JP2000500334A

JP2000500334A - ヒトｇｐ３９に対するヒト化抗体、それを含有する組成物およびその治療的使用

Info

Publication number: JP2000500334A
Application number: JP9518328A
Authority: JP
Inventors: ブラック，アメリア; ハンナ，ナビル; パドラン，エデュアルド・エイ; ニューマン，ローランド・エイ
Original assignee: アイデック・ファーマシューティカルズ・コーポレイション
Priority date: 1995-11-07
Filing date: 1996-11-07
Publication date: 2000-01-18
Also published as: NO324272B1; NO982062L; AU717762B2; US6506383B1; KR100389711B1; WO1997017446A2; NO982062D0; US6001358A; US7074406B2; EP0862630A2; EP0862630B1; DE69637131D1; HUP9902327A2; WO1997017446A3; KR19990067370A; US20030175269A1; ATE364699T1; HUP9902327A3; NZ324500A; US20060147446A1

Abstract

(57)【要約】本発明はヒトgp３９を結合するヒト化抗体類およびその治療剤としての使用に関する。これらのヒト化抗体類はとくに自己免疫疾患の治療に有用である。

Description

【発明の詳細な説明】ヒトgp39に対するヒト化抗体、それを含有する組成物およびその治療的使用発明の分野本発明は一部、ＮＩＨ助成金番号ＳＢＩＲフェーズＩ、プロジェクト番号1Ｒ4 3ＡＩ39326-01を受けて行われた。本発明は、ヒトgp39に特異的なヒト化抗体、それら抗体をコードするＤＮＡ、それらの製法、それらヒト化抗体を含有する医薬組成物、およびそれらの治療薬としての使用に関する。これらの抗体は特に、例えば慢性関節リウマチ、多発性硬化症、糖尿病および全身性エリテマトーデスなどを含む自己免疫疾患や、移植片対宿主病などを含む非自己免疫疾患の処置、ならびに移植拒絶の予防に応用される。発明の背景免疫系は外来抗原に対して２種類の抗原特異反応を生成することができる。細胞性免疫は、Ｔリンパ球によって媒介される免疫系のエフェクター機能を指すのに使用される用語である。体液性免疫は、Ｂリンパ球による抗原特異抗体の産生を指すのに使用される用語である。ほとんどの抗原に対する体液性免疫の発生には、抗体産生Ｂリンパ球だけでなく、ヘルパーＴ（以下Ｔh）リンパ球の関与も必要だということは、古くから認識されてきた（Ｍitchison，Ｅur.Ｊ.Ｉmmunol . ，1:18-25(1971); ＣlamanおよびＣhaperon，Ｔransplant Ｒev.，1:92-119(19 69); Ｋatzら，Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳＡ，70: 2624-2629(1973); Ｒaff ら，Ｎature，226:1257-1260(1970)）。胸腺依存性（以下ＴＤ）抗原による刺激に反応して、一定のシグナルまたは「ヘルプ」がＴh細胞によって与えられる。Ｂリンパ球ヘルプのいくつかはＴh細胞が放出する可溶性分子（例えばＩＬ-４やＩＬ-５などのリンホカイン）によって媒介されるが、Ｂ細胞の活性化には、Ｂ細胞とＴh細胞の接触依存的相互作用も必要である（Ｈirohataら，Ｊ.Ｉmmunol. ，140:3736-3744(1988); Ｂartlettら，Ｊ.Ｉmmunol.，143:1745-1765(1989)）。これは、Ｂ細胞とＴh細胞の細胞表面分子間の相互作用が、Ｂ細胞の活性化には必須であることを示している。このような相互作用は、活性化Ｔ細胞の単離原形質膜がＢ細胞活性化に必要なヘルパー機能を提供しうるという観察によって、さらに裏付けられる（Ｂrian，Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳＡ，85:564-568(1988); Ｈodgkinら，Ｊ.Ｉmmunol.，145:2025-2034(1990); Ｎoelleら，Ｊ.Ｉmmunol.， 146:1118-1124(1991)）。また「Ｔ細胞ヘルパー機能」と呼ばれる接触依存的プロセスでは、ＣＤ４⁺Ｔリンパ球がＢリンパ球の活性化と分化を指示し、抗体分子の特異性、分泌、およびイソタイプがコードする機能を調整することによって、体液性免疫反応を調節することも知られている（Ｍitchellら，Ｊ.Ｅxp.Ｍed.，128:821(1968); Ｍitc hison，Ｅur.Ｊ.Ｉmmunol.，1:68(1971); Ｗhiteら，Ｊ.Ｅxp.Ｍed.，14:664(19 78); Ｗhiteら，Ｊ.Ｅxp.Ｍed.，14:664(1978); Ｒeinherzら，Ｐroc.Ｎatl.Ａc ad.Ｓci.ＵＳＡ，74:4061(1978); Ｊanewayら，Ｉmmunol.Ｒev.，101:39(1988); Ｏ'Ｂrienら，Ｊ.Ｉmmunol.，141:3335(1988); Ｒahemtullaら，Ｎature，353: 180(1991); Ｇrusbyら，Ｓicence，253:1417(1991)）。Ｔ細胞がＢ細胞の分化を助けるプロセスは、性質の異なる２つの相、すなわち誘導相とエフェクター相に分けられている（Ｖittettaら，Ａdv.Ｉmmunol.，45: 1(1989); Ｎoelleら，Ｉmmunol.Ｔoday，11:361(1990)）。誘導相では、休止Ｔ細胞が抗原で初回刺激されたＢ細胞と接触し、その会合により、クロノタイプ（ clonotypic）Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）-ＣＤ４複合体がＢ細胞上のＩg/Ａg複合体と相互作用できるようになる（Ｊanewayら，Ｉmmunol.Ｒev.，101:39(1988) ; Ｋatzら，Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.，70:2624(1973); Ｚinkernagel，Ａdv.Ｅ xp.Ｍed. ，66:527(1976); Ｓprent，Ｊ.Ｅxp.Ｍed.，147: 1159(1978); Ｓprent ，Ｉmmunol.Ｒev.，42:158(1978); Ｊonesら，Ｎature，292: 547(1981); Ｊuli usら，Ｅur.Ｊ.Ｉmmunol.，18:375(1982); Ｃhestnutら，Ｊ.Ｉmmunol.，126:15 75(1981); Ｒogozinskiら，Ｊ.Ｉmmunol.，126:735(1984)）。Ｉa/ＡgのＴＣＲ/ ＣＤ４認識は、安定なＴ-Ｂコグネイト対の形成と双方向的なＴおよびＢ細胞の活性化をもたらす（Ｓandersら，Ｊ.Ｉmmunol.，137:2395(1986); Ｓnowら，Ｊ. Ｉmmunol. ，130:614(1983); Ｋrusemeierら，Ｊ.Ｉmmunol.，140:367(1988); Ｎ oelleら，Ｊ.Ｉmmunol.，143:1807 (1989); Ｂartlettら，Ｊ.Ｉmmunol.，143:1745(1989); Ｋupferら，Ａnnu.Ｒev .Ｉmmunol. ，7:309(1987)）。エフェクター相では、活性化Ｔ細胞が、リンホカインの分泌（Ｔhompsonら，Ｊ.Ｉmmunol.，134:369(1985)）と接触依存的刺激（Ｎoelleら，Ｊ.Ｉmmunol.，143:1807(1989); Ｃlementら，Ｊ.Ｉmmunol.，140:3 736(1984); Ｃrowら，Ｊ.Ｅxp.Ｍed.，164:1760(1986); Ｂrian，Ｐroc.Ｎatl. Ａcad.Ｓci.，ＵＳＡ，85:564(1988); Ｈirohataら，Ｊ.Ｉmmunol．140:3736(19 88); Ｊoverら，Ｃlin.Ｉmmunol.Ｉmmun.，53:90(1989); Ｗhalenら，Ｊ.Ｉmmun ol. ，141:2230(1988); Ｐollokら，Ｊ.Ｉmmunol.，146:1633(1991); Ｂartlett ら，Ｊ.Ｉmmunol.，143:1745(1990)）によって、Ｂ細胞の分化を推進する。Ｔ細胞が休止小Ｂ細胞をＩg分泌細胞に最終分化させるには、これらの両方が必要である（Ｃlementら，Ｊ.Ｉmmunol.，132:740(1984); Ｍartinezら，Ｎature，290 :60(1981); Ａnderssonら，Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.，ＵＳＡ，77:1612(1980) ）。Ｔ細胞ヘルプの誘導相はＡg依存性かつＭＨＣ限定的であるが（Ｊanewayら，Ｉmmun.Ｒev. ，101:34(1988); Ｋatzら，Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.，ＵＳＡ，10 :2624(1973); Ｚinkernagle，Ａdv.Ｅxp.Ｍed.Ｂiol.，66:527(1976)）、Ｔ細胞ヘルパー機能のエフェクター相はＡg非依存性かつＭＨＣ非限定的でありうる（Ｃlementら，Ｊ.Ｉmmunol.，132:740(1984); Ｈirohataら，Ｊ.Ｉmmunol.，140: 3736(1988); Ｗhalenら，Ｊ.Ｉmmunol.，143:1715(1988)）。Ｔ細胞ヘルプの誘導相がしばしばＣＤ４分子を必要とし、抗ＣＤ４mＡbによって阻害される（Ｒog ozinskiら，Ｊ.Ｉmmunol.，126:735(1984)）のに対して、ヘルパーエフェクター機能はＣＤ４分子を必要とせず（Ｆriedmanら，Ｃell Ｉmmunol.，103:105(1986 )）、抗ＣＤ４mＡbによって阻害されない（Ｂrian，Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.，ＵＳＡ，85:564(1988); Ｈirohataら，Ｊ.Ｉmmunol.，140:3736(1988); Ｗhalen ら，Ｊ.Ｉmmunol.，143:1745(1988); Ｔohmaら，Ｊ.Ｉmmunol.，146:2547(1991) ）ということも対照的な特徴である。この非特異的なヘルパーエフェクター機能は、抗原特異的なコグネイト対によるＴ-Ｂ細胞相互作用の局在性によって、特定のＢ細胞標的に集中するのだと考えられる（Ｂartlettら，Ｊ.Ｉmmunol.，143 :1745(1989); Ｋupferら，Ｊ.Ｅxp.Ｍed.，165:1565(1987); Ｐooら，Ｎature， 332:378(1988)）。最終Ｂ細胞分化は、Ｔ細胞からの接触媒介性刺激とリンホカイン媒介性刺激の両方を必要とするが、Ｂ細胞分化の中間段階は、分泌因子の不在下で、活性化Ｔ細胞表面によって誘導されうる（Ｃrowら，Ｊ.Ｅxp.Ｍed.，164:1760(1986); Ｂ rian，Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Sci.，ＵＳＡ，85:564(1988); Ｓekitaら，Ｅur.Ｊ. Ｉmmunol. ，18:1405(1988); Ｈodgkinら，Ｊ.Ｉmmunol.，145:2025(1990); Ｎoe lleら，ＦＡＳＥＢＪ,，5:2770(1991)）。Ｂ細胞に対するこれらの中間作用には、表面ＣＤ23発現の誘導（Ｃrowら，Ｃell Ｉmmunol.，121:94(1989)）、細胞周期の進行に関係する酵素（Ｐollokら，Ｊ.Ｉmmunol.，146:1633(1991)）、リンホカインに対する応答性（Ｎoelleら，ＦＡＳＥＢＪ.，5:2770(1989); Ｐollok ら，Ｊ.Ｉmmunol.，146:1633(1991)）が含まれる。最近、Ｂ細胞の活性化を指示する数種類の活性化誘導性（activation-induced）Ｔ細胞表面分子が同定された。また、機能研究により、Ｂ細胞活性化を指示する活性化誘導性Ｔ細胞表面分子の特性もいくつか特徴づけられた。第１に、Ｔ細胞は活性化の４〜８時間後にＢ細胞刺激能を獲得する（Ｂartlettら，Ｊ.Ｉmmunol.，145:3956(1990); Ｔohma ら，Ｊ.Ｉmmunol.，146:2544(1991)）。第２に、活性化Ｔ細胞の表面に付随するＢ細胞刺激活性は、パラホルムアルデヒド固定細胞（Ｎoelleら，Ｊ.Ｉmmunol. ，143:1807(1989); Ｃrosら，Ｊ.Ｅxp.Ｍed.，164:1760(1986); Ｐollokら，Ｊ. Ｉmmunol. ，146:1633(1991); Ｔohmaら，Ｊ.Ｉmmunol.，146:2544(1991); Ｋubo taら，Ｉmmunol.，72:40(1991)）と精製膜断片（Ｈodgkinら，Ｊ.Ｉmmunol.，14 5:2025(1990); Ｍartinezら，Ｎature，290:60(1981)）でも保存される。第３に、そのＢ細胞刺激活性はプロテアーゼ処理に対して感受性である（Ｎoelleら，Ｊ.Ｉmmunol. ，143:1807(1989); Ｓekitaら，Ｅur.Ｊ.Ｉmmunol.，18:1405(1988 ); Ｈodgkinら，Ｊ.Ｉmmunol.，145:2025(1990)）。第４に、Ｔ細胞活性化後にこれらの表面活性構造を獲得する過程はシクロヘキシミドによって阻害される（Ｔohmaら，Ｊ.Ｉmmunol.，196:2349(1991); Ｈodgkinら，Ｊ.Ｉmmunol.，195:20 25(1990)）。ＣＤ40は未熟および成熟Ｂリンパ球上に同定された細胞表面分子であり、抗体によって架橋されると、Ｂ細胞増殖を誘導する。Ｖalleら，Ｅur.Ｊ.Ｉmmuno.， 19:1463-1467(1989); Ｇordonら，Ｊ.Ｉmmunol.，140:1425-1467(1989); Ｇrude r ら，Ｊ.Ｉmmunol.，142:4144-4152(1989)。ＣＤ40は分子クローニングされ、特徴づけられている（Ｓtamenkovicら，ＥＭＢＯＪ. ，8:1403-1420(1989)）。ＣＤ40はＢ細胞、鉗合（interdigitating）樹状細胞、マクロファージ、濾胞性樹状細胞、および胸腺上皮に発現する（Ｃlark，Ｔissue Ａntigens 36:33(19 90); Ａldersonら，Ｊ.Ｅxp.Ｍed.，178:669(1993); Ｇalyら，Ｊ.Ｉmmunol.，1 42:772(1992)）。ヒトＣＤ40は50kＤaのＩ型膜タンパク質であり、神経成長因子受容体ファミリーに属する（Ｈollenbaughら，Ｉmmunol.Ｒev.，138:23(1994)）。ＩＬ-10の存在下でＣＤ40を介して起こる情報伝達は、ＩgＡ、ＩgＭおよびＩg Ｇ産生を誘導する。これは、イソタイプ転換がこれらの相互作用によって調節されることを示している。ＣＤ40とそのリガンドの間の相互作用は、Ｂ細胞の準備刺激状態をもたらし、そのＢ細胞は以降のシグナルに対して受容性になる。また、最近、ＣＤ40に対するリガンドgp39（ＣＤ40リガンドまたはＣＤ40Ｌともいう）が分子クローニングされ、特徴づけられた（Ａrmitageら，Ｎature，35 7:80-82(1992); Ｌederman，Ｊ.Ｅxp.Ｍed.，175:1091-1101(1992); Ｈollenbau ghら，ＥＭＢＯＪ.，11:4314-4319(1992)）。gp39タンパク質は活性化ＣＤ４⁺ Ｔh細胞には発現するが、休止ＣＤ４⁺Ｔh細胞には発現しない。Ｓpringgsら，Ｊ .Ｅxp.Ｍed. ，176:1543-1550(1992); Ｌaneら，Ｅur.Ｊ.Ｉmmunol.，22:2573-25 78(1992); Ｒoyら，Ｊ.Ｉmmunol.，151:1-14(1993)。gp39遺伝子でトランスフェクションされ、gp39タンパク質をその表面に発現させる細胞は、Ｂ細胞増殖を誘発することができ、また、他の刺激シグナルと共に、抗体産生を誘導することができる。Ａrmitageら，Ｎature，357:80-82(1992); Ｈollenbaughら，ＥＭＢＯＪ. ，11:4313.4319(1992)。具体的に述べると、ＣＤ40に対するリガンドgp39は、マウス（Ｎoelleら，Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳＡ，89:6550(1992); Ａrmi tageら，Ｎature，357:80(1992)）とヒト（Ｈollenbaughら，Ｅmbo Ｊ.，11:431 3(1992); Ｓpriggsら，Ｊ.Ｅxp.Ｍet.，176:1543(1992)）について同定されている。gp39はII型膜タンパク質であり、ＦＡＳ、ＣＤ27、ＣＤ30および４-１ＢＢのリガンドや、ＴＮＦ-α、ＴＮＦ-βを包含する新しい遺伝子スーパーファミリーの一部である。ＣＤ４⁺Ｔ細胞におけるgp39の発現は、抗ＣＤ３抗体またはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）+イオノマイシンを用いることにより、試験管内で容易に誘導することができる。発現は迅速かつ一過性で、６〜８時間後に極大に達し、24〜48時間でほぼ休止レベルに戻る（Ｒoyら，Ｊ.Ｉmmunol.，151:2497(1 993)）。生体内では、gp39が、脾臓の細動脈周辺リンパ球鞘とリンパ様濾胞の外套および中心細胞帯中のＣＤ⁺Ｔ細胞上に、ＣＤ40⁺Ｂ細胞を伴って存在することが、ヒトで報告されている（Ｌedermanら，Ｊ.Ｉmmunol.，149:3807(1992)）。g p39⁺Ｔ細胞はＩＬ-２、ＩＬ-４およびＩＦＮ-γを産生する（Ｖan der Ｅetwegh ら，Ｊ.Ｅxp.Ｍed.，178:1555(1993)）。Ｘ連鎖高ＩgＭ症候群（ＨＩＭ）というヒト疾患の研究によって、体液性免疫の調節に関するgp39の新しい役割についてユニークな洞察がなされている。ＨＩＭは胸腺依存性体液性免疫の喪失と、ＩgＧ、ＩgＡおよびＩgＥを生産できないことを特徴とする深刻なＸ連鎖免疫不全症である。gp39遺伝子中の突然変異が、非機能的gp39タンパク質の発現と、ＨＩＭ患者から得たヘルパーＴ細胞がＢ細胞を活性化できないことの原因だった（Ａllenら，Ｓcience，259:990(1993); Ａr uffoら，Ｃell，72:291(1993); ＤiＳantoら，Ｎature，361:541(1993); Ｋorth auerら，Ｎature，361:539(1993)）。これらの研究は、ペプチド/ＭＨＣクラスI I複合体がＴ細胞レセプターと連動すると間もなく、gp39がコグネイトヘルパーＴ細胞上に誘導され、Ｂ細胞上のＣＤ40に対するgp39の結合が、Ｂ細胞の細胞周期への移行と、免疫グロブリン（Ｉg）分泌およびイソタイプ転換への分化を誘導するという結論を裏付けている。マウスを抗gp39で処置すると、胸腺依存性抗原（ＳＲＢＣおよびＴＮＰ-ＫＬＨ）に対する抗体反応が完全に破壊されるが、胸腺非依存性抗原（ＴＮＰ-フィコール）に対する抗体反応は破壊されないことが、機能研究によって示されている（Ｆoyら，Ｊ.Ｅxp.Ｍed.，178:1567(1993)）。また、抗gp39による処置は、コラーゲンを注射したマウスにおけるコラーゲン誘発性関節炎（ＣＩＡ）の発生を予防した（Ｄurieら，Ｓcience，261:1328(1993)）。さらに、抗gp39は、マウス脾臓中のメモリーＢ細胞と胚中心の形成を妨害した（Ｆoyら，Ｊ.Ｅxp.Ｍed. ，180:157 (1994)）。総合すると、これらのデータは、Ｔ細胞上のgp39とＢ細胞上のＣＤ40 の間の相互作用が胸腺依存性抗原に対する抗体反応に必須であることの外延的証拠となる。最近、自己免疫疾患のマウスモデルをいくつか使用して、疾患の発症に対する抗gp-39投与の潜在的な治療的価値が評価されている。それらのモデルにおける試験結果に関して簡単な考察を以下に述べる。コラーゲン誘発性関節炎：ＣＩＡはヒトの自己免疫疾患である慢性関節リウマチ（ＲＡ）の動物モデルである（Ｔrenthornら，Ｊ.Ｅxp.Ｍed.，146:857(1977) ）。この疾患は、異種のII型コラーゲンを投与することにより、多くの種で誘発することができる（Ｃourtenayら，Ｎature，283:665(1980); Ｃathcartら，Ｌa b.Ｉnvest. ，54:26(1986)）。ＣＩＡの誘発に対する抗gp39の影響を調べるため（Ｄurieら，Ｓcience，261: 1328(1993)）、フロイント完全アジュバント中に乳化したニワトリII型コラーゲンを雄ＤＢＡ１/Ｊマウスの尾の根元に経皮注射した。次の抗原投与は21日後に行なった。次に、関連する対照抗体または抗gp39でマウスを処置した。抗gp39で処置されたマウス群は、免疫した非処置対照マウスに比べて、抗コラーゲン抗体価を示さなかった。組識学的分析によると、抗gp39抗体で処置されたマウスは、炎症の兆候や、免疫した動物に観察される疾患の典型的な病理組識学的症状を示さなかった。これらの結果は、gp39-ＣＤ40相互作用がＣＩＡの誘発には絶対的に必要であることを示している。Ｔ細胞とＢ細胞の間の最初のコグネイト相互作用が起こらないのであれば、自己抗体の形成やその結果起こる炎症反応などといった後続のプロセスは起こらない。最近、単球を活性化してＧＭ-ＣＳＦ、ＩＬ-３およびＩＦＮ-γの不在下にＴＮＦ-αとＩＬ-６を生産するのに、gp39が重要であることが示された（Ａlderso nら，Ｊ.Ｅxp.Ｍed.，178:669(1993)）。ＴＮＦ-αは、ＣＩＡ疾患プロセス（Ｔ horbeckeら，Ｅur.Ｊ.Ｉmmunol.，89:7375(1992)）とＲＡ（ＤiＧiovaneら，Ａn n.Ｒheum.Ｄis. ，47:68(1988); Ｃhuら，Ａrthrit.Ｒheum.，39:1125(1991); Ｂ rennanら，Ｅur.Ｊ.Ｉmmunol.，22:1907(1992)）に関連づけられている。したがって、抗gp39によるＴＮＦ-αの阻害は、関節炎マウスの関節で強い抗炎症作用を持つだろう。抗g p39によるＴＮＦ-αの阻害とＴ細胞-Ｂ細胞相互作用の阻害は、どちらもＣＩＡの発症に影響を与えるだろう。実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）：ＥＡＥは中枢神経系（ＣＮＳ）の実験的自己免疫疾患であり（Ｚamvilら，Ａnn.Ｒev.Ｉmmunol.，8:579(1990)）、ヒトの自己免疫状態である多発性硬化症（ＭＳ）の疾患モデルである（Ａlvord ら「Ｅxperimental Ａllergic Ｍodel for Ｍultiple Ｓclerosis（多発性硬化症の実験的アレルギーモデル）」ＮＹ511(1984)）。これは、ＣＮＳから精製されるミエリン塩基性タンパク質または脳炎惹起性プロテオリピド（ＰＬＰ）の免疫によって、哺乳類種に容易に誘発される。ＳＪＬ/Ｊマウスはマウスの感受性株（Ｈ-２^S）であり、ＥＡＥを誘発すると、これらのマウスは急性麻痺性疾患を発症し、急性の細胞浸潤がＣＮＳ内に確認できる。Ｃlassenとその共同研究者ら（未発表データ）は、ＳＪＬ/ＪマウスにおけるＥＡＥの誘発に対する抗gp39の影響を調べた。彼らは、抗-gp39処置動物で、ＥＡＥの発症が完全に抑制されることを発見した。また、抗ＰＬＰ抗体反応も、対照動物の場合と比較して、遅延し、減少した。ＥＡＥは、Ｔ細胞によって媒介される細胞性自己免疫疾患の一例であり、疾患の進行に自己抗体が必要であることを示す直接的証拠はない。gp39とＣＤ40の間の相互作用を妨害すると、疾患の誘発と疾患の養子移入が予防される。慢性（c）および急性（a）移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）：慢性および急性ＧＶＨＤは、ＭＨＣアレル不同性の宿主に対して反応するドナー細胞によって生じる。cＧＶＨＤ（Ｈ-２^d→Ｈ-２^bd）では、アロ特異性ヘルパーＴ細胞と宿主Ｂ細胞の相互作用により、ポリクローナル免疫グロブリン産生が増大する。抗gp39抗体の生体内投与により、cＧＶＨＤ誘発性血清抗ＤＮＡ自己抗体、ＩgＥ産生、試験管内での自発的免疫グロブリン産生、付随する脾腫が遮断され、また、疾患を転移させることができなくなった。Ｄurie Ｆ.Ｈ.ら，Ｊ.Ｃlin.Ｉnvest.，94:133 (1994)。抗体産生は、抗gp39投与の停止後、長期間にわたって、阻害されたままであった。抗同種異系細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）反応も、抗gp39の生体内投与によって予防された。これらのデータは、ＣＤ40-gp39相互作用が、どちらの形態のＧＶＨＤの発生にも重要な意味を持つことを示唆している。ＣＴＬ反応が阻害され、抗gp39による簡単な処置が疾患の長期予防をもたらしたという事実は、同種異系細胞と抗gp39抗体の同時投与による、Ｔ細胞区画の持続的変化を示唆している。様々な研究グループが、gp39に特異的なマウス抗体の生産を報告しており、それらが免疫抑制薬として治療的有用性を持つことを開示している。例えば、コロンビア大学に譲渡されたＷＯ93/09812（1993年５月27日公開）、ＥＰ0,555,880 （1993年８月18日公開）、Ｎoelleらが1994年９月２日に出願したＰＣＴＵＳ/9 4/09872（ダートマス大学に譲渡）には、gp39に特異的なマウス抗体とそれらの治療薬としての使用が記述されている。しかし、マウス抗体はヒトの治療薬としての応用できるが、それらはいくつかの点で不都合である。具体的に述べると、マウス抗体は、それらが異種由来であるという事実ゆえに、ヒトでは免疫原性を持ちうる。これはしばしば中和抗体反応をもたらし、それは、例えば慢性または再発性疾患状態の治療のように抗体を繰り返し投与することが望ましい場合には、特に問題となる。また、マウス抗体はマウス定常ドメインを含んでいるので、それらはヒトのエフェクター機能を発揮しないかもしれない。これらの問題を排除し、または軽減するための努力として、キメラ抗体が開示されている。キメラ抗体は（通例、２つの種に由来する）２種類の抗体の一部を含有する。通常、これらの抗体は、ヒト定常領域と、種の異なる（通例マウスの）可変領域とを含有する。例えば、親マウス抗体の結合特性とヒト定常領域に付随するエフェクター機能とを示すマウス/ヒトキメラ抗体がいくつか報告されている。例えばＣabillyら，米国特許第4,816,567号；Ｓhomakerら，米国特許第4, 978,745号；Ｂeaversら，米国特許第4,975,369号；Ｂossら，米国特許第4,816,3 97号を参照のこと（これらはすべて参考文献として本明細書の一部を構成する）。通常、これらのキメラ抗体は、既存のマウスハイブリドーマから抽出したＤＮＡからゲノム遺伝子ライブラリーを作成することによって構築される（Ｎishimuraら，Ｃancer Ｒesearch，47:999(1987)）。次に、正しい抗体断片再編成パターンを示す重鎖と軽鎖両方の可変領域遺伝子を得るために、そのライブラリーをスクリーニングする。別法として、ハイブリドーマから抽出したＲＮＡからcＤＮＡライブラリーを作成してスクリーニングするか、ポリメラーゼ連鎖反応によって可変領域を得る。次に、クローン化した可変領域遺伝子を、適当な重鎖または軽鎖ヒト定常領域遺伝子のクローン化カセットを含有する発現ベクターに連結する。次に、そのキメラ遺伝子を選択した細胞系（通常はマウス骨髄腫系）内で発現させる。このようなキメラ抗体は、ヒトの治療に使用されている。共通譲渡された出願（出願番号07/912,292）には、ヒト定常領域と旧世界ザル可変領域を含有する「Ｐrimatized^TM」抗体が開示されている。これらのＰrim atized^TM抗体は免疫原性が低い（または弱い）ことから、ヒトでも十分に許容される。また、当技術分野ではヒト化抗体も知られている。理想的には、「ヒト化」によって、元の分子の抗原結合特性を完全に保持する免疫原性の低い抗体が得られる。元の抗体の抗原結合特性をすべて保持するには、その結合部位の構造をその「ヒト化」型に忠実に再現する必要がある。これは（a）非ヒト可変ドメイン全体をヒト定常領域に移植してキメラ抗体を作成するか（Ｍorrisonら，Ｐroc.Ｎa tl.Ａcad.Ｓci.，ＵＳＡ，81:6801(1984); ＭorrisonおよびＯi，Ａdv.Ｉmmunol . ，44:65(1988); このキメラ抗体はリガンド結合特性を保存するが、同時に非ヒト可変ドメインの免疫原性をも保持する）、（b）非ヒトＣＤＲだけを、重要な枠組み構造残基と共に、またはそれらを伴わずに、ヒトの枠組み構造領域と定常領域に移植するか（Ｊonesら，Ｎature，321:522(1986); Ｖerhoeyenら，Ｓcien ce ，239:1539(1988)）、もしくは（c）非ヒト可変ドメイン全体を移植する（リガンド結合特性を保存するため）と共に、露出した残基を注意深く置換して、それらをヒト様表面で「おおい隠す（cloak）」（抗原性を減少させるため）ことによって（Ｐadlan，Ｍolec.Ｉmmunol.，28:489(1991)）、非ヒト抗体の結合部位をヒトの枠組みに移植すれば、達成できる可能性がある。本来、ＣＤＲ移植によるヒト化では、ヒトの枠組み構造領域と定常領域のヒト断片にＣＤＲだけを移植する。理論的には、これによって免疫原性は実質上除去されるはずである（アロタイプまたはイディオタイプの相違が存在する場合を除く）。しかし、元の抗体のいくつかの枠組み構造残基も保存する必要があると報告されている（Ｒiechmannら，Ｎature，332:323(1988); Ｑueenら，Ｐroc.Ｎat l.Ａcad.Ｓci.ＵＳＡ，86:10,029(1989)）。保存する必要がある枠組み構造残基は、コンピューターモデリングによって同定することができる。また、既知の抗体結合部位構造を比較することによっても、重要な枠組み構造残基を同定できる可能性がある（Ｐadlan，Ｍolec.Ｉmmun. ，31(3):169-217(1994)）。抗原結合に潜在的に影響する残基は、数種類のグループに分けられる。第１のグループは、結合部位表面に隣接し、それゆえに抗原と直接接触しうる残基からなる。これらには、アミノ末端残基とＣＤＲに隣接する残基が含まれる。第２のグループには、ＣＤＲまたはその反対鎖と接触することにより、ＣＤＲの構造または相対的配置を変化させるうる残基が含まれる。第３のグループは、可変ドメインの構造的整合性に影響を及ぼしうる、埋没した側鎖を持つアミノ酸からなる。採用した番号体系（Ｋabatら「Ｓequences of Ｐroteins of immunologicalin terst（免疫学的に重要なタンパク質の配列）」第５版，出版番号91.3242，米国保健社会福祉省，ＮＩＨ，メリーランド州ベセスダ，1991を参照のこと）によれば、これらのグループに属する残基は、通常、同じ位置に認められる（Ｐadlan ，1994，同上）。しかし、ヒト化抗体はヒトにおける免疫原性が潜在的に低いことから好ましいのであるが、その製造は予測不可能である。例えば抗体の配列を変更すると、抗原結合機能または結合特異性が実質的にもしくは完全に失われるかもしれない。また「ヒト化抗体」が、配列の変更にもかかわらず、ヒトにおいてなお免疫原性を示す可能性もある。したがって当技術分野では、今なお、望ましい抗原に対する新規ヒト化抗体が大いに必要とされている。より具体的に述べると、当技術分野では、gp39に特異的なヒト化抗体が、その免疫治療薬としての可能性ゆえに、必要とされている。発明の目的この目標に向けて、ヒトgp39に特異的なヒト化抗体を提供することが本発明の目的である。より具体的に述べると、gp39に対するマウス抗体（具体的にはヒトgp39に結合する特異的マウス抗体24-31）に由来するヒト化抗体を提供することが、本発明の目的である。また、ヒトgp39に特異的なヒト化抗体を含有する医薬組成物を提供することも、本発明の目的である。より具体的な本発明の目的は、ヒトgp39に特異的に結合するマウス抗体24-31 由来のヒト化抗体を含有する医薬組成物を提供することである。本発明のもう１つの具体的目的は、gp39発現の調節および/またはgp39/ＣＤ40 結合相互作用の阻害によって治療できるヒト疾患状態（例えば、全身性エリテマトーデス、慢性関節リウマチ、多発性硬化症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、糖尿病などの自己免疫疾患あるいは移植片対宿主病や移植などの非自己免疫状態）の処置に、ヒトgp39に対するヒト化抗体を用いる方法を提供することである。さらに、ヒトgp39に対するヒト化抗体をコードする核酸配列を提供することも、本発明の目的である。より具体的な本発明の目的は、ヒトgp39抗原に特異的に結合するマウス抗体24 -31由来のヒト化抗体をコードする核酸配列を提供することである。本発明のもう１つの目的は、ヒトgp39に対するヒト化抗体（具体的には、ヒト gp39抗原に特異的に結合するマウス抗体24-31由来のヒト化抗体）を発現させるベクターを提供することである。発明の要旨最も一般的な態様として、本発明は、マウス24-31抗体のgp39抗原結合親和力の約10分の１以上、より好ましくは３分の１以上を保持している、かつ/または、例えばＴ細胞依存的抗体産生を測定するＢ細胞アッセイにおいてマウス抗体24 -31の試験管内機能活性の約10分の１以上、より好ましくは約３分の１以上を保持しているヒト化抗体に向けられる。より具体的に述べると、本ヒト化抗体は、24-31抗体の濃度の３倍を越えない濃度で、Ｂ細胞アッセイにおける試験管内機能活性が、その半最大効力の少なくとも10分の１、より好ましくは少なくとも約３分の１を保持している。さらに本発明は、マウス24-31抗体と同じエピトープに結合する、かつ/または、gp39に対するＣＤ40の結合の阻害に関してマウス24-31抗体と競争することができる、かつ/または、24-31抗体のＣＤＲを含有するヒト化抗体に向けられる。より好ましくは、本発明は、下記のヒト化可変軽鎖配列および/またはヒト化可変重鎖配列を持つ、マウス24-31由来のヒト化抗体ならびにその変異体および等価体に向けられる：および、次の群から選択されるヒト化可変重鎖配列：本発明におけるその変異体および等価体とは、上記ヒト化可変重鎖および/または可変軽鎖配列中のアミノ酸残基の１または数個が、置換、付加および/または欠失によって、gp39抗原結合親和力に実質上影響しないような形で変更されているヒト化免疫グロブリン配列を包含するものとする。具体的には、本発明は、保存的置換突然変異、すなわち類似するアミノ酸による１またはそれ以上のアミノ酸の置換を含有する変異体および等価体を包含する。例えば、保存的置換とは、同じ一般分類（例えば酸性アミノ酸または塩基性アミノ酸、中性アミノ酸）に属するアミノ酸の、同じ分類に属する別のアミノ酸による置換を表わす。保存的アミノ酸置換の意味するところは、当技術分野ではよく知られている。上記変異体および等価体は、好ましくは、親マウス24-31抗体のgp39抗原結合親和力の約10 分の１以上、より好ましくは約３分の１以上、よりこの好ましくはマウス24-31 抗体のgp39抗原結合親和力の約３分の１以上を保持しているだろう。さらに、上記変異体および等価体は、例えばＴ細胞依存的抗体産生を測定するＢ細胞アッセイにおいて、マウス抗体24-31の試験管内機能活性の10分の１以上、より好ましくは少なくとも約３分の１を保っているだろう。より好ましくは、これらの変異体および等価体は、例えばＴ細胞依存的抗体産生を測定するＢ細胞アッセイにおいて、マウス抗体24-31の試験管内機能活性の少なくとも約３分の１を保持しているだろう。より具体的には、これらの抗体は、親24-31抗体の濃度の約３倍を越えない濃度で、Ｂ細胞アッセイにおける試験管内機能活性が、その半最大効力を維持しているだろう。さらに本発明は、上記ヒト化抗体の発現をコードする核酸配列と、組換え宿主細胞におけるヒト化抗体の生産を可能にする発現ベクターにも向けられる。最も好ましい態様では、これらのＤＮＡ配列が、下記のヒト化可変重鎖および/またはヒト化可変軽鎖配列をコードするだろう：および、次の群から選択されるヒト化可変重鎖配列：本発明はさらに、上に定義した等価体および変異体をも包含する。さらに本発明は、gp39に特異的な上記ヒト化抗体の医薬としての使用に向けられる。本発明は、gp39発現の調節またはgp39/ＣＤ40相互作用の阻害によって治療できる疾患を処置するための、本ヒト化抗gp39抗体の使用にも向けられる。より具体的に述べると、本発明は、自己免疫疾患、例えば慢性関節リウマチ、多発性硬化症、糖尿病、全身性エリテマトーデスおよびＩＴＰを治療するための、gp 39に特異的な上記ヒト化抗体のヒト化抗体の使用にも向けられる。さらに本発明は、移植片対宿主病を含む非自己免疫障害を治療したり、移植片拒絶を抑制するための、gp39に対する本ヒト化抗体の使用にも向けられる。図面の簡単な説明図１は、24-31由来のヒト化抗体およびキメラ抗体を発現させるのに使用したＩＤＥＣ発現ベクターＮ５ＫＧ１を表わす。図２aは、ヒトＰＢＬを可溶性gp39-ＣＤ８、組換えヒトＩＬ-４およびマウス2 4-31抗体または対照マウスＩgＧ１モノクローナル抗体と接触させるＢ細胞増殖アッセイの結果であり、24-31抗体がgp39によって誘導されるＢ細胞増殖を阻害することを示している。図２Ｂは、固定化抗ＣＤ３で活性化したマイトマイシン処理Ｔ細胞を、ＩＧＤ⁺ Ｂ細胞と様々な濃度の24-31抗体の存在下に培養したものを用いる、Ｂ細胞分化アッセイの結果であり、24-31抗体がヒトＢ細胞によるＴ細胞依存的ポリクローナル抗体産生を阻害することを示している。図３は、非形質移入ＣＨＯ細胞とgp39トランスフェクタントのＦＡＣＳを表わす。図４は、ＶＬ＃１または好ましいヒト化可変軽鎖配列（１）と呼ばれる好ましいヒト化可変軽鎖配列（相補性決定領域を含む）に相当するアミノ酸配列とＤＮＡ配列である。図５は、ＶＬ＃２または好ましいヒト化可変軽鎖配列（２）と呼ばれる好ましいヒト化可変リガンド配列（相補性決定領域を含む）に相当するアミノ酸配列とＤＮＡ配列である。図６は、ＶＨ＃１または好ましいヒト可変重鎖配列（１）と呼ばれる好ましいヒト化可変重鎖配列（相補性決定領域を含む）に相当するアミノ酸配列とＤＮＡ配列である。図７は、24-31（非ヒト化）の可変軽鎖配列のアミノ酸配列とＤＮＡ配列である。図８は、24-31（非ヒト化）の可変重鎖配列のアミノ酸配列とＤＮＡ配列である。図９は、gp39発現ＣＨＯ細胞に対するマウス24-31、キメラ24-31およびヒト化 24-31抗体の結合を比較したものである。図10は、gp39発現ＣＨＯ細胞に対する24-31（ビオチン）とヒト化、mキメラおよび24-31の結合を比較した競争アッセイの結果を示す。図11は、マイトマイシンＣ処理Ｔ細胞の存在下で培養したＢ細胞によるヒトＩ gＭ産生に対する、マウス24-31と本発明のヒト化24-31抗体の影響を測定するアッセイの結果を示す。図12は、gp39発現ＣＨＯ細胞に対する本発明の２種類のヒト化抗体の結合を比較するアッセイの結果を示す。図13は、マウス24-31に関するスキャッチャードプロットである。図14は、ヒト化１型に関するスキャッチャードプロットである。図15は、ヒト化２型に関するスキャッチャードプロットである。図16は、gp39-ＣＤ８融合タンパク質存在下のＨ24-31.1のＦcＲＩ結合を示し、Ｈ24-31.1が、抗原と複合体化した場合にのみ、ＦcレセプターＩと結合することを示している。図17は、gp39-ＣＤ８融合タンパク質存在下のＨ24-31.1のＦcＲII結合を示し、Ｈ24-31.1が、抗原と複合体化した場合にのみ、ＦcレセプターIIと結合することを示している。図18は、アラマーブルーを用いた補体依存性細胞毒性を示し、Ｈ24-31.1が約0 .5μg/mlで細胞増殖の50％を阻害することを示している。図19は、gp39+ＣＨＯ結合型Ｈ24-31.1（ヒト化25.311型）のＣ１q結合の測定を示す。具体的には、様々な濃度のＨ24-31.1で標識したgp39+ＣＨＯ細胞を過剰量のヒトＣ１q（補体因子１）中で保温した後、ＦＩＴＣ標識ヤギ抗ヒトＣ１qと共に保温した。試料をフローサイトメトリーで分析することにより、Ｃ１qによる細胞の相対標識量を決定した。またこの図は、Ｃ１qによる細胞の標識が抗体濃度に依存したことと、Ｈ24-31.1 Ｆab断片（非Ｃ１q結合性）がＣ１qを結合しなかったことを示している。図20は、Ｔ細胞依存性リコール抗原に対するＴ細胞反応にＨ24-31.1が与える影響を示す。またこの図は、ＴＴ誘発性の増殖とＩＬ-２産生が≧１μg/mlＨ2 4-31.1で最大に（約40％）阻害されたことを示している。図21は、Ｔ細胞依存性Ｂ細胞分化に対するＨ24−31.1の影響を示す。この図は、Ｈ24-31.1がＴ細胞依存性ＩgＧ産生を１ng/mlで阻害（約85％）することをも示している。より高濃度で認められるＩgＧ産生の見かけ上の増大は、この試験がＨ24-31.1とＢ細胞によって生産される抗体とを識別できないことによる。図22は、Ｔ細胞依存性Ｂ細胞分化に対するＨ24-31.1 Ｆabの影響を示す。また、Ｔ細胞依存性Ｂ細胞ＩgＧ産生の抗gp39抗体阻害をも示している。さらにこの図は、完全なＨ24−31.1抗体とＦab断片とでは、ＩgＧ産生の阻害に相違がないことを示している。図23は、Ｔ細胞依存性リコール抗原に対する抗原特異Ｂ細胞反応の生成にＨ24 -31.1が与える影響を示す。試験管内で３日間、破傷風トキソイドで刺激したヒト脾細胞を、約１×10⁷細胞/ＳＣＩＤの濃度でＳＣＩＤマウスに移した。６日後、得られたhu-ＳＰＬ-ＳＣＩdマウスに、ＰＢＳ（第１群）または300μgのＨ24- 31.1（第１群および第２群）を注射した。翌日、そのＨu-ＳＰＬ-ＳＣＩＤすべてを、破傷風トキソイドで追加免疫した。第３群のマウスには、300μgのＨ24-3 1.1をそれぞれ３日の間隔でさらに２回注射した。様々な時点でそれらのマウスから採血し、ヒトＩgＧ抗破傷風トキソイド力価のレベルをＥＬＩＳＡによって測定した。またこの図は、Ｈ24-31.1の注射により、破傷風トキソイド特異反応の生成が約90％（第３群）阻害されたことを示している。全ヒトＩgＧのレベルは３群とも同等だった。図24は、可溶性gp39-ＣＤ８によるヒトＢ細胞の増殖を示す。４日間の増殖アッセイとして、様々な濃度のＣＤ８-gp39を濃縮ヒトＢ細胞＋ＩＬ-４と共に保温した。gp39-ＣＤ８を含まないＢ細胞＋ＩＬ-４培養中に得られたＣＰＭをバックグランドとして使用し、gp39-ＣＤ８で刺激した被検培養の総ＣＰＭから差引いた。ＰＷＭ＋ＩＬ-４と共に培養した細胞をＢ細胞増殖に関する陽性対照とした。ＣＰＭは３つずつ試験した試料の平均ＣＰＭを表わす。図25は、Ｈ24-31によるＢ細胞増殖の阻害を示す。４日間の増殖アッセイとして、様々な濃度のＨ24-31.1抗体を、ＩＬ-４（1000Ｕ/ml）および10μg/mlのg p39-ＣＤ８と共に培養したＢ細胞（１×10⁵）と共に保温した。ＰＷＭ＋ＩＬ-４と共に培養した細胞をＢ細胞増殖に関する陽性対照とした。ＣＰＭは３つずつ試験した試料の平均ＣＰＭを表わす。図26は、gp39に対するＣＤ40-Ｉg結合の、ヒト化型24-31による遮断を示す。またこの図は、マウス型およびヒト化型24-31がＣＤ40-Ｉgの結合を遮断することを示している。発明の詳細な説明本発明を説明する前に、本明細書で使用する一定の用語の定義を以下に述べる。ヒト化抗体−これは、親抗体の抗原結合特性を保持または実質上保持しているが、ヒトでの免疫原性が低い、非ヒト抗体（通例マウス）由来の抗体をいう。これは、（a）非ヒト可変ドメイン全体をヒト定常領域に移植してキメラ抗体を作成する方法、（b）非ヒトＣＤＲだけを、重要な枠組み構造残基と共に、またはそれらを伴わずに、ヒトの枠組み構造領域と定常領域に移植する方法、あるいは（c）非ヒト可変ドメイン全体を移植すると共に、表面残基の置換により、それらをヒト様区域で「おおい隠す」方法、を含む様々な方法によって達成することができる。これらの方法は、Ｊonesら，Ｍorrisonら，Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci. ，ＵＳＡ，81:6851-6855(1984); ＭorrisonおよびＯi，Ａdv.Ｉmmunol.，44:65- 92(1988); Ｖerhoeyenら，Ｓcience，239:1534-1536(1988); Ｐadlan，Ｍolec. Ｉmmun. ，28:489-498(1991); Ｐadlan，Ｍolec.Ｉmmun.，31(3):169-217(1994) に開示されており、これらはすべて参考文献として本明細書の一部を構成する。相補性決定領域またはＣＤＲ−本明細書で使用するＣＤＲという用語は、Ｋab atら（1991）が記述しているように、天然の免疫グロブリン結合部位の天然のＦ v領域の結合親和性と特異性を、全体として規定するアミノ酸配列を指す。枠組み構造領域−本明細書で使用するＦＲという用語は、ＣＤＲ間に挿入されているアミノ酸配列を指す。抗体のこれらの部分は、ＣＤＲを適当な配向に保持するのに役立つ（これにより、ＣＤＲは抗原を結合することができる）。定常領域−エフェクター機能を付与する抗体分子の部分。本発明では、マウス定常領域をヒト定常領域で置換する。本キメラまたはヒト化抗体の定常領域はヒト免疫グロブリンに由来する。重鎖定常領域は５つのイソタイプ：アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマまたはミューのいずれから選択してもよい。また、様々なサブクラス（例えば重鎖のＩgＧサブクラス）の重鎖は、異なるエフェクター機能の原因となるので、望ましい重鎖定常を選択することにより、所望のエフェクター機能を持つキメラ抗体を作成することができる。好ましい定常領域はガンマ１（ＩgＧ１）、ガンマ３（ＩgＧ３）およびガンマ４（ＩgＧ４）である。ガンマ１（ＩgＧ１）ハイソタイプのＦc領域がより好ましい。軽鎖定常領域はカッパ型でもラムダ型でもよいが、カッパ型のものが好ましい。キメラ抗体−これは（通例、種の異なる）２種類の抗体に由来する配列を含有する抗体である。もっとも典型的なキメラ抗体は、ヒト抗体断片およびマウス抗体断片（一般的にはヒト定常領域とマウス可変領域）からなる。免疫原性−ターゲティングタンパク質（targeting protein）または治療成分が、受容者に投与された時に（体液性または細胞性）免疫反応を誘発する能力の尺度。本発明は、本ヒト化抗体またはその断片の免疫原性に関係する。免疫原性が減少したヒト化またはキメラ抗体−これは、親抗体（例えば24-31 抗体）と比較して減少した免疫原性を示す抗体またはヒト化抗体を指す。親抗体の結合特性を実質上保持しているヒト化抗体−これは、当該ヒト化またはキメラ抗体の作成に使用した親抗体によって認識される抗原を特異的に結合する能力を保持しているヒト化またはキメラ抗体を指す。24-31の結合特性を実質上保持するヒト化またはキメラ抗体は、ヒトgp39に結合するだろう。このヒト化またはキメラ抗体は、好ましくは、親抗体と同じ抗原結合親和性（アフィニティーまたはアビディティー）を示すだろう。理想的には、この抗体の親和力は、親抗体の親和力の10％を下回らず、より好ましくは約30％を下回らないだろう。その親和力は、最も好ましくは、親抗体の50％を下回らないだろう。抗原結合親和力を検定する方法は当技術分野ではよく知られており、これには、半最大結合アッセイ、競争アッセイおよびスキャッチャード分析が含まれる。好適な抗原結合アッセイについては、本願で説明する。本発明は、ヒトgp39を結合する新規ヒト化モノクローナル抗体と、治療薬としてのそれらの使用に向けられる。さらに本発明は、該ヒト化抗体をコードする核酸配列ならびに組換え宿主細胞におけるそれらの発現にも向けられる。より具体的には、本発明は、ヒトgp39に特異的に結合するマウス抗体24-31由来のヒト化抗体に向けられる。マウス抗体24-31は、ヒトgp39に対して生じたマウス抗体であって、試験管内でも生体内でもgp39を機能的に不活化する。したがってこの抗体が持つ特性は、 gp39不活化および/またはgp39/ＣＤ40相互作用の調節または阻害が望ましい疾患の処置に有用であろう。具体的に述べると、そのような疾患には、例えば慢性関節リウマチ、多発性硬化症、ＩＴＰ、糖尿病、全身性エリテマトーデスなどの自己免疫疾患と、移植片対宿主病および移植片拒絶などの非自己免疫疾患が含まれる。しかし、マウス抗体24-31が持つ機能的特徴は、治療薬として有用でありうると同時に、潜在的に不都合な点もいくつか持っている。すなわち、これはネズミ由来の抗体であるので、ヒトでは免疫原性となる可能性がある。また、これはマウス定常配列を含有するので、ヒトエフェクター機能のすべてを示すとは思われないし、ヒトに投与した場合は、より迅速に浄化されるだろう。これらの不都合は、ある種の疾患状態または人の処置では問題にならないだろうが、処置する疾患が慢性または再発性である場合は、重大な問題となる。再発性または慢性疾患の例には、例えば宿主が継続的または慢性的に自己抗原に対する自己免疫反応を示す自己免疫疾患がある。したがって、マウス抗体24-31に付随するこのような不都合（すなわち、ヒトにおける潜在的な免疫原性とヒトエフェクター機能の減少）を緩和するため、本発明者らは、マウス24-31抗体の改良ヒト化誘導体を作成しようとした。それが本発明の目標であったのだが、所望した結果は、ありきたりの、あるいは予測可能なものではなかった。抗体をヒト化するには、変更すべきアミノ酸残基の注意深い選択と、その置換に使用する残基の賢明な選択が必要である。なぜなら、抗体可変領域の変更は、わずか数アミノ酸が関与するものであっても、抗原結合に本質的に有害な影響を与えるかもしれないからである。例えば、ヒト化抗体は、その親抗体と比較して、かなり減少した抗原親和力および/または抗原特性を示す可能性がある。上述のように、文献には、マウス抗体を含む抗体のヒト化法が種々報告されている。例えばＰadlan，Ｍolec.Ｉmmunol.，31(3):169.217(1994); Ｐadlan，Ｍo lec.Ｉmmunol. ，28:484-498(1991); ＭorrisonおよびＯi，Ａdv.Ｉmmunol.，44: 65-92(1988)を参照のこと（これらはすべてそのまま参考文献として本明細書の一部を構成する）。具体的に述べると、これらの方法には、ＣＤＲ移植によるヒト化（Ｊonesら，Ｎature，321:522-525(1986); Ｖerhoeyenら，Ｓcience，239: 1534-1539(1988)）や、非必須枠組み構造アミノ酸残基の選択と、適当な置換突然変異によるそれらの改変を伴う、Ｐadlan，Ｍolec.Ｉmmunol.，28:489(1991) およびＰadlan，Ｍolec.Ｉmmunol.，31;169(1994)のより適合度の高い方法がある。これらの文献は、そのまま参考文献として本明細書の一部を構成する。上述のように、ＣＤＲ移植技術は、成功する例もあるものの、結果として得られるヒト化抗体の親和性に本質的に有害な影響をあたえる可能性がある。これは、いくつかの枠組み構造残基が抗原結合に影響を及ぼすため、またはそれらが抗原結合に必須であって、少なくとも抗原結合に影響を及ぼすために起こると考えられる。我々の技術（Ｐadlan(1994)，同上）は、より洗練されている。なぜなら、我々の方法では、その分子の表面特性を可能な限りヒトのものに保ちながら、抗体結合部位の保存に重要だと我々が考えるマウス枠組み構造残基のみを残すからである。したがってこの技術には、親抗体の抗原結合特性を保持するヒト化抗体を作成する潜在能力がある。それゆえに、本発明者らは、ヒトgp39に特異的なマウス抗体24-31由来のヒト化抗体を得るための手段として、この技術を採用した。 24-31の可変領域のクローニング（下記実施例に詳述する）によって、24−31 抗体が使用するＶ_L配列とＶ_H配列（それぞれ図７と図８に示す）が同定された。配列決定の後、その可変領域をヒト化した。これは、上述のように、参考文献として本明細書の一部を構成するＰadlan(1994)（同上）の方法に実質上従って達成した。この方法は一般に、抗原結合特性の保存に重要だと我々が考える枠組み残基だけを残して、非ヒト枠組み構造をヒト枠組み構造残基で置換することからなる。理想的には、この方法論により、異種抗体の表面にヒト様の特徴が付与されて、その抗体の免疫原性が減少し、しかも、その抗原結合特性に影響を及ぼす内部残基と接触残基は保たれることになる。より具体的に述べると、図７および８に記載の24-31Ｖ_KおよびＶ_H配列を、公表された配列のヒト抗体（これを「鋳型」という）と比較することによってヒト化した。具体的には、次の配列を鋳型として24-31Ｖ_Kをヒト化した：（a）ＶＬ＃１については、ヒトＶ-カッパ・サブグループＩ配列（例えばＤＥＮなど）と、生殖系012（Ｃoxら，Ｅur.Ｊ.Ｉmmunol. 24:827-836(1994)を参照のこと）；ＶＬ＃２については、ヒトＶ-カッパ・サブグループＩＶ配列（例えばＬＥＮ）。これらの鋳型配列は知られており、Ｋabatら(1991)（同上）またはＧ enＢankに開示されている。 24-31Ｖ_H＃１は、次の配列を鋳型としてヒト化した：（a）ヒトＶ_HサブグループＩＶ配列58p２と、（b）（ＧenBank受入番号）Ｚ18320および生殖系３d75d（Ｓ.van der Ｍaarelら，Ｊ.Ｉmmunol.，150:2858-2868(1993)）。上記の鋳型可変重鎖抗体配列も知られており、Ｋabatら「Ｓequences of Ｐro tein of Ｉmmunological Ｉnterest」第５版，ＮＩＨ(1991)とＧenＢankに開示されている。これらの鋳型ヒト可変重鎖および軽鎖配列は、いくつかの異なる基準に基づいて選択した。具体的には、２-31全体との高度な配列類似性、および「重要な」残基（すなわちＶ_L：Ｖ_H界面に含まれると考えられる残基、相補性決定領域と接触している残基、もしくは内向きに位置している残基）における類似性が、この基準に含まれる。またこれらの鋳型は、24-31Ｆ_Vの静電荷が可能な限り多く保存されうるように、またグリシン、プロリンその他の、抗原結合に影響を及ぼすと考えられる特定のアミノ酸残基が保存されるように選択した。この方法論により、下記表１および表２に記載する、24-31抗体由来の好ましいヒト化Ｖ_LおよびＶ_H重鎖配列を得た。上述のように、本発明はさらに、これら好ましいヒト化配列の等価体および変異体、すなわちgp39結合に実質上影響を及ぼさない１またはそれ以上の保存的アミノ酸置換を含有するものをも包含する。相補性決定領域は、親（非ヒト化）24 -31抗体の全可変重鎖および軽鎖ＣＤＲ配列を記載した図７および８に認められる。これから分かるように、４つの好ましいヒト化枠組み配列を、Ｖ_H鎖とＶ_L鎖の両方に割り当てた。したがって、上述のヒト化Ｖ_HおよびＶ_L24−31配列を用いて合成できるヒト化24-31抗体は、保存的改変を含有する変異体および等価体を除いて、16種類考えられる。これらのヒト化可変重鎖および軽鎖配列を含有するヒト化24-31抗体は、組換え法によって得ることができる。上記好ましいヒト化可変配列の任意の組み合せを含有するヒト化配列は、ヒトgp39を結合するヒト化抗体をもたらすと期待される。さらに、これらの配列に基づいて、表１および表２に示した番号を用いて優先順位を付けると、次のようになると予想される：（１）＃１Ｖ_Lと＃１Ｖ_H（１型）（２）＃２Ｖ_Lと＃１Ｖ_H（２型）（３）＃１Ｖ_Lと＃２Ｖ_H（３型）（４）＃２Ｖ_Lと＃２Ｖ_H（４型）。上述のヒト化Ｖ_HおよびＶ_L配列は、例えば１またはそれ以上のさらなる置換修飾の導入や、他のアミノ酸の付加などによって、さらに改変することもできる。さらなる改変には、抗原（gp39）結合に有害な影響を及ぼさないものが選択されるだろう。例えば、本発明者らは、残基34、43、44及び68（Ｋabatの番号付与法（Ｋabatら（1991）（同上））に従う）の１つまたはそれ以上の置換による、Ｖ_H 鎖のさらなる改変を企図している。また、本発明者らは、Ｖ_L鎖の残基85の修飾を企図している。抗体結合部位の構造上の特徴から、これらの残基の修飾も抗原結合に有害な影響を与えないはずだと考えられる。さらに、１またはそれ以上の保存的アミノ酸置換の導入はgp39結合に有害な影響を与えないはずだと予想される。本ヒト化24-31Ｖ_HおよびＶ_L配列をよりよく説明するため、好ましいヒト化枠組み構造配列を下記の表３に示し、それらの配列を、鋳型ヒト可変重鎖および軽鎖枠組み構造配列、すなわちヒトＤＥＮＶＫ１、ヒトo12/Ｖ36生殖系、ヒトＬＥＮＶＫＩＶ、ヒト58p２、ヒトＺ18320およびヒト３d75d、ならびに非ヒト化マウス24-31Ｖ_HおよびＶ_L枠組み構造配列と比較する。ヒト化抗体を作成するには、上述のヒト化Ｖ_LおよびＶ_H配列をコードするＤＮＡ配列を合成する。上述のように、これら４種類のヒト化Ｖ_L配列と４種類のヒト化Ｖ_H配列を考慮すると、合成できるヒト化抗原結合部位は16種類考えられる。また、ヒト化Ｖ_Hの残基34、43、44および68とヒト化Ｖ_Lの残基85を他のアミノ酸残基で置換すること、および/または、保存的置換突然変異を組込むことを考慮すると、さらに多くのヒト化抗原結合部位が考えられる。２つの好ましいヒト化可変軽鎖配列（1）と（2）、および好ましいヒト化可変重鎖配列（1）を、その相補性決定領域および対応するＤＮＡ配列を含めて、それぞれ図４、５および６に示す。配列がわかっているタンパク質をコードするＤＮＡを合成する方法は、当技術分野ではよく知られている。それらの方法を使用して、本ヒト化Ｖ_LおよびＶ_H配列をコードするＤＮＡ配列を合成した後、組換え抗体の発現に適したベクター系でそれらを発現させる。これは、本ヒト化Ｖ_LおよびＶ_H配列がヒト定常ドメイン配列との融合タンパク質として発現し、それらが会合することによって機能的な（抗原結合性の）抗体が生じるベクター系なら、どのベクター系でも達成できる。組換え抗体、特にヒト化抗体の発現に適した発現ベクターと宿主細胞は、当技術分野ではよく知られている。以下は組換え免疫グロブリンの発現に適した方法とベクターの典型であり、これらは参考文献として本明細書の一部を構成する：Ｗeidleら，Ｇene，51:21-29 (1987); Ｄoraiら，Ｊ.Ｉmmunol.，13(12):4232-4241(1987); Ｄe Ｗaeleら，Ｅ ur.Ｊ.Ｂiochem. ，176:287-295(1988); Ｃolcherら，Ｃancer Ｒes.，49:1738-1 745(1989); Ｗoodら，Ｊ.Ｉmmunol.，145(a):3011-3016(1990); Ｂulensら，Ｅu r.Ｊ.Ｂiochem. ，195:235-242(1991); Ｂeggingtonら，Ｂiol.Ｔechnology，10: 169(1992); Ｋingら，Ｂiochem.Ｊ.，281:317-323(1992); Ｐageら，Ｂiol.Ｔec hnology ，9:54(1991); Ｋingら，Ｂiochem.Ｊ.，290:723-729(1993); Ｃhaudary ら，Ｎature，339:394-397(1989); Ｊonesら，Ｎature，321:522-525(1986); Ｍ orrisonおよびＯi，Ａdv.Ｉmmunol.，44:65-92(1988); Ｂenharら，Ｐroc.Ｎatl .Ａcad.Sci.ＵＳＡ，91:12051-12055(1994); Ｓingerら，Ｊ.Ｉmmunol.，150:28 44-2857(1993); Ｃootoら，Ｈybridoma，13(3):215-219(1994); Ｑueenら，Ｐro c.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳＡ，86:10029-10033(1989); Ｃaronら，Ｃancer Ｒes. ，32:6761-6767(1992); Ｃotomaら，Ｊ.Ｉmmunol.Ｍeth.，152:89-109(1992)。さらに、組換え抗体の発現に適したベクターは市販されている。機能的な免疫グロブリンを発現させうることが知られている宿主細胞は数多いが、なかでも、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＣＯＳ細胞、骨髄腫細胞などの哺乳類細胞、大腸菌などの細菌、サッカロミセス・セレビシェなどの酵母細胞などを例示することができる。これらのうちＣＨＯ細胞は、免疫グロブリンを効率よく発現、分泌させうることから、多くの研究者に使用されている。本質的に、ヒト化抗体の組換え発現は、２つの一般的方法のいずれかで行われる。第１の方法では、選択した定常領域に融合した重鎖可変配列と軽鎖可変配列の両方を発現させる単一のベクターで、宿主細胞をトランスフェクションする。第２の方法では、選択した定常領域に融合した可変重鎖配列または可変軽鎖配列のいずれかをそれぞれ発現させる２つのベクターで、宿主細胞をトランスフェクションする。ヒト定常ドメイン配列は当技術分野ではよく知られており、文献に報告されている。好ましいヒトＶ_L配列としては、カッパおよびラムダ定常軽鎖配列が挙げられる。好ましいヒト重鎖定常配列としては、ヒトガンマ１、ヒトガンマ２、ヒトガンマ３、ヒトガンマ４、および変化した効果または機能（例えば増大した生体内半減期や、減少したＦ_Cレセプター結合性など）を提供するそれらの突然変異型が挙げられる。ヒトガンマ４定常ドメインの好ましい修飾には、共通譲渡された代理人整理番号012712-165（1995年９月６日出願；これはそのまま参考文献として本明細書の一部を構成する）に記述されているようなＰおよび/またはＥ修飾（これらは、それぞれ、位置236のロイシンをグルタミン酸に変えることおよび/または位置22 9のセリンをプロリンに変えること（Ｋabat番号）を指す）がある。特に好ましいベクター系は、共通譲渡された米国出願番号08/476,237（1995年６月７日出願）、出願番号08/397,072（1995年１月25日出願）、08/147,696（19 93年11月３日出願）、07/977,691（1992年11月13日出願）、07/912,122（1992年７月10日出願）、07/886,281（1992年３月23日出願）、および07/735,064（1991 年７月25日出願）（これらはすべて、そのまま参考文献として本明細書の一部を構成する）に記述された発現ベクターからなる。具体的に述べると、これらの出願には、組換え抗体生産用のベクター系であって、下記からなるＴＣＡＥ5.2およびＴＣＡＥ６と呼ばれるものが記述されている：１）縦一列に並んだ次に挙げる４つの転写カセット：（a）ヒト免疫グロブリン軽鎖定常領域。ＴＣＡＥ5.2では、これがヒト免疫グロブリンカッパ軽鎖定常領域（Ｋabat番号アミノ酸108〜214、アロタイプＫm３）であり、ＴＣＡＥ６では、ヒト免疫グロブリン軽鎖ラムダ定常領域（Ｋabat番号アミノ酸108-215，遺伝子型Ｏzマイナス，Ｍcgマイナス，Ｋeマイナス，アロタイプ）。（b）ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域；どちらの構築物でも、このヒト免疫グロブリン重鎖は、ガンマ/定常領域（Ｋabat番号アミノ酸114-478，アロタイプＧ mla，Ｇm12）である。（c）ＤＨＦＲ；それ自身の真核プロモーターとポリアデニル化領域を含む。（d）ＮＥＯ；これもそれ自身の真核プロモーターとポリアデニル化領域を含む。２）上記ヒト免疫グロブリン軽鎖および重鎖カセットは、免疫グロブリン鎖分泌用の合成シグナル配列を含有する。３）上記ヒト免疫グロブリン軽鎖および重鎖カセットは、免疫グロブリン軽鎖および重鎖可変領域を挿入することが可能な特定のＤＮＡ結合であって、翻訳読み枠を保ち、かつ、免疫グロブリン鎖内に通常認められるアミノ酸を変化させないものを含有する。ＡＮＮＥＸ２ベクターは、ネオマイシンホスホトランスフェラーゼ（neo）開始コドンに２種類の修飾を含有するＴＣＡＥベクターの修飾体である。第１の修飾は、枠外上流翻訳開始部位（out of frame upstream translational start si te）が付加されていることである。第２の修飾は、neo遺伝子の開始部位が、その効率が低くなるように修飾されていることである。ＮＥＯＳＰＬＡベクターはＡＮＮＥＸ２ベクターの修飾体である。そのneo遺伝子は合成ドナー/アクセプタースプライス部位を用いて２つの部分に分けられており、軽鎖、重鎖およびＤＨＦＲ遺伝子がそのneoイントロンの内部に置かれている。これらのベクターはＣＨＯ細胞中で使用することが好ましい。本抗体は上述のベクター系で発現させることが好ましい。しかし、第24-31抗体に由来する本ヒト化抗体配列は、機能的抗体（すなわちg p39抗原を結合する抗体）を発現させるベクター系なら、どのベクター系で発現させてもよい。具体的に述べると、本発明者らは、ヒトカッパおよびヒトガンマ１定常領域を含有するＮ５ＫＧ１発現ベクターを用いて、ＣＨＯ細胞中で、本ヒト化Ｖ_LおよびＶ_H配列、ならびに24-31由来の天然（非修飾）Ｖ_LおよびＶ_H配列を発現させることにした。Ｎ５ＫＧ１発現ベクターの概略を図１に示す。ＣＨＯ細胞中で発現させると、この24-31由来のキメラ抗体は、期待通りgp39を結合する（ＣＨＯ- gp39トランスフェクタントに対する結合が立証されたことによる）。また、このベクター系を用いて、24-31由来の本発明ヒト化抗体をいくつか発現させたところ、機能的な（gp39結合性の）抗体が得られた。下記の実施例によって本発明をさらに説明する。これらの実施例は例示のために記載するのであって、限定を意図するものではない。実施例１ヒト化用24-31抗体の選択抗gp39の投与によって種々の自己免疫プロセスを予防され、同種異系移植片拒絶が妨害されることを示す証拠は、動物モデルで蓄積されつつある。これらの結果は、ヒトgp39に対する抗体がヒトの自己免疫疾患と同種異系組識および器官の移植の管理に有意義な治療的価値を持ちうることを示す説得力のある証拠となる。ヒトgp39に特異的なモノクローナル抗体（mＡb）は既に報告されており（Ｌed ermanら，Ｊ.Ｉmmunol.，199:3817(1992)）、gp39-ＣＤ40相互作用の遮断に関してその機能活性が調べられている。ヒト免疫系に対する抗gp39抗体の機能的影響をより深く洞察するために、一群の抗ヒトgp39mＡbを作成した。そのうちの１つが優れているように思われたので、そのmＡbをgp39の機能的不活化に関して試験管内と生体内で詳細に調べた。より具体的に述べると、ヒトgp39の可溶性融合タンパク質（gp39-ＣＤ８）で免疫した後、活性化ヒト末梢血Ｔ細胞で攻撃することにより、６種類のマウス（すべてＩgＧ１）抗gp39抗体を作成した。ヒト末梢血Ｔ細胞のフローサイトメトリー分析から、これらのmＡbは活性化（ＰＭＡ/イオノマイシン）ＣＤ３⁺Ｔ細胞上に発現した細胞表面分子を認識するが、休止ＣＤ3⁺Ｔ細胞上に発現した細胞表面分子を認識しないことと、反応性のパターンが組換えＣＤ40融合タンパク質（ＣＤ40-Ｉg）で認められるものと類似していることがわかった（非掲載データ）。[³⁵Ｓ]で代謝的に標識した活性化ヒト末梢血Ｔ細胞の免疫沈降により、これら６種類のmＡbがいずれも、ＣＤ40-Ｉgによって沈降する分子と類似するサイズ（ 33kＤa）の分子を沈降させることがわかった。さらに、gp39に対するＣＤ40-Ｉg の結合は、これら抗体の存在下で遮断された。これは同じ分子が認識されることを示し、これにより、それら抗体の特異性が確認される。６種類のmＡbはすべてgp39機能を遮断できたが、そのうちの１つ、24-31を詳細な分析のために選択した。実施例２Ｔ細胞依存性のＢ細胞増殖とＢ細胞分化（Ｉg産生）は抗gp39によって遮断されるＣＤ40を介してそのリガンドであるgp39によって送達される信号がＢ細胞の活性化、増殖、分化およびイソタイプ転換を誘発することは、多くの研究によって証明されている。抗gp39 24-31 mＡbがgp39機能を遮断するかどうかを決定するために、Ｂ細胞をgp39の可溶性融合タンパク質（gp39-ＣＤ８）と共に24-31の存在下または不在下で焙養し、Ｂ細胞の増殖応答を³Ｈ-チミジン取り込みによって評価した。その結果（図２Ａに記載）は、gp39-ＣＤ８がＢ細胞の活発な増殖を誘発したことを示している。抗gp39 24-31 mＡbの存在は、わずか2.5μg/mlの濃度で、gp39-ＣＤ８Ｂによって誘発されるＢ細胞増殖を完全に消失させた。24-31 がＴ細胞誘導性Ｂ細胞分化を妨害するかどうかを決定するため、Ｂ細胞を、24-3 1の存在下または不在下に、抗ＣＤ３活性化Ｔ細胞と同時培養した。ポリクローナルＩgＭ、ＩgＧおよびＩgＡ産生を12日後に評価した。図２Ｂに示すように、2 4-31の添加はポリクローナルＩgＭ、ＩgＧおよびＩgＡ抗体産生を阻害（90〜99 ％）した。これらの結果は、Ｔ細胞依存性Ｂ細胞分化にgp39-ＣＤ40相互作用が必要であることを証明した過去の報告（Ｎishiokaら，Ｊ.Ｉmmunol.，153:1027( 1994)）を追認するものであると共に、gp39機能の遮断に関する、新たに特徴づけられた抗ヒトgp39 24-31 mＡbの効用を立証するものでもある。実施例３抗gp39はヒトＰＢＬで再構成したscidマウスにおける破傷風トキソイド特異抗体の産生を生体内で遮断するヒト末梢血リンパ球を移植した重症複合免疫不全（scid）マウス（hu-ＰＢＬ-scid マウス）を使用することにより、ヒト免疫系を実験的条件下に生体内で研究できることは、数多くの研究によって証明されている（Ｍoslerら，Ｎature， 335:256(1988); ＭcＣuneら，Ｓcience，241:1632(1988); Ｄuchosalら，Ｃell Ｉmmunol. ，139:468(1992)）。scidマウスにヒトＰＢＬを注射することによって長期キメラ現象を達成することができ、hu-ＰＢＬ-scidマウスの生体内に抗原を投与すると、抗原特異的二次抗体反応が検出される（Ｃarlssonら，Ｊ.Ｉmmunol . ，139:468(1992)）。この系を利用して、ヒトＴおよびＢ細胞によって誘発される免疫応答に対する、生体内抗gp39投与の免疫抑制効果を調べた。図２Ｂに結果を示す実験では、24-31によるgp39機能の遮断が、ヒトＢ細胞による試験管内でのＴ細胞依存性ポリクローナルＩg産生を阻害することが立証された。24-31が抗原特異的Ｂ細胞抗体産生を生体内でも阻害しうるかどうかを決定するため、ヒトＰＢＬを腹腔内注射し（hu-ＰＢＬ-scid）かつ破傷風トキソイド（ＴＴ）で免疫したＣ.Ｂ-17 scid/scidマウスを、24-31またはＰＢＳで処置し、その二次（ＩgＧ）抗-ＴＴ抗体反応を評価した。hu-ＰＢＬ-scidをＴＴで免疫すると、免疫後14日以内に、ほとんどの動物でＩgＧ抗ＴＴ抗体が検出できるレベルになった（表４）。しかし、抗gp39（24-31；250μg/日，週２回）による処置は、試験した10匹のマウス中９匹で二次抗ＴＴ抗体反応を完全に消失させ、 gp39機能の生体内遮断が抗原特異的体液性反応の阻害をももたらすことが立証された。 ¹⁾抗gp39 24-31またはＰＢＳ（250μg/注射）を全実験期間中、毎週２回腹腔内投与した。²⁾ 血清中のヒト抗破傷風トキソイド抗体のレベルを毎週ＥＬＩＳＡによって決定した。1:10の希釈率で0.100 Ｏ.Ｄ.を超えるヒト抗破傷風トキソイド抗体の血清レベルを持つマウスは、すべて陽性とみなした。表に記載の平均±ＳＥ値の計算には陽性マウスのみを使用した。破傷風トキソイドで免疫しなかった免疫前マウスから得た血清中のヒト抗破傷風トキソイドのレベルは、0.02 Ｏ.Ｄ.未満だった。記載のデータは平均±ＳＥである。^* 抗gp39処置群と有意に相違（p＝0.222）^** 抗gp39処置群と有意に相違（p＜0.001）実施例４坑gp39処置は、hu-ＰＢＬ-scid脾細胞の抗原特異的Ｔ細胞増殖反応を阻害しない抗gp39によるhu-ＰＢＬ-scidマウスの処置が抗原特異的Ｔ細胞の反応性を変化させるかどうかを決定するため、ＴＴで免疫し24-31で処置したhu-ＰＢＬ-scid から得た脾細胞の増殖反応を試験管内で評価した。対照または抗gp39処置hu-ＰＢＬ-scidマウスの脾細胞をＴＴまたは培地のみと共に培養し、６日後に、その増殖反応を³Ｈ-チミジン取り込みによって評価した。そのような実験の一つの結果を表５に要約する。抗gp39で処置したhu-ＰＢＬ-scidマウスは、ＴＴによる試験管内刺激に対して、処置していないhu-ＰＢＬ-scidマウスと同様に反応した（反応したマウスは5/10と3/10）。ＮＯＤ/ＬtＳz-scid/scidマウスを受容動物とする実験でも、同様の結果が得られた。ただし、これらのマウスでは抗ＴＴ-抗体は検出できなかった（非掲載データ）。これらのデータは、抗gp39がhu-ＰＢＬ-scidマウスにおける抗原特異的Ｔ細胞の欠失または機能的不活化を引き起こさないことを示しており、抗gp39によるＴＴ特異的抗体反応の阻害がgp39-ＣＤ4 0相互作用とそれに続く（Ｔ細胞不活化ではなく）Ｂ細胞反応の遮断によるものであるという主張を裏付けている。 ¹⁾抗gp39 24-31またはＰＢＳ（250μg/注射）を全実験期間中、毎週２回腹腔内投与した。²⁾ ヒトＰＢＬを注射し破傷風トキソイドで免疫したマウスから得た脾細胞を、１ ×10⁵細胞/mlの濃度で、培地のみまたは破傷風トキソイド（2.5または5.0μg/ml ）の存在下に培養した。増殖は６日後に³Ｈ-チミジン取り込みによって評価した。刺激指数は、次の式によって計算した：Ｓ.Ｉ.＝cpm破傷風−cpm培地/cpm培地。2.0を超えるＳ.Ｉ.を陽性とみなした。実施例５ gp39 ＣＨＯトランスフェクタント細胞系の作成本願で提唱するヒト抗gp39 24-31結合試験用の試薬として使用するために、最近、細胞表面gp39を構成的に発現させるＣＨＯトランスフェクタントを作成した。完全長gp39遺伝子（Ｈollenbaughら，Ｉmmunol.Ｒev.，138:23(1994)）をフィトヘマグルチニン活性化ヒトＰＢＬのポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅し、それをＩＤＥＣのＩＮＰＥＰ４ベクター中、そのサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターおよびエンハンサー要素の転写制御下にクローニングした。ＣＨＯトランスフェクタントを樹立し、50nＭメトトレキセート中で増幅した。ＥＬＩＳＡ（非掲載データ）とＦＡＣＳ分析（図３）によって、そのトランスフェクタント50Ｄ４は細胞表面gp39を発現させることがわかった。このトランスフェクタントをmgp39 ＣＨＯ（膜結合型gp39形質移入ＣＨＯ細胞）ともいう。実施例６ＣＨＯ発現系を用いる抗体の高レベル発現ＩＤＥＣの特許Ｎ５ＫＧ１発現ベクターをＣＨＯ細胞中で使用して、ヒト化抗 gp39 24-31抗体を発現させる。このベクターの概略を図１に示す。このベクターおよび類似のベクターを使用すると、ＣＨＯ細胞内で常に、組換え抗体の高レベル発現が得られる。これらのベクターを用いると、かなりの数のＧ418耐性クローン（５〜10％）が、相当量の組換えタンパク質（１〜10mg/lの抗体）を発現させることがわかる。通常、これらは単プラスミドコピー成分であるが、メトトレキセートを用いて容易に増幅することができ、30〜100pg/細胞/日の分泌免疫グロブリンを与える。表６に、この系を用いてＣＨＯ細胞中で発現させた３種類の抗体の、遺伝子増幅前後に得られた抗体レベルを示す。実施例７ 24-31 Ｖ_LおよびＶ_HＤＮＡ配列のクローニング抗gp39 24-31 Ｖ_kおよびＶ_H遺伝子断片をクローン化し、配列決定した。それらの配列を分析した後、そのＶ領域遺伝子断片のヒト化型を設計した。対応するＤＮＡ配列を合成し、ヒト定常領域遺伝子を含有する高レベル発現ベクター中にクローニングした。次に、そのヒト化24-31抗体を産生するＣＨＯトランスフェクタントを樹立する。ヒト化型抗gp39抗体がそのgp39結合親和力を保持していることを確認するために、マウス抗体とヒト化抗体の相対的親和力を直接結合アッセイと競争アッセイで比較した。また、ヒト化24-31がgp39に対するＣＤ40結合を遮断し、Ｔ細胞依存性抗体産生を阻害する能力を調べる。１．24-31 Ｖ_kおよびＶ_H遺伝子断片のクローニングａ．cＤＮＡの調製：Ｉnvitrogen社のＭicro Ｆast Ｔrack^TMmＲＮＡ単離キットを使用し、その製造者のプロトコルに従って、各２×10⁶細胞の24-31ハイブリドーマとＮＳ１細胞系（Ｃarrollら，Ｍol.Ｉmmunol.，10:991(1988)；24-31ハイブリドーマの作成に使用した融合パートナー）から、ポリＡ⁺mＲＮＡを調製した。50pmolのオリゴdＴと５単位のＭ-ＭＬＶ逆転写酵素（Ｐromega）を用いて第一鎖cＤＮＡを合成し（Ｓambrookら，Ｍolecular Ｃloning: Ａ Laborator Ｍan ual ，２nd Ed.，Ｃold Ｓpring Ｈarbor Ｌaboratory Ｐress(1989)）、Ｓephad ex Ｇ-25クロマトグラフィーにかけた。ｂ．Ｖ_kおよびＶ_HcＤＮＡのＰＣＲ増幅：Ｖ_kまたはＶ_Hリーダー配列に特異的な一群の５'プライマーを３'定常領域プライマーと組み合わせて用いることにより、24-31 cＤＮＡとＮＳ１ cＤＮＡをＰＣＲで増幅した。この５'Ｖ_Hプライマー群は、ＪonesおよびＢendigが記述しているものと同一である（Ｂio/Ｔechnol . ，9:88(1991); Ｅrrata，Ｂio/Ｔechnol.，9:579(1991)）。増幅した遺伝子断片をＩＤＥＣのＮ５ＫＧ１発現ベクターに容易にクローニングできるよう、５' Ｖ_kプライマー群（Ｊonesら，同上）には、そのＳalＩクローニング部位認識配列（ＧＴＣＧＡＣ）をＢglII認識配列（ＡＧＡＴＣＴ）に変換する改良を施した（図１参照）。３'Ｖ_kおよびＶ_Hプライマーは、それぞれアミノ酸位置108〜109 （番号はＫabatら「Ｓequences of Ｐroteins of Ｉmmunological Ｉnterest」第５版，ＮＩＨ(1991)に従う）にＢsi ＷＩクローニング部位配列を、位置114〜 115にＮhe Ｉクローニング部位配列を含有し、次の配列を持つ：このプライマー群はすでに本譲受人が、Ｃ２ＢＢ抗ＣＤ20抗体（Ｎishiokaら，Ｊ.Ｉmmunol. ，153:1027(1994)）とその他多くのマウスＶ_kおよびＶ_H遺伝子断片（非掲載データ）の増幅およびクローニングに使用している。 24-31 Ｖ_kおよびＶ_H遺伝子断片の増幅に適したプライマー対を決定するために、 24-31 cＤＮＡを、上記Ｃ_kプライマーと組み合わせた11種類の５'Ｖ_kプライマーの１つまたは上記Ｃ_γ1プライマーと組み合わせた12種類の５_'Ｖ_Hプライマーの１つを含む23種類の反応で増幅した。比較のために、ＮＳ１ cＤＮＡを同じプライマー群で増幅した。Ｔaq ＤＮＡポリメラーゼ（Ｐerkin Ｅlmer）５単位、10m ＭＴris-ＨＣl（pＨ8.3）、50mＭＫＣl、1.5mＭＭgＣl₂、各0.25mＭのdＣＴＰ、dＧＴＰ、dＡＴＰおよびＴＴＰ、50pmolの３'定常領域プライマーおよび50pmo lの５'プライマーを含む100μlの最終容積中で、１μlのcＤＮＡ（cＤＮＡ試料の1/50）を増幅した。増幅サイクルは、95℃で１分間の変性、50℃で２分間のアニーリング、72℃で２分間の伸長からなり、これを34回繰返した。増幅産物をアガロースゲル電気泳動で分析した。Ｖ_kとＶ_Hについて唯一の増幅産物を与えた24 -31 ＰＣＲ反応を繰り返し、複製ＰＣＲ反応から得た産物をクローン化した。ＰＣＲ増幅産物をアガロースゲルで精製し（Ｓambrookら，Ｍolecular Ｃloning: ＡＬaboratory Ｍanual ，第２版(1989)）、Bgl IIとＢsi ＷＩ（Ｖ_kの場合）またはSal ＩとＮheＩ（Ｖ_Hの場合）で消化する。その生成物を、ＩＤＥＣのベクターＮ５ＫＧ１に順次連結する（Ａusubelら，Ｃurrent Ｐrotocols in Ｍolecu lar Ｂiology ，Ｖol.２，Ｇreene Ｐubl.Ａssoc.(1992)）。大腸菌ＸＬ１-blue細胞（Ｓtratagene）を形質転換した後、プラスミドＤＮＡを調製し、その複製構築物からＶ_k配列とＶ_H配列を得た（配列決定はＳcrippsＲ esearch Ｉnstitute Ｃore Ｆacility（カリフォルニア州ラジョラ）が行なった）。ＮＳ１融合パートナーの内因性軽鎖および重鎖の配列はわかっている（Ｃar rollら，Ｍol.Ｉmmunol.，10:991(1988); Ｋabatら，(1991)(同上)）ので、それらを用いて、24-31の増幅がもたらしたＰＣＲ産物と、ＮＳ１融合パートナーＶ領域の増幅がもたらしたＰＣＲ産物とを識別した。実施例８ヒト化24-31 Ｖ領域をコードする遺伝子断片の合成表１と表２にヒト化Ｖ_LおよびＶ_H（１）として示した最も好ましいヒト化24-3 1 Ｖ_kおよびＶ_H配列を含有するヒト化型を合成した。具体的には、上記ヒト化Ｖ_k およびＶ_H領域をコードする４対の重複相補オリゴヌクレオチド（オリゴ）を合成（Ｍidland Ｃhemicals）し、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で精製した（Ａusubelら，Ｃurrent Ｐrotocols in Ｍolecular Ｂiology，Ｖol.２，Ｇree ne Ｐubl.Ａssoc.(1992)）。各オリゴは約100塩基長で、隣接する相補オリゴヌクレオチドと20塩基ずつ重複している。Ｖ_kとＶ_Hの５'オリゴはそれぞれＢglII クローニング部位とＳalＩクローニング部位を含有し、３'オリゴはそれぞれＢs i ＷＩクローニング部位とＮheＩクローニング部位を含有する。各可変領域遺伝子断片を、次に示す方法（この方法はＷatsonら，Ｒecombinant ＤＮＡ，第２版，Ｓcientif.Ａmer.Ｂooks，ニューヨーク州ニューヨーク(1992)に要約されている）で、下に図解する合成オリゴから組立てた。相補オリゴ対（Ａ+Ｅ、Ｂ+Ｆ、Ｃ+Ｇ、Ｄ+Ｆ）を300pmolの各プライマーと、Ｔ４ポリヌクレオチドキナーゼ（Ｐromega）を用いて、その製造者のプロトコルに従ってキナーゼ処理した。そのオリゴを95℃に加熱し、室温まで冷却することによってアニールした。アニールしたオリゴ対を、６単位のＴ４ＤＮＡリガーゼ（Ｎew Ｅngland Ｂiolabs）を用いて連結した（Ａ/ＥとＢ/ＦおよびＣ/ＧとＤ/Ｈ）。適当な５'または３'クローニング部位制限エンドヌクレアーゼで消化した後、約200塩基対のＤＮＡ断片をポリアクリルアミドゲル電気泳動後の電気溶出によって精製した（Ｓambrookら，同上）。次に、その合成遺伝子断片を、ＩＤＥＣの特許高レベル発現ベクターＮ５ＫＧ１中、そのＣＭＶプロモーターおよびエンハンサー要素の制御下に挿入した。この連結反応は、ゲル精製した２つの断片（Ａ/Ｅ/Ｂ/ＦとＣ/Ｇ/Ｄ/Ｈ）とＮ５ＫＧ１をそれぞれ100:100:1のモル比で含有する。ＸＬ１-blue細胞を形質転換した後、プラスミドＤＮＡを調製し、合成遺伝子断片の配列を確認した。得られた構築物h24-31は、ヒト化24-31 Ｖ領域断片と、ヒトカッパおよびガンマ１定常領域をコードする。上述のように、この抗体は表１と表２に「（１）」配列として示したヒト化可変重鎖配列とヒト化可変軽鎖配列を含有し、これを１型またはＨ24-31.1と呼ぶ。これは、最適なgp39特性を持つヒト化抗体を与えると予想される。また、Ｖ_L＃２をＶ_H＃１と共に含有する構築物（２型ヒト化24-31またはＨ24-31.2）をも作成した。ＩＤＥＣの特許ベクターを用いた同様の構築物は、ＩＤＥＣの抗ＣＤ20抗体（Ｒeffら，Ｂlood，83:425(1994)）と抗ＣＤ-４抗体（Ｎewmanら，Ｂiol. Ｔechnology ，10:1455(1992)）の高レベル発現に使用されている。実施例９２．ヒト化24-31の生産と特徴づけａ．ヒト化24-31（１型および２型）を産生するＣＨＯトランスフェクタントの作成４×10⁶個のＣＨＯ細胞に直線型h24-31 ＤＮＡ（１型または２型）をエレクトロポレーションした後、Ｇ418で選択することにより、ヒト化24-31（１型または２型）を発現させるＣＨＯトランスフェクタントを作成した。Ｇ418耐性クローンから得た細胞培養上清を、ヤギ抗ヒトカッパを用いて免疫グロブリンを捕捉するサンドイッチＥＬＩＳＡによって、免疫グロブリン産生について検査した。免疫グロブリン結合は、ヒトＩgＧに特異的な西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合型ヤギ抗体と共に保温した後、ＨＲＰ基質（0.0175％Ｈ₂Ｏ₂を含むクエン酸緩衝液（９-34g/l Ｃ₆Ｈ₈Ｏ₇と14.2g/l Ｎa₂ＨＰＯ₄）pＨ5.0中の0.4mg/ml Ｏ-フェニレンジアミン(ＯＰＤ)）を加えることによって測定した。プレートは、Ｍelcular ＤiviＣes“Ｖmax，kinetic microplate reader”分光光度計を用いて490nmで読み取った。実施例10 ヒト化24-31によるgp39に対するＣＤ40-Ｉg結合の遮断ヒト化抗gp39がgp39に結合することを確認した後、そのヒト化抗gp39が、gp39 レセプターに対する当該リガンドの結合を遮断する能力を保持していることを確認するためのアッセイを行なう。そのために、活性化ヒト末梢血Ｔ細胞またはgp 39形質移入ＣＨＯ細胞50Ｄ４を、段階的濃度のマウス24-31またはヒト化１型または２型24-31で、４℃で15分間、前処理する。この前培養の後、ＣＤ40-Ｉg-ビオチンを加え、その結合をＰＥ-アビジンを用いてフローサイトメトリーによって測定する。図26は、１型がＣＤ40-Ｉgの結合を４μg/mlで50％減少させ、マウス24-31が約12μg/mlで結合を50％減少させ、２型が20μg/mlまたはそれ以上で結合を50％減少させることを示している。実施例11 24-31によるＢ細胞の増殖と分化の遮断マウス24-31がgp39機能を遮断することを確認するために、Ｂ細胞をgp39の可溶性融合タンパク質（gp39-ＣＤ８）と共に、ある用量範囲のマウス24-31またはヒト化24-31の存在下または不在下に培養する。Ｂ細胞増殖反応は、図２Ａに示すように、³Ｈ-チミジン取り込みによって評価する。Ｔ細胞依存性Ｂ細胞分化（Ｉg産生）は、gp39に対するmＡbによって遮断される。マウス24-31抗体が活性化ヒトＴ細胞の表面に発現した天然gp39の機能を遮断するのに有効であることを確認するために、本ヒト化24-31抗体がＴ細胞誘発性Ｂ細胞分化を阻害する能力を評価する。Ｂ細胞を、ヒト化24-31およびマウス2 4-31の存在下または不在下に、抗ＣＤ３活性化Ｔ細胞と共に同時焙養する。ポリクローナルＩgＭ、ＩgＧおよびＩgＡ産生を12日後に評価する（図２Ｂ参照）。これらの結果から、抗gp39 24-31がＣＤ40結合を遮断し、ＣＤ40を介したＴ細胞依存的なＢ細胞活性化を妨害することが確認される。実施例12 結合能この実験は、gp39抗原に対するマウス、キメラ、およびヒト化（１型）24-31 抗体の反応性を、その抗体濃度と関連づけて測定するために行なった。プロトコル：プレート調製１．50のポリ-l-リジンを96ウェルプレートの各ウェルに加える。室温で30分間保温する。プレートを振ってポリ-l-リジンを除く。２．mgp39-ＣＨＯ細胞（実施例５に記載の細胞表面膜gp39を発現させるチャイニーズハムスター卵巣細胞）を1500rpmで５分間の遠心分離によりＨＢＳＳで３回洗浄する。細胞をＨＢＳＳに２×10⁶細胞mlになるよう再懸濁する。３．50μlの細胞懸濁液を各ウェルに加え、プレートを2000rpmで５分間遠心分離する。４．50μl/ウェルの氷冷0.5％グルタルアルデヒドを加え、室温で15分間保温する。５．プレートを振り、紙などに吸い取ることによって、過剰のグルタルアルデヒドを除く。0.1％ＢＳＡを含む100mＭグリシン150μl/ウェルを加え、室温で30 分間保温する。プレートは直ちに使用してもよいし、後で使用するために、−20 ℃で凍結しておいてもよい。結合アッセイ１．プレートを融解し、グリシン緩衝液を除く。２．被検抗体を希釈緩衝液中に１μg/mlから連続希釈（1:2）する。50μg/ウェルの各希釈液を２つ一組で移す。室温で２時間保温する。３．水道水の流水中でプレートを10回洗浄する。４．ヤギ抗ヒトＩgＧＨＲＰまたはヤギ抗マウスＩgＧＨＲＰの1:2000希釈液を各ウェルに50μlずつ加える。５．水道水の流水中でプレートを10回洗浄する。６．50μl/ウェルのＡＢＴＳ基質を加え、プレートを20〜30分間発色させる。バックグランド波長を490nmとし、405nmの波長でプレートを読み取る。７．吸光度−抗体濃度のグラフをプロットする。結果と結論：抗体濃度と関連づけた３種類の抗gp39抗体（マウス型、キメラ型およびヒト化１型24-31）の結合能は、本質的に重ね合せることができた（図９参照）。これは、これらの抗体がヒトgp39に関して類似する結合能を持つことをよく示しており、ヒト化抗体がマウス24-31のgp39結合親和力を保持していることを表わしている。実施例13 ビオチン標識マウス24-31とキメラおよびヒト化１型24-31の競争 24-31とそのキメラ型およびヒト化型の結合の類似性を決定するべく、これらの誘導体がgp39に対する結合について元のマウス抗体と競争する能力を測定するための試験を行なった。過去の研究から、約200ng/mlの24-31で、結合が２/３飽和に達することが確認されている。本競争アッセイでは、この量を使用した。24 -31の直接結合だけを測定し、競争を24-31の結合の減少として測定するために、Ｈ24-31をビオチニル化した。様々な濃度のキメラ24-31型とヒト化24-31型を最終濃度200ng/mlのビオチニル化マウス24-31と混合し、グルタルアルデヒドでプレートに固定されたgp39+ＣＨＯ細胞で覆われたＥＬＩＳＡプレートのウェルに分配した。24-31結合は、アビジン-ＨＲＰを用いて下記のように測定した。プロトコル：プレート調製１．50のポリ-l-リジンを96ウェルプレートの各ウェルに加える。室温で30分間保温する。プレートを振ってポリ-l-リジンを除く。２．mgp39-ＣＨＯ細胞を1500rpmで５分間の遠心分離によりＨＢＳＳで３回洗浄する。細胞をＨＢＳＳに２×10⁶細胞/mlになるよう再懸濁する。３．50μlの細胞懸濁液を各ウェルに加え、プレートを2000rpmで５分間遠心分離する。４．50μl/ウェルの氷冷0.5％グルタルアルデヒドを加え、室温で15分間保温する。５．プレートを振り、紙などに吸い取ることによって、過剰のグルタルアルデヒドを除く。0.1％ＢＳＡを含む100mＭグリシン150μl/ウェルを加え、室温で30 分間保温する。プレートは直ちに使用してもよいし、後で使用するために、−20 ℃で凍結しておいてもよい。競争アッセイ１．プレートを融解し、グリシン緩衝液を除く。２．マウス抗gp39ビオチンを、１％ＢＳＡを含むＰＢＳ中に、200ng/mlの濃度で希釈する。３．被検抗体（マウス、キメラ、およびヒト化24-31）を希釈緩衝液中に10μg /mlから連続希釈（1:2）する。４．50μgの希釈被検抗体とマウス抗gp39ビオチンを、２つ一組にして各ウェルに移す。いくつかのウェルには、最大対照群として、50μlの希釈緩衝液とマウス抗gp39ビオチンを入れておくべきである。５．水道水の流水中でプレートを10回洗浄する。６．ストレプトアビジンＨＲＰの1:2000希釈液を各ウェルに50μlずつ加え、室温で１時間保温する。７．水道水の流水中でプレートを10回洗浄する。８．50μl/ウェルのＡＢＴＳ基質を加え、プレートを20〜30分間発色させる。バックグランド波長を490nmとし、405nmの波長でプレートを読み取る。９．対照ウェルの平均値を用いて、阻害率を計算する。結果と結論：３種類の抗体はすべて同等に、ビオチン標識24-31と競争した（図10参照）。その競争特性は、このアッセイの限界内にある全ての濃度で、本質的に重ね合せることができる。これは、試験したヒト化抗体（１型）がそのgp39結合親和力を保持していることを示している。実施例14 Ｔ細胞依存性Ｂ細胞分化の調節ヒト化24-31がマウス24-31の試験管内機能活性を保持していることを確認するために、ヒト化24-31を“Ｌipsky”アッセイでマウス24-31と比較した。ドナー末梢血単核細胞を２つの画分、Ｔ細胞画分とＢ細胞画分に分離した。有糸分裂を防ぐために、Ｔ細胞をまずマイトマイシンＣで処理し、次に抗ＣＤ３抗体で活性化した。Ｂ細胞を、マウスまたはヒト化（１型）24-31抗体と共に加えた。この実験には、抗体を含まない陽性対照と、Ｂ細胞を含まない陰性対照を含めた。10 日間の培養後、上清をヒトＩgＭの存在について調べた。プロトコル：１．50μl/ウェルの滅菌４μg/ml抗ＣＤ３抗体（50mＭＴris(pＨ９)中に希釈したもの）を用いて、96ウェルプレートを37℃で２時間コーティングする。２．Ｌympho-Ｋwik試薬を用いて、バフィーコート（軟膜）からＴ細胞とＢ細胞を選択的に精製する。５×10⁶細胞につき50μg/mlのマイトマイシンＣを用いて、37℃で30分間、Ｔ細胞を活性化する。３．プレートのウェルを滅菌ＨＢＳＳまたは培地で数回洗浄することにより、非付着抗体を除く。４．１×10⁵個の精製Ｔ細胞（２×10⁶/ml）を各ウェルに加える。５．５×10⁵個の精製Ｂ細胞（５×10⁶/ml）を各ウェルに加える。抗gp39抗体（10〜0.1μg/ml）を各ウェルに４つ一組にして加える。対照ウェルには次のものが含まれる：a）０抗体、b）０抗体，Ｔ細胞なし、およびc）０抗体，Ｂ細胞なし。６．プレートを37℃/５％ＣＯ₂で12日間保温する。７．７日後に３Ｈチミジンまたは他の適当な方法を用いて複製ウェルの細胞増殖を評価する。８．12日後に、複製ウェルから上清を集め、ＥＬＩＳＡアッセイを行なって、Ｉg産生（ＩgＭ）を測定する。結果と結論：結果は、ヒトＩgＭの産生が、濃度0.01μg/ml未満のヒト化24-31により、マウス24-31で得られる阻害レベルと同様に、50％まで阻害されることを示している（図11参照）。このヒト化抗体は、この実験で、Ｔ細胞依存性Ｂ細胞増殖（Ｉg Ｍ産生）を阻害するというその能力を保持していた。実施例15 ヒト化24-31 ２型の評価この実験は、ヒト化24-31 ２型が、１型と比較した場合に、直接結合アッセイで同等のgp39結合能を持つかどうかを決定するために行なった。プロトコル：上記実施例13と同じ。結果と結論：結果は、これら２種類の24-31の結合能が本質的に重ね合せ得ることを示している（図12参照）。これは、これら２つの型がgp39に対して同等の結合活性を持つことを示している。実施例16 この実験は、24-31と、２つのヒト化型１および２のＫdを測定するために行なった。プロトコル：３種類の抗体（マウス、１型または２型24-31）それぞれの予め決定した量を、Ｇ25/ＤＥＡＥ/Ａmberliteカラムでのサイズ分離により、抗体結合型¹²⁵Ｉを遊離型¹²⁵Ｉから分離した。カウント/μgと適当な作業濃度（〜半最大結合濃度）を決定するために、マウスgp39-ＣＨＯ細胞に対する¹²⁵Ｉ標識抗体の直接結合を希釈系列で調べた。 ¹²⁵Ｉ標識抗体を非標識抗体と希釈系列で混合し、保温した。結合型抗体の総量と遊離型抗体の量に基づき、結合型対結合型-遊離型グラフから、スキャッチャードプロットを作成した。総抗体濃度は、１活性部位あたり75kＤの標準サイズに基づいた。 “近似(best fit)”線を作成することにより、Ｋdを計算した。その曲線の傾きの逆数がＫdである。相関係数r²も計算した。結果：これらのスキャッチャードプロットを分析した。この分析で得られたＫdは次の通りである：２型，Ｋd＝14nＭ；マウス24-31，Ｋd＝8.51nＭ；１型，Ｋd＝5. 6。その結果を図13（マウス）、図14（１型）および図15（２型）にそれぞれ記載する。これらの結果は、本ヒト化抗体が24-31と同様にgp38抗原を結合することのさらなる証拠となる。実施例17 Ｈ24-31.1のＦcＲＩ結合ヒトＦcＲＩをコードする遺伝子でトランスフェクションしたＣＨＯ細胞系で、ＦcＲＩ結合を行なった（図16）。このＦcレセプターに対するＨ24-31.1の結合を、ヒトgp39の細胞外部分に結合したＣＤ８の細胞外部分からなる融合タンパク質の形態にある可溶性gp39と共に、もしくはこれを添加しないでアッセイした。図16は、Ｈ24-31.1が抗原に結合した場合にのみＦＣＲＩと結合することを示している。実施例18 Ｈ24-31.1のＦcＲII結合ヒトＦcＲIIをコードする遺伝子でトランスフェクションしたマウス線維芽細胞系を用いて、ＦcＲII結合を行なった（図17）。このＦcレセプターに対するＨ 24-31.1の結合を、ヒトgp39の細胞外部分に結合したＣＤ８の細胞外部分からなる融合タンパク質の形態にある可溶性gp39と共に、もしくはこれを添加しないでアッセイした。図17は、Ｈ24-31.1が抗原に結合した場合にのみＦcレセプターII と結合することを示している。実施例19 補体依存的細胞性細胞毒性におけるＨ24-31.1の影響５％ウサギ補体の存在下に、Ｈ24-31.1を様々な濃度でgp39+ＣＨＯ細胞に加えた（図18）。そのＣＨＯ細胞の増殖をアラマーブルーでモニターした。図18は、Ｈ24-31.1が約0.5μg/mlで細胞増殖の50％を阻害することを示している。実施例20 gp39+ ＣＨＯ結合型Ｈ24-31.1のＣ１q結合の測定様々な濃度のＨ24-31.1で標識したgp39+ＣＨＯ細胞を過剰量のヒトＣ１q（補体因子１）中で培養した後、ＦＩＴＣ標識ヤギ抗ヒトＣ１qと共に培養した。それらの試料をフローサイトメトリーで分析することにより、Ｃ１qによる細胞の相対標識量を決定した（図19）。図19は、Ｃ１qによる細胞の標識が、抗体濃度に依存することと、Ｈ24-31.1 Ｆab断片（非Ｃ１q結合性）がＣ１qを結合しないことを示している。実施例21 Ｔ細胞依存性リコール抗原に対するＴ細胞反応にＨ24-31.1が与える影響 10％ヒトＡＢ血清、L-グルタミン、ピルビン酸ナトリウムおよび非必須アミノ酸を含むＩscoves改良ダルベッコ培地で、ヒト末梢血リンパ球を培養した（図20 ）。さらに、１つを除いて全ての培養に10μg/ml破傷風トキソイドを加えた。破傷風トキソイドで準備刺激した細胞には、0〜10μg/mlのＨ24-31.1をも与えた。３日後に、上清を採取してＩＬ-２含量を測定した。さらに２日後、すべての培養に１μＣi³Ｈ-チミジン/mlを16時間与えた。細胞を収集し、増殖の尺度として、染色体ＤＮＡへのチミジンの取り込みを調べた。破傷風トキソイドを含まない培養物のＥＬ-２レベルは、検出限界（約２ng/ml）未満だった。また、その培養物に取り込まれた³Ｈ-チミジンはバックグラウンドレベル（約300cpm）であり、明らかにＨ24-31.1処理の影響を受けなかった（非掲載）。図20は、ＴＴ誘発性の増殖とＩＬ-２産生が、１μg/ml以上のＨ24-31.1によって、最大に阻害された（約40％）ことを示している。実施例22 Ｔ細胞依存性Ｂ細胞分化に対するＨ24-31.1の効果 96ウェルプレートを２μg/mlの抗ＣＤ３抗体で終夜コーティングし、ＰＢＳで十分に洗浄してから使用した。バフィーコートから得た末梢血リンパ球を、Ｔ細胞画分とＢ細胞画分に分離した。そのＴ細胞をマイトマイシンＣと共に１時間保温してから、上記96ウェルプレートのウェルにまいた。次に、10％ウシ胎児血清、Ｌ-グルタミン、ピルビン酸ナトリウムおよび非必須アミノ酸を添加したＩsco ves改良ダルベッコ培地中で、Ｂ細胞を加えた。それらの細胞を、０から10μg/m lまでの様々な濃度のＨ24-31.1の存在下に培養した。12日後、上清を採取し、ヒトＩgＧの存在について調べた（図21）。この図は、ヒト化Ｈ24-31.1が、Ｔ細胞依存性ＩgＧ産生を、１ng/mlで約85％阻害することを示している。実施例23 Ｔ細胞依存性Ｂ細胞分化に対するＨ24-31.1 Ｆabの効果 96ウェルプレートを２μg/mlの抗ＣＤ３抗体で終夜コーティングし、ＰＢＳで十分に洗浄してから使用した。バフィーコートから得た末梢血リンパ球を、Ｔ細胞画分とＢ細胞画分に分離した。そのＴ細胞をマイトマイシンＣと共に１時間保温してから、上記96ウェルプレートのウェルにまいた。次に、10％ウシ胎児血清、Ｌ-グルタミン、ピルビン酸ナトリウムおよび非必須アミノ酸を添加したＩs coves改良ダルベッコ培地中で、Ｂ細胞を混合した。それらの細胞を、０から10 μg/mlまでの様々な濃度のＨ24-31.1およびＨ24-31.1 Ｆabの存在下に培養した。12日後、上清を採取し、ヒトＩgＧの存在について調べた（図22）。この図は、完全なＨ24-3とそのＦab断片の間に、ＩgＧ産生の阻害に関して相違がないことを示している。実施例24 Ｔ細胞依存性リコール抗原に対する抗原特異Ｂ細胞反応の生成にＨ24-31.1が与える影響試験管内で３日間、破傷風トキソイドで準備刺激したヒト脾細胞を、ＳＣＩＤマウスに約１×10⁷細胞/ＳＣＩＤの濃度で移した。６日後に、得られたhu-ＳＰＬ-ＳＣＩＤマウスにＰＢＳ（第１群）または300μgのＨ24-31.1（第１群および第２群）を注射した。翌日、そのＨu-ＳＰＬ-ＳＣＩＤマウスすべてを、破傷風トキソイドで追加免疫した。第３群のマウスには、さらに300μgのＨ24-31.1を各３日の間隔で、２回注射した。様々な時点でマウスから採血し、ヒトＩgＧ抗破傷風トキソイド価のレベルをＥＬＩＳＡによって決定した（図23）。図23は、Ｈ24-31.1の注射によって、破傷風トキソイド特異反応の生成が約90％阻害されたことを示している。実施例２５ヒトＢ細胞増殖に対するＨ２４−３１．１抗体の作用これら実験の目的は、Ｈ２４−３１．１抗体によるＢ細胞の増殖の可溶性ｇｐ３９−ＣＤ８誘発の抑制を示すことにあった。バフィーコートからのリンパ球調製物を、製造業者により推奨されたプロトコールに従ってリンホ−クイック（Ｌympho−Ｋwik）試薬（カタログ＃ＬＫ−２５ −Ｂ、ＬＫ−５０−Ｂ、Ｏne Ｌambda，Ｉnc.、ワン・ラムダ、カリフォルニア９１３０３）によりＢ細胞を濃縮した（enriched）（＞９０％）。１０００Ｕ／ｍｌのＩＬ４（Ｇenzyme，Ｃorp.）とともに９６ウエルの各ウエル当たり１×１０⁵細胞にて培養した濃縮ヒトＢ細胞を、種々の濃度のＨ２４−３１．１抗体ならびに１０μｇ／ｍｌのｇｐ３９−ＣＤ８とともに４日間インキュベートした。インキュベーションの最後の１６時間に１μＣｉ／ウエルの³Ｈチミジンを適用し、増殖細胞による放射能の取り込みを測定した。図２４は、投与量に依存した形でのｇｐ３９−ＣＤ８によるＢ細胞増殖を示す。図２５は、Ｈ２４−３１．１がｇｐ３９−ＣＤ８依存Ｂ細胞増殖を抑制することを示す。用途本発明のヒト化抗ｇｐ３９抗体は、ｇｐ３９−ＣＤ４０相互作用のｇｐ３９調節および／または抑制が治療上有用であるいかなる疾患状態を治療するうえで効力を有する。さらに、本発明のヒト化抗ｇｐ３９抗体は、抗原への抗体応答の抑制が望まれる疾患の治療に用いることができる。そのような状態には自己免疫疾患および非自己疾患の両者が含まれる。Ｂ細胞でのＣＤ４０シグナル伝達を妨害する抗ｇｐ３９抗体の能力は、インビボでのＴ細胞依存性抗体応答の顕著な抑制に機能的に翻訳される。それゆえ、自己抗体の産生により媒体される自己免疫疾患は抗ｇｐ３９抗体療法の利益を蒙ることが期待される。そのような疾患には、全身性エリテマトーデス、特発性血小板減少性紫斑病、重症筋無力症および抗インスリン抗体および抗インスリン受容体抗体を有する糖尿病患者の亜集団が含まれる。さらに、Ｂ細胞および樹状細胞におけるＣＤ４０シグナル伝達は、Ｂ７．１分子およびＢ７．２分子などの共同シグナル伝達（co-signaling）受容体のアップレギュレーションに必須である。この抗ｇｐ３９抗体によるＣＤ４０シグナル伝達の阻止はＴ細胞への抗原提示を妨害し、その結果、Ｔ細胞の活性化およびＴ細胞により媒体された応答が抑制される。ＣＩＡ、ＥＡＥ、ＮＯＤマウスなどの疾患モデル、ＧＶＨＤおよび移植拒絶での抗ｇｐ３９抗体の治療学的な効力は、Ｔ細胞により媒体される応答に対する該抗体の抑制作用をさらに確認するものである。動物モデルでの効力により支持されたこのような作用メカニズムに基づき、本発明のヒト化抗ｇｐ３９抗体の治療能は、ＲＡ、ＭＳ、糖尿病、乾癬、ＧＶＨＤおよび移植拒絶などの疾患に拡張される。本発明のヒト化抗体の投与により治療しうる可能性のある特定の状態には以下のものが含まれる：アレルギー性気管支肺アスペルギルス症；自己免疫溶血貧血；黒色表皮症；アレルギー性接触性皮膚炎；アジソン病；アトピー性皮膚炎；円形脱毛症；汎脱毛症；アミロイド症；過敏症様紫斑病；アナフィラキシー様反応；無形成貧血；遺伝性血管浮腫；特発性血管浮腫；強直性脊椎炎；頭蓋動脈炎；巨細胞性動脈炎；高安動脈炎；側頭動脈炎；喘息；毛細管拡張性運動失調；自己免疫卵巣炎；自己免疫睾丸炎；自己免疫多内分泌腺不全；ベーチェット病；ベルジェ病；ビュルガー病；水泡性天疱瘡；慢性粘膜皮膚性カンジダ症；カプラン症候群；心筋梗塞後症候群；心膜切開後症候群；心炎；腹腔スプルー；シャガス病；チェディアック・東症候群；チャーグ・シュトラウス病；コーガン症候群；寒冷凝集素症；クレスト症候群；クローン病；クリオグロブリン血症；潜在性線維性肺胞炎；疱疹状皮膚炎；皮膚筋炎；真性糖尿病；ダイアモンド・ブラックファン症候群；ディ・ジョージ症候群；円板状エリテマトーデス；好酸性筋膜炎；上強膜炎；持続隆起性紅斑；輪郭性紅斑；多形紅斑；結節性紅斑；家族性地中海熱；フェルティー症候群；肺線維症；過敏症様糸球体腎炎；自己免疫糸球体腎炎；連鎖球菌後糸球体腎炎；移植後糸球体腎炎；膜様糸球体腎炎；グッドパスチャー症候群；移植片対宿主病；免疫媒体顆粒球減少症；環状肉芽腫；アレルギー性肉芽腫；肉芽腫性筋炎；バセドウ病；橋本甲状腺炎；新生児溶血性疾患；特発性血色素症；ヘノッホ・シェライン紫斑病；慢性、急性および慢性進行性肝炎；組織球症Ｘ；過好酸球増加症候群；特発性血小板減少性紫斑病；ジョブ症候群；若年性皮膚筋炎；若年性慢性関節リウマチ；川崎病；角膜炎；乾性角結膜炎；ランドリー・ギラン・バレー・ストロール症候群；らい腫らい；レフレル症候群；ライエル症候群；ライム病；リンパ腫様肉芽腫症；全身性肥満細胞症；混合結合組織病；多発性単神経炎；マックル・ウェルズ症候群；皮膚粘膜リンパ節症候群；皮膚粘膜リンパ節症候群；多中心網内組織球症；多発性硬化症；重症筋無力症；きのこ状フングス；全身性壊死性脈管炎；ネフローゼ症候群；重複症候群；皮下脂肪組織炎；発作性寒冷ヘモグロビン尿症；発作性夜間ヘモグロビン尿症；類天疱瘡；天疱瘡；紅斑性天疱瘡；落葉状天疱瘡；尋常性天疱瘡；養鳩病；肺炎、過敏症；結節性多発性関節炎；リウマチ性多発性筋痛；多発性筋炎；特発性多発性神経炎；ポルトガル家族性多発性神経障害；子癇前症／子癇；原発性胆汁性肝硬変；全身性進行性肝硬変（強皮症）；乾癬；乾癬性関節炎；肺胞タンパク症；肺線維症；レイノー現象／症候群；リーデル甲状腺炎；ライター症候群；再発性多発性軟骨炎；リウマチ熱；慢性関節リウマチ；サルコイドーシス；強膜炎；硬化性胆管炎；血清病；セザリー症候群；シェーグレン症候群；スティーブンス・ジョンソン症候群；スチル病；亜急性硬化性汎脳炎；交感性眼炎；全身性エリテマトーデス；移植拒絶；潰瘍性大腸炎；未分化結合組織病；慢性蕁麻疹；寒冷蕁麻疹；ぶどう膜炎；白斑；ウェーバー・クリスチャン病；ウェジナー肉芽腫症；ウィスコット・アルドリッチ症候群。これらのうち、抗ｇｐ３９抗体の投与により治療もしくは防御しうる好ましい適応症としては、自己免疫溶血性貧血；無形成貧血；側頭動脈炎；真性糖尿病；フェルティー症候群；グッドパスチャー症候群；移植片対宿主病；特発性血小板減少性紫斑病；重症筋無力症；多発性硬化症；結節性多発性関節炎；乾癬；乾癬性関節炎；慢性関節リウマチ；全身性エリテマトーデス；喘息；アレルギー状態；および移植拒絶が挙げられる。治療効果を得るのに有用な抗体量は、当業者によく知られた標準法により決定することができる。抗体は一般に、薬理学的に許容しうる緩衝液中にて標準法により提供され、いかなる所望の経路によっても投与できる。本発明により特許請求された抗体の効力およびヒトによる寛容のため、ヒトにおける種々の疾患または疾患状態に対処するためにこれら抗体を繰り返し投与することが可能である。本発明の抗ｇｐ３９ヒト化抗体（またはそのフラグメント）はまた、免疫修飾の誘発、たとえばヒトまたは動物の免疫系の抑制の誘発にも有用である。それゆえ、本発明は、かかる本発明の抗体の有効な非毒性量を免疫修飾の誘発を必要とするヒトまたは他の動物に投与することによる、かかるヒトまたは他の動物において免疫修飾を予防的または治療的に誘発する方法に関する。本発明の抗体が免疫抑制の誘発において有用性を有するという事実は、これら抗体が、移植臓器または組織（たとえば、腎臓、心臓、肺臓、骨髄、皮膚、角膜など）に対する抵抗性または拒絶の治療または予防；自己免疫疾患、炎症性疾患、増殖性疾患および過増殖性疾患の治療または予防、および免疫学的に媒体された疾患（たとえば、慢性関節リウマチ、エリテマトーデス、全身性エリテマトーデス、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、ＥＡＥ、重症筋無力症、１型糖尿病、ぶどう膜炎、ネフローゼ症候群、乾癬、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎および他の湿疹性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、偏平苔せん、天疱瘡、水泡性天疱瘡、表皮水泡症、蕁麻疹、血管浮腫、脈管炎、紅斑、皮膚性好酸球増加症、円形脱毛症など）の皮膚上の現れの治療または予防；可逆性閉塞性気道疾患、腸性炎症およびアレルギー（たとえば、腹腔疾患、直腸炎、好酸球性胃腸炎、肥満細胞症、クローン病および潰瘍性大腸炎）および食物関連アレルギー（たとえば、偏頭痛、鼻炎および湿疹）の治療に有用であることを意味する。本発明の抗体はまた、免疫調節が望まれる非自己免疫状態、たとえば、とりわけ移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、移植拒絶、喘息、白血病、ＨＩＶ、リンパ腫の治療において潜在的な有用性を有する。本発明の抗体はまた、ベクターまたは組換えウイルス（たとえば、治療用ＤＮＡを含む）の投与の前、投与と同時、または投与後に、該ベクターに対する宿主の免疫（液性）応答を防いだり減少させるために投与することができる。当業者であれば日常的な実験により、免疫抑制を誘発させる目的のために抗体の有効な非毒性量を決定できるであろう。しかしながら、一般に、有効投与量は１日当たり約０.０５〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲であろう。本発明の抗体は、上記治療法に従い、かかる効果を治療または予防程度まで得るのに充分な量でヒトまたは他の動物に投与してよい。かかる本発明の抗体は、公知の方法に従って通常の薬理学的に許容しうる担体または希釈剤と混合することにより調製した通常の剤型にてかかるヒトまたは他の動物に投与することができる。当業者には、薬理学的に許容しうる担体または希釈剤の形態および特性は、それと配合する活性成分の量、投与経路その他のよく知られた変数により書き留めうることが認識されるであろう。本発明の抗体（またはそのフラグメント）の投与経路は、経口、非経口、吸入または局所であってよい。本明細書において用いる非経口なる語には、静脈内、筋肉内、皮下、経直腸、経膣または腹腔内投与が含まれる。非経口投与の皮下および筋肉内形態が一般に好ましい。予防的または治療的に免疫抑制を誘発するために本発明の化合物を用いる毎日の非経口および経口投与計画は、一般に１日当たり約０.０５〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、好ましくは約０.５〜１０ｍｇ／ｋｇ体重であろう。本発明の抗体はまた吸入によっても投与することができる。「吸入」とは、鼻内および経口吸入投与を意味する。かかる投与のための適当な剤型、たとえばエアロゾル製剤または計量吸入器（metered dose inhaler）は常法により調製できる。使用する本発明の化合物の好ましい投与量は、一般に約１０〜１００ｍｇの範囲である。本発明の抗体はまた局所投与できる。局所投与とは非全身性の投与を意味し、本発明の抗体（またはそのフラグメント）化合物の表皮への外用塗布、口腔内への適用、かかる抗体の耳、眼および鼻、および血流中へ有意に侵入しない部位への滴下を含む。全身性投与とは、経口、静脈内、腹腔内および筋肉内投与を意味する。治療または予防効果に必要な抗体の量は、もちろん、選択した抗体、治療しようとする状態の性質および重篤度および治療を受ける動物により変わりであろうが、最終的には医師の裁量による。本発明の抗体の適当な局所投与量は、一般に１日当たり約１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲であろう。処方抗体またはそのフラグメントは単独で投与することもできるが、医薬組成物として与えるのが好ましい。その活性成分は、局所投与には組成の０．００１〜１０重量％好ましくは１〜２重量％の量で含有される。１０重量％を超えてもよいが好ましくは５重量％を超えず、より好ましくは０．１〜１重量％である。本発明の局所用組成物は、活性成分に１またはそれ以上の許容しうる担体および所望により他の治療剤を含む。担体は、組成物中の他の成分と両立しうるものであって賦形薬に対して害作用を有しないという意味で許容しうるものでなければならない。局所投与に適した組成物は、皮膚を滲透して治療の必要な部位に達するのに適した液状または半液状の製剤を含み、リニメント、ローション、クリーム、軟膏、ペーストなどがあり、また眼、耳または鼻に投与するのに適した点滴剤がある。本発明による点滴剤は滅菌水または油状溶液または懸濁液が含まれ、活性成分を殺菌剤および／または抗真菌剤および／または他の好適な防腐剤、好ましくは表面活性剤を含んだ適当な水溶液にとかして調製される。その得られた溶液は濾過して澄明にし、適当な容器に入れ、密封し、オートクレーブで、または９０〜１００℃で３０分滅菌処理する。別法としては、その溶液を濾過滅菌し、無菌的に容器に入れる。点滴剤に含ませるのに好ましい殺菌剤および抗真菌剤の例としてはフェニル水銀ナイトレートまたはアセテート（０．００２％）、塩化ベンザルコニウム（０．０１％）およびクロルヘキシジンアセテート（０．０１％）からなる。油状溶液の調製に好ましい溶媒としては、グリセリン、希アルコールおよびプロピレングリコールを含む。本発明のコーションは皮膚または眼に適用するのに適している。アイローションは適宣殺菌剤を含んだ滅菌水からなり、点滴剤と同様の方法で調製される。皮膚適用のためのローションまたはリニメントは乾燥を早め、また皮膚を冷すためのアルコールかアセトンのような薬剤を含んでいてもよく、またグリコールのようなモイスチャライザーやヒマシ油、落花生油などの油類も含んでいてもよい。本発明によるクリーム、軟膏またはペースト類は本活性成分の半固形外用処方である。それらは細粉または粉末状の活性成分を単独または水または非水液体の溶液または懸濁液の形で、適当な機械で、油状または非油状基剤と共に混合して調製される。その基剤は、ハード、ソフトまたは液体パラフィン、グリセリン、ミツロウ、金属石鹸等の炭化水素類、粘質類、アーモンド油、コーン油、落花生油、ヒマシ油、またはオリーブ油等の天然油類、またはプロピレングリコールまたはマクロゴール等のアルコールと共にステアリン酸またはオレイン酸等の脂肪酸からなる。その処方は、ソルビタンエステルまたはそのポリオキシエチレン誘導体等のアニオン、アチオンまたは非イオン界面活性剤を含んでいてもよい。天然ガム、セルロース誘導体等の懸濁剤またはケイ質ケイ砂等の無機物質、およびラノリン等の他の成分を含んでいてもよい。本発明の抗体またはフラグメントの個々の人の最適用量、投与間隔は、治療条件、剤形、投与ルート、投与部位、特に治療動物等に基づいて決定され、また最適用量は常法により決定されることは当業者に自明であろう。また、最適投与コース、例えば、本発明の抗体またはそのフラグメントの１日当りの投与数なども通常の治療決定テストにより当業者が容易に決定できる。さらに労作を要することなく当業者ならば前記記載に基づいて本発明を実施できるものと確信する。以下の記載は単なる実施例を示すもので本発明はそれらに限定されない。カプセル組成物本発明のカプセル形の医薬組成物は、粉末状の本発明の抗体またはそのフラグメント５０mg、ラクトース１００mg、タルク３２mgおよびステアリン酸マグネシウム８mgからなり、これを標準ハードゼラチンカプセル２個に充填して調製される。注射用非経口組成物注射に適した本発明の医薬組成物は、本発明の抗体またはそのフラグメント１．５kgを１０kg容量のプロピレングリコールと水の中に撹拌して加えて調製される。その溶液を濾過滅菌する。軟膏組成物本発明の抗体またはそのフラグメント１．０gと白色ソフトパラフィン１００．０gとからなる。本発明の抗体またはフラグメントを少量の賦形剤中に分散して、平滑な均質製品を得る。コラプシブルメンタルチューブにその分散物を充填する。局所用クリーム組成物本発明の抗体またはそのフラグメント１．０g ポーラワックスＧＰ２００２０．０g 無水ラノリン２．０g 白色ミツロウ２．５g ヒドロキシ安息香酸メチル０．１g 蒸留水全量１００．０ｇポーラワックス、ミツロウおよびラノリンを６０℃で加熱し、ヒドロキシ安息香酸メチル溶液を加え、高速撹拌にて均一に混合する。放冷してＳＯＯＣに落とす。本発明の抗体またはフラグメントを加え、全体に分散させ、その組成物を低速撹拌しながら放冷する。局所用ローション組成物本発明の抗体またはそのフラグメント１．０g ソルビタンモノラウレート０．６g ポリソベート２００．６g セトステアリルアルコール１．２g グリセリン６．０g ヒドロキシ安息香酸メチル０．２g 精製水Ｂ．Ｐ．全量１００．００ml （Ｂ.Ｐ.＝英国薬局方）ヒドロキシ安息香酸メチルおよびグリセリンを７５℃で水７０mlにとかす。ソルビタンモノラウレート、ポリソベート２０およびセトステアリルアルコールを７５℃で溶融し、該水溶液に加える。得られたエマルジョンを均質化し、連続的に撹拌しながら放冷し、それに、本発明の抗体またはフラグメントを残りの水に懸濁させたものを加える。その懸濁液を均質になるまで撹拌する。点眼組成物本発明の抗体またはそのフラグメント０．５g ヒドロキシ安息香酸メチル０．０１g ヒドロキシ安息香酸プロピル０．０４g 精製水Ｂ.Ｐ. 全量１００．００ml ヒトロキシ安息香酸メチルおよびプロピルを７５℃で精製水７０mlにとかし、その溶液を放冷する。本発明の抗体またはフラグメントを加え、メンブランフィルター（孔径：０．０２２Ａmポアサイズ）で濾過滅菌し、適当な滅菌容器に無菌パックする。吸込投与用組成物１５〜２０ml容のエアゾル容器に、本発明の抗体またはフラグメント１０mgとポリソルベート８５またはオレイン酸等の滑剤０．２〜０．５kgを混合して加え、その混合物をフレオン、好ましくは１，２−ジクロロテトラフルオロエタンおよびジフルオロクロロメタンの組合せ等のプロペラントに分散し、これを、鼻腔内または口腔内吸入投与に適したエアゾル容器に充填する。１５〜２０ml容エアゾル容器用吸入投与用組成物：本発明の抗体またはそのフラグメント１０mgをエタノール６〜８mlにとかし、ポリソルベート８５またはオレイン酸等の滑剤０．１〜０．２kgを加え、フレオン、好ましくは１，２−ジクロロテトラフルオロエタンおよびジフルオロクロロメタンの組合せ等のプロペラントに分散させ、鼻腔または口腔内吸入投与に適したエアゾル容器に加える。本発明の抗体および医薬組成物は非経口投与、例えば皮下注射、筋肉注射または静脈注射に特に適している。非経口投与用組成物は、本発明の抗体またはそのフラグメントまたはそのカクテルを適当な担体、好ましくは水性担体にとかした溶液からなる。水性担体としては、水、緩衝水溶液、０．４k食塩水、０．３％グリセリン等が挙げられる。これらの溶液を滅菌し、粒子のないものとする。これらの溶液は通常の滅菌技術で滅菌される。これらの組成物は、pＨ調節剤、緩衝剤等の通常の医薬上許容される助剤を含んでいてもよい。それら医薬処方中の本発明の抗体またはそのフラグメントの濃度は広範囲にあり、選ばれた投与形態に応じて、例えば、約０．５k以下から、通常または少なくとも約１重量％から１５または２０重量％の範囲で、液体量、粘度等に基づいて選定される。このように、本発明の筋肉注射用医薬組成物は、滅菌緩衝水１mlおよび本発明の抗体またはそのフラグメント５０mgを含むように調製される。同様に、静注用医薬組成物は、滅菌リンゲル液２５０mlおよび本発明の抗体またはフラグメント１５０mgを含むように調製される。非経口投与組成物の具体的な調製方法は当業者によく知られているか自明であり、例えば、レミントンの文献（Ｒemington's Ｐharmaceutical Ｓcience）１５版、Ｍack Ｐublishing Ｃompany，Ｅaston，Ｐennsylvania）に記載されている。本発明の抗体（またはそのフラグメント）は凍結乾燥して保存でき、使用前に適当な担体に再構築しうる。この技術は通常の免疫グロブリンに有効であることが知られており、公知の凍結乾燥技術、再構築技術が用いられる。目的に応じて、本発明の医薬組成物を予防および／または治療用に投与できる。治療用には、疾患にかかっている患者に該疾患およびその合併症を治療または少なくとも部分的に阻止するのに必要な量の組成物を投与する。予防用には、本発明の抗体またはその配合物を含む組成物を、いまだ疾病状態にはなっていない患者に投与して、その患者の抵抗を高める。医薬組成物は、治療を行う医者が選択する用量水準およびパターンにしたがって、一回投与したり、複数回に分けて投与する。いかなる場合も、本発明の医薬組成物は、患者を効果的に治療する量の本発明の改変抗体（またはそのフラグメント）を与えるようにする。また、本発明の抗体をその抗体と同じ治療に有用なペプチドまたは非ペプチド化合物（疑似体）の設計または合成に有用である。Ｓaragovi等、Ｓcience２５３７９２−７９５（１９９１）を参照。以上、本発明の特定の態称について記載したが、それはあくまで例示であって、本発明の範囲を損和わない限り種々の改変も含むものであって、本発明は以下のクレームによって限定されない。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 17/00 Ａ６１Ｋ 31/00 ６１７ 27/00 ６２７ 29/00 ６２９Ａ 35/02 ６２９ 37/00 ６３５Ａ 37/08 ６３７Ａ６１Ｋ 39/395 ６３７ＥＣ０７Ｋ 16/28 39/395 Ｎ 16/46 Ｃ０７Ｋ 16/28 //(Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ 16/46 Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者ハンナ，ナビルアメリカ合衆国92024カリフォルニア州オリブンヒアン、フォーチュナ・ランチ・ロード3255番 (72)発明者パドラン，エデュアルド・エイアメリカ合衆国20895メリーランド州ケンジントン、シムズ・ドライブ4006番 (72)発明者ニューマン，ローランド・エイアメリカ合衆国92122カリフォルニア州サンディエゴ、ロビンズ・ストリート4311 番

Claims

【特許請求の範囲】１．ＣＤ４０のgp３９への結合を抑制するためのマウス２４−３１抗体と競合しうるヒト化抗体。２．図４−８に示される２４−３１抗体の相補性決定領域または１またはそれ以上の保存的アミノ酸が置換した改変体または均等物を含む請求項１の抗体。３．マウスモノクローナル抗体２４−３１から誘導されるヒト化抗体。４．マウス２４−３１抗体のgp３９抗原結合親和性の少なくとも約１／３を保持するマウスモノクローナル抗体２４−３１から誘導されるヒト化抗体。５．親マウス２４−３１抗体の濃度の３倍以下の濃度にて、Ｂ細胞アッセイにおけるインビトロ機能活性において最大効力の半分の効力を保持しているマウスモノクローナル抗体２４−３１から誘導されるヒト化抗体。６．Ｂ細胞アッセイがＴ細胞依存性抗体産生を測定する請求項５の方法。７．該抗体が、下記の群から選ばれるヒト化可変軽鎖配列：および得られたヒト化抗体のgp３９抗原への結合能に実質的に影響しない１またはそれ以上の保存的アミノ酸置換を含む改変および均等物を含有する請求項１のヒト化抗体。８．該抗体が、下記の群から選ばれるヒト化可変重鎖配列：および得られたヒト化抗体のgp３９抗原への結合能に実質的に影響しない１またはそれ以上の保存的アミノ酸置換を含む改変および均等物を含有する請求項１のヒト化抗体。９．下記の群から選ばれるヒト化可変軽鎖配列：および、下記の群から選ばれるヒト化可変重鎖配列：および得られたヒト化抗体のgp３９抗原への結合能に実質的に影響しない１またはそれ以上の保存的アミノ酸置換を含む改変および均等物を含有する請求項１のヒト化抗体。１０．ヒト化可変軽鎖配列（１）およびヒト化可変重鎖配列（１）を含有する請求の項５のヒト化抗体。１１．ヒト化可変軽鎖配列（２）およびヒト化可変重鎖配列（１）を含有する請求の項５のヒト化抗体。１２．ヒト化可変軽鎖配列（１）およびヒト化可変重鎖配列（２）を含有する請求の項５のヒト化抗体。１３．ヒト化可変軽鎖配列（２）およびヒト化可変重鎖配列（２）を含有する請求の項５のヒト化抗体。１４．ヒトカッパまたはラムダ軽鎖定常領域およびヒトガンマ１またはガンマ４のいずれかの重鎖定常領域を含有する請求項１〜９のいずれか１つのヒト化抗体。１５．請求項１〜１３のいずれか１つのヒト化抗体をコードするＤＮＡ配列。１６．請求項１０のＤＮＡ配列を含有する発現ベクター。１７．マウスモノクローナル抗体２４−３１から誘導されるヒト化抗体を含有する医薬組成物。１８．該ヒト化抗体が、下記の群から選ばれるヒト化可変軽鎖配列：および得られたヒト化抗体のgp３９抗原への結合能に実質的に影響しない１またはそれ以上の保存的アミノ酸置換を含む改変および均等物を含有する請求項１７の医薬組成物。１９．下記の群から選ばれるヒト化可変重鎖配列：および得られたヒト化抗体のgp３９抗原への結合能に実質的に影響しない１またはそれ以上の保存的アミノ酸置換を含む改変および均等物を含有する請求項１８の医薬組成物。２０．下記の群から選ばれるヒト化可変軽鎖配列：および下記の群から選ばれるヒト化可変重鎖配列：および得られたヒト化抗体のgp３９抗原への結合能に実質的に影響しない１またはそれ以上の保存的アミノ酸置換を含む改変および均等物を含有する請求項１７の医薬組成物。２１．該ヒト化抗体がヒト化可変軽鎖配列（１）および可変重鎖配列（１）を含有する請求項２０の医薬組成物。２２．該ヒト化抗体がヒト化可変軽鎖配列（２）および可変重鎖配列（１）を含有する請求項２０の医薬組成物。２３．該ヒト化抗体がヒト化可変軽鎖配列（１）および可変重鎖配列（２）を含有する請求項２０の医薬組成物。２４．該ヒト化抗体がヒト化可変軽鎖配列（２）および可変重鎖配列（２）を含有する請求項２０の医薬組成物。２５．請求項１〜１３のいずれか１つのヒト化抗体の治療的有効量を投与することを特徴とするgp３９の発現を調節するかまたはgp３９／ＣＤ４０の相互作用を阻害することにより治療しうる疾病の治療方法。２６．該疾病が自己免疫疾患である請求項２５の方法。２７．該自己免疫疾患が、リウマチ様関節炎、乾癬、多発性硬化症、糖尿病、全身性紅斑性狼瘡およびＩＴＰからなる群から選ばれる請求項２５の方法。２８．該疾病が非自己免疫疾患である請求項２５の方法。２９．該疾病が対宿主移植片疾患または移植拒絶である請求項２７の方法。３０．該疾病がリウマチ性関節炎、紅斑性狼瘡、全身性紅斑性狼瘡、ハシモト甲状腺炎、多発性硬化症、ＥＡＥ、重症筋無力症、１型糖尿病、ブドウ膜炎、ネフローゼ症候群、乾癬、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、およびさらに湿疹性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、扁平苔癬、天疱瘡、水疱性類天疱瘡、表皮水疱症、じんま疹、血管性浮腫、脈管炎、紅斑、皮膚好酸球増加症、円形脱毛症、可逆性気道閉塞症、腸炎、アレルギー類（小児脂肪便症、直腸炎、好酸球増加症、胃腸炎、肥満細胞症、クローン病、潰瘍性大腸炎）、および食物関連アレルギーからなる群から選ばれる請求項２５の方法。３１．該疾病が喘息、白血病、ＨＩＶおよびリンパ腫から選ばれる請求項２５の方法。