ITVC980012A1 - Impiego della batocuproina (acido disolfonico) per la valutazione del potere antiossidante (pao) nei liquidi e soluzioni. - Google Patents
Impiego della batocuproina (acido disolfonico) per la valutazione del potere antiossidante (pao) nei liquidi e soluzioni. Download PDFInfo
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Description
IMPIEGO DELLA BATOCUPROINA PER LA VALUTAZIONE DEL POTERE ANTIOSSIDANTE (PAO) NEI LIQUIDI E SOLUZIONI.
Il presente trovato riguarda il settore delle analisi chimiche e più specificatamente un procedimento per la determinazione del Potere Antiossidante di un liquido e/o soluzione, organico o non, impiegando la Batucuproina. Secondo il trovato, si valuta il potere antiossidante di un liquido e/o soluzione, organico o, non messo a competere con la Batocuproina in una soluzione di Solfato di Rame. Il risultato raffrontato all'azione riducente di una soluzione a concentrazione nota, di acido urico nelle soluzioni acquose e alfatocoferolo nelle soluzioni oleose, permette di esprimere valori in μmoli /litro.
Attualmente il metodo usato per valutare il Potere Antiossidante di un campione, valido solo in soluzioni acquose, prevede le fasi di:
ricostituire una soluzione di ABTS (2,2'-Azino-di-(3-etilbenztiazolin sulfonato) con la Metamioglobina, che è un composto stabile solo 8 ore a temperatura ambiente o 48 ore a 2/+8° ;e
mettere a competere questa soluzione con il campione in esame su una soluzione di perossido di idrogeno .
Compito del trovato è quello di fornire un metodo di valutazione del Potere Antiossidante di un liquido e/o soluzione, lavorando con un marker che sia una sostanza stabile e fornendo valori espressi in μmoli/litro.
E' noto che la Batocuproina (BC) forma complessi stabili con la forma monovalente del rame Cu. Questo tipo di reazione è specifico per il Cu(I) e non per la forma divalente Cu(II).
In soluzione, il Cu (II) può essere ridotto a Cu (I) da una serie di composti riducenti, una classe di composti prevalentemente rappresentata dagli antiossidanti non enzimatici sia liposolubili (tocoferoli, carotenoidi ,ecc.) che idrosolubiili (acido ascorbico, acido urico, bilirubina,ecc.). L'inventore ha evidenziato che, quando la reazione viene fatta avvenire in una soluzione tampone contenente Batocuproina (BC), l'entità del complesso formatosi è rappresentativa della concentrazione di riducenti e quindi, con buona approssimazione, di antiossidanti presenti nel sistema. Gli aspetti quantitativi di questa reazione possono essere facilmente misurati spettrofotometricamente a 480 nm sia con macro che con micrometodi, con l'impiego di una serie appropriata di standard di composti riducenti a concentrazione nota.
Costituisce quindi una prima caratteristica del presente trovato quella di valutare il Potere Antiossidante del campione (plasma, siero, altri liquidi biologici e non) mediante -l'aggiunta di Solfato di Rame e la misurazione dello ione Cu(I) formatosi per riduzione dello ione Cu (II) ad opera di tutte le sostanze antiossidanti presenti.
Costituisce una seconda caratteristica peculiare del trovato quella che la rivelazione dello ione Cu(I) è effettuata misurando la formazione del complesso tra Cu(l) ed il chelante Batocuproina, (BC), pura nelle soluzioni oleose e nella forma disulfonato nelle soluzioni acquose. Tale complesso (stabile) presenta un tipico spettro di assorbimento con un massimo a 480-490 nm. I valori ottenuti sono quantizzati per comparazione con una curva standard ottenuta con campioni a concentrazione nota di acido urico, utilizzato come riducente tipo nelle soluzioni aquose, e di ex-tocoferolo nelle soluzioni oleose.
Ulteriori caratteristiche e vantaggi dell'invenzione risulteranno evidenti dalla descrizione che segue di una preferita forma di attuazione del procedimento.
Secondo il trovato, la determinazione del Potere Antiossidante di un campione nelle soluzioni aquose prevede le seguenti fasi:
1: Trattamento del campione, consistente nel miscelare, in una provetta, 485 μl di tampone (soluzione salina tamponata con buffer fosfato 10 mM a pH 7,4) contenente batocuproina disulfonato alla concentrazione finale di 360 μΜ con 15μ1 di campione e nell'agitare su Vortex. Si prepara allo stesso modo il bianco (utilizzando 15 μl di acqua) e gli standards (utilizzando 15 μl di soluzioni standards di acido urico a concentrazione nota). Se si utilizzano pozzetti a maggiore o minore capacità, si deve mantenere una diluizione 1:40 del campione.
2: Si dispongono 200 μΐ di ciascun campione nei pozzetti di una piastra a completamento multiplo (multiwell) o in singoli pozzetti.
3: Si effettua una prima lettura spettrofotometrica dei campioni a 490 nm.
4: Si aggiunge ad ogni pozzetto 50 μΐ di una soluzione di Solfato di Rame e si incuba, a temperatura ambiente per 3 minuti.
5: Si aggiunge ad ogni pozzetto 50 μΐ di soluzione stoppante (EDTA= acido etilendiamminat etracetico)
6 : Si effettua una seconda lettura spettrofotometrica dei campioni a 490 nm.
7: Si sottraggono i valori della prima lettura a quelli ottenuti nella seconda.
8 : Coi valori relativi ai campioni standard cioè ai campioni a concentrazione nota di acido urico, utilizzato come riducente tipo, si ricava una curva standard.
9: Si calcolano i valori dei campioni ignoti in base ai valori ottenuti dalla curva standard precedentemente ricavata e si moltiplica per il fattore di correzione 2189 in modo che i valori siano espressi come equivalenti riducenti in μmoli/litro.
Claims (1)
- RIVENDICAZIONI 1. Uso della Batucoproina per determinare il valore del potere antiossidante di un liquido organico e non, messo a competere in una soluzione di Solfato di Rame 2. Uso dell’acido urico come campione standard di riducente tipo per ottenere una curva standard di comparazione da utilizzare per ricavare i valori quantitativi, mediante confronto con le misurazioni, effettuate su una sostanza in soluzione acquosa della quale si vuole conoscere il potere antiossidante
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