JP2000212092A

JP2000212092A - 抗ウイルス・抗菌剤

Info

Publication number: JP2000212092A
Application number: JP11018279A
Authority: JP
Inventors: Masanobu Azuma; 匡伸東; Yoko Knox; 洋子ノックス; Tatsuo Suzutani; 達夫錫谷; Itsuro Yoshida; 逸朗吉田; Taiichiro Shibaki; 泰一郎芝木; Masahiro Ogasawara; 正洋小笠原
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1999-01-27
Filing date: 1999-01-27
Publication date: 2000-08-02

Abstract

(57)【要約】【課題】黒房すぐり抽出物の生理活性機能に基づく抗ウ
イルス・抗菌剤を提供する。【解決手段】本発明の抗ウイルス・抗菌剤は、黒房すぐ
り抽出物濃縮液を含む。特にインフルエンザウイルスＡ
型、インフルエンザウイルスＢ型または単純ヘルペスウ
イルス１型に対する抗ウイルス活性を備える。前記黒房
すぐり抽出物濃縮液を１０００倍以下の範囲の希釈倍率
で含む。食品に添加して用いることができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、抗ウイルス・抗菌
剤に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】近年、植物から抽出された物質の有する
生理活性機能について関心が高まり、植物抽出物を各種
生理活性剤として利用することが検討されている。

【０００３】例えば、木村進ら編著「食品の変化の化
学」（光琳、１９９５）、井上正康編著「活性酸素と医
食同源：分子論的背景と医食の接点を求めて」（共立出
版、１９９６）には、食品中のポリフェノールの一つで
あるアントシアニン類あるいはそのアグリコンであるア
ントシアニジンが、抗酸化作用、発癌抑制作用、免疫賦
活作用、抗菌作用等の種々の生理活性を有することが報
告されている。前記アントシアニン類は、キイチゴ属、
スグリ属、ブドウ属等の深紫色から黒色を呈する果実、
黒米、黒豆等の種子の中に多量に含まれており、前記果
実または種子は生理機能活性食品として注目を集めてい
る。

【０００４】また、最近、エルダベリー（Ｓａｍｂｕｃ
ｕｓｎｉｇｒａＬ．、和名：アメリカニワトコ）抽
出物が試験管内（ｉｎｖｉｔｒｏ）でインフルエンザ
ウイルスの増殖を抑えることと、Ｂ型インフルエンザ流
行時に患者の症状の軽減に働くことが報告されている
（ザッケイ−ローンズゼット、「インフルエンザＢパ
ナマ型の発生中におけるエルダベリー（Ｓａｍｂｕｃｕ
ｓｎｉｇｒａＬ．）抽出物による試験管内でのイン
フルエンザウイルスの種々のウイルス株の抑制及び症状
の低減」、Ｊ．Ａｌｅｒ．Ｃｏｍｐｌｅ．Ｍｅｄ．１，
ｐ．３６１〜３６９，１９９５）。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、黒房すぐり
抽出物の生理活性機能に基づく抗ウイルス・抗菌剤を提
供することを目的とする。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、中華人民
共和国黒竜江省原産の野生種のユキノシタ科黒房すぐり
（ＲｉｂｅｓｎｉｇｒｕｍＬ）の果実の抽出物（販
売元：株式会社黒五本舗、商標名：「黒加倫」、以下
「黒房すぐり抽出物」と記載する）の生理活性機能につ
いて種々検討を重ねた。この結果、前記黒房すぐり抽出
物が抗ウイルス活性及び抗菌性を有することを知見し、
本発明を完成した。

【０００７】そこで、本発明は、黒房すぐり抽出物濃縮
液を含む抗ウイルス・抗菌剤にある。本発明では、前記
黒房すぐり抽出物濃縮液として、アントシアニジンであ
るデルフィニジン、ペオニジン、シアニジンを各１０ｍ
ｇ／１００ｇ、０．２ｍｇ／１００ｇ、１１ｍｇ／１０
０ｇ、アスコルビン酸１５１ｍｇ／１００ｇ、クエン酸
１７．７ｇ／１００ｇを含み、ｐＨ２．８の酸性の液体
を用いる。

【０００８】本発明の抗ウイルス・抗菌剤は、大腸菌、
ネズミチフス菌、腸炎サルモネラ菌等の各種細菌に対し
抗菌性を示し、特にインフルエンザウイルスＡ型、イン
フルエンザウイルスＢ型または単純ヘルペスウイルス１
型に対する抗ウイルス活性を備えている。

【０００９】また、本発明の抗ウイルス・抗菌剤は、前
記黒房すぐり抽出物濃縮液を１０００倍以下の範囲の希
釈倍率で含むことを特徴とする。前記黒房すぐり抽出物
濃縮液を約１０００倍の希釈倍率で含む本発明の抗ウイ
ルス・抗菌剤によれば、単純ヘルペスウイルス１型のプ
ラーク（ウイルスのコロニー）形成を５０％抑制するこ
とができ、前記黒房すぐり抽出物濃縮液を２５０倍の希
釈倍率で含む本発明の抗ウイルス・抗菌剤によればイン
フルエンザウイルスＡ型及びインフルエンザウイルスＢ
型のプラーク形成を５０％抑制することができる。ま
た、前記黒房すぐり抽出物濃縮液を１０〜１００倍の希
釈倍率で含む本発明の抗ウイルス・抗菌剤によれば、イ
ンフルエンザウイルスＡ型及びインフルエンザウイルス
Ｂ型を直接不活性化することができる。

【００１０】さらに、前記黒房すぐり抽出物濃縮液を１
００〜２００倍の希釈倍率で含む本発明の抗ウイルス・
抗菌剤によれば各種細菌の増殖を抑制することができ、
４０〜８０倍の希釈倍率で含む本発明の抗ウイルス・抗
菌剤によれば各種細菌を２４時間以内に死滅せしめるこ
とができる。

【００１１】さらに、本発明の抗ウイルス剤は、のど飴
等の食品に添加して用いることができる。

【００１２】

【発明の実施の形態】次に、添付の図面を参照しながら
本発明の実施の形態についてさらに詳しく説明する。図
１は本発明の抗ウイルス・抗菌剤のインフルエンザウイ
ルスに対する抗ウイルス活性を示すグラフ、図２は感染
前に本発明の抗ウイルス・抗菌剤で処理した細胞におけ
るインフルエンザウイルスの細胞内増殖量の経時変化を
示すグラフ、図３は感染後に本発明の抗ウイルス・抗菌
剤で処理した細胞におけるインフルエンザウイルスの細
胞内増殖量の経時変化を示すグラフ、図４は感染８時間
後に本発明の抗ウイルス・抗菌剤で処理した細胞におけ
るインフルエンザウイルスの細胞外放出量の経時変化を
示すグラフ、図５は本発明の抗ウイルス・抗菌剤の単純
ヘルペスウイルス１型に対する抗ウイルス活性を示すグ
ラフ、図６は本発明の抗ウイルス・抗菌剤による処理時
間と単純ヘルペスウイルス１型の増殖量との関係を示す
グラフ、図７は本発明の抗ウイルス・抗菌剤に対する加
熱処理と抗ウイルス活性との関係を示すヒストグラムで
ある。また、図８及び図９は本発明の抗ウイルス・抗菌
剤により細菌を死滅させるために要する時間を示すグラ
フである。

【００１３】本実施態様の抗ウイルス・抗菌剤は、黒房
すぐり抽出物濃縮液を、イーグル（Ｅａｇｌｅ）ＭＥＭ
培地で所定の倍率に希釈することにより調製した。前記
黒房すぐり抽出物濃縮液は、デルフィニジン１０ｍｇ／
１００ｇ、ペオニジン０．２ｍｇ／１００ｇ、シアニジ
ン１１ｍｇ／１００ｇ（以上はアントシアニンであ
る）、アスコルビン酸１５１ｍｇ／１００ｇ、クエン酸
１７．７ｇ／１００ｇを含み、ｐＨ２．８の酸性の液体
である。また、必要に応じて、前記のように調製した抗
ウイルス・抗菌剤に１Ｎ−ＮａＯＨ水溶液を加え、ｐＨ
７．２に調整した。次に、実施例を示す。

【００１４】

【実施例１】本実施例では、本発明の抗ウイルス・抗菌
剤によるインフルエンザウイルスを直接不活性化する作
用について検討した。

【００１５】このために、まず、前記黒房すぐり抽出物
濃縮液をイーグルＭＥＭ培地で１０ ^-1及び１０^-2に希釈
してｐＨ２．８の２種の抗ウイルス・抗菌剤を調製し
た。また、前記２種の抗ウイルス・抗菌剤に、それぞれ
１Ｎ−ＮａＯＨ水溶液を添加してｐＨ７．２に調整し、
２種の抗ウイルス・抗菌剤を調製した。

【００１６】次に、前記４種の抗ウイルス・抗菌剤をそ
れぞれ、インフルエンザウイルスＡ型（Ａ／ＰＲ／８／
３４株）及びインフルエンザウイルスＢ型（Ｂ／Ｇｉｆ
ｕ／２／７３株）と混合し、３７℃で３０分間放置した
のち、ウイルス感染価を測定した。

【００１７】また比較のために、前記黒房すぐり抽出物
濃縮液を含まないイーグルＭＥＭ培地を前記インフルエ
ンザウイルスと混合し、３７℃で３０分間放置したの
ち、ウイルス感染価を測定して、コントロールとした。

【００１８】コントロールのウイルス感染価を１００と
したときの前記ウイルス感染価の比率を表１に示す。

【００１９】

【表１】

【００２０】表１から、本実施例のｐＨ２．８の抗ウイ
ルス・抗菌剤によれば、インフルエンザウイルスＡ型、
Ｂ型共に、９９．９％以上が不活性化されることが明ら
かである。また、本実施例のｐＨ７．２の抗ウイルス・
抗菌剤によってもインフルエンザウイルスＡ型、Ｂ型の
９５．２〜９９．８％が不活性化されることが明らかで
ある。

【００２１】

【実施例２】本実施例では、本発明の抗ウイルス・抗菌
剤によるインフルエンザウイルスの増殖を抑制する作用
について検討した。

【００２２】このために、まず、前記黒房すぐり抽出物
濃縮液を、イーグルＭＥＭ培地でそれぞれ１０^-1、１０
^-1.5、１０^-2、１０^-2.5、１０^-3に希釈して、５種類の
抗ウイルス・抗菌剤を調製した。

【００２３】次に、２４穴プラスチックプレートにＭＤ
ＣＫ細胞（コッカースパニエル成犬（雌）の腎臓から樹
立された上皮様細胞）を単層培養し、実施例１で用いた
ものと同一のインフルエンザウイルスＡ型とインフルエ
ンザウイルスＢ型とを、それぞれ５０ＰＦＵ／穴で１２
穴ずつ接種した。３７℃で１．５時間ウイルスを吸着さ
せた後、細胞をイーグルＭＥＭ培地で３回洗滌し、前記
のように調製した抗ウイルス・抗菌剤と、１単位／ミリ
リットルのトリプシン（Ｓｉｇｍａ，ＴｙｐｅＸＩＩ
Ｉ）と、０．８％の寒天（Ｄｉｆｃｏ，ＡｇａｒＮｏ
ｂｌｅ）を含む重層寒天培地で２穴ずつ重層した。また
比較のために、前記抗ウイルス・抗菌剤を含まず前記ト
リプシンのみを含む重層寒天培地で重層したものを調製
して、コントロールとした。４８時間後に、各穴のプラ
ーク数を計測し、各希釈倍率の抗ウイルス・抗菌剤のコ
ントロールに対する割合（２穴の平均値）を求めた。結
果を図１に示す。

【００２４】図１から、本実施例の抗ウイルス・抗菌剤
がウイルスに対して５０％プラーク減少を示す希釈倍数
（ＥＣ₅₀）は、インフルエンザウイルスＡ型、インフル
エンザウイルスＢ型のいずれに対しても０．４×１０^-2
であることが明らかである。これは、２５０倍に希釈し
た前記黒房すぐり抽出物濃縮液を含む抗ウイルス・抗菌
剤が、インフルエンザウイルスＡ型及びインフルエンザ
ウイルスＢ型のプラーク形成を５０％抑制することを示
している。

【００２５】

【実施例３】本実施例では、本発明の抗ウイルス・抗菌
剤をインフルエンザウイルスに感染する前の細胞に接触
させた場合のウイルスの細胞内増殖を抑制する作用と、
インフルエンザウイルスに感染した後の細胞に接触させ
た場合のウイルスの細胞内増殖を抑制する作用とを比較
検討した。

【００２６】このために、まず、前記黒房すぐり抽出物
濃縮液をイーグルＭＥＭ培地でそれぞれ１０^-1、１
０^-2、１０^-3に希釈し、さらに１Ｎ−ＮａＯＨ水溶液を
添加してｐＨ７．２に調整して、３種類の抗ウイルス・
抗菌剤を調製した。

【００２７】次に、ＭＤＣＫ細胞培養を前記３種の抗ウ
イルス・抗菌剤と３７℃で２時間接触させた後、細胞を
よく洗滌し、５ＰＦＵ／細胞のインフルエンザウイルス
Ａ型、インフルエンザウイルスＢ型（いずれも実施例１
で用いたものと同一）で感染させた。感染させた細胞
は、３７℃で１．５時間ウイルスを吸着させ、未吸着の
ウイルスを除いて細胞をイーグルＭＥＭ培地で洗滌した
後、各細胞を１単位／ミリリットルのトリプシンを含む
イーグルＭＥＭ培地で培養した。また比較のために、前
記ＭＤＣＫ細胞培養を前記抗ウイルス・抗菌剤を含まな
いイーグルＭＥＭ培地と接触させた以外は前記と同一に
処理して、コントロールとした。

【００２８】そして、８、１６、２４時間後の各培養液
中のウイルス量（プラーク数）を測定した。インフルエ
ンザウイルスＡ型に対する結果を図２（ａ）に、インフ
ルエンザウイルスＢ型に対する結果を図２（ｂ）に示
す。

【００２９】図２から、１０^-1に希釈した前記黒房すぐ
り抽出物濃縮液を含む抗ウイルス・抗菌剤は、感染前の
細胞に接触させることにより、インフルエンザウイルス
Ａ型、インフルエンザウイルスＢ型共に、完全に細胞内
増殖を抑制することが明らかである。また、図２から、
前記抗ウイルス・抗菌剤を感染前の細胞に接触させるこ
とによるウイルスの細胞内増殖を抑制する効果は、前記
黒房すぐり抽出物濃縮液の濃度に依存し、インフルエン
ザウイルスＢ型に対するよりもインフルエンザウイルス
Ａ型に対する効果の方が優ることが明らかである。

【００３０】次に、ＭＤＣＫ細胞培養を５ＰＦＵ／細胞
のインフルエンザウイルスＡ型、インフルエンザウイル
スＢ型（いずれも実施例１で用いたものと同一）で感染
させた後、３７℃で１．５時間ウイルスを吸着させ、未
吸着のウイルスを除き、その後、本実施例の前記３種の
抗ウイルス・抗菌剤と３７℃で６時間接触させた。その
後、細胞をよく洗滌し、各細胞を１単位／ミリリットル
のトリプシンを含むイーグルＭＥＭ培地で培養した。ま
た比較のために、前記ＭＤＣＫ細胞培養を前記抗ウイル
ス・抗菌剤を含まないイーグルＭＥＭ培地と接触させた
以外は前記と同一に処理して、コントロールとした。

【００３１】そして、８、１６、２４時間後の各培養液
中のウイルス量（プラーク数）を測定した。インフルエ
ンザウイルスＡ型に対する結果を図３（ａ）に、インフ
ルエンザウイルスＢ型に対する結果を図３（ｂ）に示
す。

【００３２】図３から、１０^-1及び１０^-2に希釈した前
記黒房すぐり抽出物濃縮液を含む抗ウイルス・抗菌剤
は、感染後の細胞に接触させることにより、インフルエ
ンザウイルスＡ型の細胞内増殖を完全に抑制し、１０^-3
に希釈した前記黒房すぐり抽出物濃縮液を含む抗ウイル
ス・抗菌剤によってもインフルエンザウイルスＡ型の細
胞内増殖がコントロールに比較して有意に抑制されるこ
とが明らかである。一方、本実施例の各抗ウイルス・抗
菌剤のインフルエンザウイルスＢ型に対する細胞内増殖
を抑制する効果は、図２の場合と同一の傾向を示し、抑
制の程度はインフルエンザウイルスＡ型に対する効果よ
り低かった。

【００３３】従って、図２及び図３から、本実施例の抗
ウイルス・抗菌剤によれば、感染前の細胞に接触させた
場合（図２）よりも、感染後の細胞に接触させた場合
（図３）の方が、ウイルスの細胞内増殖を抑制する点に
おいて優れた効果が得られることが明らかである。この
結果から、本実施例の抗ウイルス・抗菌剤は、ウイルス
が細胞に吸着して細胞内に侵入する感染初期段階より
も、ウイルスが細胞内で増殖する感染後期段階を抑制し
ているものと考えられる。

【００３４】

【実施例４】本実施例では、本発明の抗ウイルス・抗菌
剤をインフルエンザウイルスに感染後、所定時間経過後
の細胞に接触させ、感染細胞からのウイルスの細胞外放
出を抑制する作用について検討した。

【００３５】このために、まず、前記黒房すぐり抽出物
濃縮液を、イーグルＭＥＭ培地でそれぞれ１０^-1、１０
^-2に希釈してｐＨ７．２に調整し、２種類の抗ウイルス
・抗菌剤を調製した。

【００３６】次に、ＭＤＣＫ細胞培養を５ＰＦＵ／細胞
のインフルエンザウイルスＡ型、インフルエンザウイル
スＢ型（いずれも実施例１で用いたものと同一）で感染
させた。感染させた細胞は、３７℃で１．５時間ウイル
スを吸着させ、未吸着のウイルスを除いて、各細胞を１
単位／ミリリットルのトリプシンを含むイーグルＭＥＭ
培地で培養した。そして、感染から８時間後に本実施例
の前記２種の抗ウイルス・抗菌剤と３７℃で１時間接触
させ、細胞をよく洗滌した後、前記培地で培養を継続し
た。また比較のために、前記ＭＤＣＫ細胞培養を感染か
ら８時間後に前記抗ウイルス・抗菌剤を含まないイーグ
ルＭＥＭ培地と接触させた以外は、前記と同一に処理し
て、コントロールとした。

【００３７】そして、感染から４、８、９、１６、２４
時間後の各培養液中のウイルス量（プラーク数）を測定
した。インフルエンザウイルスＡ型に対する結果を図４
（ａ）に、インフルエンザウイルスＢ型に対する結果を
図４（ｂ）に示す。

【００３８】図４から、１０^-1に希釈した前記黒房すぐ
り抽出物濃縮液を含む抗ウイルス・抗菌剤は、感染から
所定時間経過後の細胞に接触させることにより、該細胞
からインフルエンザウイルスＡ型、インフルエンザウイ
ルスＢ型の細胞外放出を著しく抑制することが明らかで
ある。

【００３９】

【実施例５】本実施例では、本発明の抗ウイルス・抗菌
剤によるヘルペスウイルスを直接不活性化する作用につ
いて検討した。

【００４０】このために、まず、前記黒房すぐり抽出物
濃縮液を、イーグルＭＥＭ培地で１０^-3、１０^-4及び１
０^-5に希釈し、さらにそれぞれ１Ｎ−ＮａＯＨ水溶液を
添加してｐＨ７．２に調整し、３種の抗ウイルス・抗菌
剤を調製した。

【００４１】次に、前記３種の抗ウイルス・抗菌剤をそ
れぞれ単純ヘルペスウイルス１型（ＶＲ−３株）と混合
し、４℃で１時間放置した後、ウイルス感染価を測定し
た。

【００４２】また比較のために、前記黒房すぐり抽出物
濃縮液を含まないイーグルＭＥＭ培地を前記単純ヘルペ
スウイルス１型と混合し、４℃で１時間放置したのち、
ウイルス感染価を測定してコントロールとした。

【００４３】コントロールのウイルス感染価を１００と
したときの前記ウイルス感染価の比率を表２に示す。

【００４４】

【表２】

【００４５】表２から、１０^-3に希釈した前記黒房すぐ
り抽出物濃縮液を含むｐＨ７．２の抗ウイルス・抗菌剤
によれば、単純ヘルペスウイルス１型の９９．３％が不
活性化されることが明らかである。

【００４６】このように、本実施例の抗ウイルス・抗菌
剤は、インフルエンザウイルスＡ型、インフルエンザウ
イルスＢ型に対する実施例１の各抗ウイルス・抗菌剤よ
りも希釈倍率が高く、しかもｐＨも７．２でありなが
ら、単純ヘルペスウイルス１型に対してウイルス不活性
化作用を示している。従って、本実施例の抗ウイルス・
抗菌剤は、単純ヘルペスウイルス１型に対して、インフ
ルエンザウイルスＡ型、インフルエンザウイルスＢ型に
対するよりも、強いウイルス不活性化作用を備えている
ことが明らかである。

【００４７】

【実施例６】本実施例では、本発明の抗ウイルス・抗菌
剤によるヘルペスウイルスの増殖を抑制する作用につい
て検討した。

【００４８】このために、まず、前記黒房すぐり抽出物
濃縮液を、イーグルＭＥＭ培地でそれぞれ１０^-2、１０
^-2.5、１０^-3、１０^-3.5、１０^-4に希釈して、５種類の
抗ウイルス・抗菌剤を調製した。

【００４９】次に、２４穴プラスチックプレートにＶｅ
ｒｏ細胞（アフリカミドリザルの腎臓由来の樹立細胞）
を単層培養し、実施例５で用いたものと同一の単純ヘル
ペスウイルス１型を５ＰＦＵ／穴で接種した。３７℃で
１．５時間ウイルスを吸着させた後、前記のように調製
した抗ウイルス・抗菌剤を含む０．５％メチルセルロー
ズ重層培地で重層した。また比較のために、抗ウイルス
・抗菌剤を含まない０．５％メチルセルローズ重層培地
で重層したものを調製して、コントロールとした。４８
時間後に、各穴のプラーク数を計測し、各希釈倍率の抗
ウイルス・抗菌剤のコントロールに対する割合を求め
た。結果を図５に示す。

【００５０】図５から、本実施例の抗ウイルス・抗菌剤
がウイルスに対して５０％プラーク減少を示す希釈倍数
（ＥＣ₅₀）は、単純ヘルペスウイルス１型に対して、
０．１１×１０^-2であることが明らかである。これは、
９１０倍に希釈した前記黒房すぐり抽出物濃縮液を含む
抗ウイルス・抗菌剤は、単純ヘルペスウイルス１型のプ
ラーク形成を５０％抑制することを示している。

【００５１】

【実施例７】本実施例では、本発明の抗ウイルス・抗菌
剤を細胞に所定時間接触させた後、さらに前記抗ウイル
ス・抗菌剤を含まない培地で培養し、前記抗ウイルス・
抗菌剤に接触している時間とその後の培養時間との合計
が１４時間になるようにして、前記抗ウイルス・抗菌剤
を細胞に接触させた時間のヘルペスウイルスの増殖抑制
に及ぼす作用について検討した。

【００５２】このために、まず、前記黒房すぐり抽出物
濃縮液をイーグルＭＥＭ培地で１０ ^-2に希釈してｐＨ
７．２に調整し、抗ウイルス・抗菌剤を調製した。

【００５３】次に、前記Ｖｅｒｏ細胞に実施例５で用い
たものと同一の単純ヘルペスウイルス１型を５ＰＦＵ／
細胞で接種し、１時間吸着後、細胞を洗滌して、前記抗
ウイルス・抗菌剤を含むイーグルＭＥＭ培地で２時間培
養した。２時間後に、前記細胞を前記抗ウイルス・抗菌
剤を含まないイーグルＭＥＭ培地に置き換え、さらに１
２時間（合計１４時間）培養し、細胞内及び培養液中の
ウイルス量を測定した。

【００５４】また、単純ヘルペスウイルス１型を接種、
吸着し、洗滌したＶｅｒｏ細胞を前記抗ウイルス・抗菌
剤を含むイーグルＭＥＭ培地で培養する時間を、４、
６、８時間とし、前記各時間経過後さらに前記抗ウイル
ス・抗菌剤を含まないイーグルＭＥＭ培地で培養し、合
計１４時間培養した以外は前記と同一に処理して、それ
ぞれの時間に対応する細胞内及び培養液中のウイルス量
を測定した。

【００５５】さらに、単純ヘルペスウイルス１型を接
種、吸着し、洗滌したＶｅｒｏ細胞を前記抗ウイルス・
抗菌剤を含むイーグルＭＥＭ培地で培養する時間を１４
時間とし、前記抗ウイルス・抗菌剤を含まないイーグル
ＭＥＭ培地で培養しなかった以外は前記と同一に処理し
て、１４時間後培養後の細胞内及び培養液中のウイルス
量を測定した。

【００５６】比較のために、前記と同一にして単純ヘル
ペスウイルス１型を接種、吸着し、洗滌したＶｅｒｏ細
胞を前記抗ウイルス・抗菌剤を含まないイーグルＭＥＭ
培地で１４時間培養し、細胞内及び培養液中のウイルス
量を測定してコントロールとした。

【００５７】前記抗ウイルス・抗菌剤を含むイーグルＭ
ＥＭ培地で培養したときの前記各ウイルス量を、前記コ
ントロールを１００として図６に示す。

【００５８】図６から、前記抗ウイルス・抗菌剤を含む
イーグルＭＥＭ培地で処理する（培養する）時間が長く
なるほど、ウイルス収量が減少することが明らかであ
る。

【００５９】

【実施例８】本実施例では、本発明の抗ウイルス・抗菌
剤の抗ウイルス活性に対する熱安定性を検討した。

【００６０】このために、まず、前記黒房すぐり抽出物
濃縮液をそのまま抗ウイルス・抗菌剤とし、該抗ウイル
ス・抗菌剤に、１００℃で５分間、１００℃で１０分
間、１００℃で２０分間、１２１℃で２０分間の加熱処
理を施した。

【００６１】次に、前記加熱処理を施した各抗ウイルス
・抗菌剤について、実施例２と同様にして、各抗ウイル
ス・抗菌剤が単純ヘルペスウイルス１型に対して５０％
プラーク減少を示す希釈倍数（ＥＣ₅₀）を求めた。結果
を図７に示す。

【００６２】図７から、本実施例の抗ウイルス・抗菌剤
は、加熱処理条件によらず、略同程度の抗ウイルス活性
を示すことが明らかである。

【００６３】前記実施例１〜８で用いたインフルエンザ
ウイルス及び単純ヘルペスウイルスは、いずれもその表
面にエンベロープという被膜を有している。そこで、前
記黒房すぐり抽出物は、含有成分が前記エンベロープの
脂質または蛋白質と結合することにより、前記のような
抗ウイルス活性を示すものと考えられる。

【００６４】また、前記黒房すぐり抽出物は、含有成分
がウイルスが増殖している感染細胞の細胞膜上のウイル
スの成分と結合することにより、実施例４に示したよう
な該感染細胞からウイルスの細胞外放出を抑制する作用
を示すものと考えられる。

【００６５】

【実施例９】本実施例では、本発明の抗ウイルス・抗菌
剤による細菌の増殖を抑制する作用について検討した。

【００６６】このために、まず、前記黒房すぐり抽出物
濃縮液を段階的に希釈して、抗ウイルス・抗菌剤を調製
した。次に、前記各希釈倍率の抗ウイルス・抗菌剤を含
む培地で各種細菌を培養して、その細菌の増殖を抑制す
ることができる最も小さな濃度（最小発育阻止濃度＝最
大希釈倍率）を測定した。結果を、最小発育阻止濃度
（その細菌の増殖を抑制することができる最も大きな希
釈倍率の逆数）により、表３に示す。表３記載の細菌
は、次の通りである（表中、対応する同一番号で示
す）。

【００６７】１．薬剤感受性試験用国際標準大腸菌
（Ｅ．ｃｏｌｉＡＴＣＣ２５９２２）２．腸管出血性大腸菌Ｏ１５７標準菌（ＥＤＬ９３１
株）３．腸管出血性大腸菌Ｏ１５７臨床分離株（ＯＢ−２９
−８１０株）４．腸管出血性大腸菌Ｏ１５７臨床分離株（ＨＵ−４３
９株）５．食中毒サルモネラ菌（ネズミチフス菌実験室株）６．食中毒サルモネラ菌（腸炎サルモネラ臨床分離株）

【００６８】

【表３】

【００６９】表３から、本発明の抗ウイルス・抗菌剤
は、前記黒房すぐり抽出物濃縮液を１００〜２００倍の
希釈倍率で含むことにより、前記各種細菌の増殖を完全
に抑制することが明らかである。

【００７０】

【実施例１０】本実施例では、本発明の抗ウイルス・抗
菌剤を所定時間細菌と接触させることにより、前記抗ウ
イルス・抗菌剤を除去しても前記細菌が増殖できなくな
る（不可逆的増殖抑制、即ち殺菌）作用について検討し
た。

【００７１】このために、まず、前記黒房すぐり抽出物
濃縮液を段階的に希釈して、抗ウイルス・抗菌剤を調製
した。次に、前記各希釈倍率の抗ウイルス・抗菌剤を各
種細菌と２４時間接触させたのち除去した。そして、前
記抗ウイルス・抗菌剤を除去しても前記各種細菌が増殖
できない最小濃度（最小殺菌濃度＝最大希釈倍率）を測
定した。

【００７２】結果を、最小殺菌濃度（その細菌を殺菌す
ることができる最も大きな希釈倍率の逆数）により、表
４に示す。表４記載の細菌は、実施例９で用いたものと
同一である（表中、実施例９に対応する同一番号で示
す）。

【００７３】

【表４】

【００７４】表４から、本発明の抗ウイルス・抗菌剤
は、前記黒房すぐり抽出物濃縮液を４０〜８０倍の希釈
倍率で含むことにより、前記各種細菌を２４時間で完全
に死滅せしめることが明らかである。

【００７５】

【実施例１１】本実施例では、本発明の抗ウイルス・抗
菌剤により大腸菌Ｏ１５７を死滅せしめる所要時間につ
いて検討した。

【００７６】このために、まず、前記黒房すぐり抽出物
濃縮液を５０倍に希釈してｐＨ２．５の抗ウイルス・抗
菌剤を調製した。また、前記抗ウイルス・抗菌剤のｐＨ
を調整してｐＨ７．２の抗ウイルス・抗菌剤を調製し
た。そして、前記抗ウイルス・抗菌剤に大腸菌Ｏ１５７
を接触させて、経時的に細菌数を測定し、全細菌が死滅
するのに要する時間を測定した。

【００７７】また比較のために、大腸菌Ｏ１５７を前記
抗ウイルス・抗菌剤を含まない培地で培養し、経時的に
細菌数を測定してコントロールとした。結果を図８に示
す。

【００７８】図８から、本実施例のｐＨ２．５の抗ウイ
ルス・抗菌剤によれば、大腸菌Ｏ１５７を完全に死滅せ
しめるために、６時間を要することが明らかである。ま
た、ｐＨ７．２の抗ウイルス・抗菌剤では、大腸菌Ｏ１
５７を死滅せしめることはできないものの、増殖は抑制
できることが明らかである。

【００７９】

【実施例１２】本実施例では、本発明の抗ウイルス・抗
菌剤によりネズミチフス菌を死滅せしめる所要時間につ
いて検討した。

【００８０】本実施例では、前記黒房すぐり抽出物濃縮
液を５０倍に希釈してｐＨ２．５の抗ウイルス・抗菌剤
を調製し、大腸菌Ｏ１５７に替えてネズミチフス菌を用
いた以外は、実施例１１と全く同一にして全細菌が死滅
するのに要する時間を測定した。結果を図９に示す。

【００８１】図９から、本実施例のｐＨ２．５の抗ウイ
ルス・抗菌剤によれば、ネズミチフス菌を完全に死滅せ
しめるために、２４時間を要することが明らかである。

【００８２】

【実施例１３】本実施例では、本発明の抗ウイルス・抗
菌剤の抗菌性に対する熱安定性を検討した。

【００８３】このために、まず、加熱処理を施さない前
記黒房すぐり抽出物濃縮液、それぞれ１００℃で２０分
間、１２１℃で２０分間の加熱処理を施した前記黒房す
ぐり抽出物濃縮液を、段階的に希釈して、抗ウイルス・
抗菌剤を調製した。次に、前記各抗ウイルス・抗菌剤を
用い、実施例９と同一にして最小発育阻止濃度を、また
実施例１０と同一にして最小殺菌濃度を測定した。結果
を、最小発育阻止濃度及び最小殺菌濃度の逆数により、
表５に示す。表５記載の細菌は、実施例９で用いたもの
と同一の薬剤感受性試験用国際標準大腸菌（Ｅ．ｃｏｌ
ｉＡＴＣＣ２５９２２）、腸管出血性大腸菌Ｏ１５７
標準菌（ＥＤＬ９３１株）、食中毒サルモネラ菌（腸炎
サルモネラ臨床分離株）である（表中、実施例９に対応
する同一番号で示す）。

【００８４】

【表５】

【００８５】表５から、本実施例の抗ウイルス・抗菌剤
は、加熱処理条件によらず、略同程度の抗菌性を示すこ
とが明らかである。

【００８６】図７（実施例８）及び表５（実施例１３）
の結果から、本発明の抗ウイルス・抗菌剤は、食品の高
圧蒸気滅菌処理の条件である１２１℃で２０分間の加熱
処理によっても抗ウイルス活性及び抗菌性が失活しない
ことが明らかであり、食品に抗ウイルス活性及び抗菌性
を付与する添加物として使用することができる。

【００８７】前記食品として、例えば、のど飴、のどガ
ム、ガーグル（うがい薬）、加工魚肉類、ドレッシング
類、ジャム、菓子類、各種飲料等を挙げることができ
る。

【００８８】尚、前記実施例１〜８では、実験の便宜の
ために前記黒房すぐり抽出物濃縮液をイーグルＭＥＭ培
地で希釈して抗ウイルス・抗菌剤を調製しているが、本
発明の抗ウイルス・抗菌剤はこれに限定されるものでは
なく、薬理的、生理的に許容されるそれ自体公知の物質
により所定の倍率に希釈して製剤することができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の抗ウイルス・抗菌剤のインフルエンザ
ウイルスに対する抗ウイルス活性を示すグラフ。

【図２】感染前に本発明の抗ウイルス・抗菌剤で処理し
た細胞におけるインフルエンザウイルスの細胞内増殖量
の経時変化を示すグラフ。

【図３】感染後に本発明の抗ウイルス・抗菌剤で処理し
た細胞におけるインフルエンザウイルスの細胞内増殖量
の経時変化を示すグラフ。

【図４】感染８時間後に本発明の抗ウイルス・抗菌剤で
処理した細胞におけるインフルエンザウイルスの細胞外
放出量の経時変化を示すグラフ。

【図５】本発明の抗ウイルス・抗菌剤の単純ヘルペスウ
イルス１型に対する抗ウイルス活性を示すグラフ。

【図６】本発明の抗ウイルス・抗菌剤による処理時間と
単純ヘルペスウイルス１型の増殖量との関係を示すグラ
フ。

【図７】本発明の抗ウイルス・抗菌剤に対する加熱処理
と抗ウイルス活性との関係を示すヒストグラム。

【図８】本発明の抗ウイルス・抗菌剤により腸管出血性
大腸菌Ｏ１５７を死滅させるために要する時間を示すグ
ラフ。

【図９】本発明の抗ウイルス・抗菌剤によりネズミチフ
ス菌を死滅させるために要する時間を示すグラフ。

【符号の説明】

符号なし。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者錫谷達夫北海道旭川市西神楽４線５号３番地の11 旭川医科大学内 (72)発明者吉田逸朗北海道旭川市西神楽４線５号３番地の11 旭川医科大学内 (72)発明者芝木泰一郎北海道旭川市西神楽４線５号３番地の11 旭川医科大学内 (72)発明者小笠原正洋北海道旭川市西神楽４線５号３番地の11 旭川医科大学内Ｆターム(参考） 4B018 LB01 LB05 LB08 LB09 LE05 MD48 ME09 MF01 4C088 AB66 BA08 BA37 MA07 MA16 NA14 ZB33 ZB35

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】黒房すぐり抽出物濃縮液を含むことを特徴
とする抗ウイルス・抗菌剤。
【請求項２】インフルエンザウイルスＡ型、インフルエ
ンザウイルスＢ型または単純ヘルペスウイルス１型に対
する抗ウイルス活性を備えることを特徴とする請求項１
記載の抗ウイルス・抗菌剤。
【請求項３】前記黒房すぐり抽出物濃縮液を１０００倍
以下の範囲の希釈倍率で含むことを特徴とする請求項１
または請求項２記載の抗ウイルス・抗菌剤。
【請求項４】食品に添加して用いられることを特徴とす
る請求項１乃至請求項３のいずれかの項記載の抗ウイル
ス・抗菌剤。