JP2000501415A - ピリミジン誘導体およびグアニン誘導体、ならびに腫瘍細胞の処置におけるそれらの使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、腫瘍細胞においてＯ ⁶−アルキルグアニン−ＤＮＡアルキルトランスフェラーゼ（ＡＴａｓｅ）活性を減少させる効力を示す化合物を提供する。これらの化合物には、式ＩＩの特定のピリミジン誘導体［式中、Ｒは（ｉ）所望により炭素環もしくは複素環がそれに縮合した、少なくとも１つの５員もしくは６員の複素環を有する環式基（この複素環またはそれぞれの複素環はＯ、ＮまたはＳから選択される少なくとも１個の異種原子を有する）、またはその置換誘導体であるか；あるいは（ii）フェニルまたはその置換誘導体であり、Ｒ²はＨ、Ｃ₁〜Ｃ₅アルキル、ハロゲンまたはＮＨ₂から選択され、Ｒ⁴およびＲ⁵は同一であるかまたは異なり、Ｈ、ＮＨ−Ｙ′またはＮＯ_nから選択され、ここでＹ′はＨ、リボシル、デオキシリボシル、アラビノシル、（ａ）（ここでＸはＯまたはＳであり、Ｒ″はアルキルであり、Ｒ″′はＨまたはアルキルである）、またはその置換誘導体であり、ｎは１または２であり、あるいはＲ⁴とＲ⁵はピリミジン環と一緒に、１個またはそれ以上の異種原子を含む５員または６員の環構造を形成する］およびその薬剤学的に許容しうる塩類が含まれる。それらには、式（XIII）の特定のグアニン誘導体［式中、Ｒ⁶は前記Ｒにつき（ｉ）に定めたものであり、Ｙ′は前記に定めたものである］が含まれる。

Description

【発明の詳細な説明】 ピリミジン誘導体およびグアニン誘導体、 ならびに腫瘍細胞の処置におけるそれらの使用技術分野 本発明は、ピリミジン誘導体およびグアニン誘導体、ならびに腫瘍細胞の処置 におけるそれらの使用に関する。特に、本発明は６−ヘタリールアルキルオキシ ピリミジン誘導体、Ｏ ⁶−置換グアニン誘導体およびＳ ⁶−置換チオグアニン誘導 体に関する。これらの化合物は、腫瘍細胞においてＯ ⁶−アルキルグアニン−Ｄ ＮＡアルキルトランスフェラーゼ（ＡＴａｓｅ）活性を減少させる効力を示す。背景技術 Ｏ ⁶−アルキルグアニン−ＤＮＡアルキルトランスフェラーゼ減少活性をもつＯ ⁶ −アルキルグアニン誘導体を、腫瘍細胞致死のために用いられる化学療法用 アルキル化剤（主としてＤＮＡをメチル化またはクロロエチル化するもの）の有 効性を高めるために利用することが示唆されている。哺乳動物細胞でのアルキル 化剤の毒性や突然変異誘発作用はＤＮＡ中のグアニンのＯ ⁶−位におけるアルキ ル化の結果によるところが大きいという証拠が増えている。Ｏ ⁶−アルキルグア ニンの修復はＡＴａｓｅにより仲介される。これは修復タンパク質であって、自 己不活性化プロセスにおいてＯ ⁶−アルキル化グアニン残基に対し、アルキル基 をこの修復タンパク質の活性部位にあるシステイン残基へ化学量論的に転移させ ることにより作用する。アルキル化剤の生物学的作用に対し細胞を保護するのに ＡＴａｓｅが重要であることは、クローン化したＡＴａｓｅ遺伝子またはｃＤＮ ＡをＡＴａｓｅ欠失細胞中へ伝達して発現させることにより、最も明瞭に証明さ れた。すなわちこれは、多様な薬剤、主としてＤＮＡをメチル化またはクロロエ チル化するものに対する抵抗性を与える。ＡＴａｓｅ欠失細胞におけるＯ ⁶−メ チルグアニンによる細胞致死のメカニズムの詳細はまだ明らかでないが、Ｏ ⁶− クロロエチルグアニンによる致死は環状エタノグアニン中間体を経て反対鎖上の シトシン残基へＤＮＡ鎖間架橋が形成されることにより起きる。このプロセスは 、 ＡＴａｓｅが仲介するクロロエチル基除去または複合体形成により阻止される。 ＡＴａｓｅ活性を減少させるためにＯ ⁶−メチルグアニンおよびＯ ⁶−ｎ−ブチ ルグアニンを利用することが研究された（Dolan et al.,Cancer Res.,(1986)・46 ,pp.4500；Dolan et al.,Cancer Chemother.Pharmacol.,(1989)25,pp.103）。Ａ Ｔａｓｅ発現細胞をクロロエチル化剤の細胞毒性に対しより感受性にするために 、ＡＴａｓｅ活性を減少させるものとして、Ｏ ⁶−ベンジルグアニン誘導体が提 唱された（Moschel et al.,J.Med.Chem.,1992,35,4486）。米国特許第5 091 430 号および国際特許出願公開第WO 91/13898号（Moschelら）には、宿主において腫 瘍細胞のＯ ⁶−アルキルグアニン−ＤＮＡアルキルトランスフェラーゼ量を激減 させる方法であって、宿主に次式のＯ ⁶−ベンジル化グアニン誘導体を含有する 有効量の組成物を投与することを含む方法が開示されている： Ｒ^aはベンジル基または置換ベンジル基である。ベンジル基はオルト、メタまた はパラ位において、ハロゲン、ニトロ、アリール、たとえばフェニルまたは置換 フェニル、炭素原子１〜４個のアルキル、炭素原子１〜４個のアルコキシ、炭素 原子最高４個のアルケニル、炭素原子最高４個のアルキニル、アミノ、モノアル キルアミノ、ジアルキルアミノ、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、ヒドロキシ メチル、およびＳＯ_nＲ^b（ここでｎは０、１、２または３であり、Ｒ^bは水素、 炭素原子１〜４個のアルキル、またはアリールである）などの置換基で置換され ていてもよい。Chae et al.,J.Med.Chem.,1994,37,342-347には、ベンゼン環ま たは９位に次第に嵩高い置換基をもつＯ ⁶−ベンジルグアニン類似体についての 試験が記載されている。Chae et al.,J.Med.Chem.,1995,38,359-365には、数種 の８−置換Ｏ ⁶−ベンジルグアニン、２−および／または８−置換６−（ベンジ ルオキシ）プリン、置換６（４）−（ベンジルオキシ）ピリミジン、および６− （ベンジルオキシ）−ｓ−トリアジンが記載され、それらがＡＴａｓｅを不活性 化する効力につき試験された。ヒトＨＴ２９結腸腫瘍細胞抽出液中のＡＴａｓｅ の不活性化において、２種類の化合物が、Ｏ ⁶−ベンジルグアニンより有意に有 効であると確認された。これらは８−位に電子吸引基をもつ８−置換Ｏ ⁶−ベン ジルグアニン（たとえば８−アザ−Ｏ ⁶−ベンジルグアニンおよびＯ ⁶−ベンジル −８−ブロモグアニン）、および５−位に電子吸引基をもつ５−置換２，４−ジ アミノ−６−（ベンジルオキシ）ピリミジン（たとえば２，４−ジアミノ−６− （ベンジルオキシ）−５−ニトロソピリミジンおよび２，４−ジアミノ−６−（ ベンジルオキシ）−５−ニトロピリミジン）であった。後者の誘導体は、無傷の ＨＴ２９結腸腫瘍細胞中のＡＴａｓｅの不活性化においても、Ｏ ⁶−ベンジルグ アニンより有意に有効であった。本出願の優先日より後に公開された国際特許出 願公開第WO 96/04280号は、同様な置換Ｏ ⁶−ベンジルグアニンおよび６(４)−ベ ンジルオキシピリミジンに関する。 本出願人は、国際特許出願公開第WO 94/29312号として公開された国際特許出 願PCT/IE 94/00031号の出願人でもある。国際特許出願公開第WO 94/29312号（そ の内容全体を本明細書に参考として引用する）には、式ＩのＯ ⁶−置換グアニン 誘導体： ［式中、 またはＳであり、Ｒ″およびＲ″′はアルキルである）、またはその置換誘導体 であり； Ｒ′はＨ、アルキルまたはヒドロキシアルキルであり； Ｒは（ｉ）所望により炭素環もしくは複素環がそれに縮合した、少なくとも５ 員もしくは６員の複素環を有する環式基またはその置換誘導体であって、この複 素環またはそれぞれの複素環はＯ、ＮまたはＳから選択される少なくとも１個の 異種原子を有し；あるいは （ii）ナフチルまたはその置換誘導体である］ およびその薬剤学的に許容しうる塩類が記載されている。 ＡＴａｓｅ活性を減少させ、したがって前記の化学療法薬の効果を高めるのに 有用であるためには、化合物は以下の点に関して評価した特性を兼ね備えていな ければならない １）組換え体ＡＴａｓｅのインビトロ不活性化 ２）安定性 ３）溶解性 ４）哺乳動物細胞および／または異種腫瘍移植体における、ＡＴａｓｅの不活性 化 ５）その化学療法薬の致死作用または増殖阻害作用に対する、哺乳動物細胞およ び／または異種腫瘍移植体の感受性増大 この組合わせ試験における新規化合物の挙動は、予測不能である。この予測不 能なＡＴａｓｅ不活性化における、立体的要因を含めた分子相互作用は、ＡＴａ ｓｅ分子中のシステイン受容体部位の環境の性質に関係すると思われる。 大腸菌（E.coli）由来のＡＴａｓｅタンパク質（Ａｄａ遺伝子）の構造が、Ｘ 線結晶学的技術により解明された（M.H.Moore et.al.,EMBO Journal，1994,13,1 495）。ヒトＡＴａｓｅのアミノ酸配列は細菌由来のものとは若干異なるが、既 知のＡＴａｓｅ（ヒト、げっ歯類、酵母、細菌）はすべて共通フラグメントＰｒ ｏ−Ｃｙｓ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ中にシステイン（Ｃｙｓ）受容体部位を含む。Ａｄ ａタンパク質の結晶構造からコンピューターにより作成したヒトＡＴａｓｅの相 同モデル（J.E.A.Wibley et.al.,Anti-Cancer Drug Design,1995,10,75）は、タ ンパク質のポケット内に深く埋め込まれたＣｙｓ受容体をもつという点で、それ に似ている。無傷のＤＮＡ中にあるＯ ⁶−アルキル化グアニン残基、またはベン ジルのような比較的大きな基でアルキル化された遊離グアニンですら、Ｃｙｓ受 容体に接近するには構造をかなりひずませる必要がある。これらの立体配置の変 化は、二重らせんＤＮＡがこのタンパク質に特徴的に結合することにより開始す る（K.Goodtzova et.al.,Biochemistry,1994,33,8385）。 ＡＴａｓｅ活性部位“ポケット”のアミノ酸の成分および寸法は、関与するメ カニズムの詳細と同様にまだ分かっていないので、個々のＯ ⁶−アルキル化グア ニンまたはこれに類する環系の活性を予測するのは不可能である。 この分野の公表された報文は、主としてＤＮＡ中のグアニンのものと等しい核 をもつＯ ⁶−アルキルグアニン誘導体の使用に関する。Chae et al.,J.Med.Chem. ,1995,38,359-365には、グアニン環が修飾された限られた数の化合物についての 試験を記載している。しかしこれらの化合物はすべて、修飾グアニン環のＯ ⁶− 位のベンジル置換またはピリミジン環の６（４）−ベンジルオキシ置換をもつも のであった。グアニン環またはプリン骨格の置換基の微妙な変化によりそれらの “親”構造と比較して著しく無効なＡＴａｓｅ不活性化剤である物質が生成する 可能性があるという所見は、より実質的な修飾がＡＴａｓｅ不活性化機能を破壊 するという可能性も示唆する。 クロルエチル化作用性またはメチル化作用性の抗腫瘍薬のような化学療法薬の 効果を高めるために、ＡＴａｓｅ活性を減少させるのに有用な他の新規化合物が 要望されている。他の目的は、Ｏ ⁶−ベンジルグアニンより良好なＡＴａｓｅ不 活性化特性をもち、かつ異なる溶解度パターンをもつ化合物を提供することであ る。 本発明の他の目的は、ＡＴａｓｅ活性を減少させるのに有用な化合物を含有す る薬剤組成物を提供することである。本発明の他の目的は、腫瘍細胞においてＡ Ｔａｓｅ活性を減少させる方法を提供することである。本発明のさらに他の目的 は、宿主内の腫瘍細胞を、それらが上記のアルキル化剤に対してより感受性にな るように処理する方法を提供することである。 本発明は、式ＩＩの６−ヘタリールアルキルオキシピリミジン誘導体： ［式中、 Ｒは（ｉ）所望により炭素環もしくは複素環がそれに縮合した、少なくとも１ つの５員もしくは６員の複素環を有する環式基（この複素環またはそれぞれの複 素環はＯ、ＮまたはＳから選択される少なくとも１個の異種原子を有する）、ま たはその置換誘導体であるか；あるいは （ii）フェニルまたはその置換誘導体であり、 Ｒ²はＨ、Ｃ₁〜Ｃ₅アルキル、ハロゲンまたはＮＨ₂から選択され、 Ｒ⁴およびＲ⁵は同一であるかまたは異なり、Ｈ、ＮＨ−Ｙ′またはＮＯ_nから 選択され、ここでＹ′はＨ、リボシル、デオキシリボシル、アラビノシル、 Ｈまたはアルキルである）、またはその置換誘導体であり、ｎは１または２であ り、 あるいは Ｒ⁴とＲ⁵はピリミジン環と一緒に、１個またはそれ以上の異種原子を含む５員 または６員の環構造を形成する］ およびその薬剤学的に許容しうる塩類を提供する；ただし Ｒ⁴とＲ⁵が環構造ＩＸ ＸはＯまたはＳであり、Ｒ″およびＲ″′はアルキルである）、またはその置換 誘導体である］を形成する場合、Ｒ²はＮＨ₂ではなく、 かつ以下の状況ａ）〜ｈ）では、Ｒはフェニルではない： ａ）Ｒ²およびＲ⁵がＮＨ₂であり、かつＲ⁴がＮＯまたはＮＯ₂である場合、 ｂ）Ｒ²がＮＨ₂であり、かつＲ⁴とＲ⁵が環構造Ｘを形成している場合、 ｃ）Ｒ²がＮＨ₂であり、かつＲ⁴とＲ⁵が環構造ＸＩを形成している場合、 ｄ）Ｒ²がＮＨ₂であり、かつＲ⁴がＮＯ₂であり、かつＲ⁵がＨもしくはＣＨ₃であ る場合、 ｅ）Ｒ²、Ｒ⁴およびＲ⁵がＮＨ₂である場合、 ｆ）Ｒ²およびＲ⁵がＮＨ₂であり、かつＲ⁴がＨである場合、 ｇ）Ｒ²がＨであり、かつＲ⁴がＮＯ₂であり、かつＲ⁵がＮＨ₂である場合、 または ｈ）Ｒ²がＦもしくはＯＨであり、かつＲ⁴とＲ⁵が環構造ＸＩＩを形成している 場合 国際特許出願公開第WO 94/29312号中の一般式に含まれるけれどもそこに公開 されていない特定のＯ ⁶−置換グアニン誘導体が、国際特許出願公開第WO 94/293 12号に定義された群のうちからそれらの誘導体を選択するのを正当化する予想外 の有利な特性を兼ね備えていることが見出された。 他の態様において本発明は、式XIIIのグアニン誘導体： ［式中、 ＥはＯまたはＳであり、 Ｙ′は前記式ＩＩにつき定めたものであり、 Ｒ⁶は所望により炭素環もしくは複素環がそれに縮合した、少なくとも１つの ５員もしくは６員の複素環を有する環式基（この複素環またはそれぞれの複素環 はＯ、ＮまたはＳから選択される少なくとも１個の異種原子を有する）、または その置換誘導体である］ およびその薬剤学的に許容しうる塩類を提供する。ただし、国際特許出願公開第 WO 94/29312号に公開された化合物を除く。 特に、本発明は式XIVの有利な化合物： ［式中、 Ｒ¹⁰はブロモ、クロロまたはシアノであり、 Ｙ′は式ＩＩにつき定めたものである］ を選択する。 最も好ましくはＲ¹⁰はブロモである。特に好ましい選択化合物は、次式ＸＶのＯ ⁶ −（４−ブロモテニル）グアニンである： この化合物は、経口投与の可能性を含めた有利な特性を兼ね備えている。 ＲまたはＲ⁶は、適切には５員もしくは６員の複素環またはそのベンゾ誘導体 であり、後者の場合ピリミジン部分はＲまたはＲ⁶の複素環またはベンゼン環の いずれに結合していてもよい。 好ましい態様において、ＲまたはＲ⁶はＳまたはＯを含む５員環であって、第 ２の環がそれに縮合した、または縮合していないものである。 好ましくはＲまたはＲ⁶は、少なくとも１個のＳ原子を含む複素環である；よ り好ましくはＲまたはＲ⁶は、少なくとも１個のＳ原子を含む５員の複素環であ る；最も好ましくはＲまたはＲ⁶は、チオフェン環またはその置換誘導体である 。あるいはＲまたはＲ⁶は、少なくとも１個のＯ原子を含む複素環、特に少なく とも１個のＯ原子を含む５員の複素環であってもよく、より具体的にはＲまたは Ｒ⁶はフラン環またはその置換誘導体であってもよい。他の態様として、Ｒまた はＲ⁶は少なくとも１個のＮ原子を含む複素環であってもよく、特にＲまたはＲ⁶ は、少なくとも１個のＮ原子をもつ６員の複素環であってもよく、殊にＲまたは Ｒ⁶はピリジン環であってもよい。 ＲまたはＲ⁶において複素環に縮合した炭素環または複素環自体が二環式、た とえばナフタレンであってもよい。 一般に本発明のいずれかの化合物に関して用いる“置換誘導体”という語は、 化合物中のその存在がＡＴａｓｅ減少活性をもつ化合物と適合するいかなる置換 誘導体をも意味する。 ＹまたはＹ′の定義において“置換誘導体”という語には、さらに以下の基１ 個またはそれ以上による置換が含まれる：ヒドロキシ、ハロ、アルコキシ、アミ ノ、アルキルアミノ、アミドまたはウレイド。特に好ましい化合物群において、 Ｒ″はヒドロキシ置換アルキルであり、かつＲ″′はＨであり、したがってＹ′ はヒドロキシアルコキシメチル、好ましくはアルコキシ基中に１〜１０個の炭素 原子をもつものである。 ＲまたはＲ⁶の定義において“置換誘導体”という語には、以下の基１個また はそれ以上による複素環（１またはそれ以上）および／または炭素環（１または それ以上）の置換が含まれる：アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ 、アリール、ハロ、ハロアルキル、ニトロ、シアノ、アジド、ヒドロキシアルキ ル、ＳＯ_nＲ⁷（ここでＲ⁷はアルキルであり、ｎは０、１または２である）、ま たは式−ＣＯＯＲ⁸（ここでＲ⁸はＨまたはアルキルである）のカルボキシルもし くはエステル基。ハロ、ハロアルキル、シアノ、アルキレンジオキシ、ＳＯ_nＲ⁷ （上記に定義）および−ＣＯＯＲ⁸（ここでＲ⁸はアルキルである）が好ましい置 換基である。 アルキル、アルコキシ、アルケニルまたはアルキニル基は、好ましくは１〜２ ０個、より好ましくは１〜１０個、最も好ましくは１〜５個の炭素原子を含む。 ハロには、ヨード、ブロモ、クロロまたはフルオロが含まれる。アリール基は、 好ましくは１〜２０個、より好ましくは１〜１０個の炭素原子、特に５または６ 個の炭素原子を含む。 本発明の１態様によれば、前記式ＩＩもしくは式XIIIの化合物またはその薬剤 学的に許容しうる塩、および剤学的に許容しうる賦形剤を含有する薬剤組成物が 提供される。所望により組成物は、クロロエチル化剤またはメチル化剤のような アルキル化剤を含有してもよい。 他の態様において本発明は、前記式ＩＩもしくは式XIIIの化合物またはその 薬剤学的に許容しうる塩を含有する有効量の組成物、より具体的には前記に定め る薬剤組成物を、宿主に投与することを含む、宿主においてＡＴａｓｅ活性を減 少させる方法を提供する。あるいはこの方法は、宿主においてＡＴａｓｅ仲介Ｄ ＮＡ修復活性を減少させる方法と定義できる。 本発明はさらに、前記式ＩＩもしくは式XIIIの化合物またはその薬剤学的に許 容しうる塩を含有する有効量の組成物、より具体的には前記に定める薬剤組成物 を、宿主に投与し、かつアルキル化剤を含有する有効量の組成物を宿主に投与す ることを含む、宿主において腫瘍細胞を処置する方法を提供する。本方法は、ア ルキル化剤の作用に対し感受性であることが知られているものを含めた新生物、 たとえば黒色腫および神経膠腫その他、アルキル化剤だけによる処置に対する抵 抗性を本発明による不活性化剤の使用により克服しうるものの処置に利用できる 。 本明細書および請求の範囲で用いる“薬剤学的に許容しうる塩類”という用語 は、薬剤産業の分野で既知の種類の塩類を意味し、以下のものを含む：無機酸、 たとえば硫酸、臭化水素酸、硝酸、リン酸または塩酸との塩類、および有機酸、 たとえば酢酸、クエン酸、マレイン酸、フマル酸、安息香酸、コハク酸、酒石酸 、プロピオン酸、ヘキサン酸、ヘプタン酸、シクロペンタンプロピオン酸、グリ コール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、リンゴ酸、ｏ−（４−ヒドロキシ−ベ ンゾイル）安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホ ン酸、１，２−エタンジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンジスルホン酸、ベン ゼンスルホン酸、ｐ−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、 ｐ−トルエンスルホン酸、ショウノウスルホン酸、４−メチル−ビシクロ［２． ２．２］オクト−２−エン−１−カルボン酸、グルコヘプトン酸、４，４′−メ チレンビス（３−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸）、３−フェニルプロピオン酸、 トリメチル酢酸、ｔ−ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、 ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸またはムコン酸などとの塩類 。 前記の条件付きで、好ましい本発明化合物は以下のものである： タイプ１式III 式中、 Ｒは式ＩＩにつき定めたもの、特に、置換されていないか、あるいは好ましく はハロゲン、たとえば塩素、臭素もしくはフッ素、またはシアノで置換された、 フリルまたはチエニルであり； Ｙ′は式ＸIIIにつき定めたものであり、好ましくはＹ′はＨまたはＨＯＣＨ₂ ＣＨ₂ＯＣＨ₂−であり； Ｒ²はＨ、ＮＨ₂、Ｃ₁〜Ｃ₅アルキル、好ましくはメチル、またはハロゲン、好 ましくはフッ素であり； Ｒ³はＨまたはＯＨである。 タイプ２式ＩＶ 式中、 Ｒは式ＩＩにつき定めたもの、特に、置換されていないか、あるいは好ましく はハロゲン、たとえば塩素、臭素もしくはフッ素、またはシアノで置換された、 フェニル、チエニルまたはフリルであり、あるいはメチレンジオキシ環構造がそ れに縮合したフェニルであり； Ｙ′は式ＸIIIにつき定めたものであり； ＸはＣＨまたはＮであり； ＡはＣＨまたはＮであり；好ましくはＸ＝ＮであるときＡ＝ＣＨである。式Ｖ 式中、 Ｒは式ＩＩにつき定めたものであり； ＸはＣＨまたはＮであり； ＡはＣＨまたはＮである。 タイプ３式ＶＩ 式中、 Ｒは式ＩＩにつき定めたもの、特に、置換されていないか、または好ましくは ハロゲン、たとえば塩素もしくは臭素で置換された、チエニルまたはフリルであ り； ＺはＯまたはＳまたはＣＨ＝ＣＨである。 このタイプの特に好ましい化合物群はＯ ⁶−（４−ハロテニル）−８−チアグア ニン、特にＯ ⁶−（４−ブロモテニル）−８−チアグアニンである。式VII 式中、 Ｒは式ＩＩにつき定めたものであり； ＵはＣＨまたはＮであり； ＶはＣＨまたはＮであり； ＷはＣＨまたはＮであり； ただし、Ｕ、ＶおよびＷがすべてＣＨであることはない。 タイプ４式VIII 式中、 Ｒは式ＩＩにつき定めたもの、特に、ハロゲン、好ましくは１個またはそれ以 上の塩素、臭素またはフッ素で所望により置換された、テニルまたはフリルであ り； ＴはＨ、ＮＨ₂またはＮＯ_nであり、ここでｎは１または２であり； ＱはＨ、ＮＨ₂またはＮＯ_nであり、ここでｎは１または２である。 タイプ５式ＸＶＩ 式中、 Ｒは式XIIIにつき定めたものであり； Ｙ′は式ＩＩにつき定めたものである。 図面の簡単な説明 添付の図面を参照して本発明をより詳細に記述する。 図１〜４は、化合物Ｂ．４３１６による前処置が種々の化学療法薬に対するＲ ａｊｉ細胞の感受性増大に及ぼす効果を示すグラフである。各グラフには、Ｂ． ４３１６の存在下および不在下の化学療法薬の濃度（μｇ／ｍｌ）に対し増殖率 をプロットする。 図１は、１μＭのＢ．４３１６による前処置がテモゾロミド(temozolomide)に 対するＲａｊｉ細胞の感受性増大に及ぼす効果を示す。 図２は、１０μｍのＢ．４３１６による前処置がＢＣＮＵに対するＲａｊｉ細 胞の感受性増大に及ぼす効果を示す。 図３は、１０μＭのＢ．４３１６による前処置がフォテムスチン(fotemustine )に対するＲａｊｉ細胞の感受性増大に及ぼす効果を示す。 図４は、１０μＭのＢ．４３１６による前処置がメルファラン（melphalan） およびシスプラチン（cisplatin）に対するＲａｊｉ細胞の感受性増大に及ぼす 効果を示す。 図５は、１０μＭのＢ．４３１６による前処置が種々の化学療法薬に対するＲ ａｊｉ細胞の感受性増大に及ぼす効果を示すヒストグラムである。効果はＤ₅₀に 基づく増感係数（ＳＦ、後記に定義）として測定された。ただしフォテムスチン の場合はＳＦはＤ₈₀に基づく。 図６は、１０μＭのＢ．４３４９による前処置が種々の化学療法薬に対するＲ ａｊｉ細胞の感受性増大に及ぼす効果を示す同様なヒストグラムである。ＳＦは 図５の場合と同様である。 図７は、種々の不活性化化合物５ｍｇ／ｋｇを腹腔内投与した２時間後の、Ａ ３７５Ｍ腫瘍および宿主ネズミ組織におけるＡＴａｓｅ不活性化を示す、一連の ヒストグラムである。不活性化は、ｆｍ／ｍｇ（タンパク質）として測定した対 照ＡＴａｓｅ活性に対する％として計算された。 図８は、Ｂ．４３６３（２０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）を投与した後の、Ａ３７５ Ｍ腫瘍および宿主ネズミ組織におけるＡＴａｓｅの減少と回復の反応速度を示す グラフである。グラフには、対照ＡＴａｓｅ活性に対する％を時間（時間）に対 しプロットする。 図９は、漸増する濃度の不活性化剤Ｏ ⁶−ベンジルグアニン（ＢｅＧ）、Ｏ ⁶− テニルグアニン（Ｂ．４２０５）およびＯ ⁶−（４−ブロモテニル）グアニン（ Ｂ．４２８０）と共にインキュベートした後の純粋な組換えヒトＡＴａｓｅの活 性残存率のグラフである。５０％残存活性のラインをＩ₅₀値、すなわちＡＴａｓ ｅ活性を５０％低下させるのに必要な不活性化剤濃度の計算に用いる。示したＩ₅₀ 値はこれらの曲線から外挿したものである。１時間のプレインキュベーション 後に［³Ｈ］−メチル化基質を添加して、ＡＴａｓｅ残存活性を測定した。 図１０Ａは、テモゾロミド濃度（μｇ／ｍｌ）に対する細胞増殖率％を示す３ つのグラフである。これらはＢｅＧ、Ｂ．４２０５およびＢ．４２８０（最終濃 度０．５μＭ）による前処置がテモゾロミドの増殖阻害作用に対するRaji細胞の 感受性に及ぼす効果を示す。不活性化剤またはビヒクルをテモゾロミドの２時間 前に投与した。 図１０Ｂは、図１０Ａの不活性化剤に関し、テモゾロミドによる増殖阻害に対 するＲａｊｉ細胞のＤ₅₀に基づく増感係数を示すヒストグラムである。 図１１は、時間（時間）に対するＡＴａｓｅ活性（ｆｍ／ｍｇ）のヒストグラ ムであり、ＡＴａｓｅ不活性化剤ＢｅＧ、Ｂ．４２０５およびＢ．４２８０がヌ ードマウス内で増殖したヒト黒色腫異種移植片のＡＴａｓｅ活性に及ぼす効果を 示す。動物に１回量の不活性化剤３０ｍｇ／ｋｇまたは６０ｍｇ／ｋｇを腹腔内 投与し、図示した時間後に屠殺した。 図１２は、ＡＴａｓｅ不活性化剤がヌードマウス内で増殖したヒト黒色腫異種 移植片中のＡＴａｓｅ活性（ｆｍ／ｍｇ）に及ぼす効果を示すヒストグラムであ る。動物にＢ．４２０５もしくはテモゾロミドを単独で、またはＢ．４２０５も しくはＢ．４２８０をテモゾロミド（５０ｍｇ／ｋｇ）と組合わせて、図示した 用量で連続３日間（指示した場合以外）腹腔内投与し、最終投与の２４時間後に 屠殺した。ビヒクルは、不活性化剤についてはトウモロコシ油、テモゾロミドに ついてはＰＢＳ（２０％ＤＭＳＯ）であった。 図１３は、ＡＴａｓｅ不活性化剤がヌードマウスの肝臓のＡＴａｓｅ活性に及 ぼす効果を示すヒストグラムである。動物にＢ．４２０５もしくはテモゾロミド を単独で、またはＢ．４２０５もしくはＢ．４２８０をテモゾロミド（５０ｍｇ ／ｋｇ、腹腔内）と組合わせて、図示した用量で連続３日間（指示した場合以外 ）投与し、最終投与の２４時間後に屠殺した。 図１４Ａは、時間（日）に対する腫瘍増殖率％のグラフであり、Ｂ．４２０５ がテモゾロミドによる増殖阻害に対するヒト黒色腫異種移植片の感受性に及ぼす 効果を示す。動物を処置せず、またはテモゾロミドのみ（１００ｍｇ／ｋｇ、腹 腔内）を投与し、またはＢ．４２０５（５、１０または２０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内 ）を投与した１時間後にテモゾロミド（１００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）を連続５日 間投与した。記載に従って腫瘍の増殖を監視した。多数の別個の試験で得たデー タを提示する。 図１４Ｂは、時間（日）に対する生存マウス数のグラフであり、図１４Ａに示 した試験に用いた動物（腫瘍保有ヌードマウス）の生存数を示す。異種移植片が 最大サイズに達した動物群は終結させた。 図１５Ａは、Ｂ．４２８０がテモゾロミドによる増殖阻害に対するヒト黒色腫 異種移植片の感受性に及ぼす効果を示すグラフである。動物を処置せず、または テモゾロミドのみ（１００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）もしくはＢ．４２８０のみ（２ ０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）を投与し、またはＢ．４２８０（１、５、１０または２ ０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）を投与した１時間後にテモゾロミド（１００ｍｇ／ｋｇ 、腹腔内）を連続５日間投与した。記載に従って腫瘍の増殖を監視した。多数の 別個の試験で得たデータを提示する。 図１５Ｂは、図１５Ａに示した試験に用いた動物（腫瘍保有ヌードマウス）の 生存数を示すグラフである。異種移植片が最大サイズに達した動物群は終結させ た。 図１６Ａは、時間（日）に対する腫瘍増殖率％のグラフであり、腹腔内（ｉｐ ）および経口（ｐｏ）投与したＢ．４２８０がテモゾロミドによる増殖阻害に対 するヒト黒色腫異種移植片の感受性に及ぼす効果の比較を示す。動物を処置せず 、 またはテモゾロミドのみ（１００ｍｇ／ｋｇ）もしくはＢ．４２８０のみ（２０ ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）を投与し、またはＢ．４２８０（２０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内 ）もしくはＢ．４２８０（３０ｍｇ／ｋｇ、経口）を投与した１時間後にテモゾ ロミド（１００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）を連続５日間投与した。記載に従って腫瘍 の増殖を監視した。多数の別個の試験で得たデータを提示する。 図１６Ｂは、図１６Ａに示した試験に用いた動物の生存数を示すグラフである 。異種移植片が最大サイズに達した動物群は終結させた。 図１７は、腫瘍を保有しないＤＢＡ₂マウスにおいて、テモゾロミド（ＴＺ） と組み合わせたＢｅＧ、Ｂ．４２０５およびＢ．４２８０が及ぼす効果の比較試 験における動物の生存数を示すグラフである。動物にテモゾロミドのみ（１００ ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）を投与し、またはＢｅｇ（１０または２０ｍｇ／ｋｇ、腹 腔内）、Ｂ．４２０５（１０または２０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）もしくはＢ．４２ ８０（１０または２０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）を投与した１時間後にテモゾロミド （１００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）を連続５日間投与した。 図１８〜２１は、Ｂ．４２８０を指示した用量で投与した後の、種々の腫瘍お よび宿主ネズミ組織におけるＡＴａｓｅの減少と回復の反応速度を示す各対のグ ラフである。グラフには、ＡＴａｓｅ活性（ｆｍ／ｍｇタンパク質）および対照 ＡＴａｓｅ活性に対する％を、時間（時間）に対しプロットする： 図１８は、Ａ３７５Ｍ腫瘍および他の組織におけるＢ．４２８０（２０ｍｇ／ ｋｇ、腹腔内）に関する。 図１９は、Ａ３７５Ｍ腫瘍および他の組織におけるＢ．４２８０（３０ｍｇ／ ｋｇ、経口）に関する。 図２０は、ＭＣＦ−７腫瘍および他の組織におけるＢ．４２８０（３０ｍｇ／ ｋｇ、腹腔内）に関する。 図２１は、ＤＵ−１４５腫瘍および他の組織におけるＢ．４２８０（２０ｍｇ ／ｋｇ、腹腔内）に関する。 図２２は、時間（日）に対する腫瘍増殖率％のグラフであり、Ｂ．４２８０が テモゾロミドによる増殖阻害に対するＭＣＦ−７腫瘍の感受性に及ぼす効果を示 す。動物を処置せず、またはテモゾロミドのみ（１００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）も しくはＢ．４２８０（PaTrin-２）のみ（２０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）を投与し、 またはＢ．４２８０（２０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）を投与した１時間後にテモゾロ ミド（１００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）を連続５日間投与した。 図２３は、時間（日）に対する腫瘍増殖率％、生存マウス数および平均体重（ ｇ）のグラフからなり、１回投与したＢ．４２８０（PaTrin−２）が１回投与し たフォテムスチンによる増殖阻害に対する黒色腫の感受性に及ぼす効果を示す。 動物にフォテムスチンのみ（２０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）を投与し、またはＢ．４ ２８０（３０ｍｇ／ｋｇ、経口）を投与した１時間後にフォテムスチン（２０ｍ ｇ／ｋｇ、腹腔内）を投与した。 図２４は、時間（日）に対する腫瘍増殖率％および生存マウス数のグラフから なり、Ｂ．４２０５（PaTrin-１）およびＢ．４２８０ 20ｍｇ／ｋｇ前処置後 、図２２と同様に５日間方式のテモゾロミド１５０ｍｇ／ｋｇによる、Ａ３７５ Ｍ腫瘍の感受性増大につき示す。 図２５は、時間に対する腫瘍増殖率％、生存マウス数および平均体重（ｇ）の グラフからなり、２０ｍｇ／ｋｇのＢ．４３４９またはＢ．４３５１（腹腔内） 投与後のテモゾロミド（１００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）に対するＡ３７５Ｍ腫瘍の 感受性増大を示す。 図２６は、９０ｍｇ／ｋｇのＢ．４３３５腹腔内投与後、２時間目および２４ 時間目のＡ３７５Ｍ腫瘍および宿主ネズミ組織におけるＡＴａｓｅ活性を示す図 である。 本明細書中、“１ｈ”または“２ｈ”などの略号は“１時間”、“２時間”な どを意味する。図面において略号“Ｔｅｍｏ”および“Ｔｚ”はテモゾロミドを 意味する。 図２７は、時間（日）に対する腫瘍増殖率％および体重（１日目の数値に対す る％）のグラフからなり、テモゾロミド（１００ｍｇ／ｋｇ／日）および／また はＢ．４２８０（PaTrin-２）（２０ｍｇ／ｋｇ／日）１〜５日間投与後の腫瘍 ＤＵ−１４５前立腺異種移植片の増殖を示す。各点は少なくとも４匹のマウスか ら得た数値の平均である。各群の増殖の遅れ（ｐ値）は以下のとおりであった： PaTrin−２のみ０．１日（＞．０５）；テモゾロミドのみ７．８日（＞．０５） ；両薬剤１５．３日（０２３８）。 図２８は、Ｏ ⁶−［³Ｈ］−（４−ブロモテニル）グアニンの合成のための反応 経路である。 図２９は、基準Ｂ．４２８０とＯ ⁶−［³Ｈ］−（４−ブロモテニル）グアニン 合成反応生成物中の放射能の同時クロマトグラフィーである。陰影部は回収した カウント数（ＬＨ軸）、線は２５４ｎｍにおけるＯＤ（ＬＨ軸）を示す。 図３０は、３７℃で１時間インキュベートした後の、Ｏ ⁶−［³Ｈ］−（４−ブ ロモテニル）グアニンからｒｈＡＴａｓｅへの放射能の伝達を示す。 好ましい態様の記述 本発明化合物の例を表１ａおよび１ｂに示す。それらは以下に提示する方法を 適宜採用して合成された。タイプ１ Ａ．Ｏ ⁶−置換ヒポキサンチンは、アルコキシドＲＣＨ₂ＯＮａを第四級塩Ｎ，Ｎ ，Ｎ−トリメチル−１Ｈ−プリン−６−アミニウムクロリドに作用させることに より製造された。¹ Ｂ．Ｏ ⁶−置換２−メチルヒポキサンチンは、同様にジアザビシクロオクタン（ Ｄ ＡＢＣＯ）から得た第四級塩および６−クロロ−２−メチルプリンから製 造された。² Ｃ．Ｏ ⁶−置換２−フルオロヒポキサンチンは、対応するグアニン類を亜硝酸ナ トリウムおよび濃フルオロホウ酸により−２５℃でジアゾ化することにより製造 された。³ Ｄ．Ｏ ⁶−置換９−（２−ヒドロキシエトキシメチル）グアニンは、対応するグ アニン類をシリル化した後、シアン化水銀の存在下に臭化２−アセトキシエトキ シメチルと縮合させ、次いでＯ−アセチル基をけん化することにより製造された 。⁴ Ｅ．Ｏ ⁶−置換８−ヒドロキシグアニンは、６−ヘタリールメチル−２，４，５ −トリアミノピリミジンおよび１，１−カルボニルジイミダソールからＤＭＦ中 で製造された。⁵ ６−クロロ−２，４−ジアミノピリミジンとアルコキシドを ＤＭＳＯ中で反応させ、次いで酢酸水溶液中で亜硝酸ナトリウムによりニトロソ 化し、水性ＤＭＦ中で亜硫酸水素ナトリウムにより還元して、２，４，５−トリ アミンを得た。タイプ２ Ａ．Ｏ ⁶−置換８−アザグアニンは、上記トリアミンおよび亜硝酸ナトリウムか ら酢酸水溶液中で製造された。⁶ Ｂ．Ｏ ⁶−置換８−アザ−７−デアザグアニンは、アルコキシドＲＣＨ₂ＯＮａお よび２−アミノ−６−クロロ−８−アザ−７−デアザプリン⁷からスルホラン中 で、またはそれより誘導されたＤＡＢＣＯ第四級塩から（ＤＭＳＯ溶剤中で）製 造された。タイプ３ Ａ．Ｏ ⁶−置換８−オキサグアニンは、タイプ１Ｅと同様にして得た６−ヘタリ ールメチル−２，４−ジアミノ−５−ニトロソピリミジンの四酢酸鉛酸化⁸によ り製造された。 Ｂ．Ｏ ⁶−置換８−チアグアニンは、タイプ１Ｅのトリアミン中間体およびＮ− トシルチオニルイミンからピリジン中で製造された。⁹ Ｃ．Ｏ ⁶−置換プテリンは、これらのトリアミンおよびグリオキサールから、メ タ重亜硫酸ナトリウムにより製造された。¹⁰ タイプ４ ＡおよびＢ． これらのピリミジン類はタイプ１Ｅと同様にして得られた。 Ｃ．Ｏ ⁶−置換２，４−ジアミノ−５−ニトロピリミジンは、アルコキシドＲＣ Ｈ₂ＯＮａをＤＭＳＯ中で６−クロロ−２，４−ジアミノ−５−ニトロピリミジ ンに作用させることにより製造された。¹¹ タイプ５ Ｓ⁶−置換６−チオグアニンは、チオレートＲＣＨ₂ＳＮａおよび第四級塩２− アミノ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−１Ｈ−プリン−６−アミニウムクロリドから 製造された（国際特許出願公開第WO 94/29312号）。 表６ａおよび６ｂに挙げたＯ ⁶−置換グアニンは、国際特許出願公開第WO 94/2 9312号に記載された標準法により、通常は第四級塩１ｍｍｏｌにつき３ｍｍｏｌ のアルコールＲＣＨ₂ＯＨを用いて製造された。 これらのアルコール類は、国際特許出願公開第WO 94/29312号に記載されたよ うに、対応するアルデヒド類の水素化ホウ素ナトリウム還元により製造された。 ２種の例外がある。Ｂ．４２８０に必要な４−ブロモテニルアルコール¹²につい ては、そのアルデヒドが市販されている。５−クロロチオフェン−２−アルデヒ ド¹³および５−メチルチオチオフェン−２−アルデヒド¹⁴は、それぞれ２−クロ ロチオフェンおよび２−メチルチオチオフェンのフィルスマイヤー（Vilsmeier ）反応により製造された。メチルチオアルデヒドの水素化ホウ素ナトリウム還元 、次いで得られたメチルチオアルコールの過ヨウ素酸ナトリウム酸化¹⁵により、 Ｂ．４２９４に必要なメチルスルフィニルアルコールを得た。上記クロロアルデ ヒドを還元して、Ｂ．４２８１に用いる５−クロロテニルアルコール¹⁶を得た。 適切なチオフェンアルデヒドまたはフルフラールのハロゲン化により、他の数 種のアルデヒド類を得た。たとえば直接臭素化により５−ブロモフルフラール¹⁷ を、それからＢ．４３３６に用いるアルコール¹⁸を得た。ハロゲンを塩化アルミ ニウムの存在下でチオフェン−２−アルデヒドに作用させると４−クロロチオフ ェン−２−アルデヒド¹⁹（Ｂ．４２９８用のアルコールに用いる）が得られ、チ オフェン−３−アルデヒドに作用させると２−ブロモチオフェン−４−アルデヒ ド²⁰（最終的にＢ．４３１３）が得られ、５−クロロチオフェン−２−アルデヒ ドに作用させると４，５−ジクロロチオフェン−２−アルデヒド²¹（Ｂ．４３１ ８用のアルコール²²に用いる）が得られた。 シアノアルデヒドはシアン化銅および対応するブロモアルデヒドから、還流ジ メチルホルムアミド中で得られた。次いで５−シアノチオフェン−２−アルデヒ ド²³およびその４−シアノ異性体²⁴から、それぞれＢ．４２８３およびＢ．４３ １７に用いる５−シアノおよび４−シアノ²⁵アルコールが得られた。 ４−メトキシテニルアルコール²⁶（Ｂ．４３００用）は、記載に従って２，３ −ジブロモコハク酸およびチオグリコール酸メチルから、メチルエステル（この 場合はアルデヒドでなく）を水素化アルミニウムリチウムで最終還元することに より製造された。２−クロロ−４−ピコリルアルコール²⁷（Ｂ．４３２１用）は 、対応する酸塩化物の水素化ホウ素ナトリウム還元により²⁸製造され、この酸塩 化物はオキシ塩化リン／五塩化リンをイソニコチン酸Ｎ−オキシドに反応させる ことにより²⁹製造された。 Ｂ．４２８２については、３−ピリジンメタノールＮ−オキシドが市販されて いる。５−メチルスルホニルテニルアルコール（Ｂ．４３０９用）は、５−メチ ルチオ−２−チオフェンカルボキシアルデヒドの還元により得たアルコールのｍ −クロロ過安息香酸（ＭＣＰＢＡ）酸化により得られた。³⁰ ６−クロロ−３−ピリジンメタノール（Ｂ．４３１９用）および５−ブロモ− ３−ピリジンメタノール（Ｂ．４３２０用）は、それぞれ６−クロロおよび５− ブロモニコチン酸をオキシ塩化リン／五塩化リンで処理し、得られた酸塩化物を 水素化ホウ素ナトリウムで還元することにより製造された²⁸。イソチアゾール− ４−メタノール（Ｂ．４３５４用）は、対応するメチルエステル（A.Adams and R.Slack，J.Chem.Soc．1959，3061）を水素化アルミニウムリチウムで還元する ことによりにより得られた（M.Hatanaka and T.Ishimaru，J.Med.Chem.16,1973, 978）。 ４−ブロモ−２−チオフェンカルボキシアルデヒドをそのエチレンアセタール の４−リチオ誘導体（A.L.Johnson,J.Org.Chem.41,1976,1320）に変換し、この 有機金属化合物をジメチルジスルフィドと反応させ、次いで酸加水分解して、４ −メチルチオ−２−チオフェンカルボキシアルデヒドを得た（R.Noto,L.Lamarti na,C.Arnone and D.Spinelli,J.Chem.Soc.,Perkin Trans.2,1987,689）。このア ルデヒドを水素化ホウ素ナトリウム還元して４−メチルチオアルコール（Ｂ．４ ３５６用）となし、次いでこれを１または２当量のＭＣＰＢＡと反応させて、４ −メチルスルフィニルアルコールおよび４−メチルスルホニルアルコール（それ ぞれＢ．４３７７およびＢ．４３６１用）を得た。上記の有機金属化合物をナフ タレン−２−スルホニルアジド（A.B.Khare and C.E.McKenna，Synthesis,1991, 405）およびピロリン酸ナトリウムと反応させ、次いで他のアジドチオフェンア ルデヒドの製造に用いた方法（P.Spagnolo and P.Zanirato，J.Org.Chem.43,197 8,3539）で加水分解すると４−アジド−２−チオフェンカルボキシアルデヒドが 得られ、これをＢ．４３７３用のアルコールに誘導した。 ５−ヨード−３−チオフェンメタノール（Ｂ．４３５７用）は、３−チオフェ ンカルボキシアルデヒドをヨウ素−ヨウ素酸−硫酸で処理することにより得たア ルデヒドから得られた（R.Guilard，P.Fournari and M.Person，Bull.Soc.Chim. France .1967,4121）。 ２−ナフト［２，１−ｂ］チエニルメタノール（Ｂ．４３６６用）は、対応す るカルボン酸の水素化アルミニウムリチウム還元により製造された（M.L.Tedjam ulia,Y.Tominaga,R.N.Castle and M.L.Lee,J.Heterocycl.Chem.,20,1983,1143） 。５−フェニルテニルアルコール（融点９１．５℃、Ｂ．４３７８用）は、２− フェニルチオフェン（塩化ベンゼンジアゾニウムおよびアルカリとチオフェンの ゴンバーグ−バッハマン（Gomberg-Bachmann）反応（N.P.Buu-Hoi and N.Hoan，Rec.trav.chim .,69,1950,1455）による）のフィルスマイヤー反応により得たア ルデヒド（P.Demerseman,N.P.Buu-Hoi and R.Royer,J.Chem.Soc..1954,4193）の 水素化ホウ素ナトリウム還元により得られた。 具体例として、Ｏ⁶−（４−ブロモテニル）グアニン（Ｂ．４２８０）の製造 につき以下に記載する。 Ｏ⁶−（４−ブロモテニル）グアニンの製造 ＤＭＳＯ（４ｍｌ）中における４−ブロモテニルアルコール¹²［４．６３ｇ， ２４ｍｍｏｌ；ＴＬＣ（ＰｈＭｅ−ＭｅＯＨ，４：１）におけるＲ_f０．３８］ の溶液を、水素化ナトリウム（油中６０％；０．６４ｇ，１６ｍｍｏｌ）で慎重 に処理した。１時間の撹拌後に、２−アミノ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−１Ｈ− プリン−６−アミニウムクロリド（１．８３ｇ，８ｍｍｏｌ）を添加した。さら に１時間の撹拌後に、酢酸（１．３ｍｌ）、次いでエーテル（２４０ｍｌ）を添 加し、１〜２時間後に固体を濾別した。溶剤および過剰のアルコール（沸点８５ 〜９０℃／０．４ｍｍ）を濾液から除去して、無視できる量の第２画分（１７ｍ ｇ）を得た。主画分を水（１０ｍｌ）で摩砕処理して、ＴＬＣ（ＰｈＭｅ−Ｍｅ ＯＨ，４：１）におけるＲ_f０.２２の実質的に純粋な生成物（１．８９ｇ，７３ ％）を得た。これを熱メタノール（１００ｍｌ）に溶解し、次いで濃縮すること により再結晶した。分析データを他の化合物のデータと共に表６ａおよび６ｂに 挙げる。他の一般的合成法を、たとえば本明細書に後記の特別な節に例示的に記 載する。 式ＩＩまたはXIIIにおいて、Ｙ′がＲ″ＸＣＨＲ″′であり、Ｒ″′がアルキ ルである化合物（ｓｅｃｏ−ヌクレオシド）は、Ｏ⁶−ベンジルグアニンとクロ ロエーテル類との反応（MacCoss et al.,Tetrahedron Lett．；欧州特許出願第1 84,473号,上記引用文中）、または臭化アルキルとの反応（たとえばKjellberg， Liljenberg and Johansson，Tetrahedron Lett．1986,27,877；Moschel，McDoug all，Stine and Pegg,J.Med.Chem..1992,35,4486）と同様な製造方法で製造でき る。 ｓｅｃｏ−ヌクレオシドを生成する、Ｒ″ＸＣＨＲ″′に相当する典型的な“ 糖”成分は、たとえばMcCormick and McElhinney,J.Chem.Soc.,Perkin Trans.1, 1985,93；Lucey,McCormick and McElhinney,J.Chem.Soc.,Perkin Trans.1,1990, 795に記載の方法で製造される。 式ＩＩまたはXIIIにおいて、Ｙがリボシルまたはデオキシリボシルである化合 物（ヌクレオシド）は、Ｏ⁶−ベンジルグアニンリボシドおよび２−デオキシリ ボシドの合成と同様な方法で製造できる（Moschel et al.,1992；比較：Gao,Fat hi,Gaffney et al.,J.Org.Chem.,1992,57,6954；Moschel Hudgins and Dipple,J .Amer.Chem.Soc .,1981,103,5489）（前記リボシドの製造を参照）。産業上の有用性 本発明化合物の使用量は、腫瘍細胞の処置に必要な有効量に従って変化する。 適量は、適切なアルキル化剤による化学療法の前に、処置すべき腫瘍細胞中にＡ Ｔａｓｅ活性を減少させる濃度の本発明化合物が得られる量、たとえば約１〜２ ０００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは１〜８００ｍｇ／ｋｇ体重、特に１〜１２０ ｍｇ／ｋｇ体重である。 本発明の薬剤組成物は、たとえば国際特許出願公開第WO 91/13898およびWO 96 /04281号、ならびに米国特許第5,091,430および5,352,669号に記載されるように 、慣用される賦形剤を用いて慣用される剤形に配合することができる。それらの 内容全体を本明細書に参考として引用する。本発明組成物は本発明による不活性 化剤を適切なアルキル化剤と共に含有するか、または本発明組成物は２部分から なり、一方が不活性化剤を含有し、他方がアルキル化剤を含有してもよい。本発 明化合物を宿主に投与する方法も、たとえば国際特許出願公開第WO 91/13898号 に記載されるような常法であってよい。本発明の不活性化剤を患者に投与するた めに薬剤組成物は、静脈注射のためには不活性化剤を好適なベヒクル、たとえば 食塩溶液中の４０％ポリエチレングリコール４００中、または食塩溶液中、また は３％エタノール（食塩溶液中）中に含有し、あるいは経口投与のためには好適 なカプセル内の粉末状であるのが好適である。 アルキル化剤は、たとえば国際特許出願公開第WO 91/13898号に記載されるよ うに既知の手法で、慣用される投与形態により投与でき、または好ましくは、１ 回量として、ＡＴａｓｅ不活性化剤投与の直後または最高２４時間後、好ましく は約２時間後に、かつ標準的処置方式で使用するより低い用量で投与できる。一 般に不活性化剤がアルキル化剤の毒性を高めると予想されるので、用量を減らす ことが必要であろう。クロロエチル化剤の例には、１，３−ビス（２−クロロエ チル）−１−ニトロソ尿素（ＢＣＮＵ）、１−（２−クロロエチル）−３−シク ロヘキシル−１−ニトロソ尿素（ＣＣＮＵ）、フォテムスチン、ミトゾロミド（ mitozolomide）およびクロメゾン（clomesone）、ならびにMcCormick,McElhinne y,McMurry and Maxwell J.Chem.Soc.Perkin Trans.I,1991,877、およびBibby, Double,McCormick,McElhinney,Radacic,Pratesi and Domont Anti-Cancer Drug Design ,1993,8,115に記載のものが含まれる。メチル化剤の例には、テモゾロミ ド（英国特許 GB 2,104,522号および米国特許第5,260,291号、それらの内容全体 を本明細書に参考として引用する）、ならびにダカルバジン（dacarbazine）、 プロカルバジン（procarbazine）およびストレプトゾシン（streptozocin）が含 まれる。方法 Ｏ ⁶ −アルキルグアニン−ＤＮＡ−アルキルトランスフェラーゼアッセイ 種々の量の組換えＡＴａｓｅまたは細胞／組織抽出物を、［³Ｈ］−メチルニ トロソ尿素−メチル化ウシ胸腺ＤＮＡ（比放射能、１７Ｃｉ／ｍｍｏｌ）と共に 、３７℃で１時間、組換えＡＴａｓｅおよび組織抽出物についてはウシ血清アル ブミン（ＩＢＳＡ）１ｍｇ／ｍｌを含有する緩衝液Ｉ［５０ｍＭトリス−ＨＣｌ （ｐＨ８．３）、３ｍＭジチオトレイトール（ＤＴＴ）、１ｍＭ ＥＤＴＡ］３ ００μｌ、または細胞抽出物については緩衝液Ｉ １．１ｍｌの全容量でインキ ュベートした。インキュベーション後、ウシ血清アルブミン（緩衝液Ｉ中１０ｍ ｇ／ｍｌのもの１００μｌ）および過塩素酸（４Ｍ過塩素酸を、容量３００μｌ については１００μｌ、１．１ｍｌについては４００μｌ）および１Ｍ過塩素酸 ２ｍｌを添加した。次いで試料を７５℃に５０分間加熱してＤＮＡを加水分解し た。次いで試料を３，０００ｒｐｍで１０分間遠心し、沈殿を１Ｍ過塩素酸４ｍ ｌで１回洗浄した後、０．０１Ｍ水酸化ナトリウム３００μｌに再懸濁し、水性 シンチレーション液（エコシント（Ecoscint）Ａ、ナショナル・ダイアグノステ ィックス）３ｍｌに溶解した。計数効率は約３０％であった。活性が抽出物添加 量に比例する領域からＡＴａｓｅ比活性を計算した。これより高い量の抽出物で は、反応が基質制限性になるからである。ＡＴａｓｅ活性を、抽出物中の全タン パク質１ｍｇにつきタンパク質へ転移したメチルのｆｍｏｌとして表す。組換えＡＴａｓｅの精製法 ヒトＡＴａｓｅのｃＤＮＡクローン化および過剰発現は、これまでに報告され ている³⁰。組換えタンパク質の精製は、Wilkinsonら³¹，³²が記載したＤＮＡ− セルロースカラムによるアフィニティークロマトグラフィー、またはＤＥＡＥ− セルロース−イオン交換クロマトグラフィーにより行われた。後者については、 ＤＥＡＥ−セルロースカラムに装填する前に、ＡＴａｓｅタンパク質を硫酸アン モニウム沈殿法（３０〜６０％）により部分精製し、１０ｍＭトリス−ＨＣｌ（ ｐＨ７．５）、１ｍＭ ＤＴＴ、２ｍＭ ＥＤＴＡ、１０％グリセリンに対し透 析した。次いでＡＴａｓｅを０〜０．１Ｍ ＮａＣｌ濃度勾配で溶離した。精製 したヒトＡＴａｓｅタンパク質は、高濃度で−２０℃において緩衝液Ｉ［５０ｍ Ｍトリス−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）／３ｍＭジチオトレイトール／１ｍＭ−ＥＤＴ Ａ］中に保存すると、１年より長期間活性を保持し、数回の融解および再凍結を 行っても実質的な活性損失はなかった。不活性化剤とのインキュベーションおよびＡＴａｓｅアッセイ 被験化合物をＤＭＳＯに最終濃度１０ｍＭに溶解し、使用直前に緩衝液Ｉ中に 希釈した。ウシ血清アルブミン（ＩＢＳＡ）１ｍｇ／ｍｌを含有する緩衝液Ｉ中 に組換えＡＴａｓｅを希釈し、前記に従って反応が基質制限条件下ではなくＡＴ ａｓｅ制限条件下で行われるように滴加した。各アッセイで、一定量のＡＴａｓ ｅ（６０〜７５ｆｍｏｌ）を種々の量のＯ ⁶−ベンジルグアニンまたは被験化合 物と共に、１０μｇのウシ胸腺ＤＮＡを含有する全容量２００μｌのＩＢＳＡ中 において、３７℃で１時間インキュベートした。次いで［³Ｈ］−メチル化ＤＮ Ａ基質（４μｇのＤＮＡおよび１００ｆｍｏｌのＯ ⁶−メチルグアニンを含有す る１００μｌ）を添加し、反応が完結するまで３７℃で１時間インキュベーショ ンを続けた。前記に従ってＤＮＡを酸加水分解した後、［³Ｈ］−メチル化タン パク質を回収し、液体シンチレーション計数により定量した。Ｉ₅₀は上記の条件 下でＡＴａｓｅ活性を５０％低下させるのに要する不活性化剤の濃度である。 細胞培養および抽出物の調製 Ｒａｊｉ細胞（バーキットリンパ腫由来のヒトリンパ芽球細胞系）、Ａ３７５ Ｍ細胞（ヒト黒色腫細胞）、ＭＣＦ−７細胞（ヒト胸部癌細胞）、ならびにＰＣ ３およびＤＵ１４５（両方ともヒト前立腺癌細胞）を含む哺乳動物細胞を標準条 件下で培養した。たとえばＲａｊｉ細胞は、１０％ウマ血清を補充したＲＰＭＩ 培地中で懸濁培養で増殖させた。細胞ペレットを、２μｇ／ｍｌのロイペプチン を含有する低温（４℃）の緩衝液Ｉに再懸濁し、ピーク−ピーク間隔１２μｍで １０秒間、超音波処理した。氷中で冷却した後、細胞を１８μｍでさらに１０秒 間、超音波処理した。超音波処理の直後に１０μｌ／ｍｌのフッ化フェニルメタ ンスルホニル（１００％エタノール中のＰＭＳＦ ８．７ｍｇ／ｍｌ）を添加し 、超音波処理物を１５０００ｃｐｍで４℃において１０分間遠心して、細胞片を ペレット化した。上清を氷上のチューブに移し、ＡＴａｓｅ活性測定用として保 存した（前記参照）。 分光測光法による３７℃での不活性化剤の安定性 不活性化剤（ＤＭＳＯ中１０ｍＭ）を、予熱およびガス抜きしたＰＢＳ（ｐＨ ７〜７．２）中に０．１ｍＭに希釈した。ＰＢＳ（リン酸緩衝食塩液）は０．８ ％ＮａＣｌ、０．０２％ＫＣｌ，０．１５％Ｎａ₂Ｈ₂ＰＯ₄、０．０２％ＫＨ₂Ｐ Ｏ₄である。試料を直ちにＣＡＲＹ１３分光光度計（キュベットブロックを３７ ℃に保持）に移し、適切な波長（化合物のスペクトル特性による）において５〜 １０分間隔で最高８０時間、走査した。結果を時間に対する吸収の変化率％とし て表し、これからＴ 1/2値（半減期）を推定した。各表において、これらの試験 の結果を“ＰＢＳ中”または“分光法”と表示する。 ＡＴａｓｅアッセイによる不活性化剤の安定性 不活性化剤（ＤＭＳＯ中１０μＭ）を、ＤＴＴを含有しない緩衝液Ｉ中に適切 な濃度（先のＩ₅₀測定データから計算したＩ₉₀）に希釈し、３７℃で種々の時間 インキュベートした。次いで競合アッセイ用試料を採取し、化合物がヒトＡＴａ ｓｅを不活性化する効力を評価した。結果を時間に対する不活性化活性の低下と して表し、これからＴ 1/2値を推定した。 Ｒａｊｉ細胞におけるＡＴａｓｅ活性の不活性化 適切な濃度の不活性化剤または等容量のビヒクル（ＤＭＳＯ）を含有する培地 中に、Ｒａｊｉ細胞を５×１０⁵〜１０⁶／ｍｌに希釈した。３７℃で２時間イン キュベートした後、細胞を遠心により回収し、ＰＢＳで２回洗浄し、得られた細 胞ペレット（ペレット当たり５×１０⁶〜１０⁷細胞）を−２０℃で保存した。Ａ Ｔａｓｅ活性を前記に従って２組ずつの細胞抽出物において測定し、未処理対照 （アッセイに応じて３５０〜４５０ｆｍ／ｍｇ）中に存在する活性を基準とした 活性残存率％として表した。このデータからＩ₅₀（すなわちＡＴａｓｅ活性を５ ０％低下させるのに要する不活性化剤の濃度）値を推定した。 細胞毒性物質に対する哺乳動物細胞の感受性増大 不活性化剤による２時間の前処理後、ＢＣＮＵ、テモゾロミドその他の細胞毒 性物質の細胞毒性効果に対する哺乳動物細胞の感受性増大を、ＸＴＴ−基準増殖 阻害アッセイ²²により分析した。細胞を９６ウェルのプレートに接種し（たとえ ばＲａｊｉ細胞の場合は５００細胞／ウェル）、３７℃で３０分間インキュベー トした後、適切な濃度の不活性化剤または等容量のビヒクルを含有する培地を添 加した。３７℃で２時間インキュベートした後、漸増する用量の細胞毒性物質ま たは等量のビヒクルを含有する培地を添加し、細胞を６日間増殖させた。この時 点でＸＴＴ溶液を添加し、細胞を３７℃でさらに４時間インキュベートした。得 られた赤／オレンジ色のホルマザン反応生成物を、ミクロタイタープレート読取 器で４５０ｎｍの吸収を測定することにより定量した。 このデータから、一定用量範囲のＢＣＮＵ、テモゾロミドその他の細胞毒性物 質につき、不活性化剤の存在下および不在下での対照ウェルに対する細胞増殖率 ％を判定した。細胞毒性物質単独につき計算したＤ₅₀（すなわちアルキル化剤で 処理しなかった対照に対比して５０％増殖した用量）（Ｄ₅₀・^C）を細胞毒性物 質プラス不活性化剤につき計算した値（Ｄ₅₀・^I）で割ることにより、Ｄ₅₀に基 づく増感係数（Ｄ₅₀・^C／Ｄ₅₀・^I）を判定した。したがって、数値１は不活性化 剤による感受性増大がないことを示す。場合により、Ｄ₆₀およびＤ₈₀、すなわち 未処理対照と比較してそれぞれ６０％または８０％増殖した用量に基づき、匹敵 する増感係数も判定した。表３には増感係数Ｄ₅₀・^C／Ｄ₅₀・^IをＤ₅₀対照／Ｄ₅₀ ’Ｂ’として示す。文字’Ｂ’は不活性化剤化合物を表す。異種移植片試験 動物 体重２０〜３０ｇのスイスマウス由来無胸腺雄マウス（ｏ／ｎｕ）を、ゼネカ ・ファーマシューティカルズ（Alderley Park,Macclesfield,Cheshire,SK10 4T6 ,英国）から入手した。動物をフィルタートップケージにケージ当たり４〜５匹 収容し、食物と水を任意に摂取させた。すべての動物を制御された１２時間−明 −１２時間−暗サイクル下で飼育した。下記のように図１１および１７ならびに 表８に示したもの以外のすべての試験に、これらの動物を用いた。 細胞 Ａ３７５Ｍ細胞（ヒト黒色腫）およびＤＵ１４５（ヒト前立腺癌）細胞は、１ ０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含有するＤＭＥＭ中で増殖させた。ＭＣＦ−７細 胞（ヒト胸部癌細胞）は、１００ｉｕインシュリンを補充した１０％ＦＢＳを含 有するＤＭＥＭ中で増殖させた。 腫瘍 １００μｌのＰＢＳ中におけるＡ３７５Ｍ、ＤＵ１４５およびＭＣＦ−７細胞 （１０⁶）を、８〜１０週齢ｏ／ｎｕ無胸腺マウスの右側腹部に皮下注射した。 これらの細胞を３〜４週間（Ａ３７５ＭおよびＤＵ１４５細胞）および４〜６週 間（ＭＣＦ−７細胞）、腫瘍にまで増殖させた。樹立した時点で２ｍｍ³のブロ ックを無胸腺ｏ／ｎｕマウスの右側腹部に皮下移植することにより、腫瘍を維持 した。ＭＣＦ−７腫瘍はエストロジェン陽性であり、増殖のためにエストロジェ ンを要求する。これを腫瘍移植と同時およびその後各月に、尾基部に皮下植込み 剤として補給した（後記参照）。 エストロジェンペレットの調製 ４６８ｍｇのβ−エストラジオールを９．７ｇのシラスチック（Silastic）に 添加し、均一に分散するまで混合した。１．１ｇの硬化剤を添加し、混合物全体 を３個の（２６ｍｍ×１２ｍｍ×１ｍｍ）ガラス型に広げた。次いでこれらを４ ２℃で一夜インキュベートした後、２ｍｍ×２ｍｍ×１ｍｍの立方体に切断した 。したがって各ペレットは２ｍｇのエストラジオールを含有していた。ＡＴａｓｅ減少実験 腫瘍を前記のように移植し、腫瘍のタイプに応じて３〜６週間放置して樹立さ せた。不活性化剤を腹腔内注射または経口胃管投与により投与する前に、トウモ ロコシ油に５ｍｇ／ｍｌに均質化した。最高７２時間までの種々の時点でマウス を屠殺し、ＡＴａｓｅアッセイ用に腫瘍およびマウス組織を採取した。試料を瞬 間凍結し、分析するまで−２０℃に保存した。 腫瘍感受性増大実験 ｏ／ｎｕマウスを、適量の前記細胞毒性物質（たとえばテモゾロミド６ｍｇ／ ｍｌ、ＰＢＳ＋２０％ＤＭＳＯ中）またはフォテムスチンもしくはＢＣＮＵ（２ ｍｇ／ｍｌ、ＰＢＳ＋３％エタノール中）を指示した用量および計画に従って投 与する１時間前に、適量の前記不活性化剤（トウモロコシ油中４ｍｇ／ｍｌ）ま たは対照としての適切なビヒクルで処理した。 腫瘍の測定 動物を週２回体重測定し、デジタルカリパスで異種移植腫瘍を測定した。腫瘍 の体積を式（ｈ×ｗ×ｌ）π／６により計算した。腫瘍が許容しうる最大体積（ すなわち１ｃｍ³）に達するまで測定を続けた。１日目の腫瘍の体積を対照とし て用いた腫瘍増殖率％として結果を表す。 表６ならびに図９〜１７に示した化合物に関する試験で用いた方法は国際特許 出願公開第WO 94/29312号に記載のものである。以下の項目ａ）〜ｃ）も留意す べきである： ａ）標準ＡＴａｓｅアッセイ法 精製ウシ胸腺ＤＮＡをＮ−［³Ｈ］−メチル−Ｎ−ニトロソ尿素（１８．７Ｃ ｉ／ｍｍｏｌ、アマシャム・インタナショナル）と共にインキュベートすること により、ＡＴａｓｅ基質ＤＮＡを調製した。細胞または組織抽出物を、［³Ｈ］ −メチル化−ＤＮＡ基質（６．７μｇのＤＮＡおよび１００ｆｍｏｌのＯ ⁶−［³ Ｈ］−メチルグアニンを含有する１００μｌ）と共に３７℃で６０分間インキュ ベートした。先に記載されたように³³ＤＮＡを酸加水分解して、［³Ｈ］−メチ ル化タンパク質を回収し、液体シンチレーション計数により定量した。 ｂ）薬物処理 テモゾロミド（１００ｍｇ／ｋｇ、リン酸緩衝食塩液中の２０％ＤＭＳＯ中） 投与（常に腹腔内注射）の６０分前に、トウモロコシ油中の懸濁液として腹腔内 注射または経口胃管投与することにより、マウスを不活性化剤で処理した。この 計画を１日目から５日目まで繰り返した。対照にはビヒクル単独、不活性化剤単 独、またはテモゾロミド単独を投与した。 ｃ）動物 図１１および表８に示した試験のマウスは、国際特許出願公開第WO 94/29312 号に記載された、パターソン癌研究所（Paterson Institute for Cancer Resear ch）の研究所内繁殖コロニーからのＢＡＬＢ−Ｃ由来無胸腺雄マウス（ｎｕ／ｎ ｕ無胸腺）であった（アニマル・サービス・ユニット−ＡＳＵマウス）。 図１２〜１６に示した試験のマウスは、前記のようにスイスマウス由来の無胸 腺雄マウス（ｏ／ｎｕ無胸腺）であった。 図１７に示した試験のマウスは、パターソン癌研究所の研究所内繁殖コロニー からのＤＢＡ₂マウスであった（アニマル・サービス・ユニット）。これは１９ ７０年のジャクソン・ラボラトリーのものに由来する。試験結果 表１の化合物についてのＡＴａｓｅ減少アッセイの結果を表２または表３に示 す。試験した化合物の多くは、ＡＴａｓｅ不活性化においてＯ ⁶−ベンジルグア ニンより有効であった。親出願である国際特許出願公開第WO 94/29312号の結果 によれば、Ｒが複素環基である化合物はベンジルオキシ側鎖をもつ匹敵する化合 物より有効であった。一般に、ＲＣＨ₂が置換または非置換テニルである化合物 が最も好ましく、そのハロ置換基をピリミジン残基に結合したメチレンオキシ基 と１，３の関係でもつハロ置換テニルが最も好ましい。 表３、４および５に、多数のパラメーターについてのデータをまとめる。表３ は、以下のタイプの組換えＡＴａｓｅについての減少アッセイ結果を含む： ｈＡＴ ＝ ヒト ｍＡＴ ＝ マウス ｒＡＴ ＝ ラット ｃｈＡＴ ＝ チャイニーズ・ハムスター ｏｇｔ ＝ 大腸菌（E.coli）ｏｇｔ遺伝子 ａｄａ ＝ 大腸菌（E.coli）ａｄａ遺伝子 各表において種々の不活性化剤が兼ね備えた特性が分かる。特に以下の予想外 の点に注目されたい： Ｂ．４３１６は、予想外に高い水溶性をもつ化合物である。 Ｂ．４３３５は、Ｒａｊｉ細胞の不活性化において純粋な組換えタンパク質 より予想以上にはるかに有効な化合物である。一般には、インビトロでの組換え ＡＴａｓｅの不活性化に関するＩ₅₀は培養細胞の場合より低いか、またはそれと 同様である。 Ｂ．４３４３は、インビトロでＡＴａｓｅに関して極めて低いＩ₅₀をもつ化 合物であるが、テモゾロミドの増殖阻害作用に対するＲａｊｉ細胞の感受性増大 においては、より高いＩ₅₀をもつ物質（たとえばＢ．４３３５）ほど有効ではな い。同様な例がＢ．４３４９に対するＢ．４３５１である。 Ｂ．４３１６はＢ．４２８０より２倍有効であったが、テモゾロミドに対す るＲａｊｉ細胞の感受性増大はほぼ等しい。したがって異なる細胞系がこれらの 物質に対し予想外に異なる反応を示す可能性がある。 図１〜３は、テモゾロミド、ＢＣＮＵおよびフォテムスチンはＲａｊｉ細胞の 増殖を用量依存性の様式で阻害するが、それぞれ０．１、１．０および１０μＭ のＢ．４３１６に暴露することにより感受性が著しく増大することを示す。これ に対し、メルファランまたはシスプラチンによるＲａｊｉ細胞の増殖阻害に関し ては、Ｂ．４３１６は測定可能な効果を示さなかった（図４）。これは、本発明 の不活性化剤が、他のクラスのアルキル化作用化合物に対してではなく、Ｏ ⁶− アルキル化剤に対し特異的に細胞の感受性を増大させることを示す。 図５および６はそれぞれ、Ｒａｊｉ細胞における上記治療薬に関するＢ．４３ １６およびＢ．４３４９の増感係数を示す。 図７は、この実験条件下では、試験した不活性化剤のうちＢ．４３１４および Ｂ．４３５１の投与後にのみヒト黒色腫異種移植片ＡＴａｓｅの減少が完結した ことを示す。宿主動物の肝臓および腎臓のＡＴａｓｅ減少においては前者の方が 有効であり、一方、脳においては後者の方が有効であった。これは、血液−脳関 門の通過は後者の方が相対的に容易であることを示唆する。注目に値するのは、 Ｂ．４３１１はテモゾロミドの毒性に対するＲａｊｉ細胞の感受性増大において は最も有効な物質のひとつであるが、意外にもそれはマウス組織または腫瘍異種 移植片のＡＴａｓｅ活性減少においては最も有効性の低い物質のひとつであった という事実である。 図８は、採用した条件下ではＢ．４３６３は、宿主ネズミ組織よりヒト黒色腫 異種移植片においてより効果的にＡＴａｓｅを減少させ、脳組織においてはこれ より低い効果がみられたことを示す。。これは、それが血液−脳関門を越える能 力が低いことを示唆する。 表６の化合物（および表１の若干）に関する試験結果を表７および図９〜２７ に示す。 Ｂ．４２８０、すなわちＯ ⁶−（４−ブロモテニル）グアニンであり、そのブ ロモ置換基がグアニン残基に結合したメチレン基と１，３の関係にあるものは、 インビトロでのＡＴａｓｅ不活性化において、その５−ブロモ類似体Ｂ．４２６ ９、すなわちそのブロモ置換基がメチレン基と１，４の関係にあるものより有効 であった。Ｂ．４２８０およびＢ．４２６９はいずれも、これらより非置換テニ ル誘導体Ｂ．４２０５がかなり大きなＯ ⁶−置換基をもつにもかかわらず、これ より有効であった。 他の好ましい化合物はＢ．４３１７、すなわちＯ ⁶−（４−シアノテニル）グ アニンである。Ｂ．４３１７はインビトロで、その５−シアノ類似体Ｂ．４２８ ３または非置換テニル誘導体Ｂ．４２０５より有効な不活性化剤である。 ＢｅＧ（ベンジルグアニン）ならびにＢ．４２０５およびＢ．４２８０に関す る典型的なＡＴａｓｅ不活性化プロフィルを図９に示す。 ＡＴａｓｅの不活性化により、テモゾロミドの増殖阻害作用に対するＲａｊｉ 細胞の感受性が増大した（図１０）。この点に関してＢ．４２８０はＢ．４２０ ５またはＢｅＧよりかなり有効であった。 ヒト黒色腫異種移植片のＡＴａｓｅがＢｅＧ、Ｂ．４２０５およびＢ．４２８ ０により不活性化された（図１１）。ＡＴａｓｅ活性の回復速度は薬剤間で若干 異なることが、ある程度示された。試験した用量ではＢ．４２８０が最も有効な インビボ不活性化剤であった。 Ｂ．４２８０は、表８に示した大部分の組織においてＡＴａｓｅを不活性化す ることができた。たとえば脳、精巣および骨髄での活性は２４時間目までにほぼ 対照の水準となったが、肺および脾臓での活性は４８時間目までに完全には回復 しなかった。腫瘍の活性は２４時間目には極めて低かったが、４８時間目までに 完全に回復した。回復速度の差は、ＣＮＵまたはテモゾロミドと併用する際にＡ Ｔａｓｅ不活性化剤の毒性における重要な要因であろう。 ３日間にわたって投与したＢ．４２０５またはＢ．４２８０とテモゾロミドの 組合わせは、腫瘍異種移植片のＡＴａｓｅ不活性化において、いずれかの薬剤単 独より有効であった（図１２）。Ｂ．４２０５の用量を低下させても、この薬剤 がＡＴａｓｅを不活性化する効力に著しい影響はなく、１０ｍｇ／ｋｇが６０ｍ ｇ／ｋｇと同様に有効であった。Ｂ．４２８０は等量ではＢ．４２０５より有効 であった。前記（図１１）のように、ＡＴａｓｅの回復作用は肝臓（図１３）よ り腫瘍異種移植片（図１２）の場合の方が低いことが、ある程度示された。 Ｂ．４２０５（図１４Ａ）およびＢ．４２８０（図１５Ａ）は、テモゾロミド の増殖阻害作用に対するヒト黒色腫異種移植片の感受性を増大させるのに有効で あった。これら２組のデータを比較すると、この点に関してＢ．４２８０がＢ． ４２０５より約２倍有効であることが示される。腫瘍増殖阻害に関して同等に有 効な用量では、Ｂ．４２８０はＢ．４２０５より毒性が低いように思われる（図 １４Ｂと図１５Ｂ）。 表９に示すように、ＤＢＡ₂マウスを用いた実験でＢＣＮＵと併用した場合、 Ｂ．４２８０はＢ．４２０５またはＢｅＧよりかなり急性毒性が低かった。テモ ゾロミドの増殖阻害作用に対するヒト黒色腫異種移植片の感受性増大において、 Ｂ．４２８０の経口投与は腹腔内投与とほぼ同程度に有効であることが示された （図１６Ａ）。さらに、経口併用は腹腔内経路よりわずかに毒性が低いように思 われる（図１６Ｂ）。 ＤＢＡ₂マウスにおいて２０ｍｇ／ｋｇの不活性化剤をテモゾロミドと併用し た場合、Ｂ．４２０５およびＢ．４２８０はＢｅＧより急性毒性が低く、Ｂ．４ ２８０の方がＢ．４２０５より急性毒性が低いことが示された（図１７）。 図１８および１９は、Ｂ．４２８０（PaTrin−２）（それぞれ２０ｍｇ／ｋｇ 、腹腔内、および３０ｍｇ／ｋｇ、経口）がヒト黒色腫異種移植片において、宿 主組織におけるより完全に、より長期間、ＡＴａｓｅを減少させることを示す。 図２０は、ヒト胸部腫瘍中の方がＡＴａｓｅ活性の初期レベルがかなり高いに もかかわらず、Ｂ．４２８０が宿主ネズミ組織中より完全に、より長期間、腫瘍 のＡＴａｓｅを減少させることを示す。３０ｍｇ／ｋｇのＢ．４２８０を腹腔内 に用いたこの試験で、脳組織に著しい減少がみられた。これは血液−脳関門を越 えうることを示す。 図２１は同様に、ヒト前立腺腫瘍中の方がＡＴａｓｅ活性の初期レベルがかな り高いにもかかわらず、Ｂ．４２８０が宿主ネズミ組織中より完全に、より長期 間、そのＡＴａｓｅを減少させることを示す。２０ｍｇ／ｋｇのＢ．４２８０を 腹腔内に用いたこの試験では、脳組織にみられた減少は比較的少ない。図２０を 参照すると、これはＢ．４２８０が血液−脳関門を越える能力は用量依存性であ る可能性を示す。 図２２は、Ｂ．４２８０（２０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）が、５日間の投与計画に よるテモゾロミドの増殖阻害作用に対するヒト胸部腫瘍異種移植片の感受性を、 かなり増大させたことを示す。この腫瘍のＡＴａｓｅのレベルが極めて高いにも かかわらず、この感受性増大は起きた。 図２３は、１回量のＢ．４２８０（３０ｍｇ／ｋｇ、経口）が、１回量のクロ ロエチル化剤フォテムスチンの増殖阻害作用に対するヒト黒色腫異種移植片の感 受性をかなり増大させ、毒性には実質的影響がないことを示す。Ｏ ⁶ −(メチレン[³Ｈ])−（４−ブロモテニル）グアニンの合成 ブロモテニルアルデヒド（０．７９ｍｇ，６６．８μｍｏｌ）を、イソプロパ ノール（３５０μｌ）中で室温において１時間、ＮａＢ[³Ｈ]₄（０．０１６７ｍ ｍｏｌ，６０Ｃｉ／ｍｍｏｌ）と反応させた。得られた[³Ｈ]−４−ブロモテニ ルアルコールをペンタン中へ抽出し、乾燥させ、秤量し、ＤＭＳＯ（２５０μｌ ）中で室温において１時間、ＮａＨ（５．４４ｍｇ）およびグアニンの第四級ア ンモニウム塩（１５．５５ｍｇ）と反応させた。生成物を酢酸−エーテル（エー テル１．５ｍｌ中の氷酢酸１５μｌ）から沈殿させることにより回収し、エーテ ルで洗浄し、乾燥させ、Ｈ₂Ｏで摩砕処理した。水で洗浄した後、最終生成物を 一定重量になるまで乾燥させた。図２８は、放射性標識Ｂ．４２８０の合成経路 を示す。 高性能液体クロマトグラフィー分析 アリコートの生成物を緩衝液Ａ（７．５％アセトニトリルを含有する１０ｍＭ ＫＨ₂ＰＯ₄）に溶解し、ＯＤＳ−５カラム上で高性能液体クロマトグラフィー 処理した。１ｍｌ／分で２０分かけて、１００％Ａから２０％Ａ：８０％Ｂ（８ ０％アセトニトリルを含有する１０ｍＭ ＫＨ₂ＰＯ₄）までの直線勾配で溶離し た。溶出液を２５４ｎｍでのＵＶ吸収につき監視し、画分（１分）を採集し、１ ０ｍｌのエコシントＡを添加した後、放射能を測定した。９６％の放射能が基準 試料Ｂ．４２８０と共に溶出したことが示された（図２９）。 アリコートの生成物を既知量の純粋な組換えヒト（ｒｈ）ＡＴａｓｅと共にイ ンキュベートすると、放射能がタンパク質へ転移した（図３０）。これは、ＡＴ ａｓｅ不活性化のメカニズムがＡＴａｓｅ分子中の活性部位のシステインへのテ ニル基の転移によるものであることを、強く示唆する。タンパク質へ転移した放 射能量の測定により、Ｏ ⁶−([³Ｈ]−４−ブロモテニル)グアニンは放射性純度＞ ９６％、比放射能１６Ｃｉ／ｍｍｏｌをもつことが示された。 Ｏ ⁶−([³Ｈ]−４−ブロモテニル)グアニンは、たとえば細胞または組織抽出物 中のＡＴａｓｅ量を測定するための標準法（現在、[³Ｈ]−標識した基質ＤＮ Ａを使用）の代替として使用できる。それは、腫瘍および他の組織切片中におけ る活性ＡＴａｓｅ分子の存在位置を調べるためにも使用でき、顕微鏡スライド上 でそれらの切片と共にインキュベートした後、洗浄、オートラジオグラフィーお よび組織染色する。それは、哺乳動物に投与した後、この物質の分解や代謝によ る[³Ｈ]−標識生成物の形成を監視するためにも使用できる。それは、全身オー トラジオグラフィーにより動物の組織および腫瘍中のＢ．４２８０やその分解生 成物の分布を調べるためにも使用できる。 典型的な合成法タイプ１Ａ Ｏ⁶−(４−ブロモテニル)ヒポキサンチン、Ｂ．４２９２ ４−ブロモテニルアルコール（１．１６ｇ，６ｍｍｏｌ）を水素化ナトリウム （油中６０％；０．１６ｇ，２ｍｍｏｌ）およびＤＭＳＯ（１ｍｌ）に添加した 。この溶液を３０分間撹拌した。次いでトリメチルアンモニウム塩（０．４２７ ｇ，２ｍｍｏｌ）を添加し、２０℃で２．５時間撹拌を続けた。この溶液を氷浴 中で冷却し、酢酸（０．３２ｍｌ）を含有するエーテル（６０ｍｌ）に注入した 。白色沈殿を採集し、水（４ｍｌ）で摩砕処理し、再度採集してＢ．４２９２（ ４３６ｍｇ，６９％）を得た。メタノールから再結晶。タイプ１Ｂ Ｏ⁶−テニル−２−メチルヒポキサンチン、Ｂ．４３５０ ６−クロロ−２−メチルプリンからのＤＡＢＣＯ塩 ６−クロロ−２−メチルプリン（０．５ｇ，３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍｌ） およびジグリム（diglyme）（２５ｍｌ）の混合物に溶解した。次いでＤＡＢＣ Ｏ（０．６６ｇ，６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１時間撹拌し、沈殿を採集 して第四級塩（７００ｍｇ，８２％）を得た。 ＮＭＲ(３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆)：シフト(ｐｐｍ) 2.65（s），3.27（t,J=7.5Hz），3.78（s），4.14（t,J=7.5Hz），8.1（s）． テニルアルコール（６８４ｇ，６ｍｍｏｌ）を水素化ナトリウム（油中６０％ ； ８０ｍｇ，２ｍｍｏｌ）およびＤＭＳＯ（０．５ｍｌ）に添加した。この溶液を ３０分間撹拌した。次いで上記ＤＡＢＣＯ塩を添加し、５時間撹拌を続けた。次 いでこの溶液を、酢酸（０．１５ｍｌ）を含有するエーテル（３０ｍｌ）に注入 した。沈殿を採集し、水（４ｍｌ）で摩砕処理し、再度採集してＯ⁶−テニル− ２−メチルヒポキサンチン（９６ｍｇ，３５％）を得た。アセトニトリルから再 結晶。タイプ１Ｃ Ｏ⁶−（４−ブロモテニル）−２−フルオロヒポキサンチン、Ｂ．４３５３ 浴中で−２５℃に予冷した４０％フルオロホウ酸３．６ｍｌに、Ｏ⁶−（４− ブロモテニル）グアニン（３２６ｍｇ，１ｍｍｏｌ）を激しく撹拌しながら添加 した。水（０．１５ｍｌ）中における亜硝酸ナトリウム（０．１１６ｇ，１．７ ｍｍｏｌ）の溶液を１０分かけて滴加した。２０分後に溶液を氷に注入した。次 いで混合物を０℃に１５時間放置し、次いで採集し、乾燥させて、ほとんど純粋 な（ｔ.ｌ.ｃ.）Ｂ．４３５３（１８０ｍｇ，５５％）を得た。フラッシュクロ マトグラフィー（ヘキサン−酢酸エチル、極性を漸次低下）によりＢ．４３５３ を得た。タイプ３Ｄ Ｏ⁴−テニル−５−デアザプテリン、Ｂ．４３７６ ａ）Ｎ²−ピバロイル−５−デアザプテリン ５−デアザプテリン³³,³⁴（２．０ｇ，１３．３６ｍｍｏｌ）、４−ジメチル アミノピリジン（０．２２ｇ，１．８ｍｍｏｌ）および無水ピバリン酸（１２ｍ ｌ）の混合物を１６５℃に加熱した。過剰の無水ピバリン酸を留去し、残渣をジ クロロメタンに溶解し、シリカゲルのパッドに付与し、ジクロロメタン中の２％ メタノールで溶離した。蒸発させ、生成物をエタノールから再結晶して、ピバロ イル誘導体の光沢あるクリーム色結晶（２．２５ｇ，７４％）を得た。融点２５ ８〜２５９℃；λ_max（ＭｅＯＨ）２７７ｎｍ； ＮＭＲ(３００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ₆)：δ 1.28（s），7.44（q），8.43（dd） ，8.88（dd），11.4（s），12.31（s）． ｂ）Ｎ²−ピバロイル−Ｏ⁴−テニル−５−デアザプテリン テトラヒドロフラン（８ｍｌ）中におけるＮ²−ピバロイル−５−デアザプテ リン（０．４９２ｇ，２ｍｍｏｌ）の懸濁液を１０分間撹拌し、トリ−ｎ−ブチ ルホスフィン（０．６０６ｇ，３ｍｍｏｌ）、テニルアルコール（０．４３２ｇ ，３ｍｍｏｌ）およびアゾジカルボン酸ジイソプロピル（０．６０６ｇ，３ｍｍ ｏｌ）を続けて添加した。反応を室温で２時間進行させ、次いで蒸発させると油 が得られた。ヘキサンを添加して結晶化を誘発した。濾過およびヘキサンからの 再結晶により、明るい黄色の結晶状のテニル誘導体（０．３２ｇ，４７％）を得 た。融点１０７〜１０８℃；λ_max（ＭｅＯＨ）２７２，３１１ｎｍ； ＮＭＲ(３００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ₆)：δ 1.28（s），5.86（s），6.98（q） ，7.28（dd），7.43（dd），7.52（q），8.46（dd），8.89（dd）． ｃ）Ｂ．４３７６ Ｎ²−ピバロイル−Ｏ⁴−テニル−５−デアザプテリン（０．２８ｇ，０．８２ ｍｍｏｌ）を、ＮａＯＨ水溶液（３Ｍ，２ｍｌ）およびエタノール（１ｍｌ）と 共に２４時間加熱還流した。溶剤を蒸発除去し、残留固体を水に溶解した。酢酸 で酸性化すると白色沈殿が生じた。濾過し、固体をエタノールから再結晶して、 白色結晶状のＯ⁴−テニル−５−デアザプテリン（Ｂ．４３７６）（０．１０７ ｇ，５１％）を得た。タイプ４Ｄ Ｏ⁶−(４−ブロモテニル)−５−ニトロシトシン、Ｂ．４３８０ 水素化ナトリウム（油中６０％；８０ｍｇ，２ｍｍｏｌ）を、乾燥ＤＭＳＯ（ １ｍｌ）中における４−ブロモテニルアルコール（２９０ｍｇ，１．５ｍｍｏｌ ）の攪拌溶液に添加した。３０分後に４−アミノ−２−クロロ−５−ニトロピリ ミジン³⁵（１７４ｍｇ，１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を５０℃に２時間加熱し た。ＤＭＳＯを真空中で除去し、酢酸水溶液でｐＨ７に調整した。酢酸エチル中 へ抽出した後、生成物Ｂ．４３８０をメタノールから結晶化した（５１ｍｇ，１ ５％）。タイプ５ Ｓ⁶−(４−ブロモテニル)−６−チオグアニン、Ｂ．４３５２ 水素化ナトリウム（油中６０％；４４ｍｇ，１．１ｍｍｏｌ）を、乾燥ＤＭＳ Ｏ（０．５ｍｌ）中における４−ブロモテニルメルカプタン（４１８ｍｇ，２ｍ ｍｏｌ）の攪拌溶液に添加した。３０分後に２−アミノ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチ ル−１Ｈ−プリン−６−アミニウムクロリド（２２８ｍｇ，１ｍｍｏｌ）を添加 し、１時間撹拌を続けた。酢酸（０．１２ｍｌ）およびエーテル（３０ｍｌ）を 添加し、デカントし、新鮮なエーテルで摩砕処理した後、Ｂ．４３５２（３８ｍ ｇ，１１％）を濾別した。９−置換Ｏ⁶−(４−ブロモテニル)グアニン ： Ｏ⁶−(４−ブロモテニル)−９−（エトキシメチル）グアニン、Ｂ．４３６９ Ｏ⁶−(４−ブロモテニル)グアニン（６５２ｍｇ，２ｍｍｏｌ）をナトリウム エトキシド（１Ｍ；２ｍｌ，２ｍｍｏｌ）に溶解した。１０分後にエタノールを 除去し、残渣を乾燥ＤＭＦに溶解した。この溶液に撹拌下でクロロメチルエチル エーテル（１８９ｍｇ，２ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下に滴加した。４５分後 に溶剤を除去した。油状生成物をエタノールから結晶化して、Ｂ．４３６９（１ ５８ｍｇ）を針状晶として得た。母液をシリカゲル上でＣＨ₂Ｃｌ₂中の５％エタ ノールによりフラッシュクロマトグラフィー処理して、さらに１１８ｍｇを得た 。総収率３９％。 Ｏ⁶−(４−ブロモテニル)−９−（２−ヒドロキシエトキシメチル）グアニン、 Ｂ．４３３５ Ｏ⁶−(４−ブロモテニル)グアニン（２９４ｍｇ，１ｍｍｏｌ）、（ＮＨ₄）₂ ＳＯ₄（４７ｍｇ）およびヘキサメチルジシラザン（５ｍｌ）の攪拌混合物を３ 時間加熱還流した。次いで揮発性物質を真空下で蒸発させた。残渣をベンゼン（ １５ｍｌ）およびＨｇ(ＣＮ)₂（３４４ｍｇ，１．３ｍｍｏｌ）と共に還流下で ３０分間撹拌した。ベンゼン（１０ｍｌ）中における臭化（２−アセトキシエト キシ）メチル｛参考文献４，ｐ３３｝（１９７ｍｇ，１ｍｍｏｌ）の溶液を添 加し、２時間還流し続け、混濁液をクロロホルム（１５０ｍｌ）で希釈した。有 機相を飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液（３０ｍｌ）、次いでＫＩ（１Ｍ、３０ｍｌ）で 洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、蒸発させて油（３１３ｍｇ）を得た。この油を 、シリカゲルカラム上でＣＨＣｌ₃−ＭｅＯＨ（１２：１）を溶離剤として用い てクロマトグラフィー処理し、ほとんど純粋な（ｔ.ｌ.ｃ.）Ｂ．４３３５のＯ −アセテート（１４１ｍｇ）を得た。メタノール（６０ｍｌ）を乾燥アンモニア で飽和し、密栓したフラスコ内のこのＯ−アセテートに注いだ。溶解後に撹拌を 止め、フラスコを密閉したまま一夜放置した。メタノールの蒸発によりＢ．４３ ３５（１３５ｍｇ，４６％）を得た。イソプロパノールから再結晶。 Ｏ⁶−４−ブロモテニル−９−（β−Ｄ−リボフラノシル）グアニン、Ｂ．４３ ６３ 乾燥テトラヒドフラン（１６ｍｌ）中における２′，３′，５′−トリ−（Ｏ −アセチル）グアノシン³⁶（４０９ｍｇ，１ｍｍｏｌ）、トリ−ｎ−ブチルホス フィン（３０３ｍｇ，１．５ｍｍｏｌ）および４−ブロモテニルアルコール（２ ９０ｍｇ，１．５ｍｍｏｌ）の混合物を室温で４５分間撹拌した。次いでアゾジ カルボン酸ジイソプロピル（３０３ｍｇ，１．５ｍｍｏｌ）を滴加し、混合物を ２時間撹拌した。この溶液を蒸発させると油が残り、これをＴＨＦ／ＭｅＯＨ／ ２５％アンモニア水（１：１：１；５ｍｌ）に溶解し、４℃に４８時間保持した 。シリカゲルに吸着させ、ＣＨＣｌ₃−ＭｅＯＨ（１５：１から１０：１まで） を用いてカラムクロマトグラフィー処理し、リボシドＢ．４３６３（２０５ｍｇ ，４４％）を得た。 Ｏ⁶−４−ブロモテニル−９−（β−Ｄ−２′−デオキシリボフラノシル）グア ニン、Ｂ．４３７９ 乾燥テトラヒドフラン（４０ｍｌ）中における３′，５′−ジ−（Ｏ−アセチ ル）−２′−デオキシグアノシン³⁷（５５４ｍｇ，１．５ｍｍｏｌ）、トリ−ｎ −ブチルホスフィン（６６６．６ｍｇ，３．３ｍｍｏｌ）および４−ブロモテニ ルアルコール（６３８ｍｇ，３．３ｍｍｏｌ）の混合物を８０℃で1５分間撹拌 した。次いでアゾジカルボン酸ジイソプロピル（６６６．６ｍｇ，３．３ｍｍｏ ｌ）を 滴加し、１５分後に反応混合物を冷却し、蒸発させると油が残った。これをＴＨ Ｆ／ＭｅＯＨ／２５％アンモニア水（１：１：１；５ｍｌ）に溶解し、４℃に４ ８時間保持した。シリカゲルに吸着させ、ＣＨＣｌ₃−ＭｅＯＨ（２０：１）を 用いてカラムクロマトグラフィー処理し、２′−デオキシリボシドＢ．４３７９ （３３８ｍｇ，５１％）を得た。 ９−（β−Ｄ−アラビノフラノシル）−Ｏ⁶−（４−ブロモテニル）グアニン、 Ｂ．４３６８ 水素化ナトリウム（油中６０％；６０ｍｇ，１．５ｍｍｏｌ）および４−ブロ モテニルアルコール（３４４ｍｇ，１．８ｍｍｏｌ）から、乾燥ＤＭＳＯ（０． ５ｍｌ）中で１時間かけて、アルコキシド溶液を調製した。これを２−アミノ− ９−（β−Ｄ−アラビノフラノシル）−６−クロロプリン³⁸（１５１ｍｇ，０． ５ｍｍｏｌ）と反応させ、室温で５分間、次いで６０〜６５℃で１５分間、撹拌 した。冷却し、エーテル（５０ｍｌ）で摩砕処理し、濾過して固体を得た。これ を水（５ｍｌ）に溶解し、酢酸で中和し、シリカゲルで処理した。酢酸エチル／ ＭｅＯＨ（１９：１）を用いるカラムクロマトグラフィーにより、アラビノシド Ｂ．４３６８（８７ｍｇ，３８％）を得た。ｔ.ｌ.ｃ.で純粋。 Ｏ⁶−置換グアニン これらは第四級塩２−アミノ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−１Ｈ−プリン−６− アミニウムクロリドと、ＤＭＳＯ中でアルコールおよび水素化ナトリウムから誘 導された適切なアルコキシドとから、標準法により製造された（7/12/95のpp.16 d,17,18,47参照）。 参考文献 1． Kiburis J．and 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【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項 【提出日】１９９７年１１月１１日（１９９７．１１．１１） 【補正内容】 Ｒ^aはベンジル基または置換ベンジル基である。ベンジル基はオルト、メタまた はパラ位において、ハロゲン、ニトロ、アリール、たとえばフェニルまたは置換 フェニル、炭素原子１〜４個のアルキル、炭素原子１〜４個のアルコキシ、炭素 原子最高４個のアルケニル、炭素原子最高４個のアルキニル、アミノ、モノアル キルアミノ、ジアルキルアミノ、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、ヒドロキシ メチル、およびＳＯ_nＲ^b（ここでｎは０、１、２または３であり、Ｒ^bは水素、 炭素原子１〜４個のアルキル、またはアリールである）などの置換基で置換され ていてもよい。Chae et al.,J.Med.Chem.,1994,37,342-347には、ベンゼン環ま たは９位に次第に嵩高い置換基をもつＯ ⁶−ベンジルグアニン類似体についての 試験が記載されている。Chae et al.,J.Med.Chem.,1995,38,359-365には、数種 の８−置換Ｏ ⁶−ベンジルグアニン、２−および／または８−置換６−（ベンジ ルオキシ）プリン、置換６（４）−（ベンジルオキシ）ピリミジン、および６− （ベンジルオキシ）−ｓ−トリアジンが記載され、それらがＡＴａｓｅを不活性 化する効力につき試験された。ヒトＨＴ２９結腸腫瘍細胞抽出液中のＡＴａｓｅ の不活性化において、２種類の化合物が、Ｏ ⁶−ベンジルグアニンより有意に有 効であると確認された。これらは８−位に電子吸引基をもつ８−置換Ｏ ⁶−ベン ジルグアニン（たとえば８−アザ−Ｏ ⁶−ベンジルグアニンおよびＯ ⁶−ベンジル −８−ブロモグアニン）、および５−位に電子吸引基をもつ５−置換２，４−ジ アミノ−６−（ベンジルオキシ）ピリミジン（たとえば２，４−ジアミノ−６− （ベンジルオキシ）−５−ニトロソピリミジンおよび２，４−ジアミノ−６−（ ベンジルオキシ）−５−ニトロピリミジン）であった。後者の誘導体は、無傷の ＨＴ２９結腸腫瘍細胞中のＡＴａｓｅの不活性化においても、Ｏ ⁶−ベンジルグ アニンより有意に有効であった。本出願の優先日より後に公開された国際特許出 願公開第WO 96/04281号は、同様な置換Ｏ ⁶−ベンジルグアニンおよび６(４)−ベ ンジルオキシピリミジンに関する。 本出願人は、国際特許出願公開第WO 94/29312号として公開された国際特許出 願PCT/IE 94/00031号の出願人でもある。国際特許出願公開第WO 94/29312号（そ の内容全体を本明細書に参考として引用する）には、式ＩのＯ ⁶−置換グアニン 誘導体： 図２２は、Ｂ．４２８０（２０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）が、５日間の投与計画に よるテモゾロミドの増殖阻害作用に対するヒト胸部腫瘍異種移植片の感受性を、 かなり増大させたことを示す。この腫瘍のＡＴａｓｅのレベルが極めて高いにも かかわらず、この感受性増大は起きた。 図２３は、１回量のＢ．４２８０（３０ｍｇ／ｋｇ、経口）が、１回量のクロ ロエチル化剤フォテムスチンの増殖阻害作用に対するヒト黒色腫異種移植片の感 受性をかなり増大させ、毒性には実質的影響がないことを示す。Ｏ ⁶ −(４−ブロモ−２−チエニル[³Ｈ]メチル)グアニンの合成 ４−ブロモ−２−チオフェンカルボキシアルデヒド（０．７９ｍｇ，６６．８ μｍｏｌ）を、イソプロパノール（３５０μｌ）中で室温において１時間、Ｎａ Ｂ[³Ｈ]₄（０．０１６７ｍｍｏｌ，６０Ｃｉ／ｍｍｏｌ）と反応させた。得られ た[³Ｈ]−４−ブロモテニルアルコールをペンタン中へ抽出し、乾燥させ、秤量 し、ＤＭＳＯ（２５０μｌ）中で室温において１時間、ＮａＨ（５．４４ｍｇ） およびグアニンの第四級アンモニウム塩（１５．５５ｍｇ）と反応させた。生成 物を酢酸−エーテル（エーテル１．５ｍｌ中の氷酢酸１５μｌ）から沈殿させる ことにより回収し、エーテルで洗浄し、乾燥させ、Ｈ₂Ｏで摩砕処理した。水で 洗浄した後、最終生成物を一定重量になるまで乾燥させた。図２８は、放射性標 識Ｂ．４２８０の合成経路を示す。 高性能液体クロマトグラフィー分析 アリコートの生成物を緩衝液Ａ（７.５％アセトニトリルを含有する１０ｍＭ ＫＨ₂ＰＯ₄）に溶解し、ＯＤＳ−５カラム上で高性能液体クロマトグラフィー処 理した。１ｍｌ／分で２０分かけて、１００％Ａから２０％Ａ：８０％Ｂ（８０ ％アセトニトリルを含有する１０ｍＭ ＫＨ₂ＰＯ₄）までの直線勾配で溶離した 。 １．以下から選択されるピリミジン誘導体： Ａ） 式ＩＩの６−ヘタリールアルキルオキシピリミジン誘導体； ［式中、 Ｒは、所望により炭素環もしくは複素環がそれに縮合した、少なくとも１つの ５員もしくは６員の複素環を有する環式基（この複素環またはそれぞれの複素環 はＯ、ＮまたはＳから選択される少なくとも１個の異種原子を有する）、または その置換誘導体であり； Ｒ²はＨ、Ｃ₁〜Ｃ₅アルキル、ハロゲンまたはＮＨ₂から選択され、 Ｒ⁴およびＲ⁵は同一であるかまたは異なり、Ｈ、ＮＨ−Ｙ′またはＮＯ_nから 選択され、 ここでＹ′はＨ、リボシル、デオキシリボシル、アラビノシル、 Ｈまたはアルキルである）、またはその置換誘導体であり、ｎは１または２であ り、あるいは Ｒ⁴とＲ⁵は一緒になって、環構造ＩＩＩ^aを形成し； （ここで、Ｙ’は上記に定めたものであり、Ｒ³はＨまたはＯＨである）、ある いは Ｒ⁴とＲ⁵はピリミジン環と一緒に、上記式ＩＩＩ^aのもの以外の１個またはそ れ以上の異種原子を含む５員または６員の環構造を形成する］ およびその薬剤学的に許容しうる塩類；ただし Ｒ⁴とＲ⁵が環構造ＩＸ ＸはＯまたはＳであり、Ｒ″およびＲ″′はアルキルである）、またはその置換 誘導体である］を形成する場合、Ｒ²はＮＨ₂ではない：並びに Ｂ） 以下に定義する式ＩＩＩ^b、ＩＩＩ^c、ＩＶ^b、Ｖ^b、ＶＩ^b、ＶＩＩ^bおよび ＶＩＩＩ^bの誘導体から選択される６−アリールアルキルオキシピリミジン誘導 体： ［式中、Ｒ¹⁰はフェニルまたはその置換誘導体であり； Ｒ¹¹はＣ１−Ｃ５アルキルであり； Ｙ’は上記定義の通りであり； Ｒ³はＨまたはＯＨである。］ ［式中、Ｒ¹⁰は上記定義の通りであり； Ｒ²は、式ＩＩについて定義した通りであり； Ｒ³は、ＨまたはＯＨである。］［式中、Ｒ¹⁰は上記定義の通りであり； Ｙ’は、式ＩＩについて定義した通りであり； Ｘは、ＣＨまたはＮであり； 但し、ＸがＮであり、Ｙ’がＨである場合、Ｒ¹⁰はフェニルではない。］ ［式中、Ｒ¹⁰は上記定義の通りであり； Ｘは、ＣＨまたはＮであり； Ａは、ＣＨまたはＮである。］ ［式中、Ｒ¹⁰は、上記定義の通りであり； Ｚは、ＯまたはＳまたはＣＨ＝ＣＨである。］ ［式中、Ｒ¹⁰は上記定義の通りであり； Ｕは、ＣＨまたはＮであり； Ｖは、ＣＨまたはＮであり； Ｗは、ＣＨまたはＮである。］ ［式中、Ｒ¹⁰は上記定義の通りであり； Ｔは、Ｈ、ＮＨ₂またはＮＯ_n（ここで、ｎは１または２）であり； Ｑは、Ｈ、ＮＨ₂またはＮＯ_n（ここで、ｎは１または２）であり； 但し、ＱがＮＨ₂であり、ＴがＮＯまたはＮＯ₂である場合、または ＱがＨであり、ＴがＮＯ₂である場合、または ＱおよびＴが共にＮＨ₂である場合、または ＱがＮＨ₂であり、ＴがＨである場合には、 Ｒ¹⁰はフェニルではない］ ２．請求項１記載の式IIIの化合物 （式中、 Ｒは請求項１に定めたものであり； Ｙ′はＨまたはＨＯＣＨ₂ＣＨ₂ＯＣＨ₂−であり； Ｒ²はＨ、ＮＨ₂、Ｃ₁〜Ｃ₅アルキル、またはハロゲンであり； Ｒ₃はＨまたはＯＨであり； 但し、Ｙ’およびＲ³が共にＨである場合、Ｒ²はＮＨ₂ではない）。 ３．請求項１記載の式ＩＶの化合物 （式中、 ＲおよびＹ′は請求項１に定めたものであり； ＸはＣＨまたはＮであり； ＡはＣＨまたはＮであり； 但し、ＸがＮであり、ＡがＣＨである場合、Ｙ’は請求項１に定義したＹでは ない）。 ４２．宿主においてＯ ⁶−アルキルグアニン−ＤＮＡアルキルトランスフェラ ーゼ活性を減少させる方法であって、 Ｏ ⁶−アルキルグアニン−ＤＮＡアルキルトランスフェラーゼ活性を減少させ るのに有効な量のＯ ⁶−（４−ブロモテニル）グアニンを含む組成物を宿主に投 与することを含む方法。 ４３．宿主において腫瘍細胞を処置する方法であって、 化学療法薬用アルキル化剤の有効性を高めるのに十分なほどＯ ⁶−アルキルグ アニン−ＤＮＡアルキルトランスフェラーゼ活性を減少させるのに有効な量のＯ ⁶ −（４−ブロモテニル）グアニンを含む組成物を宿主に投与し；かつＯ ⁶−（４−ブロモテニル）グアニンと組み合わせた場合に細胞毒性である量 のアルキル化剤を含む組成物を宿主に投与する ことを含む方法。 ４４．Ｏ ⁶−（４−ブロモ−２−チエニル［³Ｈ］メチル）グアニン。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 31/522 Ａ６１Ｋ 31/52 ６０１ 31/708 31/70 ６２１ Ｃ０７Ｄ 239/47 Ｃ０７Ｄ 239/47 409/12 ２３９ 409/12 ２３９ 473/18 473/18 473/30 473/30 473/40 473/40 475/02 475/02 487/04 １４３ 487/04 １４３ １４６ １４６ 498/04 １０５ 498/04 １０５ 513/04 ３４１ 513/04 ３４１ Ｃ０７Ｈ 19/167 Ｃ０７Ｈ 19/167 19/173 19/173 19/19 19/19 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，Ｓ Ｚ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＴ，ＡＵ ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ， ＣＺ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＥ，Ｅ Ｓ，ＦＩ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ， ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，Ｍ Ｘ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ， ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者 マケルヒニー，ロバート・スタンリー アイルランド国ダブリン ２，トリニテ ィ・カレッジ，ザ・ユニバーシティ・ケミ カル・ラボラトリー (72)発明者 マコーミック，ジョアン・エリザベス アイルランド国ダブリン ２，トリニテ ィ・カレッジ，ザ・ユニバーシティ・ケミ カル・ラボラトリー (72)発明者 ドネリー，ドロシー・ジョセフィン アイルランド国ダブリン ２，トリニテ ィ・カレッジ，ザ・ユニバーシティ・ケミ カル・ラボラトリー (72)発明者 マーレイ，ポール アイルランド国ダブリン ２，トリニテ ィ・カレッジ，ザ・ユニバーシティ・ケミ カル・ラボラトリー (72)発明者 カロラ，クリストフ アイルランド国ダブリン ２，トリニテ ィ・カレッジ，ザ・ユニバーシティ・ケミ カル・ラボラトリー (72)発明者 エルダー，ロデリック・ヒュー イギリス国マンチェスター エム20・９ビ ーエックス，ウィルムズロー・ロード，ク リスティー・ホスピタル，パターソン・イ ンスティチュート・オブ・キャンサー・リ サーチ，シーアールシー・デパートメン ト・オブ・カーシノジェネシス (72)発明者 ケリー，ジェーン イギリス国マンチェスター エム20・９ビ ーエックス，ウィルムズロー・ロード，ク リスティー・ホスピタル，パターソン・イ ンスティチュート・オブ・キャンサー・リ サーチ，シーアールシー・デパートメン ト・オブ・カーシノジェネシス (72)発明者 マージソン，ジェフリー・ポール イギリス国マンチェスター エム20・９ビ ーエックス，ウィルムズロー・ロード，ク リスティー・ホスピタル，パターソン・イ ンスティチュート・オブ・キャンサー・リ サーチ，シーアールシー・デパートメン ト・オブ・カーシノジェネシス (72)発明者 ワトソン，アマンダ・ジーン イギリス国マンチェスター エム20・９ビ ーエックス，ウィルムズロー・ロード，ク リスティー・ホスピタル，パターソン・イ ンスティチュート・オブ・キャンサー・リ サーチ，シーアールシー・デパートメン ト・オブ・カーシノジェネシス (72)発明者 ラファーティー，ジョセフ・アンソニー イギリス国マンチェスター エム20・９ビ ーエックス，ウィルムズロー・ロード，ク リスティー・ホスピタル，パターソン・イ ンスティチュート・オブ・キャンサー・リ サーチ，シーアールシー・デパートメン ト・オブ・カーシノジェネシス (72)発明者 ウィリントン，マーク・アンドリュー イギリス国マンチェスター エム20・９ビ ーエックス，ウィルムズロー・ロード，ク リスティー・ホスピタル，パターソン・イ ンスティチュート・オブ・キャンサー・リ サーチ，シーアールシー・デパートメン ト・オブ・カーシノジェネシス (72)発明者 ミドルトン，マーク・ロス イギリス国マンチェスター エム20・９ビ ーエックス，ウィルムズロー・ロード，ク リスティー・ホスピタル，パターソン・イ ンスティチュート・オブ・キャンサー・リ サーチ，シーアールシー・デパートメン ト・オブ・カーシノジェネシス

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．式ＩＩの６−ヘタリールアルキルオキシピリミジン誘導体： ［式中、 Ｒは（ｉ）所望により炭素環もしくは複素環がそれに縮合した、少なくとも１ つの５員もしくは６員の複素環を有する環式基（この複素環またはそれぞれの複 素環はＯ、ＮまたはＳから選択される少なくとも１個の異種原子を有する）、ま たはその置換誘導体であるか；あるいは （ii）フェニルまたはその置換誘導体であり、 Ｒ²はＨ、Ｃ₁〜Ｃ₅アルキル、ハロゲンまたはＮＨ₂から選択され、 Ｒ⁴およびＲ⁵は同一であるかまたは異なり、Ｈ、ＮＨ−Ｙ′またはＮＯ_nから 選択され、ここでＹ′はＨ、リボシル、デオキシリボシル、アラビノシル、 Ｈまたはアルキルである）、またはその置換誘導体であり、ｎは１または２であ り、 あるいは Ｒ⁴とＲ⁵はピリミジン環と一緒に、１個またはそれ以上の異種原子を含む５員 または６員の環構造を形成する］ およびその薬剤学的に許容しうる塩類；ただし Ｒ⁴とＲ⁵が環構造ＩＸ ＸはＯまたはＳであり、Ｒ″およびＲ″′はアルキルである）、またはその置換 誘導体である］を形成する場合、Ｒ²はＮＨ₂ではなく、 かつ以下の状況ａ）〜ｈ）では、Ｒはフェニルではない： ａ）Ｒ²およびＲ⁵がＮＨ₂であり、かつＲ⁴がＮＯまたはＮＯ₂である場合、 ｂ）Ｒ²がＮＨ₂であり、かつＲ⁴とＲ⁵が環構造Ｘを形成している場合、 ｃ）Ｒ²がＮＨ₂であり、かつＲ⁴とＲ⁵が環構造ＸＩを形成している場合、 ｄ）Ｒ²がＮＨ₂であり、かつＲ⁴がＮＯ₂であり、かつＲ⁵がＨもしくはＣＨ₃であ る場合、 ｅ）Ｒ²、Ｒ⁴およびＲ⁵がＮＨ₂である場合、 ｆ）Ｒ²およびＲ⁵がＮＨ₂であり、かつＲ⁴がＨである場合、 ｇ）Ｒ²がＨであり、かつＲ⁴がＮＯ₂であり、かつＲ⁵がＮＨ₂である場合、 または ｈ）Ｒ²がＦもしくはＯＨであり、かつＲ⁴とＲ⁵が環構造ＸＩＩを形成している 場合 ２．請求項１記載の式IIIの化合物（式中、 Ｒは請求項１に定めたものであり； Ｙ′は請求項１に定めたものであり； Ｒ²はＨ、ＮＨ₂、Ｃ₁〜Ｃ₅アルキル、またはハロゲンであり； Ｒ³はＨまたはＯＨである）。 ３．請求項１記載の式ＩＶの化合物 （式中、 ＲおよびＹ′は請求項１に定めたものであり； ＸはＣＨまたはＮであり； ＡはＣＨまたはＮである）。 ４．請求項１記載の式Ｖの化合物 （式中、 Ｒは請求項１に定めたものであり； ＸはＣＨまたはＮであり； ＡはＣＨまたはＮである）。 ５．請求項１記載の式ＶＩの化合物（式中、 Ｒは請求項１に定めたものであり； ＺはＯまたはＳまたはＣＨ＝ＣＨである）。 ６．請求項１記載の式ＶIIの化合物 （式中、 Ｒは請求項１に定めたものであり； ＵはＣＨまたはＮであり； ＶはＣＨまたはＮであり； ＷはＣＨまたはＮであり； ただし、Ｕ、ＶおよびＷがすべてＣＨであることはない）。 ７．請求項１記載の式ＶIIIの化合物 （式中、 Ｒは請求項１に定めたものであり； ＴはＨ、ＮＨ₂またはＮＯ_nであり、ここでｎは１または２であり； ＱはＨ、ＮＨ₂またはＮＯ_nであり、ここでｎは１または２である）。 ８．Ｙ′がＨ、リボシル、デオキシリボシル、アラビノシル、ＨＯＣＨ₂ＣＨ₂ ＯＣＨ₂−またはＲ″ＸＣＨＲ″′（ここでＸはＯまたはＳであり、Ｒ″および Ｒ″′はアルキルである）、またはその置換誘導体である、請求項１、２または ３記載の化合物。 ９．Ｒが少なくとも１個のＳ原子を含む５員の複素環である、請求項１記載の 化合物。 １０．Ｒがチオフェン環、フラン環、およびそれらの置換誘導体から選択され る、請求項１記載の化合物。 １１．Ｒが、ハロ、ハロアルキル、シアノ、ＳＯ_nＲ⁷（ここでＲ⁷はアルキル であり、ｎは０、１または２である）、または−ＣＯＯＲ⁸（ここでＲ⁸はアルキ ルである）で置換された、複素環および／または炭素環を含む、請求項１記載の 化合物。 １２．Ｒがチオフェン環、フラン環、ならびにそれらのブロモ−およびシアノ −置換誘導体から選択される置換誘導体から選択される、請求項１記載の化合物 。 １３．Ｒが、ピリミジン残基に結合したメチレンオキシ基と１，３−または１ ，４−関係にあるクロロ−、ブロモ−またはシアノ−置換基を有する、チオフェ ン環およびフラン環から選択される、請求項１記載の化合物。 １４．Ｙ′が、アルコキシ基のアルキルにおいて所望によりＯＨで置換された アルコキシメチルである、請求項１記載の化合物。 １５．下記より選択される請求項１記載の化合物： Ｏ⁶−（４−ブロモテニル）−８−チアグアニン Ｏ⁶−（４−クロロテニル）プテリン Ｏ⁶−ピペロニル−７−デアザ−８−アザグアニン Ｏ⁶−（４−ブロモテニル）−８−ヒドロキシグアニン Ｏ⁶−（４−クロロテニル）−２，４−ジアミノ−６−ヒドロキシ−５−ニトロ ソピリミジン。 １６．式XIIIのグアニン誘導体［式中、 ＥはＯまたはＳであり、 Ｙ′は請求項１に定めたものであり、 Ｒ⁶は所望により炭素環もしくは複素環がそれに縮合した、少なくとも１つの ５員もしくは６員の複素環を有する環式基（この複素環またはそれぞれの複素環 はＯ、ＮまたはＳから選択される少なくとも１個の異種原子を有する）、または その置換誘導体である］ およびその薬剤学的に許容しうる塩類；ただし国際特許出願公開第WO 94/29312 号に公開された化合物を除く。 １７．Ｒ⁶が少なくとも１個のＳ原子を含む５員の複素環である、請求項１６ 記載の化合物。 １８．Ｒ⁶がチオフェン環、フラン環、およびそれらの置換誘導体から選択さ れる、請求項１６記載の化合物。 １９．Ｒ⁶が、ハロ、ハロアルキル、シアノ、ＳＯ_nＲ⁷（ここでＲ⁷はアルキル であり、ｎは０、１または２である）、または−ＣＯＯＲ⁸（ここでＲ⁸はアルキ ルである）で置換された、複素環および／または炭素環を含む、請求項１６記載 の化合物。 ２０．Ｒ⁶が、チオフェン環、フラン環、ならびにそれらのブロモ−およびシ アノ−置換誘導体から選択される置換誘導体から選択される、請求項１６記載の 化合物。 ２１．Ｒ⁶が、ピリミジン残基に結合したメチレンオキシ基と１，３−または １，４−関係にあるクロロ−、ブロモ−またはシアノ−置換基を有する、チオフ ェン環およびフラン環から選択される、請求項１６記載の化合物。 ２２．式XIVのグアニン誘導体：（式中、Ｒ¹⁰はブロモ、クロロまたはシアノであり、Ｙ′は請求項１に定めたも のである）。 ２３．Ｙ′がＨ、リボシル、デオキシリボシル、またはＲ″ＸＣＨＲ″′（こ こでＸはＯまたはＳであり、Ｒ″はアルキルであり、Ｒ″′はＨまたはアルキル である）、またはその置換誘導体である、請求項２２記載の化合物。 ２４．Ｏ ⁶−（４−ブロモテニル）グアニン。 ２５．Ｏ ⁶−（４−ブロモテニル）−９−（２−ヒドロキシエトキシメチル） グアニンである、請求項２２記載の化合物。 ２６．９−（β−Ｄ−アラビノフラノシル）−Ｏ ⁶−（４−ブロモテニル）グ アニンである、請求項２２記載の化合物。 ２７．Ｏ ⁶−（４−ブロモテニル）グアノシンである、請求項２２記載の化合 物。 ２８．Ｏ ⁶−（４−ブロモテニル）−２−デオキシグアノシンである、請求項 ２２記載の化合物。 ２９．下記より選択される請求項２０記載の化合物：Ｏ ⁶ −（５−クロロテニル）グアニンＯ ⁶ −（５−シアノテニル）グアニンＯ ⁶ −（５−メチルスルフィニルテニル）グアニンＯ ⁶ −（４−クロロテニル）グアニンＯ ⁶ −（４−メトキシテニル）グアニンＯ ⁶ −（５−ブロモ−３−チエニルメチル）グアニンＯ ⁶ −（４−シアノテニル）グアニンＯ ⁶ −（４，５−ジクロロテニル）グアニン ３０．下記より選択される請求項２０記載の化合物：Ｏ ⁶ −（４−メチルチオテニル）グアニンＯ ⁶ −（４−アジドテニル）グアニン ３１．下記より選択される請求項１６記載の化合物：Ｏ ⁶ −（２−クロロ−４−ピコリル）グアニンＯ ⁶ −（５−ブロモフルフリル）グアニン ３２．請求項１〜３１のいずれか１項記載の化合物および薬剤学的に許容しう る賦形剤を含む薬剤組成物。 ３３．さらにアルキル化剤を含む、請求項３２記載の薬剤組成物。 ３４．アルキル化剤が１，３−ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソ尿素 (ＢＣＮＵ)およびテモゾロミドから選択される、請求項３３記載の組成物。 ３５．宿主においてＯ ⁶−アルキルグアニン−ＤＮＡアルキルトランスフェラ ーゼ活性を減少させる方法であって、 Ｏ ⁶−アルキルグアニン−ＤＮＡアルキルトランスフェラーゼ活性を減少させ るのに有効な量の、請求項１〜３１のいずれか１項記載の化合物を含む組成物を 宿主に投与することを含む方法。 ３６．宿主において腫瘍細胞を処置する方法であって、 化学療法用アルキル化剤の有効性を高めるのに十分なほどＯ ⁶−アルキルグア ニン−ＤＮＡアルキルトランスフェラーゼ活性を減少させるのに有効な量の、請 求項１〜３１のいずれか１項記載の不活性化剤化合物を含む組成物を宿主に投与 し；かつ 前記不活性化剤化合物と組み合わせた場合に細胞毒性である量のアルキル化剤 を含む組成物を宿主に投与する ことを含む方法。 ３７．腫瘍細胞においてＯ ⁶−アルキルグアニン−ＤＮＡアルキルトランスフ ェラーゼ活性を減少させるための薬剤の製造における、請求項１〜３１のいずれ か１項記載の化合物の使用。 ３８．Ｏ ⁶−（４−ブロモテニル）グアニンおよび薬剤学的に許容しうる賦形 剤を含む薬剤組成物。 ３９．経口投与に適した、請求項３８記載の薬剤組成物。 ４０．さらにアルキル化剤を含む、請求項３８記載の薬剤組成物。 ４１．アルキル化剤が１，３−ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソ尿素 (ＢＣＮＵ)およびテモゾロミドから選択される、請求項４０記載の薬剤組成物。 ４２．宿主においてＯ ⁶−アルキルグアニン−ＤＮＡアルキルトランスフェラ ーゼ活性を減少させる方法であって、 Ｏ ⁶−アルキルグアニン−ＤＮＡアルキルトランスフェラーゼ活性を減少させ るのに有効な量のＯ ⁶−（４−ブロモテニル）グアニンを含む組成物を宿主に投 与することを含む方法。 ４３．宿主において腫瘍細胞を処置する方法であって、 化学療法薬用アルキル化剤の有効性を高めるのに十分なほどＯ ⁶−アルキルグ アニン−ＤＮＡアルキルトランスフェラーゼ活性を減少させるのに有効な量のＯ ⁶ −（４−ブロモテニル）グアニンを含む組成物を宿主に投与し；かつ Ｏ ⁶−（４−ブロモテニル）グアニンと組み合わせた場合に細胞毒性である量 のアルキル化剤を含む組成物を宿主に投与する ことを含む方法。 ４４．Ｏ ⁶−（メチレン［³Ｈ］−（４−ブロモテニル）グアニン。