JP2000342273A - β−フラクトフラノシダーゼ遺伝子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【課題】 β−フラクトフラノシダーゼ活性を有するポ
リペプチドの遺伝的情報を解明し、β−フラクトフラノ
シダーゼの大量生産により、食品分野、医薬品分野等で
注目されているフラクトフラノシル転移糖の効率的生産
を図ること。 【解決手段】 アルスロバクタースピーシーズ由来のβ
−フラクトフラノシダーゼ活性を有するタンパク質をコ
ードするβ−フラクトフラノシダーゼ遺伝子。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明はβ−フラクトフラノ
シダーゼ遺伝子に関するものである。β−フラクトフラ
ノシダーゼ（ＥＣ３．２．１．２６．）は蔗糖及びその
他のβ−フルクトフラノシドを加水分解してフルクトー
スを遊離する酵素である。本酵素は、基質からβ−フル
クトフラノシル基を水に転移して加水分解するほか、他
の糖質、アルコール、フェノールなど水酸基を有してい
る化合物へ転移する作用がある。この作用を利用して、
本酵素は、ラクトスクロースなどのフラクトシル転移糖
の合成に利用される。

【０００２】

【従来の技術】ラクトスクロース等のフラクトシル転移
糖は、ビフィズス菌増殖活性を有し、蔗糖に代わる新し
い甘味剤として、現在、食品分野や医薬品分野で注目さ
れている。

【０００３】フラクトシル転移糖の一種であるフラクト
フラノシル転移糖は、通常、蔗糖と澱粉糖や乳糖などを
原料として用い、これらにβ−フラクトフラノシダーゼ
を作用させて製造される。β−フラクトフラノシダーゼ
は、アルスロバクター等の微生物によって生産される
が、該微生物はいずれもβ−フラクトフラノシダーゼ産
生能が低い。そのため、フラクトフラノシル転移糖を大
規模に生産しようとすると、微生物を大量に培養しなけ
ればならないという問題がある。

【０００４】ところで、今日の遺伝子工学的手法の発達
により、アミノ酸配列が解明されていない酵素であって
も、これをコードする遺伝子を単離し、その塩基配列を
解明できれば、その酵素をコードする遺伝子を含む組換
えＤＮＡを作製し、これを微生物や動植物の細胞に導入
して得られる形質転換体を培養することにより、比較的
容易に大量の酵素が取得できるようになった。そこで、
β−フラクトフラノシダーゼをコードする遺伝子を突き
止め、その塩基配列を解明することが望まれている。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、β−
フラクトフラノシダーゼ活性を有するポリペプチドをコ
ードする遺伝子の構造を特定し、該酵素を用いたフラク
トフラノシル転移糖の大量生産システムを提供すること
にある。β−フラクトフラノシダーゼ活性を有するポリ
ペプチドをコードしている遺伝子を解読することができ
れば、大量の酵素が取得できる可能性は勿論のこと、遺
伝子工学的手法を用いて耐熱性や転移率を上昇させた変
異体酵素を開発することに有用であるものと考えられ
る。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、過去数年
にわたってフラクトシル転移糖の合成研究を続けてき
た。その過程で、アルスロバクター・スピーシーズ Ｋ
−１株が生産するβ−フラクトフラノシダーゼは、他の
β−フラクトフラノシダーゼとは基質特異性が異なり、
さらに受容体存在下では高い転移効率を示すことを明ら
かにしてきた。すなわち、アルスロバクター・スピーシ
ーズ Ｋ−１株は、培地にショ糖を添加しなくてもβ−
フラクトフラノシダーゼを菌体外に生産することがで
き、しかも高分子フルクタンを合成しないことから、扱
いが容易である。そこで、本発明者らは、このβ−フラ
クトフラノシダーゼをコードしている構造遺伝子に注目
し鋭意研究を重ねた結果、β−フラクトフラノシダーゼ
遺伝子の構造を解読するに到った。

【０００７】請求項１記載の本発明は、配列表の配列番
号１に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質をコード
するβ−フラクトフラノシダーゼ遺伝子である。

【０００８】

【発明の実施の形態】最初に、本発明に至るまでの概略
を述べる。本発明者らは、β−フラクトフラノシダーゼ
生産能を有するアルスロバクター属由来の細菌培養液か
ら得たβ−フラクトフラノシダーゼを高度に精製し、そ
のＮ末端のアミノ酸配列を決定した。さらに、このβ−
フラクトフラノシダーゼを酵素分解してペプチドフラグ
メントを調製し、それらのアミノ酸配列を決定した。

【０００９】次いで、それらのアミノ酸配列から確認で
きた塩基配列を基にしてプライマーを作成した。このプ
ライマーを用いてアルスロバクター属菌株から抽出した
染色体ＤＮＡをテンプレートとして行ったポリメラ−ゼ
連鎖反応法（ＰＣＲ）により、２２１ｂｐの明瞭なバン
ドを得た。

【００１０】得られたＰＣＲ産物をＴＡクローニングし
た後、ＤＮＡシーケンサーで塩基配列を解読した。得ら
れた塩基配列をアミノ酸に翻訳し、ホモロジー検索を行
ったところ、蔗糖に作用する酵素類と高い相同性が認め
られたことから、このＤＮＡがβ−フラクトフラノシダ
ーゼ遺伝子の一部であるものと考えられた。

【００１１】そこで、このＰＣＲ産物をプローブとして
β−フラクトフラノシダーゼ遺伝子のクローニングを実
施した。まず、アルスロバクター属の細菌から抽出した
染色体ＤＮＡを、制限酵素分解後、サザンハイブリダイ
ゼーションを行った。その結果、約９ＫｂｐのＤＮＡ断
片に目的とするβ−フラクトフラノシダーゼ遺伝子の存
在を確認した。このＤＮＡ断片をゲルから切り出し精製
した後、コスミドベクターにin vitroパッケージング
し、部分ＤＮＡライブラリーを構築した。

【００１２】このライブラリーの中から、β−フラクト
フラノシダーゼ遺伝子を有する大腸菌をコロニーハイブ
リダイゼーションによりスクリーニングし、陽性クロー
ンから、総塩基数１９１７からなる遺伝子を抽出した。
すなわち、この遺伝子が、本発明のβ−フラクトフラノ
シダーゼ遺伝子である。

【００１３】以下に、本発明を詳しく説明する。前記し
たように、本発明のβ−フラクトフラノシダーゼ遺伝子
は、β−フラクトフラノシダーゼ生産能を有するアルス
ロバクター属微生物に由来するものである。このような
β−フラクトフラノシダーゼ生産能を有するアルスロバ
クター属微生物としては、アルスロバクター・スピーシ
ーズ Ｋ−１株とその変異株などがある。すなわち、本
菌を自然に、もしくは人工的手段によって変異させて得
られるものであっても、上記能力を有する菌株はすべて
包含される。

【００１４】アルスロバクター・スピーシーズ Ｋ−１
株は、大阪府の土壌から分離されたもので、通商産業省
工業技術院生命工学工業技術研究所に寄託されている。
その受託番号は、ＦＥＲＭ ＢＰ−３１９２である。本
菌の菌学的性質は、特許第２７８１４１２号公報に記載
されている。

【００１５】β−フラクトフラノシダーゼは上記の微生
物菌体から得ることができる。具体的には、上記の菌株
を栄養培地で培養後、遠心分離等にて菌体を除去し、培
養液を回収する。続いて、塩析や種々のカラムクロマト
グラフィー等の精製手段を用いることによって、高度に
精製したβ−フラクトフラノシダーゼを得ることができ
る。

【００１６】次に、精製したβ−フラクトフラノシダー
ゼのＮ末端のアミノ酸配列を、アプライト・バイオシス
テム製気相プロテイン・シーケンサ『476A』を用いて決
定した。決定したアミノ酸配列は、９個のアミノ酸から
なり、配列表の配列番号２に示す通りである。さらに、
このβ−フラクトフラノシダーゼを酵素分解してペプチ
ドフラグメントを調製し、それらのアミノ酸配列を決定
した（配列表の配列番号３から５）。

【００１７】解読できたアミノ酸配列の情報を基にプラ
イマー（配列表の配列番号６および７参照）を作成し、
このプライマーを用いて、アルスロバクター属菌株から
抽出した染色体ＤＮＡをテンプレートとしてＰＣＲ反応
を行った。その結果、２２１ｂｐのＤＮＡ増幅産物が得
られた。このＤＮＡを精製し、ＴＡクローニングした
後、ＤＮＡシーケンサーで塩基配列を解読した。決定し
た塩基配列は配列表の配列番号８に示す通りである。

【００１８】得られた塩基配列をアミノ酸に翻訳し、ホ
モロジー検索を行ったところ、アセトバクター属由来の
レバンスクラ−ゼ等の蔗糖などのβ―フラクトフラノシ
ル基に作用する酵素と高い相同性が認められたことか
ら、このＤＮＡがβ−フラクトフラノシダーゼ遺伝子の
一部であるものと考えた。

【００１９】そこで、このＰＣＲ産物をプローブとして
β−フラクトフラノシダーゼの全長遺伝子のクローニン
グを実施した。まず、アルスロバクター属菌株から抽出
した染色体ＤＮＡを制限酵素分解後、サザンハイブリダ
イゼーションを行った。その結果、約９ＫｂｐのＤＮＡ
断片に、目的とするβ−フラクトフラノシダーゼ遺伝子
の存在を確認した。

【００２０】このＤＮＡ断片をゲルから切り出して精製
した後、コスミドベクターにin vitroパッケージング
し、部分ＤＮＡライブラリーを構築した。このライブラ
リーの中から、β−フラクトフラノシダーゼ遺伝子を有
する大腸菌をコロニーハイブリダイゼーションによりス
クリーニングし、陽性クローンを取得した。常法により
β−フラクトフラノシダーゼ遺伝子をサブクローニング
した後、β−フラクトフラノシダーゼ遺伝子の塩基配列
を決定した。

【００２１】本発明のβ−フラクトフラノシダーゼ遺伝
子は、配列表の配列番号１記載の塩基配列を有する。本
発明に係るβ−フラクトフラノシダーゼは新規なアミノ
酸配列を有する酵素であり、これと６５％以上の相同性
が認められる蛋白質は存在していなかった。このことか
ら、本発明β−フラクトフラノシダーゼ遺伝子は、現在
までに解明されていない、新規な塩基配列を有する遺伝
子であることが明らかである。

【００２２】β−フラクトフラノシダーゼの発現は、上
述の形質転換体である大腸菌を培養し、該大腸菌及び培
養上清の酵素活性を測定することにより確認できる。ま
た、この形質転換体を栄養培地で培養し、得られた菌体
を破砕したのち、固液分離して得られる上清を常法によ
って精製することにより、β−フラクトフラノシダーゼ
を得ることができる。

【００２３】アルスロバクター等の微生物を利用したβ
−フラクトフラノシダーゼ生産は、該微生物の生産能に
左右され、酵素を大量生産するには、大量の微生物を培
養する必要があった。しかし、本発明において解明され
た該酵素の遺伝子を発現させることにより、β−フラク
トフラノシダーゼを容易に大量生産することが可能であ
る。得られるβ−フラクトフラノシダーゼは、アルスロ
バクター・スピーシーズＫ−１株の産生する該酵素の特
質をそのまま受け継いでおり、通常のβ−フラクトフラ
ノシダーゼと比較して基質特異性が異なり、さらに受容
体存在下では高い転移効率を示す。よって、本発明の遺
伝子により生産されるβ−フラクトフラノシダーゼは、
食品分野や医薬品分野で注目されているフラクトシル転
移糖の効率的生産に有用である。また、本発明の遺伝子
について、遺伝子工学的手法を用いることにより耐熱性
や転移率を上昇させた変異体酵素の開発にも有用である
ものと期待される。

【００２４】

【実施例】次に、本発明を実施例により詳しく説明する
が、本発明はこれらにより限定されるものではない。 実施例１ 可溶性澱粉４．０％（ｗ／ｖ）、ポリペプトン０．８％
（ｗ／ｖ）、酵母エキス１．２％（ｗ／ｖ）、燐酸アン
モニウム０．４％（ｗ／ｖ）、硫酸マグネシウム・７水
塩０．１％（ｗ／ｖ）及び水からなる液体培地（ｐＨ
７．０）１００ｍ１を５００ｍ１容坂口フラスコに入
れ、１２０℃で１５分間オートクレーブして滅菌し、冷
却した後、アルスロバクター・スピーシーズ Ｋ−１株
（ＦＥＲＭＢＰ−３１９２）を接種し、３７℃で２日間
振とう培養して培養物を得た。

【００２５】培養物を遠心分離した上清に硫酸アンモニ
ウムを６０％飽和になるまで加え、４℃で一夜静置した
後、遠心分離してβ−フラクトフラノシダーゼを含む沈
澱を採取した。この沈殿を５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ
７．０）に溶解し、新鮮な同一緩衝液に対して一昼夜透
析した後、遠心分離して上清を採取した。

【００２６】この上清を、予め２０ｍＭリン酸暖衝液
（ｐＨ７．０）により平衡化しておいた東ソー製イオン
交換クロマトグラフィー用ゲル『ＤＥＡＥ−トヨパール
６５０Ｍ』１００ｍ１のカラムに負荷し、塩化ナトリウ
ムを０Ｍから０．５Ｍまで直線的に上昇させ、β−フラ
クトフラノシダーゼ活性を有する画分を回収した。

【００２７】この画分を２Ｍ硫酸アンモニウムを含む２
０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に対して透析した
後、遠心分離して上清を回収した。この上清を予め１Ｍ
硫酸アンモニウムを含む２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ
７．０）により平衡化しておいた東ソー製疎水性カラム
クロマトグラフィー用ゲル『ブチルトヨパール６５０
Ｍ』１００ｍ１のカラムに負荷し、１Ｍから０Ｍに直線
的に下降する硫酸アンモニウムの濃度勾配下にて２０ｍ
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）を通液し、β−フラクト
フラノシダーゼ活性を有する画分を回収した。

【００２８】その後、この画分を２０ｍＭリン酸緩衝液
（ｐＨ７．０）に対して透析し、予め２０ｍＭリン酸緩
衝液（ｐＨ７．０）により平衡化しておいたファルマシ
ア製ゲル濾過カラムクロマトグラフィー用ゲル『セファ
デックス Ｇ−７５』カラムに負荷し、β−フラクトフ
ラノシダーゼ活性を有する画分を回収し、これを精製酵
素とした。この精製β−フラクトフラノシダーゼをＳＤ
Ｓ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動したところ、単一
バンドが観察された。

【００２９】この精製β−フラクトフラノシダーゼを１
０％のＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動を行っ
た後、ゲル中の蛋白質をミリポア製のＰＶＤＦメンブラ
ン『イモビロン−Ｐ』に転写させた。ＰＶＤＦメンブラ
ンに転写されたβ−フラクトフラノシダーゼのバンドを
切り取りアプライト・バイオシステム製気相プロテイン
・シーケンサ『４７６Ａ』を用い、常法にしたがって分
析したところ、Ｎ末端に配列表の配列番号２に示すアミ
ノ酸配列を有していた。

【００３０】さらに、精製β−フラクトフラノシダーゼ
約２．５μｇを１０％のＳＤＳ−ポリアクリルアミトゲ
ル電気泳動を行い染色した後、β−フラクトフラノシダ
ーゼのバンドを切り取り、１５％のＳＤＳ−ポリアクリ
ルアミトゲル電気泳動のウェルに挿入した。その上に、
蛋白質に対し１／１０００（ｗ／ｗ）量のスタフィロコ
ッカス・オーレウス由来のＶ８プロテアーゼを重層し、
電気泳動を行った。β−フラクトフラノシダーゼとＶ８
プロテアーゼのバンドが濃縮ゲル中で濃縮されたのを確
認した後、電気泳動を一時停止させ、室温で１時間プロ
テアーゼ処理を行った。

【００３１】その後、再び電気泳動を行い、３種類のβ
−フラクトフラノシダーゼのペプチド断片を分離した。
上記と同様にアミノ酸配列分析をしたところ、ペプチド
断片は配列表の配列番号３から５に示すアミノ酸配列を
有していた。解読できたＮ末端アミノ酸配列の中から、
コドンの縮重の少ない領域を選び、センスプライマー
（配列表の配列番号６）を、内部のアミノ酸配列の中か
らコドンの縮重の少ない領域を選びアンチセンスプライ
マー（配列表の配列番号７）を作成した。

【００３２】一方、アルスロバクター・スピーシーズ
Ｋ−１株（ＦＥＲＭ ＢＰ−３１９２）からの染色体Ｄ
ＮＡの抽出は下記のようにして行った。まず、５００ｍ
１容坂口フラスコに、可溶性澱粉４．０％（ｗ／ｖ）、
ポリペプトン０．８％（ｗ／ｖ）、酵母エキス１．２％
（ｗ／ｖ）、燐酸アンモニウム０．４％（ｗ／ｖ）、硫
酸マグネシウム・７水塩０．１％（ｗ／ｖ）及び水から
なる液体培地（ｐＨ７．０）を１００ｍ１ずつとり、１
２０℃で２０分間オートクレーブして滅菌し、冷却した
後、アルスロバクター・スピーシーズ Ｋ−１株を接種
し、３７℃で４８時間回転振とう培養した。

【００３３】培養物を遠心分離して菌体を分離し、−８
０℃で凍結させた後、冷却したＳＥＴ緩衝液（ｐＨ８．
０）を添加し、十分撹拌した。この溶液にリゾチームを
０．１％（ｗ／ｖ）、リボヌクレアーゼを０．０５％
（ｗ／ｖ）加え、３７℃で反応させた。完全に溶菌した
後、１０％ＳＤＳを０．１ｍｌ添加し、さらに終濃度が
１００μｇ／ｍｌになるようにプロテイナーゼＫ（シグ
マ社製）を加え、５０℃で一晩反応させた。反応終了
後、反応液にクロロホルム／イソアミルアルコール混液
を加え、染色体ＤＮＡを抽出した。抽出物に冷却したエ
タノールを加え、界面に生じたＤＮＡをガラス棒でかき
取り、ＴＥ緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解させた。

【００３４】上記で作成したプライマーを用い、アルス
ロバクター・スピーシーズ Ｋ−１株の染色体ＤＮＡを
テンプレートとしパーキンエルマー製ＤＮＡサーマルサ
イクラーによりＰＣＲ反応（９４℃で１分間、５５℃で
１分間、７２℃で２分間を２５サイクル）を行い、β−
フラクトフラノシダーゼ遺伝子断片を増幅させた。その
結果、アガロースゲル電気泳動で２２１ｂｐのＤＮＡバ
ンドが確認された。このＤＮＡをゲルから切り出した
後、ダイアヤトロン製のDNA PREP KITを用いて精製し
た。

【００３５】このＤＮＡは、ノボジェン製のpT7Blue T-
ベクターとライゲーションさせ、大腸菌ＪＭ１０９に形
質転換させた。この大腸菌からプラスミドを精製し、ア
プライト・バイオシステム製ＤＮＡシーケンシング・シ
ステム『３７７』を用いて塩基配列を決定しところ、配
列表の配列番号８に記載の塩基配列が得られた。このＤ
ＮＡをアミノ酸に翻訳し、ホモロジー検索を行ったとこ
ろ、アセトバクター属由来のレバンスクラ−ゼ等の蔗糖
などのβ−フラクトフラノシル基に作用する酵素と高い
相同性が認められたことから、このＤＮＡがβ−フラク
トフラノシダーゼ遺伝子の一部であるものと考えた。そ
こで、このＰＣＲ産物をプローブとして用い、β−フラ
クトフラノシダーゼ遺伝子のクローニングを実施した。

【００３６】まず、アルスロバクター属の細菌から抽出
した染色体ＤＮＡを、各種制限酵素で分解後、サザンハ
イブリダイゼーションを行った。その結果、染色体ＤＮ
ＡをBamHＩで切断した約９Ｋｂｐの断片中に目的とする
β−フラクトフラノシダーゼ遺伝子が存在していること
を確認した。この付近のＤＮＡ断片をゲルから切り出し
精製した後、日本ジーン製コスミドベクターCharomid 9
-36 のBamHＩサイトに挿入した。

【００３７】このベクターをストラタジーン製ギガパッ
クIII ゴールドin vitroパッケージングキットを用いパ
ッケージングを行い、部分ＤＮＡライブラリーを構築し
た。次に、パッケージングした組換えファージを大腸菌
ＪＭ１０９に感染させ、β−フラクトフラノシダーゼ遺
伝子を有する大腸菌をコロニーハイブリダイゼーション
によりスクリーニングした。

【００３８】一次スクリーニングによって同定された陽
性クローンは二次スクリーニング、三次スクリーニング
を行うことで完全に分離させた。得られた陽性クローン
中のβ−フラクトフラノシダーゼ遺伝子は常法にしたが
ってpUC119へサブクローニングした後、β−フラクトフ
ラノシダーゼ遺伝子の塩基配列を決定した。

【００３９】本発明のβ−フラクトフラノシダーゼ遺伝
子は、配列表の配列番号１記載の塩基配列を有する。本
発明に係るβ−フラクトフラノシダーゼは新規なアミノ
酸配列を有するポリペプチドであり、これと６５％以上
の相同性が認められる蛋白質は存在していなかった。

【００４０】この配列表の配列番号１に示したアミノ酸
配列からなるβ−フラクトフラノシダーゼ遺伝子を、先
に判明しているアミノ酸配列と比較したところ、β−フ
ラクトフラノシダーゼのＮ末端のアミノ酸配列（配列表
の配列番号２）は配列表の配列番号１に示したアミノ酸
配列中の１番から９番目の配列と一致した。さらに、β
−フラクトフラノシダーゼ由来のペプチドフラグメント
の配列（配列表の配列番号３、４、５）は、それぞれ配
列表の配列番号１に示したアミノ酸配列中の２７８番か
ら２８７番目、３２０番から３２８番目、７０番から７
９番目の配列と一致した。

【００４１】したがって、配列表の配列番号１に示した
アミノ酸配列中の−３６番から−１番目の配列は、分泌
型酵素において一般的に認められるシグナルペプチド領
域であると推定される。以上の結果より、本例の酵素は
配列表の配列番号１に示すアミノ酸配列を有するもので
あり、配列表の配列番号１に示す塩基配列のＤＮＡによ
りコードされていることが確認された。

【００４２】

【発明の効果】本発明によれば、β−フラクトフラノシ
ダーゼの遺伝子が提供される。本発明の遺伝子を発現さ
せれば、微生物の培養による場合と比較して、微生物の
生産性等に左右されることなく、β−フラクトフラノシ
ダーゼの大量生産を容易に行うことができる。このβ−
フラクトフラノシダーゼは、通常のβ−フラクトフラノ
シダーゼと比較して基質特異性が異なり、さらに受容体
存在下で高い転移効率を示す。よって、本発明の遺伝子
を用いて生産されるβ−フラクトフラノシダーゼは、食
品分野や医薬品分野で注目されているフラクトシル転移
糖の効率的生産に有用である。また、本発明のβ−フラ
クトフラノシダーゼ遺伝子は、遺伝子工学的手法による
耐熱性や転移率を上昇させた変異体酵素の開発にも有用
である。

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> 社団法人農林水産先端技術産業振興センター <120> β−フラクトシダーゼ遺伝子 <130> P111045K <160> 8 <210> 1 <211> 1917 <212> DNA <213> Arthrobacter sp. <400> 1 cggcgaactc ttcctcgttc cacggctcgt cgagttagca gggttgtcaa gttccgcgag 60 cgatgcagta gccgcggcga ccatgtcccc cgaaatacct acaaacctat gcgttgtctt 120 atgagagcat gtagaggtgc aaatcgattt gcataccttt cccacatgaa ggagagcacg 180 atg act cac tcg acg aga ggg cgc gtt cgt cgc gtc ctg gcc gga ggg 228 Met Thr His Ser Thr Arg Gly Arg Val Arg Arg Val Leu Ala Gly Gly -35 -30 -25 ctg gcg acc agt acc ctt gcg gcc gcc gtc ctg atc gcc gga gcc gcc 276 Leu Ala Thr Ser Thr Leu Ala Ala Ala Val Leu Ile Ala Gly Ala Ala -20 -15 -10 -5 cct gcg act gct cag tca ggg ctc cag gac ggc ccg gag ccg aca att 324 Pro Ala Thr Ala Gln Ser Gly Leu Gln Asp Gly Pro Glu Pro Thr Ile -1 1 5 10 cac act cag cag gcg tac gcc ccc gag gat gat ttc acc gcc aag tgg 372 His Thr Gln Gln Ala Tyr Ala Pro Glu Asp Asp Phe Thr Ala Lys Trp 15 20 25 aca cgc gcc gac gcc cgc cag ttg cag cgc atg tcc gac ccc acc gcg 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ctg ggc ggc tgg gcg gat atc ccg gcg aac aag cac ctg ttc aca 1764 Gly Leu Gly Gly Trp Ala Asp Ile Pro Ala Asn Lys His Leu Phe Thr 480 485 490 aac ggc aag ttc ggc gtg gcg gtc tcc gac gag gcg gcg cag aag atc 1812 Asn Gly Lys Phe Gly Val Ala Val Ser Asp Glu Ala Ala Gln Lys Ile 495 500 505 cgc aag atc ctc ggc tcg aag ttc gac gac tac ctc gac ggc gag ccc 1860 Arg Lys Ile Leu Gly Ser Lys Phe Asp Asp Tyr Leu Asp Gly Lys Pro 510 515 520 gtc tca gcc acg gtg cga gcc ctc atc gag aag ctg ctg gca caa tac 1908 Val Ser Ala Thr Val Arg Ala Leu Ile Glu Lys Leu Leu Ala Gln Tyr 525 530 535 540 ggc ggc tga 1917 Gly Gly <210> 2 <211> 9 <212> PRT <213> Arthrobacter sp. <400> 2 Gln Ser Gly Leu Gln Asp Gly Pro Glu 1 5 <210> 3 <211> 10 <212> PRT <213> Arthrobacter sp. <400> 3 Glu Ala Asp Leu Gly Tyr Arg Gln Gly Asp 1 5 10 <210> 4 <211> 9 <212> PRT <213> Arthrobacter sp. <400> 4 Glu Trp Glu Phe Leu Pro Xaa Ile Leu 1 5 <210> 5 <211> 10 <212> PRT <213> Arthrobacter sp. <400> 5 Glu Gln Val Trp Val Trp Asp Thr Trp 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───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 原 耕三 神奈川県横浜市鶴見区大黒町13−46 株式 会社横浜国際バイオ研究所内 (72)発明者 殿塚 隆史 東京都国立市北３−31 国立住宅313 (72)発明者 坂野 好幸 東京都国立市富士見台４−41−１−625 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA03 AA05 AA11 BA12 CA03 DA06 EA04 EA06 GA11 GA19 HA03 HA13 HA14 4B050 CC01 CC03 DD02 EE01 EE10 LL01 LL02 LL03 LL05

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配
   列からなるタンパク質をコードするβ−フラクトフラノ
   シダーゼ遺伝子。