JP2000500463A - 血液調節化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は血液調節活性を有し、造血の刺激ならびにウイルス、真菌および細菌感染症の治療に用いることができる新規化合物に関する。

Description

【発明の詳細な説明】 血液調節化合物 発明の分野 本発明は、血液調節活性を有する化合物であって、造血を刺激し、ウイルス、 真菌および細菌感染症の治療に用いることができる新規な化合物に関する。 発明の背景 造血系は終生に及ぶ細胞再生プロセスであり、このプロセスにより特定の幹細 胞集団が少なくとも９種の異なる細胞系統（赤血球、血小板、好酸球、好塩基球 、好中球、単球／マクロファージ、破骨細胞およびリンパ球）のより大きな集団 の成熟分化血液細胞（Ｄexter ＴＭ.Ｓtem cells in normal growth and diseas e.Ｂr.Ｍed.Ｊ.1987;195:1192-1194）を生じさせる(Ｍetcalf Ｄ.,Ｔhe Ｍolecu lar Ｃontrol of Ｂlood Ｃells.1988;Ｈarvard Ｕniversity Ｐress，Ｃambrid ge，ＭＡ)。さらに、幹細胞は、最終的に、細胞毒性物質で治療した後または骨 髄移植後の骨髄の再生に関与している。 大部分の標準的な抗腫瘍薬の用量−限定の（dose−limiting）主な毒性は骨髄 抑制に関連付けられ、これが重度であるかまたは長引くと、生命を脅かす感染性 および出血性合併症を引き起こしうる。骨髄抑制は予測可能であり、単一薬剤の Ｉ相試験細胞毒性化合物の５０％以上で用量−限定的であると報告されている( Ｍerrouche Ｙ.，Ｃatimel Ｇ.，Ｃlavel Ｍ.，Ｈematopoietic growth fctors and chemoprotectants; should we move toward a two-step process for phase Ｉclinical trails in oncology?Ａnn Ｏncol 1993;4;471-474)。感染の危険性 は、好中球減少症の重篤度および期間により測定される骨髄抑制の程度に直接関 係する(Ｂrody ＧＰ,Ｂuckley Ｍ,Ｓathe ＹＳ,Ｆreireich ＥＪ.Ｑuantitative relationshipbetween circulating leukocytes and infections with acute le ukemia.Ａnn In Ｍed 1965;64:328-334)。 造血作用の調節は、初期多機能幹細胞および成熟循環エフェクター細胞を含む 、 造血カスケードの種々の段階での種々のサイトカインおよび増殖因子の相互作用 に影響を与える。これらの調節分子として、顆粒球コロニー刺激因子(Ｇ−ＣＳ Ｆ)、顆粒球−マクロファージ刺激因子(ＧＭ−ＣＳＧ)、マクロファージ−コロ ニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）および宿主防御において主要な役割を果たす重複す る、付加的かつ相乗的作用を有する種々のインターロイキンが挙げられる。機構 的には、これは、顆粒球およびマクロファージの産生の向上、ならびにエフェク ター細胞機能の活性化により達成される(Ｍoore ＭＡＳ．Ｈemopoietic growthf actor interactions: in vitro and in vivo preclinical evaluation.Ｃancer Ｓurveys 1990;9:7-80)。これらの活性を調整することで、細菌、ウイルスおよ び真菌感染症を克服するのに必要な最適宿主防御が支持される。 好中球減少症の重篤度および骨髄毒性を予防または軽減させる方法として、造 血増殖因子および／または他の造血サイトカインの使用が挙げられる。このよう な治療法は、抗腫瘍薬の効能を改善させるかもしれない細胞毒性薬の用量を増加 させる可能性を付与し、抗腫瘍薬の使用に伴う罹患性を減少させるため、該治療 法は一般的に行われるようになってきている(Ｓteward ＷＲ.，Ｇranulocyte an d granulocyte-macrophage colony stimulating factors，Ｌancet 1993;342:15 3-157)。臨床研究により、Ｇ−、ＧＭ−および／またはＭ−ＣＳＦが、細胞毒性 化学療法を受けている悪性腫瘍の患者または骨髄移植後の感染の危険性が高い患 者において好中球減少症の期間を減少させ、骨髄性回復を促進し、好中球減少症 に伴う感染症および他の感染性合併症を減少させうることがわかった(Ｓteward ＷＲ.，Ｇranulocyte and granulocyte-macrophage colony stimulating factor s,Ｌancet 1993;342:153.157 およびＭunn ＤＨ，Ｃheung ＮＫＶ.Ｐreclinical studies of macrophage colony-stimulating fctor.Ｓemin Ｏncol.1992;19:39 5-407)。 合成ペプチドは、骨髄基質要素からのｍ−ＣＳＦを含め、造血メディエイター の合成および放出を誘発すると報告されている。米国特許出願番号０８／００１ ９０５を参照のこと。 本発明者らは骨髄造血細胞に対して刺激効果を有するある種の新規な非ペプチ ド化合物を見いだした。これらは、組織反応を抑制する免疫抑制治療による、す なわち骨髄移植手術における骨髄機能が低下した患者を含め、骨髄損傷、無顆粒 球症および再生不能性貧血を含む骨髄造血活性の減少に苦しむ患者における骨髄 造血の刺激に有用である。これらはさらに腫瘍およびウイルス病に関する細胞増 殖抑制性化学療法および放射療法を行った後の骨髄のより迅速な再生の促進に用 いられる。これらは、患者が骨髄不全後の免疫応答の欠如による重い感染症を有 する場合に特に有用である。これらはウイルス、真菌および細菌病の治療および 予防において有用である。 発明の要約 本発明は、血液調節活性を有し、造血作用の刺激ならびに細菌、ウイルスおよ び真菌病の予防および治療に用いることができる、後記に式（Ｉ）で表す、化合 物を含む。 これらの化合物は、種々の臨床釣状況、例えば手術により誘発された骨髄抑制 、ＡＩＤＳ、ＡＲＤＳ、先天性脊髄形成異常、骨髄および臓器移植に由来の細胞 数の減少した患者における白血球の回復；白血球減少症の患者の感染症からの防 御；重症の火傷患者の治療；いくつかの細胞周期特異性抗ウイルス剤について観 察される脊髄抑制の軽減；骨髄移植を受けた患者、特に移植片対宿主疾患の患者 における感染症の治療、結核の治療およびヒトおよび動物における原因不明の熱 病の治療において有用である。化合物はさらに免疫抑制および「正常」対象の両 方におけるウイルス、真菌および細菌感染症、特にカンジダおよびヘルペスの治 療および予防においても有用である。これらはグラム陰性およびグラム陽性生物 により引き起こされる敗血症の治療において有用である。 これらの化合物はさらに同時係属の米国出願番号０７／７９９４６５および米 国特許第４４９９０８１号（出典明示により本発明の一部とする）の脊髄抑制剤 と組み合わせて用いて、骨髄細胞における活性の高低の交互のピークを得、造血 の自然の約２４時間周期のリズムを促進できる。このように、細胞増殖抑制療法 を低骨髄活性の期間に適用することができ、かくして骨髄損傷の危険性が軽減さ れ、一方で次の活性のピークにより再生が促進されるであろう。 本発明はさらに、式（Ｉ）の化合物と医薬上許容される担体とを含んでなる医 薬組成物を提供する。 本発明はさらに、ヒトを含む動物の骨髄造血系の刺激法であって、これを必要 とする動物に、有効量の式（Ｉ）の化合物を投与することからなる方法を提供す る。 本発明はさらに、免疫抑制の正常な、ヒトを含む動物におけるウイルス、真菌 および敗血症を含む細菌感染症の予防および治療法であって、これを必要とする 動物に有効量の式（Ｉ）の化合物を投与することからなる方法を提供する。 発明の詳細な記載 本発明の化合物は、構造式（Ｉ）： ｛式中、 Ｒ₁は、独立して、ＮＨ₂、ＯＨ、ＳＨ、ＣＮ、ＣＯ₂Ｈまたは水素であり； Ｒ₂は、独立して、水素、Ｃ_1-4アルキルＣ(Ｏ)Ｒ₅、Ｃ₁-₄アルキルであるかま たはＲ₂は１または２個のＣ_1-4アルキル、Ｃ_1-4アルコキシ、Ｆ、Ｃｌ、Ｉ、Ｂ ｒ、ＯＨ、またはＮ(Ｒ₄)₂で所望により置換されていてもよいベンジルであり； Ｒ₃は、独立して、水素、Ｃ_1-5アルキル、Ｃ_1-5アルキレンヒドロキシ、Ｃ_1-5 アルキレンＣＯ₂Ｈ、(ＣＨ₂)_yＮ(Ｒ₄)₂、(ＣＨ₂)_mＣ(Ｏ)ＮＲ(Ｒ４)₂、Ｃ_1-5ア ルキレンＳＨ、ＣＨ₂Ａｒ、 Ｒ₄は、独立して、水素、Ｃ_1-5アルキルまたはベンジルであり； Ａｒは、独立して、１または２個のＲ₇基で所望により置換されていてもよい フェニルまたはインドリルであり; Ｑは、ビシクロ［３．３．０］オクタニル、キシリル、ベンゾフェノイルまた は１，２，３，４−テトラヒドロナフタリルであり、これらはすべて、１個また は２個の：Ｃ_1-4アルキル、Ｃ_1-4アルコキシ、ハロゲン、モノまたはジＣ_1-4ア ルキルアミノ、(Ｃ_1-4アルキル)₂−ＮＣ(Ｏ)−、−(ＣＨ₂)_n−Ｒ₅、−(ＣＨ₂)_n −Ｒ₆、−(ＣＨ₂)_n−ＣＯＲ₅または−(ＣＨ₂)_n−ＣＯＲ₆から選択される置換基 で置換されていなくても置換されていてもよい； Ｒ₅は−ＯＲ₆、−Ｎ(Ｒ₆)₂、または−ＳＲ₆であり； Ｒ₆は水素、Ｃ_1-4アルキルまたはベンジルであり； Ｒ₇はハロゲン、Ｒ₅またはＲ₆であり； ｎは独立して０ないし３の整数であり； ｍは独立して１ないし３の整数であり； ｓは独立して０または１であり； ｙは独立して２ないし４の整数である； ただし、ｓが１のときｎは０ではなく、さらに、 ［(Ｓ)，(Ｓ)］−Ｎ，Ｎ’−（１，４−キシレンジイル）ビス[２−アセトアミ ド−６，７，８，８ａ−テトラヒドロピローロ［１，２−ａ］ピラジン−１，４ （２Ｈ，３Ｈ）−ジオン]； ［(Ｒ)，(Ｒ)］−２，２’−（１，２−キシレンジイル）ビス[６，７，８，８ ａ−テトラヒドロピローロ［１，２−ａ］ピラジン−１，４（２Ｈ，３Ｈ）−ジ オン]； ［(Ｓ)，(Ｓ)］−２，２’−（１，３−キシレンジイル）ビス[６，７，８，８ ａ−テトラヒドロピローロ［１，２−ａ］ピラジン−１，４（２Ｈ，３Ｈ）−ジ オン]； を除く｝ で示される化合物またはその医薬上許容される塩である。 また、本発明は、式（Ｉ）の化合物および医薬上許容される担体を含む医薬組 成物である。 アルキル基は直鎖であっても分枝であってもよい。ハロゲンは、クロロ、ヨー ド、フルオロ、ブロモである。 本発明の化合物は１またはそれ以上の不斉炭素原子を含有し、ラセミおよび光 学活性な形態で存在してもよい。これらのすべての化合物およびジアステレオマ ーは本発明の範囲内にあると考えられる。 好ましい式（Ｉ）の化合物は、Ｒ₁がＯＨまたは水素；Ｒ₃がＣＨ₂ＯＨまたは 水素およびＱがキシリルまたはビシクロ［３．３．０］オクタノイルである化合 物である。より好ましい化合物は、Ｒ₁、Ｒ₂およびＲ₃が水素、Ｑがキシリルで ある化合物である。 本発明のもっとも好ましい化合物は： ［３(Ｓ)，３’(Ｓ)，８ａ(Ｓ)，８ａ’(Ｓ)］−Ｎ，Ｎ’−（１，４−キシレン ジイル）ビス[２−（アセトアミド）−３−（ヒドロキシメチル）−６，７，８ ，８ａ−テトラヒドロピローロ［１，２−ａ］ピラジン−１，４（２Ｈ，３Ｈ） −ジオン]、 ［(Ｓ)，(Ｓ)］−２，２’−（１，２−キシレンジイル）ビス[６，７，８，８ ａ−テトラヒドロピローロ［１，２−ａ］ピラジン−１，４（２Ｈ，３Ｈ）−ジ オン]、 ［(Ｓ)，(Ｓ)］−２，２’−（１，２−キシレンジイル）ビス［６，７，８，８ ａ−テトラヒドロピローロ［１，２−ａ］ピラジン−１（２Ｈ，３Ｈ，４Ｈ）− オン］ である。 調製法 ＡがテトラヒドロピローロピラジンジオンでＲ₁、Ｒ₂、Ｒ₃およびｎが式（Ｉ ）において定義したとおりである式（Ｉ）の化合物は、スキーム１に記載したの と類似した方法により調製される。 スキーム１ ａ）ＥＤＣ、ＨＯＢｔ、ｉＰｒ₂ＮＥｔ、ＤＭＦ； ｂ）ＴＦＡ、ＣＨ₂Ｃｌ₂；ｃ）ｐＴＳＯＨ、トルエン、還流； ｄ）ＮａＨ、ＴＨＦ；ｅ）ｔ−ブチルブロモアセテート； ｆ）ＴＦＡ、ＣＨ₂Ｃｌ₂； ｇ）ＥＤＣ、ＨＯＢｔ、ｉＰｒ₂ＮＥｔ、ＤＭＦ；ｈ）無水ＨＦ 適当な保護されたアミノ酸（スキーム１における１および２など）を標準的な 溶液相ペプチド合成法（ＤＭＦ中、ＥＤＣ、ＨＯＢｔ、ｉＰｒ₂ＮＥｔなど）を 用いて結合し、保護されたジペプチドを得る。窒素上で保護基を除去し、ついで 、適当な溶媒（トルエンなど）中、触媒量の穏やかな酸（ｐ−トルエンスルホン 酸 など）を用いて環化し、ジケトピペラジン（スキーム１における３など）を得る 。ジケトピペラジン（スキーム１における３など）を適当な非プロトン性極性溶 媒（ＴＨＦなど）中、適当な保護されたアルキル化剤（ｔ−ブチルブロモアセテ ートなど）でアルキル化し、Ｎ−アルキル化ジケトピペラジン（スキーム１にお ける４など）を得る。酸性条件（ＣＨ₂Ｃｌ₂中、ＴＦＡなど）下でｔ−ブチルエ ステルを除去し、ついで、適当な溶媒（ＤＭＦなど）中、標準的な条件（ＥＤＣ 、ＨＯＢｔ、ｉＰｒ₂ＮＥｔなど）下で適当なジアミン（１，４−キシレン−ジ アミンなど）と結合させ、保護された結合生成物を得る。典型的な条件（無水Ｈ Ｆなど）下で保護基を除去し、最終生成物（スキーム１における５など）を得る 。 スキーム２ ａ）ＥＤＣ、ＨＯＢｔ、ｉＰｒ₂ＮＥｔ、ＣＨ₂Ｃｌ₂； ｂ）ローソン試薬、トルエン；ｃ）ＴＦＡ、ＣＨ₂Ｃｌ₂； ｄ）ｉＰｒ₂ＮＥｔ、トルエン；ｅ）Ｒａ−Ｎｉ、ＭｅＯＨ； ｆ）ｏ−ジブロモキシレン、ＮａＨ、ＴＨＦ Ａがテトラヒドロピローロピラジノンである式（Ｉ）の化合物は、スキーム２ に記載したのと類似した方法により調製される。適当な保護されたアミノ酸（ス キーム１における１および２など）を標準的な溶液相ペプチド合成法（ＣＨ₂Ｃ ｌ₂中、ＥＤＣ、ＨＯＢｔ、ｉＰｒ₂ＮＥｔなど）を用いて結合し、保護されたジ ペプチドを得る。適当な溶媒（トルエンなど）中、通常の試薬（ローソン試薬な ど）を用いてアミド基をチオアミドに変換し、対応する保護されたチオアミドを 得る。窒素上で保護基を除去し、ついで熱的に促進された環化により、環状チオ アミド（スキーム２における３など）を得る。チオアミドを適当な極性溶媒（Ｍ ｅＯＨなど）中、通常の試薬（ラニー−ニッケルなど）を用いて還元し、テトラ ヒドロピローロピラジノン（スキーム２における４など）を得る。この化合物の ナトリウム塩を１／２等量の適当なジハライド（ｏ−ジブロモキシレンなど）で アルキル化し、最終生成物（スキーム２における５など）を得る。 式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩をヒトおよび他の哺乳動物の 治療に用いるためには、通常、標準的な製薬慣習にしたがって医薬組成物として 処方される。 本発明のさらに別の特徴により、活性成分として、１またはそれ以上の前記し た式（Ｉ）の化合物またはその生理学上適合しうる塩を医薬担体または賦形剤と 合わせて含んでなる医薬組成物が提供される。本発明の組成物は、たとえば経口 、経鼻、非経口または経直腸投与に適した形態で提供してもよい。 本明細書において用いる場合、「医薬上」なる用語は、本発明の獣医学的用途を 包含する。これらの化合物を経口投与用にカプセル化、錠剤化あるいはエマルジ ョンまたはシロップに調製する。医薬上許容される固体または液体担体を添加し て、組成物を増強したり、安定化したり、あるいは組成物の調製を容易にするこ とができる。液体担体は、シロップ、落花生油、オリーブ油、グリセリン、食塩 水および水を包含する。固体担体は、デンプン、ラクトース、硫酸カルシウム二 水和物、白土、ステアリン酸マグネシウムまたはステアリン酸、タルク、ペクチ ン、アカシア、寒天またはゼラチンを包含する。担体はまた、単独でまたはワッ クスを含む、グリセリルモノステアラートまたはグリセリルジステアラートなど の徐放性物質を包含する。固体担体の量は変わるが、好ましくは、投与単位当た り約２０ｍｇないし約１ｇの間である。医薬製剤は、錠剤形の場合、粉砕、混合 、顆粒化、および必要ならば圧縮を含み；またハードゼラチンカプセル形の場合 、 粉砕、混合および充填を含む通常の調剤技術にしたがって調製される。１または 数種の活性成分を含有するカプセルは、例えば、活性成分をラクトースまたはソ ルビトールなどの不活性な担体と混合し、混合物をゼラチンカプセル中に充填す ることにより調製される。液体担体を用いる場合、製剤はシロップ、エリキシル 剤、エマルジョンまたは水性または非水性懸濁液の形態である。このような液体 製剤は、直接経口投与されるか、またはソフトゼラチンカプヤル中に充填される 。臓器特異性担体系もまた用いられる。 別法として、本発明の化合物またはその誘導体の医薬組成物は、非経口投与用 凍結乾燥粉末の溶液として処方してもよい。粉末は、使用前に適当な希釈剤また は他の医薬上許容される担体の添加により復元される。液体処方は、一般に緩衝 化された等張水溶液である。適当な希釈剤の例は、通常の等張塩溶液、標準的５ ％水中デキストロースまたは緩衝酢酸ナトリウムまたはアンモニウム溶液である 。このような製剤は非経口投与に特に適しているが、経口投与用に用いることも できるし、吸入用に計量吸入器またはネブライザー中にいれてもよい。ポリビニ ルピロリドン、ゼラチン、ヒドロキシセルロース、アカシア、ポリエチレングリ コール、マンニトール、塩化ナトリウムまたはクエン酸ナトリウムなどの賦形剤 を添加するのが望ましい。 直腸投与の場合、本発明の化合物の微粉末を、カカオ脂、グリセリン、ゼラチ ンまたはボリエチレングリコールなどの賦形剤と合し、坐剤に成型する。微粉末 はさらに油状製剤、ゲル、クリームまたはエマルションと配合してもよいし、緩 衝剤処理してもしなくてもよく、また経皮貼付剤により投与してもよい。 鼻スプレーは同様に水溶液中に処方され、エアゾル噴射剤を含むかまたは手動 圧縮手段を備えたスプレー容器中に充填する。 本発明の化合物を含有する投与単位は好ましくは０．０５−５０ｍｇ、例えば ０．０５−５ｍｇの式（Ｉ）の化合物またはその塩を含有する。 本発明のさらに別の態様によると、骨髄造血の刺激法であって、有効量の前記 した医薬組成物を対象に投与することからなる方法が提供される。 本発明の化合物を本発明にしたがって投与した場合に、許容できない毒性はな いと考えられる。 式（Ｉ）の化合物の生物学的活性を以下の試験により説明する。基質細胞における造血相乗活性の誘発 基質細胞系Ｃ６．４由来のネズミ骨髄を１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０ 中１２ウェルプレート中で増殖させる。集密に達すると、Ｃ６．４細胞を洗浄し 、培地をＦＢＳ不含の新鮮なＲＰＭＩ１６４０と交換する。ネズミＣ６．４細胞 の集密細胞層を化合物で処理する。無細胞上清を１８時間後に集める。上清をＣ entricon−３０分子量カットオフ膜で分画する。Ｃ６．４細胞造血相乗因子（Ｈ ＳＦ）活性をネズミＣＦＵ−Ｃ検定において測定する。ＣＦＵ−Ｃ検定 骨髄細胞をＣ５７Ｂ１／６雌マウスから得、１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６ ４０中に懸濁する。骨髄細胞（７．５Ｅ＋４細胞／ｍＬ）を標準的ネズミソフト 寒天ＣＦＵ−Ｃ検定において準最適レベルのＣＦＵ＋前記からの試験Ｃ６．４細 胞３０Ｋ−Ｅ上清の希釈物とともに培養する。細胞凝集物＞５０細胞をコロニー として計数する。計数された寒天コロニー数はＣ６．４骨髄基質系上清中に存在 するＨＳＦの量に比例する。エフェクター細胞機能検定 雌Ｃ５７Ｂ１マウスに試験化合物を８日間毎日、腹腔内または経口投与する。 処置または未処置マウスからのex vivo で用いた残存腹腔浸出細胞（ＰＥＣ）を 冷カルシウムならびにマグネシウム不含のヘパリンおよび抗生物質を補足したＤ ＰＢＳで最終注射後の２−４時間以内に収穫する。付着ＰＥＭ集団を、標準化Ｐ ＥＣ懸濁液をマイクロタイター皿中、２時間３７℃（５％ＣＯ₂）で培養し、ウ ェルを温緩衝液で洗浄することにより非付着細胞を除去することにより調製する 。 ホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）（１００−２００ｎＭ）による in vitro 刺激に応答してエフェクター細胞または予めオプソニン処理した（オ ートローガスな血清）生シー・アルビカンス（Ｅ：Ｔ＝１：１０）により放出さ れるスーパーオキシドディスムターゼ（ＳＯＤ）の抑制可能なスーパーオキシド をマイクロタイターフェリチトクロムｃ還元検定において定量化する。総体積２ ０ ０ｕＬ／ウェル中１％ゼラチン／ＨＢＳＳおよび８０ｕＭフェリチトクロムｃの 存在下で検定を行う。還元されたチトクロムｃのｎモル数／ウェルを３７℃(５ ％ＣＯ₂)で１時間インキュベートした後に得た分光分析の読み（５５０ｎｍ）か ら計算する。還元されたＳＯＤ−抑制可能なチトクロムｃの量をＳＯＤ（２００ Ｕ／ウェル）を含むウェルの包含により決定する。基線となるスーパーオキシド 放出を、刺激のない状態で測定する。実験データは対照群の百分率として表す。 以下の実施例は例示的なものであって、本発明の化合物を制限するものではな い。実施例１ ［３(Ｓ)，３’(Ｓ)，８ａ(Ｓ)，８ａ’(Ｓ)］−Ｎ，−（１，４−キシレンジイ ル）ビス［２−（アセトアミド）−３−（ヒドロキシメチル）−６，７８，８ａ −テトラヒドロピローロ［１，２−ａ］ピラジン−１，４（２Ｈ，３Ｈ）−ジオ ン］ ａ）[３(Ｓ)，８ａ(Ｓ)]−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルメチル）−３− （ベンジルオキシメチル）−６，７，８，８ａ−テトラヒドロピローロ［１，２ −ａ］ピラジン−１，４（２Ｈ，３Ｈ）−ジオン アルゴン下でＮａＨ（０．１２０ｇ、油中６０％分散物、３．０ｍｍｏｌ）の 乾燥ＴＨＦ（１５ｍＬ）中撹拌懸濁液を０℃に冷却した。化合物Ｐｒｏ−Ｓｅｒ （Ｂｚｌ）ジケトピペラジン（０．８２ｇ、３．０ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１ ０ｍＬ）中溶液をシリンジで添加し、混合物を２０分間撹拌した。ｔ−ブチル− ２−ブロモアセテート（０．５４ｍＬ、３．３ｍｍｏｌ）を添加し、冷却槽を取 り除き、反応物を５時間攪拌した。水（１０ｍＬ）を添加し、反応物をクエンチ した。混合物をＨ₂Ｏ（５０ｍＬ）および飽和ＮａＣｌ（５０ｍＬ）で希釈し、 ついで、ＣＨＣｌ₃で抽出した（３×５０ｍＬ）。合した有機層をＨ₂Ｏで洗浄し (２×５０ｍＬ)、ＭｇＳＯ₄上で乾燥し、濾過して、真空下濃縮し、黄色の固体 を得た。フラッシュクロマトグラフィー（２／９８ ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ₃、シ リカゲル）で精製し、１．１０ｇ（９４％）の所望の生成物を得た。ＭＳ（ＥＳ Ｉ）ｍ／ｚ ３８９．２(ＭＨ⁺)。 ｂ）[３(Ｓ)，３’(Ｓ)，８ａ(Ｓ)，８ａ’(Ｓ)]−Ｎ，Ｎ’−（１，４−キシレ ンジイル）ビス［２−（アセトアミド）−３−（ベンジルオキシメチル）−６， ７，８，８ａ−テトラヒドロピローロ［１，２−ａ］ピラジン−１，４（２Ｈ， ３Ｈ）−ジオン］ 実施例１（ａ）の化合物（１．１ｇ、２．８ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍ Ｌ）中攪拌溶液に、純粋なＴＦＡ（１０ｍＬ）を添加した。２時間後、混合物を 真空下で油にまで濃縮し、ついで、トルエンと３回共沸して、過剰な酸を除去し た。この生成物を高減圧下で１日置き、さらに乾燥させ、ついで、次の工程に直 接用いた。 上記で得られた化合物をＤＭＦ（１０ｍＬ）中に溶解した。１，４−キシレン ジアミン（０．１４ｇ、１．０ｍｍｏｌ）、ｉＰｒ₂ＮＥｔ（１．７５ｍＬ、１ ０．０ｍｍｏｌ)、ＨＯＢｔ（０．３１ｇ、２．３ｍｍｏｌ）およびＢＯＰ試薬 （１．０２ｇ、２．３ｍｍｏｌ）を続けて添加し、反応物を１８時間室温で攪拌 した。反応混合物をＥｔＯＡｃ(１００ｍＬ)、１ＮＨＣｌ（１００ｍＬ）および 飽和ＮａＣｌ（１００ｍＬ）の速く撹拌される混合物に添加した。１時間撹拌後 、層を分離し、水層を新鮮なＥｔＯＡｃで抽出した(２×５０ｍＬ)。合した有機 層をＨ₂Ｏで洗浄し(３×５０ｍＬ)、ＭｇＳＯ₄上で乾燥し、濾過し、真空下濃縮 し、黄色油とした。フラッシュクロマトグラフィー（２０／８０ ＭｅＯＨ／Ｅ ｔＯＡｃ、シリカゲル）で精製し、２３４ｍｇ（３１％）の所望の生成物を白色 固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ７６５．４(ＭＨ⁺)。 ｃ）［３(Ｓ)，３’(Ｓ)，８ａ(Ｓ)，８ａ’(Ｓ)］−Ｎ，Ｎ’−（１，４−キシ レンジイル）ビス［２−（アセトアミド）−３−（ヒドロキシメチル）−６，７ ，８，８ａ−テトラヒドロピローロ［１，２−ａ］ピラジン−１，４（２Ｈ，３ Ｈ）−ジオン］ 磁石撹拌棒を備えた５０ｍＬテフロンＨＦ反応容器中で、実施例１（ｂ）の化 合物（２６ｍｇ、４５μｍｏｌ）をｐ−クレゾール（０．５ｍＬ）に溶解した。 容器を−７８℃に冷却し、水アスピレーターで排気した。無水ＨＦ（約５ｍＬ） を混合物中に凝縮した。反応混合物を０℃にあたため、４５分間攪拌した。つい で、ＨＦを真空下、注意深く除去した。残渣をＥｔ₂Ｏ（２５ｍＬ）中にとり、 Ｈ₂Ｏ中０．１％ＴＦＡで抽出した(ｖ／ｖ、４×２５ｍＬ)。合した水層をＥｔ₂ Ｏで洗浄し(３×２５ｍＬ)、ついで、約１０ｍＬにまで真空下濃縮した。この溶 液を凍結乾燥し、白い粉末とした。ＨＰＣＬ[ＣＨ₃ＣＮ／Ｈ₂Ｏ（０．１％ＴＦ Ａ、ハミルトンＰＲＰ−１]により精製し、６．３ｍｇ（２４％）の白い粉末の 標記化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ５８５．２(ＭＨ⁺)。実施例２ ［(Ｓ)，(Ｓ)］−２，２’−（１，２−キシレンジイル）ビス［６，７，８，８ ａ−テトラヒドロピローロ［１，２−ａ］ピラジン−１，４（２Ｈ，３Ｈ）−ジ オン］ アルゴン下でＮａＨ（８８ｍｇ、油中６０％分散物、２．２ｍｍｏｌ）の無水 ＤＭＦ（５ｍＬ）中攪拌懸濁液に、Ｐｒｏ−Ｇｌｙジケトピペラジン（０．３４ ｇ、２．２ｍｍｏｌ）を一部分で加えた(わずかに泡立った)。２０分後、α、α ’−ジブロモ−ｏ−キシレン（０．２６ｇ、１．０ｍｍｏｌ）を添加し、反応物 を室温で４時間攪拌した。水（２ｍＬ）を添加し、反応をクエンチした。混合物 をＨ₂Ｏ（１０ｍＬ）および飽和ＮａＣｌ（５０ｍＬ）で希釈し、ついで、ＣＨ Ｃｌ₃で抽出した(４×５０ｍＬ)。合した有機層をＭｇＳＯ₄上で乾燥し、濾過し 、透明な油にまで真空下濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（２／９８ ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ₃、シリカゲル）により精製し、２８９ｍｇ（７０％）のガ ラス状の固体の標記化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ４１１．２(ＭＨ⁺) 。実施例３ ［(Ｓ)，(Ｓ)］−２，２’−（１，２−キシレンジイル）ビス［６，７，８，８ ａ−テトラヒドロピローロ［１，２−ａ］ピラジン−１（２Ｈ，３Ｈ，４Ｈ）− オン］ ａ）Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニルアミノチオアセチル）プロリンメチルエステ ル トルエン（２００ｍＬ）中のＢｏｃ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−ＯＭｅ（２．７８ｇ、 ９．７２ｍｍｏｌ）にローソン試薬（２．３６ｇ、５．８３ｍｍｏｌ）を添加し た。混合物を加熱し２時間還流し、ついで、室温に冷却し、真空下濃縮し、黄色 の残渣を得た。フラッシュクロマトグラフィー（３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、 シリカゲル）により、２．３３ｇ（７６％）の黄色油の所望の化合物を得た。こ の物質は、ＴＬＣおよび¹ＨＮＭＲ分析により均質であり、さらに精製すること なく用いた。 ｂ）(Ｓ)−６，７，８，８ａ−テトラヒドロピロリル［１，２−ａ］ピラジン− １−オン−４（２Ｈ，３Ｈ）−チオン ＣＨ₂Ｃｌ₂（３５ｍＬ）中の実施例３（ａ）の化合物（２．２２ｇ、７．３５ ｍｍｏｌ）に０℃でＴＦＡ（３５ｍＬ）を添加した。氷浴を取り除き、溶液を１ 時間撹拌した。溶媒を真空下除去し、残渣をトルエンから共沸した(３×２０ｍ Ｌ)。残渣をトルエン（５００ｍＬ）に懸濁し、ｉＰｒ₂ＮＥｔ（３．８４ｍＬ、 ２２．０ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を加熱し１８時間還流し、ついで室温に 冷却した。反応混合物を１ＮＨＣｌ／塩水で洗浄し(２×５０ｍＬ １：１ｖ／ ｖ)、水性洗浄物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で抽出した。合した有機層を濃縮 し、０．９２ｇ（７４％）の黄色固体の所望の物質を得た。この物質はＴＬＣお よび¹ＨＮＭＲにより均質であり、さらに精製することなく用いた。 ｃ）(Ｓ)−６，７，８，８ａ−テトラヒドロピロリル［１，２−ａ］ピラジン− １（２Ｈ，３Ｈ，４Ｈ）−オン ＭｅＯＨ（１８０ｍＬ）中の実施例３（ｂ）の化合物（０．９２ｇ、５．４１ ｍｍｏｌ）にラネーニッケル（約９ｇ、５０％水性スラリー）を添加した。混合 物を加熱し２時間還流し、室温に冷却し、セライトを通して濾過し、ラネーニッ ケルを除去した。濾過ケーキをＥｔＯＨで洗浄し、合した濾過物を真空下濃縮し 、０．６５ｇ（８６％）の淡黄色固体の所望の物質を得た。この物質は、¹ＨＮ ＭＲ解析により均質であり、さらに精製することなく用いた。 ｄ）[(Ｓ)，(Ｓ)]−２，２’−（１，２−キシレンジイル）ビス［６，７，８， ８ａ−テトラヒドロピローロ［１，２−ａ］ピラジン−１（２Ｈ，３Ｈ，４Ｈ） −オン］ ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の実施例３（ｃ）の化合物（０．６５ｇ、４．６４ｍｍ ｏｌ）およびｏ−ジブロモキシレン（０．５５ｇ、２．０８ｍｍｏｌ）にＮａＨ （０．１９ｇ、油中６０％分散物、４．７５ｍｍｏｌ）を分けて添加した。反応 物を室温で２４時間撹拌し、ついで、１ＮＨＣｌ（７５ｍＬ）中に注意深く注い だ。水層をヘキサン（２０ｍＬ）およびＥｔ₂Ｏ（２０ｍＬ）で洗浄した。合し た有機層を１ＮＨＣｌ（２０ｍＬ）で抽出し、合した水層を真空下濃縮し、黄色 の残渣を得た。逆相フラッシュクロマトグラフィー（ステップ勾配、１００％Ｈ₂ Ｏ＋０．１％ＴＦＡ；５％ＣＨ₃ＣＮ／Ｈ₂Ｏ＋０．１％ＴＦＡ；１０％ＣＨ₃Ｃ Ｎ／Ｈ₂Ｏ＋０．１％ＴＦＡ；ＹＭＣ逆相シリカゲル）により、０．０４ｇの白 色固体の標記化合物を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｚ ３８３．１(ＭＨ⁺)。実施例４ 本発明の化合物を配合した医薬用処方は、種々の形態に、多くの賦形剤を用い て調製できる。このような処方物の例を以下に示す。 錠剤／成分 一錠剤当たり １．活性成分（式Ｉの化合物） ０．５ｍｇ ２．コーンスターチ ２０ ｍｇ ３．アルギン酸 ２０ ｍｇ ４．アルギン酸ナトリウム ２０ ｍｇ ５．ステアリン酸マグネシウム １．３ｍｇ 錠剤化操作 工程１ 成分 Ｎo．１、Ｎo.２、Ｎo.３およびＮo.４を適当なミキサー／ブレ ンダー中でブレンドする。 工程２ 各添加後、慎重に混合しながら、工程１からのブレンドに十分な量の 水を数回にわけて添加する。そのように水を添加し、混合し、塊が湿式顆粒に変 わる濃度とする。 工程３ Ｎo.８メッシュ（２．３８ｍｍ）スクリーンを用いて振動グラニュレ ーターを通すことにより湿式塊を顆粒に変える。 工程４ ついで該湿式顆粒を１４０°Ｆ（６０℃）のオーブン中で乾燥する。 工程５ 乾式顆粒を成分Ｎo.５で潤滑化する。 工程６ 潤滑化顆粒を適当な打錠プレスで圧縮する。 非経口製剤 適当量の式Ｉの化合物をポリエチレングリコール中に加熱しながら溶解させる ことにより、非経口投与用医薬組成物を調製する。この溶液についでＰｈ Ｅｕ ｒ注射用水で希釈する(１００ｍｌにする)。ついで、溶液を０．２２ミクロンメ ンブランフィルターで濾過することにより滅菌処理し、滅菌容器中に密封する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 31/4985 Ａ６１Ｋ 31/495 ６０５ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＪＰ，ＵＳ (72)発明者 ロカストロ，スティーブン・マイケル アメリカ合衆国19341ペンシルベニア州 エクストン、キャンダルウッド・レイン 223番

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．式（Ｉ）： ｛式中、 Ｒ₁は、独立して、ＮＨ₂、ＯＨ、ＳＨ、ＣＮ、ＣＯ₂Ｈまたは水素であり； Ｒ₂は、独立して、水素、Ｃ_1-4アルキルＣ(Ｏ)Ｒ₅、Ｃ_1-4アルキルであるかま たはＲ₂は１または２個のＣ_1-4アルキル、Ｃ_1-4アルコキシ、Ｆ、Ｃｌ、Ｉ、Ｂ ｒ、ＯＨ、またはＮ(Ｒ₄)₂で置換されていてもよいベンジルであり； Ｒ₃は、独立して、水素、Ｃ_1-5アルキル、Ｃ_1-5アルキレンヒドロキシ、Ｃ_1-5 アルキレンＣＯ₂Ｈ、(ＣＨ₂)_yＮ(Ｒ₄)₂、(ＣＨ₂)_mＣ(Ｏ)ＮＲ(Ｒ₄)₂、Ｃ_1-5アル キレンＳＨ、ＣＨ₂Ａｒ、 Ｒ₄は、独立して、水素、Ｃ_1-5アルキルまたはベンジルであり； Ａｒは、独立して、１または２個のＲ₇基で置換されていてもよいフェニルま たはインドリルであり; Ｑは、ビシクロ［３．３．０］オクタニル、キシリル、ベンゾフェノイルまた は１，２，３，４−テトラヒドロナフタリルであり、これらはすべて、１個また は２個の：Ｃ_1-4アルキル、Ｃ_1-4アルコキシ、ハロゲン、モノまたはジＣ_1-4ア ルキルアミノ、(Ｃ_1-4アルキル)₂−ＮＣ(Ｏ)−、−(ＣＨ₂)_n−Ｒ₅、−(ＣＨ₂)_n −Ｒ₆、−(ＣＨ₂)_n−ＣＯＲ₅または−(ＣＨ₂)_n−ＣＯＲ₆から選択される置換基 で置換されていなくても置換されていてもよい； Ｒ₅は−ＯＲ₆、−Ｎ(Ｒ₆)₂、または−ＳＲ₆であり； Ｒ₆は水素、Ｃ_1-4アルキルまたはベンジルであり； Ｒ₇はハロゲン、Ｒ₅またはＲ₆であり； ｎは独立して０ないし３の整数であり； ｍは独立して１ないし３の整数であり； ｓは独立して０または１であり； ｙは独立して２ないし４の整数である； ただし、ｓが１のときｎは０ではなく、さらに、 ［(Ｓ)，(Ｓ)］−Ｎ，Ｎ’−（１，４−キシレンジイル）ビス[２−アセトアミ ド−６，７，８，８ａ−テトラヒドロピローロ［１，２−ａ］ピラジン−１，４ （２Ｈ，３Ｈ）−ジオン]； ［(Ｒ)，(Ｒ)］−２，２’−（１，２−キシレンジイル）ビス[６，７，８，８ ａ−テトラヒドロピローロ［１，２−ａ］ピラジン−１，４（２Ｈ，３Ｈ）−ジ オン]； ［(Ｓ)，(Ｓ)］−２，２’−（１，３−キシレンジイル）ビス[６，７，８，８ ａ−テトラヒドロピローロ［１，２−ａ］ピラジン−１，４（２Ｈ，３Ｈ）−ジ オン]； を除く｝ で示される化合物またはその医薬上許容される塩。 ２．Ｒ₁がＯＨまたは水素；Ｒ₃がＣＨ₂ＯＨまたは水素；およびＱがキシリル またはビシクロ［３．３．０］オクタノイルである式（Ｉ）の化合物。 ３．Ｒ₁、Ｒ₂およびＲ₃が水素、Ｑがキシリルである式（Ｉ）の化合物。 ４．[３(Ｓ)，３’(Ｓ)，８ａ(Ｓ)，８ａ’(Ｓ)]−Ｎ，Ｎ’−（１，４−キシ レンジイル）ビス[２−（アセトアミド）−３−（ヒドロキシメチル）−６，７ ，８，８ａ−テトラヒドロピローロ［１，２−ａ］ピラジン−１，４（２Ｈ，３ Ｈ）−ジオン]、 ［(Ｓ)，(Ｓ)］−２，２’−（１，２−キシレンジイル）ビス[６，７，８，８ ａ−テトラヒドロピローロ［１，２−ａ］ピラジン−１，４（２Ｈ，３Ｈ）−ジ オン]、または、 ［(Ｓ)，(Ｓ)］−２，２’−（１，２−キシレンジイル）ビス［６，７，８，８ ａ−テトラヒドロピローロ［１，２−ａ］ピラジン−１（２Ｈ，３Ｈ，４Ｈ）− オン］ である式（Ｉ）の化合物。 ５．ウイルス、真菌または細菌感染症の予防または治療法であって、この予防 または治療を必要とする動物に有効量の請求項１記載の化合物を投与することか らなる方法。 ６．骨髄造血系を刺激する方法であって、この刺激を必要とする動物に該骨髄 造血系を刺激するのに有効量の請求項１記載の化合物を投与することからなる方 法。 ７．敗血症を予防または治療する方法であって、この予防または治療を必要と する動物に、有効量の請求項１記載の化合物を投与することからなる方法。 ８． ａ）Ａがテトラヒドロピローロピラジンジオンである化合物の場合には、２等量 の式（ＩＩ）の化合物または２等量の式（ＩＩＩ）の化合物： （式中、Ｒ₁およびＲ₃は式（Ｉ）について定義したものまたはそれらに変換可能 な基、Ｙは適当な保護基を意味する。） と式（ＩＶ）: ＨＮ(Ｒ₂)-Ｑ-(Ｒ₂)ＮＨ （IV） （式中、Ｒ₂およびＱは式（Ｉ）に定義したものである）の適当なジアミンとを 適当な溶媒中結合化剤とともに結合し、保護基を除去する； または ｂ）Ａがテトラヒドロピローロピラジノンである化合物の場合には、式（Ｖ）： （式中、Ｒ₁およびＲ₃は、式（Ｉ）について定義したものまたはそれらに変換可 能な基）を１／２等量の式（ＶＩ）： Ｘ-Ｑ-Ｘ （VI） （式中、ＸはＣｌ、ＦまたはＩおよびＱは式（Ｉ）で定義したもの）の適当なジ ハライドでアルキル化し、必要に応じ： ｉ）Ｒ₁およびＲ₃を変換し；および／または ｉｉ）塩を形成させる ことからなる．式（Ｉ）の化合物を製造する方法。