JP2000346848A - グルコースの測定方法及び測定装置 - Google Patents
グルコースの測定方法及び測定装置Info
- Publication number
- JP2000346848A JP2000346848A JP11157654A JP15765499A JP2000346848A JP 2000346848 A JP2000346848 A JP 2000346848A JP 11157654 A JP11157654 A JP 11157654A JP 15765499 A JP15765499 A JP 15765499A JP 2000346848 A JP2000346848 A JP 2000346848A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hemoglobin
- column
- concentration
- sample
- unstable
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】グルコースと安定型ヘモグロビンＡ１ｃの濃度
を、同一血液試料について同時かつ高精度で測定する方
法及び装置を提供する。 【解決手段】試料中の全ヘモグロビン含量及び不安定型
ヘモグロビンＡ１ｃ含量を測定し、全ヘモグロビン含量
に対する不安定型ヘモグロビンＡ１ｃの割合から当該試
料中のグルコース濃度を算出する、グルコースの測定方
法及びそのための装置。
を、同一血液試料について同時かつ高精度で測定する方
法及び装置を提供する。 【解決手段】試料中の全ヘモグロビン含量及び不安定型
ヘモグロビンＡ１ｃ含量を測定し、全ヘモグロビン含量
に対する不安定型ヘモグロビンＡ１ｃの割合から当該試
料中のグルコース濃度を算出する、グルコースの測定方
法及びそのための装置。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、血液試料中のグル
コース濃度を測定する方法及びグルコース濃度を測定す
る装置に関するものであり、他の血中物質、特に安定型
ヘモグロビンＡ１ｃの測定と同時にグルコースを測定す
るのに好適な測定方法及び測定装置に関するものであ
る。
コース濃度を測定する方法及びグルコース濃度を測定す
る装置に関するものであり、他の血中物質、特に安定型
ヘモグロビンＡ１ｃの測定と同時にグルコースを測定す
るのに好適な測定方法及び測定装置に関するものであ
る。
【０００２】
【従来の技術】血液試料中のグルコース濃度は、種々の
疾患に関連して変動するため、臨床診断の分野で頻繁に
利用されている。なかでも、糖尿病の早期発見、治療経
過観察において、重要な指標の一つとして広く利用され
ている。
疾患に関連して変動するため、臨床診断の分野で頻繁に
利用されている。なかでも、糖尿病の早期発見、治療経
過観察において、重要な指標の一つとして広く利用され
ている。
【０００３】従来、血液試料中のグルコース濃度は、グ
ルコースとグルコースオキシダーゼとの反応により生成
した過酸化水素を、ペルオキシダーゼ等の酵素とその酵
素基質を用いて比色定量する方法や、グルコースとヘキ
ソキナーゼの反応によりＡＴＰ存在下で生成するグルコ
ース−６−リン酸を、グルコース−６−リン酸デヒドロ
ゲナーゼと反応させることで生成するＮＡＤ（Ｐ）Ｈを
比色定量する方法により、測定されている。また、この
ような生化学的測定以外にも、グルコースオキシダーゼ
固定化半透膜を用い、該膜がグルコース存在下で生成す
る過酸化水素又は酸素を電気化学的に測定する方法も利
用されている。
ルコースとグルコースオキシダーゼとの反応により生成
した過酸化水素を、ペルオキシダーゼ等の酵素とその酵
素基質を用いて比色定量する方法や、グルコースとヘキ
ソキナーゼの反応によりＡＴＰ存在下で生成するグルコ
ース−６−リン酸を、グルコース−６−リン酸デヒドロ
ゲナーゼと反応させることで生成するＮＡＤ（Ｐ）Ｈを
比色定量する方法により、測定されている。また、この
ような生化学的測定以外にも、グルコースオキシダーゼ
固定化半透膜を用い、該膜がグルコース存在下で生成す
る過酸化水素又は酸素を電気化学的に測定する方法も利
用されている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】上記したように、血液
試料中のグルコース濃度の測定は、臨床的に重要な意義
を有しているが、グルコース濃度を測定するためには、
酵素や色素等の試薬を種々使用し、更には時間を費やし
て複雑な反応を行うか、又は、専用装置を用いて、電気
化学的に測定するしかなかった。
試料中のグルコース濃度の測定は、臨床的に重要な意義
を有しているが、グルコース濃度を測定するためには、
酵素や色素等の試薬を種々使用し、更には時間を費やし
て複雑な反応を行うか、又は、専用装置を用いて、電気
化学的に測定するしかなかった。
【０００５】また、例えば糖尿病は、患者数も多く合併
症による医療費負担の増加のため、早期の発見と治療が
重要である。現在のところ、糖尿病の早期発見・経過観
察を目的とするグルコース濃度の測定は必須であるが、
その際に、併せて安定型ヘモグロビンＡ１ｃの測定を同
時に行えれば、さらに有効な臨床的知見を得ることが可
能になる（Ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒ
ｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３２９，９７７−９
８６（１９９３年））。ヘモグロビンＡ１ｃは、赤血球
中のヘモグロビンにグルコースが非酵素的に結合して生
成するが、その反応過程では、非常に短時間で可逆的に
生成する不安定型ヘモグロビンＡ１ｃを経て、非可逆的
に安定型ヘモグロビンＡ１ｃが生成するため、過去１〜
３月間の血中グルコース濃度が、安定型ヘモグロビン濃
度に平均的に反映されるからである。
症による医療費負担の増加のため、早期の発見と治療が
重要である。現在のところ、糖尿病の早期発見・経過観
察を目的とするグルコース濃度の測定は必須であるが、
その際に、併せて安定型ヘモグロビンＡ１ｃの測定を同
時に行えれば、さらに有効な臨床的知見を得ることが可
能になる（Ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒ
ｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３２９，９７７−９
８６（１９９３年））。ヘモグロビンＡ１ｃは、赤血球
中のヘモグロビンにグルコースが非酵素的に結合して生
成するが、その反応過程では、非常に短時間で可逆的に
生成する不安定型ヘモグロビンＡ１ｃを経て、非可逆的
に安定型ヘモグロビンＡ１ｃが生成するため、過去１〜
３月間の血中グルコース濃度が、安定型ヘモグロビン濃
度に平均的に反映されるからである。
【０００６】しかしながら、従来は、グルコースと安定
型ヘモグロビンＡ１ｃの濃度を、同一血液試料について
同時かつ高精度で測定する方法がなかったため、グルコ
ース濃度は生化学測定又は電気化学的な測定方法によ
り、そして安定型ヘモグロビンＡ１ｃ濃度は液体クロマ
トグラフィーにより測定するのが一般的であった。この
ため、比較的多量の血液試料が必要であったばかりでな
く、血液試料を異なる装置毎に分注する手間や結果を得
るまで時間がかかる、という課題があった。
型ヘモグロビンＡ１ｃの濃度を、同一血液試料について
同時かつ高精度で測定する方法がなかったため、グルコ
ース濃度は生化学測定又は電気化学的な測定方法によ
り、そして安定型ヘモグロビンＡ１ｃ濃度は液体クロマ
トグラフィーにより測定するのが一般的であった。この
ため、比較的多量の血液試料が必要であったばかりでな
く、血液試料を異なる装置毎に分注する手間や結果を得
るまで時間がかかる、という課題があった。
【０００７】本発明は、上記課題に鑑み、１台の装置に
より、グルコースと安定型ヘモグロビンＡ１ｃの濃度
を、同一血液試料について同時かつ高精度で測定し得る
方法及び装置を提供するものである。
より、グルコースと安定型ヘモグロビンＡ１ｃの濃度
を、同一血液試料について同時かつ高精度で測定し得る
方法及び装置を提供するものである。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、血液試料中
の全ヘモグロビン含量、即ち不安定型ヘモグロビンＡ１
ｃ含量、安定型ヘモグロビンＡ１ｃ含量そしてその他の
ヘモグロビン含量の和、に対する不安定型ヘモグロビン
Ａ１ｃの割合と、当該試料中のグルコース濃度が一次式
で表される相関関係を有するという、従来知られていな
かった新たな知見を得、それに基づき、完成されたもの
である。
の全ヘモグロビン含量、即ち不安定型ヘモグロビンＡ１
ｃ含量、安定型ヘモグロビンＡ１ｃ含量そしてその他の
ヘモグロビン含量の和、に対する不安定型ヘモグロビン
Ａ１ｃの割合と、当該試料中のグルコース濃度が一次式
で表される相関関係を有するという、従来知られていな
かった新たな知見を得、それに基づき、完成されたもの
である。
【０００９】即ち請求項１に記載した発明は、グルコー
スの測定方法に関するものであり、試料中の全ヘモグロ
ビン含量及び不安定型ヘモグロビンＡ１ｃ含量を測定
し、全ヘモグロビン含量に対する不安定型ヘモグロビン
Ａ１ｃの割合から当該試料中のグルコース濃度を算出す
るものである。また請求項２に記載した発明は、請求項
１に記載した発明に係り、試料中の全ヘモグロビン含量
及び不安定型ヘモグロビンＡ１ｃ含量の測定を、液体ク
ロマトグラフィーにより行うことを特徴とする。
スの測定方法に関するものであり、試料中の全ヘモグロ
ビン含量及び不安定型ヘモグロビンＡ１ｃ含量を測定
し、全ヘモグロビン含量に対する不安定型ヘモグロビン
Ａ１ｃの割合から当該試料中のグルコース濃度を算出す
るものである。また請求項２に記載した発明は、請求項
１に記載した発明に係り、試料中の全ヘモグロビン含量
及び不安定型ヘモグロビンＡ１ｃ含量の測定を、液体ク
ロマトグラフィーにより行うことを特徴とする。
【００１０】また請求項３に記載した発明は、グルコー
スの測定装置に関するものであり、試料中の全ヘモグロ
ビン含量及び不安定型ヘモグロビンＡ１ｃ含量を測定す
るための測定手段と、全ヘモグロビン含量に対する不安
定型ヘモグロビンＡ１ｃの割合を算出し、そして算出結
果から当該試料中のグルコース濃度を算出するための演
算手段とを有するものである。そして請求項４に記載し
た発明は、請求項３に記載した発明に係り、測定手段が
液体クロマトグラフィーにより試料中の全ヘモグロビン
含量及び不安定型ヘモグロビンＡ１ｃ含量を測定する手
段であることを特徴とする。以下、本発明を詳細に説明
する。
スの測定装置に関するものであり、試料中の全ヘモグロ
ビン含量及び不安定型ヘモグロビンＡ１ｃ含量を測定す
るための測定手段と、全ヘモグロビン含量に対する不安
定型ヘモグロビンＡ１ｃの割合を算出し、そして算出結
果から当該試料中のグルコース濃度を算出するための演
算手段とを有するものである。そして請求項４に記載し
た発明は、請求項３に記載した発明に係り、測定手段が
液体クロマトグラフィーにより試料中の全ヘモグロビン
含量及び不安定型ヘモグロビンＡ１ｃ含量を測定する手
段であることを特徴とする。以下、本発明を詳細に説明
する。
【００１１】本発明における試料は、必要に応じて、例
えば蒸留水や、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００等の界面活性剤
を含有する溶血試薬等の希釈液で希釈された血液であ
る。本発明では、まず、試料を適当な測定に供し、試料
中の全ヘモグロビン含量と不安定型ヘモグロビンＡ１ｃ
含量を測定する。全ヘモグロビン含量と不安定型Ａ１ｃ
量の測定は、例えば液体クロマトグラフィーにより測定
できるが、より短時間で操作を終了でき、しかも不安定
型ヘモグロビンＡ１ｃを他のヘモグロビンと十分に分離
して測定し得る、高速液体クロマトグラフィーにより測
定することが好ましい。不安定型ヘモグロビンＡ１ｃ
を、他のヘモグロビンと十分に分離して含量を測定する
ことにより、算出されるグルコース濃度の正確性を高め
ることができる。
えば蒸留水や、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００等の界面活性剤
を含有する溶血試薬等の希釈液で希釈された血液であ
る。本発明では、まず、試料を適当な測定に供し、試料
中の全ヘモグロビン含量と不安定型ヘモグロビンＡ１ｃ
含量を測定する。全ヘモグロビン含量と不安定型Ａ１ｃ
量の測定は、例えば液体クロマトグラフィーにより測定
できるが、より短時間で操作を終了でき、しかも不安定
型ヘモグロビンＡ１ｃを他のヘモグロビンと十分に分離
して測定し得る、高速液体クロマトグラフィーにより測
定することが好ましい。不安定型ヘモグロビンＡ１ｃ
を、他のヘモグロビンと十分に分離して含量を測定する
ことにより、算出されるグルコース濃度の正確性を高め
ることができる。
【００１２】液体クロマトグラフィーに用いる分析カラ
ムや、分析液等に関する分離条件は、不安定型ヘモグロ
ビンＡ１ｃを他のヘモグロビンから分離し得れば特に制
限されないが、陽イオン交換基を有する充填剤を充填し
た分析カラムを用いるイオン交換クロマトグラフィー
は、特に好適な例である。そして、カラムにより分離さ
れた不安定型ヘモグロビンＡ１ｃ及びその他のヘモグロ
ビンを検出するための検出器は、ヘモグロビンの吸収極
大波長である４１５ｎｍ付近の吸収を連続的に測定でき
る、フローセルタイプの可視検出器を用いることが好ま
しい。
ムや、分析液等に関する分離条件は、不安定型ヘモグロ
ビンＡ１ｃを他のヘモグロビンから分離し得れば特に制
限されないが、陽イオン交換基を有する充填剤を充填し
た分析カラムを用いるイオン交換クロマトグラフィー
は、特に好適な例である。そして、カラムにより分離さ
れた不安定型ヘモグロビンＡ１ｃ及びその他のヘモグロ
ビンを検出するための検出器は、ヘモグロビンの吸収極
大波長である４１５ｎｍ付近の吸収を連続的に測定でき
る、フローセルタイプの可視検出器を用いることが好ま
しい。
【００１３】液体クロマトグラフィーに試料を供して得
られるクロマトグラムから、不安定型ヘモグロビンＡ１
ｃに由来するピークとそれ以外のヘモグロビンに由来す
るピークを同定後、不安定型ヘモグロビンＡ１ｃ由来の
ピーク面積をＬＡＲＥＡ、それ以外のヘモグロビン由来
のピーク面積をＨＡＲＥＡ１とすると、安定型ヘモグロ
ビンの割合（ＳＡ１Ｃ（％））が得られる。
られるクロマトグラムから、不安定型ヘモグロビンＡ１
ｃに由来するピークとそれ以外のヘモグロビンに由来す
るピークを同定後、不安定型ヘモグロビンＡ１ｃ由来の
ピーク面積をＬＡＲＥＡ、それ以外のヘモグロビン由来
のピーク面積をＨＡＲＥＡ１とすると、安定型ヘモグロ
ビンの割合（ＳＡ１Ｃ（％））が得られる。
【００１４】ＬＡ１Ｃ（％）＝ＬＡＲＥＡ／（ＬＡＲＥ
Ａ＋ＨＡＲＥＡ１）×１００ ここで、ＬＡ１Ｃ（％）は当該血液試料中のグルコース
濃度と一次の相関関係を有していることから、血液試料
中のグルコース濃度ＢＧ（ｍｇ／ｄｌ）は、以下の通り
となる。
Ａ＋ＨＡＲＥＡ１）×１００ ここで、ＬＡ１Ｃ（％）は当該血液試料中のグルコース
濃度と一次の相関関係を有していることから、血液試料
中のグルコース濃度ＢＧ（ｍｇ／ｄｌ）は、以下の通り
となる。
【００１５】 ＢＧ（ｍｇ／ｄｌ）＝Ｆ１×ＬＡ１Ｃ（％）＋Ｆ２ 上記において、Ｆ１及びＦ２は定数である。係数Ｆ１及
びＦ２は、既知のグルコース濃度の血液試料を、例えば
同一条件下での液体クロマトグラフィーに供し、得られ
たクロマトグラムに基づき、不安定型ヘモグロビンＡ１
ｃの、その他のヘモグロビンに対する割合から算出され
るもので、分析カラム７の種類（例えばイオン交換基の
種類等）やカラムのサイズ、分析に使用する溶離液の組
成等の条件によって異なるが、分析条件が一定であれば
固定できる係数であり、血液試料を提供する被検者や、
糖尿病を患っているか否か等の被検者の状態によっては
あまり変動しない。このため、本発明では、上記のよう
にして、グルコース濃度（ｍｇ／ｄｌ）を知ることがで
きるのである。
びＦ２は、既知のグルコース濃度の血液試料を、例えば
同一条件下での液体クロマトグラフィーに供し、得られ
たクロマトグラムに基づき、不安定型ヘモグロビンＡ１
ｃの、その他のヘモグロビンに対する割合から算出され
るもので、分析カラム７の種類（例えばイオン交換基の
種類等）やカラムのサイズ、分析に使用する溶離液の組
成等の条件によって異なるが、分析条件が一定であれば
固定できる係数であり、血液試料を提供する被検者や、
糖尿病を患っているか否か等の被検者の状態によっては
あまり変動しない。このため、本発明では、上記のよう
にして、グルコース濃度（ｍｇ／ｄｌ）を知ることがで
きるのである。
【００１６】本発明は、血液試料中の全ヘモグロビン含
量に対する不安定型ヘモグロビンＡ１ｃの割合から、当
該血液試料中のグルコース濃度を算出するものである
が、安定型ヘモグロビンのピーク面積等を知ることがで
きれば、その割合（％）も同時に得ることが可能であ
る。即ち、まず、例えば上記液体クロマトグラフィーの
クロマトグラムにおいて、不安定型ヘモグロビンＡ１
ｃ、安定型ヘモグロビンＡ１ｃ、そしてその他のヘモグ
ロビンの各ピークを同定後、各ピークのピーク面積を算
出する。不安定型ヘモグロビンＡ１ｃ由来のピーク面積
をＬＡＲＥＡ、安定型ヘモグロビン由来のピーク面積を
ＳＡＲＥＡ、その他のヘモグロビン由来のピーク面積を
ＨＡＲＥＡ２とすると、安定型ヘモグロビンの割合（Ｓ
Ａ１Ｃ（％））が得られる。
量に対する不安定型ヘモグロビンＡ１ｃの割合から、当
該血液試料中のグルコース濃度を算出するものである
が、安定型ヘモグロビンのピーク面積等を知ることがで
きれば、その割合（％）も同時に得ることが可能であ
る。即ち、まず、例えば上記液体クロマトグラフィーの
クロマトグラムにおいて、不安定型ヘモグロビンＡ１
ｃ、安定型ヘモグロビンＡ１ｃ、そしてその他のヘモグ
ロビンの各ピークを同定後、各ピークのピーク面積を算
出する。不安定型ヘモグロビンＡ１ｃ由来のピーク面積
をＬＡＲＥＡ、安定型ヘモグロビン由来のピーク面積を
ＳＡＲＥＡ、その他のヘモグロビン由来のピーク面積を
ＨＡＲＥＡ２とすると、安定型ヘモグロビンの割合（Ｓ
Ａ１Ｃ（％））が得られる。
【００１７】ＳＡ１Ｃ（％）＝ＳＡＲＥＡ／（ＬＡＲＥ
Ａ＋ＳＡＲＥＡ＋ＨＡＲＥＡ２）×１００ 上記において、不安定型ヘモグロビンＡ１ｃ又は安定型
ヘモグロビンＡ１ｃ以外のヘモグロビンとしては、例え
ばヘモグロビンＡ１ａ、ヘモグロビンＡ１ｂ、ヘモグロ
ビンＡ０等のヘモグロビンＡ群や、ヘモグロビンＦがあ
る。上記のように本発明は不安定型ヘモグロビンＡ１ｃ
又は安定型ヘモグロビンＡ１ｃの、全ヘモグロビン含量
に対する割合を求めることを含むが、ここで、ヘモグロ
ビンＡ群に属するヘモグロビンの総量は、真の全ヘモグ
ロビン含量の大部分（約９５％以上）を占めることか
ら、該Ａ群に属するヘモグロビン総量を全ヘモグロビン
含量として本発明を実施することもできる。
Ａ＋ＳＡＲＥＡ＋ＨＡＲＥＡ２）×１００ 上記において、不安定型ヘモグロビンＡ１ｃ又は安定型
ヘモグロビンＡ１ｃ以外のヘモグロビンとしては、例え
ばヘモグロビンＡ１ａ、ヘモグロビンＡ１ｂ、ヘモグロ
ビンＡ０等のヘモグロビンＡ群や、ヘモグロビンＦがあ
る。上記のように本発明は不安定型ヘモグロビンＡ１ｃ
又は安定型ヘモグロビンＡ１ｃの、全ヘモグロビン含量
に対する割合を求めることを含むが、ここで、ヘモグロ
ビンＡ群に属するヘモグロビンの総量は、真の全ヘモグ
ロビン含量の大部分（約９５％以上）を占めることか
ら、該Ａ群に属するヘモグロビン総量を全ヘモグロビン
含量として本発明を実施することもできる。
【００１８】以上のように、本発明では、液体クロマト
グラフィーによる分析を１回行うのみで、グルコース濃
度（ｍｇ／ｄｌ）、そして更には安定型ヘモグロビンＡ
１ｃの割合（％）をも得ることができる。
グラフィーによる分析を１回行うのみで、グルコース濃
度（ｍｇ／ｄｌ）、そして更には安定型ヘモグロビンＡ
１ｃの割合（％）をも得ることができる。
【００１９】本発明を用いてグルコース濃度を算出しよ
うとする場合には、不安定型ヘモグロビンを他のヘモグ
ロビンと分離可能な手段を用いれば良いが、グルコース
濃度に加えて安定型ヘモグロビンの割合をも算出しよう
とする場合には、不安定型ヘモグロビンＡ１ｃ、安定型
ヘモグロビンＡ１ｃ、そしてその他のヘモグロビンの３
成分を分離できる手段を用いる。例えば前記した液体ク
ロマトグラフィーは、この３成分をも分離し得る好適な
分離手段として例示可能であるが、中でも、ヘモグロビ
ンＡ１ｃ分析に常用されている、陽イオン交換基を有す
る充填剤を充填した分析カラムを用いるイオン交換クロ
マトグラフィーを、好適な手段として例示できる。
うとする場合には、不安定型ヘモグロビンを他のヘモグ
ロビンと分離可能な手段を用いれば良いが、グルコース
濃度に加えて安定型ヘモグロビンの割合をも算出しよう
とする場合には、不安定型ヘモグロビンＡ１ｃ、安定型
ヘモグロビンＡ１ｃ、そしてその他のヘモグロビンの３
成分を分離できる手段を用いる。例えば前記した液体ク
ロマトグラフィーは、この３成分をも分離し得る好適な
分離手段として例示可能であるが、中でも、ヘモグロビ
ンＡ１ｃ分析に常用されている、陽イオン交換基を有す
る充填剤を充填した分析カラムを用いるイオン交換クロ
マトグラフィーを、好適な手段として例示できる。
【００２０】
【発明の実施の形態】以下、実施例等により本発明を更
に詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定され
るものではない。
に詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定され
るものではない。
【００２１】図１、本発明の分析装置を説明するため
の、概略図である。この装置は、分析液を切り替えるた
めの切り替えバルブ４、分析液を送液するための送液ポ
ンプ５、試料を注入するための試料注入バルブ６、分析
カラム７、検出器８から構成されている。そして、検出
器８は、プリンタ８に検出結果であるクロマトグラムを
出力するに止まらず、不図示のクロマトグラム解析装置
に対しても検出結果を出力する。解析装置は、入力した
クロマトグラムを記憶し、各種ヘモグロビンのピーク同
定、各ピークの面積の算出、後述する不安定型ヘモグロ
ビンＡ１ｃの割合の算出、そしてグルコース濃度（ｍｇ
／ｄｌ）の算出更には安定型ヘモグロビンＡ１ｃの割合
（％）の算出と出力を行う。
の、概略図である。この装置は、分析液を切り替えるた
めの切り替えバルブ４、分析液を送液するための送液ポ
ンプ５、試料を注入するための試料注入バルブ６、分析
カラム７、検出器８から構成されている。そして、検出
器８は、プリンタ８に検出結果であるクロマトグラムを
出力するに止まらず、不図示のクロマトグラム解析装置
に対しても検出結果を出力する。解析装置は、入力した
クロマトグラムを記憶し、各種ヘモグロビンのピーク同
定、各ピークの面積の算出、後述する不安定型ヘモグロ
ビンＡ１ｃの割合の算出、そしてグルコース濃度（ｍｇ
／ｄｌ）の算出更には安定型ヘモグロビンＡ１ｃの割合
（％）の算出と出力を行う。
【００２２】溶離液１〜３としては、分析カラム７に陽
イオン交換カラムを用いるのであれば、例えば、異なる
３種類の濃度の硫酸ナトリウムを含む、２０ｍＭ ＭＥ
Ｓ緩衝液（ｐＨ５．５）等を使用することができる。
イオン交換カラムを用いるのであれば、例えば、異なる
３種類の濃度の硫酸ナトリウムを含む、２０ｍＭ ＭＥ
Ｓ緩衝液（ｐＨ５．５）等を使用することができる。
【００２３】次に、この装置を用いて本発明を実施する
場合について、説明する。まず、測定に先立ち分析カラ
ム７を、３種の溶離液のうち、硫酸ナトリウム濃度がも
っとも低いもので平衡化する。次に、血液試料（血液そ
のもの）を必要に応じて蒸留水やＴｒｉｔｏｎＸ−１０
０等の界面活性剤を含有する溶血試薬等の希釈液で希釈
し、試料注入バルブから注入し、ヘモグロビンをいった
んカラム７に保持させる。
場合について、説明する。まず、測定に先立ち分析カラ
ム７を、３種の溶離液のうち、硫酸ナトリウム濃度がも
っとも低いもので平衡化する。次に、血液試料（血液そ
のもの）を必要に応じて蒸留水やＴｒｉｔｏｎＸ−１０
０等の界面活性剤を含有する溶血試薬等の希釈液で希釈
し、試料注入バルブから注入し、ヘモグロビンをいった
んカラム７に保持させる。
【００２４】次に、分析カラム７に供される硫酸ナトリ
ウムの濃度が順次上昇するよう、切り替えバルブ４を切
り替えて、供する溶離液を切り替える。これにより、カ
ラム７に保持されたモグロビンは、カラムに充填された
充填剤に対する保持力の弱い順に溶出する。順次カラム
７から溶出するヘモグロビンは、検出器８で連続的に検
出で検出され、そのクロマトグラムは、検出器８に接続
したプリンター９から出力される。
ウムの濃度が順次上昇するよう、切り替えバルブ４を切
り替えて、供する溶離液を切り替える。これにより、カ
ラム７に保持されたモグロビンは、カラムに充填された
充填剤に対する保持力の弱い順に溶出する。順次カラム
７から溶出するヘモグロビンは、検出器８で連続的に検
出で検出され、そのクロマトグラムは、検出器８に接続
したプリンター９から出力される。
【００２５】検出は、ヘモグロビンの吸収極大波長であ
る４１５ｎｍで行い得る。なお、ヘモグロビンの溶出順
番は充填剤や溶離液の種類等、分析条件により異なる
が、上記条件下では、ヘモグロビンＡ１ａ、ヘモグロビ
ンＡ１ｂ、ヘモグロビンＦ、不安定型ヘモグロビンＡ１
ｃ、安定型ヘモグロビンＡ１ｃ、その他のヘモグロビン
（ヘモグロビンＡ０が主成分である）の順で溶出する。
る４１５ｎｍで行い得る。なお、ヘモグロビンの溶出順
番は充填剤や溶離液の種類等、分析条件により異なる
が、上記条件下では、ヘモグロビンＡ１ａ、ヘモグロビ
ンＡ１ｂ、ヘモグロビンＦ、不安定型ヘモグロビンＡ１
ｃ、安定型ヘモグロビンＡ１ｃ、その他のヘモグロビン
（ヘモグロビンＡ０が主成分である）の順で溶出する。
【００２６】図２は、上記本発明の分析装置により実際
に得られたクロマトグラムである。各ピークの面積（ｍ
Ｖ・ｓｅｃ）は、ピーク高さを時間方向に積分すること
で求めることができる。図２のクロマログラムでは、ヘ
モグロビンＡ１ａ（１０を付したピーク；１３．６７ｍ
Ｖ・ｓｅｃ）、ヘモグロビンＡ１ｂ（１１を付したピー
ク；１１．８３ｍＶ・ｓｅｃ）、ヘモグロビンＦ（１２
を付したピーク；１１．０４ｍＶ・ｓｅｃ）、不安定型
ヘモグロビンＡ１ｃ（１３を付したピーク；５８．１６
ｍＶ・ｓｅｃ）、安定型ヘモグロビンＡ１ｃ（１４を付
したピーク；１０１．０５ｍＶ・ｓｅｃ）、その他のヘ
モグロビン（ヘモグロビンＡ０が主成分である、１５を
付したピーク；２２０９．９７ｍＶ・ｓｅｃ）である。
に得られたクロマトグラムである。各ピークの面積（ｍ
Ｖ・ｓｅｃ）は、ピーク高さを時間方向に積分すること
で求めることができる。図２のクロマログラムでは、ヘ
モグロビンＡ１ａ（１０を付したピーク；１３．６７ｍ
Ｖ・ｓｅｃ）、ヘモグロビンＡ１ｂ（１１を付したピー
ク；１１．８３ｍＶ・ｓｅｃ）、ヘモグロビンＦ（１２
を付したピーク；１１．０４ｍＶ・ｓｅｃ）、不安定型
ヘモグロビンＡ１ｃ（１３を付したピーク；５８．１６
ｍＶ・ｓｅｃ）、安定型ヘモグロビンＡ１ｃ（１４を付
したピーク；１０１．０５ｍＶ・ｓｅｃ）、その他のヘ
モグロビン（ヘモグロビンＡ０が主成分である、１５を
付したピーク；２２０９．９７ｍＶ・ｓｅｃ）である。
【００２７】不安定型ヘモグロビンＡ１ｃと安定型ヘモ
グロビンＡ１ｃを除く、その他のヘモグロビン由来ピー
クの総面積（ＨＡＲＥＡ）は、上記から、２２４６．５
１ｍＶ・ｓｅｃとなる。この結果、不安定型ヘモグロビ
ンの割合（ＬＡ１Ｃ（％））は２．４１％となり、試料
中のグルコース濃度は、次式により算出される。
グロビンＡ１ｃを除く、その他のヘモグロビン由来ピー
クの総面積（ＨＡＲＥＡ）は、上記から、２２４６．５
１ｍＶ・ｓｅｃとなる。この結果、不安定型ヘモグロビ
ンの割合（ＬＡ１Ｃ（％））は２．４１％となり、試料
中のグルコース濃度は、次式により算出される。
【００２８】ＢＧ（ｍｇ／ｄｌ）＝９８．６（Ｆ１）×
２．４１−１０３．２（Ｆ２）≒１３４ｍｇ／ｄｌ 係数Ｆ１及びＦ２は、既知のグルコース濃度の血液試料
を上記の液体クロマトグラフィーに供し、得られたクロ
マトグラムから、不安定型ヘモグロビンＡ１ｃの、その
他のヘモグロビンに対する割合から算出したものであ
る。なお係数Ｆ１及びＦ２は上記数値に限られるもので
はなく、本発明を実施する条件毎決定するすべきもので
ある。
２．４１−１０３．２（Ｆ２）≒１３４ｍｇ／ｄｌ 係数Ｆ１及びＦ２は、既知のグルコース濃度の血液試料
を上記の液体クロマトグラフィーに供し、得られたクロ
マトグラムから、不安定型ヘモグロビンＡ１ｃの、その
他のヘモグロビンに対する割合から算出したものであ
る。なお係数Ｆ１及びＦ２は上記数値に限られるもので
はなく、本発明を実施する条件毎決定するすべきもので
ある。
【００２９】一方、安定型ヘモグロビンＡ１ｃの割合
（ＳＡ１Ｃ（％））は、ＳＡ１Ｃ（％）＝４．２０％と
なる。この結果、例えば既知濃度のヘモグロビンを含む
血液試料が示すピーク面積について予め知見を得ておけ
ば、本発明によって安定型ヘモグロビンＡ１ｃ含有量を
推定することが可能となる。
（ＳＡ１Ｃ（％））は、ＳＡ１Ｃ（％）＝４．２０％と
なる。この結果、例えば既知濃度のヘモグロビンを含む
血液試料が示すピーク面積について予め知見を得ておけ
ば、本発明によって安定型ヘモグロビンＡ１ｃ含有量を
推定することが可能となる。
【００３０】（実施例）８７例の血液試料を用い、市販
の溶血試薬（ＨＬＣ−７２３ＧＨｂＶ用溶血洗浄液、東
ソー（株）製）で希釈して溶血した後、上記装置を用い
て測定を行い、血中グルコース濃度を測定した。また同
一の血液試料をグルコースオキシダーゼ固定化電極を用
いた市販のグルコース濃度測定装置（電極法糖分析装置
ＧＡ０３、（株）エイアンドティー製）で測定し、グル
コース濃度を測定した。
の溶血試薬（ＨＬＣ−７２３ＧＨｂＶ用溶血洗浄液、東
ソー（株）製）で希釈して溶血した後、上記装置を用い
て測定を行い、血中グルコース濃度を測定した。また同
一の血液試料をグルコースオキシダーゼ固定化電極を用
いた市販のグルコース濃度測定装置（電極法糖分析装置
ＧＡ０３、（株）エイアンドティー製）で測定し、グル
コース濃度を測定した。
【００３１】図３は、本発明により測定されたグルコー
ス濃度と、市販の装置により測定したグルコース濃度の
相関を示す図である。図３から明らかなように、本発明
によって測定されたグルコース濃度は、市販の装置によ
り測定されたグルコース濃度と良好な相関を示すことが
分かる。
ス濃度と、市販の装置により測定したグルコース濃度の
相関を示す図である。図３から明らかなように、本発明
によって測定されたグルコース濃度は、市販の装置によ
り測定されたグルコース濃度と良好な相関を示すことが
分かる。
【００３２】
【発明の効果】本発明により測定方法では、既存の方法
と同等の測定値（グルコース濃度）が得られるが、本発
明では更に、安定型ヘモグロビンＡ１ｃをも同時に測定
することができる、という効果がある。
と同等の測定値（グルコース濃度）が得られるが、本発
明では更に、安定型ヘモグロビンＡ１ｃをも同時に測定
することができる、という効果がある。
【００３３】本発明は、従来から実施されている液体ク
ロマトグラフィーにより、クロマトグラムを取得後、そ
の結果を解析することでグルコース濃度等を算出しよう
とするものである。この結果、新たな装置や機器を必要
とせず、従来から使用されている測定装置に、クロマト
グラムを解析するための解析装置を付加するのみで実施
することが可能である。そして本発明によれば、グルコ
ース濃度や安定型ヘモグロビンＡ１ｃの割合を簡便かつ
迅速に知ることができ、臨床検査特に糖尿病の早期発見
・治療経過観察に効果的である。
ロマトグラフィーにより、クロマトグラムを取得後、そ
の結果を解析することでグルコース濃度等を算出しよう
とするものである。この結果、新たな装置や機器を必要
とせず、従来から使用されている測定装置に、クロマト
グラムを解析するための解析装置を付加するのみで実施
することが可能である。そして本発明によれば、グルコ
ース濃度や安定型ヘモグロビンＡ１ｃの割合を簡便かつ
迅速に知ることができ、臨床検査特に糖尿病の早期発見
・治療経過観察に効果的である。
【図１】本発明に係わる方法を実施した液体クロマトグ
ラフィー分析装置の概略図を示す。
ラフィー分析装置の概略図を示す。
【図２】実施例により得られたクロマトグラムを示す。
【図３】実施例により得られた血中グルコース濃度（Ｙ
軸）と糖分析装置ＧＡ０３により得られたグルコース濃
度（Ｘ軸）の相関を示す。
軸）と糖分析装置ＧＡ０３により得られたグルコース濃
度（Ｘ軸）の相関を示す。
１，２，３：溶離液 ４：溶離液切り替え弁 ５：送液ポンプ ６：試料注入バルブ ７：分析カラム ８：検出器 ９：プリンター １０：ヘモグロビンＡ１ａ 画分 １１：ヘモグロビンＡ１ｂ 画分 １２：ヘモグロビンＦ 画分 １３：不安定型ヘモグロビンＡ１ｃ 画分 １４：安定型ヘモグロビンＡ１ｃ 画分 １５：ヘモグロビンＡ０ 画分
Claims (4)
- 【請求項１】試料中の全ヘモグロビン含量及び不安定型
ヘモグロビンＡ１ｃ含量を測定し、全ヘモグロビン含量
に対する不安定型ヘモグロビンＡ１ｃの割合から当該試
料中のグルコース濃度を算出する、グルコースの測定方
法。 - 【請求項２】試料中の全ヘモグロビン含量及び不安定型
ヘモグロビンＡ１ｃ含量の測定を、液体クロマトグラフ
ィーにより行うことを特徴とする、請求項１の方法。 - 【請求項３】試料中の全ヘモグロビン含量及び不安定型
ヘモグロビンＡ１ｃ含量を測定するための測定手段と、
全ヘモグロビン含量に対する不安定型ヘモグロビンＡ１
ｃの割合を算出し、そして算出結果から当該試料中のグ
ルコース濃度を算出するための演算手段とを有する、グ
ルコースの測定装置。 - 【請求項４】前記測定手段が液体クロマトグラフィーに
より試料中の全ヘモグロビン含量及び不安定型ヘモグロ
ビンＡ１ｃ含量を測定する手段であることを特徴とす
る、請求項３の装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15765499A JP4144117B2 (ja) | 1999-06-04 | 1999-06-04 | グルコースの測定方法及び測定装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15765499A JP4144117B2 (ja) | 1999-06-04 | 1999-06-04 | グルコースの測定方法及び測定装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000346848A true JP2000346848A (ja) | 2000-12-15 |
| JP4144117B2 JP4144117B2 (ja) | 2008-09-03 |
Family
ID=15654463
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15765499A Expired - Fee Related JP4144117B2 (ja) | 1999-06-04 | 1999-06-04 | グルコースの測定方法及び測定装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP4144117B2 (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008035748A1 (en) * | 2006-09-22 | 2008-03-27 | Arkray, Inc. | Blood analysis apparatus |
| WO2008133332A1 (ja) * | 2007-04-25 | 2008-11-06 | Arkray, Inc. | 基質濃度測定方法および基質濃度測定装置 |
| EP2400034A1 (en) * | 2010-06-23 | 2011-12-28 | Arkray, Inc. | Diluent for preparing analytical sample |
| JP2012500401A (ja) * | 2008-08-21 | 2012-01-05 | バイオ−ラッド ラボラトリーズ，インコーポレイティド | 分析物の比を決定する校正表面方法 |
| JP2012215470A (ja) * | 2011-03-31 | 2012-11-08 | Tosoh Corp | 糖化ヘモグロビンの測定方法及び糖化ヘモグロビン測定装置 |
| JP2021025791A (ja) * | 2019-07-31 | 2021-02-22 | アークレイ株式会社 | 推定方法及び平均血糖値推定システム |
| WO2025192701A1 (ja) * | 2024-03-14 | 2025-09-18 | 東ソー株式会社 | 糖化ヘモグロビンの測定方法 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP6895819B2 (ja) | 2017-06-26 | 2021-06-30 | アークレイ株式会社 | 液体クロマトグラフィ装置 |
-
1999
- 1999-06-04 JP JP15765499A patent/JP4144117B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008035748A1 (en) * | 2006-09-22 | 2008-03-27 | Arkray, Inc. | Blood analysis apparatus |
| JP5441409B2 (ja) * | 2006-09-22 | 2014-03-12 | アークレイ株式会社 | 血液分析装置 |
| JP2014095715A (ja) * | 2006-09-22 | 2014-05-22 | Arkray Inc | 血液分析装置 |
| US9429579B2 (en) | 2006-09-22 | 2016-08-30 | Arkray, Inc. | Blood analysis apparatus |
| WO2008133332A1 (ja) * | 2007-04-25 | 2008-11-06 | Arkray, Inc. | 基質濃度測定方法および基質濃度測定装置 |
| JPWO2008133332A1 (ja) * | 2007-04-25 | 2010-07-29 | アークレイ株式会社 | 基質濃度測定方法および基質濃度測定装置 |
| JP2012500401A (ja) * | 2008-08-21 | 2012-01-05 | バイオ−ラッド ラボラトリーズ，インコーポレイティド | 分析物の比を決定する校正表面方法 |
| EP2400034A1 (en) * | 2010-06-23 | 2011-12-28 | Arkray, Inc. | Diluent for preparing analytical sample |
| JP2012215470A (ja) * | 2011-03-31 | 2012-11-08 | Tosoh Corp | 糖化ヘモグロビンの測定方法及び糖化ヘモグロビン測定装置 |
| JP2021025791A (ja) * | 2019-07-31 | 2021-02-22 | アークレイ株式会社 | 推定方法及び平均血糖値推定システム |
| JP7282298B2 (ja) | 2019-07-31 | 2023-05-29 | アークレイ株式会社 | 推定方法及び平均血糖値推定システム |
| WO2025192701A1 (ja) * | 2024-03-14 | 2025-09-18 | 東ソー株式会社 | 糖化ヘモグロビンの測定方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP4144117B2 (ja) | 2008-09-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP2319937B1 (en) | Blood component measurement method utilizing hemolyzed whole blood, and kit for the method | |
| Little et al. | Interlaboratory standardization of glycated hemoglobin determinations. | |
| Ellis et al. | An automated" high-pressure" liquid-chromatographic assay for hemoglobin A1c. | |
| Liu et al. | Direct enzymatic assay for% HbA1c in human whole blood samples | |
| EP2400031B1 (en) | Method for measuring plasma glucose | |
| US6268167B1 (en) | Methods for determining an analyte in a plasma or serum sample which may be contaminated with interfering substances resulting from hemolysis | |
| Wiener | Whole blood glucose: what are we actually measuring? | |
| CN107884401A (zh) | 消除脂血干扰的葡萄糖氧化酶测定方法 | |
| Thode et al. | Evaluation of a new semiautomatic electrode system for simultaneous measurement of ionized calcium and pH | |
| CN103278469B (zh) | 一种总蛋白检测试剂 | |
| Niklasson | Simultaneous liquid-chromatographic determination of hypoxanthine, xanthine, urate, and creatinine in cerebrospinal fluid, with direct injection. | |
| Astles et al. | Evaluation of the YSI 2300 glucose analyzer: algorithm-corrected results are accurate and specific | |
| JP4144117B2 (ja) | グルコースの測定方法及び測定装置 | |
| DK157047B (da) | Fremgangsmaade og reagens til bestemmelse af glykosileret haemoglobin og reagens til adskillelse mellem glykosileret og ikke glykosileret haemoglobin | |
| CN104714040B (zh) | 血清中葡萄糖氧化酶双试剂测定方法 | |
| EP3498860B1 (en) | Method for measuring hba1c | |
| JP4901956B2 (ja) | 基質濃度測定方法および基質濃度測定装置 | |
| JP3516069B2 (ja) | グルコース濃度の測定方法 | |
| US6207459B1 (en) | Method for the analysis of medical samples containing haemoglobin | |
| Chung et al. | Effect of nitroblue tetrazolium concentration on the fructosamine assay for quantifying glycated protein. | |
| JPH0933533A (ja) | グルコース濃度の測定方法 | |
| Lin et al. | Technical performance evaluation of BM/Hitachi 747-200 serum fructosamine assay | |
| JPH09318634A (ja) | グルコース濃度の測定方法 | |
| Diamandis et al. | Liquid chromatography of glycated hemobglobins with the Daiichi HA-8110 automated analyzer. | |
| JPS6118982B2 (ja) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20060425 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20080521 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20080527 |
|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20080609 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110627 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110627 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120627 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120627 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130627 Year of fee payment: 5 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |