaria (pazienti che hanno avuto in precedenza un evento trombotico);
3) riduzione della dose giornaliera dell’ASA con riducione degli effetti collaterali;
4) possibilità di somministrare ASA a pazienti che non possono assumerne elevate quantità, per sensibilità gastrica al farmaco, ma che necessitano di trattamento per lunghi periodi, quali pazienti affetti da patologie infiammatorie croniche;
5) possibilità di somministrare per brevi periodi ASA a dosaggio ridotto e quindi di ridurre il rischio di gastrolesività da FANS.

Claims (15)

  1. RIVENDICAZIONI 0 4 B Q 1. Impiego di una composizione comprendente ASA, suoi derivati e sali fisiologicamente accettabili, in combinazione con inibitori dei canali MRP4 per la realizzazione di un medicamento per il trattamento di patologie correlate alla resistenza ad ASA.
  2. 2. Impiego secondo la riv. 1 in cui ASA e l’inibitore vengono preparati in un medicamento in modo da essere somministrati in combinazione o successione tra loro.
  3. 3. Impiego secondo le riv. 1-2 in cui rinibitore dei canali MRP4 è scelto fra: dipiridamolo; mopidamolo; MK571; derivati della pirimido-pirimidina; derivati della chinolina, quali meflochina, amodiachina, clorochina, primachina, chinidina e chinina; diclofenac; celecoxib; dl-butionina-(S,R)-sulfossimmina; probenecide; S- (2 , 4- dinitr ofenil) - glutatione ; AT-acetil-(2,4-dinitrofenil)cisteina; a-naftil-/?-D-glucoronide; p-nitrofenil-^-D-glucoronide; flurbiprofene; ibuprofene; indometacina; indoprofene; ketoprofene; diclofenac; celecoxib; rofecoxib; disulfiran; corrispondenti derivati e sali fisiologicamente accettabili di detti composti, e relative miscele.
  4. 4. Impiego secondo le riv. 1-3 in cui la composizione ASA e inibitori comprende ulteriormente eccipienti, diluenti, veicoli, adiuvanti.
  5. 5. Impiego secondo la riv. 4 in cui eccipienti, diluenti, veicoli e adiuvanti sono scelti fra sostanze quali acqua, soluzione WVik i'IWW UtIWIVIH 27 Doti. Ing. Adriana Raimondi salina, glicerolo, etanolo, agenti emulsionanti, sostanze tampone, conservanti e simili.
  6. 6. Impiego secondo le riv. 1-5 in cui la composizione viene preparata in forma solida, semi-solida o liquida sottoforma di: tavolette, capsule, pillole, compresse, pasticche, granulati, sciroppi, fiale, gocce, soluzioni, sospensioni, emulsioni, in forme unitarie o dosi separate, sciroppi, pronti per l’uso o unità estemporanee, creme, gel.
  7. 7. Impiego secondo le riv. 1-5 in cui la composizione viene preparata in formulazioni per uso parenterale, forme iniettabili per somministrazioni intramuscolari, sottocutanee, transdermiche o endovena.
  8. 8. Impiego secondo le riv. 1-5 in cui la composizione viene preparata in formulazioni somministrabili per via orale oppure, per via parenterale, rettale o cutanea.
  9. 9. Impiego secondo le riv. 1-5 in cui la composizione viene preparata in formulazioni che comportano un confezio-namento comprendente forme distinte di somministrazione dei principi attivi, accompagnate dalle istruzioni per la somministrazione coordinata simultanea o in successione degli ingredienti attivi.
  10. 10. Impiego secondo le riv. 1-9 in cui la combinazione ASA e inibitore dipiridamolo viene somministrata in dosi giornaliere di circa 40 mg di ASA e circa 75 mg di dipiridamolo. Doti. Ing. Adriana Raimondi
  11. 11. Impiego secondo le riv. 1-9 in cui la combinazione ASA e inibitore dipiridamolo viene somministrata in quantità variabili rispettivamente negli intervalli 76-150 mg/die per ASA e 75-500 mg/die, preferibilmente 75-200 mg/die per dipiridamolo.
  12. 12. Metodo di diagnosi per la rilevazione in vitro di pazienti che manifestano resistenza all’ASA comprende i seguenti passaggi: a. prelevare un campione di fluido biologico del paziente e porlo in contatto con anticorpi mono o policlonali anti-MRP4 in condizioni e per un tempo sufficiente alla formazione di un complesso fica antigene e anticorpo; b. identificare la presenza della banda caratteristica degli MRP4 di peso molecolare a circa 190 KDalton e la presenza, indicativa di soggetto sensibilizzato, o l’assenza, indicativa di soggetto sano, della banda a circa 250 KDalton.
  13. 13. Metodo secondo la riv. 12 in cui il campione di fluido biologico è sangue periferico venoso purificato da cui si ottiene un lisato proteico piastrinico.
  14. 14. Metodo diagnostico per la rilevazione in vitro di pazienti che manifestano resistenza all’ASA da effettuare su un campione di fluido biologico caratterizzato dal fatto che detto metodo si basa sull’identificazione in detto campione dell’RNA messaggero piastrinico deputato alla sintesi di MRP4.
  15. 15. Kit per la conduzione del metodo secondo le riv. 12, 13 o secondo la riv. 14 comprendente, oltre al materiale per effettuare Doti, Fabio Cavatomi 29 il saggio fra cui: provette da saggio e pozzetti di piastre da titolazione, reagenti, e spiegazioni relative alla metodologia d’impiego; anche anticorpi anti-MRP4 per il saggio di valutazione mediante Western Blot; oppure enzimi di restrizione specifici per gli MRP4 da analizzare quantitativamente per determinare l’mRNA piastrinico mediante Southern Blot o RT-PCR.
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PT78276516T PT2064556T (pt) 2006-08-31 2007-08-30 Método para identificar e tratar indivíduos resistentes ao ácido acetilsalicílico
US12/439,454 US20100009938A1 (en) 2006-08-31 2007-08-30 Method to identify and treat subjects resistant to acetyl salicylic acid
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Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6047150B2 (ja) * 2011-05-13 2016-12-21 キングス・カレッジ・ロンドン 血小板感受性に関係する方法と組成物
CN104849464B (zh) * 2015-05-12 2016-03-02 广州华弘生物科技有限公司 一种检测阿司匹林疗效的试剂盒及其检测方法
CN116904584B (zh) * 2023-09-11 2023-12-12 北京宏微特斯生物科技有限公司 阿司匹林抵抗用药指导相关基因多态位点的试剂盒及其使用方法

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3576119D1 (de) * 1984-07-21 1990-04-05 Hoechst Ag Kombinationspraeparat aus pyrimido-pyrimidinen und o-acetylsalicylsaeure bzw. deren pharmakologisch vertraeglichen salzen und dessen verwendung.
DE3627423A1 (de) * 1986-08-13 1988-02-18 Thomae Gmbh Dr K Arzneimittel enthaltend dipyridamol oder mopidamol und o-acetylsalicylsaeure bzw. deren physiologisch vertraegliche salze, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung zur bekaempfung der thrombusbildung
US6759238B1 (en) * 1999-03-31 2004-07-06 St. Jude Children's Research Hospital Multidrug resistance associated proteins and uses thereof
DE10352511A1 (de) * 2003-11-07 2005-06-16 Ernst-Moritz-Arndt-Universität Greifswald Verwendung von MRP4-Inhibitoren zur Behandlung und/oder Prophylaxe kardiovaskulärer Erkrankungen
CA2587026A1 (en) * 2004-10-25 2006-05-04 Boehringer Ingelheim International Gmbh Use of dipyridamole in combination with antithrombotics for treatment and prevention of thromboembolic diseases
US7358091B2 (en) * 2004-12-14 2008-04-15 Portola Pharmaceuticals, Inc. Device and methods for identifying and treating aspirin non-responsive patients

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