JP2000230002A - 骨修復材 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 ヒアルロン酸自体が本来持っている優れた生
体適合性の特徴を最大限生かすために、なんら化学的架
橋剤や化学的修飾剤を使用することなく、またカチオン
性の高分子と複合体化することなく、安全性及び生体適
合性に優れ、更に骨修復を顕著に増進させる骨修復材を
提供すること。 【解決手段】 中性水溶液に難溶性であるヒアルロン酸
単独で形成されたゲルを含有する骨修復材を構成とす
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、中性水溶液に難溶
性であるヒアルロン酸単独で形成されたゲルを含有する
ヒトまたは動物の骨欠損、損傷及び抜歯等の外科的治
療、整形外科手術等に用いられる骨修復材に関する。

【０００２】

【従来の技術】生体材料のうち、ブロック状の充填材と
して、例えば、特開昭６２−３９５０６号の多孔質スポ
ンジは、薬剤によりキチンを架橋した充填材である。特
開平３−２３８６４号は、コラーゲンスポンジとポリ乳
酸からなるブロック状の複合材料である。また、特表平
７−５０５６４３号は、ヒアルロン酸エステルからなる
生体適合性と生体吸収性を有する優れた骨置換剤であ
る。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、前記従
来技術には以下のような課題があった。すなわち、特開
昭６２−３９５０６号の多孔質スポンジは生体内で非吸
収性であるため骨自身に完全に置換されないので、感染
の危険性および材料自体が離脱してしまう危険性があっ
た。他方、特開平３−２３８６４号の複合材料は、アテ
ロコラーゲンに若干の抗原性があるという不具合があ
る。

【０００４】これら非吸収性と生体適合性の問題点はヒ
アルロン酸を用いることで解決できる。しかし、従来の
化学的な改質方法によるヒアルロン酸の骨修復材は、ヒ
アルロン酸の分子中に架橋物質や金属などを内包するた
め、その生理作用や生体適合性が本質的にヒアルロン酸
と同等であるとは言い難く安全性の問題を完全に回避す
ることは難しかった。

【０００５】本発明が解決しようとする課題は、優れた
生体適合性や成形性や生体内分解性を有する骨修復材を
提供することにある。

【０００６】本発明者らは、架橋剤を用いない本質的に
ヒアルロン酸のみからなる難水溶性ヒアルロン酸ゲルを
見出し（ＰＣＴ／ＪＰ９８／０３５３６）、今回、この
難水溶性ヒアルロン酸ゲルの骨修復材としての有用性を
見出し、本発明を完成させるに至った。

【０００７】

【課題を解決するための手段】すなわち、本発明は、
（１）中性水溶液に難溶性であるヒアルロン酸単独で形
成されたゲルを含有する骨修復材、（２）次の（ａ）、
（ｂ）の要件を満たすヒアルロン酸単独で形成されたゲ
ルを含有することを特徴とする骨修復材、（ａ）中性の
３７℃の水溶液中で１２時間での溶解率が５０％以下で
ある、（ｂ）ヒアルロン酸の促進酸加水分解条件下でヒ
アルロン酸ゲルを処理することで可溶化されたヒアルロ
ン酸が分岐構造を有し、該可溶化されたヒアルロン酸中
に、分岐度が０．５以上の分子量フラクションを部分的
に含む、（３）ヒアルロン酸単独で形成されたゲルが、
フィルム状、シート状、スラリー状、破砕状、スポンジ
状、塊状又はペースト状からなる群より選択した１種で
あることを特徴とする請求項２記載の骨修復材、（４）
中性の３７℃の水溶液中で１２時間での溶解率が５０％
以下であり、ヒアルロン酸の促進酸加水分解条件下でヒ
アルロン酸ゲルを処理することで可溶化されたヒアルロ
ン酸が分岐構造を有し、該可溶化されたヒアルロン酸中
に、分岐度が０．５以上の分子量フラクションを部分的
に含むヒアルロン酸ゲルと、ゲル化されていないヒアル
ロン酸、生理活性物質、骨顆粒、又は抗生物質からなる
群より選択した少なくとも１種を含む骨修復材である。

【０００８】

【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
本発明でいう骨修復材とは、ヒトまたは動物の骨欠損、
損傷及び抜歯等に於ける骨の欠損組織の成長及び修復を
促進するものである。

【０００９】また、本発明でいうヒアルロン酸ゲルと
は、三次元網目構造をもつ高分子及びその膨潤体であ
る。三次元網目構造はヒアルロン酸に架橋構造によって
形成されている。

【００１０】本発明に用いられるヒアルロン酸は、動物
組織から抽出したものでも、また発酵法で製造したもの
でもその起源を問うことなく使用できる。発酵法で使用
する菌株は自然界から分離されるストレプトコッカス属
等のヒアルロン酸生産能を有する微生物、又は特開昭６
３−１２３３９２号公報に記載したストレプトコッカス
・エクイＦＭ−１００（微工研菌寄第9027号) 、特開平
２−２３４６８９号公報に記載したストレプトコッカス
・エクイＦＭ−３００（微工研菌寄第2319号) のような
高収率で安定にヒアルロン酸を生産する変異株が望まし
い。上記の変異株を用いて培養、精製されたものが用い
られる。

【００１１】本発明に用いられるヒアルロン酸の分子量
は、約１×１０⁵ 〜約１×１０⁷ ダルトンの範囲内のも
のが好ましい。また、上記範囲内の分子量をもつもので
あれば、より高分子量のものから、加水分解処理等をし
て得た低分子量のものでも同様に好ましく使用できる。
なお、本発明にいうヒアルロン酸は、そのアルカリ金属
塩、例えば、ナトリウム、カリウム、リチウムの塩をも
包含する概念で使用される。

【００１２】本発明でいうヒアルロン酸単独とは、ヒア
ルロン酸以外に化学的架橋剤や化学的修飾剤等は使用し
ないことまた、カチオン性の高分子と複合体化しないこ
とを意味するものである。

【００１３】本発明でいうヒアルロン酸ゲルは、ヒアル
ロン酸の促進酸加水分解反応条件下でヒアルロン酸ゲル
を処理することで分解、可溶化することができる。可溶
化されたヒアルロン酸が架橋構造を保持している場合、
分岐点を有するヒアルロン酸として高分子溶液論的に直
鎖状のヒアルロン酸と区別することができる。

【００１４】本発明でいうヒアルロン酸の促進酸加水分
解反応条件としては、水溶液のｐＨ１．５、温度６０℃
が適当である。ヒアルロン酸のグリコシド結合の加水分
解による主鎖切断反応が、中性の水溶液中と比較して、
酸性やアルカリ性の水溶液中で著しく促進される。更に
酸加水分解反応は、反応温度が高い方が促進される。

【００１５】本発明ではＧＰＣ−ＭＡＬＬＳ法を用い、
ＧＰＣで分離された分子量フラクションの分子量と分岐
度をオンラインで連続的に測定した。本発明では、同一
溶出体積のフラクションの可溶化されたヒアルロン酸の
分子量と対照となる直鎖状ヒアルロン酸の分子量を比較
して分岐度を計算する溶出体積法を使って分岐度の測定
を行った。分岐度は可溶化されたヒアルロン酸の高分子
鎖１コ当たりに存在する分岐点の数であり、可溶化され
たヒアルロン酸の分子量に対してプロットされる。

【００１６】可溶化されたヒアルロン酸は、ＧＰＣ溶媒
で希釈して濃度を調製し、０．２μｍのメンブランフィ
ルターでろ過した後測定に供した。本発明でいうヒアル
ロン酸ゲル中に、ヒアルロン酸の促進酸加水分解条件下
でも安定に存在する架橋構造がある場合、可溶化された
ヒアルロン酸に分岐構造が高分子溶液論的に確認され
る。

【００１７】以下に、難水溶性ヒアルロン酸ゲルを用い
る骨修復材の具体的な例をあげるが、これらの例は例示
として挙げるものであり、中性の３７℃の水溶液中で１
２での溶解率が５０％以下であるヒアルロン酸単独で形
成された難水溶性ヒアルロン酸ゲルからなる骨修復材で
あれば、製造方法は何ら制限されるものではない。

【００１８】本発明の骨修復材の製造工程の一例を順を
追って説明する。ヒアルロン酸の水溶液は、ヒアルロン
酸の粉末と水を混合し、撹拌して得られる。ヒアルロン
酸の水溶液は、酸性となるように調整することが好まし
い。

【００１９】ヒアルロン酸の水溶液のｐＨを調整するた
めに使用する酸は、ｐＨ３．５以下に調整できる酸であ
れば、いずれの酸も使用することができる。酸の使用量
を低減するために、好ましくは強酸、例えば、塩酸、硝
酸、硫酸等を使用することが望ましい。

【００２０】ヒアルロン酸の水溶液のｐＨは、ヒアルロ
ン酸のカルボキシル基が充分な割合でプロトン化するｐ
Ｈに調整する。調整されるｐＨはヒアルロン酸塩の対イ
オンの種類、ヒアルロン酸の分子量、水溶液濃度、凍結
及び解凍の条件、並びに生成するゲルの強さ等の諸特性
により適宜決められるが、本発明では、ｐＨ３．５以
下、好ましくは、ｐＨ２．５以下に調整することであ
る。

【００２１】凍結、解凍はヒアルロン酸の酸性水溶液
を、任意の容器に入れた後、所定の温度で凍結させ、凍
結が終わった後、所定の温度で解凍させる操作を１回以
上行う。凍結、解凍の温度は、好ましくは−５℃以下の
凍結温度、５℃以上の解凍温度が選ばれ、また、時間は
特に制限はない。またその操作の繰り返し回数は１回以
上繰り返すことが好ましい。

【００２２】次に、この難水溶性ヒアルロン酸ゲルは、
酸等の成分を除くために洗浄に供される。洗浄に用いる
液は特に制限はないが、例えば、水、生理食塩水、リン
酸緩衝液等が好適に用いられる。

【００２３】また、洗浄方法は、特に制限はないが、通
常は、バッチ法、濾過法、カラム等に充填して通液する
方法等が用いられる。これらの洗浄条件は、洗浄液量、
回数等を含めて、除きたい成分を目標の濃度以下にでき
る条件であればよく、ヒアルロン酸ゲルの形態や用途に
より適宜選択することが可能である。

【００２４】そして、この洗浄した難水溶性ヒアルロン
酸ゲルは、溶媒中に浸積した状態、溶媒を含ませた湿潤
状態、風乾、減圧乾燥あるいは凍結乾燥等の処理を経た
乾燥状態として骨修復材として供される。

【００２５】難水溶性ヒアルロン酸ゲルの成形加工等の
処理は、作成時には、ヒアルロン酸酸性溶液の凍結時の
容器や手法の選択により所望の形態の難水溶性ヒアルロ
ン酸ゲルの修復材の作成が可能である。例えば、容器の
形により塊状、スポンジ状の形態が得られる。作成後の
加工としては、機械的粉砕による微細な破砕状が例示さ
れる。

【００２６】さらに、ヒアルロン酸酸性溶液を凍結、解
凍する前に、骨顆粒、生理活性物質、及び抗生物質等を
混合することにより、それらを包含した難水溶性ヒアル
ロン酸ゲルの骨修復材を得ることも可能である。また、
ヒアルロン酸酸性溶液を凍結、解凍し、洗浄した後、ゲ
ル化されていないヒアルロン酸、骨顆粒、生理活性物
質、及び抗生物質等を混合することにより、それらを包
含した難水溶性ヒアルロン酸ゲルの骨修復材を得ること
も可能である。

【００２７】骨顆粒は、ヒアルロン酸と同様に細胞の足
場として機能し、骨修復を増進させる機能を有する。ま
た、生理活性物質は、増骨細胞を活性化し、骨修復を加
速させる機能を有す。また、抗生物質は骨損傷部位に感
染する恐れのある病原菌の増殖を抑える働きを有する。

【００２８】骨使用するゲル化されていないヒアルロン
酸、骨顆粒、生理活性物質、及び抗生物質等には特に制
限はないが、骨修復材料の適用部位が骨、関節、及び歯
根等であることから以下のようなものが挙げられる。

【００２９】ゲル化されていないヒアルロン酸として
は、その起源は何ら制約を受けず、またその各種のアル
カリ金属塩をも包合し、また、その分子量の制約も特に
無く分子量約１×１０² 〜１×１０⁷ ダルトンの範囲ま
で使用できる。

【００３０】生理活性物質としては、骨細胞代謝促進剤
として、ＴＧＦβ、ＢＭＰ等や、カルシトニン、エルシ
トニン、サケカルシトニン等が挙げられる。

【００３１】骨顆粒としては、天然骨顆粒または人工の
骨顆粒としてヒドロキシアパタイト、燐酸トリカルシウ
ム及び炭酸カルシウムの顆粒が挙げられ特に制限されな
い。一般に、既に通常に使用されているものを使用でき
る。例えば、該骨顆粒の直径が５０μｍ〜５ｍｍであ
り、また、それらは多孔質または非孔質のいずれを問わ
ない。

【００３２】抗生物質の種類は、特に制限されるもので
はないが、骨炎や骨髄炎に対して有効なものを使用する
ことが好ましい。特にセファレキシン等のセファム系抗
生物質、アンピシリン等のペニシリン系抗生物質、ゲン
タマイシン等のアミノグルコシド系抗生物質、エリスロ
マイシン等のマクロライド系抗生物質、ミノサイクロン
等のテトラサイクリン系抗生物質、バシトラシン等のペ
プチド系抗生物質等が挙げられる。

【００３３】難水溶性ヒアルロン酸ゲルの骨修復材は、
骨の損傷が生じるいかなる動物にも適用でき、哺乳動
物、特に人間に於いて好適に骨を修復することができ
る。難水溶性ヒアルロン酸ゲルの骨修復材は、ペースト
状、破砕状、スポンジ状、塊状、スラリー状又はフィル
ム状等の形態で外科手術に用いられるが、好ましくはペ
ースト状、破砕、スラリー状として注射器で骨損傷部位
に直接充填する、また、スポンジ状、塊状として骨損傷
部位に挿入するのが好適である。

【００３４】

【実施例】以下、実施例により本発明を更に詳しく説明
する。なお、本発明はこれにより限定されるものではな
い。

【００３５】実施例１ 分子量が２×１０⁶ ダルトンのヒアルロン酸ナトリウム
を蒸留水に溶解し、１重量％のヒアルロン酸水溶液を調
整した。この水溶液のｐＨを、１Ｎ塩酸でｐＨ１．５に
調整し、ヒアルロン酸酸性水溶液を得た。このヒアルロ
ン酸酸性水溶液２５ｍｌを、プラスチック製シャーレに
入れ、−２０℃での冷凍２２時間と２５℃での解凍２時
間を２回繰り返した。次にこれを生理的食塩水に５０ｍ
Ｍ濃度でリン酸緩衝成分を加えて調整したｐＨ７のリン
酸緩衝生理的食塩水１００ｍｌに５℃で２４時間浸漬し
た後、蒸留水で十分に洗浄した。そして、これを凍結乾
燥し、シート状の難水溶性ヒアルロン酸ゲルの骨修復材
を得た。

【００３６】実施例２ 分子量が６×１０⁵ ダルトンのヒアルロン酸ナトリウム
を用いて、実施例１と同様な操作を行い、シート状の難
水溶性ヒアルロン酸ゲルの骨修復材を得た。

【００３７】実施例３ 実施例１の分子量が２×１０⁶ ダルトンのｐＨ１．５の
ヒアルロン酸酸性水溶液２５ｍｌを、プラスチック製シ
ャーレに入れ、−２０℃での冷凍２２時間と２５℃での
解凍２時間を２回繰り返した。次にこれを実施例１と同
様にリン酸緩衝生理的食塩水浸漬、洗浄した後、オーブ
ンにより４０℃で３時間乾燥し、フィルム状の難水溶性
ヒアルロン酸ゲルの骨修復材を得た。

【００３８】実施例４ 実施例１のシート状の難溶解性ヒアルロン酸５０ｍｇを
無菌的に１０ｍｌの生理的食塩水に入れ、マイクロホモ
ジナイザー（POLYTORON 、KINEMATICA AG 製）にて粉砕
し、スラリー状及び破砕状の難水溶性ヒアルロン酸ゲル
の骨修復材を得た。

【００３９】実施例５ 実施例１の分子量が２×１０⁶ ダルトンのｐＨ１．５の
ヒアルロン酸酸性水溶液１５ｍｌを３０ｍｌのガラスビ
ンに入れ、−２０℃での冷凍２２時間と２５℃での解凍
２時間を２回繰り返した。これを実施例１と同様にリン
酸緩衝生理的食塩水浸漬、洗浄、凍結乾燥し、スポンジ
状難水溶性ヒアルロン酸ゲルの骨修復材を得た。

【００４０】実施例６ 実施例１の分子量が２×１０⁶ ダルトンのｐＨ１．５の
ヒアルロン酸酸性水溶液１５ｍｌを３０ｍｌのガラスビ
ンに入れ、−２０℃での冷凍２２時間と２５℃での解凍
２時間を２回繰り返した。これを実施例１と同様にリン
酸緩衝生理的食塩水浸漬、洗浄し、遠心脱水で押し固め
たまま凍結乾燥し、塊状の難水溶性ヒアルロン酸ゲルの
骨修復材を得た。

【００４１】実施例７ 実施例５のスポンジ状のヒアルロン酸ゲルをホモジナー
ザーにより粒径が１ｍｍ以下になるまで破砕し、遠心分
離により回収した。これを分子量が２×１０⁶ダルトン
の２重量％のヒアルロン酸水溶液に混合することによ
り、ヒアルロン酸を併用するペースト状の難水溶性ヒア
ルロン酸ゲルの骨修復材を得た。

【００４２】比較例１ 実施例１で調整したヒアルロン酸水溶液のｐＨを１Ｎ水
酸化ナトリウムでｐＨ７．０に調整し、その１５ｍｌを
３０ｍｌのガラスビンに入れ−２０℃で凍結して、凍結
乾燥してシート状ヒアルロン酸の骨修復材を得た。

【００４３】比較例２ 実施例１で調整したヒアルロン酸水溶液のｐＨを１Ｎ水
酸化ナトリウムでｐＨ７．０に調整し、その２５ｍｌを
プラスチック製シャーレに入れて６０℃で風乾し、シー
ト状ヒアルロン酸の骨修復材を得た。

【００４４】比較例３ 実施例１で調整したヒアルロン酸水溶液のｐＨを１Ｎ水
酸化ナトリウムでｐＨ７．０に調整し、その２５ｍｌを
ビーカーに入れて−２０℃で凍結し、凍結乾燥してスポ
ンジ状のヒアルロン酸の骨修復材を得た。

【００４５】比較例４ リン酸水素二ナトリウム１．１ｇを３０ｇの水に溶解し
２％水酸化ナトリウムでｐＨ１０に調整した溶液に平均
分子量６０万のヒアルロン酸ナトリウム０．６ｇを溶解
した。塩化シアヌール０．０５ｇを１．５ｍｌのジオキ
サンに溶解し、上記ヒアルロン酸溶液に添加し３時間室
温で反応した。その後、透析膜に入れ、１日間水に対し
て透析し、その１５ｍｌを３０ｍｌのガラスビンに入れ
凍結乾燥して、スポンジ状の塩化シアヌール架橋ヒアル
ロン酸ゲルの骨修復材を得た。

【００４６】実施例８ 難水溶性ヒアルロン酸ゲルの骨修復材の溶解性試験 生理的食塩水に５０ｍＭ濃度でリン酸緩衝成分を加え、
ｐＨ７のリン酸緩衝生理的食塩水を調整した。得られた
難水溶性ヒアルロン酸ゲルを蒸留水で水洗し、ろ紙上で
脱水した。乾燥重量で１５０ｍｇのヒアルロン酸を含む
難水溶性ヒアルロン酸ゲルに対して、５０ｍｌのリン酸
緩衝生理的食塩水の割合で、難水溶性ヒアルロン酸ゲル
をリン酸緩衝生理的食塩水中に浸漬した。３７℃でリン
酸緩衝生理的食塩水中に溶出するヒアルロン酸の割合
を、リン酸緩衝生理的食塩水中のヒアルロン酸濃度から
求めた。

【００４７】リン酸緩衝生理的食塩水中のヒアルロン酸
の濃度は、ＧＰＣを使って、示差検出器のピーク面積か
ら求めた。

【００４８】上記に従い、実施例１〜７および比較例１
〜３の溶解性試験を行った。その結果を表１に示す。

【００４９】

【表１】

【００５０】表１より、実施例１〜７で得られたヒアル
ロン酸ゲルが中性水溶液に難溶性であることが確認され
た。

【００５１】実施例９ 難水溶性ヒアルロン酸ゲルの骨修復材の分岐度測定 実施例１〜７で得られた難水溶性ヒアルロン酸ゲルを、
ｐＨ１．５の塩酸水溶液１５ｍｌに浸漬し、６０℃、６
時間の加水分解を行った。ゲルは加水分解により可溶化
され、これをＧＰＣ溶媒で２倍に希釈して濃度を０．０
５重量％に調製し、０．２μｍのメンブランフィルター
で濾過した後、０．１ｍｌ注入してＧＰＣ−ＭＡＬＬＳ
の測定を行った。実施例１〜７で得られた難水溶性ヒア
ルロン酸ゲルの分岐度は、いずれも０．５以上であっ
た。

【００５２】実施例１０ 難水溶性ヒアルロン酸ゲルの骨修復材の家兎頭蓋骨欠損
モデルによる骨修復治療効果試験 実施例５のスポンジ状の難水溶性ヒアルロン酸ゲルの骨
修復材（直径１ｃｍ、高さ３ｍｍ）、また、実施例７の
ペースト状の難水溶性ヒアルロン酸ゲルの骨修復材を以
下の試験に供した。また、コントロールとして、生理的
食塩水のみを投与する無処置群、及び比較例４の塩化シ
アヌール架橋ヒアルロン酸を直径１ｃｍ、高さ３ｍｍに
裁断したものを以下の試験に供した。

【００５３】日本白色種家兎（約２．５ｋｇ）２０匹
のうち、５匹をスポンジ状難水溶性ヒアルロン酸ゲル、
５匹をペースト状の難水溶性ヒアルロン酸ゲル、比較例
として５匹を生理的食塩水投与、残り５匹を塩化シアヌ
ール架橋ヒアルロン酸の埋め込みに用いた。埋め込み
は、家兎の頭部の毛を刈り、エーテル麻酔下で頭蓋骨に
マイクロドリルを用い骨欠損部（直径５ｍｍ）を作製
し、各種ヒアルロン酸を骨欠損部に充填し縫合すること
により行った。

【００５４】埋め込みから９週後に、難溶解性ヒアルロ
ン酸埋め込み家兎と、凍結乾燥ヒアルロン酸埋め込み家
兎をと殺後、頭部を切開し、埋め込み部の状態の観察を
行い、骨欠損部（直径５ｍｍ）が再生され、頭蓋骨が結
合されたものを修復したとした。ヒアルロン酸残存率を
埋め込んだシート中のヒアルロン酸量を基準として算出
した結果を、埋め込み部の状態の観察結果と併せて、表
２に示す。

【００５５】

【表２】

【００５６】表２より、どの家兎も正常に生育したが、
組織の状態は難水溶性ヒアルロン酸ゲル及び凍結乾燥ヒ
アルロン酸が埋め込み局所の組織の状態に異常は見られ
なかったのに対し、比較例４の塩化シアヌール架橋ヒア
ルロン酸では組織の軽微な炎症が認められた。

【００５７】

【発明の効果】本発明によれば、ヒアルロン酸単独で形
成された難水溶性のヒアルロン酸を含有する骨修復材を
提供することができる。かかる本発明の骨修復材は、架
橋剤等を使用していないため生体内に存在する本来のヒ
アルロン酸の構造を維持しており、無毒性及び生体適合
性に優れ、更に骨修復を顕著に増進させるものである。

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 中性水溶液に難溶性であるヒアルロン酸
   単独で形成されたゲルを含有する骨修復材。
2. 【請求項２】 次の（ａ）、（ｂ）の要件を満たすヒア
   ルロン酸単独で形成されたゲルを含有することを特徴と
   する骨修復材。 （ａ）中性の３７℃の水溶液中で１２時間での溶解率が
   ５０％以下である、（ｂ）ヒアルロン酸の促進酸加水分
   解条件下でヒアルロン酸ゲルを処理することで可溶化さ
   れたヒアルロン酸が分岐構造を有し、該可溶化されたヒ
   アルロン酸中に、分岐度が０．５以上の分子量フラクシ
   ョンを部分的に含む。
3. 【請求項３】 ヒアルロン酸単独で形成されたゲルが、
   フィルム状、シート状、スラリー状、破砕状、スポンジ
   状、塊状又はペースト状からなる群より選択した１種で
   あることを特徴とする請求項２記載の骨修復材。
4. 【請求項４】 中性の３７℃の水溶液中で１２時間での
   溶解率が５０％以下であり、ヒアルロン酸の促進酸加水
   分解条件下でヒアルロン酸ゲルを処理することで可溶化
   されたヒアルロン酸が分岐構造を有し、該可溶化された
   ヒアルロン酸中に、分岐度が０．５以上の分子量フラク
   ションを部分的に含むヒアルロン酸ゲルと、ゲル化され
   ていないヒアルロン酸、生理活性物質、骨顆粒、又は抗
   生物質からなる群より選択した少なくとも１種を含む骨
   修復材。