JP2000350600A - 骨粗鬆症薬剤感受性予測方法 - Google Patents
骨粗鬆症薬剤感受性予測方法Info
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- JP2000350600A JP2000350600A JP11165642A JP16564299A JP2000350600A JP 2000350600 A JP2000350600 A JP 2000350600A JP 11165642 A JP11165642 A JP 11165642A JP 16564299 A JP16564299 A JP 16564299A JP 2000350600 A JP2000350600 A JP 2000350600A
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Abstract
(57)【要約】
【解決手段】 ヒト由来試料に含まれるゲノムＤＮＡか
ら、ビタミンＤ受容体遺伝子、エストロゲン受容体遺伝
子およびアポリポ蛋白Ｅ遺伝子のそれぞれの多型を分析
し、該遺伝子多型の組み合わせに基づいて、該試料が複
数の骨粗鬆症治療薬に対する感受性において特定の優先
性を示す個人由来のものであると予測することを特徴と
する骨粗鬆症薬剤感受性予測方法。 【効果】 本発明の方法によれば、投薬前にどの骨粗鬆
症治療薬が対象患者に対して最も治療効果が高いかを予
測することができるので、適切な薬剤の選択が可能とな
り、患者のＱＯＬを向上させるのに極めて有用である。
ら、ビタミンＤ受容体遺伝子、エストロゲン受容体遺伝
子およびアポリポ蛋白Ｅ遺伝子のそれぞれの多型を分析
し、該遺伝子多型の組み合わせに基づいて、該試料が複
数の骨粗鬆症治療薬に対する感受性において特定の優先
性を示す個人由来のものであると予測することを特徴と
する骨粗鬆症薬剤感受性予測方法。 【効果】 本発明の方法によれば、投薬前にどの骨粗鬆
症治療薬が対象患者に対して最も治療効果が高いかを予
測することができるので、適切な薬剤の選択が可能とな
り、患者のＱＯＬを向上させるのに極めて有用である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、骨粗鬆症の治療に
おいて有用な情報を提供し得る新規なヒト由来試料の分
析方法に関する。詳細には、本発明は、骨粗鬆症治療
薬、特にビタミンＤ、エストロゲンおよびビタミンＫ2
のうちのいずれの薬剤の使用が最も有効な治療効果を示
すかを予測するための、ヒト由来試料中のゲノムＤＮＡ
の遺伝子多型の分析方法に関する。また、本発明はヒト
由来試料中のゲノムＤＮＡの遺伝子多型の組み合わせか
ら、該試料が前記薬剤に対する感受性において特定の優
先性を示す個人由来のものであると予測する方法に関す
る。さらに、本発明は上記の方法において使用し得る遺
伝子多型分析用キットに関する。
おいて有用な情報を提供し得る新規なヒト由来試料の分
析方法に関する。詳細には、本発明は、骨粗鬆症治療
薬、特にビタミンＤ、エストロゲンおよびビタミンＫ2
のうちのいずれの薬剤の使用が最も有効な治療効果を示
すかを予測するための、ヒト由来試料中のゲノムＤＮＡ
の遺伝子多型の分析方法に関する。また、本発明はヒト
由来試料中のゲノムＤＮＡの遺伝子多型の組み合わせか
ら、該試料が前記薬剤に対する感受性において特定の優
先性を示す個人由来のものであると予測する方法に関す
る。さらに、本発明は上記の方法において使用し得る遺
伝子多型分析用キットに関する。
【０００２】
【従来の技術】骨粗鬆症は骨量（骨に含まれるカルシウ
ムを中心としたミネラルの量）が減少し、かつ骨組織の
微細構造が変化し、そのために骨が脆くなり骨折しやす
くなった病態である。閉経後の女性や高齢の男性に多
く、我が国の患者数は推定１，０００万人といわれてい
る。人口の高齢化に伴い、今後も患者数は不可避的に増
加するものと予測される。
ムを中心としたミネラルの量）が減少し、かつ骨組織の
微細構造が変化し、そのために骨が脆くなり骨折しやす
くなった病態である。閉経後の女性や高齢の男性に多
く、我が国の患者数は推定１，０００万人といわれてい
る。人口の高齢化に伴い、今後も患者数は不可避的に増
加するものと予測される。
【０００３】現在、骨粗鬆症の治療薬として、カルシウ
ム製剤、ビタミンＤ等の骨活性化薬、エストロゲン等の
骨吸収抑制薬、ビタミンＫ等の骨形成促進薬など、種々
の薬剤が用いられているが、その治療効果は患者によっ
てまちまちであり、それらをどのように使い分けるかに
ついての検討はほとんどなされていない。これらの治療
薬は単剤投与が原則とされているので、どの治療薬が最
も効果的であるかを調べるには、実際に１つの薬剤を数
年間患者に投与して、その結果を見て判断するしかない
のが現状であり、極めて非効率的である。
ム製剤、ビタミンＤ等の骨活性化薬、エストロゲン等の
骨吸収抑制薬、ビタミンＫ等の骨形成促進薬など、種々
の薬剤が用いられているが、その治療効果は患者によっ
てまちまちであり、それらをどのように使い分けるかに
ついての検討はほとんどなされていない。これらの治療
薬は単剤投与が原則とされているので、どの治療薬が最
も効果的であるかを調べるには、実際に１つの薬剤を数
年間患者に投与して、その結果を見て判断するしかない
のが現状であり、極めて非効率的である。
【０００４】一方、近年の遺伝子研究から、いくつかの
遺伝子の多型と患者の骨粗鬆症治療薬に対する感受性と
の関連が提唱されている。例えば、ビタミンＤ受容体
（以下、ＶＤＲという）遺伝子の第８エクソンと第９エ
クソンの間のイントロン領域内でApa I により切断され
ない遺伝子型Ａは、同制限酵素によって切断される遺伝
子型ａに比べてビタミンＤに対して高感受性であるとの
報告がある〔例えば、特開平8-126497号公報および特開
平8-126500号公報参照〕。
遺伝子の多型と患者の骨粗鬆症治療薬に対する感受性と
の関連が提唱されている。例えば、ビタミンＤ受容体
（以下、ＶＤＲという）遺伝子の第８エクソンと第９エ
クソンの間のイントロン領域内でApa I により切断され
ない遺伝子型Ａは、同制限酵素によって切断される遺伝
子型ａに比べてビタミンＤに対して高感受性であるとの
報告がある〔例えば、特開平8-126497号公報および特開
平8-126500号公報参照〕。
【０００５】また、白木ら〔１９９７年骨代謝学会要旨
集第５２頁〕には、ＶＤＲ遺伝子の多型とビタミンＤ感
受性、エストロゲン受容体（以下、ＥＲという）遺伝子
の多型とエストロゲン感受性およびアポリポ蛋白Ｅ（以
下、ＡｐｏＥ）遺伝子の多型とビタミンＫ2 感受性につ
いて調べた結果、ＶＤＲ遺伝子型ＡＡＢ（Ｂは第８エク
ソンと第９エクソンの間のイントロン領域内でBsm I に
より切断されない遺伝子型）はａａｂｂに比べてビタミ
ンＤ3 に対する感受性が有意に低く、またＥＲ遺伝子型
ＰｐＸｘ（ＰおよびＸはそれぞれPvu IIおよびXba I で
切断されない遺伝子型）は他の遺伝子型群に比べてエス
トロゲンに対する感受性が有意に高く、さらに、Ａｐｏ
Ｅ4 (+) 群はＡｐｏＥ4 (-) 群に比べてビタミンＫ2 に
対する感受性が有意に低かったと記載されている。
集第５２頁〕には、ＶＤＲ遺伝子の多型とビタミンＤ感
受性、エストロゲン受容体（以下、ＥＲという）遺伝子
の多型とエストロゲン感受性およびアポリポ蛋白Ｅ（以
下、ＡｐｏＥ）遺伝子の多型とビタミンＫ2 感受性につ
いて調べた結果、ＶＤＲ遺伝子型ＡＡＢ（Ｂは第８エク
ソンと第９エクソンの間のイントロン領域内でBsm I に
より切断されない遺伝子型）はａａｂｂに比べてビタミ
ンＤ3 に対する感受性が有意に低く、またＥＲ遺伝子型
ＰｐＸｘ（ＰおよびＸはそれぞれPvu IIおよびXba I で
切断されない遺伝子型）は他の遺伝子型群に比べてエス
トロゲンに対する感受性が有意に高く、さらに、Ａｐｏ
Ｅ4 (+) 群はＡｐｏＥ4 (-) 群に比べてビタミンＫ2 に
対する感受性が有意に低かったと記載されている。
【０００６】さらに、ビタミンＤ結合蛋白（ＤＢＰ）遺
伝子をHae III およびSty I で切断して得られるＲＦＬ
ＰパターンがＧＣ２−２型のものは、他の群に比べてビ
タミンＤ類に対する感受性が高いと記載されている［特
開平８−２０１３７３号公報］。
伝子をHae III およびSty I で切断して得られるＲＦＬ
ＰパターンがＧＣ２−２型のものは、他の群に比べてビ
タミンＤ類に対する感受性が高いと記載されている［特
開平８−２０１３７３号公報］。
【０００７】しかしながら、これらはいずれも１遺伝子
の多型から１つの薬剤に対する感受性を予測するもので
あり、１つの薬剤について他の遺伝子型よりも感受性が
高いか否かを予測するものでしかない。すなわち、ＶＤ
Ｒ遺伝子型がａａｂｂで且つＡｐｏＥ遺伝子型がＡｐｏ
Ｅ4 (-) である人は、他のＶＤＲ遺伝子型およびＡｐｏ
Ｅ遺伝子型を有する人に比べてビタミンＤおよびビタミ
ンＫ2 に対する感受性が高いと予測されるが、それで
は、このような遺伝子型を有する患者に対してビタミン
Ｄを投与するのとビタミンＫ2 を投与するのとでは、ど
ちらがより高い治療効果が得られるのかについては、依
然として予測することができない。したがって、結局の
ところ、異なる薬剤のいずれに対して患者がより感受性
が高いかを知るには、上述のように、実際に各薬剤を、
１つの薬剤について数年間のスパンで順次患者に投与し
て結果を見るしかなかった。特に、エストロゲンは、治
療効果は大きいが副作用も大きいため、感受性の低い患
者への長期投与は患者のＱＯＬ（Quality of Life ）を
著しく損なうおそれがあった。
の多型から１つの薬剤に対する感受性を予測するもので
あり、１つの薬剤について他の遺伝子型よりも感受性が
高いか否かを予測するものでしかない。すなわち、ＶＤ
Ｒ遺伝子型がａａｂｂで且つＡｐｏＥ遺伝子型がＡｐｏ
Ｅ4 (-) である人は、他のＶＤＲ遺伝子型およびＡｐｏ
Ｅ遺伝子型を有する人に比べてビタミンＤおよびビタミ
ンＫ2 に対する感受性が高いと予測されるが、それで
は、このような遺伝子型を有する患者に対してビタミン
Ｄを投与するのとビタミンＫ2 を投与するのとでは、ど
ちらがより高い治療効果が得られるのかについては、依
然として予測することができない。したがって、結局の
ところ、異なる薬剤のいずれに対して患者がより感受性
が高いかを知るには、上述のように、実際に各薬剤を、
１つの薬剤について数年間のスパンで順次患者に投与し
て結果を見るしかなかった。特に、エストロゲンは、治
療効果は大きいが副作用も大きいため、感受性の低い患
者への長期投与は患者のＱＯＬ（Quality of Life ）を
著しく損なうおそれがあった。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】したがって、本発明の
目的は、骨粗鬆症患者もしくは将来骨粗鬆症を発症する
可能性のある人が、複数の骨粗鬆症治療薬のいずれに対
してより高い感受性を有するかを予測する手段を提供す
ることであり、それによって治療効果の低い薬剤の長期
投与による病状の進行を回避し、患者のＱＯＬを向上さ
せることである。
目的は、骨粗鬆症患者もしくは将来骨粗鬆症を発症する
可能性のある人が、複数の骨粗鬆症治療薬のいずれに対
してより高い感受性を有するかを予測する手段を提供す
ることであり、それによって治療効果の低い薬剤の長期
投与による病状の進行を回避し、患者のＱＯＬを向上さ
せることである。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明者らは上記目的を
達成するために鋭意検討を重ねた結果、ゲノムＤＮＡを
含有するヒト由来試料を、ＶＤＲ遺伝子、ＥＲ遺伝子お
よびＡｐｏＥ遺伝子の多型について分析することによ
り、得られる多型の組み合わせに基づいて、ビタミン
Ｄ、エストロゲンおよびビタミンＫ2 のうちのいずれか
の薬剤に対する感受性が、他の２つの薬剤に対する感受
性に比べて高いことが予測可能であることを見出した。
すなわち、他の遺伝子型に比べてビタミンＤに高感受性
のＶＤＲ遺伝子型および他の遺伝子型に比べてエストロ
ゲンに高感受性のＥＲ遺伝子型を有する場合、ビタミン
Ｄよりもエストロゲンに対してより感受性が高く、他の
遺伝子型に比べてエストロゲンに高感受性のＥＲ遺伝子
型および他の遺伝子型に比べてビタミンＫ2 に高感受性
のＡｐｏＥ遺伝子型を有する場合、ビタミンＫ2 よりも
エストロゲンに対してより感受性が高く、他の遺伝子型
に比べてビタミンＤに高感受性のＶＤＲ遺伝子型および
他の遺伝子型に比べてビタミンＫ2 に高感受性のＡｐｏ
Ｅ遺伝子型を有する場合、ビタミンＤよりもビタミンＫ
2 に対してより感受性が高い傾向を示すことを見出し
て、本発明に到達した。
達成するために鋭意検討を重ねた結果、ゲノムＤＮＡを
含有するヒト由来試料を、ＶＤＲ遺伝子、ＥＲ遺伝子お
よびＡｐｏＥ遺伝子の多型について分析することによ
り、得られる多型の組み合わせに基づいて、ビタミン
Ｄ、エストロゲンおよびビタミンＫ2 のうちのいずれか
の薬剤に対する感受性が、他の２つの薬剤に対する感受
性に比べて高いことが予測可能であることを見出した。
すなわち、他の遺伝子型に比べてビタミンＤに高感受性
のＶＤＲ遺伝子型および他の遺伝子型に比べてエストロ
ゲンに高感受性のＥＲ遺伝子型を有する場合、ビタミン
Ｄよりもエストロゲンに対してより感受性が高く、他の
遺伝子型に比べてエストロゲンに高感受性のＥＲ遺伝子
型および他の遺伝子型に比べてビタミンＫ2 に高感受性
のＡｐｏＥ遺伝子型を有する場合、ビタミンＫ2 よりも
エストロゲンに対してより感受性が高く、他の遺伝子型
に比べてビタミンＤに高感受性のＶＤＲ遺伝子型および
他の遺伝子型に比べてビタミンＫ2 に高感受性のＡｐｏ
Ｅ遺伝子型を有する場合、ビタミンＤよりもビタミンＫ
2 に対してより感受性が高い傾向を示すことを見出し
て、本発明に到達した。
【００１０】すなわち、本発明は以下の通りである。 １．ヒトから採取した試料中に含まれるゲノムＤＮＡか
ら、ビタミンＤ受容体遺伝子、エストロゲン受容体遺伝
子およびアポリポ蛋白Ｅ遺伝子のそれぞれの遺伝子多型
を分析し、これらの遺伝子多型の組み合わせに基づい
て、該試料が複数の骨粗鬆症治療薬に対する感受性にお
いて特定の優先性を示す個人由来のものであると予測す
ることを特徴とする骨粗鬆症薬剤感受性予測方法。 ２．ビタミンＤ受容体遺伝子、エストロゲン受容体遺伝
子およびアポリポ蛋白Ｅ遺伝子の遺伝子多型の組み合わ
せが、[B(-) X(-) 4(-)], [B(-) X(-) 4(+)], [B(-) X
(+) 4(-)], [B(-) X(+) 4(+)], [B(+) X(-) 4(-)], [B
(+) X(-) 4(+)], [B(+) X(+) 4(-)]および[B(+) X(+) 4
(+)]からなる群より選択されるいずれかである上記１の
方法（ここで、B は第８エクソンと第９エクソンの間の
イントロン領域内でBsm I により切断されないビタミン
Ｄ受容体対立遺伝子を、X は第１エクソンと第２エクソ
ンの間のイントロン領域内でXba I により切断されない
エストロゲン受容体対立遺伝子を、4 はＡｐｏＥ4 型ア
ポリポ蛋白Ｅ対立遺伝子をそれぞれ表し、(+) および
(-) はその対立遺伝子を有するおよび有しないことをそ
れぞれ表している）。 ３．複数の骨粗鬆症治療薬がビタミンＤ、エストロゲン
およびビタミンＫ2 である上記１または２の方法。 ４．ビタミンＤ受容体遺伝子、エストロゲン受容体遺伝
子およびアポリポ蛋白Ｅ遺伝子の遺伝子多型の組み合わ
せが[B(-) X(-) 4(-)]および[B(+) X(-) 4(-)]の場合、
ビタミンＫ2 に対する感受性が、ビタミンＤに対する感
受性およびエストロゲンに対する感受性に比べて高い個
人由来の試料であると予測することを特徴とする上記３
の方法。 ５．ビタミンＤ受容体遺伝子、エストロゲン受容体遺伝
子およびアポリポ蛋白Ｅ遺伝子の遺伝子多型の組み合わ
せが[B(-) X(-) 4(+)]の場合、ビタミンＤに対する感受
性が、ビタミンＫ2 に対する感受性およびエストロゲン
に対する感受性に比べて高い個人由来の試料であると予
測することを特徴とする上記３の方法。 ６．ビタミンＤ受容体遺伝子、エストロゲン受容体遺伝
子およびアポリポ蛋白Ｅ遺伝子の遺伝子多型の組み合わ
せが[B(-) X(+) 4(-)], [B(-) X(+) 4(+)]および[B(+)
X(+) 4(-)]の場合、エストロゲンに対する感受性が、ビ
タミンＤに対する感受性およびビタミンＫ2 に対する感
受性に比べて高い個人由来の試料であると予測すること
を特徴とする上記３の方法。 ７．ビタミンＤ受容体遺伝子を特異的に増幅し得るプラ
イマー対、エストロゲン受容体遺伝子を特異的に増幅し
得るプライマー対およびアポリポ蛋白Ｅ遺伝子を特異的
に増幅し得るプライマー対、および／またはビタミンＤ
受容体遺伝子と特異的にハイブリダイズし得る核酸プロ
ーブ、エストロゲン受容体遺伝子と特異的にハイブリダ
イズし得る核酸プローブおよびアポリポ蛋白Ｅ遺伝子と
特異的にハイブリダイズし得る核酸プローブを含むこと
を特徴とするヒトゲノムＤＮＡ含有試料の遺伝子多型分
析用キット。
ら、ビタミンＤ受容体遺伝子、エストロゲン受容体遺伝
子およびアポリポ蛋白Ｅ遺伝子のそれぞれの遺伝子多型
を分析し、これらの遺伝子多型の組み合わせに基づい
て、該試料が複数の骨粗鬆症治療薬に対する感受性にお
いて特定の優先性を示す個人由来のものであると予測す
ることを特徴とする骨粗鬆症薬剤感受性予測方法。 ２．ビタミンＤ受容体遺伝子、エストロゲン受容体遺伝
子およびアポリポ蛋白Ｅ遺伝子の遺伝子多型の組み合わ
せが、[B(-) X(-) 4(-)], [B(-) X(-) 4(+)], [B(-) X
(+) 4(-)], [B(-) X(+) 4(+)], [B(+) X(-) 4(-)], [B
(+) X(-) 4(+)], [B(+) X(+) 4(-)]および[B(+) X(+) 4
(+)]からなる群より選択されるいずれかである上記１の
方法（ここで、B は第８エクソンと第９エクソンの間の
イントロン領域内でBsm I により切断されないビタミン
Ｄ受容体対立遺伝子を、X は第１エクソンと第２エクソ
ンの間のイントロン領域内でXba I により切断されない
エストロゲン受容体対立遺伝子を、4 はＡｐｏＥ4 型ア
ポリポ蛋白Ｅ対立遺伝子をそれぞれ表し、(+) および
(-) はその対立遺伝子を有するおよび有しないことをそ
れぞれ表している）。 ３．複数の骨粗鬆症治療薬がビタミンＤ、エストロゲン
およびビタミンＫ2 である上記１または２の方法。 ４．ビタミンＤ受容体遺伝子、エストロゲン受容体遺伝
子およびアポリポ蛋白Ｅ遺伝子の遺伝子多型の組み合わ
せが[B(-) X(-) 4(-)]および[B(+) X(-) 4(-)]の場合、
ビタミンＫ2 に対する感受性が、ビタミンＤに対する感
受性およびエストロゲンに対する感受性に比べて高い個
人由来の試料であると予測することを特徴とする上記３
の方法。 ５．ビタミンＤ受容体遺伝子、エストロゲン受容体遺伝
子およびアポリポ蛋白Ｅ遺伝子の遺伝子多型の組み合わ
せが[B(-) X(-) 4(+)]の場合、ビタミンＤに対する感受
性が、ビタミンＫ2 に対する感受性およびエストロゲン
に対する感受性に比べて高い個人由来の試料であると予
測することを特徴とする上記３の方法。 ６．ビタミンＤ受容体遺伝子、エストロゲン受容体遺伝
子およびアポリポ蛋白Ｅ遺伝子の遺伝子多型の組み合わ
せが[B(-) X(+) 4(-)], [B(-) X(+) 4(+)]および[B(+)
X(+) 4(-)]の場合、エストロゲンに対する感受性が、ビ
タミンＤに対する感受性およびビタミンＫ2 に対する感
受性に比べて高い個人由来の試料であると予測すること
を特徴とする上記３の方法。 ７．ビタミンＤ受容体遺伝子を特異的に増幅し得るプラ
イマー対、エストロゲン受容体遺伝子を特異的に増幅し
得るプライマー対およびアポリポ蛋白Ｅ遺伝子を特異的
に増幅し得るプライマー対、および／またはビタミンＤ
受容体遺伝子と特異的にハイブリダイズし得る核酸プロ
ーブ、エストロゲン受容体遺伝子と特異的にハイブリダ
イズし得る核酸プローブおよびアポリポ蛋白Ｅ遺伝子と
特異的にハイブリダイズし得る核酸プローブを含むこと
を特徴とするヒトゲノムＤＮＡ含有試料の遺伝子多型分
析用キット。
【００１１】
【発明の実施の形態】本発明の分析方法に供され得るヒ
ト由来試料は、ヒトゲノムＤＮＡを含有するものであれ
ば特に限定されない。好ましくは、各種ヒト細胞から単
離されたゲノムＤＮＡが例示される。ゲノムＤＮＡの抽
出は、ＳＤＳ／フェノール法、グアニジンチオシアネー
ト法、ＣＴＡＢ法等の慣用の方法で行えばよい。また、
全血、分画された血球細胞、擦過診材料として使用され
る表皮細胞や粘膜細胞、あるいは毛髪などの、入手が容
易で且つＰＣＲ法の鋳型ＤＮＡ試料として従来より使用
されている細胞・組織も好ましく用いられる。この場
合、例えば細胞・組織を水中で煮沸したり、あるいはア
ルカリ溶液中で加熱することにより、細胞を破砕してゲ
ノムＤＮＡ試料とする。
ト由来試料は、ヒトゲノムＤＮＡを含有するものであれ
ば特に限定されない。好ましくは、各種ヒト細胞から単
離されたゲノムＤＮＡが例示される。ゲノムＤＮＡの抽
出は、ＳＤＳ／フェノール法、グアニジンチオシアネー
ト法、ＣＴＡＢ法等の慣用の方法で行えばよい。また、
全血、分画された血球細胞、擦過診材料として使用され
る表皮細胞や粘膜細胞、あるいは毛髪などの、入手が容
易で且つＰＣＲ法の鋳型ＤＮＡ試料として従来より使用
されている細胞・組織も好ましく用いられる。この場
合、例えば細胞・組織を水中で煮沸したり、あるいはア
ルカリ溶液中で加熱することにより、細胞を破砕してゲ
ノムＤＮＡ試料とする。
【００１２】本発明の分析方法は、ＶＤＲ遺伝子、ＥＲ
遺伝子およびＡｐｏＥ遺伝子についての遺伝子多型を調
べることを特徴とする。ＶＤＲ遺伝子は第１２番染色体
上にある。ＶＤＲ遺伝子の多型の１つは、第８エクソン
と第９エクソンの間のイントロン領域内での制限酵素Bs
m I による切断の可否によって検出される。Bsm I で切
断されない対立遺伝子をＢ、同酵素により切断される対
立遺伝子をｂで表すと、ＢＢ、Ｂｂおよびｂｂの３つの
遺伝子型をとり得るが、本発明においては、ＶＤＲ遺伝
子多型は、対立遺伝子Ｂを有する遺伝子型B(+)（すなわ
ち、ＢＢおよびＢｂ）と対立遺伝子Ｂを有しない遺伝子
型B(-)（すなわち、ｂｂ）とに類別される。また、ＶＤ
Ｒ遺伝子の多型部位とは、対立遺伝子ｂの第８エクソン
と第９エクソンの間のイントロン領域内のBsm I 制限部
位（ＧＡＡＴＧＣ）および対立遺伝子Ｂのそれに対応す
る部位（ＧＡＡＴＧＴ）をいうものとする。
遺伝子およびＡｐｏＥ遺伝子についての遺伝子多型を調
べることを特徴とする。ＶＤＲ遺伝子は第１２番染色体
上にある。ＶＤＲ遺伝子の多型の１つは、第８エクソン
と第９エクソンの間のイントロン領域内での制限酵素Bs
m I による切断の可否によって検出される。Bsm I で切
断されない対立遺伝子をＢ、同酵素により切断される対
立遺伝子をｂで表すと、ＢＢ、Ｂｂおよびｂｂの３つの
遺伝子型をとり得るが、本発明においては、ＶＤＲ遺伝
子多型は、対立遺伝子Ｂを有する遺伝子型B(+)（すなわ
ち、ＢＢおよびＢｂ）と対立遺伝子Ｂを有しない遺伝子
型B(-)（すなわち、ｂｂ）とに類別される。また、ＶＤ
Ｒ遺伝子の多型部位とは、対立遺伝子ｂの第８エクソン
と第９エクソンの間のイントロン領域内のBsm I 制限部
位（ＧＡＡＴＧＣ）および対立遺伝子Ｂのそれに対応す
る部位（ＧＡＡＴＧＴ）をいうものとする。
【００１３】ＥＲ遺伝子は第６番染色体上にある。ＥＲ
遺伝子の多型の１つは、第１エクソンと第２エクソンの
間のイントロン領域内での制限酵素Xba I による切断の
可否によって検出される。Xba I で切断されない対立遺
伝子をＸ、同酵素で切断される対立遺伝子をｘで表す
と、ＸＸ、Ｘｘおよびｘｘの３つの遺伝子型をとり得る
が、本発明においては、ＥＲ遺伝子多型は、対立遺伝子
Ｘを有する遺伝子型X(+)（すなわち、ＸＸおよびＸｘ）
と対立遺伝子Ｘを有しない遺伝子型X(-)（すなわち、ｘ
ｘ）とに類別される。また、ＥＲ遺伝子の多型部位と
は、対立遺伝子ｘの第１エクソンと第２エクソンの間の
イントロン領域内のXba I 制限部位（ＴＣＴＡＧＡ）お
よび対立遺伝子Ｘのそれに対応する部位（ＴＣＣＡＧ
Ａ）をいうものとする。
遺伝子の多型の１つは、第１エクソンと第２エクソンの
間のイントロン領域内での制限酵素Xba I による切断の
可否によって検出される。Xba I で切断されない対立遺
伝子をＸ、同酵素で切断される対立遺伝子をｘで表す
と、ＸＸ、Ｘｘおよびｘｘの３つの遺伝子型をとり得る
が、本発明においては、ＥＲ遺伝子多型は、対立遺伝子
Ｘを有する遺伝子型X(+)（すなわち、ＸＸおよびＸｘ）
と対立遺伝子Ｘを有しない遺伝子型X(-)（すなわち、ｘ
ｘ）とに類別される。また、ＥＲ遺伝子の多型部位と
は、対立遺伝子ｘの第１エクソンと第２エクソンの間の
イントロン領域内のXba I 制限部位（ＴＣＴＡＧＡ）お
よび対立遺伝子Ｘのそれに対応する部位（ＴＣＣＡＧ
Ａ）をいうものとする。
【００１４】ＡｐｏＥ遺伝子は第１９番染色体上にあ
り、４つのエクソンと３つのイントロンからなり、２９
９個のアミノ酸からなる蛋白質をコードする。ＡｐｏＥ
蛋白はリポ蛋白によるトリグリセリドやコレステロール
の輸送に関与し、ビタミンＫ2の転送蛋白でもある。Ａ
ｐｏＥ蛋白には３つのアイソフォーム（Ｅ2 、Ｅ3 およ
びＥ4 ）が知られており、このうちＥ3 が野生型である
と考えられている。Ｅ4は第１１２番目のシステイン
（コドン：ＴＧＣ）がアルギニン（コドン：ＣＧＣ）に
置換されたものである。また、Ｅ2 は第１５８番目のア
ルギニンがシステインに置換されたものである。したが
って、ＡｐｏＥ4 対立遺伝子は変異部位において制限酵
素Hha I により切断されるが、ＡｐｏＥ2 およびＡｐｏ
Ｅ3 対立遺伝子は同部位において同酵素により切断され
ない。ＡｐｏＥ2 、ＡｐｏＥ3 およびＡｐｏＥ4 対立遺
伝子をそれぞれ２、３および４で表すと、2/2 、2/3 、
2/4 、3/3 、3/4 および4/4 の遺伝子型をとり得るが、
本発明においては、ＡｐｏＥ遺伝子多型は、対立遺伝子
４を有する遺伝子型4(+)（すなわち、2/4 、3/4 および
4/4 ）と、対立遺伝子４を有しない遺伝子型4(-)（すな
わち、2/2 、2/3 および3/3 ）とに類別される。また、
ＡｐｏＥ遺伝子の多型部位とは、対立遺伝子４の第１１
２コドンにおけるHha I 制限部位（ＧＣＧＣ）および対
立遺伝子２および３のそれに対応する部位（ＧＴＧＣ）
をいうものとする。
り、４つのエクソンと３つのイントロンからなり、２９
９個のアミノ酸からなる蛋白質をコードする。ＡｐｏＥ
蛋白はリポ蛋白によるトリグリセリドやコレステロール
の輸送に関与し、ビタミンＫ2の転送蛋白でもある。Ａ
ｐｏＥ蛋白には３つのアイソフォーム（Ｅ2 、Ｅ3 およ
びＥ4 ）が知られており、このうちＥ3 が野生型である
と考えられている。Ｅ4は第１１２番目のシステイン
（コドン：ＴＧＣ）がアルギニン（コドン：ＣＧＣ）に
置換されたものである。また、Ｅ2 は第１５８番目のア
ルギニンがシステインに置換されたものである。したが
って、ＡｐｏＥ4 対立遺伝子は変異部位において制限酵
素Hha I により切断されるが、ＡｐｏＥ2 およびＡｐｏ
Ｅ3 対立遺伝子は同部位において同酵素により切断され
ない。ＡｐｏＥ2 、ＡｐｏＥ3 およびＡｐｏＥ4 対立遺
伝子をそれぞれ２、３および４で表すと、2/2 、2/3 、
2/4 、3/3 、3/4 および4/4 の遺伝子型をとり得るが、
本発明においては、ＡｐｏＥ遺伝子多型は、対立遺伝子
４を有する遺伝子型4(+)（すなわち、2/4 、3/4 および
4/4 ）と、対立遺伝子４を有しない遺伝子型4(-)（すな
わち、2/2 、2/3 および3/3 ）とに類別される。また、
ＡｐｏＥ遺伝子の多型部位とは、対立遺伝子４の第１１
２コドンにおけるHha I 制限部位（ＧＣＧＣ）および対
立遺伝子２および３のそれに対応する部位（ＧＴＧＣ）
をいうものとする。
【００１５】本発明の遺伝子多型の測定方法は、ＶＤＲ
遺伝子の多型B(+)とB(-)、ＥＲ遺伝子の多型X(+)とX(-)
およびＡｐｏＥ遺伝子の多型4(+)と4(-)をそれぞれ区別
し得る方法であれば特に制限されず、サザンハイブリダ
イゼーション法、シーケンス法、ＰＣＲ法等の通常のゲ
ノムＤＮＡの検出・分析法を適宜組み合わせた種々の方
法が利用できる。
遺伝子の多型B(+)とB(-)、ＥＲ遺伝子の多型X(+)とX(-)
およびＡｐｏＥ遺伝子の多型4(+)と4(-)をそれぞれ区別
し得る方法であれば特に制限されず、サザンハイブリダ
イゼーション法、シーケンス法、ＰＣＲ法等の通常のゲ
ノムＤＮＡの検出・分析法を適宜組み合わせた種々の方
法が利用できる。
【００１６】これらの遺伝子多型の測定方法は、その原
理に基づいて３つに大別される。すなわち、（１）多型
部位を含む遺伝子断片を単離して当該部位の塩基配列を
決定するかあるいは特異的なプローブまたはプライマー
を用いて多型部位を直接検出する方法、（２）多型部位
を含む遺伝子断片の高次構造の差を利用して、電気泳動
度により多型を判別する方法および（３）多型部位での
制限酵素による切断の可否を利用して、電気泳動度によ
り多型を判別する方法である。（１）の具体的な方法と
して、例えば、シーケンス法、配列特異的オリゴプロー
ブ（sequence-specific oligonucleotide probe;ＳＳＯ
Ｐ）法、アレル特異的増幅（mutant allele specific a
mplification; ＭＡＳＡ）法などが挙げられる。
理に基づいて３つに大別される。すなわち、（１）多型
部位を含む遺伝子断片を単離して当該部位の塩基配列を
決定するかあるいは特異的なプローブまたはプライマー
を用いて多型部位を直接検出する方法、（２）多型部位
を含む遺伝子断片の高次構造の差を利用して、電気泳動
度により多型を判別する方法および（３）多型部位での
制限酵素による切断の可否を利用して、電気泳動度によ
り多型を判別する方法である。（１）の具体的な方法と
して、例えば、シーケンス法、配列特異的オリゴプロー
ブ（sequence-specific oligonucleotide probe;ＳＳＯ
Ｐ）法、アレル特異的増幅（mutant allele specific a
mplification; ＭＡＳＡ）法などが挙げられる。
【００１７】シーケンス法では、まず、ＶＤＲ遺伝子、
ＥＲ遺伝子およびＡｐｏＥ遺伝子のそれぞれの多型部位
を内部に含む適当な長さの各遺伝子断片を増幅し得るよ
うな特異的プライマー対を合成する。該プライマー対は
約１５〜約４０塩基で、通常のＰＣＲプライマーに要求
される好適な条件を満たすものであれば特に制限されな
い。次いで、該プライマー対を用い、ヒト由来試料を鋳
型としてＰＣＲを行い、目的の各遺伝子断片を増幅させ
る。ＰＣＲの反応条件は通常使用される範囲で適宜選択
することができる。各遺伝子断片の増幅は別個に行って
も同時に行ってもよい。得られた増幅断片を適当なベク
ターにそれぞれサブクローニングし、マキサム・ギルバ
ート法やジデオキシ法を用いた通常のシーケンスにより
各多型部位の塩基配列を決定することができる。また、
サブクローニングすることなく直接サイクルシーケンス
法により配列決定することもできる。
ＥＲ遺伝子およびＡｐｏＥ遺伝子のそれぞれの多型部位
を内部に含む適当な長さの各遺伝子断片を増幅し得るよ
うな特異的プライマー対を合成する。該プライマー対は
約１５〜約４０塩基で、通常のＰＣＲプライマーに要求
される好適な条件を満たすものであれば特に制限されな
い。次いで、該プライマー対を用い、ヒト由来試料を鋳
型としてＰＣＲを行い、目的の各遺伝子断片を増幅させ
る。ＰＣＲの反応条件は通常使用される範囲で適宜選択
することができる。各遺伝子断片の増幅は別個に行って
も同時に行ってもよい。得られた増幅断片を適当なベク
ターにそれぞれサブクローニングし、マキサム・ギルバ
ート法やジデオキシ法を用いた通常のシーケンスにより
各多型部位の塩基配列を決定することができる。また、
サブクローニングすることなく直接サイクルシーケンス
法により配列決定することもできる。
【００１８】ＳＳＯＰ法は、多型部位を含む約１５〜約
１００塩基の、一方の対立遺伝子配列に完全相補的なプ
ローブを作製し、ハイブリダイゼーション温度を厳密に
制御しながらヒト由来試料から抽出したゲノムＤＮＡと
サザンハイブリダイゼーションを行い、ハイブリッド形
成の有無により遺伝子多型を判別する方法である。ハイ
ブリダイゼーションは各遺伝子について別個に行って
も、あるいは同時に行ってもよい。但し、本発明におい
て測定される３つの遺伝子の多型はいずれも１塩基置換
であるのでミスマッチを含むプローブとの交叉反応を防
ぐためにはハイブリダイゼーション条件を高度に制御す
る必要がある。また、ミスマッチによる不安定化効果を
最大限にするために、プローブの中央付近に多型部位が
存在するようにプローブを設計することが望ましい。好
ましい変法として、ハイブリダイゼーションに先立って
多型部位を含む断片をＰＣＲで増幅しておくＰＣＲ−Ｓ
ＳＯＰ法が挙げられる。また、両方の対立遺伝子に完全
相補的な２つのプローブを作製し、その一方のみを標識
して両者共存下にハイブリダイゼーションを行う競合的
ハイブリダイゼーション法は、ハイブリダイゼーション
条件を厳密に制御することなく１塩基置換を判別するこ
とができる。
１００塩基の、一方の対立遺伝子配列に完全相補的なプ
ローブを作製し、ハイブリダイゼーション温度を厳密に
制御しながらヒト由来試料から抽出したゲノムＤＮＡと
サザンハイブリダイゼーションを行い、ハイブリッド形
成の有無により遺伝子多型を判別する方法である。ハイ
ブリダイゼーションは各遺伝子について別個に行って
も、あるいは同時に行ってもよい。但し、本発明におい
て測定される３つの遺伝子の多型はいずれも１塩基置換
であるのでミスマッチを含むプローブとの交叉反応を防
ぐためにはハイブリダイゼーション条件を高度に制御す
る必要がある。また、ミスマッチによる不安定化効果を
最大限にするために、プローブの中央付近に多型部位が
存在するようにプローブを設計することが望ましい。好
ましい変法として、ハイブリダイゼーションに先立って
多型部位を含む断片をＰＣＲで増幅しておくＰＣＲ−Ｓ
ＳＯＰ法が挙げられる。また、両方の対立遺伝子に完全
相補的な２つのプローブを作製し、その一方のみを標識
して両者共存下にハイブリダイゼーションを行う競合的
ハイブリダイゼーション法は、ハイブリダイゼーション
条件を厳密に制御することなく１塩基置換を判別するこ
とができる。
【００１９】ＭＡＳＡ法は、多型部位を含む約１５〜約
４０塩基の、一方の対立遺伝子配列に完全相同的（また
は完全相補的）なオリゴＤＮＡを一方のプライマーとし
て合成し、アニーリング温度を厳密に制御しながらヒト
由来試料を鋳型としてＰＣＲを行い、増幅産物の存在の
有無により遺伝子多型を判別する方法である。該方法も
上記と同様、交叉反応を防ぐためにＰＣＲの条件を高度
に制御する必要があるが、自動サーマルサイクラー中で
反応を行えば、比較的に容易に正確な判別が可能であ
る。
４０塩基の、一方の対立遺伝子配列に完全相同的（また
は完全相補的）なオリゴＤＮＡを一方のプライマーとし
て合成し、アニーリング温度を厳密に制御しながらヒト
由来試料を鋳型としてＰＣＲを行い、増幅産物の存在の
有無により遺伝子多型を判別する方法である。該方法も
上記と同様、交叉反応を防ぐためにＰＣＲの条件を高度
に制御する必要があるが、自動サーマルサイクラー中で
反応を行えば、比較的に容易に正確な判別が可能であ
る。
【００２０】上記（２）の方法としては、以下のＰＣＲ
−ＳＳＣＰ（single-strand conformation polymorphis
m ）法、ＰＣＲ−ＤＧＧＥ（denaturing gradient gel
electrophoresis ）法、ＰＣＲ−ＣＦＬＰ（cleavase
fragment length polymorphism ）法等が挙げられる。
これらの方法は、いずれも（１）のシーケンス法と同様
にして、多型部位を内部に含む適当な長さの各遺伝子断
片を増幅することを第一の工程として含む。
−ＳＳＣＰ（single-strand conformation polymorphis
m ）法、ＰＣＲ−ＤＧＧＥ（denaturing gradient gel
electrophoresis ）法、ＰＣＲ−ＣＦＬＰ（cleavase
fragment length polymorphism ）法等が挙げられる。
これらの方法は、いずれも（１）のシーケンス法と同様
にして、多型部位を内部に含む適当な長さの各遺伝子断
片を増幅することを第一の工程として含む。
【００２１】ＰＣＲ−ＳＳＣＰ法では、増幅産物を加熱
またはアルカリ処理等により一本鎖に変性する。一本鎖
に解離したＤＮＡ断片はその塩基配列に依存した独自の
高次構造を形成するので、これをポリアクリルアミドゲ
ル等の非変性ゲル上で電気泳動することにより、１塩基
置換の多型を移動度の差として検出することができる。
またはアルカリ処理等により一本鎖に変性する。一本鎖
に解離したＤＮＡ断片はその塩基配列に依存した独自の
高次構造を形成するので、これをポリアクリルアミドゲ
ル等の非変性ゲル上で電気泳動することにより、１塩基
置換の多型を移動度の差として検出することができる。
【００２２】ＰＣＲ−ＤＧＧＥ法では、増幅産物を変性
・再会合させた後、変性剤（ＳＤＳ、尿素、ホルムアミ
ドなど）の濃度勾配をつけた変性ゲル上で電気泳動す
る。１塩基置換の多型は、それを含むドメインの融解温
度（Ｔm ）を変化させるので、異なる変性剤濃度の位置
で部分解離し、その結果異なる移動度を示す。特に、ヘ
テロ接合体のＤＮＡの場合、変性・再会合により、野生
型および変異型のホモデュプレックスと、ミスマッチを
有する２種のヘテロデュプレックスとが生成されるの
で、４本のバンドが検出される。但し、最もＴm の高い
ドメイン中に変異を有する場合は移動度に差が生じな
い。その場合は、ＧＣクランプと呼ばれる約２０〜約５
０ｂｐのＧＣリッチな配列を５’側に付加すれば、その
部分が最もＴmの高いドメインになるので、多型を移動
度の差として検出することができる。
・再会合させた後、変性剤（ＳＤＳ、尿素、ホルムアミ
ドなど）の濃度勾配をつけた変性ゲル上で電気泳動す
る。１塩基置換の多型は、それを含むドメインの融解温
度（Ｔm ）を変化させるので、異なる変性剤濃度の位置
で部分解離し、その結果異なる移動度を示す。特に、ヘ
テロ接合体のＤＮＡの場合、変性・再会合により、野生
型および変異型のホモデュプレックスと、ミスマッチを
有する２種のヘテロデュプレックスとが生成されるの
で、４本のバンドが検出される。但し、最もＴm の高い
ドメイン中に変異を有する場合は移動度に差が生じな
い。その場合は、ＧＣクランプと呼ばれる約２０〜約５
０ｂｐのＧＣリッチな配列を５’側に付加すれば、その
部分が最もＴmの高いドメインになるので、多型を移動
度の差として検出することができる。
【００２３】ＰＣＲ−ＣＦＬＰ法は、増幅産物を加熱ま
たはアルカリ処理等により一本鎖に変性し、さらにclea
vaseと呼ばれるヘアピン構造を認識して切断する酵素で
処理した後、ゲル電気泳動を行う方法であり、多型によ
るヘアピン構造の有無またはヘアピン形成部位の相違を
バンドの数および／または移動度の差として検出するこ
とができる。
たはアルカリ処理等により一本鎖に変性し、さらにclea
vaseと呼ばれるヘアピン構造を認識して切断する酵素で
処理した後、ゲル電気泳動を行う方法であり、多型によ
るヘアピン構造の有無またはヘアピン形成部位の相違を
バンドの数および／または移動度の差として検出するこ
とができる。
【００２４】上記（３）の方法も、迅速且つ簡便に遺伝
子多型を測定できるので好ましい。このような方法とし
ては、ＲＦＬＰ法、ＰＣＲ−ＲＦＬＰ法等が挙げられ
る。
子多型を測定できるので好ましい。このような方法とし
ては、ＲＦＬＰ法、ＰＣＲ−ＲＦＬＰ法等が挙げられ
る。
【００２５】ＲＦＬＰ法は、ヒト由来試料から単離した
ゲノムＤＮＡを、一方の遺伝子多型を多型部位で切断し
得る制限酵素（さらに必要に応じて、該多型部位の上流
および下流の適当な部位でゲノムＤＮＡを切断し得る他
の制限酵素）で消化し、当該遺伝子の部分配列または全
配列をプローブとしてサザンハイブリダイゼーションを
行い、バンドの長さおよび数に基づいて多型を判別する
方法である。本発明においては、ＶＤＲ遺伝子の分析に
はBsm I が、ＥＲ遺伝子の分析にはXba I が、ＡｐｏＥ
遺伝子の分析にはHha I がそれぞれ使用される。
ゲノムＤＮＡを、一方の遺伝子多型を多型部位で切断し
得る制限酵素（さらに必要に応じて、該多型部位の上流
および下流の適当な部位でゲノムＤＮＡを切断し得る他
の制限酵素）で消化し、当該遺伝子の部分配列または全
配列をプローブとしてサザンハイブリダイゼーションを
行い、バンドの長さおよび数に基づいて多型を判別する
方法である。本発明においては、ＶＤＲ遺伝子の分析に
はBsm I が、ＥＲ遺伝子の分析にはXba I が、ＡｐｏＥ
遺伝子の分析にはHha I がそれぞれ使用される。
【００２６】ＰＣＲ−ＲＦＬＰ法は、ＶＤＲ遺伝子、Ｅ
Ｒ遺伝子およびＡｐｏＥ遺伝子のそれぞれの多型部位を
内部に含む適当な長さの各遺伝子断片を増幅し得るよう
な特異的プライマー対を合成し、該プライマー対を用
い、ヒト由来試料を鋳型としてＰＣＲを行い、目的の各
遺伝子断片を増幅させた後、増幅産物について上記のＲ
ＦＬＰ法と同様の制限酵素処理を行い、ゲル電気泳動し
てバンドの長さおよび数から多型を判別する方法であ
る。また、ＰＣＲに先立って制限酵素処理を行えば、制
限酵素で切断されるＤＮＡは遺伝子増幅されないので、
バンドの有無により多型を判別することができる。
Ｒ遺伝子およびＡｐｏＥ遺伝子のそれぞれの多型部位を
内部に含む適当な長さの各遺伝子断片を増幅し得るよう
な特異的プライマー対を合成し、該プライマー対を用
い、ヒト由来試料を鋳型としてＰＣＲを行い、目的の各
遺伝子断片を増幅させた後、増幅産物について上記のＲ
ＦＬＰ法と同様の制限酵素処理を行い、ゲル電気泳動し
てバンドの長さおよび数から多型を判別する方法であ
る。また、ＰＣＲに先立って制限酵素処理を行えば、制
限酵素で切断されるＤＮＡは遺伝子増幅されないので、
バンドの有無により多型を判別することができる。
【００２７】上記のような本発明の多型分析により、ヒ
ト由来試料は、ＶＤＲ遺伝子、ＥＲ遺伝子およびＡｐｏ
Ｅ遺伝子の遺伝子多型の組み合わせに基づいて、[B(-)
X(-)4(-)], [B(-) X(-) 4(+)], [B(-) X(+) 4(-)], [B
(-) X(+) 4(+)], [B(+) X(-)4(-)], [B(+) X(-) 4(+)],
[B(+) X(+) 4(-)]および[B(+) X(+) 4(+)]に類別され
る。
ト由来試料は、ＶＤＲ遺伝子、ＥＲ遺伝子およびＡｐｏ
Ｅ遺伝子の遺伝子多型の組み合わせに基づいて、[B(-)
X(-)4(-)], [B(-) X(-) 4(+)], [B(-) X(+) 4(-)], [B
(-) X(+) 4(+)], [B(+) X(-)4(-)], [B(+) X(-) 4(+)],
[B(+) X(+) 4(-)]および[B(+) X(+) 4(+)]に類別され
る。
【００２８】本発明は、上記の遺伝子多型の組み合わせ
に基づいて、該ヒト由来試料が、複数の骨粗鬆症治療薬
に対する感受性において特定の優先性を示す個人由来の
ものであると予測することを特徴とする。本発明におい
て、複数の骨粗鬆症治療薬とは、好ましくはビタミン
Ｄ、エストロゲンおよびビタミンＫ2 である。また、こ
こで骨粗鬆症治療薬に対する感受性とは、治療薬の骨粗
鬆症治療効果の度合いの大きさを意味する。すなわち、
ある患者において薬剤Ａが薬剤Ｂよりも治療効果が高い
場合には、「その患者の薬剤Ａに対する感受性は薬剤Ｂ
に対する感受性に比べて高い」。本発明においては、薬
剤投与前後での骨塩量の変化率を感受性の指標とし、
［骨塩量変化率］−［期待骨塩量変化率］の値が大きい
程、その薬剤に対する感受性が高いと定義する。
に基づいて、該ヒト由来試料が、複数の骨粗鬆症治療薬
に対する感受性において特定の優先性を示す個人由来の
ものであると予測することを特徴とする。本発明におい
て、複数の骨粗鬆症治療薬とは、好ましくはビタミン
Ｄ、エストロゲンおよびビタミンＫ2 である。また、こ
こで骨粗鬆症治療薬に対する感受性とは、治療薬の骨粗
鬆症治療効果の度合いの大きさを意味する。すなわち、
ある患者において薬剤Ａが薬剤Ｂよりも治療効果が高い
場合には、「その患者の薬剤Ａに対する感受性は薬剤Ｂ
に対する感受性に比べて高い」。本発明においては、薬
剤投与前後での骨塩量の変化率を感受性の指標とし、
［骨塩量変化率］−［期待骨塩量変化率］の値が大きい
程、その薬剤に対する感受性が高いと定義する。
【００２９】本発明の分析方法では、ＶＤＲ遺伝子、Ｅ
Ｒ遺伝子およびＡｐｏＥ遺伝子の遺伝子多型の組み合わ
せが[B(-) X(-) 4(-)]および[B(+) X(-) 4(-)]の場合、
ビタミンＫ2 に対する感受性が、ビタミンＤに対する感
受性およびエストロゲンに対する感受性に比べて高い個
人由来の試料であると予測し、遺伝子多型の組み合わせ
が[B(-) X(-) 4(+)]の場合、ビタミンＤに対する感受性
が、ビタミンＫ2 に対する感受性およびエストロゲンに
対する感受性に比べて高い個人由来の試料であると予測
し、遺伝子多型の組み合わせが[B(-) X(+) 4(-)], [B
(-) X(+) 4(+)]および[B(+) X(+) 4(-)]の場合、エスト
ロゲンに対する感受性が、ビタミンＤに対する感受性お
よびビタミンＫ2 に対する感受性に比べて高い個人由来
の試料であると予測することを特徴とする。
Ｒ遺伝子およびＡｐｏＥ遺伝子の遺伝子多型の組み合わ
せが[B(-) X(-) 4(-)]および[B(+) X(-) 4(-)]の場合、
ビタミンＫ2 に対する感受性が、ビタミンＤに対する感
受性およびエストロゲンに対する感受性に比べて高い個
人由来の試料であると予測し、遺伝子多型の組み合わせ
が[B(-) X(-) 4(+)]の場合、ビタミンＤに対する感受性
が、ビタミンＫ2 に対する感受性およびエストロゲンに
対する感受性に比べて高い個人由来の試料であると予測
し、遺伝子多型の組み合わせが[B(-) X(+) 4(-)], [B
(-) X(+) 4(+)]および[B(+) X(+) 4(-)]の場合、エスト
ロゲンに対する感受性が、ビタミンＤに対する感受性お
よびビタミンＫ2 に対する感受性に比べて高い個人由来
の試料であると予測することを特徴とする。
【００３０】本発明はまた、上記の分析方法を実施する
のに有用なヒトゲノムＤＮＡ含有試料の遺伝子多型分析
用キットを提供する。本発明のキットは、ＶＤＲ遺伝子
を特異的に増幅し得るプライマー対、ＥＲ遺伝子を特異
的に増幅し得るプライマー対およびＡｐｏＥ遺伝子を特
異的に増幅し得るプライマー対、および／またはＶＤＲ
遺伝子と特異的にハイブリダイズし得る核酸プローブ、
ＥＲ遺伝子と特異的にハイブリダイズし得る核酸プロー
ブおよびＡｐｏＥ遺伝子と特異的にハイブリダイズし得
る核酸プローブを含む。
のに有用なヒトゲノムＤＮＡ含有試料の遺伝子多型分析
用キットを提供する。本発明のキットは、ＶＤＲ遺伝子
を特異的に増幅し得るプライマー対、ＥＲ遺伝子を特異
的に増幅し得るプライマー対およびＡｐｏＥ遺伝子を特
異的に増幅し得るプライマー対、および／またはＶＤＲ
遺伝子と特異的にハイブリダイズし得る核酸プローブ、
ＥＲ遺伝子と特異的にハイブリダイズし得る核酸プロー
ブおよびＡｐｏＥ遺伝子と特異的にハイブリダイズし得
る核酸プローブを含む。
【００３１】多型分析にシーケンス法、ＰＣＲ−ＳＳＯ
Ｐ法、ＰＣＲ−ＳＳＣＰ法、ＰＣＲ−ＤＧＧＥ法、ＰＣ
Ｒ−ＣＦＬＰ法等を用いる場合、各プライマー対は、多
型部位を内部に含む各遺伝子断片を増幅し得るように、
各遺伝子の多型部位よりも上流の配列と、多型部位より
も下流の配列と同一の塩基配列を有するオリゴヌクレオ
チドが使用される。一方、ＭＡＳＡ法を用いる場合は、
一方のプライマーは、各遺伝子の多型部位を含む領域に
完全相同的（＝センス）または完全相補的（＝アンチセ
ンス）な塩基配列を有するものである。
Ｐ法、ＰＣＲ−ＳＳＣＰ法、ＰＣＲ−ＤＧＧＥ法、ＰＣ
Ｒ−ＣＦＬＰ法等を用いる場合、各プライマー対は、多
型部位を内部に含む各遺伝子断片を増幅し得るように、
各遺伝子の多型部位よりも上流の配列と、多型部位より
も下流の配列と同一の塩基配列を有するオリゴヌクレオ
チドが使用される。一方、ＭＡＳＡ法を用いる場合は、
一方のプライマーは、各遺伝子の多型部位を含む領域に
完全相同的（＝センス）または完全相補的（＝アンチセ
ンス）な塩基配列を有するものである。
【００３２】また、多型分析にＲＦＬＰ法を用いる場
合、核酸プローブは各遺伝子の一部または全部の配列を
含むものであれば特に制限されず、多型部位の配列を必
ずしも含む必要はない。一方、多型分析にＳＳＯＰ法ま
たはＰＣＲ−ＳＳＯＰ法を用いる場合、核酸プローブ
は、各遺伝子の多型部位を含む領域の配列に完全相補的
な塩基配列を有するものである。
合、核酸プローブは各遺伝子の一部または全部の配列を
含むものであれば特に制限されず、多型部位の配列を必
ずしも含む必要はない。一方、多型分析にＳＳＯＰ法ま
たはＰＣＲ−ＳＳＯＰ法を用いる場合、核酸プローブ
は、各遺伝子の多型部位を含む領域の配列に完全相補的
な塩基配列を有するものである。
【００３３】本発明のキットは、本発明の分析方法を実
施するのに好適な各種試薬および／または器具等をさら
に含んでいてもよい。
施するのに好適な各種試薬および／または器具等をさら
に含んでいてもよい。
【００３４】
【実施例】以下、参考例および実施例を用いて、本発明
を詳細に説明する。
を詳細に説明する。
【００３５】参考例１ 無作為に選んだ閉経後の１７７人の日本人女性から血液
を採取し、血球細胞を分画して、常法によりゲノムＤＮ
Ａを抽出精製した。該ゲノムＤＮＡを鋳型とし、下記の
プライマー対を用いてＶＤＲ遺伝子断片、ＥＲ遺伝子断
片およびＡｐｏＥ遺伝子断片をそれぞれ別個に増幅し
た。 ＶＤＲ遺伝子断片増幅用プライマー： センス： 5'-CAACCAAGACTACAAGTACCGCGTCAGTGA-3' （配列番号１） アンチセンス：5'-AACCAGCGGGAAGAGGTCAAGGG-3' （配列番号２） ＥＲ遺伝子断片増幅用プライマー： センス： 5'-CTGCCACCCTATCTGTATCTTTTCCTATTCTCC-3' （配列番号３） アンチセンス：5'-TCTTTCTCTGCCACCCTGGCGTCGATTATCTGA-3' （配列番号４） ＡｐｏＥ遺伝子断片増幅用プライマー： センス： 5'-CGGGCACGGCTGTCCAAGGAG-3' （配列番号５） アンチセンス：5'-CACGCGGCCCTGTTCCACGAG-3' （配列番号６） ＰＣＲ条件は、ＶＤＲ遺伝子については、変性：９４
℃、６０秒；アニーリング：６２℃、６０秒；伸長：７
２℃、６０秒（３０サイクル）、ＥＲ遺伝子について
は、変性：９４℃、３０秒；アニーリング：６５℃、３
０秒；伸長：７２℃、３０秒（３０サイクル）、Ａｐｏ
Ｅ遺伝子については、変性：９４℃、３０秒；アニーリ
ング：６１℃、４０秒；伸長：７２℃、９０秒（３０サ
イクル）であった。このＰＣＲ増幅により、多型部位を
含む７．２ｋｂｐのＶＤＲ遺伝子断片、１．３ｋｂｐの
ＥＲ遺伝子断片および２４４ｂｐのＡｐｏＥ遺伝子断片
がそれぞれ得られる。ＶＤＲ遺伝子増幅反応液をBsm I
で、ＥＲ遺伝子増幅反応液をXba I で、ＡｐｏＥ遺伝子
増幅反応液をHha I でそれぞれ処理した後、アガロース
ゲル電気泳動にかけた。各増幅産物が多型部位において
制限酵素で切断される場合、ＶＤＲ増幅産物では４．６
ｋｂｐと２．６ｋｂｐ、ＥＲ増幅産物では９００ｂｐと
４００ｂｐ、ＡｐｏＥ増幅産物では７２、４８、３８、
３５、１９、１７および１５ｂｐのバンドが検出され
る。４型を持たない（すなわち、4(-)）場合は認められ
ない７２ｂｐのバンドが検出される。泳動終了後、エチ
ジウムブロマイドでゲルを染色し、バンドパターンから
ＶＤＲ、ＥＲおよびＡｐｏＥの遺伝子多型を判別し、８
つの多型群に類別した（表２）。
を採取し、血球細胞を分画して、常法によりゲノムＤＮ
Ａを抽出精製した。該ゲノムＤＮＡを鋳型とし、下記の
プライマー対を用いてＶＤＲ遺伝子断片、ＥＲ遺伝子断
片およびＡｐｏＥ遺伝子断片をそれぞれ別個に増幅し
た。 ＶＤＲ遺伝子断片増幅用プライマー： センス： 5'-CAACCAAGACTACAAGTACCGCGTCAGTGA-3' （配列番号１） アンチセンス：5'-AACCAGCGGGAAGAGGTCAAGGG-3' （配列番号２） ＥＲ遺伝子断片増幅用プライマー： センス： 5'-CTGCCACCCTATCTGTATCTTTTCCTATTCTCC-3' （配列番号３） アンチセンス：5'-TCTTTCTCTGCCACCCTGGCGTCGATTATCTGA-3' （配列番号４） ＡｐｏＥ遺伝子断片増幅用プライマー： センス： 5'-CGGGCACGGCTGTCCAAGGAG-3' （配列番号５） アンチセンス：5'-CACGCGGCCCTGTTCCACGAG-3' （配列番号６） ＰＣＲ条件は、ＶＤＲ遺伝子については、変性：９４
℃、６０秒；アニーリング：６２℃、６０秒；伸長：７
２℃、６０秒（３０サイクル）、ＥＲ遺伝子について
は、変性：９４℃、３０秒；アニーリング：６５℃、３
０秒；伸長：７２℃、３０秒（３０サイクル）、Ａｐｏ
Ｅ遺伝子については、変性：９４℃、３０秒；アニーリ
ング：６１℃、４０秒；伸長：７２℃、９０秒（３０サ
イクル）であった。このＰＣＲ増幅により、多型部位を
含む７．２ｋｂｐのＶＤＲ遺伝子断片、１．３ｋｂｐの
ＥＲ遺伝子断片および２４４ｂｐのＡｐｏＥ遺伝子断片
がそれぞれ得られる。ＶＤＲ遺伝子増幅反応液をBsm I
で、ＥＲ遺伝子増幅反応液をXba I で、ＡｐｏＥ遺伝子
増幅反応液をHha I でそれぞれ処理した後、アガロース
ゲル電気泳動にかけた。各増幅産物が多型部位において
制限酵素で切断される場合、ＶＤＲ増幅産物では４．６
ｋｂｐと２．６ｋｂｐ、ＥＲ増幅産物では９００ｂｐと
４００ｂｐ、ＡｐｏＥ増幅産物では７２、４８、３８、
３５、１９、１７および１５ｂｐのバンドが検出され
る。４型を持たない（すなわち、4(-)）場合は認められ
ない７２ｂｐのバンドが検出される。泳動終了後、エチ
ジウムブロマイドでゲルを染色し、バンドパターンから
ＶＤＲ、ＥＲおよびＡｐｏＥの遺伝子多型を判別し、８
つの多型群に類別した（表２）。
【００３６】上記のように多型分析を行った日本人女性
１７７人の骨塩量をそれぞれ測定した。次いで、これら
の患者にビタミンＤ3 、エストロゲンまたはビタミンＫ
2 のいずれかを６ヶ月間投与した。投与量はビタミンＤ
3 が１μｇ／日、エストロゲンが０．３１２ｍｇ／日お
よびビタミンＫ2 が４５ｍｇ／日であった。６ヶ月後に
再度骨塩量を測定し、薬剤投与前の骨塩量に対する変化
率を求めた。各遺伝子型別の平均骨塩量変化率から各薬
剤の治療効果期待値（無作為に抽出した患者に対する全
平均治療効果；表１）を差し引いた値を各遺伝子型にお
ける薬剤感受性とした。その結果を表２に示す。
１７７人の骨塩量をそれぞれ測定した。次いで、これら
の患者にビタミンＤ3 、エストロゲンまたはビタミンＫ
2 のいずれかを６ヶ月間投与した。投与量はビタミンＤ
3 が１μｇ／日、エストロゲンが０．３１２ｍｇ／日お
よびビタミンＫ2 が４５ｍｇ／日であった。６ヶ月後に
再度骨塩量を測定し、薬剤投与前の骨塩量に対する変化
率を求めた。各遺伝子型別の平均骨塩量変化率から各薬
剤の治療効果期待値（無作為に抽出した患者に対する全
平均治療効果；表１）を差し引いた値を各遺伝子型にお
ける薬剤感受性とした。その結果を表２に示す。
【００３７】
【表１】
【００３８】
【表２】
【００３９】表２から明らかなように、遺伝子型が[B
(-) X(-) 4(-)]および[B(+) X(-) 4(-)]の場合、ビタミ
ンＫ2 に対する感受性が、ビタミンＤに対する感受性お
よびエストロゲンに対する感受性に比べて高く、遺伝子
型が[B(-) X(-) 4(+)]の場合、ビタミンＤに対する感受
性が、ビタミンＫ2 に対する感受性およびエストロゲン
に対する感受性に比べて高く、遺伝子型が[B(-) X(+) 4
(-)], [B(-) X(+) 4(+)]および[B(+) X(+) 4(-)]の場
合、エストロゲンに対する感受性が、ビタミンＤに対す
る感受性およびビタミンＫ2 に対する感受性に比べて高
かった。
(-) X(-) 4(-)]および[B(+) X(-) 4(-)]の場合、ビタミ
ンＫ2 に対する感受性が、ビタミンＤに対する感受性お
よびエストロゲンに対する感受性に比べて高く、遺伝子
型が[B(-) X(-) 4(+)]の場合、ビタミンＤに対する感受
性が、ビタミンＫ2 に対する感受性およびエストロゲン
に対する感受性に比べて高く、遺伝子型が[B(-) X(+) 4
(-)], [B(-) X(+) 4(+)]および[B(+) X(+) 4(-)]の場
合、エストロゲンに対する感受性が、ビタミンＤに対す
る感受性およびビタミンＫ2 に対する感受性に比べて高
かった。
【００４０】実施例１ ある日本人の骨粗鬆症患者から血液を採取し、血球細胞
を分画して、常法によりゲノムＤＮＡを抽出精製する。
該ゲノムＤＮＡを鋳型とし、参考例１と同様の方法でＶ
ＤＲ遺伝子、ＥＲ遺伝子およびＡｐｏＥ遺伝子の多型を
分析する。得られた遺伝子型が[B(-) X(-) 4(-)]および
[B(+) X(-) 4(-)]の場合、該ゲノムＤＮＡは、ビタミン
Ｋ2 に対する感受性が、ビタミンＤに対する感受性およ
びエストロゲンに対する感受性に比べて高い個人由来の
ものであると判定し、遺伝子型が[B(-) X(-) 4(+)]の場
合、該ゲノムＤＮＡは、ビタミンＤに対する感受性が、
ビタミンＫ2 に対する感受性およびエストロゲンに対す
る感受性に比べて高い個人由来のものであると判定す
る。さらに、遺伝子型が[B(-) X(+) 4(-)], [B(-) X(+)
4(+)]および[B(+) X(+) 4(-)]の場合、該ゲノムＤＮＡ
は、エストロゲンに対する感受性が、ビタミンＤに対す
る感受性およびビタミンＫ2 に対する感受性に比べて高
い個人由来のものであると判定する。
を分画して、常法によりゲノムＤＮＡを抽出精製する。
該ゲノムＤＮＡを鋳型とし、参考例１と同様の方法でＶ
ＤＲ遺伝子、ＥＲ遺伝子およびＡｐｏＥ遺伝子の多型を
分析する。得られた遺伝子型が[B(-) X(-) 4(-)]および
[B(+) X(-) 4(-)]の場合、該ゲノムＤＮＡは、ビタミン
Ｋ2 に対する感受性が、ビタミンＤに対する感受性およ
びエストロゲンに対する感受性に比べて高い個人由来の
ものであると判定し、遺伝子型が[B(-) X(-) 4(+)]の場
合、該ゲノムＤＮＡは、ビタミンＤに対する感受性が、
ビタミンＫ2 に対する感受性およびエストロゲンに対す
る感受性に比べて高い個人由来のものであると判定す
る。さらに、遺伝子型が[B(-) X(+) 4(-)], [B(-) X(+)
4(+)]および[B(+) X(+) 4(-)]の場合、該ゲノムＤＮＡ
は、エストロゲンに対する感受性が、ビタミンＤに対す
る感受性およびビタミンＫ2 に対する感受性に比べて高
い個人由来のものであると判定する。
【００４１】
【発明の効果】本発明の分析方法によれば、投薬前に対
象となる患者がどの骨粗鬆症治療薬に対してより感受性
が高いかを高い確率で予測することができるので、適切
な薬剤の選択が可能となる。したがって、治療効果の乏
しい薬剤を長期間投与するという非効率的な治療を回避
することができ、患者のＱＯＬを向上することができる
点で極めて有用である
象となる患者がどの骨粗鬆症治療薬に対してより感受性
が高いかを高い確率で予測することができるので、適切
な薬剤の選択が可能となる。したがって、治療効果の乏
しい薬剤を長期間投与するという非効率的な治療を回避
することができ、患者のＱＯＬを向上することができる
点で極めて有用である
【００４２】
【配列表のフリーテキスト】配列番号１：多型部位を含
むＶＤＲ遺伝子の断片を増幅するためのプライマーとし
て働くべく設計されたオリゴヌクレオチド。 配列番号２：多型部位を含むＶＤＲ遺伝子の断片を増幅
するためのプライマーとして働くべく設計されたオリゴ
ヌクレオチド。 配列番号３：多型部位を含むＥＲ遺伝子の断片を増幅す
るためのプライマーとして働くべく設計されたオリゴヌ
クレオチド。 配列番号４：多型部位を含むＥＲ遺伝子の断片を増幅す
るためのプライマーとして働くべく設計されたオリゴヌ
クレオチド。 配列番号５：多型部位を含むＡｐｏＥ遺伝子の断片を増
幅するためのプライマーとして働くべく設計されたオリ
ゴヌクレオチド。 配列番号６：多型部位を含むＡｐｏＥ遺伝子の断片を増
幅するためのプライマーとして働くべく設計されたオリ
ゴヌクレオチド。
むＶＤＲ遺伝子の断片を増幅するためのプライマーとし
て働くべく設計されたオリゴヌクレオチド。 配列番号２：多型部位を含むＶＤＲ遺伝子の断片を増幅
するためのプライマーとして働くべく設計されたオリゴ
ヌクレオチド。 配列番号３：多型部位を含むＥＲ遺伝子の断片を増幅す
るためのプライマーとして働くべく設計されたオリゴヌ
クレオチド。 配列番号４：多型部位を含むＥＲ遺伝子の断片を増幅す
るためのプライマーとして働くべく設計されたオリゴヌ
クレオチド。 配列番号５：多型部位を含むＡｐｏＥ遺伝子の断片を増
幅するためのプライマーとして働くべく設計されたオリ
ゴヌクレオチド。 配列番号６：多型部位を含むＡｐｏＥ遺伝子の断片を増
幅するためのプライマーとして働くべく設計されたオリ
ゴヌクレオチド。
【００４３】
【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> NISSHO CORPORATION <120> Method for Expecting Sensitivity to Pharmaceutical Agent for Osteoporosis <130> A-3978 <160> 6 <210> 1 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotide designed to act as primer for amplifying VDR gene fragment containing polymorphic site. <400> 1 caaccaagac tacaagtacc gcgtcagtga 30 <210> 2 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotide designed to act as primer for amplifying VDR gene fragment containing polymorphic site. <400> 2 aaccagcggg aagaggtcaa ggg 23 <210> 3 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotide designed to act as primer for amplifying ER gene fragment containing polymorphic site. <400> 3 ctgccaccct atctgtatct tttcctattc tcc 33 <210> 4 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotide designed to act as primer for amplifying ER gene fragment containing polymorphic site. <400> 4 tctttctctg ccaccctggc gtcgattatc tga 33 <210> 5 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotide designed to act as primer for amplifying ApoE gene fragment containing polymorphic site. <400> 5 CGGGCACGGC TGTCCAAGGA G 21 <210> 6 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotide designed to act as primer for amplifying ApoE gene fragment containing polymorphic site. <400> 6 CACGCGGCCC TGTTCCACGA G 21
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 CA01 CA09 DA03 HA09 HA11 HA14 4B063 QA05 QA12 QQ02 QQ03 QQ08 QQ42 QQ60 QR14 QR55 QR62 QR66 QS16 QS25 QX01 4C086 AA01 AA02 DA08 DA14 ZA97 ZC78 4C206 AA01 AA02 CB28 ZA97 ZC78
Claims (7)
- 【請求項１】 ヒトから採取した試料中に含まれるゲノ
ムＤＮＡから、ビタミンＤ受容体遺伝子、エストロゲン
受容体遺伝子およびアポリポ蛋白Ｅ遺伝子のそれぞれの
遺伝子多型を分析し、これらの遺伝子多型の組み合わせ
に基づいて、該試料が複数の骨粗鬆症治療薬に対する感
受性において特定の優先性を示す個人由来のものである
と予測することを特徴とする骨粗鬆症薬剤感受性予測方
法。 - 【請求項２】 ビタミンＤ受容体遺伝子、エストロゲン
受容体遺伝子およびアポリポ蛋白Ｅ遺伝子の遺伝子多型
の組み合わせが、[B(-) X(-) 4(-)], [B(-)X(-) 4(+)],
[B(-) X(+) 4(-)], [B(-) X(+) 4(+)], [B(+) X(-) 4
(-)], [B(+)X(-) 4(+)], [B(+) X(+) 4(-)]および[B(+)
X(+) 4(+)]からなる群より選択されるいずれかである
請求項１記載の方法（ここで、B は第８エクソンと第９
エクソンの間のイントロン領域内でBsm I により切断さ
れないビタミンＤ受容体対立遺伝子を、X は第１エクソ
ンと第２エクソンの間のイントロン領域内でXba I によ
り切断されないエストロゲン受容体対立遺伝子を、4 は
ＡｐｏＥ4 型アポリポ蛋白Ｅ対立遺伝子をそれぞれ表
し、(+) および(-) はその対立遺伝子を有するおよび有
しないことをそれぞれ表している）。 - 【請求項３】 複数の骨粗鬆症治療薬がビタミンＤ、エ
ストロゲンおよびビタミンＫ2 である請求項１または２
記載の方法。 - 【請求項４】 ビタミンＤ受容体遺伝子、エストロゲン
受容体遺伝子およびアポリポ蛋白Ｅ遺伝子の遺伝子多型
の組み合わせが[B(-) X(-) 4(-)]および[B(+) X(-) 4
(-)]の場合、ビタミンＫ2 に対する感受性が、ビタミン
Ｄに対する感受性およびエストロゲンに対する感受性に
比べて高い個人由来の試料であると予測することを特徴
とする請求項３記載の方法。 - 【請求項５】 ビタミンＤ受容体遺伝子、エストロゲン
受容体遺伝子およびアポリポ蛋白Ｅ遺伝子の遺伝子多型
の組み合わせが[B(-) X(-) 4(+)]の場合、ビタミンＤに
対する感受性が、ビタミンＫ2 に対する感受性およびエ
ストロゲンに対する感受性に比べて高い個人由来の試料
であると予測することを特徴とする請求項３記載の方
法。 - 【請求項６】 ビタミンＤ受容体遺伝子、エストロゲン
受容体遺伝子およびアポリポ蛋白Ｅ遺伝子の遺伝子多型
の組み合わせが[B(-) X(+) 4(-)], [B(-) X(+) 4(+)]お
よび[B(+) X(+) 4(-)]の場合、エストロゲンに対する感
受性が、ビタミンＤに対する感受性およびビタミンＫ2
に対する感受性に比べて高い個人由来の試料であると予
測することを特徴とする請求項３記載の方法。 - 【請求項７】 ビタミンＤ受容体遺伝子を特異的に増幅
し得るプライマー対、エストロゲン受容体遺伝子を特異
的に増幅し得るプライマー対およびアポリポ蛋白Ｅ遺伝
子を特異的に増幅し得るプライマー対、および／または
ビタミンＤ受容体遺伝子と特異的にハイブリダイズし得
る核酸プローブ、エストロゲン受容体遺伝子と特異的に
ハイブリダイズし得る核酸プローブおよびアポリポ蛋白
Ｅ遺伝子と特異的にハイブリダイズし得る核酸プローブ
を含むことを特徴とするヒトゲノムＤＮＡ含有試料の遺
伝子多型分析用キット。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16564299A JP3684921B2 (ja) | 1999-06-11 | 1999-06-11 | 骨粗鬆症薬剤感受性予測方法 |
| AT00110219T ATE376066T1 (de) | 1999-05-18 | 2000-05-18 | Verfahren zur abschätzung der sensitivität für osteoporose-medikamente |
| DE60036750T DE60036750T2 (de) | 1999-05-18 | 2000-05-18 | Verfahren zur Abschätzung der Sensitivität für Osteoporose-Medikamente |
| EP00110219A EP1054066B1 (en) | 1999-05-18 | 2000-05-18 | Method for anticipating sensitivity to medicine for osteoporosis and a reagent therefor |
| US09/572,891 US6566064B1 (en) | 1999-05-18 | 2000-05-18 | Method for anticipating sensitivity to medicine for osteoporosis |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16564299A JP3684921B2 (ja) | 1999-06-11 | 1999-06-11 | 骨粗鬆症薬剤感受性予測方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000350600A true JP2000350600A (ja) | 2000-12-19 |
| JP3684921B2 JP3684921B2 (ja) | 2005-08-17 |
Family
ID=15816252
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP16564299A Expired - Fee Related JP3684921B2 (ja) | 1999-05-18 | 1999-06-11 | 骨粗鬆症薬剤感受性予測方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3684921B2 (ja) |
-
1999
- 1999-06-11 JP JP16564299A patent/JP3684921B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3684921B2 (ja) | 2005-08-17 |
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