JP2000224992A

JP2000224992A - 新規ホスホジエステラーゼ及びその遺伝子

Info

Publication number: JP2000224992A
Application number: JP11129343A
Authority: JP
Inventors: Kenji Omori; 謙司大森; Atsushi Kodera; 淳小寺; Kotomi Fujishige; 古都美藤重; Hideo Michihashi; 英雄道端; Keizo Yuasa; 恵造湯浅
Original assignee: Tanabe Seiyaku Co Ltd
Current assignee: Tanabe Pharma Corp
Priority date: 1998-11-30
Filing date: 1999-05-11
Publication date: 2000-08-15

Abstract

(57)【要約】【課題】新規なホスホジエステラーゼおよびその遺伝
子を提供する。【解決手段】１０型ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ１
０）及びその遺伝子。より詳細には、（Ａ）配列番号
１、配列番号２、配列番号１５又は配列番号１６で示さ
れるアミノ酸配列を有する蛋白質、及び（Ｂ）配列番号
１、配列番号２、配列番号１５又は配列番号１６で示さ
れるアミノ酸配列において、１もしくは複数個のアミノ
酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列を有す
る蛋白質であって、かつ、環状ヌクレオチドを加水分解
する活性を有する蛋白質、から選択されるホスホジエス
テラーゼ及びその遺伝子。また、これらを用いて、ホス
ホジエステラーゼ阻害薬の特徴付け、同定、選択を行う
方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新規なホスホジエ
ステラーゼおよびその遺伝子に関する。

【０００２】

【従来の技術】ｃＡＭＰ及びｃＧＭＰなどの環状ヌクレ
オチドは、細胞内情報伝達のセカンドメッセンジャーと
して、生体内の多くの機能調節に関与している（Kukove
tzら、Naunyn Schmiedeberg's Arch. Pharmacol.、第31
0巻、第129-138頁、1979年；Schramら、Science、第225
巻、第1350−1356頁、1984年；Ignarroら、Annu.Rev.Ph
armacol.Toxicol.、第25巻、第171−191頁、1985年；Ma
rtinら、J.Pharmacol.Exp.、第237巻、第539−547頁、1
986年）。

【０００３】細胞外からのシグナルに応答して変動する
細胞内ｃＡＭＰ及びｃＧＭＰの濃度は、その合成に関与
するアデニルシクラーゼ及びグアニルシクラーゼと、環
状ヌクレオチド分解に関与するホスホジエステラーゼ
（ＰＤＥ）のバランスによって調節されている。

【０００４】これまで、哺乳動物の組織から、環状ヌク
レオチドを分解する多くのホスホジエステラーゼが見出
されており、アミノ酸配列の相同性、生化学的性質、阻
害剤による特徴付けなどから、複数の型に分類されてい
る（Beavo、Physiol.Rev.、第75巻、第725−748頁、199
5年）。

【０００５】例えば、ＰＤＥ１は、Ｃａ²⁺/カルモジュ
リン依存性のＰＤＥであり、ｃＡＭＰとｃＧＭＰの両者
を加水分解する。ＰＤＥ２はｃＧＭＰで活性化され、ｃ
ＡＭＰとｃＧＭＰの両者を加水分解する。ＰＤＥ３に分
類されるＰＤＥは、ｃＧＭＰで阻害される。ＰＤＥ４
は、ｃＡＭＰを特異的に基質とし、またロリプラム（Ro
lipram）感受性である。ＰＤＥ５は、ｃＧＭＰを特異的
に基質とする。ＰＤＥ６は、フォトレセプターｃＧＭＰ
−ＰＤＥである。ＰＤＥ７は、ｃＡＭＰを特異的に基質
とし、ロリプラム非感受性である。

【０００６】さらに最近、２種類の新規な型のＰＤＥの
存在が報告されている（Soderlingら、Proc.Natl.Acad.
Sci.USA、第95巻、第8991−8996頁、1998年；Fisher
ら、Biochem.Biophys.Res.Commun.、第246巻、第570−5
77頁、1998年；Soderlingら、J.Biol.Chem.、第273巻、
第15553−15558頁、1998年；Fisherら、J.Biol.Chem.、
第273巻、第15559−15564頁、1998年；Hayashiら、Bioc
hem.Biophys.Res.Commun.、第250巻、第751−756頁、19
98年）。一つはＰＤＥ８と称され、ｃＡＭＰを特異的に
基質とする。もう一つはＰＤＥ９と称され、ｃＧＭＰを
特異的に基質とする。これら２つのＰＤＥはＩＢＭＸ
(３−イソブチル−１−メチルキサンチン)に対して非感
受性であることが報告されている。

【０００７】また、ＰＤＥは医薬の開発研究においても
重要な標的分子であり、阻害剤研究が精力的に進められ
ている。既知医薬の中にＰＤＥ阻害作用が見出されたも
のがあり、また、特異的なＰＤＥ阻害剤が有用な治療薬
となり得ることが見出されている。

【０００８】例えば、強心剤であるミルリノン（Milrin
one)、ザプリナスト（Zaprinast)は各々ＰＤＥ３及びＰ
ＤＥ５の阻害剤である（Harrisonら、Mol.Pharmacol.、
第29巻、第506−514頁、1986年；Gillespieら、Mol.Pha
rmacol.、第36巻、第773−781頁、1989年）。また、抗
鬱剤であるロリプラムは、ＰＤＥ４阻害剤である（Schn
eiderら、Eur.J.Pharmacol.、第127巻、第105−115頁、
1986年）。ＰＤＥ４阻害剤は、抗炎症剤あるいは喘息治
療薬としても開発されている。また、ＰＤＥ５の選択的
阻害剤は勃起不全治療薬として開発されている。

【０００９】この他、ＩＢＭＸは、多くの型のＰＤＥに
作用する非選択的阻害剤として知られている。ビンポセ
チン（Vinpocetin）はＰＤＥ１阻害剤、EHNA（エリトロ
−９−（２−ヒドロキシ−３−ノニル）アデニン）はＰ
ＤＥ２阻害剤、ジピリダモール（Dipyridamole）はＰＤ
Ｅ５とＰＤＥ６の阻害剤、SCH51866はＰＤＥ１とＰＤＥ
５の阻害剤、E4021はＰＤＥ５の阻害剤として知られて
いる。

【００１０】治療効果が高く、副作用の少ない優れた医
薬を開発するためには、標的とするある型のＰＤＥに対
して選択性の高い阻害剤を選択することが望まれてい
る。

【００１１】さらに、従来のものとは異なる分子種であ
る新しい型のＰＤＥを見出すことは、細胞内情報伝達の
複合的なメカニズムの研究のためにも、また、新たな治
療薬の標的分子となる可能性からも望まれていた。

【００１２】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、新規
な型のホスホジエステラーゼ（１０型ホスホジエステラ
ーゼ（ＰＤＥ１０））およびその遺伝子を提供すること
にある。また、ホスホジエステラーゼ阻害薬の特徴付
け、同定、選択を行う新しい方法を提供することにあ
る。また、上記以外の目的については以下の記載より明
らかである。

【００１３】

【課題を解決するための手段】発明者らは、従来のもの
とは異なる分子種である新しい型のホスホジエステラー
ゼ（ＰＤＥ１０とも称する）をコードする全長ｃＤＮＡ
をヒト及びラットから単離した。また、ヒトのホスホジ
エステラーゼ（ＰＤＥ１０）を遺伝子組換え技術により
ＣＯＳ細胞中で発現させ、単離することに成功した。さ
らに酵素としての特徴づけを行い、本発明を完成するに
到った。

【００１４】すなわち、本発明は、１０型ホスホジエス
テラーゼ（ＰＤＥ１０）及びその遺伝子である。より詳
細には、以下の（Ａ）又は（Ｂ）から選択されるホスホ
ジエステラーゼである。

【００１５】（Ａ）配列番号１、配列番号２、配列番号
１５又は配列番号１６で示されるアミノ酸配列を有する
蛋白質、及び（Ｂ）配列番号１、配列番号２、配列番号
１５又は配列番号１６で示されるアミノ酸配列におい
て、１もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは
付加されたアミノ酸配列を有する蛋白質であって、か
つ、環状ヌクレオチドを加水分解する活性を有する蛋白
質。

【００１６】また本発明は、以下の（ａ）又は（ｂ）か
ら選択される遺伝子又は核酸である。

【００１７】（ａ）配列番号１、配列番号２、配列番号
１５又は配列番号１６で示される塩基配列を有するＤＮ
Ａからなる遺伝子又は核酸、及び、（ｂ）配列番号１、
配列番号２、配列番号１５又は配列番号１６で示される
塩基配列を有するＤＮＡとストリンジェントな条件下で
ハイブリダイズするＤＮＡからなる遺伝子又は核酸であ
って、かつ、環状ヌクレオチドを加水分解する活性を有
する蛋白質をコードする遺伝子又は核酸。

【００１８】さらに本発明は、これらを含有する組換え
ベクターならびに宿主細胞である。さらに、これらを用
いて、ホスホジエステラーゼ阻害薬の特徴付け、同定、
選択を行う方法である。

【００１９】後記配列表の配列番号１及び２は、発明者
らが単離した新規ヒトＰＤＥ遺伝子（ヒトＰＤＥ１０遺
伝子）の翻訳領域全長を含むｃＤＮＡの塩基配列（上
段）及びそれにコードされた新規ヒトＰＤＥ（ヒトＰＤ
Ｅ１０）のアミノ酸配列（下段）を表す。

【００２０】配列番号１及び２は新規ヒトＰＤＥ遺伝子
（ヒトＰＤＥ１０遺伝子）の２種類のバリアントに由来
する配列である。

【００２１】前記配列番号１及び配列番号２に示される
塩基配列またはアミノ酸配列について、既知ＤＮＡデー
タベース（ＧｅｎＢａｎｋおよびＥＭＢＬ）およびプロ
テインデータベース（ＮＢＲＦおよびＳＷＩＳＳ−ＰＲ
ＯＴ）に対してホモロジー検索を行った結果、ＥＳＴ
（Genbank/EMBL ID No:W04835及びAI300062）を除き、
同一分子種に由来すると考えられるものは見出されたな
かった。

【００２２】後記配列表の配列番号１５及び１６は、発
明者らが単離した新規ラットＰＤＥ遺伝子（ラットＰＤ
Ｅ１０遺伝子）の翻訳領域全長を含むｃＤＮＡの塩基配
列（上段）及びそれにコードされた新規ラットＰＤＥ
（ラットＰＤＥ１０）のアミノ酸配列（下段）を表す。

【００２３】配列番号１５及び１６は新規ラットＰＤＥ
遺伝子（ラットＰＤＥ１０遺伝子）の２種類のバリアン
トに由来する配列である。

【００２４】前記配列番号１５及び配列番号１６に示さ
れる塩基配列またはアミノ酸配列について、既知ＤＮＡ
データベース（ＧｅｎＢａｎｋおよびＥＭＢＬ）および
プロテインデータベース（ＮＢＲＦおよびＳＷＩＳＳ−
ＰＲＯＴ）に対してホモロジー検索を行った結果、ＥＳ
Ｔ（Genbank/EMBL ID No:H32734）を除き、同一分子種
に由来すると考えられるものは見出されなかった。

【００２５】ヒトとラットのＰＤＥ１０各々のアミノ酸
配列を比較した場合、約９６％もの高い相同性が認めら
れる。

【００２６】

【発明の実施の形態】本発明の蛋白質としては、配列番
号１、２、１５又は１６で示されるアミノ酸配列を有す
るものが挙げられる。また、配列番号１、２、１５又は
１６で示されるアミノ酸配列において、１もしくは複数
個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸
配列を有するものが挙げられる。アミノ酸の欠失、置換
もしくは付加は、環状ヌクレオチドを加水分解する活性
が失われない程度であればよく、通常１〜約１６０個、
好ましくは１〜約８０個、より好ましくは１〜約４０個
である。このような蛋白質は、配列番号１、２、１５又
は１６で示されたアミノ酸配列と通常約８０％以上、好
ましくは約９０％以上、より好ましくは約９５％以上の
アミノ酸レベルのホモロジーを有する。このような蛋白
質には、自然界で発見される変異型蛋白質のほか、人為
的に改変した変異蛋白質、異種生物由来の蛋白質等が含
まれる。

【００２７】本発明の遺伝子又は核酸としては、配列番
号１、２、１５又は１６で示される塩基配列を有するＤ
ＮＡを含むものが挙げられる。また、配列番号１、２、
１５又は１６で示される塩基配列を有するＤＮＡとスト
リンジェントな条件下でハイブリダイズし得るＤＮＡを
含むものが挙げられる。このようなハイブリダイズし得
るＤＮＡは、環状ヌクレオチドを加水分解する活性を有
する蛋白質をコードするものであればよい。このような
ＤＮＡは、配列番号１、２、１５又は１６で示される塩
基配列と、通常約７０％以上、好ましくは約８０％以
上、より好ましくは約９０％以上のホモロジーを有す
る。このような遺伝子又は核酸としては、自然界で発見
される変異型遺伝子、人為的に改変した変異型遺伝子、
異種生物由来の相同遺伝子等が含まれる。

【００２８】本発明において、ストリンジェントな条件
下でのハイブリダイゼーションは、通常のストリンジェ
ントな条件では、６×ＳＳＣまたはこれと同等の塩濃度
のハイブリダイゼーション溶液中、５０〜７０℃の温度
条件下、約１６時間ハイブリダイゼーションを行い、６
×ＳＳＣまたはこれと同等の塩濃度の溶液等で必要に応
じて予備洗浄を行った後、１×ＳＳＣまたはこれと同等
の塩濃度の溶液中で洗浄を行うことにより実施できる。
また、より高いストリンジェンシーを有する条件（ハイ
ストリンジェントな条件）では、前記において、洗浄を
０．１×ＳＳＣまたはこれと同等の塩濃度の溶液中で行
うことにより実施できる。

【００２９】本発明の遺伝子又は核酸は、哺乳動物の組
織や細胞を遺伝子源としてスクリーニングを行うことに
より単離取得できる。哺乳動物としては、イヌ、ウシ、
ウマ、ヤギ、ヒツジ、サル、ブタ、ウサギ、ラットおよ
びマウスなどの非ヒト動物のほか、ヒトが挙げられる。

【００３０】本発明の遺伝子又は核酸は、本明細書中に
開示された配列情報（後記配列表の配列番号１、２、１
５及び１６）を利用して取得することができる。例え
ば、開示された塩基配列の情報をもとにプライマーやプ
ローブを設計し、これらを用いるＰＣＲ（polymerase c
hain reaction）法、コロニーハイブリダイゼーション
法、プラークハイブリダイゼーション法を適宜組み合わ
せて、ＤＮＡライブラリーから選択・取得できる。

【００３１】例えば、哺乳動物の細胞や組織から調製し
たｍＲＮＡからｃＤＮＡを合成し、これを鋳型として、
ＰＣＲ法によりｃＤＮＡ断片を得る。得られたｃＤＮＡ
をプローブとして用い、コロニーハイブリダイゼーショ
ン法又はプラークハイブリダイゼーション法によりｃＤ
ＮＡライブラリーをスクリーニングして、全長ｃＤＮＡ
を取得できる。また、ゲノミックＤＮＡライブラリーを
スクリーニングすることにより、ゲノム遺伝子を単離す
ることができる。また、他の哺乳動物のＤＮＡライブラ
リーをスクリーニングすることにより、異種生物由来の
相同遺伝子を単離することができる。このような哺乳動
物としては、例えばイヌ、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、
サル、ブタ、ウサギおよびラットなどの非ヒト動物のほ
か、ヒトが挙げられる。

【００３２】ｃＤＮＡライブラリーおよびゲノミックＤ
ＮＡライブラリー等のＤＮＡライブラリーは、例えば、
「ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ」（Sambrook,
J.,Fritsch, E.F.およびManiatis, T.著、Cold Spring
Harbor Laboratory Pressより１９８９年に発刊）に記
載の方法により調製することができる。あるいは、市販
のライブラリーがある場合はこれを用いてもよい。

【００３３】得られたｃＤＮＡの塩基配列を決定するこ
とにより、遺伝子産物の蛋白質をコードする翻訳領域を
決定でき、この蛋白質のアミノ酸配列を得ることができ
る。

【００３４】本発明のＰＤＥは、通常の遺伝子組換え技
術により過剰発現（overexpression）させ生産すること
ができる。また、他の蛋白質やペプチドとの融合蛋白
（fusion protein）の形で発現させ生産することもでき
る。

【００３５】例えば、ＰＤＥをコードするＤＮＡを、適
当なプロモーターの下流に連結される形でベクターに挿
入し、発現ベクターを構築する。ついで得られた発現ベ
クターを宿主細胞に導入する。

【００３６】発現系（宿主−ベクター系）としては、例
えば、細菌、酵母、昆虫細胞及び哺乳動物細胞の発現系
などが挙げられる。このうち、機能がよく保存された蛋
白質を得るためには、昆虫細胞（Spodoptera frugiperd
a SF9、SF21等）および哺乳動物細胞（サルＣＯＳ−７
細胞、チャイニーズハムスターＣＨＯ細胞、ヒトＨｅＬ
ａ細胞等）を宿主として用いることが好ましい。

【００３７】ベクターとしては、哺乳動物細胞系の場
合、レトロウイルス系ベクター、パピローマウイルスベ
クター、ワクシニアウイルスベクター、ＳＶ４０系ベク
ター等、昆虫細胞系の場合、バキュロウイルスベクター
等を用いることができる。

【００３８】プロモーターとしては、哺乳動物細胞系の
場合、ＳＶ４０プロモーター、ＬＴＲプロモーター、エ
ロンゲーション１αプロモーター等、昆虫細胞系の場
合、ポリヘドリンプロモーター等を用いることができ
る。

【００３９】ＰＤＥをコードするＤＮＡとしては、自然
界に存在するｍＲＮＡに対応するｃＤＮＡ（例えば、配
列番号１、２、１５及び１６に示される塩基配列を有す
るもの）を用いることができるが、これに限定されな
い。目的とする蛋白質のアミノ酸配列に対応するＤＮＡ
を設計して用いることもできる。この場合、ひとつのア
ミノ酸をコードするコドンは各々１〜６種類知られてお
り、用いるコドンの選択は任意でよいが、例えば発現に
利用する宿主のコドン使用頻度を考慮して、より発現効
率の高い配列を設計することができる。設計した塩基配
列を持つＤＮＡは、ＤＮＡの化学合成、前記ｃＤＮＡの
断片化と結合、塩基配列の一部改変等によって取得でき
る。人為的な塩基配列の一部改変、変異導入は、所望の
改変をコードする合成オリゴヌクレオチドからなるプラ
イマーを利用して部位特異的変異導入法（site specifi
c mutagenesis）（Proceedings of National Academy o
f Sciences、第81巻、第5662〜5666頁、1984年）等に
よって実施できる。

【００４０】本発明のＰＤＥは、発現ベクターを導入し
た細胞の培養物などから、公知の精製方法（無機塩類に
よる塩析、有機溶媒による分画沈殿、イオン交換樹脂カ
ラムクロマトグラフィー、アフィニティーカラムクロマ
トグラフィー、ゲルろ過法など）を適宜組合せることに
よって、分離精製できる。

【００４１】本発明の遺伝子又は核酸とストリンジェン
トな条件下でハイブリダイズする核酸（オリゴヌクレオ
チドもしくポリヌクレオチド）は、本発明の遺伝子を検
出するためのプローブとして使用できる。また、遺伝子
の発現を変調させるために、例えばアンチセンスオリゴ
ヌクレオチドや、リボザイム、デコイとして使用するこ
ともできる。このような核酸としては、例えば、配列番
号１、２、１５又は１６で示される塩基配列の中の通
常、連続する１４塩基以上の部分配列もしくはその相補
的な配列を有するヌクレオチドを用いることができる。

【００４２】本発明のＰＤＥ又はこれと免疫学的同等性
を有する蛋白質もしくはペプチド（蛋白質の断片または
部分配列を有する合成ペプチド等）を抗原として用い
て、本発明のＰＤＥを認識する抗体を取得することがで
きる。免役学的同等性を有するとは、例えば本発明のＰ
ＤＥに対する抗体と交差反応を生じるということを意味
する。

【００４３】ポリクローナル抗体は、宿主動物（例え
ば、ラットやウサギ等）に抗原を接種し、免疫血清を回
収する通常の方法により製造することができる。モノク
ローナル抗体は、通常のハイブリドーマ法などの技術に
より製造できる。また、モノクローナル抗体の遺伝子を
改変してヒト化モノクローナル抗体等を作製できる。

【００４４】上記で得られた抗体を用いて、通常の免疫
化学的方法（enzyme immuno assay法など）により、本
発明のＰＤＥの細胞中又は組織中などにおける発現を検
出することができる。あるいは、抗体を用いるアフィニ
ティクロマトグラフィーにより本発明のＰＤＥの精製を
実施することができる。

【００４５】本発明のＰＤＥが、環状ヌクレオチド（ｃ
ＡＭＰ又はｃＧＭＰ）を加水分解する活性を有すること
は、一般的に知られた通常のＰＤＥ活性測定の方法（Th
ompsonら、Adv.Cyclic Nucleotide Res.、第10巻、第69
−92頁、1979年；Yanakaら、Eur.J.Biochem.、第255
巻、第391−399頁、1998年）により確認することができ
る。

【００４６】酵素反応の基質としては、ｃＡＭＰ及びｃ
ＧＭＰなどの環状ヌクレオチド及びその誘導体を用いる
ことができる。本発明のＰＤＥは、ｃＡＭＰ及びｃＧＭ
Ｐのいずれをも基質としこれらを加水分解する。

【００４７】本発明のＰＤＥは、ホスホジエステラーゼ
阻害剤の特徴付け、同定又は選択のために使用すること
ができる。

【００４８】例えば、本発明のＰＤＥ、酵素の基質及び
被験物質（好ましくは低分子化合物など）を含む系内で
酵素反応を行い、酵素活性（環状ヌクレオチドを加水分
解する活性）に対する被験物質の阻害作用を検定する。

【００４９】あるいは、本発明のＰＤＥ及び被験物質
（好ましくは低分子化合物など）を含む系内で結合反応
を行い、被験物質が本発明のＰＤＥに対して結合能を有
するか否かを検定する。結合能力を有する被験物質（リ
ガンド）は、阻害剤となる可能性が高い。

【００５０】さらに、被験物質（好ましくは低分子化合
物など）について、本発明のＰＤＥに対する阻害作用
（又は結合能）を調べ、他の型のＰＤＥに対する阻害作
用（又は結合能）と比較することにより阻害作用（又は
結合能）の選択性を判定できる。これにより、特定の型
のＰＤＥに対して相対的に高い作用を有する阻害剤（選
択的な阻害剤）を選択することができる。また、阻害剤
を同定し、特徴付けることができる。

【００５１】以下、実施例をもって本発明をさらに詳し
く説明するが、これらの実施例は本発明を制限するもの
ではない。

【００５２】なお、下記実施例において、各操作は特に
明示がない限り、「モレキュラークローニング（Molecu
lar Cloning）」（Sambrook, J., Fritsch, E.F.及びMa
niatis, T. 著、Cold Spring Harbor Laboratory Press
より1989年に発刊）に記載の方法により行うか、また
は、市販の試薬やキットを用いる場合には市販品の指示
書に従って使用した。

【００５３】

【実施例】実施例１ヒト新規ＰＤＥ（ＰＤＥ１０）の
ｃＤＮＡの単離（１）ヒトＰＤＥ５Ａ（Genbank/EMBL データベース Accessio
n No.Ｄ89094；Yanakaら、Eur.J.Biochem.、第255巻、
第391〜399頁、1998年）のＣ−末端触媒領域（第５００
〜８７５番目のアミノ酸残基に相当する領域）のアミノ
酸配列をクエリー配列として、ＢＬＡＳＴ（Ｂａｓｉｃ
ＬｏｃａｌＡｌｉｇｎｍｅｎｔＳｅａｒｃｈＴ
ｏｏｌ）法により、ＥＳＴ（Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄｓｅ
ｑｕｅｎｃｅｔａｇｓ）データベースを検索した。こ
れにより、いくつかのＥＳＴがヒトＰＤＥ５ＡのＣ−末
端触媒領域と相同性を有するものとして見出され、さら
にこれらの中から、既知ＰＤＥの配列とは異なる新規配
列を有する一つのＥＳＴ（ID No:W04835）を見出した。

【００５４】このＥＳＴ（ID No.W04835）に相当するＤ
ＮＡ断片(約４００ｂｐ）を、ＰＣＲ（polymerase chai
n reaction）法にて取得した。

【００５５】ＰＣＲの反応は、１サイクルが９４℃１分
間、５５℃２分間、および７２℃２分間の条件で、合計
６０サイクル行った。

【００５６】最初の３０サイクルは、プライマーとし
て、後記配列表の配列番号３及び配列番号４に示した配
列を有するオリゴヌクレオチドを、各々センスプライマ
ー及びアンチセンスプライマーとして用いた。また、鋳
型としては、ヒト胎児肺由来ｃＤＮＡライブラリー（ベ
クター：λｇｔ１１ファージ）（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社
製）を用いた。

【００５７】続く３０サイクルは、前記ＰＣＲの産物の
１／１０量を鋳型として行った。プライマーは、後記配
列表の配列番号５及び配列番号６に示した配列を有する
オリゴヌクレオチドを、各々センスプライマー及びアン
チセンスプライマーとして用いた。

【００５８】得られたＰＣＲ産物を制限酵素で処理した
後、ベクタープラスミドｐＧＥＭ−Ｔｅａｓｙ（Ｐｒｏ
ｍｅｇａ社製）に連結し、その塩基配列を決定した。塩
基配列は、自動ＤＮＡシーケンサー（ＬＩ−ＣＯＲ４０
００Ｌ；ＬＩ−ＣＯＲ社製およびＡＢＩＰＲＩＳＭ３
１０；ＰＥアプライドバイオシステムズ社製）を用い、
ダイデオキシ法により決定した（以下、同）。これによ
り、得られたＤＮＡ断片が、前記ＥＳＴ（ID No.W0483
5）とほぼ同様の配列を有していることを確認した。

【００５９】このＤＮＡ断片（³²Ｐでラベルしたもの）
をプローブとし、プラークハイブリダイゼーションを行
った。ｃＤＮＡライブラリーは、前記と同様のヒト胎児
肺由来ｃＤＮＡライブラリーを用いた。

【００６０】プラークハイブリダイゼーションは、以下
のように高ストリンジェントな条件下で行った。すなわ
ち、プラ−クをアルカリ処理し、ＤＮＡを変性固定した
ナイロンメンブレン（Hybond-N+）を、プローブを含む
ハイブリダイゼーション溶液（６ｘＳＳＣ、０．５％Ｓ
ＤＳ、５ｘデンハルト溶液、１００μｇ／ｍｌのサケ精
子ＤＮＡ）中、６５℃、１６時間、置いてハイブリダイ
ゼーションさせた。（なお、１ｘＳＳＣの組成は、０．
１５Ｍ塩化ナトリウムおよび１５ｍＭクエン酸ナトリウ
ム、ｐＨ７．０であり、１ｘデンハルト溶液の組成は、
０．０２％ウシ血清アルブミン、０．０２％ポリビニル
ピロリドンおよびＦｉｃｏｌｌ４００である。以下、
同）ついで予備洗浄溶液（２ｘＳＳＣ、０．５％ＳＤ
Ｓ）を用い、室温で１０分間、メンブレンを洗浄した
後、さらに洗浄溶液（０．１ｘＳＳＣ、０．５％ＳＤ
Ｓ）を用い、６５℃で３０分間、２度洗浄した。その後
−７０℃で１日間、オートラジオグラフィーを行い、陽
性クローンを検出した。

【００６１】得られた陽性クローン（クローンヒトＰＤ
Ｅ１０Ａ１と称する）から挿入ｃＤＮＡ断片を単離し、
ベクタープラスミドｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＩＩＳＫ
（＋）（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ社製）にサブクローニン
グした。得られたプラスミドを用いｃＤＮＡ断片の塩基
配列を決定した。

【００６２】単離したｃＤＮＡ（４５７６ｂｐ）は、新
規なヒトＰＤＥ（以下、ＰＤＥ１０と称する）遺伝子の
全長ｃＤＮＡであると考えられた。このｃＤＮＡの塩基
配列を解析して、オープンリーディングフレームを同定
し、さらにそれにコードされる蛋白質のアミノ酸配列を
決定した。

【００６３】後記配列表の配列番号１に、この全長ｃＤ
ＮＡの塩基配列（配列番号１上段）及びそれにコードさ
れる蛋白質（新規なヒトＰＤＥ（ＰＤＥ１０））のアミ
ノ酸配列（配列番号１下段）を示した。アミノ酸配列
（７７９アミノ酸残基）から推定されるＰＤＥ１０の分
子量は、約８８Ｋｄであった。

【００６４】また、既知ＰＤＥとのアミノ酸配列上のホ
モロジーを調べたところ、配列の類似性から、ＰＤＥ１
０のｃＧＭＰ結合領域及び触媒領域は、各々第２４３〜
４４５番目及び４９３〜７２８番目のアミノ酸残基に相
当する領域と推定された。

【００６５】ＰＤＥ１０のアミノ酸配列を、既知の各種
ｃＧＭＰ結合型ヒトＰＤＥと比較すると、触媒領域にお
いては、ＰＤＥ２Ａと４２％、ＰＤＥ５Ａと４７％、Ｐ
ＤＥ６Ａと４０％、ＰＤＥ６Ｂと４２％のホモロジーを
示した。

【００６６】また、ｃＧＭＰ結合領域においては、ＰＤ
Ｅ２Ａ、ＰＤＥ５Ａ及び光受容体ホスホジエステラーゼ
と、各々の１８〜３８％のホモロジーを示した。

【００６７】ＰＤＥ１０は、典型的なｃＧＭＰ結合モチ
ーフを含むｃＧＭＰ結合領域を１つ有する。しかし、Ｐ
ＤＥ５Ａ中に見つけられたｃＡＭＰ又はｃＧＭＰ依存キ
ナーゼのリン酸化領域は、この配列中には認めれなかっ
た。

【００６８】さらに、得られたＰＤＥ１０のｃＤＮＡ塩
基配列情報をもとに翻訳領域を囲むＰＣＲプライマーを
設計し、これを用いるＲＴ−ＰＣＲ（reverse transcri
pt -polymerase chain reaction）により、ヒト肺由来
ｍＲＮＡ中に前記と同一のＰＤＥ１０クローンが存在す
ることを以下のようにして確認した。

【００６９】すなわち、ヒト胎児肺ポリ（Ａ）＋ＲＮＡ
（ＣｌｏｎｔｅｃｈＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）
とランダムプライマー（ヘキサマー）を用いて４２℃、
６０分間、逆転写反応を行った後、得られたｃＤＮＡを
鋳型としてＰＣＲを行った。ＰＣＲのプライマーは、後
記配列表の配列番号７〜１０に示した塩基配列を有する
オリゴヌクレオチドを合成して用いた。ＰＣＲの反応は
前記と同様の条件で行った。

【００７０】ＰＣＲで増幅されたＤＮＡ断片（約２．４
ｋｂ）の塩基配列を決定し、前記ｃＤＮＡ配列と比較し
たところ、ＰＣＲで増幅された部分の塩基配列は一致し
た。

【００７１】実施例２ヒト新規ＰＤＥ（ＰＤＥ１０）
のｃＤＮＡの単離（２）前記実施例１で得られたＰＤＥ１０のｃＤＮＡ塩基配列
情報をもとに翻訳領域を囲むＰＣＲプライマーを設計
し、これを用いるＲＴ−ＰＣＲにより、新たなｃＤＮＡ
クローンの取得を試みた。

【００７２】まず、ヒト胎児肺ポリ（Ａ）＋ＲＮＡ（Ｃ
ｌｏｎｔｅｃｈＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）とラ
ンダムプライマー（ヘキサマー）を用いて４２℃、６０
分間、逆転写反応を行った後、得られたｃＤＮＡを鋳型
としてＰＣＲを行った。ＰＣＲのプライマーは、後記配
列表の配列番号１１〜１４に示した塩基配列を有するオ
リゴヌクレオチドを合成して用いた。ＰＣＲの反応は、
１サイクルが９４℃３０秒間、５５℃３０秒間、および
７２℃２分間の条件で、合計６０サイクル行い、最終サ
イクルとして７２℃で５分間の条件で１サイクルを行っ
た。

【００７３】最初の３０サイクルは、プライマーとし
て、後記配列表の配列番号１１及び配列番号１２に示し
た配列を有するオリゴヌクレオチドを、各々センスプラ
イマー及びアンチセンスプライマーとして用いた。続く
３０サイクルは、プライマーとして、後記配列表の配列
番号１３及び配列番号１４に示した配列を有するオリゴ
ヌクレオチドを、各々センスプライマー及びアンチセン
スプライマーとして用いた。

【００７４】ＰＣＲで増幅されたＤＮＡ断片（約２．４
ｋｂ）を新規ｃＤＮＡクローン（クローンヒトＰＤＥ１
０Ａ２と称する）として取得し、その塩基配列を決定し
た。

【００７５】これを、実施例１で得たｃＤＮＡ配列と比
較したところ、５'末端領域で一部塩基配列の相違が見
られたが、それ以外では一致していた。

【００７６】新たに得られたクローン（ヒトＰＤＥ１０
Ａ２）のｃＤＮＡ塩基配列及びそれにコードされる蛋白
質のアミノ酸配列を、後記配列表の配列番号２に示し
た。

【００７７】新たに得られたクローン（ヒトＰＤＥ１０
Ａ２）は、実施例１のＰＤＥ１０（ヒトＰＤＥ１０Ａ１
と称する）のスプライシングバリアントに相当すると推
察された。ヒトＰＤＥ１０Ａ１とヒトＰＤＥ１０Ａ２
は、アミノ酸配列上のＮ末端側（配列番号１の第１〜１
３番目のアミノ酸残基、配列番号２の第１〜２３番目の
アミノ酸残基）及びこれらに対応するｃＤＮＡ配列が相
違している。またこの相違部分には、ｃＡＭＰ又はｃＧ
ＭＰ依存キナーゼによってリン酸化を受けるとされるア
ミノ酸配列のモチーフが存在することを確認した。

【００７８】実施例３ヒトＰＤＥ１０のＣＯＳ細胞
中での発現と精製（１）ＰＤＥ１０発現用ベクタープラスミドの構築前記実施例１で得たヒトＰＤＥ１０のｃＤＮＡを、制限
酵素ＳｓｐＩ及びＮｏｔＩで消化し、得られた断片（約
２．８ｋｂ）をベクタープラスミドｐＢｌｕｅｓｃｒｉ
ｐｔＩＩＳＫ（＋）（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ社製）
のＳｐｅＩ（平滑末端化）−ＮｏｔＩ部位に挿入した。
得られたプラスミドを、制限酵素ＮｏｔＩ（平滑末端
化）及びＢａｍＨＩで消化し得られた断片（約２．８ｋ
ｂ）を、ベクタープラスミドｐＳＶＬ（Ａｍｅｒｓｈａ
ｍＰｈａｒｍａｃｉａＢｉｏｔｅｃｈ社製）のＸｂ
ａＩ（平滑末端化）−ＢａｍＨＩ部位に挿入して、ＰＤ
Ｅ１０発現用ベクタープラスミドｐＳＶＬ−ＰＤＥ１０
を得た。ｐＳＶＬ−ＰＤＥ１０においては、ＳＶ４０プ
ロモーターの下流にヒトＰＤＥ１０のｃＤＮＡが機能的
に連結されている。

【００７９】（２）ＣＯＳ細胞中での発現ＣＯＳ−７細胞（ＡＴＣＣ；ＣＲＬ１６５１）は、１０
％ウシ胎児血清、１００ユニット／ｍｌペニシリン及び
１００μＭ／ストレプトマイシンを添加したダルベッコ
・イーグル培地（Dulbecco's modified Eagle's mediu
m）（Ｇｉｂｃｏ社製）中、３７℃、５％二酸化炭素の
条件下で継代培養した。

【００８０】ＣＯＳ−７細胞に、前記ｐＳＶＬ−ＰＤＥ
１０（又は対照としてベクターｐＳＶＬ）をトランスフ
ェクション（一過性トランスフェクション；transient
transfection）した。トランスフェクションは、ポリカ
チオン性リポソーム試薬（商品名：LipofectAMINE、Ｇ
ｉｂｃｏ社製）を用いて行った。

【００８１】（３）組換えヒトＰＤＥ１０の精製トランスフェクションの４８時間後、細胞を、氷冷した
リン酸塩緩衝液で洗浄した後、氷冷ホモジナイズ用緩衝
液（２０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、２ｍＭ
酢酸マグネシウム、０．３ｍＭ塩化カルシウム、１ｍＭ
ジチオスレイトール、４０μＭロイペプチン、１．３ｍ
Ｍベンズアミジン、０．２ｍＭフェニルメチルスルホニ
ルフルオリド、１ｍＭアジ化ナトリウム）中で超音波
処理して破砕した。得られたホモジネートを遠心（１０
００００ｇ、６０分間）し、上清を分取した。

【００８２】溶出緩衝液（２０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣ
ｌ、ｐＨ７．４、１ｍＭ塩化カルシウム、１ｍＭジチオ
トレイトール、２μＭロイペプチン、５ｍＭベンズアミ
ジン）で平衡化したＭｏｎｏＱセファロース高速カラム
（ＡｍｅｒｓｈａｍＰｈａｒｍａｃｉａＢｉｏｔｅ
ｃｈ社製）に、前記で得た上清を供した。カラムを溶出
緩衝液２０ｍｌで洗浄した後、塩化ナトリウム勾配
（０、３５０及び８００ｍＭ、各２０ｍｌ）で蛋白を溶
出し、氷冷下２ｍｌずつ分画した。各画分について、ｃ
ＡＭＰ及びｃＧＭＰを基質とする加水分解活性（ＰＤＥ
活性）を測定した。

【００８３】ＰＤＥ活性の測定は、ラジオラベル核酸法
により行った。すなわち、１μＭの非標識ｃＧＭＰ（又
はｃＡＭＰ）及び２２ｎＭの［³Ｈ］−ｃＧＭＰ（又は
［³Ｈ］−ｃＡＭＰ）（ＡｍｅｒｓｈａｍＰｈａｒｍ
ａｃｉａＢｉｏｔｅｃｈ社製）を含むアッセイ用緩衝
液（５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８．０、５ｍＭ
塩化マグネシウム、４ｍＭ２−メルカプトエタノー
ル、０．３３ｍｇ／ｍｌウシ血清アルブミン（脂肪酸不
含、シグマ社製）、）５００μｌ中に１０〜３０μｌの
酵素溶液を添加して反応を開始した。３７℃で３０分間
保温して反応を行った後、１．５分間煮沸して反応を停
止させ、さらに１ｍｇ／ｍｌのヘビ毒（Crotalus atrox
snake venom）１００μｌを添加して３７℃で３０分間
保温した。ついで、５００μｌのメタノールを添加し、
反応液をＤｏｗｅｘカラム（１ｘ８−４００）で処理し
た後、各溶出液に液体シンチレーションカクテルを加
え、ラジオ活性を測定した。

【００８４】ＭｏｎｏＱセファロースカラムクロマトグ
ラフィーで分画した細胞抽出液の各画分のＰＤＥ活性
を、図１に示した。

【００８５】ＰＤＥ１０発現用ベクター（ｐＳＬＶ−Ｐ
ＤＥ１０）をトランスフェクトした細胞の抽出液画分N
o.14に、ｃＡＭＰ及びｃＧＭＰに対する強い加水分解活
性のピークが認められた。このピークは、ベクター（ｐ
ＳＬＶ）のみをトランスフェクトした細胞の抽出液では
見られなかったことから、組換えヒトＰＤＥに由来する
と考えられた。また、ＰＤＥ１０はｃＡＭＰ及びｃＧＭ
Ｐのいずれをも加水分解する活性を有することがわかっ
た。この画分No.14を部分精製組換えヒトＰＤＥとして
用いた。

【００８６】画分No.24付近にも活性のピークが認めら
れたが、ベクターのみをトランスフェクトした細胞の抽
出液でも同様のピークは見られたことから、これは宿主
であるＣＯＳ細胞のＰＤＥに由来すると考えられた。

【００８７】実施例４ヒトＰＤＥ１０の酵素的性質の
解析前記実施例３と同様にして得た精製組換えヒトＰＤＥを
用い、以下のようにして種々の酵素的性質を解析した。

【００８８】（１）酵素反応の速度論的解析種々の基質（ｃＧＭＰ又はｃＡＭＰ）濃度を用いて酵素
反応を行い、ＰＤＥ活性（反応初速度）を測定した。酵
素反応とＰＤＥ活性測定は、前記実施例３（３）と同様
にして行った。但し、反応液中、非標識ｃＡＭＰを添加
する場合の濃度は０．１〜２μＭ、非標識ｃＧＭＰを添
加する場合の濃度は０．２〜１６μＭとした。また、反
応終了後の基質の分解率が約１０％程度となるよう、酵
素量を設定し、反応時間は３０分間とした。

【００８９】結果（Lineweaver-Burk plot）を図２に示
した。解析の結果から、ヒトＰＤＥ１０のｃＡＭＰを基
質とした時のＫ_m値は、７．２±０．６２μＭであり、
Ｖｍａｘは１．４±０．０７７ｐｍｏｌ／分／μｇであ
った。また、ｃＧＭＰを基質とした時のＫ_m値は、０．
２６±０．０４８μＭであり、Ｖｍａｘは０．６３±
０．１２ｐｍｏｌ／分／μｇであった。

【００９０】これらのことから、ＰＤＥ１０はｃＡＭＰ
及びｃＧＭＰのいずれをも加水分解する活性を有する
が、ｃＡＭＰに対してより強い親和性を有することがわ
かった。

【００９１】（２）ｃＡＭＰ分解活性に対するｃＧＭＰ
の影響ｃＡＭＰを基質として酵素反応を行い、反応液中に種々
の濃度のｃＧＭＰを添加してＰＤＥ活性に対する影響を
調べた。

【００９２】酵素反応及びＰＤＥ活性測定は、前記実施
例３（３）と同様にして行った。但し、反応液中、非標
識ｃＡＭＰを０．３μＭ（［³Ｈ］−ｃＡＭＰは２２ｎ
Ｍ）添加し、さらにｃＧＭＰ（非標識）を０．０１〜３
０μＭ添加（もしくは非添加）した。また、反応終了後
の基質の分解率が約１０％程度となるよう、酵素量を設
定し、反応時間は３０分間とした。

【００９３】ｃＧＭＰ非添加の場合のｃＡＭＰ分解活性
を１００％とし、活性の相対値（％）を算出した。結果
を図３に示した。図３から明らかなように、ｃＧＭＰの
添加濃度に依存して、ｃＡＭＰ分解活性の低下が認めら
れた。ＰＤＥ１０は、ＰＤＥ２とは異なりｃＧＭＰ濃度
によってＰＤＥ活性の上昇は認められなかった。

【００９４】（３）各種既知ＰＤＥ阻害剤による活性阻
害ヒトＰＤＥ１０のｃＡＭＰ及びｃＧＭＰ加水分解活性
（ＰＤＥ活性）に対する各種既知ＰＤＥ阻害剤（ＩＢＭ
Ｘ、ビンポセチン、EHNA、ザプリナスト、ジピリダモー
ル、ロリプラム、ミルリノン、SCH51866及びE-4021）の
作用を以下のようにして調べた。

【００９５】ｃＡＭＰ又はｃＧＭＰを基質として酵素反
応を行い、反応液中に種々の既知ＰＤＥ阻害剤を添加し
て加水分解活性を測定した。酵素反応及びＰＤＥ活性測
定は、前記実施例３（３）と同様にして行った。但し、
反応液中、非標識ｃＡＭＰを添加する場合の濃度は０．
３μＭとし、非標識ｃＧＭＰを添加する場合の濃度は７
μＭとし、反応液中に各種ＰＤＥ阻害剤を０〜１００μ
Ｍ添加した。

【００９６】反応終了後の基質の分解率が約１０％程度
となるよう、酵素量を設定し、反応時間は３０分間とし
た。

【００９７】ヒトＰＤＥ１０の活性に対する各種ＰＤＥ
阻害剤の阻害作用をＩＣ５０で表した結果を、表１に示
した。

【００９８】

【表１】

【００９９】実施例５ヒトの各種組織におけるＰＤＥ
１０の発現ヒトの種々の組織（心臓、脳、脾臓、肺、肝臓、骨格
筋、腎臓、精巣、大腿骨、頭頂骨）におけるＰＤＥ１０
遺伝子発現の有無を、以下のように調べた。

【０１００】各種のヒト組織由来ｍＲＮＡ（ポリ（Ａ）
＋ＲＮＡ）（商品名ヒトＲＮＡマルチプル・ティシュ
・ノーザン（ＭＴＮ）ブロット（ＣｌｏｎｔｅｃｈＬ
ａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）を用いてドットブロット
解析を行った。プローブとしては、実施例１で得たヒト
ＰＤＥ１０ｃＤＮＡの中の触媒領域に対応する断片（Ｅ
ｃｏＲＩ切断断片；配列番号１の第１５０９〜２３０８
番目の塩基配列に相当）を³²Ｐで標識して用いた。

【０１０１】ポリ（Ａ）＋ＲＮＡ量は、ヒトユビキチン
のｃＤＮＡと主組織適合性複合体クラスＩｃをプローブ
とし、それらに対するシグナルが一定になる様に調節し
た量を用いた。ハイブリダイゼーションは、以下のよう
な条件下で行った。すなわち、ナイロンメンブレン（Hy
bond-N+）を、³²Ｐで標識したプローブを含むハイブリ
ダイゼーション溶液（５０％ホルムアミド、４ｘＳＳ
Ｃ、０．５％ＳＤＳ、５ｘデンハルト溶液、１００μｇ
／ｍｌのサケ精子ＤＮＡ）中、４２℃、１６時間、置い
てハイブリダイゼーションさせた。ついで洗浄溶液
（０．２ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ）を用い、６０℃で
１時間、洗浄した。その後−７０℃で５日間、オートラ
ジオグラフィーを行った。

【０１０２】ドットブロットの結果、図４に示した通
り、ＰＤＥ１０ｍＲＮＡの強い発現が果核、尾状核及び
精巣で検出された。また、やや弱い発現が甲状腺、下垂
体腺、視床及び小脳で見られた（発現の強さの順は記載
順序の通りであった）。

【０１０３】また、種々のヒト組織由来ｍＲＮＡについ
て、ノーザンブロット解析を、上記と同様のプローブを
用い、同様の条件で行った。

【０１０４】ノーザンブロッティングの結果、約１０ｋ
ｂのバンドが、多数の組織で検出された。しかし、特に
精巣では、約１０ｋｂのバンドに加え、約４．０ｋｂの
バンドが観察されたことから、これら組織では変異型
（ｖａｒｉａｎｔｆｏｒｍｓ）のＰＤＥｍＲＮＡが発
現していることが考えられた。また、ｍＲＮＡのバンド
のサイズが、単離されたｃＤＮＡより長いことから、Ｐ
ＤＥ１０のｍＲＮＡは長い非翻訳部分を持つと考えられ
た。

【０１０５】実施例６ラット新規ＰＤＥ（ＰＤＥ１
０）のｃＤＮＡの単離後記配列表の配列番号１に示したヒトＰＤＥ１０ｃＤＮ
Ａの翻訳領域のｃＤＮＡ塩基配列をクエリー配列とし
て、ＢＬＡＳＴ（ＢａｓｉｃＬｏｃａｌＡｌｉｇｎ
ｍｅｎｔＳｅａｒｃｈＴｏｏｌ）法により、ＥＳＴ
（Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄｓｅｑｕｅｎｃｅｔａｇｓ）
データベースを検索した。これにより、クエリー配列と
極めて相同性の高い、ラットＰＣ１２細胞由来の１つの
ＥＳＴ（IDNo:H32734）を見出した。

【０１０６】このＥＳＴ（ID No. H32734）に相当する
ＤＮＡ断片を、ＰＣＲ（polymerasechain reaction）法
にて取得した。

【０１０７】ＰＣＲの反応は、１サイクルが９４℃１分
間、５５℃１分間、および７２℃１分間の条件で、合計
３０サイクル行った。

【０１０８】プライマーとして、後記配列表の配列番号
１７及び配列番号１８に示した配列を有するオリゴヌク
レオチドを用いた。また、鋳型としては、ラット脳由来
ｃＤＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社製）を用いた。

【０１０９】得られたＰＣＲ産物をＴＡ−クローニング
ベクタープラスミドｐＧＥＭ−Ｔｅａｓｙ（Ｐｒｏｍｅ
ｇａ社製）に連結し、その塩基配列を決定した。塩基配
列は、自動ＤＮＡシーケンサー（ＡＢＩＰＲＩＳＭ３
１０；ＰＥアプライドバイオシステムズ社製）を用い、
ダイデオキシ法により決定した。

【０１１０】これにより、得られたＤＮＡ断片が、前記
ＥＳＴ（ID No. H32734）とほぼ同様の配列を有してい
ることを確認した。

【０１１１】このＤＮＡ断片（³²Ｐでラベルしたもの）
をプローブとし、プラークハイブリダイゼーションを行
った。ｃＤＮＡライブラリーは、λＺＡＰシステムによ
り構築されたラット脳由来ｃＤＮＡライブラリー（Ｓｔ
ｒａｔａｇｅｎｅ社製）を用いた。

【０１１２】プラークハイブリダイゼーションは、以下
のような条件下で行った。すなわち、１プレート当り約
５Ｘ１０⁴個のプラ−クとなるようにして、１８のプレ
ートのプラ−クをナイロンメンブレン（Hybond-N+）に
移した。このナイロンメンブレンを、プローブを含むハ
イブリダイゼーション溶液（６ｘＳＳＣ、０．５％ＳＤ
Ｓ、５ｘデンハルト溶液、１００μｇ／ｍｌのサケ精子
ＤＮＡ）中、６５℃、１６時間置いてハイブリダイゼー
ションさせた。（なお、１ｘＳＳＣの組成は、０．１５
Ｍ塩化ナトリウムおよび１５ｍＭクエン酸ナトリウム、
ｐＨ７．０であり、１ｘデンハルト溶液の組成は、０．
０２％ウシ血清アルブミン、０．０２％ポリビニルピロ
リドンおよびＦｉｃｏｌｌ４００である。）ついで予備洗浄溶液（２ｘＳＳＣ、０．５％ＳＤＳ）を
用い、室温で１０分間、メンブレンを洗浄した後、さら
に洗浄溶液（０．２ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ）を用
い、６５℃で３０分間、２度洗浄した。その後−７０℃
で２日間、オートラジオグラフィーを行い、陽性クロー
ンを検出した。

【０１１３】得られた５３個の陽性クローンのうち、１
５個について挿入ｃＤＮＡ断片をプラスミドとして単離
回収した。ヒトＰＤＥ１０のＮ末端部分に対応する断片
（配列番号１の第６８〜４４８番目の塩基配列に相当）
とＣ末端部分に対応する断片（配列番号１の第１９９０
〜２３０４番目の塩基配列に相当）をコードするヒトＰ
ＤＥ１０のｃＤＮＡ断片をプローブとしてドットブロッ
ト解析を行った。

【０１１４】ハイブリダイゼーションは、以下のような
条件下で行った。すなわち、ナイロンメンブレン（Hybo
nd-N+）を、³²Ｐで標識したプローブを含むハイブリダ
イゼーション溶液（６ｘＳＳＣ、０．５％ＳＤＳ、５ｘ
デンハルト溶液、１００μｇ／ｍｌのサケ精子ＤＮＡ）
中、５５℃、１６時間、置いてハイブリダイゼーション
させた。ついで洗浄溶液（１ｘＳＳＣ、０．５％ＳＤ
Ｓ）を用い、５５℃で１０分間、洗浄した。その後−７
０℃で４時間、オートラジオグラフィーを行った。

【０１１５】両プローブとハイブリダイズする５種のク
ローン（完全長ｃＤＮＡを保持している可能性のある）
を選択した。このうち２種のクローン（クローンNo.８
及び１７）の挿入ｃＤＮＡ断片の全塩基配列或いは部分
塩基配列（クローンラットＰＤＥ１０Ａ２及びＡ３と称
する）を決定した。

【０１１６】単離したｃＤＮＡ（３４２７及び３０８０
ｂｐ）は、新規なラットＰＤＥ（以下、ＰＤＥ１０と称
する）をコードするｃＤＮＡであると考えられた。この
ｃＤＮＡの塩基配列を解析して、オープンリーディング
フレームを同定し、さらにそれにコードされる蛋白質の
アミノ酸配列を決定した。

【０１１７】後記配列表の配列番号１５及び１６に、こ
れらｃＤＮＡの塩基配列（配列番号１５上段及び１６上
段）及びそれにコードされる蛋白質（新規なヒトＰＤＥ
（ＰＤＥ１０））のアミノ酸配列（配列番号１５下段及
び１６下段）を示した。アミノ酸配列（７９４及び７８
８アミノ酸残基）から推定されるＰＤＥ１０の分子量
は、約９０Ｋｄであった。

【０１１８】ラットＰＤＥ１０Ａ２とラットＰＤＥ１０
Ａ３は、アミノ酸配列上のＮ末端側（配列番号１５の第
１〜２３番目のアミノ酸残基、配列番号１６の第１〜１
７番目のアミノ酸残基）及びこれらに対応するｃＤＮＡ
配列が相違している。

【０１１９】ラット由来の２種のＰＤＥ１０（ＰＤＥ１
０Ａ２及びＰＤＥ１０Ａ３）のアミノ酸配列を、ヒト由
来のＰＤＥ１０（ＰＤＥ１０Ａ１及びＰＤＥ１０Ａ２）
のアミノ酸配列と比較したところ、約９６％と高い相同
性が認められたが、Ｎ末端部分及びＣ末端部分に相違が
見られた。

【０１２０】実施例７ラットの各種組織におけるＰＤ
Ｅ１０の発現ラットの種々の組織（心臓、脳、脾臓、肺、肝臓、骨格
筋、腎臓、精巣、大腿骨、頭頂骨）におけるＰＤＥ１０
遺伝子発現の有無を、以下のように調べた。

【０１２１】各種のラット組織由来ｍＲＮＡ（ポリ
（Ａ）＋ＲＮＡ）（商品名ラットＲＮＡマルチプル・
ティシュ・ノーザン（ＭＴＮ）ブロット（Ｃｌｏｎｔｅ
ｃｈＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）を用い、実施例
５と同様にしてノーザンブロッティングを行った。但
し、プローブとしては、実施例６で得たラットＰＤＥ１
０ｃＤＮＡの中の断片（配列番号１５の第１１７２〜１
５１９番目の塩基配列に相当）を³²Ｐで標識して用い
た。

【０１２２】ノーザンブロッティングの結果、脳及び精
巣においてＰＤＥ１０ｍＲＮＡの発現が認められ、脳で
は約９．５ｋｂのバンドが、精巣では約３．５ｋｂのバ
ンドが観察された。

【０１２３】さらにラット脳に対するin situハイブリ
ダイゼーションを行った。in situハイブリダイゼーシ
ョン用のＲＮＡプローブは、ジゴキシゲニン−ＵＴＰ及
びＤＩＧＲＮＡ標識キット（Boehringer Mannheim社
製）を用い、in vitro転写により調製した。その際、鋳
型とするＤＮＡとしては、実施例６におけるプラ−クハ
イブリダイゼーションのためのプローブとして用いたｃ
ＤＮＡ断片を、ベクタープラスミドｐＧＥＭ−Ｔｅａｓ
ｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ社製）にサブクローニングした後、
制限酵素ＳｐｈＩ（アンチセンスプローブ用）及び制限
酵素ＳａｃＩ（センスプローブ用）でリニアライズした
ものを各１μｇ用いた。アンチセンスプローブはＴ７
ＲＮＡポリメラーゼを、またセンスプローブはＳＰ６
ＲＮＡポリメラーゼを用いて合成した。

【０１２４】１０週齢の雄性ラットから得た脳を用いて
１０μｍ厚の凍結切片を作成し、４％ホルムアルデヒド
を用いて固定後、１０μｇ／ｍｌプロテイナーゼＫ及び
０．１Ｍトリエタノールアミン（０．２５％無水酢酸
中）で処理した。その後アルコールで脱水した。８００
μｌのハイブリダイゼーション溶液（２０ｍＭＴｒｉ
ｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８．０、３００ｍＭ塩化ナトリウム、
１０％Ｓｏｄｉｕｍｄｅｘｔｒａｎｓｕｌｆａｔｅ、
５０％ホルムアミド、０．２％Ｎ−ラウロイルサルコ
シン、１００μｇ／ｍｌのサケ精子ＤＮＡ、１ｘデンハ
ルト溶液）で５０℃３０分間プレハイブリダイゼーショ
ンした後、ジゴキシゲニンにより標識したＲＮＡプロー
ブを用いて、８００μｌのハイブリダイゼーション溶液
中、５０℃、１６時間、湿潤箱中でハイブリダイゼーシ
ョンを行った。

【０１２５】ハイブリダイゼーション終了後、高ストリ
ンジェントな溶液（５０％ホルムアミド、３００ｍＭ塩
化ナトリウム、３０ｍＭクエン酸ナトリウム）で６０
℃、３０分間洗浄し、１μｇ／ｍｌのＲＮａｓｅＡで３
７℃、１０分間処理し、もう一度、前記の高ストリンジ
ェントな溶液で洗浄した。

【０１２６】さらに、切片を抗ジゴキシゲニンポロクロ
ーナル抗体（１．５％のブロッキング試薬（Boehringer
Mannheim社製）を含有する緩衝液Ａ（１００ｍＭＴ
ｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１５０ｍＭ塩化ナトリウ
ム）にて１／５００希釈したもの）と共に５分間、室温
でインキュべートし、その後緩衝液Ａで充分に洗浄し
た。

【０１２７】さらに切片を、調製したばかりのニトロブ
ルーテトラゾリウム及び５−ブルモ−４−クロロ−３−
インドリルホスフェートを含有するColor-Substrate溶
液（１００ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ９．５、１０
０ｍＭ塩化ナトリウム、５０ｍＭ塩化マグネシウム）で
インキュべートし、暗箱中、室温で２日間染色した。

【０１２８】in situハイブリダイゼーションの結果、
線条体及び嗅結節の神経細胞に強い発現が認められた。

【０１２９】

【発明の効果】本発明の新規ＰＤＥ及びその遺伝子は、
細胞内情報伝達の複合的なメカニズムの研究のために有
用である。また、新たな疾患に対する治療薬の標的分子
となり得る。

【０１３０】また、本発明の新規ＰＤＥ及びその遺伝子
を利用した阻害剤の特徴付け、同定、及び選択方法は、
選択性の高い阻害剤、治療効果が高く副作用の少ない優
れた医薬を開発するために有用である。

【０１３１】

【配列表】配列番号：１配列の長さ：４５７６配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 起源生物名：ヒト配列の特徴特徴を表す記号：CDS 存在位置：251..2590 配列： GAATTCCGGG CGGCGGCGGC CAAACTCCGC GGCGTCCCCA GGGCGCCACG TTCGCCCTCG 60 CCGCCGCGGC CGCGCTGCTC TTCGGCTCCG ACATGGAAGA TGGACCTTCT AATAATGCGA 120 GCTGCTTCCG AAGGCTGACC GAGTGCTTCC TGAGCCCCAA AGCTAATGGT ATAGATATAG 180 AAGTCATCCA CAGAGATGTT ACAGTTGAAG AGATGGGGGT AGAGAAGACT TTGAAGGAAA 240 AGAATGTAGA 250 ATG AGG ATA GAA GAG AGG AAA TCC CAA CAT TTA ACA GGT TTG ACA GAT 298 Met Arg Ile Glu Glu Arg Lys Ser Gln His Leu Thr Gly Leu Thr Asp 1 5 10 15 GAA AAA GTG AAG GCA TAT CTT TCT CTT CAC CCC CAG GTA TTA GAT GAA 346 Glu Lys Val Lys Ala Tyr Leu Ser Leu His Pro Gln Val Leu Asp Glu 20 25 30 TTT GTA TCT GAA AGT GTT AGT GCA GAG ACA GTA GAG AAA TGG CTG AAG 394 Phe Val Ser Glu Ser Val Ser Ala Glu Thr Val Glu Lys Trp Leu Lys 35 40 45 AGG AAG AAC AAC AAA TCA GAA GAT GAA TCA GCT CCT AAG GAA GTC AGC 442 Arg Lys Asn Asn Lys Ser Glu Asp Glu Ser Ala Pro Lys Glu Val Ser 50 55 60 AGG TAC CAA GAT ACG AAT ATG CAG GGA GTT GTA TAT GAA CTA AAC AGC 490 Arg Tyr Gln Asp Thr Asn Met Gln Gly Val Val Tyr Glu Leu Asn Ser 65 70 75 80 TAT ATA GAA CAA CGG TTG GAC ACA GGA GGA GAC AAC CAG CTA CTC CTC 538 Tyr Ile Glu Gln Arg Leu Asp Thr Gly Gly Asp Asn Gln Leu Leu Leu 85 90 95 TAT GAA CTG AGC AGC ATC ATT AAA ATA GCC ACA AAA GCC GAT GGA TTT 586 Tyr Glu Leu Ser Ser Ile Ile Lys Ile Ala Thr Lys Ala Asp Gly Phe 100 105 110 GCA CTG TAT TTC CTT GGA GAG TGC AAT AAT AGC CTG TGT ATA TTC ACG 634 Ala Leu Tyr Phe Leu Gly Glu Cys Asn Asn Ser Leu Cys Ile Phe Thr 115 120 125 CCA CCT GGG ATA AAG GAA GGA AAA CCC CGC CTC ATC CCT GCT GGG CCC 682 Pro Pro Gly Ile Lys Glu Gly Lys Pro Arg Leu Ile Pro Ala Gly Pro 130 135 140 ATC ACT CAG GGC ACC ACC GTC TCT GCT TAT GTG GCC AAG TCC AGG AAA 730 Ile Thr Gln Gly Thr Thr Val Ser Ala Tyr Val Ala Lys Ser Arg Lys 145 150 155 160 ACA CTG CTA GTA GAA GAC ATC CTT GGA GAT GAA CGA TTT CCA AGA GGT 778 Thr Leu Leu Val Glu Asp Ile Leu Gly Asp Glu Arg Phe Pro Arg Gly 165 170 175 ACT GGA CTG GAA TCA GGG ACT CGT ATC CAG TCT GTT CTT TGC TTA CCA 826 Thr Gly Leu Glu Ser Gly Thr Arg Ile Gln Ser Val Leu Cys Leu Pro 180 185 190 ATT GTC ACT GCA ATT GGT GAC TTG ATT GGT ATT CTC GAG CTG TAT CGG 874 Ile Val Thr Ala Ile Gly Asp Leu Ile Gly Ile Leu Glu Leu Tyr Arg 195 200 205 CAC TGG GGC AAA GAA GCC TTC TGT CTT AGT CAC CAG GAG GTT GCA ACA 922 His Trp Gly Lys Glu Ala Phe Cys Leu Ser His Gln Glu Val Ala Thr 210 215 220 GCA AAT CTT GCC TGG GCT TCA GTA GCA ATA CAT CAG GTG CAG GTA TGC 970 Ala Asn Leu Ala Trp Ala Ser Val Ala Ile His Gln Val Gln Val Cys 225 230 235 240 AGA GGC CTT GCC AAA CAG ACA GAA TTG AAT GAC TTC CTA CTC GAC GTA 1018 Arg Gly Leu Ala Lys Gln Thr Glu Leu Asn Asp Phe Leu Leu Asp Val 245 250 255 TCA AAA ACA TAT TTT GAT AAC ATA GTT GCA ATA GAT TCT CTA CTT GAA 1066 Ser Lys Thr Tyr Phe Asp Asn Ile Val Ala Ile Asp Ser Leu Leu Glu 260 265 270 CAC ATA ATG ATA TAT GCA AAA AAC CTG GTG AAT GCC GAT CGT TGT GCG 1114 His Ile Met Ile Tyr Ala Lys Asn Leu Val Asn Ala Asp Arg Cys Ala 275 280 285 CTT TTC CAG GTG GAC CAT AAG AAC AAG GAG TTA TAT TCA GAC CTT TTT 1162 Leu Phe Gln Val Asp His Lys Asn Lys Glu Leu Tyr Ser Asp Leu Phe 290 295 300 GAT ATT GGA GAG GAA AAG GAA GGA AAA CCT GTC TTC AAG AAG ACC AAA 1210 Asp Ile Gly Glu Glu Lys Glu Gly Lys Pro Val Phe Lys Lys Thr Lys 305 310 315 320 GAG ATA AGA TTT TCA ATT GAG AAA GGA ATT GCT GGC CAA GTA GCA AGA 1258 Glu Ile Arg Phe Ser Ile Glu Lys Gly Ile Ala Gly Gln Val Ala Arg 325 330 335 ACA GGG GAA GTC CTG AAC ATT CCA GAT GCC TAT GCA GAC CCA CGC TTT 1306 Thr Gly Glu Val Leu Asn Ile Pro Asp Ala Tyr Ala Asp Pro Arg Phe 340 345 350 AAC AGA GAA GTA GAC TTG TAC ACA GGC TAC ACC ACG CGG AAC ATC CTG 1354 Asn Arg Glu Val Asp Leu Tyr Thr Gly Tyr Thr Thr Arg Asn Ile Leu 355 360 365 TGC ATG CCC ATC GTC AGC CGA GGC AGC GTG ATA GGT GTG GTG CAG ATG 1402 Cys Met Pro Ile Val Ser Arg Gly Ser Val Ile Gly Val Val Gln Met 370 375 380 GTC AAC AAA ATC AGT GGC AGT GCC TTC TCT AAA ACA GAT GAA AAC AAC 1450 Val Asn Lys Ile Ser Gly Ser Ala Phe Ser Lys Thr Asp Glu Asn Asn 385 390 395 400 TTC AAA ATG TTT GCC GTC TTT TGT GCT TTA GCC TTA CAC TGT GCT AAT 1498 Phe Lys Met Phe Ala Val Phe Cys Ala Leu Ala Leu His Cys Ala Asn 405 410 415 ATG TAT CAT AGA ATT CGC CAC TCA GAG TGC ATT TAC CGG GTA ACG ATG 1546 Met Tyr His Arg Ile Arg His Ser Glu Cys Ile Tyr Arg Val Thr Met 420 425 430 GAA AAG CTG TCC TAC CAT AGC ATT TGT ACT TCA GAA GAG TGG CAA GGT 1594 Glu Lys Leu Ser Tyr His Ser Ile Cys Thr Ser Glu Glu Trp Gln Gly 435 440 445 CTC ATG CAA TTC ACC CTT CCC GTG CGT CTC TGC AAA GAA ATT GAA TTA 1642 Leu Met Gln Phe Thr Leu Pro Val Arg Leu Cys Lys Glu Ile Glu Leu 450 455 460 TTC CAC TTT GAC ATT GGT CCT TTT GAA AAC ATG TGG CCT GGA ATT TTT 1690 Phe His Phe Asp Ile Gly Pro Phe Glu Asn Met Trp Pro Gly Ile Phe 465 470 475 480 GTC TAC ATG GTT CAT CGG TCC TGT GGG ACA TCC TGC TTT GAG CTT GAA 1738 Val Tyr Met Val His Arg Ser Cys Gly Thr Ser Cys Phe Glu Leu Glu 485 490 495 AAG TTG TGT CGT TTT ATT ATG TCT GTG AAG AAG AAC TAT CGG CGG GTT 1786 Lys Leu Cys Arg Phe Ile Met Ser Val Lys Lys Asn Tyr Arg Arg Val 500 505 510 CCT TAT CAC AAC TGG AAG CAT GCG GTC ACT GTA GCA CAC TGC ATG TAT 1834 Pro Tyr His Asn Trp Lys His Ala Val Thr Val Ala His Cys Met Tyr 515 520 525 GCC ATA CTT CAG AAC AAT CAC ACG CTT TTC ACA GAC CTT GAG CGC AAA 1882 Ala Ile Leu Gln Asn Asn His Thr Leu Phe Thr Asp Leu Glu Arg Lys 530 535 540 GGA CTG CTG ATT GCG TGT CTG TGT CAT GAC CTG GAC CAC AGG GGC TTC 1930 Gly Leu Leu Ile Ala Cys Leu Cys His Asp Leu Asp His Arg Gly Phe 545 550 555 560 AGT AAC AGC TAC CTG CAG AAG TTC GAC CAC CCT CTG GCC GCT CTC TAC 1978 Ser Asn Ser Tyr Leu Gln Lys Phe Asp His Pro Leu Ala Ala Leu Tyr 565 570 575 TCC ACT TCC ACC ATG GAG CAG CAC CAC TTC TCC CAG ACT GTG TCC ATC 2026 Ser Thr Ser Thr Met Glu Gln His His Phe Ser Gln Thr Val Ser Ile 580 585 590 CTT CAG TTG GAA GGG CAC AAT ATC TTC TCC ACT CTG AGC TCC AGT GAA 2074 Leu Gln Leu Glu Gly His Asn Ile Phe Ser Thr Leu Ser Ser Ser Glu 595 600 605 TAT GAG CAG GTG CTT GAG ATC ATC CGC AAA GCC ATC ATT GCC ACA GAC 2122 Tyr Glu Gln Val Leu Glu Ile Ile Arg Lys Ala Ile Ile Ala Thr Asp 610 615 620 CTT GCT TTA TAC TTT GGA AAC AGG AAG CAG TTG GAA GAG ATG TAC CAG 2170 Leu Ala Leu Tyr Phe Gly Asn Arg Lys Gln Leu Glu Glu Met Tyr Gln 625 630 635 640 ACC GGA TCA CTA AAC CTT AAT AAT CAA TCA CAT AGA GAC CGT GTA ATT 2218 Thr Gly Ser Leu Asn Leu Asn Asn Gln Ser His Arg Asp Arg Val Ile 645 650 655 GGT TTG ATG ATG ACT GCC TGT GAC CTT TGT TCT GTG ACA AAA CTG TGG 2266 Gly Leu Met Met Thr Ala Cys Asp Leu Cys Ser Val Thr Lys Leu Trp 660 665 670 CCC GTT ACA AAA TTG ACG GCA AAT GAT ATA TAT GCA GAA TTC TGG GCT 2314 Pro Val Thr Lys Leu Thr Ala Asn Asp Ile Tyr Ala Glu Phe Trp Ala 675 680 685 GAG GGT GAT GAA ATG AAG AAA TTG GGA ATA CAG CCT ATT CCT ATG ATG 2362 Glu Gly Asp Glu Met Lys Lys Leu Gly Ile Gln Pro Ile Pro Met Met 690 695 700 GAC AGA GAC AAG AAG GAT GAA GTC CCC CAA GGC CAG CTT GGG TTC TAC 2410 Asp Arg Asp Lys Lys Asp Glu Val Pro Gln Gly Gln Leu Gly Phe Tyr 705 710 715 720 AAT GCC GTG GCC ATT CCC TGC TAT ACA ACC CTT ACC CAG ATC CTC CCT 2458 Asn Ala Val Ala Ile Pro Cys Tyr Thr Thr Leu Thr Gln Ile Leu Pro 725 730 735 CCC ACG GAG CCT CTT CTG AAA GCA TGC AGG GAT AAT CTC AGT CAG TGG 2506 Pro Thr Glu Pro Leu Leu Lys Ala Cys Arg Asp Asn Leu Ser Gln Trp 740 745 750 GAG AAG GTG ATT CGA GGG GAG GAG ACT GCA ACC TGG ATT TCA TCC CCA 2554 Glu Lys Val Ile Arg Gly Glu Glu Thr Ala Thr Trp Ile Ser Ser Pro 755 760 765 TCC GTG GCT CAG AAG GCA GCT GCA TCT GAA GAT TGA 2590 Ser Val Ala Gln Lys Ala Ala Ala Ser Glu Asp 770 775 779 GCACTGGTCA CCCTGACACG CTGTCCCACC TACAGATCCT CATCTTGCTT CTTTGACATT 2650 CTTTTCCTTT TTTTGGGGGG GGTGGGGGGA ACCTGCACCT GGTAACTGGG GTGCAAACCT 2710 CTTCAAGAAG GTAACATCAA ATAAATAAGT CAAGCAGAGG ACTTCCTGCC AATCTCTTCT 2770 GTGAGGCATC ATAGACACTG AGCAACCAGG ACCACCCCCA CGTTCAGAAA TCAGCTGGCC 2830 AAGTGACTCC ATTTGACTTG CAAACCAGCC TTTTCTAATA GGCTAATATT GCTGAGGCCT 2890 TAAAGGAAAT GGACAAAAAT TATCCAGAAG GGGTACTTTT CCATTGTATC TTTCTAATAA 2950 GGGTTTAAAA TGGTACTATT ATGGTATTGT ACTTGGGCTT TAACATCAAT GTTGCTTTGA 3010 TGTTGTTGGA TATAAATAGG AATTTTACAC ATTACTATTG TGAATGGTGA ATGTTCATGT 3070 ATGACCTACT TGTAATTAAC TTGAGTTGTA GTCCACAGCC TCAGGACAAA TGTCGTTGAG 3130 GTTACAGAGT AAGAAATGAT GGCAAAACGT CAAACTCTTA TTTCAGAGCT TCATGAATTT 3190 AGTTAGACTA AACATAATTC TTTAAGTTCA ACCTAAAGGG CTGAGATCAA TAAATTTAAC 3250 ACTAGACGAA GTAGACTTCC TGTCTTTTTG AGAAGAGATG AGGTATATGT TACAATAAAT 3310 CTCAGAACTT CAAGTAGCAG TTCAAAAGAT GTCAGTTTTT AAAATTGTTT TTGTTGTTGT 3370 CTTGGCAGTT TTACTGAACC CTTTGCATAA AGAACAAAAT AAAAGCTCGG CATTGTAATT 3430 TTTTTAATGG ACAAGTCTTA TGGATACGAG GGGTACATTT TTCATAATGA TTCCTTTATA 3490 TTTTCACTTT GTGTCATATG CAGAATTTTA GACTCTCATT CACAATGAAA AGTTTATTTT 3550 AAACATTGTT TAATTAAAAT ACCATACAGT TCTCTTTTAA ACATCAAACC ATAAAAAGTG 3610 TATTTTGTAA TTTTACTCTG ACCTGCCGCA GTCACCTCTC ACTTATCTCT TCCACGTACT 3670 GCACGGTCGT ATTTCATGAG CTTTCTGTCC ATAGCACAGA AACAGAGCAG AAAGTAGTAC 3730 AATCATGTTG GACCTTCTTT CTGTTCTCTT TACTCTTCTC ACAGATCAGA TCACTCCATA 3790 GAAGCCTGTG GGTTTCGATG GTTTCTTCTA TACACCTTTT TGGTTGACCA GTATTACTAT 3850 ACAATGTAAG TGTTTTAAAA AATACGAAAG TAATACTCTG CACCCCTTCC TACAAAGATG 3910 ATAAAGCAGT CACTTCTGGC GCATTTTAAT AATTTAAAGA TTTTTAGTGC AATGGCACGG 3970 TAACCTCCAA ACCTGAATTA GACAGAGACT CACTCAGGAA GTGACAGGCC CATCATATCA 4030 AATAACTTAT TCACTTTTCA TGTGGCAGGA AACTGGAATA TCGCTTTTAA TAAAATGGAA 4090 AAATATGCTT CTACATATTT ACCACCATAG GCGTTTTGTT CATATGAGCC TGGTTTGTGC 4150 AAAATTAAAT CAGAGGCTTC TACAACATGG TTTATTTATG TTGTAGCAAA GTTGGCTCTA 4210 CATAAACATT GTTCTTATTT TAAAATTAAC ACTATGTGTT CAGTTTTCTT GTGGGCTTCT 4270 GAAAGTTGCC ATCTTCCCTC CGTGGAGCTC CATTTGCTAT TTTCATTATA CACTATGAGG 4330 TAAAATGTAA TAACAAAAGA GAGAGAAGTA CCACTGTGGC TAGATATATA CACACACATA 4390 TATATATGGA TGGATGTAAT ATATGTAGCA CACACACATA GATGTATATA GGATACACAC 4450 TCATGTATGT AAACGTATAC ATATGTGTAT ATATGATACA TACACATACA CACACACGAG 4510 AGACAGAAGG AAAGAGAGGA AGAGAGAAGC AAACATGTAG GAAAAAATAT AAATCAGCCG 4570 GAATTC 4576。

【０１３２】配列番号：２配列の長さ：２４０６配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 起源生物名：ヒト配列の特徴特徴を表す記号：CDS 存在位置：15..2384 配列： TCTTCGGCTC CGAC 14 ATG GAA GAT GGA CCT TCT AAT AAT GCG AGC TGC TTC CGA AGG CTG ACC 62 Met Glu Asp Gly Pro Ser Asn Asn Ala Ser Cys Phe Arg Arg Leu Thr 1 5 10 15 GAG TGC TTC CTG AGC CCC AGT TTG ACA GAT GAA AAA GTG AAG GCA TAT 110 Glu Cys Phe Leu Ser Pro Ser Leu Thr Asp Glu Lys Val Lys Ala Tyr 20 25 30 CTT TCT CTT CAC CCC CAG GTA TTA GAT GAA TTT GTA TCT GAA AGT GTT 158 Leu Ser Leu His Pro Gln Val Leu Asp Glu Phe Val Ser Glu Ser Val 35 40 45 AGT GCA GAG ACA GTA GAG AAA TGG CTG AAG AGG AAG AAC AAC AAA TCA 206 Ser Ala Glu Thr Val Glu Lys Trp Leu Lys Arg Lys Asn Asn Lys Ser 50 55 60 GAA GAT GAA TCA GCT CCT AAG GAA GTC AGC AGG TAC CAA GAT ACG AAT 254 Glu Asp Glu Ser Ala Pro Lys Glu Val Ser Arg Tyr Gln Asp Thr Asn 65 70 75 80 ATG CAG GGA GTT GTA TAT GAA CTA AAC AGC TAT ATA GAA CAA CGG TTG 302 Met Gln Gly Val Val Tyr Glu Leu Asn Ser Tyr Ile Glu Gln Arg Leu 85 90 95 GAC ACA GGA GGA GAC AAC CAG CTA CTC CTC TAT GAA CTG AGC AGC ATC 350 Asp Thr Gly Gly Asp Asn Gln Leu Leu Leu Tyr Glu Leu Ser Ser Ile 100 105 110 ATT AAA ATA GCC ACA AAA GCC GAT GGA TTT GCA CTG TAT TTC CTT GGA 398 Ile Lys Ile Ala Thr Lys Ala Asp Gly Phe Ala Leu Tyr Phe Leu Gly 115 120 125 GAG TGC AAT AAT AGC CTG TGT ATA TTC ACG CCA CCT GGG ATA AAG GAA 446 Glu Cys Asn Asn Ser Leu Cys Ile Phe Thr Pro Pro Gly Ile Lys Glu 130 135 140 GGA AAA CCC CGC CTC ATC CCT GCT GGG CCC ATC ACT CAG GGC ACC ACC 494 Gly Lys Pro Arg Leu Ile Pro Ala Gly Pro Ile Thr Gln Gly Thr Thr 145 150 155 160 GTC TCT GCT TAT GTG GCC AAG TCC AGG AAA ACA CTG CTA GTA GAA GAC 542 Val Ser Ala Tyr Val Ala Lys Ser Arg Lys Thr Leu Leu Val Glu Asp 165 170 175 ATC CTT GGA GAT GAA CGA TTT CCA AGA GGT ACT GGA CTG GAA TCA GGG 590 Ile Leu Gly Asp Glu Arg Phe Pro Arg Gly Thr Gly Leu Glu Ser Gly 180 185 190 ACT CGT ATC CAG TCT GTT CTT TGC TTA CCA ATT GTC ACT GCA ATT GGT 638 Thr Arg Ile Gln Ser Val Leu Cys Leu Pro Ile Val Thr Ala Ile Gly 195 200 205 GAC TTG ATT GGT ATT CTC GAG CTG TAT CGG CAC TGG GGC AAA GAA GCC 686 Asp Leu Ile Gly Ile Leu Glu Leu Tyr Arg His Trp Gly Lys Glu Ala 210 215 220 TTC TGT CTT AGT CAC CAG GAG GTT GCA ACA GCA AAT CTT GCC TGG GCT 734 Phe Cys Leu Ser His Gln Glu Val Ala Thr Ala Asn Leu Ala Trp Ala 225 230 235 240 TCA GTA GCA ATA CAT CAG GTG CAG GTA TGC AGA GGC CTT GCC AAA CAG 782 Ser Val Ala Ile His Gln Val Gln Val Cys Arg Gly Leu Ala Lys Gln 245 250 255 ACA GAA TTG AAT GAC TTC CTA CTC GAC GTA TCA AAA ACA TAT TTT GAT 830 Thr Glu Leu Asn Asp Phe Leu Leu Asp Val Ser Lys Thr Tyr Phe Asp 260 265 270 AAC ATA GTT GCA ATA GAT TCT CTA CTT GAA CAC ATA ATG ATA TAT GCA 878 Asn Ile Val Ala Ile Asp Ser Leu Leu Glu His Ile Met Ile Tyr Ala 275 280 285 AAA AAC CTG GTG AAT GCC GAT CGT TGT GCG CTT TTC CAG GTG GAC CAT 926 Lys Asn Leu Val Asn Ala Asp Arg Cys Ala Leu Phe Gln Val Asp His 290 295 300 AAG AAC AAG GAG TTA TAT TCA GAC CTT TTT GAT ATT GGA GAG GAA AAG 974 Lys Asn Lys Glu Leu Tyr Ser Asp Leu Phe Asp Ile Gly Glu Glu Lys 305 310 315 320 GAA GGA AAA CCT GTC TTC AAG AAG ACC AAA GAG ATA AGA TTT TCA ATT 1022 Glu Gly Lys Pro Val Phe Lys Lys Thr Lys Glu Ile Arg Phe Ser Ile 325 330 335 GAG AAA GGA ATT GCT GGC CAA GTA GCA AGA ACA GGG GAA GTC CTG AAC 1070 Glu Lys Gly Ile Ala Gly Gln Val Ala Arg Thr Gly Glu Val Leu Asn 340 345 350 ATT CCA GAT GCC TAT GCA GAC CCA CGC TTT AAC AGA GAA GTA GAC TTG 1118 Ile Pro Asp Ala Tyr Ala Asp Pro Arg Phe Asn Arg Glu Val Asp Leu 355 360 365 TAC ACA GGC TAC ACC ACG CGG AAC ATC CTG TGC ATG CCC ATC GTC AGC 1166 Tyr Thr Gly Tyr Thr Thr Arg Asn Ile Leu Cys Met Pro Ile Val Ser 370 375 380 CGA GGC AGC GTG ATA GGT GTG GTG CAG ATG GTC AAC AAA ATC AGT GGC 1214 Arg Gly Ser Val Ile Gly Val Val Gln Met Val Asn Lys Ile Ser Gly 385 390 395 400 AGT GCC TTC TCT AAA ACA GAT GAA AAC AAC TTC AAA ATG TTT GCC GTC 1262 Ser Ala Phe Ser Lys Thr Asp Glu Asn Asn Phe Lys Met Phe Ala Val 405 410 415 TTT TGT GCT TTA GCC TTA CAC TGT GCT AAT ATG TAT CAT AGA ATT CGC 1310 Phe Cys Ala Leu Ala Leu His Cys Ala Asn Met Tyr His Arg Ile Arg 420 425 430 CAC TCA GAG TGC ATT TAC CGG GTA ACG ATG GAA AAG CTG TCC TAC CAT 1358 His Ser Glu Cys Ile Tyr Arg Val Thr Met Glu Lys Leu Ser Tyr His 435 440 445 AGC ATT TGT ACT TCA GAA GAG TGG CAA GGT CTC ATG CAA TTC ACC CTT 1406 Ser Ile Cys Thr Ser Glu Glu Trp Gln Gly Leu Met Gln Phe Thr Leu 450 455 460 CCC GTG CGT CTC TGC AAA GAA ATT GAA TTA TTC CAC TTT GAC ATT GGT 1454 Pro Val Arg Leu Cys Lys Glu Ile Glu Leu Phe His Phe Asp Ile Gly 465 470 475 480 CCT TTT GAA AAC ATG TGG CCT GGA ATT TTT GTC TAC ATG GTT CAT CGG 1502 Pro Phe Glu Asn Met Trp Pro Gly Ile Phe Val Tyr Met Val His Arg 485 490 495 TCC TGT GGG ACA TCC TGC TTT GAG CTT GAA AAG TTG TGT CGT TTT ATT 1550 Ser Cys Gly Thr Ser Cys Phe Glu Leu Glu Lys Leu Cys Arg Phe Ile 500 505 510 ATG TCT GTG AAG AAG AAC TAT CGG CGG GTT CCT TAT CAC AAC TGG AAG 1598 Met Ser Val Lys Lys Asn Tyr Arg Arg Val Pro Tyr His Asn Trp Lys 515 520 525 CAT GCG GTC ACT GTA GCA CAC TGC ATG TAT GCC ATA CTT CAG AAC AAT 1646 His Ala Val Thr Val Ala His Cys Met Tyr Ala Ile Leu Gln Asn Asn 530 535 540 CAC ACG CTT TTC ACA GAC CTT GAG CGC AAA GGA CTG CTG ATT GCG TGT 1694 His Thr Leu Phe Thr Asp Leu Glu Arg Lys Gly Leu Leu Ile Ala Cys 545 550 555 560 CTG TGT CAT GAC CTG GAC CAC AGG GGC TTC AGT AAC AGC TAC CTG CAG 1742 Leu Cys His Asp Leu Asp His Arg Gly Phe Ser Asn Ser Tyr Leu Gln 565 570 575 AAG TTC GAC CAC CCT CTG GCC GCT CTC TAC TCC ACT TCC ACC ATG GAG 1790 Lys Phe Asp His Pro Leu Ala Ala Leu Tyr Ser Thr Ser Thr Met Glu 580 585 590 CAG CAC CAC TTC TCC CAG ACT GTG TCC ATC CTT CAG TTG GAA GGG CAC 1838 Gln His His Phe Ser Gln Thr Val Ser Ile Leu Gln Leu Glu Gly His 595 600 605 AAT ATC TTC TCC ACT CTG AGC TCC AGT GAA TAT GAG CAG GTG CTT GAG 1886 Asn Ile Phe Ser Thr Leu Ser Ser Ser Glu Tyr Glu Gln Val Leu Glu 610 615 620 ATC ATC CGC AAA GCC ATC ATT GCC ACA GAC CTT GCT TTA TAC TTT GGA 1934 Ile Ile Arg Lys Ala Ile Ile Ala Thr Asp Leu Ala Leu Tyr Phe Gly 625 630 635 640 AAC AGG AAG CAG TTG GAA GAG ATG TAC CAG ACC GGA TCA CTA AAC CTT 1982 Asn Arg Lys Gln Leu Glu Glu Met Tyr Gln Thr Gly Ser Leu Asn Leu 645 650 655 AAT AAT CAA TCA CAT AGA GAC CGT GTA ATT GGT TTG ATG ATG ACT GCC 2030 Asn Asn Gln Ser His Arg Asp Arg Val Ile Gly Leu Met Met Thr Ala 660 665 670 TGT GAC CTT TGT TCT GTG ACA AAA CTG TGG CCC GTT ACA AAA TTG ACG 2078 Cys Asp Leu Cys Ser Val Thr Lys Leu Trp Pro Val Thr Lys Leu Thr 675 680 685 GCA AAT GAT ATA TAT GCA GAA TTC TGG GCT GAG GGT GAT GAA ATG AAG 2126 Ala Asn Asp Ile Tyr Ala Glu Phe Trp Ala Glu Gly Asp Glu Met Lys 690 695 700 AAA TTG GGA ATA CAG CCT ATT CCT ATG ATG GAC AGA GAC AAG AAG GAT 2174 Lys Leu Gly Ile Gln Pro Ile Pro Met Met Asp Arg Asp Lys Lys Asp 705 710 715 720 GAA GTC CCC CAA GGC CAG CTT GGG TTC TAC AAT GCC GTG GCC ATT CCC 2222 Glu Val Pro Gln Gly Gln Leu Gly Phe Tyr Asn Ala Val Ala Ile Pro 725 730 735 TGC TAT ACA ACC CTT ACC CAG ATC CTC CCT CCC ACG GAG CCT CTT CTG 2270 Cys Tyr Thr Thr Leu Thr Gln Ile Leu Pro Pro Thr Glu Pro Leu Leu 740 745 750 AAA GCA TGC AGG GAT AAT CTC AGT CAG TGG GAG AAG GTG ATT CGA GGG 2318 Lys Ala Cys Arg Asp Asn Leu Ser Gln Trp Glu Lys Val Ile Arg Gly 755 760 765 GAG GAG ACT GCA ACC TGG ATT TCA TCC CCA TCC GTG GCT CAG AAG GCA 2366 Glu Glu Thr Ala Thr Trp Ile Ser Ser Pro Ser Val Ala Gln Lys Ala 770 775 780 GCT GCA TCT GAA GAT TGA 2384 Ala Ala Ser Glu Asp 785 789 GCACTGGTCA CCCTGACACG CT 2406。

【０１３３】配列番号：３配列の長さ：１８配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成プライマー）配列： AAGCTGTCCT ACCATAGC 18 。

【０１３４】配列番号：４配列の長さ：１８配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成プライマー）配列： GGCTGCGGCC AGAGGGTG 18 。

【０１３５】配列番号：５配列の長さ：１８配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成プライマー）配列： ACTTTCAGAA GAGTGGCC 18。

【０１３６】配列番号：６配列の長さ：１８配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成プライマー）配列：ＴＧＣＡＧＧＴＡＡＣＴＧＴＴＡＣＴＧ１８。

【０１３７】配列番号：７配列の長さ：１８配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成プライマー）配列：ＣＧＣＴＧＣＴＣＴＴＣＧＧＣＴＣＣＧ１８。

【０１３８】配列番号：８配列の長さ：２１配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成プライマー）配列： GGATCTGTAG GTGGGACAGC G 21 。

【０１３９】配列番号：９配列の長さ：３１配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成プライマー）配列： GGGAATTCAT GAGGATAGAA GAGAGGAAAT C 31 。

【０１４０】配列番号：１０配列の長さ：２２配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成プライマー）配列： AGCGTGTCAG GGTGACCAGT GC 22 。

【０１４１】配列番号：１１配列の長さ：１８配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成プライマー）配列： CGCTGCTCTT CGGCTCCG 18 。

【０１４２】配列番号：１２配列の長さ：２１配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成プライマー）配列： GGATCTGTAG GTGGGACAGC G 21 。

【０１４３】配列番号：１３配列の長さ：１８配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成プライマー）配列： TCTTCGGCTC CGACATGG 18 。

【０１４４】配列番号：１４配列の長さ：２２配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成プライマー）配列： AGCGTGTCAG GGTGACCAGT GC 22 。

【０１４５】配列番号：１５配列の長さ：３４２７配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 起源生物名：ラット配列の特徴特徴を表す記号：CDS 存在位置：281..2665 配列： GAATTCGGCA CGAGGCAGCG GCGGGCGGCG GCGGCTCTTC CTTTCGCCTG CGATCCAAGG 60 CTTGCTGCTC CCAGCCCGCT CCGGGCCCCG GCCACCTCCA CCGCCGCGGC TCCCCTTACA 120 CCCGGGCGCA CACCGCGCGG ACTCCTTGGG TTTTCCGGGT GCCGGCGGGG GCTGCCCTGG 180 CCTCGGCCCC GGCTCTGCGG CCGGTGGCCG AACTCCGTGG CGGCCCCGAG GCACCGCCCT 240 CCCCCTTGCC ACTGCCTGGC CGCTGCTCTT CGGCTCCGAC 280 ATG GAA GAT GGA CCC TCT AAC AAT GCG AGT TGC TTC CGA AGG CTG ACC 328 Met Glu Asp Gly Pro Ser Asn Asn Ala Ser Cys Phe Arg Arg Leu Thr 1 5 10 15 GAG TGT TTC CTC AGC CCC AGT TTG ACG GAT GAA AAG GTG AAG GCC TAT 376 Glu Cys Phe Leu Ser Pro Ser Leu Thr Asp Glu Lys Val Lys Ala Tyr 20 25 30 CTT TCC CTC CAT CCC CAG GTA TTA GAC GAG TTT GTT TCT GAA AGT GTT 424 Leu Ser Leu His Pro Gln Val Leu Asp Glu Phe Val Ser Glu Ser Val 35 40 45 AGT GCG GAG ACT GTG GAG AAG TGG CTG AAG AGG AAA AAC AAC AAA GCA 472 Ser Ala Glu Thr Val Glu Lys Trp Leu Lys Arg Lys Asn Asn Lys Ala 50 55 60 GAA GAT GAA CCA TCT CCT AAG GAA GTC AGC AGG TAC CAG GAC ACG AAC 520 Glu Asp Glu Pro Ser Pro Lys Glu Val Ser Arg Tyr Gln Asp Thr Asn 65 70 75 80 ATG CAG GGA GTC GTG TAC GAG CTG AAC AGC TAC ATA GAG CAG CGC CTG 568 Met Gln Gly Val Val Tyr Glu Leu Asn Ser Tyr Ile Glu Gln Arg Leu 85 90 95 GAC ACC GGC GGG GAC AAC CAC CTG CTC CTG TAC GAG CTA AGC AGT ATC 616 Asp Thr Gly Gly Asp Asn His Leu Leu Leu Tyr Glu Leu Ser Ser Ile 100 105 110 ATC AGG ATA GCC ACA AAA GCC GAC GGA TTT GCA CTG TAC TTC CTT GGA 664 Ile Arg Ile Ala Thr Lys Ala Asp Gly Phe Ala Leu Tyr Phe Leu Gly 115 120 125 GAG TGC AAT AAT AGT CTG TGT GTC TTC ACA CCA CCC GGA ATG AAG GAA 712 Glu Cys Asn Asn Ser Leu Cys Val Phe Thr Pro Pro Gly Met Lys Glu 130 135 140 GGT CAA CCC CGT CTC ATC CCC GCA GGG CCC ATC ACC CAG GGC ACC ACC 760 Gly Gln Pro Arg Leu Ile Pro Ala Gly Pro Ile Thr Gln Gly Thr Thr 145 150 155 160 ATC TCT GCC TAT GTG GCC AAG TCT AGG AAG ACC CTG CTG GTA GAG GAC 808 Ile Ser Ala Tyr Val Ala Lys Ser Arg Lys Thr Leu Leu Val Glu Asp 165 170 175 ATC CTT GGG GAT GAG CGA TTT CCC AGA GGC ACT GGT CTG GAG TCA GGA 856 Ile Leu Gly Asp Glu Arg Phe Pro Arg Gly Thr Gly Leu Glu Ser Gly 180 185 190 ACC CGA ATC CAG TCT GTC CTT TGC TTG CCT ATT GTC ACT GCC ATT GGA 904 Thr Arg Ile Gln Ser Val Leu Cys Leu Pro Ile Val Thr Ala Ile Gly 195 200 205 GAC TTG ATT GGC ATC CTT GAA CTG TAC AGG CAC TGG GGC AAA GAG GCC 952 Asp Leu Ile Gly Ile Leu Glu Leu Tyr Arg His Trp Gly Lys Glu Ala 210 215 220 TTC TGC CTC AGC CAT CAG GAG GTT GCA ACC GCC AAT CTC GCT TGG GCT 1000 Phe Cys Leu Ser His Gln Glu Val Ala Thr Ala Asn Leu Ala Trp Ala 225 230 235 240 TCC GTA GCA ATA CAC CAG GTG CAG GTG TGC AGA GGT CTC GCC AAG CAG 1048 Ser Val Ala Ile His Gln Val Gln Val Cys Arg Gly Leu Ala Lys Gln 245 250 255 ACC GAA CTG AAT GAC TTC CTG CTC GAT GTA TCA AAG ACA TAC TTT GAT 1096 Thr Glu Leu Asn Asp Phe Leu Leu Asp Val Ser Lys Thr Tyr Phe Asp 260 265 270 AAC ATA GTC GCC ATA GAC TCT CTA CTT GAA CAC ATC ATG ATA TAT GCA 1144 Asn Ile Val Ala Ile Asp Ser Leu Leu Glu His Ile Met Ile Tyr Ala 275 280 285 AAA AAT CTA GTG AAC GCC GAC CGC TGC GCG CTC TTC CAG GTG GAC CAC 1192 Lys Asn Leu Val Asn Ala Asp Arg Cys Ala Leu Phe Gln Val Asp His 290 295 300 AAG AAC AAG GAG CTG TAC TCG GAC CTG TTT GAC ATT GGG GAG GAG AAG 1240 Lys Asn Lys Glu Leu Tyr Ser Asp Leu Phe Asp Ile Gly Glu Glu Lys 305 310 315 320 GAG GGG AAG CCC GTC TTC AAG AAG ACC AAG GAG ATC AGA TTT TCC ATT 1288 Glu Gly Lys Pro Val Phe Lys Lys Thr Lys Glu Ile Arg Phe Ser Ile 325 330 335 GAG AAA GGG ATT GCT GGT CAA GTG GCA AGA ACG GGA GAA GTC CTG AAC 1336 Glu Lys Gly Ile Ala Gly Gln Val Ala Arg Thr Gly Glu Val Leu Asn 340 345 350 ATT CCT GAT GCC TAC GCA GAC CCG CGC TTT AAC AGG GAG GTG GAC CTG 1384 Ile Pro Asp Ala Tyr Ala Asp Pro Arg Phe Asn Arg Glu Val Asp Leu 355 360 365 TAC ACA GGC TAT ACC ACG CGG AAC ATT CTG TGT ATG CCC ATA GTG AGC 1432 Tyr Thr Gly Tyr Thr Thr Arg Asn Ile Leu Cys Met Pro Ile Val Ser 370 375 380 CGC GGC AGC GTG ATC GGT GTG GTG CAA ATG GTT AAC AAG ATC AGC GGC 1480 Arg Gly Ser Val Ile Gly Val Val Gln Met Val Asn Lys Ile Ser Gly 385 390 395 400 AGC GCC TTC TCC AAG ACG GAT GAG AAC AAC TTC AAG ATG TTT GCT GTC 1528 Ser Ala Phe Ser Lys Thr Asp Glu Asn Asn Phe Lys Met Phe Ala Val 405 410 415 TTC TGC GCT CTG GCC CTG CAC TGC GCT AAC ATG TAC CAC AGG ATC CGC 1576 Phe Cys Ala Leu Ala Leu His Cys Ala Asn Met Tyr His Arg Ile Arg 420 425 430 CAC TCA GAG TGC ATC TAC AGG GTT ACC ATG GAG AAG CTG TCT TAC CAC 1624 His Ser Glu Cys Ile Tyr Arg Val Thr Met Glu Lys Leu Ser Tyr His 435 440 445 AGC ATC TGC ACC TCT GAG GAA TGG CAA GGC CTC ATG CAC TTC AAC TTG 1672 Ser Ile Cys Thr Ser Glu Glu Trp Gln Gly Leu Met His Phe Asn Leu 450 455 460 CCA GCA CGC ATC TGC CGG GAC ATC GAG CTA TTC CAC TTT GAC ATT GGT 1720 Pro Ala Arg Ile Cys Arg Asp Ile Glu Leu Phe His Phe Asp Ile Gly 465 470 475 480 CCT TTC GAG AAC ATG TGG CCT GGG ATC TTT GTC TAC ATG ATC CAT CGG 1768 Pro Phe Glu Asn Met Trp Pro Gly Ile Phe Val Tyr Met Ile His Arg 485 490 495 TCT TGT GGG ACA TCC TGT TTT GAA CTT GAA AAA TTG TGC CGT TTT ATC 1816 Ser Cys Gly Thr Ser Cys Phe Glu Leu Glu Lys Leu Cys Arg Phe Ile 500 505 510 ATG TCT GTG AAG AAG AAC TAT AGG CGG GTT CCT TAC CAC AAC TGG AAG 1864 Met Ser Val Lys Lys Asn Tyr Arg Arg Val Pro Tyr His Asn Trp Lys 515 520 525 CAT GCA GTC ACG GTG GCG CAC TGC ATG TAC GCC ATA CTT CAA AAC AAC 1912 His Ala Val Thr Val Ala His Cys Met Tyr Ala Ile Leu Gln Asn Asn 530 535 540 AAT GGC CTC TTC ACA GAC CTT GAG CGC AAA GGC CTG CTA ATT GCC TGT 1960 Asn Gly Leu Phe Thr Asp Leu Glu Arg Lys Gly Leu Leu Ile Ala Cys 545 550 555 560 CTG TGC CAT GAC CTG GAC CAC AGG GGC TTC AGT AAC AGC TAC CTG CAG 2008 Leu Cys His Asp Leu Asp His Arg Gly Phe Ser Asn Ser Tyr Leu Gln 565 570 575 AAA TTC GAC CAC CCC CTG GCT GCG TTG TAC TCC ACC TCC ACC ATG GAG 2056 Lys Phe Asp His Pro Leu Ala Ala Leu Tyr Ser Thr Ser Thr Met Glu 580 585 590 CAA CAC CAC TTC TCC CAG ACG GTG TCC ATC CTC CAG CTG GAA GGA CAC 2104 Gln His His Phe Ser Gln Thr Val Ser Ile Leu Gln Leu Glu Gly His 595 600 605 AAC ATC TTC TCC ACC CTG AGC TCC AGC GAG TAC GAG CAG GTG CTG GAG 2152 Asn Ile Phe Ser Thr Leu Ser Ser Ser Glu Tyr Glu Gln Val Leu Glu 610 615 620 ATC ATC CGC AAA GCC ATC ATC GCC ACT GAC CTC GCA CTG TAC TTT GGG 2200 Ile Ile Arg Lys Ala Ile Ile Ala Thr Asp Leu Ala Leu Tyr Phe Gly 625 630 635 640 AAC AGG AAG CAG TTG GAG GAG ATG TAC CAG ACA GGG TCG CTG AAC CTC 2248 Asn Arg Lys Gln Leu Glu Glu Met Tyr Gln Thr Gly Ser Leu Asn Leu 645 650 655 CAC AAC CAG TCC CAT CGA GAC CGC GTC ATC GGC TTG ATG ATG ACT GCC 2296 His Asn Gln Ser His Arg Asp Arg Val Ile Gly Leu Met Met Thr Ala 660 665 670 TGC GAT CTT TGC TCT GTG ACG AAA CTA TGG CCA GTT ACA AAA TTG ACA 2344 Cys Asp Leu Cys Ser Val Thr Lys Leu Trp Pro Val Thr Lys Leu Thr 675 680 685 GCA AAT GAT ATA TAT GCA GAG TTC TGG GCT GAG GGG GAT GAG ATG AAG 2392 Ala Asn Asp Ile Tyr Ala Glu Phe Trp Ala Glu Gly Asp Glu Met Lys 690 695 700 AAG TTG GGG ATA CAG CCC ATC CCT ATG ATG GAC AGA GAC AAG CGA GAT 2440 Lys Leu Gly Ile Gln Pro Ile Pro Met Met Asp Arg Asp Lys Arg Asp 705 710 715 720 GAA GTC CCT CAA GGA CAG CTT GGA TTC TAC AAT GCT GTG GCC ATC CCC 2488 Glu Val Pro Gln Gly Gln Leu Gly Phe Tyr Asn Ala Val Ala Ile Pro 725 730 735 TGC TAT ACC ACC CTG ACG CAG ATC CTC CCA CCC ACA GAG CCT CTG CTG 2536 Cys Tyr Thr Thr Leu Thr Gln Ile Leu Pro Pro Thr Glu Pro Leu Leu 740 745 750 AAG GCC TGC AGG GAT AAC CTC AAT CAG TGG GAG AAG GTA ATT CGA GGG 2584 Lys Ala Cys Arg Asp Asn Leu Asn Gln Trp Glu Lys Val Ile Arg Gly 755 760 765 GAA GAG ACA GCA ATG TGG ATT TCA GGC CCA GCA ACT AGC AAA AGC ACA 2632 Glu Glu Thr Ala Met Trp Ile Ser Gly Pro Ala Thr Ser Lys Ser Thr 770 775 780 TCT GAG AAG CCG ACC AGG AAG GTC GAT GAC TGA 2665 Ser Glu Lys Pro Thr Arg Lys Val Asp Asp 785 790 794 TCCTGAGGTG ATGTCTGCCT AGCAACTGAC TCAACCTGCT TCTGTGACTT CGTTCTTTTT 2725 ATTTTTATTT TTTTAACGGG GTGAAAACCT CTCTCAGAAG GTACCGTCGC ATATCCATGT 2785 GAAGCAGATG ACTCCCTGCG CACACCTCGG ACCGTGAGCA ACCCGGGCTC CACCGTGTTC 2845 AGACGTCGGC TATTCCATGG CTCCGCCTGA CCCCCGAATG CCATTTGCTA CCAGGCCAGA 2905 ACTGCGCTGG CTGGAGGGGG CAGAGACGAC AGGAGGGGTT CTTACCTGCA TCCTTCCATG 2965 AGGGTGTGGT TCTGTGTTTC ATCTCTAACA GAGATGCTAC TGCTTGGTGG CGTTTGTTAG 3025 AAATGGGACA CATGCCCCTG TCGTGAAGTT TACATGTGAC CTTCTTGTAG GTAACTTGAG 3085 TTCGTAGCCT GGGACCCCTG TAATGAAGGT TACAGTCCAC AGGTGATAGA GAAATTCAAG 3145 CTGTAAGTTA CAGGTGCACT ACAAGTGTGT TCATTCAGTT TACCTGGGGG CATGGAGGTG 3205 AGTCAGCTCC ACGAGGAAGG AAGCATACCT CTGCCCTCAT CAAGGGGACA CAGGGTACAT 3265 CCCAGGCATC AGAGAACTGC AGCTCACCTC AAACCATGTC AAAGAATTAA AACACACCCC 3325 CATCCCCTCA CTGTAGCCTT TGGCAACTTC GCCAAACCCT TCACACAAAG AAAATAAAAG 3385 TAAGGCGTAT AAATTTCCTC CAGCAAGCCT CGTGCCGAAT TC 3427。

【０１４６】配列番号：１６配列の長さ：３０８０配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 起源生物名：ラット配列の特徴特徴を表す記号：CDS 存在位置：634..3000 配列： GAATTCGGCA CGAGCTTCAG AGCACACGCA GCCCCCCAAC TCCGCCCCTA TGTCAAGTGC 60 ACGCGGGCAC ACGGGTTGGA CACTCGCCCA CGCACGCACA CACACGCGCG TGCACATACA 120 TGCACACTCG TGCACACACA CTACTTCTAG GTGTGTGGGT CTAAAGTTGC TTCCGTCGAG 180 AGGCTGAGCT GAGATGGACC AGTCTTCATT GGTGCCTAGA AAGCTCCTTA CAGCTTTCCT 240 GAGGATCCCA GAAAGGAAGG CGGGAGGGAG TAGCATCGCT CCTTCTTAGA GTTGTCTCCC 300 CCTTTTGCGA GATGGCCAGC GCAGAAACTC CAAGTACCCG AAGCCCTTGG AATACTGCTG 360 CATGGAGCAT ATTCGAGCAT CTTGGAGAGG TCCTGGACTT GGGCCACCCG GGTTTGGCAA 420 CTTGTTTTGA GCAGCCCTGG ATGGAGCCCG GATCCACCTT TCCCAGAGAC TTGTCCCTAC 480 GGCCCCACTT TGAATTTGTG AACTGGCAAT GAAGCAGAAA GGAGTTTTGT ACTGGAGGAT 540 ACTTTGGCGG GCTGCCTCCC GATCACATTT AAAGGTGGGA GCAAAGGCCC CGCTCTGCTG 600 GCACTTCGAA ACCGCACAGA CTCTCGGGGG CAG 633 ATG AGC AAT GAC TCC CCA GAA GGT GCC GTG GGC TCC TGC AAC GCA ACA 681 Met Ser Asn Asp Ser Pro Glu Gly Ala Val Gly Ser Cys Asn Ala Thr 1 5 10 15 GGT TTG ACG GAT GAA AAG GTG AAG GCC TAT CTT TCC CTC CAT CCC CAG 729 Gly Leu Thr Asp Glu Lys Val Lys Ala Tyr Leu Ser Leu His Pro Gln 20 25 30 GTA TTA GAC GAG TTT GTT TCT GAA AGT GTT AGT GCG GAG ACT GTG GAG 777 Val Leu Asp Glu Phe Val Ser Glu Ser Val Ser Ala Glu Thr Val Glu 35 40 45 AAG TGG CTG AAG AGG AAA AAC AAC AAA GCA GAA GAT GAA CCA TCT CCT 825 Lys Trp Leu Lys Arg Lys Asn Asn Lys Ala Glu Asp Glu Pro Ser Pro 50 55 60 AAG GAA GTC AGC AGG TAC CAG GAC ACG AAC ATG CAG GGA GTC GTG TAC 873 Lys Glu Val Ser Arg Tyr Gln Asp Thr Asn Met Gln Gly Val Val Tyr 65 70 75 80 GAG CTG AAC AGC TAC ATA GAG CAG CGC CTG GAC ACC GGC GGG GAC AAC 921 Glu Leu Asn Ser Tyr Ile Glu Gln Arg Leu Asp Thr Gly Gly Asp Asn 85 90 95 CAC CTG CTC CTG TAC GAG CTA AGC AGT ATC ATC AGG ATA GCC ACA AAA 969 His Leu Leu Leu Tyr Glu Leu Ser Ser Ile Ile Arg Ile Ala Thr Lys 100 105 110 GCC GAC GGA TTT GCA CTG TAC TTC CTT GGA GAG TGC AAT AAT AGT CTG 1017 Ala Asp Gly Phe Ala Leu Tyr Phe Leu Gly Glu Cys Asn Asn Ser Leu 115 120 125 TGT GTC TTC ACA CCA CCC GGA ATG AAG GAA GGT CAA CCC CGT CTC ATC 1065 Cys Val Phe Thr Pro Pro Gly Met Lys Glu Gly Gln Pro Arg Leu Ile 130 135 140 CCC GCA GGG CCC ATC ACC CAG GGC ACC ACC ATC TCT GCC TAT GTG GCC 1113 Pro Ala Gly Pro Ile Thr Gln Gly Thr Thr Ile Ser Ala Tyr Val Ala 145 150 155 160 AAG TCT AGG AAG ACC CTG CTG GTA GAG GAC ATC CTT GGG GAT GAG CGA 1161 Lys Ser Arg Lys Thr Leu Leu Val Glu Asp Ile Leu Gly Asp Glu Arg 165 170 175 TTT CCC AGA GGC ACT GGT CTG GAG TCA GGA ACC CGA ATC CAG TCT GTC 1209 Phe Pro Arg Gly Thr Gly Leu Glu Ser Gly Thr Arg Ile Gln Ser Val 180 185 190 CTT TGC TTG CCT ATT GTC ACT GCC ATT GGA GAC TTG ATT GGC ATC CTT 1257 Leu Cys Leu Pro Ile Val Thr Ala Ile Gly Asp Leu Ile Gly Ile Leu 195 200 205 GAA CTG TAC AGG CAC TGG GGC AAA GAG GCC TTC TGC CTC AGC CAT CAG 1305 Glu Leu Tyr Arg His Trp Gly Lys Glu Ala Phe Cys Leu Ser His Gln 210 215 220 GAG GTT GCA ACC GCC AAT CTC GCT TGG GCT TCC GTA GCA ATA CAC CAG 1353 Glu Val Ala Thr Ala Asn Leu Ala Trp Ala Ser Val Ala Ile His Gln 225 230 235 240 GTG CAG GTG TGC AGA GGT CTC GCC AAG CAG ACC GAA CTG AAT GAC TTC 1401 Val Gln Val Cys Arg Gly Leu Ala Lys Gln Thr Glu Leu Asn Asp Phe 245 250 255 CTG CTC GAT GTA TCA AAG ACA TAC TTT GAT AAC ATA GTC GCC ATA GAC 1449 Leu Leu Asp Val Ser Lys Thr Tyr Phe Asp Asn Ile Val Ala Ile Asp 260 265 270 TCT CTA CTT GAA CAC ATC ATG ATA TAT GCA AAA AAT CTA GTG AAC GCC 1497 Ser Leu Leu Glu His Ile Met Ile Tyr Ala Lys Asn Leu Val Asn Ala 275 280 285 GAC CGC TGC GCG CTC TTC CAG GTG GAC CAC AAG AAC AAG GAG CTG TAC 1545 Asp Arg Cys Ala Leu Phe Gln Val Asp His Lys Asn Lys Glu Leu Tyr 290 295 300 TCG GAC CTG TTT GAC ATT GGG GAG GAG AAG GAG GGG AAG CCC GTC TTC 1593 Ser Asp Leu Phe Asp Ile Gly Glu Glu Lys Glu Gly Lys Pro Val Phe 305 310 315 320 AAG AAG ACC AAG GAG ATC AGA TTT TCC ATT GAG AAA GGG ATT GCT GGT 1641 Lys Lys Thr Lys Glu Ile Arg Phe Ser Ile Glu Lys Gly Ile Ala Gly 325 330 335 CAA GTG GCA AGA ACG GGA GAA GTC CTG AAC ATT CCT GAT GCC TAC GCA 1689 Gln Val Ala Arg Thr Gly Glu Val Leu Asn Ile Pro Asp Ala Tyr Ala 340 345 350 GAC CCG CGC TTT AAC AGG GAG GTG GAC CTG TAC ACA GGC TAT ACC ACG 1737 Asp Pro Arg Phe Asn Arg Glu Val Asp Leu Tyr Thr Gly Tyr Thr Thr 355 360 365 CGG AAC ATT CTG TGT ATG CCC ATA GTG AGC CGC GGC AGC GTG ATC GGT 1785 Arg Asn Ile Leu Cys Met Pro Ile Val Ser Arg Gly Ser Val Ile Gly 370 375 380 GTG GTG CAA ATG GTT AAC AAG ATC AGC GGC AGC GCC TTC TCC AAG ACG 1833 Val Val Gln Met Val Asn Lys Ile Ser Gly Ser Ala Phe Ser Lys Thr 385 390 395 400 GAT GAG AAC AAC TTC AAG ATG TTT GCT GTC TTC TGC GCT CTG GCC CTG 1881 Asp Glu Asn Asn Phe Lys Met Phe Ala Val Phe Cys Ala Leu Ala Leu 405 410 415 CAC TGC GCT AAC ATG TAC CAC AGG ATC CGC CAC TCA GAG TGC ATC TAC 1929 His Cys Ala Asn Met Tyr His Arg Ile Arg His Ser Glu Cys Ile Tyr 420 425 430 AGG GTT ACC ATG GAG AAG CTG TCT TAC CAC AGC ATC TGC ACC TCT GAG 1977 Arg Val Thr Met Glu Lys Leu Ser Tyr His Ser Ile Cys Thr Ser Glu 435 440 445 GAA TGG CAA GGC CTC ATG CAC TTC AAC TTG CCA GCA CGC ATC TGC CGG 2025 Glu Trp Gln Gly Leu Met His Phe Asn Leu Pro Ala Arg Ile Cys Arg 450 455 460 GAC ATC GAG CTA TTC CAC TTT GAC ATT GGT CCT TTC GAG AAC ATG TGG 2073 Asp Ile Glu Leu Phe His Phe Asp Ile Gly Pro Phe Glu Asn Met Trp 465 470 475 480 CCT GGG ATC TTT GTC TAC ATG ATC CAT CGG TCT TGT GGG ACA TCC TGT 2121 Pro Gly Ile Phe Val Tyr Met Ile His Arg Ser Cys Gly Thr Ser Cys 485 490 495 TTT GAA CTT GAA AAA TTG TGC CGT TTT ATC ATG TCT GTG AAG AAG AAC 2169 Phe Glu Leu Glu Lys Leu Cys Arg Phe Ile Met Ser Val Lys Lys Asn 500 505 510 TAT AGG CGG GTT CCT TAC CAC AAC TGG AAG CAT GCA GTC ACG GTG GCG 2217 Tyr Arg Arg Val Pro Tyr His Asn Trp Lys His Ala Val Thr Val Ala 515 520 525 CAC TGC ATG TAC GCC ATA CTT CAA AAC AAC AAT GGC CTC TTC ACA GAC 2265 His Cys Met Tyr Ala Ile Leu Gln Asn Asn Asn Gly Leu Phe Thr Asp 530 535 540 CTT GAG CGC AAA GGC CTG CTA ATT GCC TGT CTG TGC CAT GAC CTG GAC 2313 Leu Glu Arg Lys Gly Leu Leu Ile Ala Cys Leu Cys His Asp Leu Asp 545 550 555 560 CAC AGG GGC TTC AGT AAC AGC TAC CTG CAG AAA TTC GAC CAC CCC CTG 2361 His Arg Gly Phe Ser Asn Ser Tyr Leu Gln Lys Phe Asp His Pro Leu 565 570 575 GCT GCG TTG TAC TCC ACC TCC ACC ATG GAG CAA CAC CAC TTC TCC CAG 2409 Ala Ala Leu Tyr Ser Thr Ser Thr Met Glu Gln His His Phe Ser Gln 580 585 590 ACG GTG TCC ATC CTC CAG CTG GAG GGA CAC AAC ATC TTC TCC ACC CTG 2457 Thr Val Ser Ile Leu Gln Leu Glu Gly His Asn Ile Phe Ser Thr Leu 595 600 605 AGC TCC AGC GAG TAC GAG CAG GTG CTG GAG ATC ATC CGC AAA GCC ATC 2505 Ser Ser Ser Glu Tyr Glu Gln Val Leu Glu Ile Ile Arg Lys Ala Ile 610 615 620 ATC GCC ACT GAC CTC GCA CTG TAC TTT GGG AAC AGG AAG CAG TTG GAG 2553 Ile Ala Thr Asp Leu Ala Leu Tyr Phe Gly Asn Arg Lys Gln Leu Glu 625 630 635 640 GAG ATG TAC CAG ACA GGG TCG CTG AAC CTC CAC AAC CAG TCC CAT CGA 2601 Glu Met Tyr Gln Thr Gly Ser Leu Asn Leu His Asn Gln Ser His Arg 645 650 655 GAC CGC GTC ATC GGC TTG ATG ATG ACT GCC TGC GAT CTT TGC TCT GTG 2649 Asp Arg Val Ile Gly Leu Met Met Thr Ala Cys Asp Leu Cys Ser Val 660 665 670 ACG AAA CTA TGG CCA GTT ACA AAA TTG ACA GCA AAT GAT ATA TAT GCA 2697 Thr Lys Leu Trp Pro Val Thr Lys Leu Thr Ala Asn Asp Ile Tyr Ala 675 680 685 GAG TTC TGG GCT GAG GGG GAT GAG ATG AAG AAG TTG GGG ATA CAG CCC 2745 Glu Phe Trp Ala Glu Gly Asp Glu Met Lys Lys Leu Gly Ile Gln Pro 690 695 700 ATC CCT ATG ATG GAC AGA GAC AAG CGA GAT GAA GTC CCT CAA GGA CAG 2793 Ile Pro Met Met Asp Arg Asp Lys Arg Asp Glu Val Pro Gln Gly Gln 705 710 715 720 CTT GGA TTC TAC AAT GCT GTG GCC ATC CCC TGC TAT ACC ACC CTG ACG 2841 Leu Gly Phe Tyr Asn Ala Val Ala Ile Pro Cys Tyr Thr Thr Leu Thr 725 730 735 CAG ATC CTC CCA CCC ACA GAG CCT CTG CTG AAG GCC TGC AGG GAT AAC 2889 Gln Ile Leu Pro Pro Thr Glu Pro Leu Leu Lys Ala Cys Arg Asp Asn 740 745 750 CTC AAT CAG TGG GAG AAG GTA ATT CGA GGG GAA GAG ACA GCA ATG TGG 2937 Leu Asn Gln Trp Glu Lys Val Ile Arg Gly Glu Glu Thr Ala Met Trp 755 760 765 ATT TCA GGC CCA GCA ACT AGC AAA AGC ACA TCT GAG AAG CCG ACC AGG 2985 Ile Ser Gly Pro Ala Thr Ser Lys Ser Thr Ser Glu Lys Pro Thr Arg 770 775 780 AAG GTC GAT GAC TGA 3000 Lys Val Asp Asp 785 788 TCCTGAGGTG ATGTCTGCCT AGCAACTGAC TCAACCTGCT TCTGTGACTT CGTTCTTTTT 3060 ATTTTTATTT TTTTAACGGG 3080。

【０１４７】配列番号：１７配列の長さ：１９配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成プライマー）配列： GCGCTCTTCC AGGTGGACC 19 。

【０１４８】配列番号：１８配列の長さ：１８配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成プライマー）配列： CATCTTGAAG TTGTTCTC 18 。

【図面の簡単な説明】

【図１】組換えヒトＰＤＥ１０を発現させたＣＯＳ細
胞の細胞抽出液をMonoQセファロースカラムクロマトグ
ラフィーで分画した結果（各画分のｃＡＭＰ又はｃＧＭ
Ｐ加水分解活性）を示した図。

【図２】ヒトＰＤＥ１０によるｃＡＭＰ又はｃＧＭＰ
加水分解反応の速度論的解析結果（Lineweaver-Burk pl
ot）を示した図。

【図３】ヒトＰＤＥ１０のｃＡＭＰ分解活性に対する
ｃＧＭＰの影響を調べた結果を示した図。ｃＧＭＰ非添
加の場合のｃＡＭＰ分解活性を１００％とし、活性の相
対値（％）を示した。

【図４】ヒトの各組織におけるＰＤＥ１０遺伝子の発
現（ドットブロットの結果）を示した図。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｎ 9/16 Ｃ 9/16 Ｃ１２Ｐ 21/08 15/02 Ｃ１２Ｑ 1/44 Ｃ１２Ｐ 21/08 1/68 ＡＣ１２Ｑ 1/44 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ 1/68 33/50 ＺＧ０１Ｎ 33/15 33/573 Ａ 33/50 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ 33/573 Ａ //(Ｃ１２Ｎ 9/16 15/00 ＣＣ１２Ｒ 1:91） (72)発明者道端英雄埼玉県戸田市川岸２丁目３番８号田辺製薬戸田寮 (72)発明者湯浅恵造埼玉県戸田市川岸２丁目３番８号田辺製薬戸田寮

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】１０型ホスホジエステラーゼ。
【請求項２】以下の（Ａ）及び（Ｂ）から選択される
蛋白質である請求項１記載のホスホジエステラーゼ。（Ａ）配列番号１、配列番号２、配列番号１５又は配列
番号１６で示されるアミノ酸配列を有する蛋白質。（Ｂ）配列番号１、配列番号２、配列番号１５又は配列
番号１６で示されるアミノ酸配列において、１もしくは
複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミ
ノ酸配列を有する蛋白質であって、かつ、環状ヌクレオ
チドを加水分解する活性を有する蛋白質。
【請求項３】以下の（Ａ）及び（Ｂ）から選択される
蛋白質である請求項１記載のホスホジエステラーゼ。（Ａ）配列番号１又は配列番号２で示されるアミノ酸配
列を有する蛋白質。（Ｂ）配列番号１又は配列番号２で示されるアミノ酸配
列において、１もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換
もしくは付加されたアミノ酸配列を有する蛋白質であっ
て、かつ、環状ヌクレオチドを加水分解する活性を有す
る蛋白質。
【請求項４】ヒト由来である請求項１、２又は３記載
のホスホジエステラーゼ。
【請求項５】ラット由来である請求項１又は２記載の
ホスホジエステラーゼ。
【請求項６】請求項１、２又は３記載のホスホジエス
テラーゼをコードする遺伝子又は核酸。
【請求項７】以下の（ａ）及び（ｂ）から選択される
遺伝子又は核酸。（ａ）配列番号１、配列番号２、配列番号１５又は配列
番号１６で示される塩基配列を有するＤＮＡからなる遺
伝子又は核酸。（ｂ）配列番号１、配列番号２、配列番号１５又は配列
番号１６で示される塩基配列を有するＤＮＡとストリン
ジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡからなる
遺伝子又は核酸であって、かつ、環状ヌクレオチドを加
水分解する活性を有する蛋白質をコードする遺伝子又は
核酸。
【請求項８】以下の（ａ）及び（ｂ）から選択される
遺伝子又は核酸。（ａ）配列番号１又は配列番号２で示される塩基配列を
有するＤＮＡからなる遺伝子又は核酸。（ｂ）配列番号１又は配列番号２で示される塩基配列を
有するＤＮＡとストリンジェントな条件下でハイブリダ
イズするＤＮＡからなる遺伝子又は核酸であって、か
つ、環状ヌクレオチドを加水分解する活性を有する蛋白
質をコードする遺伝子又は核酸。
【請求項９】ヒト由来である請求項７又は８記載の遺
伝子又は核酸。
【請求項１０】ラット由来である請求項７記載の遺伝
子又は核酸。
【請求項１１】請求項６、７又は８記載の遺伝子又は
核酸を含有する組換えベクター。
【請求項１２】発現ベクターである請求項１１記載の
組換えベクター。
【請求項１３】請求項１２記載の組換えベクターが導
入された宿主細胞。
【請求項１４】請求項１記載のホスホジエステラー
ゼ、酵素の基質及び被験物質を含む系内で酵素反応を行
う工程と、請求項１記載のホスホジエステラーゼの酵素
活性に対する被験物質の阻害作用を検定する工程を含
む、ホスホジエステラーゼ阻害薬を特徴付け、同定又は
選択するための方法。
【請求項１５】酵素の基質が、ｃＡＭＰ及びｃＧＭＰ
から選択される環状ヌクレオチドである、請求項１４記
載の方法。
【請求項１６】ホスホジエステラーゼの酵素活性が、
環状ヌクレオチドの加水分解活性である、請求項１４記
載の方法。
【請求項１７】請求項１記載のホスホジエステラーゼ
及び被験物質を含む系内で結合反応を行う工程と、被験
物質が請求項１記載のホスホジエステラーゼとの結合能
を有するか否かを検定する工程を含む、ホスホジエステ
ラーゼ阻害薬を特徴付け、同定又は選択するための方
法。
【請求項１８】複数の型のホスホジエステラーゼに対
する阻害作用の選択性によって特徴付け、同定又は選択
するために使用される請求項１４又は１７記載の方法。
【請求項１９】配列番号１、配列番号２、配列番号１
５又は配列番号１６で示される塩基配列を有するＤＮＡ
とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸
をプローブ又はプライマーとして用いて、請求項６、７
又は８記載の遺伝子又は核酸を検出する方法。
【請求項２０】請求項６、７又は８記載の遺伝子の細
胞中での発現を抑制するために使用される、配列番号
１、配列番号２、配列番号１５又は配列番号１６で示さ
れる塩基配列を有するＤＮＡとストリンジェントな条件
下でハイブリダイズする核酸。
【請求項２１】請求項１記載のホスホジエステラーゼ
を認識する抗体。
【請求項２２】請求項１記載のホスホジエステラーゼ
を認識する抗体を用いて、請求項１記載のホスホジエス
テラーゼの細胞中又は組織中での発現を検出する方法。