JP2000336099A - ペプチド及びｃ型肝炎抗体検出用試薬 - Google Patents
ペプチド及びｃ型肝炎抗体検出用試薬Info
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- JP2000336099A JP2000336099A JP11148275A JP14827599A JP2000336099A JP 2000336099 A JP2000336099 A JP 2000336099A JP 11148275 A JP11148275 A JP 11148275A JP 14827599 A JP14827599 A JP 14827599A JP 2000336099 A JP2000336099 A JP 2000336099A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 免疫測定法によるＣ型肝炎抗体検出に用いる
ことができ、簡便かつ再現性よく調製することができる
ペプチドであって、従来の方法に比べて免疫測定法にお
ける測定感度が高いペプチドを提供する。 【解決手段】 ペプチドＡのＮ末端又はＣ末端に、ペプ
チドＸが連結されたペプチドであって、上記ペプチドＡ
は、配列表の配列番号１に示されたアミノ酸配列を有す
るものであるか、又は、配列表の配列番号１に示された
アミノ酸配列において１個若しくは数個のアミノ酸が付
加、欠損又は置換されたアミノ酸配列を有するものであ
って、Ｃ型肝炎ウイルス抗原活性を有するものであり、
上記ペプチドＸは、３残基以上のアルギニン（Ａｒｇ）
が結合したアミノ配列を有するものであるか、又は、３
残基以上のアルギニンが結合したアミノ配列において、
１個のアルギニンがシステイン（Ｃｙｓ）に置換された
アミノ酸配列を有するものであるペプチド。
ことができ、簡便かつ再現性よく調製することができる
ペプチドであって、従来の方法に比べて免疫測定法にお
ける測定感度が高いペプチドを提供する。 【解決手段】 ペプチドＡのＮ末端又はＣ末端に、ペプ
チドＸが連結されたペプチドであって、上記ペプチドＡ
は、配列表の配列番号１に示されたアミノ酸配列を有す
るものであるか、又は、配列表の配列番号１に示された
アミノ酸配列において１個若しくは数個のアミノ酸が付
加、欠損又は置換されたアミノ酸配列を有するものであ
って、Ｃ型肝炎ウイルス抗原活性を有するものであり、
上記ペプチドＸは、３残基以上のアルギニン（Ａｒｇ）
が結合したアミノ配列を有するものであるか、又は、３
残基以上のアルギニンが結合したアミノ配列において、
１個のアルギニンがシステイン（Ｃｙｓ）に置換された
アミノ酸配列を有するものであるペプチド。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、Ｃ型肝炎抗体検出
法において、不溶性担体を利用する免疫測定法に有用で
あるペプチドに関する。
法において、不溶性担体を利用する免疫測定法に有用で
あるペプチドに関する。
【０００２】
【従来の技術】輸血によって肝炎を発症するケースのな
かには、従来より知られているＡ型肝炎ウイルスやＢ型
肝炎ウイルス等以外のウイルスによって引き起こされる
ものがあることが知られており、肝炎を発症した人のな
かには慢性型へ移行し、最終的には肝癌となる人も多
く、このウイルスによって汚染された血液や血液製剤を
スクリーニングによって除くことが社会的に強く望まれ
ていた。このウイルスは、後に、非Ａ非Ｂ型肝炎ウイル
ス、即ち、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）によって引き起
こされるＣ型肝炎として報告されている。
かには、従来より知られているＡ型肝炎ウイルスやＢ型
肝炎ウイルス等以外のウイルスによって引き起こされる
ものがあることが知られており、肝炎を発症した人のな
かには慢性型へ移行し、最終的には肝癌となる人も多
く、このウイルスによって汚染された血液や血液製剤を
スクリーニングによって除くことが社会的に強く望まれ
ていた。このウイルスは、後に、非Ａ非Ｂ型肝炎ウイル
ス、即ち、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）によって引き起
こされるＣ型肝炎として報告されている。
【０００３】ＨＣＶゲノム由来の塩基配列は、既に決定
されており、これによると、ＨＣＶは少なくとも２８８
６アミノ酸残基をコードしている中断なしのオープンリ
ーディングフレームを有していることがわかっている
（Ｃｈｏｏ Ｑ−Ｌ，Ｋｕｏ Ｇ，Ｗｅｉｎｅｒ Ａ，
ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４，３５９（１９
８９））。このアミノ酸配列を分析することによって、
免疫優性領域を同定し、抗原抗体反応を利用した特異性
の高い免疫測定法の開発が行われている。
されており、これによると、ＨＣＶは少なくとも２８８
６アミノ酸残基をコードしている中断なしのオープンリ
ーディングフレームを有していることがわかっている
（Ｃｈｏｏ Ｑ−Ｌ，Ｋｕｏ Ｇ，Ｗｅｉｎｅｒ Ａ，
ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４，３５９（１９
８９））。このアミノ酸配列を分析することによって、
免疫優性領域を同定し、抗原抗体反応を利用した特異性
の高い免疫測定法の開発が行われている。
【０００４】特開平５−１４８２９８号公報には、ＨＣ
Ｖ抗原の免疫優性領域を同定し、その領域を含む特定の
ペプチドを固相に結合した免疫測定試薬に対してサンプ
ルを接触させ、次いで、抗ヒトＩｇＧ抗体によってサン
プル中のＨＣＶ抗体を検出する分析法が開示されてい
る。
Ｖ抗原の免疫優性領域を同定し、その領域を含む特定の
ペプチドを固相に結合した免疫測定試薬に対してサンプ
ルを接触させ、次いで、抗ヒトＩｇＧ抗体によってサン
プル中のＨＣＶ抗体を検出する分析法が開示されてい
る。
【０００５】しかしながら、このような方法で作製した
ペプチドは、難溶性で、物理的吸着によってラテックス
等の固相に吸着させる場合、吸着量が少なかったり、又
は、化学結合によって固相に結合させたり、ウシ血清ア
ルブミン（ＢＳＡ）等とのコンジュゲートを作製する場
合においても、結合効率が悪く、試薬化した際に測定感
度が不充分であるという問題点があった。
ペプチドは、難溶性で、物理的吸着によってラテックス
等の固相に吸着させる場合、吸着量が少なかったり、又
は、化学結合によって固相に結合させたり、ウシ血清ア
ルブミン（ＢＳＡ）等とのコンジュゲートを作製する場
合においても、結合効率が悪く、試薬化した際に測定感
度が不充分であるという問題点があった。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記現状に
鑑み、免疫測定法によるＣ型肝炎抗体検出に用いること
ができ、簡便かつ再現性よく調製することができるペプ
チドであって、従来の方法に比べて免疫測定法における
測定感度が高いペプチドを提供することを目的とする。
鑑み、免疫測定法によるＣ型肝炎抗体検出に用いること
ができ、簡便かつ再現性よく調製することができるペプ
チドであって、従来の方法に比べて免疫測定法における
測定感度が高いペプチドを提供することを目的とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明は、ペプチドＡの
Ｎ末端又はＣ末端に、ペプチドＸが連結されたペプチド
であって、上記ペプチドＡは、配列表の配列番号１に示
されたアミノ酸配列を有するものであるか、又は、配列
表の配列番号１に示されたアミノ酸配列において１個若
しくは数個のアミノ酸が付加、欠損又は置換されたアミ
ノ酸配列を有するものであって、Ｃ型肝炎ウイルス抗原
活性を有するものであり、上記ペプチドＸは、３残基以
上のアルギニン（Ａｒｇ）が結合したアミノ配列を有す
るものであるか、又は、３残基以上のアルギニンが結合
したアミノ配列において、１個のアルギニンがシステイ
ン（Ｃｙｓ）に置換されたアミノ酸配列を有するもので
あるペプチドである。
Ｎ末端又はＣ末端に、ペプチドＸが連結されたペプチド
であって、上記ペプチドＡは、配列表の配列番号１に示
されたアミノ酸配列を有するものであるか、又は、配列
表の配列番号１に示されたアミノ酸配列において１個若
しくは数個のアミノ酸が付加、欠損又は置換されたアミ
ノ酸配列を有するものであって、Ｃ型肝炎ウイルス抗原
活性を有するものであり、上記ペプチドＸは、３残基以
上のアルギニン（Ａｒｇ）が結合したアミノ配列を有す
るものであるか、又は、３残基以上のアルギニンが結合
したアミノ配列において、１個のアルギニンがシステイ
ン（Ｃｙｓ）に置換されたアミノ酸配列を有するもので
あるペプチドである。
【０００８】
【発明の実施の形態】以下に本発明を詳述する。本発明
のペプチドは、ペプチドＡのＮ末端又はＣ末端に、ペプ
チドＸが連結されたようなアミノ酸配列を有するもので
ある。本発明においては、ペプチドＡのＮ末端又はＣ末
端にペプチドＸが連結したアミノ酸配列を有するペプチ
ドを用いることによって、ペプチドＡのみの場合に比べ
て、ペプチドの水溶性が増し、固相への吸着効率又は固
相やＢＳＡ等のタンパク質への結合効率を向上すること
ができ、測定感度が充分に高い免疫測定法を提供するこ
とができる。
のペプチドは、ペプチドＡのＮ末端又はＣ末端に、ペプ
チドＸが連結されたようなアミノ酸配列を有するもので
ある。本発明においては、ペプチドＡのＮ末端又はＣ末
端にペプチドＸが連結したアミノ酸配列を有するペプチ
ドを用いることによって、ペプチドＡのみの場合に比べ
て、ペプチドの水溶性が増し、固相への吸着効率又は固
相やＢＳＡ等のタンパク質への結合効率を向上すること
ができ、測定感度が充分に高い免疫測定法を提供するこ
とができる。
【０００９】上記ペプチドＸは、３残基以上のアルギニ
ンが結合したアミノ配列を有するか、又は、３残基以上
のアルギニンが結合したアミノ配列において、１個のア
ルギニンがシステインに置換されたアミノ酸配列を有す
るものである。本発明においては、上記ペプチドＸは、
ペプチドの水溶性を増加させるために、３残基以上のア
ルギニンのみが結合したアミノ配列を有するものを使用
するか、又は、３残基以上のアルギニンが結合したアミ
ノ配列のうち１個のアルギニンがシステインに置換され
たアミノ酸配列を有するものを使用する必要がある。
ンが結合したアミノ配列を有するか、又は、３残基以上
のアルギニンが結合したアミノ配列において、１個のア
ルギニンがシステインに置換されたアミノ酸配列を有す
るものである。本発明においては、上記ペプチドＸは、
ペプチドの水溶性を増加させるために、３残基以上のア
ルギニンのみが結合したアミノ配列を有するものを使用
するか、又は、３残基以上のアルギニンが結合したアミ
ノ配列のうち１個のアルギニンがシステインに置換され
たアミノ酸配列を有するものを使用する必要がある。
【００１０】上記ペプチドＸとして、３残基以上のアル
ギニンが結合したアミノ配列において１個のアルギニン
がシステインに置換されたアミノ酸配列を有するものを
使用する場合、システインに置換されるアルギニンの位
置は特に限定されず、ペプチドＸ中のいずれのアルギニ
ンでもよい。上記システインの数は、ペプチドＸの長さ
に関わらず０又は１に限定される。上記システインは、
このアミノ酸中のＳＨ基を利用してラテックス等の固相
又はＢＳＡ等の高分子タンパク質に化学結合させること
ができ、もってこれらへの結合効率を上げ、試薬として
の感度を向上させることができる。
ギニンが結合したアミノ配列において１個のアルギニン
がシステインに置換されたアミノ酸配列を有するものを
使用する場合、システインに置換されるアルギニンの位
置は特に限定されず、ペプチドＸ中のいずれのアルギニ
ンでもよい。上記システインの数は、ペプチドＸの長さ
に関わらず０又は１に限定される。上記システインは、
このアミノ酸中のＳＨ基を利用してラテックス等の固相
又はＢＳＡ等の高分子タンパク質に化学結合させること
ができ、もってこれらへの結合効率を上げ、試薬として
の感度を向上させることができる。
【００１１】上記ペプチドＸの長さとしては、アルギニ
ンのみからなる場合は３残基以上、又は、１個のアルギ
ニンがシステインに置換されている場合も３残基以上で
あれば特に限定されないが、ペプチドを化学的に固相合
成する場合には、ペプチド全体の長さが４０以下、好ま
しくは、３０以下である方が合成上有利であることか
ら、上記ペプチドＸは、３〜１０残基のアルギニンが結
合したアミノ配列を有するか、又は、３〜１０残基のア
ルギニンが結合したアミノ配列において、１個のアルギ
ニンがシステインに置換されたアミノ酸配列を有するも
のであることが好ましい。より好ましくは、３残基のア
ルギニンが結合したアミノ配列、即ち、Ａｒｇ−Ａｒｇ
−Ａｒｇのアミノ酸配列を有するものであるか、又は、
配列表の配列番号２〜１１に示されたアミノ酸配列のう
ちいずれか１つのアミノ配列を有するペプチドである。
ンのみからなる場合は３残基以上、又は、１個のアルギ
ニンがシステインに置換されている場合も３残基以上で
あれば特に限定されないが、ペプチドを化学的に固相合
成する場合には、ペプチド全体の長さが４０以下、好ま
しくは、３０以下である方が合成上有利であることか
ら、上記ペプチドＸは、３〜１０残基のアルギニンが結
合したアミノ配列を有するか、又は、３〜１０残基のア
ルギニンが結合したアミノ配列において、１個のアルギ
ニンがシステインに置換されたアミノ酸配列を有するも
のであることが好ましい。より好ましくは、３残基のア
ルギニンが結合したアミノ配列、即ち、Ａｒｇ−Ａｒｇ
−Ａｒｇのアミノ酸配列を有するものであるか、又は、
配列表の配列番号２〜１１に示されたアミノ酸配列のう
ちいずれか１つのアミノ配列を有するペプチドである。
【００１２】上記ペプチドＡは、配列表の配列番号１に
示されたアミノ酸配列を有するものであるか、又は、配
列表の配列番号１に示されたアミノ酸配列において１個
若しくは数個のアミノ酸が付加、欠損又は置換されたア
ミノ酸配列を有するものであって、ＨＣＶ抗原活性を有
するものである。
示されたアミノ酸配列を有するものであるか、又は、配
列表の配列番号１に示されたアミノ酸配列において１個
若しくは数個のアミノ酸が付加、欠損又は置換されたア
ミノ酸配列を有するものであって、ＨＣＶ抗原活性を有
するものである。
【００１３】上記ペプチドＡとしては、配列表の配列番
号１に示されたアミノ酸配列を有するペプチドを使用す
ることが好ましい。上記配列表の配列番号１に示された
アミノ酸配列を有するペプチドは、ＨＣＶ抗原の２３〜
４２番目のアミノ酸配列に相当し、Ｃｏｒｅ−２２と呼
ばれるペプチドである。上記配列表の配列番号１に示さ
れたアミノ酸配列を有するペプチドは、そのペプチドの
みでは難溶性であり、物理的吸着や化学結合によってラ
テックス等の固相やＢＳＡ等のタンパク質に吸着させる
場合、吸着量が少なく、試薬化した場合に感度が上がり
にくかったが、このペプチドに上述したペプチドＸを連
結させたペプチドを使用することによって、固相やＢＳ
Ａ等のタンパク質等に対して吸着量が増加し、免疫測定
法において測定感度を格段に向上することができる。
号１に示されたアミノ酸配列を有するペプチドを使用す
ることが好ましい。上記配列表の配列番号１に示された
アミノ酸配列を有するペプチドは、ＨＣＶ抗原の２３〜
４２番目のアミノ酸配列に相当し、Ｃｏｒｅ−２２と呼
ばれるペプチドである。上記配列表の配列番号１に示さ
れたアミノ酸配列を有するペプチドは、そのペプチドの
みでは難溶性であり、物理的吸着や化学結合によってラ
テックス等の固相やＢＳＡ等のタンパク質に吸着させる
場合、吸着量が少なく、試薬化した場合に感度が上がり
にくかったが、このペプチドに上述したペプチドＸを連
結させたペプチドを使用することによって、固相やＢＳ
Ａ等のタンパク質等に対して吸着量が増加し、免疫測定
法において測定感度を格段に向上することができる。
【００１４】上記ペプチドＡとしては、配列表の配列番
号１に示されたアミノ酸配列において１個若しくは数個
のアミノ酸が付加、欠損又は置換されたアミノ酸配列を
有するものであって、ＨＣＶ抗原活性を有するものも使
用することができる。上記ＨＣＶ抗原活性を有するか否
かを確認する方法としては、ＥＩＡ法やラテックス凝集
法等のＨＣＶ抗体を使用する抗原抗体反応により行うこ
とができる。即ち、ＨＣＶ抗体、例えば、ＨＣＶ陽性患
者の血清と試験すべきペプチドとをインキュベートし、
免疫複合体が形成されるか否かを分析することにより確
認することができる。
号１に示されたアミノ酸配列において１個若しくは数個
のアミノ酸が付加、欠損又は置換されたアミノ酸配列を
有するものであって、ＨＣＶ抗原活性を有するものも使
用することができる。上記ＨＣＶ抗原活性を有するか否
かを確認する方法としては、ＥＩＡ法やラテックス凝集
法等のＨＣＶ抗体を使用する抗原抗体反応により行うこ
とができる。即ち、ＨＣＶ抗体、例えば、ＨＣＶ陽性患
者の血清と試験すべきペプチドとをインキュベートし、
免疫複合体が形成されるか否かを分析することにより確
認することができる。
【００１５】本発明のペプチドは、上記ペプチドＡのＮ
末端又はＣ末端に、ペプチドＸが連結されたものであ
る。本発明のペプチドの調製方法としては特に限定され
ず、例えば、化学合成による方法、遺伝子組み換え技術
を利用した方法等を挙げることができる。簡便に得られ
る点より、化学合成による方法が好ましい。
末端又はＣ末端に、ペプチドＸが連結されたものであ
る。本発明のペプチドの調製方法としては特に限定され
ず、例えば、化学合成による方法、遺伝子組み換え技術
を利用した方法等を挙げることができる。簡便に得られ
る点より、化学合成による方法が好ましい。
【００１６】上記化学合成による方法としては、ペプチ
ド自動合成装置を利用する固相合成法等従来公知の方法
に従って行うことができる。上記遺伝子組み換え技術を
利用した方法としては、上記ペプチドをコードするＤＮ
Ａ塩基配列を得た後、これを大腸菌や酵母等の生育の速
い生物に組み込んで調製することができる。具体的な手
法としては、「新生物化学実験の手引き」（化学同人
社）等に記載された遺伝子実験プロトコール等の常法を
応用することで充分である。
ド自動合成装置を利用する固相合成法等従来公知の方法
に従って行うことができる。上記遺伝子組み換え技術を
利用した方法としては、上記ペプチドをコードするＤＮ
Ａ塩基配列を得た後、これを大腸菌や酵母等の生育の速
い生物に組み込んで調製することができる。具体的な手
法としては、「新生物化学実験の手引き」（化学同人
社）等に記載された遺伝子実験プロトコール等の常法を
応用することで充分である。
【００１７】上記ペプチドをコードする遺伝子の取得方
法としては、特に限定されず、例えば、ＤＮＡ自動合成
装置等により全ＤＮＡを化学合成する方法；ＤＮＡ化学
合成とＰＣＲ法を組み合わせる方法；クローニングによ
りペプチドＡをコードするＤＮＡを得た後、別にＤＮＡ
化学合成したペプチドＸをコードする遺伝子をＤＮＡリ
ガーゼ等によって結合する方法等を挙げることができ
る。
法としては、特に限定されず、例えば、ＤＮＡ自動合成
装置等により全ＤＮＡを化学合成する方法；ＤＮＡ化学
合成とＰＣＲ法を組み合わせる方法；クローニングによ
りペプチドＡをコードするＤＮＡを得た後、別にＤＮＡ
化学合成したペプチドＸをコードする遺伝子をＤＮＡリ
ガーゼ等によって結合する方法等を挙げることができ
る。
【００１８】上記ペプチドＡをコードするＤＮＡをクロ
ーニングにより得る方法としては、特に限定されず、例
えば、ＨＣＶよりゲノムＤＮＡを調製し、適当な制限酵
素サイトを含むプライマーを用いて常法に従ってＰＣＲ
法によって増幅させることによって行うことができる。
上記のようにして得たペプチドをコードする遺伝子の断
片を、耐性マーカーを含むプラスミドに挿入し、組み換
えプラスミドで大腸菌や酵母等を形質転換する。この形
質転換体を培養し、培養菌体を破砕後、従来公知の精製
方法によって、ペプチドＡのＮ末端又はＣ末端にペプチ
ドＸが連結されたペプチドを得ることができる。上記ペ
プチドは、アミノ酸配列自動分析装置等によりアミノ酸
配列を確認することができる。
ーニングにより得る方法としては、特に限定されず、例
えば、ＨＣＶよりゲノムＤＮＡを調製し、適当な制限酵
素サイトを含むプライマーを用いて常法に従ってＰＣＲ
法によって増幅させることによって行うことができる。
上記のようにして得たペプチドをコードする遺伝子の断
片を、耐性マーカーを含むプラスミドに挿入し、組み換
えプラスミドで大腸菌や酵母等を形質転換する。この形
質転換体を培養し、培養菌体を破砕後、従来公知の精製
方法によって、ペプチドＡのＮ末端又はＣ末端にペプチ
ドＸが連結されたペプチドを得ることができる。上記ペ
プチドは、アミノ酸配列自動分析装置等によりアミノ酸
配列を確認することができる。
【００１９】本発明のペプチドは、不溶性担体に直接結
合させることにより、又は、ＢＳＡ等とのタンパク質と
のコンジュゲートを作製することにより、Ｃ型肝炎抗体
検出用試薬として好適に使用することができる。上記Ｃ
型肝炎抗体検出用試薬もまた、本発明の１つである。上
記不溶性担体としては特に限定されず、例えば、有機高
分子粉末、微生物、血球及び細胞膜片等が挙げられる。
上記有機高分子粉末としては特に限定されず、例えば、
不溶性アガロース、セルロース、不溶性デキストラン等
の天然高分子粉末；ポリスチレン、スチレン−スルホン
酸（塩）共重合体、スチレン−メタクリル酸共重合体、
アクリロニトリル−ブタジエン−スチレン共重合体、塩
化ビニル−アクリル酸エステル共重合体、酢酸ビニル−
アクリル酸エステル共重合体等の合成高分子粉末等が挙
げられる。特に、合成高分子粉末を均一に懸濁させたラ
テックスが好ましい。
合させることにより、又は、ＢＳＡ等とのタンパク質と
のコンジュゲートを作製することにより、Ｃ型肝炎抗体
検出用試薬として好適に使用することができる。上記Ｃ
型肝炎抗体検出用試薬もまた、本発明の１つである。上
記不溶性担体としては特に限定されず、例えば、有機高
分子粉末、微生物、血球及び細胞膜片等が挙げられる。
上記有機高分子粉末としては特に限定されず、例えば、
不溶性アガロース、セルロース、不溶性デキストラン等
の天然高分子粉末；ポリスチレン、スチレン−スルホン
酸（塩）共重合体、スチレン−メタクリル酸共重合体、
アクリロニトリル−ブタジエン−スチレン共重合体、塩
化ビニル−アクリル酸エステル共重合体、酢酸ビニル−
アクリル酸エステル共重合体等の合成高分子粉末等が挙
げられる。特に、合成高分子粉末を均一に懸濁させたラ
テックスが好ましい。
【００２０】上記不溶性担体は、その使用目的及び用途
等により異なるが、通常、化学合成により製造するか、
又は、市販されているものを使用することができる。上
記不溶性担体としては、表面にスルホン酸基やカルボキ
シル基等を導入した不溶性担体を適宜使用可能である。
上記ラテックスを用いる場合、ラテックス粒子の粒径
は、０．０５〜１．５μｍが好ましく、０．１〜０．８
μｍがより好ましい。
等により異なるが、通常、化学合成により製造するか、
又は、市販されているものを使用することができる。上
記不溶性担体としては、表面にスルホン酸基やカルボキ
シル基等を導入した不溶性担体を適宜使用可能である。
上記ラテックスを用いる場合、ラテックス粒子の粒径
は、０．０５〜１．５μｍが好ましく、０．１〜０．８
μｍがより好ましい。
【００２１】上記不溶性担体に本発明のペプチドを担持
させる場合、結合方法としては、物理吸着、化学結合が
挙げられる。上記物理吸着により結合させる方法として
は、例えば、本発明のペプチドを含む溶液に不溶性担体
の懸濁液を添加し攪拌すると、物理的吸着によりペプチ
ドを不溶性担体に結合させることができる。上記化学結
合により結合させる方法としては、例えば、表面にスル
ホン酸基やカルボキシル基等が導入されている不溶性担
体を用いて、適当な架橋剤を添加することにより、ペプ
チドを不溶性担体に化学結合させることができる。
させる場合、結合方法としては、物理吸着、化学結合が
挙げられる。上記物理吸着により結合させる方法として
は、例えば、本発明のペプチドを含む溶液に不溶性担体
の懸濁液を添加し攪拌すると、物理的吸着によりペプチ
ドを不溶性担体に結合させることができる。上記化学結
合により結合させる方法としては、例えば、表面にスル
ホン酸基やカルボキシル基等が導入されている不溶性担
体を用いて、適当な架橋剤を添加することにより、ペプ
チドを不溶性担体に化学結合させることができる。
【００２２】上記不溶性担体に結合させる方法としては
また、本発明のペプチドを予めＢＳＡ等の担体に結合さ
せておき、その後、物理吸着により不溶性担体に担持さ
せることもできる。上記ＢＳＡ等の担体に本発明のペプ
チドを結合させる方法としては、物理吸着、化学結合が
挙げられる。上記物理吸着により結合させる方法として
は、本発明のペプチドを含む溶液に、ＢＳＡ等をラテッ
クスに担持させた溶液の懸濁液を添加し攪拌すると、物
理的吸着によりペプチドをＢＳＡ等に結合させることも
できる。上記化学結合により結合させる方法としては、
例えば、ＢＳＡ等の表面のアミノ基やカルボキシル基等
を利用し、適当な架橋剤を添加することにより、ペプチ
ドをＢＳＡ等の担体に化学結合させることができる。
また、本発明のペプチドを予めＢＳＡ等の担体に結合さ
せておき、その後、物理吸着により不溶性担体に担持さ
せることもできる。上記ＢＳＡ等の担体に本発明のペプ
チドを結合させる方法としては、物理吸着、化学結合が
挙げられる。上記物理吸着により結合させる方法として
は、本発明のペプチドを含む溶液に、ＢＳＡ等をラテッ
クスに担持させた溶液の懸濁液を添加し攪拌すると、物
理的吸着によりペプチドをＢＳＡ等に結合させることも
できる。上記化学結合により結合させる方法としては、
例えば、ＢＳＡ等の表面のアミノ基やカルボキシル基等
を利用し、適当な架橋剤を添加することにより、ペプチ
ドをＢＳＡ等の担体に化学結合させることができる。
【００２３】上記物理吸着及び化学結合においては、と
もに、結合反応時のｐＨは３〜１０が好ましい。上記ｐ
Ｈがこの範囲を外れると、タンパク質が変性する等の問
題が生じることがある。上記物理吸着及び化学結合の結
合反応時の温度は２〜５０℃が好ましい。２℃未満では
反応速度が遅く、所望の感度を有するものが得られにく
くなり、５０℃を超えると、ＢＳＡ等が変性する等の問
題が生じることがある。
もに、結合反応時のｐＨは３〜１０が好ましい。上記ｐ
Ｈがこの範囲を外れると、タンパク質が変性する等の問
題が生じることがある。上記物理吸着及び化学結合の結
合反応時の温度は２〜５０℃が好ましい。２℃未満では
反応速度が遅く、所望の感度を有するものが得られにく
くなり、５０℃を超えると、ＢＳＡ等が変性する等の問
題が生じることがある。
【００２４】本発明のペプチドを不溶性担体に結合させ
た試薬は、抗原抗体反応を利用して、試料中のＣ型肝炎
抗体を測定するのに好適に使用することができる。上記
試料としては特に限定されず、例えば、血清等の生体試
料等が挙げられる。上記ペプチドを不溶性担体に結合さ
せた試薬は、上記試料とともに一定時間インキュベート
した後で、形成した免疫複合体の量を測定することによ
り、免疫測定方法を実施することができる。上記免疫複
合体の量を測定する方法としては特に限定されず、例え
ば、不溶性担体としてラテックスを用いる場合であれ
ば、吸光変化量を測定し、抗体濃度既知の標準物質で同
様に測定した値と比較することによって試料中の抗体量
を知ることができる。また、酵素免疫測定法の場合は、
上記ペプチドを不溶性担体に結合させた試薬、試料、及
び、ヒトＩｇＧに対する酵素標識した抗体（例えば、ポ
リクローナル抗体等）を、順次又は同時に、一定時間イ
ンキュベートした後で、免疫複合体中の酵素量を測定
し、抗体濃度既知の標準物質で同様に測定した値と比較
することによって試料中の抗体量を知ることができる。
た試薬は、抗原抗体反応を利用して、試料中のＣ型肝炎
抗体を測定するのに好適に使用することができる。上記
試料としては特に限定されず、例えば、血清等の生体試
料等が挙げられる。上記ペプチドを不溶性担体に結合さ
せた試薬は、上記試料とともに一定時間インキュベート
した後で、形成した免疫複合体の量を測定することによ
り、免疫測定方法を実施することができる。上記免疫複
合体の量を測定する方法としては特に限定されず、例え
ば、不溶性担体としてラテックスを用いる場合であれ
ば、吸光変化量を測定し、抗体濃度既知の標準物質で同
様に測定した値と比較することによって試料中の抗体量
を知ることができる。また、酵素免疫測定法の場合は、
上記ペプチドを不溶性担体に結合させた試薬、試料、及
び、ヒトＩｇＧに対する酵素標識した抗体（例えば、ポ
リクローナル抗体等）を、順次又は同時に、一定時間イ
ンキュベートした後で、免疫複合体中の酵素量を測定
し、抗体濃度既知の標準物質で同様に測定した値と比較
することによって試料中の抗体量を知ることができる。
【００２５】
【実施例】以下に実施例を掲げて本発明を更に詳しく説
明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるもの
ではない。
明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるもの
ではない。
【００２６】実施例１ （１）Ｃ型肝炎ペプチド抗原感作ラテックス（物理吸
着）の調製 下記表１及び表２に示す配列番号のアミノ酸配列を有す
るペプチドを、ペプチド自動合成装置による固相合成に
よってそれぞれ１ｍｇずつ用意した。即ち、ペプチドａ
は配列表の配列番号１に示すアミノ酸配列を有するペプ
チド（ペプチドＡのみでペプチドＸを連結していないも
の）を、ペプチドＸ１〜Ｘ１１はペプチドＡのＮ末端側
に表１に示す配列番号のペプチドＸをそれぞれ連結した
ペプチドを、ペプチドＹ１〜Ｙ１１はペプチドＡのＣ末
端側に表２に示すペプチドＸをそれぞれ連結したペプチ
ドを合成した。
着）の調製 下記表１及び表２に示す配列番号のアミノ酸配列を有す
るペプチドを、ペプチド自動合成装置による固相合成に
よってそれぞれ１ｍｇずつ用意した。即ち、ペプチドａ
は配列表の配列番号１に示すアミノ酸配列を有するペプ
チド（ペプチドＡのみでペプチドＸを連結していないも
の）を、ペプチドＸ１〜Ｘ１１はペプチドＡのＮ末端側
に表１に示す配列番号のペプチドＸをそれぞれ連結した
ペプチドを、ペプチドＹ１〜Ｙ１１はペプチドＡのＣ末
端側に表２に示すペプチドＸをそれぞれ連結したペプチ
ドを合成した。
【００２７】
【表１】
【００２８】
【表２】
【００２９】上記各ペプチドを１００μｇずつ計り取
り、１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）１ｍＬを加
えた。この溶液０．４ｍＬを平均粒径０．４μｍのポリ
スチレンラテックス（固形分１０％（ｗ／ｖ）；積水化
学工業社製）１００μＬに添加し、４℃にて１．５時間
攪拌した。次いで、ＢＳＡを１％（ｗ／ｖ）含有する１
００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）２ｍＬを添加し、
１．５時間攪拌して、ラテックス表面の非特異的吸着を
防ぐことを目的とするブロッキングを行った。この溶液
を１０℃にて３０分間、１８０００ｒｐｍで遠心分離を
行った。得られた沈殿物に、ＢＳＡを０．２５％（ｗ／
ｖ）含有する１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）５
ｍＬを添加し、ラテックスを懸濁させ、ペプチド感作ラ
テックスを調製した。
り、１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）１ｍＬを加
えた。この溶液０．４ｍＬを平均粒径０．４μｍのポリ
スチレンラテックス（固形分１０％（ｗ／ｖ）；積水化
学工業社製）１００μＬに添加し、４℃にて１．５時間
攪拌した。次いで、ＢＳＡを１％（ｗ／ｖ）含有する１
００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）２ｍＬを添加し、
１．５時間攪拌して、ラテックス表面の非特異的吸着を
防ぐことを目的とするブロッキングを行った。この溶液
を１０℃にて３０分間、１８０００ｒｐｍで遠心分離を
行った。得られた沈殿物に、ＢＳＡを０．２５％（ｗ／
ｖ）含有する１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）５
ｍＬを添加し、ラテックスを懸濁させ、ペプチド感作ラ
テックスを調製した。
【００３０】（２）Ｃ型肝炎ペプチド抗原感作ラテック
ス（化学結合）の調製 ＢＳＡを１％（ｗ／ｖ）含有する１００ｍＭリン酸緩衝
液（ｐＨ７．４）５０ｍＬを平均粒径０．４μｍのポリ
スチレンラテックス（固形分１０％（ｗ／ｖ）；積水化
学工業社製）２．５ｍＬに添加し、４℃にて１．５時間
攪拌した。上記試薬に、ＳＭＣＣ溶液（Ｎ−サクシイミ
ジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）−１−カルボキシ
レート；８ｍｇ／ｍＬ；ジメチルホルムアミド溶液）
０．４ｍＬを加えて３０℃１０分間攪拌し、ＢＳＡとＳ
ＭＣＣを結合させた。次いで、上記溶液を透析膜（ＵＣ
２０−３２−１００：サイズ２０／３２；三光純薬社
製）を用い、生理食塩水（０．９％ ＮａＣｌ）３０Ｌ
で一昼夜透析した。その後、該溶液を２３本の試験管に
２ｍＬずつ分注した（溶液１）。 （１）Ｃ型肝炎ペプチド抗原感作ラテックス（物理吸
着）の調製で合成した各ペプチドを１００μｇずつ計り
取り、１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）１ｍＬを
加えた溶液を１０分間攪拌ののち、上記２３本の溶液１
に各々添加し、４℃で１時間攪拌した。この溶液を、１
℃で３０分間１８０００ｒｐｍで遠心分離した。得られ
た沈殿物に、ＢＳＡを０．２５％（ｗ／ｖ）含有する１
００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）５ｍＬを添加し、
ラテックスを懸濁させ、ペプチド感作ラテックスを調製
した。
ス（化学結合）の調製 ＢＳＡを１％（ｗ／ｖ）含有する１００ｍＭリン酸緩衝
液（ｐＨ７．４）５０ｍＬを平均粒径０．４μｍのポリ
スチレンラテックス（固形分１０％（ｗ／ｖ）；積水化
学工業社製）２．５ｍＬに添加し、４℃にて１．５時間
攪拌した。上記試薬に、ＳＭＣＣ溶液（Ｎ−サクシイミ
ジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）−１−カルボキシ
レート；８ｍｇ／ｍＬ；ジメチルホルムアミド溶液）
０．４ｍＬを加えて３０℃１０分間攪拌し、ＢＳＡとＳ
ＭＣＣを結合させた。次いで、上記溶液を透析膜（ＵＣ
２０−３２−１００：サイズ２０／３２；三光純薬社
製）を用い、生理食塩水（０．９％ ＮａＣｌ）３０Ｌ
で一昼夜透析した。その後、該溶液を２３本の試験管に
２ｍＬずつ分注した（溶液１）。 （１）Ｃ型肝炎ペプチド抗原感作ラテックス（物理吸
着）の調製で合成した各ペプチドを１００μｇずつ計り
取り、１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）１ｍＬを
加えた溶液を１０分間攪拌ののち、上記２３本の溶液１
に各々添加し、４℃で１時間攪拌した。この溶液を、１
℃で３０分間１８０００ｒｐｍで遠心分離した。得られ
た沈殿物に、ＢＳＡを０．２５％（ｗ／ｖ）含有する１
００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）５ｍＬを添加し、
ラテックスを懸濁させ、ペプチド感作ラテックスを調製
した。
【００３１】（３）検体希釈液の調製 ＢＳＡを０．２５％（ｗ／ｖ）及びｐＧＥＭＡ（グリコ
シルエチルメタクリレートのホモポリマー、平均分子量
１１４万、日本精化社製）を１％（ｗ／ｖ）含有する１
００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）に、エチレンジア
ミン四酢酸ナトリウムをその濃度が５ｍＭになるように
溶解し、検体希釈液とした。
シルエチルメタクリレートのホモポリマー、平均分子量
１１４万、日本精化社製）を１％（ｗ／ｖ）含有する１
００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）に、エチレンジア
ミン四酢酸ナトリウムをその濃度が５ｍＭになるように
溶解し、検体希釈液とした。
【００３２】（４）Ｃ型肝炎抗体測定試薬 Ｃ型肝炎抗体測定試薬は、上記（１）又は（２）のＣ型
肝炎ペプチド抗原感作ラテックスからなる第１試薬と、
上記（３）の検体希釈液からなる第２試薬とから構成さ
れる２液系の試薬である。
肝炎ペプチド抗原感作ラテックスからなる第１試薬と、
上記（３）の検体希釈液からなる第２試薬とから構成さ
れる２液系の試薬である。
【００３３】（５）標準物質 Ｃ型肝炎抗体を１０Ｃ．Ｏ．Ｉ（カットオフインデック
ス）含むヒト血清を標準Ｃ型肝炎抗体液として使用し
た。
ス）含むヒト血清を標準Ｃ型肝炎抗体液として使用し
た。
【００３４】（６）自動分析装置によるＣ型肝炎抗体価
測定 以下に、生化学自動分析装置「日立７０５０形」（日立
製作所製）により、検体中のＣ型肝炎抗体価を測定する
方法を示す。 測定モード： Ｏｒｉｇｉｎａｌ Ａｂｓ パラメーター： 検体量 ２０μＬ ラテックス試薬（第１試薬） ５０μＬ 検体希釈液（第２試薬） ３５０μＬ 測定波長： ５７０ｎｍ 測定時間： 検体分注後、直ちに検体希釈液が添
加、混合され、その後、ラテックス試薬が添加、混合さ
れる。ラテックス試薬の添加後、８０秒から３２０秒ま
での吸光変化量（反応性＝ＡＢＳ）を求め、これを反応
量とした。反応系のｐＨは７．４である。本計測におい
て、第１試薬として物理吸着試薬（１）又は化学結合試
薬（２）を使用して、１０Ｃ．Ｏ．Ｉの検体をそれぞれ
測定し、反応性（ＡＢＳ）を比較した。結果を表３及び
表４に示した。
測定 以下に、生化学自動分析装置「日立７０５０形」（日立
製作所製）により、検体中のＣ型肝炎抗体価を測定する
方法を示す。 測定モード： Ｏｒｉｇｉｎａｌ Ａｂｓ パラメーター： 検体量 ２０μＬ ラテックス試薬（第１試薬） ５０μＬ 検体希釈液（第２試薬） ３５０μＬ 測定波長： ５７０ｎｍ 測定時間： 検体分注後、直ちに検体希釈液が添
加、混合され、その後、ラテックス試薬が添加、混合さ
れる。ラテックス試薬の添加後、８０秒から３２０秒ま
での吸光変化量（反応性＝ＡＢＳ）を求め、これを反応
量とした。反応系のｐＨは７．４である。本計測におい
て、第１試薬として物理吸着試薬（１）又は化学結合試
薬（２）を使用して、１０Ｃ．Ｏ．Ｉの検体をそれぞれ
測定し、反応性（ＡＢＳ）を比較した。結果を表３及び
表４に示した。
【００３５】
【表３】
【００３６】
【表４】
【００３７】以上の結果より、配列表の配列番号１で示
したペプチドＡのみのペプチドよりも、本発明によりア
ミノ酸配列を改良したペプチドＸ１〜Ｘ１１及びＹ１〜
Ｙ１１の方が反応性が高い高感度試薬を得ることができ
ることがわかった。
したペプチドＡのみのペプチドよりも、本発明によりア
ミノ酸配列を改良したペプチドＸ１〜Ｘ１１及びＹ１〜
Ｙ１１の方が反応性が高い高感度試薬を得ることができ
ることがわかった。
【００３８】
【発明の効果】本発明は、上述のとおりであるので、Ｃ
型肝炎抗体検出用測定法に有用なペプチドを簡便かつ再
現性よく得ることができ、そのペプチドを用いた免疫測
定試薬は、従来の方法に比べて測定感度が向上したもの
である。即ち、本発明は、ペプチドＡのＮ末端又はＣ末
端に、３残基以上のアルギニンが結合したアミノ配列を
有するペプチドＸを連結することによって、ペプチドの
親水性を増し、もってラテックス等の固相への吸着力を
増加させ、試薬としての感度を向上させることができ
る。また、アルギニンの代わりにシステインを付加し、
システインのＳＨ基を利用することによって、化学結合
によるラテックス等の固相又はＢＳＡ等のタンパク質へ
の結合効率を増加させ、試薬としての感度を向上させる
ことができる。
型肝炎抗体検出用測定法に有用なペプチドを簡便かつ再
現性よく得ることができ、そのペプチドを用いた免疫測
定試薬は、従来の方法に比べて測定感度が向上したもの
である。即ち、本発明は、ペプチドＡのＮ末端又はＣ末
端に、３残基以上のアルギニンが結合したアミノ配列を
有するペプチドＸを連結することによって、ペプチドの
親水性を増し、もってラテックス等の固相への吸着力を
増加させ、試薬としての感度を向上させることができ
る。また、アルギニンの代わりにシステインを付加し、
システインのＳＨ基を利用することによって、化学結合
によるラテックス等の固相又はＢＳＡ等のタンパク質へ
の結合効率を増加させ、試薬としての感度を向上させる
ことができる。
【００３９】
【配列表】 <110> 積水化学工業株式会社 SEKISUI CHEMICAL CO., LTD. <120> ペプチド及びＣ型肝炎抗体検出用試薬 <130> 99P01486 <160> 11 <210> 1 <211> 20 <212> PRT <213> Type C hepatitis virus <400> 1 Val Lys Phe Pro Gly Gly Gly Gln Ile Val Gly Gly Val Tyr Leu leu 1 5 10 15 Pro Arg Arg Gly 20 <210> 2 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 配列表フリーテキスト ペプチドＸ <400> 2 Arg Arg Arg Cys 1 <210> 3 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 配列表フリーテキスト ペプチドＸ <400> 3 Arg Arg Cys Arg 1 <210> 4 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 配列表フリーテキスト ペプチドＸ <400> 4 Arg Cys Arg Arg 1 <210> 5 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 配列表フリーテキスト ペプチドＸ <400> 5 Cys Arg Arg Arg 1 <210> 6 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 配列表フリーテキスト ペプチドＸ <400> 6 Arg Arg Arg Arg 1 <210> 7 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 配列表フリーテキスト ペプチドＸ <400> 7 Arg Arg Arg Arg Cys 1 5 <210> 8 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 配列表フリーテキスト ペプチドＸ <400> 8 Arg Arg Arg Cys Arg 1 5 <210> 9 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 配列表フリーテキスト ペプチドＸ <400> 9 Arg Arg Cys Arg Arg 1 5 <210> 10 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 配列表フリーテキスト ペプチドＸ <400> 10 Arg Cys Arg Arg Arg 1 5 <210> 11 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 配列表フリーテキスト ペプチドＸ <400> 11 Cys Arg Arg Arg Arg 1 5
Claims (4)
- 【請求項１】 ペプチドＡのＮ末端又はＣ末端に、ペプ
チドＸが連結されたペプチドであって、前記ペプチドＡ
は、配列表の配列番号１に示されたアミノ酸配列を有す
るものであるか、又は、配列表の配列番号１に示された
アミノ酸配列において１個若しくは数個のアミノ酸が付
加、欠損又は置換されたアミノ酸配列を有するものであ
って、Ｃ型肝炎ウイルス抗原活性を有するものであり、
前記ペプチドＸは、３残基以上のアルギニン（Ａｒｇ）
が結合したアミノ配列を有するものであるか、又は、３
残基以上のアルギニンが結合したアミノ配列において、
１個のアルギニンがシステイン（Ｃｙｓ）に置換された
アミノ酸配列を有するものであることを特徴とするペプ
チド。 - 【請求項２】 ペプチドＸは、３〜１０残基のアルギニ
ンが結合したアミノ配列を有するものであるか、又は、
３〜１０残基のアルギニンが結合したアミノ配列におい
て、１個のアルギニンがシステインに置換されたアミノ
酸配列を有するものである請求項１記載のペプチド。 - 【請求項３】 ペプチドＸは、Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ
のアミノ酸配列を有するものであるか、又は、配列表の
配列番号２〜１１に示されたアミノ酸配列のうちいずれ
か１つのアミノ配列を有するものである請求項１又は２
記載のペプチド。 - 【請求項４】 請求項１、２又は３記載のペプチドを使
用することを特徴とするＣ型肝炎抗体検出用試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11148275A JP2000336099A (ja) | 1999-05-27 | 1999-05-27 | ペプチド及びｃ型肝炎抗体検出用試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11148275A JP2000336099A (ja) | 1999-05-27 | 1999-05-27 | ペプチド及びｃ型肝炎抗体検出用試薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000336099A true JP2000336099A (ja) | 2000-12-05 |
Family
ID=15449135
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11148275A Pending JP2000336099A (ja) | 1999-05-27 | 1999-05-27 | ペプチド及びｃ型肝炎抗体検出用試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2000336099A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008067199A3 (en) * | 2006-11-16 | 2008-09-18 | Kai Pharmaceuticals Inc | Polycationic calcium modulator peptides for the treatment of hyperparathyroidism and hypercalcemic disorders |
| US20090092548A1 (en) * | 2007-09-07 | 2009-04-09 | Katherine Ferrara | Methods And Compounds For Targeting Tissues |
| WO2011014707A3 (en) * | 2009-07-29 | 2011-07-07 | Kai Pharmaceuticals, Inc. | Therapeutic agents for reducing parathyroid hormone levels |
| US8969299B2 (en) | 2011-06-08 | 2015-03-03 | Kai Pharmaceuticals, Inc. | Therapeutic agents for regulating serum phosphorus |
| JP2020080784A (ja) * | 2018-11-29 | 2020-06-04 | シスメックス株式会社 | 融合ポリペプチド、融合ポリペプチドの製造方法、及び融合ポリペプチドをコードするｄｎａ |
-
1999
- 1999-05-27 JP JP11148275A patent/JP2000336099A/ja active Pending
Cited By (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101668421B (zh) * | 2006-11-16 | 2014-05-21 | 凯制药公司 | 用于治疗甲状旁腺功能亢进和高钙血症的聚阳离子钙调节肽 |
| WO2008067199A3 (en) * | 2006-11-16 | 2008-09-18 | Kai Pharmaceuticals Inc | Polycationic calcium modulator peptides for the treatment of hyperparathyroidism and hypercalcemic disorders |
| US8987200B2 (en) | 2006-11-16 | 2015-03-24 | Kai Pharmaceuticals, Inc. | Polycationic calcium modulator peptides for the treatment of hyperparathyroidism and hypercalcemic disorders |
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| US8506928B2 (en) * | 2007-09-07 | 2013-08-13 | The Regents Of The University Of California | Methods and compounds for targeting tissues |
| US9278995B2 (en) | 2009-07-29 | 2016-03-08 | Kai Pharmaceuticals, Inc. | Therapeutic agents for reducing parathyroid hormone levels |
| US8377880B2 (en) | 2009-07-29 | 2013-02-19 | Kai Pharmaceuticals, Inc. | Therapeutic agents for reducing parathyroid hormone levels |
| US8999932B2 (en) | 2009-07-29 | 2015-04-07 | Kai Pharmaceuticals, Inc. | Therapeutic agents for reducing parathyroid hormone levels |
| WO2011014707A3 (en) * | 2009-07-29 | 2011-07-07 | Kai Pharmaceuticals, Inc. | Therapeutic agents for reducing parathyroid hormone levels |
| US9567370B2 (en) | 2009-07-29 | 2017-02-14 | Kai Pharmaceuticals, Inc. | Therapeutic agents for reducing parathyroid hormone levels |
| US9701712B2 (en) | 2009-07-29 | 2017-07-11 | Kai Pharmaceuticals, Inc. | Therapeutic agents for reducing parathyroid hormone levels |
| EP3192520A1 (en) * | 2009-07-29 | 2017-07-19 | Kai Pharmaceuticals, Inc. | Therapeutic agents for reducing parathyroid hormone levels |
| US10280198B2 (en) | 2009-07-29 | 2019-05-07 | Kai Pharmaceuticals, Inc. | Therapeutic agents for reducing parathyroid hormone levels |
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| JP2020080784A (ja) * | 2018-11-29 | 2020-06-04 | シスメックス株式会社 | 融合ポリペプチド、融合ポリペプチドの製造方法、及び融合ポリペプチドをコードするｄｎａ |
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