JP2000206115A - 抗体断片を用いた免疫凝集反応試薬 - Google Patents
抗体断片を用いた免疫凝集反応試薬Info
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- JP2000206115A JP2000206115A JP11004154A JP415499A JP2000206115A JP 2000206115 A JP2000206115 A JP 2000206115A JP 11004154 A JP11004154 A JP 11004154A JP 415499 A JP415499 A JP 415499A JP 2000206115 A JP2000206115 A JP 2000206115A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】本発明は、従来と同等以上の反応性を有する免
疫凝集反応試薬、即ち高感度かつ精度の良好な免疫凝集
反応試薬とその調製方法、並びにその測定方法を提供す
ることを目的とする。 【解決手段】還元剤で断片化したモノクローナル抗体及
びポリクローナル抗体を不溶性担体に物理的又は化学的
に結合することにより、高感度かつ低濃度域から高濃度
域まで幅広い直線性を有する免疫凝集反応試薬が得られ
た。
疫凝集反応試薬、即ち高感度かつ精度の良好な免疫凝集
反応試薬とその調製方法、並びにその測定方法を提供す
ることを目的とする。 【解決手段】還元剤で断片化したモノクローナル抗体及
びポリクローナル抗体を不溶性担体に物理的又は化学的
に結合することにより、高感度かつ低濃度域から高濃度
域まで幅広い直線性を有する免疫凝集反応試薬が得られ
た。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、抗原抗体反応を利
用して免疫学的に被検液中の成分を測定する試薬におい
て、該試薬に用いる抗体を断片化することにより、幅広
い測定範囲を有する試薬、及び製造方法に関するもので
ある。
用して免疫学的に被検液中の成分を測定する試薬におい
て、該試薬に用いる抗体を断片化することにより、幅広
い測定範囲を有する試薬、及び製造方法に関するもので
ある。
【０００２】
【従来の技術】被検液中の特定成分を測定する方法とし
て、抗原抗体反応を利用した免疫学的測定試薬が数多く
あり、より高感度に、より精度良く幅広い範囲で測定す
るために各種の改良が試みられてきた。免疫学的測定試
薬の製造には、測定したい特定成分に対する抗体を不溶
性担体に担持させる際に、未処理の抗体を材料とするの
が一般的である。非特異反応の影響を避けるためにＦac
b断片を使用する方法（特公昭６３−４１４２６、特公
昭６３−６３８６３）や、Ｆ(ab')2やＦab断片を使用す
る方法もある。
て、抗原抗体反応を利用した免疫学的測定試薬が数多く
あり、より高感度に、より精度良く幅広い範囲で測定す
るために各種の改良が試みられてきた。免疫学的測定試
薬の製造には、測定したい特定成分に対する抗体を不溶
性担体に担持させる際に、未処理の抗体を材料とするの
が一般的である。非特異反応の影響を避けるためにＦac
b断片を使用する方法（特公昭６３−４１４２６、特公
昭６３−６３８６３）や、Ｆ(ab')2やＦab断片を使用す
る方法もある。
【０００３】しかしながら、ＦabやＦ(ab')2断片にはＦ
c部分が欠落しているため、未処理の抗体に比べて不溶
性担体に担持させにくいという問題点があった。また、
動物種によってはＦacb断片に処理出来ないものや抗体
のクラスによっては酵素処理に耐えられないものも存在
する。
c部分が欠落しているため、未処理の抗体に比べて不溶
性担体に担持させにくいという問題点があった。また、
動物種によってはＦacb断片に処理出来ないものや抗体
のクラスによっては酵素処理に耐えられないものも存在
する。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、従来と同等
以上の反応性を有する免疫凝集反応試薬、即ち高感度か
つ精度の良好な免疫凝集反応試薬とその調製方法、並び
に、その測定方法を提供することを目的とする。
以上の反応性を有する免疫凝集反応試薬、即ち高感度か
つ精度の良好な免疫凝集反応試薬とその調製方法、並び
に、その測定方法を提供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明は、上記課題を解
決するために、モノクローナル抗体だけでなく、ポリク
ローナル抗体も含めた免疫グロブリンを断片化し、不溶
性担体に担持させることによってなる発明である。ま
た、本発明は、モノクローナル抗体又はポリクローナル
抗体を還元剤で処理することにより断片化したものを用
いて、物理的又は化学的に、不溶性担体に該抗体を担持
させることを特徴とする免疫学的測定試薬の調製方法の
発明である。
決するために、モノクローナル抗体だけでなく、ポリク
ローナル抗体も含めた免疫グロブリンを断片化し、不溶
性担体に担持させることによってなる発明である。ま
た、本発明は、モノクローナル抗体又はポリクローナル
抗体を還元剤で処理することにより断片化したものを用
いて、物理的又は化学的に、不溶性担体に該抗体を担持
させることを特徴とする免疫学的測定試薬の調製方法の
発明である。
【０００６】更に、本発明は、モノクローナル抗体又は
ポリクローナル抗体を還元剤で処理することにより断片
化したものを用いて、物理的又は化学的に該抗体を担持
させた免疫学的測定試薬を用いることを特徴とする免疫
学的測定方法の発明である。すなわち、本発明者らは、
免疫グロブリンを不溶性担体に担持させるに際して、単
に抗体を担持させるだけでは、抗体によっては反応性が
出にくいものがあることから、これらを何らかの手段を
用いてより反応性を増加する方法を見いだすべく、鋭意
研究を重ねてきた。その結果、モノクローナル抗体だけ
ではなく、ポリクローナル抗体を還元剤にて処理するこ
とにより免疫グロブリンを断片化し、不溶性担体に担持
させるという方法により、従来の抗体を不溶性担体に担
持させる方法と比較して、より良い反応性を維持できる
ことを見出し、本発明を完成するに至った。
ポリクローナル抗体を還元剤で処理することにより断片
化したものを用いて、物理的又は化学的に該抗体を担持
させた免疫学的測定試薬を用いることを特徴とする免疫
学的測定方法の発明である。すなわち、本発明者らは、
免疫グロブリンを不溶性担体に担持させるに際して、単
に抗体を担持させるだけでは、抗体によっては反応性が
出にくいものがあることから、これらを何らかの手段を
用いてより反応性を増加する方法を見いだすべく、鋭意
研究を重ねてきた。その結果、モノクローナル抗体だけ
ではなく、ポリクローナル抗体を還元剤にて処理するこ
とにより免疫グロブリンを断片化し、不溶性担体に担持
させるという方法により、従来の抗体を不溶性担体に担
持させる方法と比較して、より良い反応性を維持できる
ことを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００７】本発明では、上記手段によって測定範囲が
広く、抗体の使用量が少ない免疫学的測定試薬の製造が
可能となる。その理由は以下のように推測される。抗体
を還元処理することにより、ヒンジ部およびＦｃ部位で
２つのＨ鎖をつないでいるＳ−Ｓ結合がはずれ、２つの
抗原認識部位を持つ１分子の抗体から１つの抗原認識部
位を持つ２分子の半抗体が生成される。２分子になるこ
とにより、立体障害などが低減し、実際の抗原抗体反応
に関わる抗原認識部位が増加すると考えられる。また、
この還元剤によるフラグメント化は、Ｆacb断片からも
製造することができる。
広く、抗体の使用量が少ない免疫学的測定試薬の製造が
可能となる。その理由は以下のように推測される。抗体
を還元処理することにより、ヒンジ部およびＦｃ部位で
２つのＨ鎖をつないでいるＳ−Ｓ結合がはずれ、２つの
抗原認識部位を持つ１分子の抗体から１つの抗原認識部
位を持つ２分子の半抗体が生成される。２分子になるこ
とにより、立体障害などが低減し、実際の抗原抗体反応
に関わる抗原認識部位が増加すると考えられる。また、
この還元剤によるフラグメント化は、Ｆacb断片からも
製造することができる。
【０００８】また、本発明において使用される抗体は、
動物種を限定するのではなく、例えば、マウス、ラッ
ト、ウサギ、ヤギ、羊、ヒト、などに由来する、モノク
ローナル抗体、もしくはポリクローナル抗体以外にも、
キメラ抗体などのように修飾を加えた抗体を使用するこ
とも可能であり、特に抗体の種類を限定するものではな
い。これら免疫グロブリンは、市販のものを用いてもよ
いし、動物血清からや細胞の培養上清から公知の方法で
取得されるものを用いてもよい。
動物種を限定するのではなく、例えば、マウス、ラッ
ト、ウサギ、ヤギ、羊、ヒト、などに由来する、モノク
ローナル抗体、もしくはポリクローナル抗体以外にも、
キメラ抗体などのように修飾を加えた抗体を使用するこ
とも可能であり、特に抗体の種類を限定するものではな
い。これら免疫グロブリンは、市販のものを用いてもよ
いし、動物血清からや細胞の培養上清から公知の方法で
取得されるものを用いてもよい。
【０００９】本発明で使用される担体は、抗体を担持で
き、担持後の担体が抗原抗体反応を起こした場合に凝集
するものであれば、公知の担体が特に制限されずに使用
できる。目的の担持不溶性担体を調製する際の担持抗体
量は特に制限されるものではなく、理論上担持可能な量
よりも少なくてもよいし、大過剰でもよい。
き、担持後の担体が抗原抗体反応を起こした場合に凝集
するものであれば、公知の担体が特に制限されずに使用
できる。目的の担持不溶性担体を調製する際の担持抗体
量は特に制限されるものではなく、理論上担持可能な量
よりも少なくてもよいし、大過剰でもよい。
【００１０】また、本発明で使用される担体は、抗体を
担持でき、担持後の担体が抗原抗体反応を起こした場合
に標識物がいかなる方法であってもその活性を測定可能
であれば、公知の担体が特に制限されずに使用できる。
担持でき、担持後の担体が抗原抗体反応を起こした場合
に標識物がいかなる方法であってもその活性を測定可能
であれば、公知の担体が特に制限されずに使用できる。
【００１１】免疫凝集反応に好適に使用できる担体は、
通常の免疫学的測定法で用いられる不溶性担体であれば
いずれも使用可能であるが、例示すれば、ポリスチレ
ン、スチレン−メタクリル酸共重合体、スチレン−グリ
シジル（メタ）アクリレート共重合体、スチレン−スチ
レンスルホン酸塩共重合体、メタクリル酸重合体、アク
リル酸重合体、アクリロニトリルブタジエンスチレン共
重合体、塩化ビニル−アクリル酸エステル共重合体、ポ
リ酢酸ビニルアクリレートなどのラテックス等の有機高
分子物質の微粒子、あるいはシリカ、シリカーアルミ
ナ、アルミナの様な無機酸化物又は該無機酸化物等にシ
ランカップリング処理等を施し、官能基を導入した無機
粒子、ヒトＯ型血球、ヒツジ赤血球等の生物由来の粒子
等が挙げられるが、これらに限定するものではない。な
かでもラテックス粒子は人工担体であり、目的に応じて
担体表面を化学的処理しやすいこと、また非特異反応が
起こりにくいことなどの点から特に好ましく用いられ
る。そのなかで、種々の変性ラテックスや磁性ラテック
ス等も必要に応じて使用できることは言うまでもない。
通常の免疫学的測定法で用いられる不溶性担体であれば
いずれも使用可能であるが、例示すれば、ポリスチレ
ン、スチレン−メタクリル酸共重合体、スチレン−グリ
シジル（メタ）アクリレート共重合体、スチレン−スチ
レンスルホン酸塩共重合体、メタクリル酸重合体、アク
リル酸重合体、アクリロニトリルブタジエンスチレン共
重合体、塩化ビニル−アクリル酸エステル共重合体、ポ
リ酢酸ビニルアクリレートなどのラテックス等の有機高
分子物質の微粒子、あるいはシリカ、シリカーアルミ
ナ、アルミナの様な無機酸化物又は該無機酸化物等にシ
ランカップリング処理等を施し、官能基を導入した無機
粒子、ヒトＯ型血球、ヒツジ赤血球等の生物由来の粒子
等が挙げられるが、これらに限定するものではない。な
かでもラテックス粒子は人工担体であり、目的に応じて
担体表面を化学的処理しやすいこと、また非特異反応が
起こりにくいことなどの点から特に好ましく用いられ
る。そのなかで、種々の変性ラテックスや磁性ラテック
ス等も必要に応じて使用できることは言うまでもない。
【００１２】上記担体の粒径も特に限定されるものでは
ないが、抗原抗体反応後の凝集の起こり易さや凝集の判
別のし易さ等の観点から平均粒径が０．０５〜１０μｍ
の担体を使用するのが好適である。また、担体の使用量
は、抗体や抗原の種類によって適宜決定すればよいが、
担持効率や操作性の観点から、測定時の溶液中の濃度が
０．００１〜１５ｗｔ％となるように用いるのが好適で
あり、懸濁液の形で使用されるのが一般的である。
ないが、抗原抗体反応後の凝集の起こり易さや凝集の判
別のし易さ等の観点から平均粒径が０．０５〜１０μｍ
の担体を使用するのが好適である。また、担体の使用量
は、抗体や抗原の種類によって適宜決定すればよいが、
担持効率や操作性の観点から、測定時の溶液中の濃度が
０．００１〜１５ｗｔ％となるように用いるのが好適で
あり、懸濁液の形で使用されるのが一般的である。
【００１３】本発明で担体に担持される抗体は、それぞ
れ検査対象となる抗原と抗原抗体反応を起こすものであ
ればよい。本発明で好適に使用される抗体を例示すれ
ば、抗α1-m抗体、抗ペプシノーゲン抗体、抗前立腺特
異抗原（ＰＳＡ）抗体、抗β2-ｍ抗体、抗フィブリノー
ゲン抗体、抗線維素分解産物（ＦＤＰ）抗体、抗アルブ
ミン抗体、抗ヒトＩｇＧ抗体、抗Ｃ反応性蛋白（ＣＲ
Ｐ）抗体、抗フェリチン抗体、抗α−フェトプロテイン
（ＡＦＰ）抗体、抗インシュリン抗体等が挙げられる。
れ検査対象となる抗原と抗原抗体反応を起こすものであ
ればよい。本発明で好適に使用される抗体を例示すれ
ば、抗α1-m抗体、抗ペプシノーゲン抗体、抗前立腺特
異抗原（ＰＳＡ）抗体、抗β2-ｍ抗体、抗フィブリノー
ゲン抗体、抗線維素分解産物（ＦＤＰ）抗体、抗アルブ
ミン抗体、抗ヒトＩｇＧ抗体、抗Ｃ反応性蛋白（ＣＲ
Ｐ）抗体、抗フェリチン抗体、抗α−フェトプロテイン
（ＡＦＰ）抗体、抗インシュリン抗体等が挙げられる。
【００１４】抗体を担体に担持させる方法としては、既
知の方法が特に限定されず使用できる。基本的な担持方
法としては物理的吸着法と化学的結合法があり、担持操
作の簡便性という点で物理的吸着法が好適に使用され
る。
知の方法が特に限定されず使用できる。基本的な担持方
法としては物理的吸着法と化学的結合法があり、担持操
作の簡便性という点で物理的吸着法が好適に使用され
る。
【００１５】本発明の免疫学的測定試薬は、抗体を担体
に担持し、検体中の抗原と接触させておこる免疫反応に
伴う現象を利用した試薬である。ラテックス凝集法を利
用した定性試薬としては、ラテックス凝集試薬、マイク
ロタイター試薬が、定量試薬としては、凝集の度合を光
学的に測定するラテックス定量試薬が例示できる。
に担持し、検体中の抗原と接触させておこる免疫反応に
伴う現象を利用した試薬である。ラテックス凝集法を利
用した定性試薬としては、ラテックス凝集試薬、マイク
ロタイター試薬が、定量試薬としては、凝集の度合を光
学的に測定するラテックス定量試薬が例示できる。
【００１６】免疫グロブリン断片を含有させる溶液とし
ては、特に限定するものではないが、該免疫グロブリン
断片が不溶性担体上に吸着あるいは結合するのを妨げる
性質を有しないものが良い。例えば精製水、又はｐＨ
５．０〜１０．０、より好ましくはｐＨ６．５〜８．５
の中性付近に緩衝作用を有するリン酸緩衝液、トリス緩
衝液、グッド緩衝液、グリシン緩衝液、ホウ酸緩衝液等
が例示される。また、これら緩衝液の濃度は、通常１０
〜５００mM、好ましくは１０〜２００mMの範囲から適宜
選択される。また、この溶液中には、該免疫グロブリン
断片が不溶性担体に吸着あるいは結合するのを妨げない
量であれば、例えば糖類、塩化ナトリウム等の塩類、界
面活性剤、防腐剤、タンパク質等が含まれていても良
い。
ては、特に限定するものではないが、該免疫グロブリン
断片が不溶性担体上に吸着あるいは結合するのを妨げる
性質を有しないものが良い。例えば精製水、又はｐＨ
５．０〜１０．０、より好ましくはｐＨ６．５〜８．５
の中性付近に緩衝作用を有するリン酸緩衝液、トリス緩
衝液、グッド緩衝液、グリシン緩衝液、ホウ酸緩衝液等
が例示される。また、これら緩衝液の濃度は、通常１０
〜５００mM、好ましくは１０〜２００mMの範囲から適宜
選択される。また、この溶液中には、該免疫グロブリン
断片が不溶性担体に吸着あるいは結合するのを妨げない
量であれば、例えば糖類、塩化ナトリウム等の塩類、界
面活性剤、防腐剤、タンパク質等が含まれていても良
い。
【００１７】本発明に使用する還元剤は、特に特定する
ものではなく、還元作用を有するものであれば良い。例
えば２−メルカプトエタノール、２−メルカプトエチル
アミン塩酸塩、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）などが挙
げられる。また、これらの濃度としては、免疫グロブリ
ンを半分子に還元できる濃度であれば良く、抗体の性質
により適宜選択される。また、より還元作用を有効にす
るために、その反応液中に尿素、ドデシル硫酸ナトリウ
ム（ＳＤＳ）、ＴｒｉｔｏｎＸ等の変性剤を用いてもよ
く、その濃度は抗体の性質により適宜選択される。
ものではなく、還元作用を有するものであれば良い。例
えば２−メルカプトエタノール、２−メルカプトエチル
アミン塩酸塩、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）などが挙
げられる。また、これらの濃度としては、免疫グロブリ
ンを半分子に還元できる濃度であれば良く、抗体の性質
により適宜選択される。また、より還元作用を有効にす
るために、その反応液中に尿素、ドデシル硫酸ナトリウ
ム（ＳＤＳ）、ＴｒｉｔｏｎＸ等の変性剤を用いてもよ
く、その濃度は抗体の性質により適宜選択される。
【００１８】本発明に用いる上記免疫グロブリン断片
は、ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル
電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）法で分析することによっ
て判別できる。電気泳動像は、還元剤未処理免疫グロブ
リンをサンプルとした場合、分子量約１５０,０００で
あるが、断片化したサンプルは、分子量約７０,０００
前後に確認できる。また、免疫グロブリン断片を不溶性
担体に物理的に担持させた後、界面活性剤等で単離した
場合においても、ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）法で分析す
ることによって判別できる。
は、ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル
電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）法で分析することによっ
て判別できる。電気泳動像は、還元剤未処理免疫グロブ
リンをサンプルとした場合、分子量約１５０,０００で
あるが、断片化したサンプルは、分子量約７０,０００
前後に確認できる。また、免疫グロブリン断片を不溶性
担体に物理的に担持させた後、界面活性剤等で単離した
場合においても、ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）法で分析す
ることによって判別できる。
【００１９】次に本発明の免疫凝集反応試薬の例として
ラテックス定量試薬の試薬形態を示すが、例示における
各物質の濃度は、試薬として使いやすい範囲を例示する
ものであって、本発明を限定するものではない。
ラテックス定量試薬の試薬形態を示すが、例示における
各物質の濃度は、試薬として使いやすい範囲を例示する
ものであって、本発明を限定するものではない。
【００２０】下記（１）、（２）及び（３）を基本成分
とする混合液 （１）緩衝液 ２０〜１０００ｍＭ、ｐＨ４〜１２ （２）免疫グロブリン断片を担持した担体０．０１〜
０．５％（ｗ／ｖ） （３）塩化ナトリウム ５０〜３００ｍＭ 緩衝液としては、トリス緩衝液、リン酸緩衝液、グリシ
ン緩衝液、ホウ酸緩衝液又はグッド緩衝液等が例示でき
る。
とする混合液 （１）緩衝液 ２０〜１０００ｍＭ、ｐＨ４〜１２ （２）免疫グロブリン断片を担持した担体０．０１〜
０．５％（ｗ／ｖ） （３）塩化ナトリウム ５０〜３００ｍＭ 緩衝液としては、トリス緩衝液、リン酸緩衝液、グリシ
ン緩衝液、ホウ酸緩衝液又はグッド緩衝液等が例示でき
る。
【００２１】上記試薬の製造方法の例としては次の方法
が例示できる。まずラテックス粒子を０．５〜１０％
（ｗ／ｖ）懸濁した緩衝液に、免疫グロブリン断片を
０．０５〜１００ｍｇ／ｍｌ含む緩衝液を混合した後、
３０分〜４８時間、４〜６０℃の条件で振とうする。そ
の後に遠心分離等により担体と溶液を分離し未結合の免
疫グロブリン断片を除去する。得られたラテックス粒子
を上記の緩衝液で洗浄することにより、目的の免疫グロ
ブリン断片担持ラテックス粒子が得られる。なお、ここ
でブロッキング処理、すなわち反応に関わらないタンパ
ク質、例えば、ウシ血清アルブミン（以下ＢＳＡと略
す）、乳タンパク質、卵白アルブミンおよびその変性物
などを含有する溶液中に浸漬する処理を行い、測定時の
非特異反応を防ぐことが望ましい。次に測定に必要なだ
けの分散性保持するための分散媒を添加し、担体を緩衝
液に分散させ上記試薬とする。
が例示できる。まずラテックス粒子を０．５〜１０％
（ｗ／ｖ）懸濁した緩衝液に、免疫グロブリン断片を
０．０５〜１００ｍｇ／ｍｌ含む緩衝液を混合した後、
３０分〜４８時間、４〜６０℃の条件で振とうする。そ
の後に遠心分離等により担体と溶液を分離し未結合の免
疫グロブリン断片を除去する。得られたラテックス粒子
を上記の緩衝液で洗浄することにより、目的の免疫グロ
ブリン断片担持ラテックス粒子が得られる。なお、ここ
でブロッキング処理、すなわち反応に関わらないタンパ
ク質、例えば、ウシ血清アルブミン（以下ＢＳＡと略
す）、乳タンパク質、卵白アルブミンおよびその変性物
などを含有する溶液中に浸漬する処理を行い、測定時の
非特異反応を防ぐことが望ましい。次に測定に必要なだ
けの分散性保持するための分散媒を添加し、担体を緩衝
液に分散させ上記試薬とする。
【００２２】次に本発明の免疫グロブリン断片の製造方
法を以下に例示する。まず、免疫グロブリン０．０５〜
１００ｍｇ／ｍｌを含む上記緩衝液を脱酸素状態、例え
ば減圧状態で脱気する。還元剤、例えば２−メルカプト
エタノールを１〜２０μｌ、抗体の性質等に合わせて適
宜選択する、を添加した後３０分〜４８時間、４〜６０
℃、好ましくは２０〜３７℃の条件でインキュベートす
る。その後、フリーのＳＨ基をブロックするもの例え
ば、Ｎ−エチルマレイミド等を適宜添加してＳＨ基の再
会合を防止する。ＥＤＴＡを添加した緩衝液を用いて、
分子量分画用のカラム等を使用することにより、目的と
する免疫グロブリン断片を分取する。
法を以下に例示する。まず、免疫グロブリン０．０５〜
１００ｍｇ／ｍｌを含む上記緩衝液を脱酸素状態、例え
ば減圧状態で脱気する。還元剤、例えば２−メルカプト
エタノールを１〜２０μｌ、抗体の性質等に合わせて適
宜選択する、を添加した後３０分〜４８時間、４〜６０
℃、好ましくは２０〜３７℃の条件でインキュベートす
る。その後、フリーのＳＨ基をブロックするもの例え
ば、Ｎ−エチルマレイミド等を適宜添加してＳＨ基の再
会合を防止する。ＥＤＴＡを添加した緩衝液を用いて、
分子量分画用のカラム等を使用することにより、目的と
する免疫グロブリン断片を分取する。
【００２３】
【実施例】以下、実施例を上げて本発明を詳細に説明す
るが、本発明はこれらの実施例に記載の範囲に限定され
るものではない。
るが、本発明はこれらの実施例に記載の範囲に限定され
るものではない。
【００２４】実施例１ （１）抗ヒト前立腺特異抗原抗体（抗ヒトＰＳＡ抗体）
の還元処理。 抗ヒトＰＳＡモノクローナル抗体Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄをそれ
ぞれ１０ｍｇ／ｍｌの濃度になるようｐＨ７．２の０．
０１Ｍリン酸緩衝液（以下ＰＢＳと略す）にて調製し、
１ｍｌに対し１．５μｌの２−メルカプトエタノール
（和光純薬工業）を添加する。３７℃で９０分インキュ
ベートした後、Ｎ−エチルマレイミド（Ｓｉｇｍａ）を
０．０１ｍｇ添加する。３７℃で１０分インキュベート
した後、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００（ファルマシア）カラ
ムを用いて、２０ｍＭのＥＤＴＡ、０．１Ｍリン酸緩衝
液でゲル濾過する事により目的の分画を得ることができ
る。この免疫グロブリン断片を以下の調製に使用した。
の還元処理。 抗ヒトＰＳＡモノクローナル抗体Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄをそれ
ぞれ１０ｍｇ／ｍｌの濃度になるようｐＨ７．２の０．
０１Ｍリン酸緩衝液（以下ＰＢＳと略す）にて調製し、
１ｍｌに対し１．５μｌの２−メルカプトエタノール
（和光純薬工業）を添加する。３７℃で９０分インキュ
ベートした後、Ｎ−エチルマレイミド（Ｓｉｇｍａ）を
０．０１ｍｇ添加する。３７℃で１０分インキュベート
した後、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００（ファルマシア）カラ
ムを用いて、２０ｍＭのＥＤＴＡ、０．１Ｍリン酸緩衝
液でゲル濾過する事により目的の分画を得ることができ
る。この免疫グロブリン断片を以下の調製に使用した。
【００２５】（２）還元処理による断片化抗ＰＳＡ抗体
担持ラテックス懸濁液の調製。 平均粒径０．３μｍのポリスチレン粒子をｐＨ７．２の
ＰＢＳで希釈してラテックス濃度が５％（ｗ／ｖ）の懸
濁液を２ｍｌ調製した。次いで上記の断片化した抗ＰＳ
Ａのモノクローナル抗体をＰＢＳで希釈した溶液（１０
ｍｇ／ｍｌ）を１ｍｌ加え混合した。３７℃で４時間振
とうした後、未反応の抗体を遠心分離により除去し、Ｂ
ＳＡ５％を含む水溶液１ｍｌを添加した。次いで９９ｍ
ｌの０．１Ｍ塩化ナトリウムと０．１％アジ化ナトリウ
ムを含むｐＨ８．０の０．１ＭのＨＥＰＥＳ緩衝液（以
下この混合液をＨＥＰＥＳ−Ｓと略す）を加えて懸濁し
て調製した。
担持ラテックス懸濁液の調製。 平均粒径０．３μｍのポリスチレン粒子をｐＨ７．２の
ＰＢＳで希釈してラテックス濃度が５％（ｗ／ｖ）の懸
濁液を２ｍｌ調製した。次いで上記の断片化した抗ＰＳ
Ａのモノクローナル抗体をＰＢＳで希釈した溶液（１０
ｍｇ／ｍｌ）を１ｍｌ加え混合した。３７℃で４時間振
とうした後、未反応の抗体を遠心分離により除去し、Ｂ
ＳＡ５％を含む水溶液１ｍｌを添加した。次いで９９ｍ
ｌの０．１Ｍ塩化ナトリウムと０．１％アジ化ナトリウ
ムを含むｐＨ８．０の０．１ＭのＨＥＰＥＳ緩衝液（以
下この混合液をＨＥＰＥＳ−Ｓと略す）を加えて懸濁し
て調製した。
【００２６】（３）ＰＳＡ被検液の調製。 ０．１ＭのＨＥＰＥＳ−Ｓ、ＰＳＡ抗原溶液を０．１Ｍ
のＨＥＰＥＳ−Ｓで希釈して、０,０． ２１，０．８
６，２．５９，７．７７，２３．３，７０，２１０ｎｇ
／ｍｌに調製して被検液とした。
のＨＥＰＥＳ−Ｓで希釈して、０,０． ２１，０．８
６，２．５９，７．７７，２３．３，７０，２１０ｎｇ
／ｍｌに調製して被検液とした。
【００２７】（４）測定法。 上記懸濁液３００μｌに被検液２０μｌをプラスチック
セル内で添加攪拌した後、３７℃で約１０分間の波長５
４６ｎｍにおける吸光度変化量を測定した。以上の操作
には、自動分析装置日立７０７０を使用した。
セル内で添加攪拌した後、３７℃で約１０分間の波長５
４６ｎｍにおける吸光度変化量を測定した。以上の操作
には、自動分析装置日立７０７０を使用した。
【００２８】（５）吸光度変化量との関係。 上記ＰＳＡ被検液を上記調製試薬、還元処理により断片
化した抗ＰＳＡ抗体担持ラテックス懸濁液で測定し、結
果を表１に示した。
化した抗ＰＳＡ抗体担持ラテックス懸濁液で測定し、結
果を表１に示した。
【００２９】比較例１ （１）抗ＰＳＡ抗体担持ラテックス懸濁液の調製。 平均粒径０．３μｍのポリスチレン粒子をＰＢＳで希釈
してラテックス濃度が５％（ｗ／ｖ）の懸濁液を２ｍｌ
調製した。次いで抗ＰＳＡのモノクローナル抗体をＰＢ
Ｓで希釈した溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）を１ｍｌ加え混合
した。３７℃で４時間振とうした後、未反応の抗体を遠
心分離により除去し、ＢＳＡ５％を含む水溶液１ｍｌを
添加した。次いで９９ｍｌの０．１Ｍ塩化ナトリウムと
０．１％アジ化ナトリウムを含むｐＨ８．０の０．１Ｍ
のＨＥＰＥＳ−Ｓを加えて懸濁して調製した。
してラテックス濃度が５％（ｗ／ｖ）の懸濁液を２ｍｌ
調製した。次いで抗ＰＳＡのモノクローナル抗体をＰＢ
Ｓで希釈した溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）を１ｍｌ加え混合
した。３７℃で４時間振とうした後、未反応の抗体を遠
心分離により除去し、ＢＳＡ５％を含む水溶液１ｍｌを
添加した。次いで９９ｍｌの０．１Ｍ塩化ナトリウムと
０．１％アジ化ナトリウムを含むｐＨ８．０の０．１Ｍ
のＨＥＰＥＳ−Ｓを加えて懸濁して調製した。
【００３０】（２）ＰＳＡ被検液の調製及び測定。 調製及び測定は、断片化ＰＳＡ抗体担持ラテックスと同
様に行った。結果を表１に示す。
様に行った。結果を表１に示す。
【００３１】
【表１】
【００３２】実施例２ （１）抗ヒトアルブミン抗体（抗ヒトＡｌｂ抗体）の還
元処理。 抗ヒトＡｌｂモノクローナル抗体Ａを１０ｍｇ／ｍｌの
濃度になるよう０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）
にて調製し、１ｍｌに対し１．５μｌの２−メルカプト
エタノール（和光純薬工業）を添加する。３７℃で９０
分インキュベートした後、Ｎ−エチルマレイミド（Ｓｉ
ｇｍａ）を０．０１ｍｇ添加する。３７℃で１０分イン
キュベートした後、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００（ファルマ
シア）カラムを用いて、２０ｍＭのＥＤＴＡ、０．１Ｍ
リン酸緩衝液でゲル濾過することにより目的の分画を得
ることができる。この免疫グロブリン断片を以下の調製
に使用した。
元処理。 抗ヒトＡｌｂモノクローナル抗体Ａを１０ｍｇ／ｍｌの
濃度になるよう０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）
にて調製し、１ｍｌに対し１．５μｌの２−メルカプト
エタノール（和光純薬工業）を添加する。３７℃で９０
分インキュベートした後、Ｎ−エチルマレイミド（Ｓｉ
ｇｍａ）を０．０１ｍｇ添加する。３７℃で１０分イン
キュベートした後、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００（ファルマ
シア）カラムを用いて、２０ｍＭのＥＤＴＡ、０．１Ｍ
リン酸緩衝液でゲル濾過することにより目的の分画を得
ることができる。この免疫グロブリン断片を以下の調製
に使用した。
【００３３】（２）抗ヒトＡｌｂ抗体Ｆａｃｂフラグメ
ントの還元処理。 抗ヒトＡｌｂモノクローナル抗体Ａを１０ｍｇ／ｍｌの
濃度になるようＰＢＳにて調製し、塩酸でｐＨを２．５
に調製する。３０℃で６０分間インキュベートした後、
水酸化ナトリウムでｐＨを７．０に戻し、３７℃で９０
分間インキュベートすることで、Ｆａｃｂフラグメント
を得る。このフラグメント溶液１ｍｌに対し１．５μｌ
の２−メルカプトエタノール（和光純薬工業）を添加す
る。３７℃で９０分インキュベートした後、Ｎ−エチル
マレイミド（Ｓｉｇｍａ）を０．０１ｍｇ添加する。３
７℃で１０分インキュベートした後、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ
２００（ファルマシア）カラムを用いて、２０ｍＭのＥ
ＤＴＡ、０．１Ｍリン酸緩衝液でゲル濾過する事により
目的の分画を得ることができる。この免疫グロブリン断
片を以下の調製に使用した。
ントの還元処理。 抗ヒトＡｌｂモノクローナル抗体Ａを１０ｍｇ／ｍｌの
濃度になるようＰＢＳにて調製し、塩酸でｐＨを２．５
に調製する。３０℃で６０分間インキュベートした後、
水酸化ナトリウムでｐＨを７．０に戻し、３７℃で９０
分間インキュベートすることで、Ｆａｃｂフラグメント
を得る。このフラグメント溶液１ｍｌに対し１．５μｌ
の２−メルカプトエタノール（和光純薬工業）を添加す
る。３７℃で９０分インキュベートした後、Ｎ−エチル
マレイミド（Ｓｉｇｍａ）を０．０１ｍｇ添加する。３
７℃で１０分インキュベートした後、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ
２００（ファルマシア）カラムを用いて、２０ｍＭのＥ
ＤＴＡ、０．１Ｍリン酸緩衝液でゲル濾過する事により
目的の分画を得ることができる。この免疫グロブリン断
片を以下の調製に使用した。
【００３４】（３）還元処理による断片化抗Ａｌｂ抗体
担持ラテックス懸濁液の調製。 平均粒径０．１２μｍのポリスチレン粒子をＰＢＳで希
釈してラテックス濃度が５％（ｗ／ｖ）の懸濁液を２ｍ
ｌ調製した。次いで（１）で断片化した抗Ａｌｂのモノ
クローナル抗体をＰＢＳで希釈した溶液（１０ｍｇ／ｍ
ｌ）を１ｍｌ加え混合した。３７℃で４時間振とうした
後、未反応の抗体を遠心分離により除去し、ＢＳＡ５％
を含む水溶液１ｍｌを添加した。次いで９９ｍｌの０．
１Ｍ塩化ナトリウムと０．１％アジ化ナトリウムを含む
ｐＨ８．０の０．１ＭのＨＥＰＥＳを加えて懸濁して調
製した。
担持ラテックス懸濁液の調製。 平均粒径０．１２μｍのポリスチレン粒子をＰＢＳで希
釈してラテックス濃度が５％（ｗ／ｖ）の懸濁液を２ｍ
ｌ調製した。次いで（１）で断片化した抗Ａｌｂのモノ
クローナル抗体をＰＢＳで希釈した溶液（１０ｍｇ／ｍ
ｌ）を１ｍｌ加え混合した。３７℃で４時間振とうした
後、未反応の抗体を遠心分離により除去し、ＢＳＡ５％
を含む水溶液１ｍｌを添加した。次いで９９ｍｌの０．
１Ｍ塩化ナトリウムと０．１％アジ化ナトリウムを含む
ｐＨ８．０の０．１ＭのＨＥＰＥＳを加えて懸濁して調
製した。
【００３５】（４）Ｆacbフラグメントの還元処理によ
る断片化抗Ａｌｂ抗体担持ラテックス懸濁液の調製。 平均粒径０．１２μｍのポリスチレン粒子をＰＢＳで希
釈してラテックス濃度が５％（ｗ／ｖ）の懸濁液を２ｍ
ｌ調製した。次いで上記（２）で断片化した抗Ａｌｂの
モノクローナル抗体をＰＢＳで希釈した溶液（１０ｍｇ
／ｍｌ）を１ｍｌ加え混合した。３７℃で４時間振とう
した後、未反応の抗体を遠心分離により除去し、ＢＳＡ
５％を含む水溶液１ｍｌを添加した。次いで９９ｍｌの
０．１Ｍ塩化ナトリウムと０．１％アジ化ナトリウムを
含むｐＨ８．０の０．１ＭのＨＥＰＥＳを加えて懸濁し
て調製した。
る断片化抗Ａｌｂ抗体担持ラテックス懸濁液の調製。 平均粒径０．１２μｍのポリスチレン粒子をＰＢＳで希
釈してラテックス濃度が５％（ｗ／ｖ）の懸濁液を２ｍ
ｌ調製した。次いで上記（２）で断片化した抗Ａｌｂの
モノクローナル抗体をＰＢＳで希釈した溶液（１０ｍｇ
／ｍｌ）を１ｍｌ加え混合した。３７℃で４時間振とう
した後、未反応の抗体を遠心分離により除去し、ＢＳＡ
５％を含む水溶液１ｍｌを添加した。次いで９９ｍｌの
０．１Ｍ塩化ナトリウムと０．１％アジ化ナトリウムを
含むｐＨ８．０の０．１ＭのＨＥＰＥＳを加えて懸濁し
て調製した。
【００３６】（５）Ａｌｂ被検液の調製。 ０．１ＭのＨＥＰＥＳ−Ｓ、Ａｌｂ抗原溶液を０．１Ｍ
のＨＥＰＥＳ−Ｓで希釈して、０．２，０．４，０．
８，３．１，６．３，２５，５０μｇ／ｍｌに調製して
被検液とした。
のＨＥＰＥＳ−Ｓで希釈して、０．２，０．４，０．
８，３．１，６．３，２５，５０μｇ／ｍｌに調製して
被検液とした。
【００３７】（６）測定法。 上記懸濁液３００μｌに被検液５μｌをプラスチックセ
ル内で添加攪拌した後、３７℃で約５分間の波長６６０
ｎｍにおける吸光度変化量を測定した。以上の操作に
は、自動分析装置日立７０７０を用いた。
ル内で添加攪拌した後、３７℃で約５分間の波長６６０
ｎｍにおける吸光度変化量を測定した。以上の操作に
は、自動分析装置日立７０７０を用いた。
【００３８】（７）吸光度変化量との関係。 上記Ａｌｂ被検液を上記調製試薬で測定した結果を表２
及び図１に示した。
及び図１に示した。
【００３９】比較例２ （１）抗ヒトＡｌｂ抗体担持ラテックス懸濁液の調製。 平均粒径０．１２μｍのポリスチレン粒子を以下ＰＢＳ
で希釈してラテックス濃度が５％（ｗ／ｖ）の懸濁液を
２ｍｌ調製した。次いで抗Ａｌｂのモノクローナル抗体
Ａ、ＢをＰＢＳで希釈した溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）を１
ｍｌ加え混合した。３７℃で４時間振とうした後、未反
応の抗体を遠心分離により除去し、ＢＳＡ５％を含む水
溶液１ｍｌを添加した。次いで９９ｍｌの０．１Ｍ塩化
ナトリウムと０．１％アジ化ナトリウムを含むｐＨ８．
０の０．１ＭのＨＥＰＥＳ−Ｓを加えて懸濁して調製し
た。
で希釈してラテックス濃度が５％（ｗ／ｖ）の懸濁液を
２ｍｌ調製した。次いで抗Ａｌｂのモノクローナル抗体
Ａ、ＢをＰＢＳで希釈した溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）を１
ｍｌ加え混合した。３７℃で４時間振とうした後、未反
応の抗体を遠心分離により除去し、ＢＳＡ５％を含む水
溶液１ｍｌを添加した。次いで９９ｍｌの０．１Ｍ塩化
ナトリウムと０．１％アジ化ナトリウムを含むｐＨ８．
０の０．１ＭのＨＥＰＥＳ−Ｓを加えて懸濁して調製し
た。
【００４０】（２）Ａｌｂ被検液の調製及び測定。 Ａｌｂ被検液の調製並びに上記抗ヒトＡｌｂ抗体担持ラ
テックス懸濁液による測定は、実施例２と同様に行い、
結果を表２及び図１に示した。
テックス懸濁液による測定は、実施例２と同様に行い、
結果を表２及び図１に示した。
【００４１】
【表２】
【００４２】実施例３ （１）抗ヒトペプシノーゲンＩＩ抗体（抗ヒトＰＧＩＩ
抗体）の還元処理。 抗ヒトＰＧＩＩモノクローナル抗体Ａを１０ｍｇ／ｍｌ
の濃度になるようＰＢＳにて調製し、１ｍｌに対し１．
５μｌの２−メルカプトエタノール（和光純薬工業）を
添加する。３７℃で９０分インキュベートした後、Ｎ−
エチルマレイミド（Ｓｉｇｍａ）を０．０１ｍｇ添加す
る。３７℃で１０分インキュベートした後、Ｓｕｐｅｒ
ｄｅｘ２００（ファルマシア）カラムを用いて、２０ｍ
ＭのＥＤＴＡ、０．１Ｍリン酸緩衝液でゲル濾過する事
により目的の分画を得ることができる。この免疫グロブ
リン断片を以下の調製に使用した。
抗体）の還元処理。 抗ヒトＰＧＩＩモノクローナル抗体Ａを１０ｍｇ／ｍｌ
の濃度になるようＰＢＳにて調製し、１ｍｌに対し１．
５μｌの２−メルカプトエタノール（和光純薬工業）を
添加する。３７℃で９０分インキュベートした後、Ｎ−
エチルマレイミド（Ｓｉｇｍａ）を０．０１ｍｇ添加す
る。３７℃で１０分インキュベートした後、Ｓｕｐｅｒ
ｄｅｘ２００（ファルマシア）カラムを用いて、２０ｍ
ＭのＥＤＴＡ、０．１Ｍリン酸緩衝液でゲル濾過する事
により目的の分画を得ることができる。この免疫グロブ
リン断片を以下の調製に使用した。
【００４３】（２）還元処理による断片化抗ヒトＰＧＩ
Ｉ抗体担持ラテックス懸濁液の調製。 平均粒径０．３μｍのポリスチレン粒子をＰＢＳで希釈
してラテックス濃度が５％（ｗ／ｖ）の懸濁液を２ｍｌ
調製した。次いで前記（１）で断片化した抗ヒトＰＧＩ
Ｉモノクローナル抗体をＰＢＳで希釈した溶液（１０ｍ
ｇ／ｍｌ）を１ｍｌ加え混合した。３７℃で４時間振と
うした後、未反応の抗体を遠心分離により除去し、ＢＳ
Ａ５％を含む水溶液１ｍｌを添加した。次いで９９ｍｌ
の０．１Ｍ塩化ナトリウムと０．１％アジ化ナトリウム
を含むｐＨ８．０の０．１ＭのＨＥＰＥＳを加えて懸濁
して調製した。
Ｉ抗体担持ラテックス懸濁液の調製。 平均粒径０．３μｍのポリスチレン粒子をＰＢＳで希釈
してラテックス濃度が５％（ｗ／ｖ）の懸濁液を２ｍｌ
調製した。次いで前記（１）で断片化した抗ヒトＰＧＩ
Ｉモノクローナル抗体をＰＢＳで希釈した溶液（１０ｍ
ｇ／ｍｌ）を１ｍｌ加え混合した。３７℃で４時間振と
うした後、未反応の抗体を遠心分離により除去し、ＢＳ
Ａ５％を含む水溶液１ｍｌを添加した。次いで９９ｍｌ
の０．１Ｍ塩化ナトリウムと０．１％アジ化ナトリウム
を含むｐＨ８．０の０．１ＭのＨＥＰＥＳを加えて懸濁
して調製した。
【００４４】（３）ＰＧＩＩ被検液の調製。 ０．１ＭのＰＢＳ、ＰＧＩＩ抗原溶液を０．１ＭＰＢＳ
で希釈して、０，１，３，１０，３０，１００ｎｇ／ｍ
ｌに調製して被検液とした。
で希釈して、０，１，３，１０，３０，１００ｎｇ／ｍ
ｌに調製して被検液とした。
【００４５】（４）測定法。 試薬量：３００μｌ、検体量：１０μｌ、測定波長５４
６ｎｍの条件で、実施例１と同様に自動分析装置日立７
０７０を用いて吸光度変化量を測定した。
６ｎｍの条件で、実施例１と同様に自動分析装置日立７
０７０を用いて吸光度変化量を測定した。
【００４６】（５）吸光度変化量との関係。 上記ＰＧＩＩ被検液を上記調製試薬で測定した。
【００４７】比較例３ 未処理の抗ＰＧＩＩのモノクローナル抗体ＡおよびＢを
用いて実施例３と同様にラテックス懸濁液を調製した。
この懸濁液を使用し、実施例３と同じ条件でＰＧＩＩ被
検液を測定した。この結果を実施例３の結果と共に表３
及び図２に示す。
用いて実施例３と同様にラテックス懸濁液を調製した。
この懸濁液を使用し、実施例３と同じ条件でＰＧＩＩ被
検液を測定した。この結果を実施例３の結果と共に表３
及び図２に示す。
【００４８】
【表３】
【００４９】実施例４ （１） ポリクローナル抗体である抗アルファフェトプ
ロテイン抗体（抗ＡＦＰ抗体）を実施例２と同一条件で
処理し、断片化抗体（Ｆａｃｂ）を得た。この抗体断片
及び未処理の抗ＡＦＰ抗体を用いて、それぞれ実施例２
と同じ工程でラテックス懸濁液を調製し、抗ＡＦＰ抗体
Ｆａｃｂ抗体担持ラテックス懸濁液及び抗ＡＦＰ抗体担
持ラテックス懸濁液を得た。
ロテイン抗体（抗ＡＦＰ抗体）を実施例２と同一条件で
処理し、断片化抗体（Ｆａｃｂ）を得た。この抗体断片
及び未処理の抗ＡＦＰ抗体を用いて、それぞれ実施例２
と同じ工程でラテックス懸濁液を調製し、抗ＡＦＰ抗体
Ｆａｃｂ抗体担持ラテックス懸濁液及び抗ＡＦＰ抗体担
持ラテックス懸濁液を得た。
【００５０】（２）ＡＦＰ被検液の調製。 ０．１ＭのＰＢＳ、ＡＦＰ抗原溶液を０．１ＭＰＢＳで
希釈して、０，１，３，１０，３０，１００，３００，
１０００ｎｇ／ｍｌに調製して被検液とした。
希釈して、０，１，３，１０，３０，１００，３００，
１０００ｎｇ／ｍｌに調製して被検液とした。
【００５１】（４）測定法。 検体量を２０μｌとする以外の測定条件は、全て実施例
１と同様にして、上記ＡＦＰ被検液の吸光度変化量を測
定した。結果は表４及び図３に示した。
１と同様にして、上記ＡＦＰ被検液の吸光度変化量を測
定した。結果は表４及び図３に示した。
【００５２】
【表４】
【００５３】表１から４に示したとおり、いずれの場合
においても断片化処理することにより、反応性の良化
が、低濃度域で認められた。また高濃度域においても、
十分な反応性を有している。なお、血清を測定した時の
非特異凝集は、実施例１〜４及び比較例１〜４のいずれ
の試薬でも起こらなかった。
においても断片化処理することにより、反応性の良化
が、低濃度域で認められた。また高濃度域においても、
十分な反応性を有している。なお、血清を測定した時の
非特異凝集は、実施例１〜４及び比較例１〜４のいずれ
の試薬でも起こらなかった。
【００５４】実施例５ （１） 断片化した抗体の分子量。 抗ＰＳＡ断片化抗体を担持したラテックスを遠心分離に
より集めたものを、界面活性剤（Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘな
ど）に接触させることにより担持させた抗体を剥離す
る。この溶液を試料としてＰｈａｓｔ−ｓｙｓｔｅｍ
（ファルマシア社）のＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分子量確
認を行った。
より集めたものを、界面活性剤（Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘな
ど）に接触させることにより担持させた抗体を剥離す
る。この溶液を試料としてＰｈａｓｔ−ｓｙｓｔｅｍ
（ファルマシア社）のＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分子量確
認を行った。
【００５５】ＳＤＳ−ＰＡＧＥの結果、アルブミンより
も若干下、分子量６万付近に単一のバンドを確認した。
なお、ＩｇＧの分子量である、分子量１５万付近にはバ
ンドは確認できなかった。
も若干下、分子量６万付近に単一のバンドを確認した。
なお、ＩｇＧの分子量である、分子量１５万付近にはバ
ンドは確認できなかった。
【００５６】
【発明の効果】還元処理による抗体断片を不溶性担体に
担持させることにより、低濃度域及び高濃度域の両方で
反応性が良化し、直線性の向上した免疫凝集反応試薬が
得られた。
担持させることにより、低濃度域及び高濃度域の両方で
反応性が良化し、直線性の向上した免疫凝集反応試薬が
得られた。
【図１】断片化ＡＬＢ抗体担持試薬の検量線
【図２】半分子抗ＰＧＩＩ抗体担持試薬の検量線
【図３】断片化抗ＡＦＰ抗体担持試薬の検量線
Claims (7)
- 【請求項１】 還元剤で断片化した抗体分子あるいは還
元剤処理で得られた抗体断片を担持していることを特徴
とする免疫学的凝集反応試薬。 - 【請求項２】 免疫学的凝集が、ラテックス凝集である
請求項１記載の免疫学的凝集反応試薬。 - 【請求項３】 以下の工程からなる請求項１に記載の免
疫学的凝集反応試薬の製造方法 １）抗体を還元剤で処理して抗体断片とする。 ２）１）の抗体を不溶性担体に担持させる。 - 【請求項４】 断片化した抗体分子あるいは抗体断片
が、半分子抗体、半分子抗体をＦａｃｂ化したもの、又
はＦａｃｂを半分子化したものである請求項１記載の免
疫学的凝集反応試薬。 - 【請求項５】 断片化した抗体分子あるいは抗体断片
が、２−メルカプトエタノール、２−メルカプトエチル
アミン塩酸塩、ジチオスレイトールのいずれかよって還
元されたものである請求項１記載の免疫学的凝集反応試
薬。 - 【請求項６】 断片化した抗体分子あるいは抗体断片を
担体に担持する方法が、物理的吸着又は化学的結合であ
る請求項１に記載の免疫学的凝集反応試薬 - 【請求項７】 請求項１に記載の免疫学的凝集反応試薬
を用いる免疫学的測定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11004154A JP2000206115A (ja) | 1999-01-11 | 1999-01-11 | 抗体断片を用いた免疫凝集反応試薬 |
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11004154A JP2000206115A (ja) | 1999-01-11 | 1999-01-11 | 抗体断片を用いた免疫凝集反応試薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000206115A true JP2000206115A (ja) | 2000-07-28 |
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11004154A Pending JP2000206115A (ja) | 1999-01-11 | 1999-01-11 | 抗体断片を用いた免疫凝集反応試薬 |
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|---|---|
| JP (1) | JP2000206115A (ja) |
Cited By (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002010744A1 (en) * | 2000-08-01 | 2002-02-07 | International Reagents Corporation | Method of pretreating sample |
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