JP2000506518A

JP2000506518A - 免疫原性分子および、アジュバントとして顆粒球―マクロファージコロニー刺激因子を含有する組成物

Info

Publication number: JP2000506518A
Application number: JP9528538A
Authority: JP
Inventors: ヤーガー，エルケ; クヌート，アレクサンダー
Original assignee: ルードヴィッヒ・インスティテュート・フォア・キャンサー・リサーチ
Priority date: 1996-02-09
Filing date: 1997-01-28
Publication date: 2000-05-30
Also published as: EP0932411A4; EP0932411A1; ES2196305T3; CA2244867A1; WO1997028816A1; AU1755297A; CA2244867C; DE69723092T2; EP0932411B1; ATE243525T1; DE69723092D1; ZA97858B; DK0932411T3; US6096313A; AU723147B2; PT932411E

Abstract

(57)【要約】顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（“ＧＭ−ＣＳＦ”）が、対象に投与するとアジュバントとして作用することが見いだされた。ＧＭ−ＣＳＦと免疫原性成分との組成物、およびこれら組成物におけるＧＭ−ＣＳＦのみの利用法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】免疫原性分子および、アジュバントとして顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子を含有する組成物発明の分野本発明は特に、腫瘍拒絶抗原前駆体(“ＴＲＡＰ”)および腫瘍拒絶抗原(“ＴＲＡ”)と称されるクラスの分子に関する免疫応答の発生において有用な組成物に関する。免疫応答は、とりわけ、ＴＲＡＰおよびＴＲＡに対する抗体の産生、および、ＴＲＡと主要組織適合分子（“ＭＨＣ”）とからなる複合体に対して特異的なＴ細胞の生成を含む。そのようなＴ細胞および抗体は、例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ヤギ、又はその他の非−ヒト動物において産生することができ、そして、腫瘍の存在を同定するための診断方法において利用できる。本組成物は、メラノーマ、または形成異常母斑(dysplastic nevi)、などのガン性の病気を患う患者、あるいは、細胞のトランスフォーメーションが起こった患者に投与し、腫瘍、ガン細胞、およびトランスフォーム細胞に対する免疫応答を引き起こすことによって、治療上にも利用することができる。先行技術の背景宿主（ホスト）生物体によるガン細胞の認識、または認識の欠如に関する研究は多くの異なる方向において行われてきた。この分野の理解は、基礎的な免疫学および腫瘍学両方についての相当の理解を有することを前提とする。マウス腫瘍における初期の研究では、腫瘍（細胞）が同系の動物へと移植された際、それらが（移植された）腫瘍細胞の拒絶を引き起こす分子を示すことが明らかにされた。これら分子は受容動物におけるＴ−細胞によって“認識”され、細胞溶解性Ｔ−細胞応答を引き起こし、移植された細胞が溶解される。この証拠は、最初、メチルコラントレンなどの、化学発ガン剤によってイン・ヴィトロで誘導された腫瘍について得られた。腫瘍によって発現され、Ｔ−細胞応答を誘発する抗原はそれぞれの腫瘍によって異なることが判明した。化学発ガン剤による腫瘍の誘発、および、細胞表面抗原における相違に関する、一般的な教示についてはプレーン(Prehn)他,J.Natl.Canc.Inst.18:769-778(1957);クライン（Klein ）他,Cancer Res.20: 1561-1572(1960);グロス（Gross）,Cancer Res.3:326-333(1943),バソムブリオ（Basombrio）,Cancer Res.30:2458-2462(1970)を参照。このクラスの抗原は“ 腫瘍特異移植抗原”または“ＴＳＴＡ”として知られるようになった。化学発ガン剤によって誘発される場合のそのような抗原の提示の観察に続いて、紫外線照射によってイン・ヴィトロで誘発される腫瘍の場合にも同様の結果が得られた。クリプケ（Kripke）,J.Natl.Canc.Inst.53:333-1336(1974)を参照。Ｔ−細胞を介する免疫応答が前述のタイプの腫瘍について観察されるのに対し、自然発症の腫瘍は一般的に非−免疫原性であると考えられていた。従ってそれらはその腫瘍を保有する患者において、腫瘍に対する応答を引き起こす抗原を提示しないと考えられていた。ヒューイット(Hewitt)他,Brit.J.Cancer33:241-259 (1976)を参照。ｔｕｍ^-抗原のファミリーを提示する細胞ラインは、その開示内容を参考文献として本出願に合体させる、ブーン（Boon）他,J.Exp.Med.152:1184-1193(1980) に記載されているように、マウス腫瘍細胞または細胞ラインを突然変異誘発することによって得た免疫原性の変異体(variant)である。詳細に説明すると、ｔｕｍ^-抗原は、同系のマウスにおいて免疫応答を発生させず、そして腫瘍の形成を導く腫瘍細胞（即ち“ｔｕｍ⁺”細胞）を突然変異させることによって得られるものである。それらのｔｕｍ⁺細胞を突然変異誘発すると、それらは同系のマウスによって拒絶されるようになり、腫瘍を形成しなくなる(従って“ｔｕｍ^-”) 。その開示内容を参考文献として本出願に合体させる、ブーン(Boon)他,Proc.Na tl.Acad.Sci.USA74:272（1997）を参照。多くのタイプの腫瘍がこの現象を示すことが明らかにされている。例えば、フロスト（Frost）他,Cancer Res.43:125( 1983)を参照。ｔｕｍ^-変異体は、それらが免疫拒絶プロセスを誘発するために進行性の腫瘍を形成することができないと考えられる。この仮説を支持する証拠は“ｔｕｍ^- ”変異体、即ち通常は腫瘍を形成しない変異体が、亜致死線量照射により免疫系が抑制されたマウスにおいては腫瘍を形成することができるということ、ファン・ペル(Van Pel)他,Proc.Natl.Acad.Sci.USA76:5282-5285(1979);および、肥満細胞腫Ｐ８１５の腹腔内注射されたｔｕｍ^-細胞が１２−１５日間は指数関数的に増え、その後、リンパ球とマクロファージの流入の間においてわずか数日の間に排除される（ウィッテンホーヴ（Uyttenhove）他,J.Exp.Med.152:1175-1183(1980)）という観察を含むものである。さらなる証拠は、マウスは同じｔｕｍ^-変異体への後の攻撃を、後の細胞の攻撃とともに、免疫抑制量の照射を行った場合においても抑えることができるような免疫記憶を獲得するという観察を含む。(ブーン（Boon）他，Pro c.Natl.Acad.Sci.USA 74:272-275(1977);ファン・ペル（Van mPel)他,前出；ウィッテンホーヴ（Uyttenhove）他,前出)。それより後の研究によって、自然発症の腫瘍が突然変異誘発をかけられると、応答を発生させる免疫原性の変異体が生じるということが判った。実際、それらの変異体はもとの腫瘍に対して免疫防御応答を誘発することができた。ファン・ペル（Van Pel)他,J.Exp.Med.157:1992- 2001(1983)を参照。従って、同系の拒絶応答に関して標的である腫瘍において、いわゆる“腫瘍拒絶抗原”の提示を誘発することができることが示された。外来の遺伝子を自然発症の腫瘍にトランスフェクトした場合にも類似の結果が得られた。この事についてはフィアソン（Fearson）他,Cancer Res.48:2975-1980(1988 )を参照。あるクラスの抗原が腫瘍細胞の表面上に提示され、細胞傷害性Ｔ細胞によって認識され、溶解を引き起こすということが認識されるようになった。このクラスの抗原を以後、“腫瘍拒絶抗原”または“ＴＲＡ”と称することにする。ＴＲＡは抗体応答を誘発する可能性と誘発しない可能性がある。これらの抗原に関してなされてきた研究の範囲は、イン・ヴィトロでの細胞溶解性Ｔ細胞キャラクタライゼーション研究、即ち、特定の細胞溶解性Ｔ細胞（以後、“ＣＴＬ”と称する）サブセットによる抗原の同定の研究によるものである。前記サブセットは提示された腫瘍拒絶抗原を認識すると増殖し、抗原を提示する細胞は溶解される。キャラクタライゼーション研究により、抗原を発現する細胞を特異的に溶解するＣＴＬクローンが同定されてきた。この研究の例は、レヴィ（Levy）他,Adv Cance r Res.24:1-59(1977);ブーン（Boon）他,J.Exp.Med.152:1184-1193(1980);ブルンナー（Brunner）他,J.Immunol.124:1627-1634(1980);マリャンスキー（Maryan ski）他,Eur.J.Imunol.124:1627-1634(1980);マリャンスキー（Maryanski）他,E ur.J.Imunol.12:406-412(1982);パッラディーノ（Palladino）他,Canc.Res.47:5 074-5079(1987)において見ることができる。このタイプの分析は、主要組織適合抗原、男性特異Ｈ−Ｙ抗原、およびここに記載した“ｔｕｍ−”抗原と称されるクラスの抗原を含む、ＣＴＬによって認識される他のタイプの抗原について必要とされる。前述の対象の腫瘍の例はＰ８１５として知られているものである。参考文献として本出願にその開示内容を合体させる、デ・プレーン(DePlaen)他,Proc.Natl. Acad.Sci.USA 85:2274-2278(1988);スジコーラ（Szikora）他,EMBO J 9:1041-10 50(1990)およびシビル（Sibille）他,J.Exp.Med.172:35-45(1990)を参照。Ｐ８１５腫瘍は、メチルコラントレンでＤＢＡ／２マウスにおいて誘発され、イン・ヴィトロの腫瘍および細胞ラインの両方として培養された肥満細胞腫である。このＰ８１５ラインから突然変異誘発によって、Ｐ９１Ａ(デ・プレーン（DePlaen ）,前出)、３５Ｂ（スジコーラ（Szikora）,前出）およびＰ１９８（シビル（Si bille），前出）と称される変異体を含む多くのｔｕｍ^-変異体が生じている。腫瘍拒絶抗原と比較して、−そしてこれが鍵となる差違である−、ｔｕｍ^-抗原は腫瘍細胞が突然変異誘発された後にのみ存在する。腫瘍拒絶抗原は突然変異誘発を受けないで、所与の腫瘍の細胞上に存在する。したがって、前記文献を参照すると“Ｐ１”と称されるラインなどの細胞ラインはｔｕｍ⁺であるということができ、誘発されてｔｕｍ^-変異体を生じさせることができる。ｔｕｍ^-表現型は親細胞ラインの表現型と異なるため、ｔｕｍ^-細胞ラインのＤＮＡにおいて、それらのｔｕｍ⁺親ラインと比べて差異があることが期待され、そしてこの差異を利用してｔｕｍ^-細胞において問題となる遺伝子の位置決定を行うことができる。その結果、Ｐ９１Ａ、３５ＢおよびＰ１９８などのｔｕｍ^-変異体の遺伝子が、当該遺伝子のコード領域における点突然変異によって、それらの正常な対立遺伝子と異なっているということが判った。スジコーラ（Szikora）およびシビル(Si bille)、前出、そしてラークウィン（Lurquin）他，Cell 58:293.303（1989）を参照。これは本発明のＴＲＡに関するケースではないということが判明した。これらの論文はまた、ｔｕｍ^-抗原に由来するペプチドはＣＴＬによる認識のためにＬ^d分子によって提示されることをも示すものであった。Ｐ９１ＡはＬ^dによって提示され、Ｐ３５はＤ^dによって、そしてＰ１９８はＫ^dによって提示される。参考文献としてその両方の内容を本出願に合体させる、先行する特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９２／０４３５４および米国特許第５，３４２，７７４号は、とりわけ、プロｓｅシングされて腫瘍拒絶抗原、即ち“ＴＲＡ”となる、種々のＴＲＡＰをコードする遺伝子および他の核酸分子に関する発明を記載している。前記ＰＣＴ対象出願の一部である配列番号１−２６は、種々のＴＲＡＰをコードする遺伝子の配列、および以後、ＭＺ２−Ｅと称されるＭＡＧＥ−１ＴＲＡＰ由来のＴＲＡ（配列番号２６）を提供している。これら遺伝子は単離精製された腫瘍拒絶抗原前駆体およびＴＲＡ自体についてのソースとして有用である。これらはいずれも、抗原が“マーカー”となるガンの治療のための薬剤、および、以下に記載するように、腫瘍学への種々の診断および監視（サーベイランス）アプローチとして利用できる可能性がある。例えば、ｔｕｍ^-細胞は、異なるｔｕｍ^-抗原およびｔｕｍ⁺細胞を提示する細胞を溶解するＣＴＬを産生するのに利用できることが知られている。例えば、参考文献としてその開示内容を本出願に合体させる、マリャンスキー(Maryanski)他,Eur.J. Immunol 12:401(1982);およびファン・デン・エインデ（Van den Eynde）他，Mo dern Trends in Leukemia IX（1990年６月）を参照。腫瘍拒絶抗原前駆体はその遺伝子をトランスフェクトした細胞において発現され、そして問題の腫瘍に対する免疫応答を生じさせるのに利用できる。ヒト新生物（腫瘍）に相当するケースにおいて、自己混合リンパ球−腫瘍細胞培養（以後“ＭＬＴＣ”と称する）は、しばしば自己腫瘍細胞を溶解するがナチュラルキラー標的（ターゲット）、自己ＥＢＶ−トランスフォームＢ細胞、そして自己線維芽細胞は溶解しない反応リンパ球を産生する、ということが観察されてきた(アニチーニ（Anichini）他,Immunol.Today 8:385-389(1987)を参照)。この応答は、特にメラノーマに関してよく研究されており、ＭＬＴＣが末梢血液細胞または腫瘍浸潤性(infiltrating)リンパ球のいずれかを用いて行われてきた。この分野における文献の例には、クヌート（Knuth）他，Proc,Natl.Acad.Sci.US A 86:2804-2802(1984);ムカージ（Mukherji）他,J.Exp.Med.158:240(1983);ヘリン（Herin）他,Int.J.Canc.39:390-396(1987);トパリアン（Topalian）他,J.Chn .Oncol 6:839-853(1988)が含まれる。安定な細胞溶解性T細胞クローンはＭＬＴＣ反応細胞に由来するものであり、それらのクローンは腫瘍細胞に対して特異的である。ムカージ（Mukherii）他、前出、ヘリン（Herin）他、前出、クヌート（Knuth）他、前出を参照。それら自己ＣＴＬによって腫瘍細胞上で認識される抗原は培養のアーティファクト（人為的結果）を反映しているとは思えない。というのは、それらはィン・ヴィヴォで腫瘍細胞上にみられるからである。トパリアン（Topahan）他、前出;デジョヴァンニ（Degiovanni）他,Eur.J.Immunol.20:1865-1868(1990) 。これらの知見は、特異的なマウス腫瘍拒絶抗原前駆体に対する遺伝子を単離するためのここに用いられた技術と連関して、ヒト腫瘍上に提示されるＴＲＡの腫瘍拒絶抗原前駆体をコードする核酸配列の単離を導くものである。現在、それに限定されるものではないが、特定の腫瘍が非常に特徴的なものを含む腫瘍拒絶抗原前駆体をコードする核酸配列を単離することが可能であり、以下にその効果が記載される。別の研究では、主要組織適合遺伝子複合体、即ち“ＭＨＣ”として知られるクラスの分子による、ＴＲＡの提示に注目している。これらの分子のヒトの形態は “ヒト白血球抗原”即ち“ＨＬＡ”である。この研究の結果、この分野に関するいくらかの予期できなかった発見がなされた。具体的には、参考文献としてその開示内容を本出願に合体させる米国特許第５，４０５，９４０号および５，４６２，８７１号には、ＨＬＡ-Ａ１分子によって提示されるノナペプチドが教示されている。この参考文献は特定のＨＬＡ分子に対する特定のペプチドの特異性が判明すれば、特定のペプチドが１つのＨＬＡ分子に結合するであろうと推測される、ということを教示している。これらのペプチドはまた、トラヴァーサリ（Tr aversari）他,J.Exp.Med.176:1453-1457(1992)に示されている。これは重要なことである。なぜなら、異なる個体は異なるＨＬＡ表現型を有するからである。そのため、特定のペプチドまたは特定のモチーフ、そしてそれらのメンバーであるペプチドが、ある特定のＨＬＡ分子に対するパートナーであると同定されたことが、診断上および治療上の効果を有しているとしても、その効果はその特定のＨＬＡ表現型を有する個体に対してしか適切ではないのである。細胞異常は一つの特定のＨＬＡ表現型に限られるものではないため、また、標的化療法(targeted therapy)には、問題の異常細胞の表現型に関する相当な知識が必要とされるため、この分野に於いて更なる研究を行う必要がある。１９９３年１月２２日出願で参考文献として本出願にその内容を合体させる米国特許出願第００８，４４６号には、ＭＡＧＥ−１発現産物がプロセシングされて第２のＴＲＡになるという事実が開示されている。この第２のＴＲＡはＨＬＡ − Ｃｗ^★１６０１分子によって提示される。この開示は１つの所与のＴＲＡＰから複数のＴＲＡが生じることができるということを示している。参考文献として本出願にその内容を合体させる米国特許第５，４８７，９７４号には、チロシナーゼが腫瘍拒絶抗原前駆体であるとして記載されている。これはKwonの米国特許第４，８９８，８１４により公知の分子である。この参考文献はいくらかの正常細胞（例えば、メラノサイト）によって作られる分子が腫瘍細胞中でプロセシングされてＨＬＡ−Ａ２分子によって提示される腫瘍拒絶抗原を生じるということを開示している。これによって提示されるペプチドが、同じく参考文献として本出願にその内容が合体される、１９９３年４月２８日出願の米国特許出願第５４，７１４号に記載されている。ＨＬＡ分子によって提示される別のチロシナーゼ由来のペプチドが、参考文献として本出願にその内容が合体される、１９９４年２月２８日および１９９４年４月２６日出願の、第２０３，０５４号および第２３３，３０５号に示されている。ＴＲＡである他のペプチドが更に別の特許出願に記載されている。参考文献として本出願にその内容が合体される、１９９４年２月１４日出願の米国特許出願第１９５，１８６号には、ＭＡＧＥ−１由来であってＨＬＡ−Ｃｗ^★１６０１と複合体を形成する３つのペプチドが示されている。１９９４年２月１５日出願の第１９６，６３０号には関連のない腫瘍拒絶抗原である、いわゆる、“ＢＡＧＥ ”遺伝子、及びそれに由来するペプチドが開示されている。これはプロセシングされるとＨＬＡ−Ｃｗ^★１６０１に提示される。Ｍｅｌａｎ−Ａと称される腫瘍拒絶抗原前駆体に対するさらなるコード配列が、参考文献として本出願にその内容が合体される、１９９３年３月１８日出願の第３２，９７８号において示されている。この遺伝子に対するより広範囲の配列が、参考文献として本出願にその内容が合体される、１９９４年７月８日出願の第２７２，３５１号に示されている。参考文献として本出願にその内容が合体される、１９９３年７月２２日出願の第９６，０３９号には、腫瘍拒絶抗原前駆体ＧＡＧＥの配列が示されている。ＭＨＣ分子によって提示された時に細胞溶解性Ｔ細胞による溶解を引き起こす一連のペプチドが第２１７，１８６号、第０８／２１７，１８８号、および第２１７，１８７号に示されている。これらはすべて１９９４年３月２４日出願で、参考文献として本出願にその内容が合体される。これら出願のうち、第１のものはＨＬＡ −Ａ２によって提示されるＭＡＧＥ−３由来のペプチドを開示している。５つのペプチドが問題となっている。第２の出願は、ＨＬＡ−Ａ２．１分子と複合体を形成すると考えられている、ＭＡＧＥ−２由来の１１の配列を提供している。これらの出願のうち最後のものは、ＨＬＡ−Ａ２と複合体を形成する２つの別のＭＡＧＥ−３由来のペプチドを開示している。１９９４年４月１日出願で、参考文献として本出願にその内容が合体される第１９０，４１１号は、それらを投与した宿主動物中で抗体の産生を引き起こすという点で、免疫原性である、ＭＡＧＥ −１由来の３つのペプチドを示している。１９９４年６月３日出願で、参考文献として本出願にその内容が合体される第２５３，５０３号は、さらなる腫瘍拒絶抗原前駆体遺伝子とそれに由来し、ＨＬＡ−Ｂ４４分子によって提示されるペプチドとを教示している。さらに、参考文献として本出願にその内容が合体される、クーリ（Couhe），イケダ（Ikeda）およびブーン‐ファラー（Boon-Falleur）の出願第３１６，２３１号には、ＤＡＧＥとして知られる腫瘍拒絶抗原前駆体をコードする配列が示されている。ＤＡＧＥは腫瘍細胞上にほとんど普遍的にみられ、正常細胞の発現に関しては精巣細胞にのみみられる。このことによってそれは特にガンの診断およびここに開示される適用において有用である。以上にリストしたものは、ＴＲＡＰおよびＴＲＡの文献を網羅するものとは思われないが、その多様性とそれらの物質がＴ細胞の増殖を引き起こすだけでなく、抗体の産生も刺激するという事実を示すために提供されるものである。抗体産生細胞がハイブリドーマを生成するためのソースとして利用可能であり、そしてハイブリドーマがモノクローナル抗体を産生するということはよく知られている。従って、ここで“抗体”という用語を使用する場合、それはポリクローナル抗体とモノクローナル抗体の両方を包含する。すべて参考文献として本出願にその内容が合体される、米国特許出願第１４２，３６８号、第１９０，４１１号、そして第３１５，９６１号は、ワクチン、免疫原性組成物(immunogenic composition)などを生成するために、ＴＲＡＰまたはＴＲＡと、アジュバントとしての様々な物質とを組み合わせることの有用性を論じている。アジュバントとは、広義では、免疫応答を促進する物質である。しばしば、アジュバントとして、フロイント完全アジュバント、または百日咳死菌生物体が選択され、ミョウバン(alum)沈降抗原(precipitated antigen)と組み合わせて用いられる。アジュバントについての一般的な議論は、参考文献として本出願にその内容が合体される、ゴディング（Goding）,Monoclonal Antibodies:Principles ＆ Practice（第２版、１９８６年）６１−６３頁に提供されている。ゴディング（Goding）は、しかし、問題となる抗原が低分子量のものであるか、または、免疫原性が不十分である場合、免疫原性担体に結合させることが推奨される、と指摘している。ゴディング（Goding）によると、そのような分子は一般的に分子量約１０００以下である。ゴディング(Goding)、２８３頁によって示唆されている担体には、キーホールリンペットヘモシアニン、ウシ血清アルブミン、卵白アルブミン（オボアルブミン）そしてトリ(fowl)免疫グロブリンがある。しかし、そのような担体について問題となるのは、それらがしばしばそれ自体でも免疫原性となるということである。従って、免疫応答は特異的ではないものとなり、その一部、大部分、または全部が免疫原そのものよりむしろ担体分子に対して向けられる可能性がある。アジュバントに関する当該技術における開発の例は、参考文献として本出願にその開示内容が合体される、ケンシル（Kensil）他の米国特許第５，０５７，５４０号である。ケンシル（Kensil）他は、免疫原性組成物においてアジュバントとして有用な種々のサポニン抽出物の調製法を開示している。天然物であるので、この抽出物は完全には規定されていない。ケンシル（Kensil）は、ＱＡ−７、ＱＡ−１９、およびＱＡ−２１（ＱＳ−２１とも称される）を含む種々の抽出物をどのように調製するのかについて完全に実施可能な開示を提供している。ウシ血清アルブミン（“ＢＳＡ”）を種々の抽出物と組み合わせる実験(例８および９)、そしてネコ白血病ウイルス組み換え糖タンパク質“ｇｐ７ＯＲ△がテストされ、続いて水酸化アルミニウム(ミョウバン)に吸収させる実験が示されている。しかしテストされたこれら２つの免疫原は、それら独自で免疫原性であると予想される(ｇｐ７ＯＲ△は７０ｋｄの分子量を有し、血清アルブミンはほぼ同じ分子量を有する)。それ自体では不十分であるか、または非−免疫原性であると考えられ、従って、応答を誘発するにはミョウバン(alum)吸収の使用か、もしくはハプテンの担体の使用が必要であろうと予想されるような分子については、全く実験が行われなかった。参考文献として本出願にその内容が合体される、防衛公開７６９７２７５に対応する、ＰＣＴ出願ＷＯ９２１９７５８において、“ＭＴＰ−ＭＦ５９”と称されるアジュバントが開示されている。このアジュバントは熱帯熱マラリア原虫タンパク質、“Ｐｆｓ−２５−Ｂ”と組み合わせて用いられている。この組み合わせは伝達遮断ワクチン(transmission blocking vaccine)として記載されている。熱帯熱マラリア原虫タンパク質はそれ自体で免疫原性となるのに十分に大きいものである。従って、改良したアジュバントが、非−免疫原性と推定されるタンパク質およびペプチドと組み合わせて、免疫学的に有効な組成物を生成するのに利用可能である、ということを示す当該技術は無い。このことは特に、先に概要を述べたようなＴＲＡＰおよびＴＲＡ分子にあてはまる。顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（以下、“ＧＭ−ＣＳＦ”と称する）は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥで約１８−３２ｋＤＡ、またはゲル濾過によると３０ｋＤＡの分子量を有する、公知のサイトカインである。それは１２７アミノ酸を含む。この分子についての他の特性は、例えば、参考文献として本出願にその開示内容が合体される、アッガーワル（Aggarwal）他,Human Cytokines:Handbook Fo r Basic And Chnical Research(Blackwell Scientific Pubhcations,1992)、特に第１４章における、クロシャー(Crosier)他,“Granulocyte-Macrophage Colon y Stimulating Factor”に要約されている。ＧＭ−ＣＳＦに関する特許文献は膨大にある。この文献の例は、すべて参考文献として本出願にその内容が合体される、米国特許第５，４３７，９９４号、５，２１１，９７４号、５，１９９，９４２号、５，１９８，４１７号、５，１７８，８５５号そして５，１６２，１１１号である。これらの特許は、レシピエントの顆粒球および／またはマクロファージの集団の増大が望ましい、もしくは必要であるような、特定の疾病および症状の治療に関する領域におけるＧＭ−ＣＳＦの種々の利用法を開示している。これらの参考文献はどれも望ましくないか、または必要ではない。これらの参考文献には、前述の例によって提示した意味において、ＧＭ-ＣＳＦのアジュバントとしての利用を教示するものはない。今回、ＧＭ−ＣＳＦが特定の免疫原に対する免疫応答を改善、増強、または誘発するためのアジュバントとして利用可能であるような性質を有することが判明した。これが、本発明の主題であり、以下により詳細に記載される。図面の簡単な説明図１Ａ、１Ｂおよび１Ｃは、それぞれ患者(patient)ＮＷ２８，ＮＷ２９およびＮＷ３０におけるペプチド特異的ＣＴＬの誘導を示す。好適実施例の詳細説明例１この例は後に続く更なる実験のための背景情報として意図されたものである。これらの実験において、すべての患者はステージＩＶまたは高リスクステージＩＩＩのいずれかの悪性メラノーマを患っている。ステージＩＶメラノーマの場合には、患者は１年の平均余命(median survival)を有し、長期生存の可能性は１５％のみである。バルチ（Balch）他，Cutaneous Melanoma（ジェイ・ビー・リッピンコット（J.B.Lippincott），Philadelphia，1992）を参照。高リスクステージＩＩＩメラノーマの場合には、患者は１−２年の平均余命を有し、長期生存の可能性は９％である。バルチ(Balch)、前出。このような患者の治療法に対する新しいアプローチが必要であることは明らかであろう。患者のプールはいかなる手術からも完全に回復した患者に限定される。さらに、患者は、治療前の４週間はいかなる化学療法も免疫療法も受けていてはならない。そして治療前の６週間はニトロソ尿素薬を受けていてはならない。患者らはまた、少なくとも３ヶ月は生存が期待される者でなければならず、カルノフスキー(Karnofsky)パフォーマンスステイタスが６０％またはそれ以上であらなければならず、実験室結果は以下の通りである。顆粒球＞２，５００／ｕｌリンパ球＞７００／ｕｌ血小板＞１００，０００／ｕｌ血清クレアチニン＞２ｍｇ／ｄｌ血清ビリルビン＞２ｍｇ／ｄｌ患者はＨＬＡ−Ａ２発現についての検査の結果が陽性でなければならず、その両方の分子の発現がメラノーマに関連しているＭｅｌａｎＡ遺伝子およびｇｐ１００についての検査の結果が陽性でなければならない。これらの分子の発現の検査はＰＣＲまたは抗体アッセイによって、ここには記載しない周知の方法を使用して行った。患者は１８歳以上でなければならず、書面による同意を行う権利のある者でなければならない。臨床診察で重大な心臓疾患（ＮＹＨＡクラスＩＩＩまたはＩＶ）、抗生物質を必要とする活動性(active)感染症または出血障害などのいかなる他の重篤の疾病を示すような患者、抗ヒスタミン薬、非−ステロイド性抗炎症薬、またはコルチコステロイドを投与されているような患者は、除外された。免疫不全を患う患者、以前に脾臓摘出、または脾臓に対する放射線療法を受けた患者も除外された。更に、妊娠、授乳、または出産時期にある患者は除外された(適切な受胎調節（避妊）法が使用されていない場合)。最後に、中枢神経系の転移疾患が存在する場合、その患者は除外された。治療プロトコールの一部として、すべての患者は通院患者として治療され、そして完全な、視覚検査を含む前処置検診を受けた。白斑について、完全な神経学上および皮膚科学の状態検査が要求された。このプロトコールに対して適格であるとされたＮＷ２８、ＮＷ２９、ＮＷ３０、ＮＷ３３、そしてＮＷ３７と称される５人の患者が以下のペプチドの注射を受けた。 Tyr Met Asp Gly Thr Met Ser Gln Val（配列番号１） Glu Ala Ala Gly Ile Gly Ile Leu Thr Val（配列番号２） Tyr Leu Glu Pro Gly Pro Val Thr Ala（配列番号３） Leu Leu Asp Gly Thr Ala Thr Leu Arg Leu（配列番号４） Gly Ile Leu Gly Phe Val Phe Thr Leu（配列番号５） Met Leu Leu Ala Val Leu Tyr Cys Leu（配列番号６）５人の患者のうち３人（即ち、ＮＷ３０，３３および３７）は、前前腕部および大腿にこれら６つのペプチドそれぞれ１００ｕｇの注射を受けた(注射部位はこのプロトコールにおいてそれぞれの注射についてずらした)。ペプチドは、配列番号１については０．３ｍｌのリン酸緩衝食塩水(ｐＨ７．４)、または水溶性でない配列番号２−５についてはジメチルスルホキシドを含有する０．３ｍｌのＰＢＳ中に混合した(combined)１００ｕｇのペプチドとして投与した。ＤＭＳＯに含有されたペプチド溶液は、配列番号２および５については５％の濃度で、配列番号３および４については１０％の濃度で添加した。完成したセットのペプチド注射は、以下の表１のスケジュールに従って投与された。注射は互いに１０ｃｍ以上の距離を隔てて、別々の部位に行った。ペプチドは注射中に混合しなかった。残りの２人の患者（即ち、ＮＷ２８およびＮＷ２９）は、以下の表２に概要を示すように異なるスケジュールでペプチド投与された。具体的にはこれらの患者は１週間にわたって、それぞれのペプチド１００ｕｇを毎週投与され、その後、注射を受けない４週間の中断をおいた。このパターンを次に更に３回繰り返し、患者ＮＷ２９については８週間のブロック(8week blocks)を、全部で４回行った。患者ＮＷ２８については、６回の４週間のブロック(six 4 weekblocks)を別にすれば、このプロトコールに従った。例２先に示したように、例１は本発明の核心である諸実験の先行であると考えられる。例１のプロトコールの完備に続いて、患者らは皮下に、１日当たり７５でのＧＭ−ＣＳＦによる全身的な前処理を受けた。注射スケジュールは以下の表１、表２に示す。ＧＭ-ＣＳＦの最初の投与の３日後、患者らは配列番号１−５をそれぞれ１００ｕｇ、および配列番号６のペプチドを１００ｕｇ皮内注射された。注射は体の異なる部位においておこなった。遅延型過敏症（ＤＴＨ）反応を４８時間後に測定した。第８日に第２ラウンドのペプチド免疫化が行われ、そしてその４８時間後にＤＴＨ反応を測定した。以下の表３は、ＤＴＨアッセイの結果を示す。この表において“−”は反応がないことを示し、(＋)は直径が＞４ｍｍの発赤および硬結を示し、“＋”は直径が＞８ｍｍの発赤を示す。“＋＋”は中心壊死を示す。ＤＴＨ反応は、ペプチド注射部位における少なくとも４ｍｍの皮膚の発赤および触知できる硬結として定義される。ＤＴＨ反応は注射されたペプチドの、皮膚に位置する抗原提示細胞上での、ＭＨＣクラスＩ分子（この場合ＨＬＡ−Ａ２分子）に対する結合の結果であると考えられる。それによってＣＤ４⁺およびＣＤ８⁺Ｔリンパ球が関与するペプチド特異的細胞反応が起こる。ＤＴＨ反応は、ＧＭ−ＣＳＦ投与前の患者のプールにおいてもテストした。５人の患者すべてにおいて、配列番号５に対して、ＧＭ−ＣＳＦ前処理後の方がＧＭ−ＣＳＦ前処理無しよりもより激しい反応を示した。これは配列番号６にもあてはまった。配列番号２については、患者のうち１人がＧＭ−ＣＳＦ前処理の後の方が前処理の前よりも強いＤＴＨ反応を示した。 “新規な”ＤＴＨ反応も観察された。いくつかのペプチドはＧＭ−ＣＳＦの前処理無しでは、全くまたは観察可能なＤＴＨ反応は引き起こさなかったが、ＧＭ −ＣＳＦ前処理後にはそのような反応を示した。配列番号２について、５人の患者のうち３人がＧＭ−ＣＳＦ前処理後に反応を示した。配列番号３については、５人の患者のうち２人がＧＭ−ＣＳＦの前処理後にのみ応答を示し、配列番号１を用いた場合については、５人の患者のうち２人が前処理後に応答を示した。例３ＤＴＨ応答が再活性化できるかどうかを判定することも興味深い問題であった。これをテストするために、先に示したプロトコールに従って、最初のＤＴＨ実験を行った１週間後に、患者の皮内にペプチド注射した。患者のうち３人は配列番号２のペプチドに対して再活性化(reactivation)を示し、５人のうち１人は配列番号５に対して再活性化を示した。この実験において、およびすべての他の実験において、ＨＬＡ−Ａ１分子に結合するコントロールペプチドを使用した。患者はＨＬＡ−Ａ１陰性であった。ＤＴＨ反応はいずれの場合にも観察されなかった。例４次に、本研究の対象の細胞溶解性Ｔ細胞応答の性質を研究するために、更なる実験を行った。表３に示すペプチドを使用した。前述の患者のうち３人、即ち、ＮＷ２８、ＮＷ２９およびＮＷ３０についてテストした。全員が測定可能な転移性の疾病を有していた。これらの患者に１００ｕｇの各ペプチド（最終容積２００ｕｌ）を、疾病のない部位に少なくとも互いに１０ｃｍ間隔を開けて皮内に注射した。ペプチドの注射に好ましい部位は、臍周囲の領域、大腿の前部、および前腕の内側部であった。注射を、週に１度、４回繰り返した。第４回目の免疫化サイクルの間に、ＧＭ−ＣＳＦを注射し（皮下に７５ｕｇ）、注射は毎日行った。ＧＭ−ＣＳＦの注射はペプチド免疫化の３日前から始め、注射後２日間続けた。ＣＴＬ応答を測定するために、Ｔ２細胞のサンプル（１サンプル当たり１０⁶ 個の細胞）を、まず、空の(empty)ＭＨＣ分子を安定化することが知られている、２ｕｇのｍＡｂ２．１とともにインキュベートした。ボドマー（Bodmer）他,N ature342:443-446(1989)を参照。次にＴ２細胞を１００μＣｉのＮａ（⁵¹Ｃｒ）Ｏ₄で標識し、１回洗浄し、１ｕｇ／ｍｌのペプチドを追加した無血清培地中に再懸濁した。細胞を室温で１時間インキュベートした。これら細胞を次に周知の技術に従ってペプチドでパルスした(pulsed)。次に反応細胞を添加した。これらは患者から採取した末梢血リンパ球（ＰＢＬ）であり、取り出した後使用時まで凍結し、そして解凍し、１０％ヒト血清、Ｌ −アスパラギン（５０ｍｇ／ｌ）、Ｌ−アルギニン（２４２ｍｇ／）そしてＬ− グルタミン（３００Ｍｇ／ｌ）を追加したＲＰＭＩ１６４０中で洗浄した。これらＰＢＬを４８穴プレートに０．５ｍｌの培地中にて播種した(１ｘ１０⁶細胞／ウェル)。残りのＰＢＬを３０００ラドで照射し、β２ミクログロブリン(２．５ｕｇ／ｍｌ)、および１０ｕｇ／ｍｌのペプチドを追加した無血清ＲＰＭＩ１ｍｌ中に再懸濁し、そして室温で１時間インキュベートした。刺激細胞（即ち、ペプチドをパルスしたＴ２細胞）を再懸濁し、そしてＩＬ−２（２５Ｕ／ｍｌ、最終容積＝１ｍｌ／ウェル）とともにＭＬＴＣに１ｘ１０⁷細胞／ウェルとなるように添加した。７日後、反応細胞を収集し、洗浄し、そして２４穴プレートに移した。ペプチドを１ｕｇ／ｍｌで添加した。１４日目、反応細胞を細胞傷害性アッセイのために収集した。このアッセイをここで説明する。ＰＢＬが反応細胞として作用し、そしてペプチドをパルスしたＴ２細胞（標的細胞）にＰＢＬを、エフェクター／標的比９０、３０、１０、３および１で添加した。ＮＫ活性をブロックするために、標識していないＫ５６２細胞を反応細胞に８０：１の比で添加した。コントロールとしてペプチドをパルスしていないＴ２細胞も使用した。 ⁵¹Ｃｒ標識された標的（１０００細胞／ウェル）および５０ｕｌの反応ＣＴＬ懸濁液の混合物を、次に円錐状９６穴マイクロタイタープレート中で、５％ＣＯ₂ を含む水飽和雰囲気にて３７℃で４時間インキュベートした。プレートを２０００ｘｇで５分間遠心分離し、１００ｕｌの上清を取り出し、遊離の(free)放射能をｙ−カウンターで測定した。特異的⁵¹Ｃｒ放出の百分率を下記式に従って決定した。最大⁵¹Ｃｒ放出は標識された標的細胞に１００ｕｌのＮｏｎｉｄｅｄＰ４０１％（Ｓｉｇｍａ）を添加することによって得られた。自発的⁵¹Ｃｒ放出は、細胞に取り込まれた全カウントの５％から１０％の範囲であった。ペプチドで標識されていないＴ２細胞からの⁵¹Ｃｒ放出量は３％から１０％の範囲であった。ペプチド特異的溶解活性がＥ：Ｔ比９０：１において２０％を越えた場合、ＣＴＬ応答は陽性であるとされた。結果は表３に示す。３人の患者のうち２人（ＮＷ２８およびＮＷ２９）において、合成のメラノーマ関連ペプチド単独の皮内接種でＣＴＬを誘導した。ＧＭ−ＣＳＦをアジュバントとして投与した第４サイクルのペプチド免疫化の間において、ＣＴＬ反応性の増強がみられた。表３に示すように、３人の患者すべてが１つのペプチドに対して増強したＣＴＬ活性を示し、ある患者は別のペプチドに対して増大した応答を示し、そして別の患者は更に別のペプチドに対して増強した活性を示した。これらの結果は図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃにも示されている。表１患者NW30.33および37についてのスケジュール表１ − 続き表２患者NW28およびNW29についてのスケジュール表２ − 続き表３メラノーマ関連ペプチドの皮内接種後のDTH反応例５例１−４において述べたすべての患者は研究開始時に、進行中の転移性メラノーマを有していた。患者ＮＷ２８は左鎖骨上の部分に、皮膚に浸潤している切除不可能なリンパ節転移を有していた。ペプチドのみでの免疫化を用いた場合、臨床検査と超音波検査により疾病の安定化が記録された。ペプチドにＧＭ−ＣＳＦを加えての免疫化の８週間後には、皮膚の腫瘍浸潤は消失し、測定可能な腫瘤（腫瘍塊）の部分的な退縮が記録された。患者ＮＷ２９は多くの大動脈傍(paraaor tal)および腸骨傍(parailiacal)のリンパ節転移と、１つの肝転移を有していた。ペプチドのみでのワクチン注射を用いた場合、２つの大動脈傍病巣のわずかな退縮がＣＴスキャンによって記録されたが、その他の病巣は安定なままであった。ペプチドにＧＭ−ＣＳＦを加えての免疫化の８週間後には、肝転移は完全に退縮（消失）した。２つの大動脈傍リンパ節と１つの腸骨傍リンパ節は、ＣＴスキャンにより評価したところ、部分的な退縮を示した。新しい転移病巣は検出されなかった。患者ＮＷ３０はその左大腿において増大している局所再発を有していたが、それは以前に１月間隔で３回切除されていた。最初の免疫化の時点でこの腫瘍は直径１．２ｃｍであった。ペプチドのみでの免疫化の開始から８週間後には、さらなる腫瘍の成長は検出されなかった。ペプチドにＧＭ−ＣＳＦを加えてのワクチン注射の８週間後には、腫瘤は完全に退縮した。新しい転移病巣は検出されなかった。前述の諸例は、ＧＭ−ＣＳＦが、それが、理論的には細胞表面上のＭＨＣ分子に結合するはずである分子に対するＴ細胞応答を増強または誘発し、それによってそれら分子からなる複合体に対する細胞溶解性Ｔ細胞の増殖を引き起こすという点において、アジュバントとして機能することを示す。本出願において提供されるＤＴＨ反応研究は明らかにそのことを示している。このイン・ヴィヴォでの有効性は、同じタイプの反応がイン・ヴィトロで起こるであろうということの証拠であると考えられる。なぜなら、応答の基礎となる原理は同じであるからである。同様に、記載およびテストされたペプチドの既知の免疫応答はＴ細胞応答である。しかしながら、適切な分子を用いた場合、同等のＢ細胞応答も誘発または増強されうるということを疑う根拠はない。本発明の免疫原は、それである必要はないが、好ましくは、ＴＲＡＰ、ＴＲＡ、およびこれらを組み合わせたものであり、そしてそれらがハプテン、担体、ミョウバン沈降物(precipitated alum)または、通常免疫原性が不十分であるか、不十分であると予想される物質に組み合わせられるいかなる物質をも含まないことを意味する。特に好適な態様において組成物(composition)は、本質的に免疫原と前記アジュバントとからなる。使用されるＴＲＡＰ、ＴＲＡ等の免疫原の量は、免疫化の目的およびそれを投与される対象(subject)によって異なるであろう。例えば、ＴＲＡを提示するガン細胞の存在を診断するといった目的に使用可能なマウス抗体を産生する場合であれば、タンパク質またはペプチドの量は、前述の例に記戟したようなイン・ヴィヴォ治療方法において使用される量よりも少なくてよいであろう。一般的に、好適な投与量は１回の投与量当たり約１ｕｇから約７５０ｕｇのタンパク質またはペプチドの範囲とすることができる。好適な態様では、約１０ｕｇから約５００ｕｇの範囲である。最も好ましくは、１回の投与量当たり概して約３０ｕｇから約３００ｕｇを使用するのがよい。もちろん、本発明の治療上の局面の関係において、研究者は投与量を変更するであろう。例えば、生後６ヶ月の乳児は、成人とは異なる投薬量を必要とするであろう。投与方法も様々なものとすることができ、好適な形態は経口、皮下、筋肉内、静脈内、および腹腔内の投与である。例えば、組成物におけるＴＲＡＰまたはＴＲＡタンパク質またはペプチドなどの、免疫原の選択は当業者によって決定可能なパラメーターに依存するであろう。例えば、異なるＴＲＡは、異なるＭＨＣ分子によって提示されるということは当業者に周知である。従って、ある対象（患者:subject）が、周知の技術を用いて、腫瘍細胞の表面上にＨＬＡ−Ａ２分子を提示するとタイプされたとすると、例えば、ＨＬＡ-Ｃｗ^★１６０１、ＨＬＡ−Ａ１、ＨＬＡ−Ｂ２４、ＨＬＡ-Ｂ８、ＨＬＡ−Ｂ４４、ＨＬＡ−Ｃｗ６等によって提示されるＴＲＡではなく、ＨＬＡ−Ａ２分子によって提示されるＴＲＡが使用されるであろう。これらＭＨＣ分子すべてが腫瘍拒絶抗原を提示するということが知られている。同様に、ポリメラーゼ連鎖反応(“ＰＣＲ”)、溶解研究、および他の当業者に周知のアッセイ方法などの技術を使用して、どの腫瘍拒絶抗原前駆体の遺伝子または複数の遺伝子が対象となる患者によって発現されているかを判定することができる。これによってどのタンパク質またはペプチドを使用するべきかの決定を行うことができるであろう。また、例として、もし対象の腫瘍細胞がＭＡＧＥ−１ではなくＭＡＧＥ−３を発現しているとすれば、免疫化において使用されるペプチドはＭＡＧＥ−１ではなくＭＡＧＥ− ３由来のものとすべきである。従って、本発明の組成物は免疫原とＧＭ−ＣＳＦを含み、そこにおいてＧＭ− ＣＳＦはアジュバントとして有効な量存在する。前記２つの構成成分は組み合わされてもよく、または、例えばキットの一部分として別々の部分(separate port ions)として提供されてもよい。配列番号１、２、３、５および６の特定のペプチドが免疫原として好適であるが、ここに記載した種々のＴＲＡなどの、いずれの免疫原も本発明の範囲内に含まれる。対象において免疫応答を引き起こすための方法も本発明の一部である。この方法は、対象にＧＭ−ＣＳＦを投与し、つづいて免疫原性物質を投与することからなる。必要という訳ではないが、随意に、ＧＭ−ＣＳＦの投与に先立って対象に免疫原を投与してもよい。前記諸例はペプチドとＧＭ−ＣＳＦとのワクチン接種がＤＴＨ反応と免疫反応の両方を引き起こすことを示すが、アジュバントとしてのＧＭ−ＣＳＦの使用が明らかに本発明の一部であることは、当業者に理解されるであろう。ガン（例えばメラノーマ）のような種々の病的状態が、ＭＨＣ分子とそれらに特異的に結合するペプチドとの相互作用によっが形成される、ＣＴＬエピトープの提示によって特徴づけられるということは周知である。従って、本発明の１つの態様は対象に対する免疫応答を誘発または増強するのに十分な量のＧＭ−ＣＳＦを個体に投与することにより、免疫応答を誘発または増強することである。そのように処置される個体は、前に言及したような、細胞溶解性Ｔ細胞にとってエピトープまたは標的として作用することになる、細胞表面上におけるＭＨＣとペプチドとからなる複合体の提示といった、病的状態に関連する特徴を示す患者(subject)であろう。Ｂ細胞応答のような他のタイプの免疫応答は、当業者に周知であり、ここで詳細に述べる必要はないであろう。投与の間の時間間隔は様々なものとすることができるが、好ましくは約２日から約２週間であり、最も好ましくは２日から１週間（即ち７日）である。従って所与のプロトコールは、第１日目の免疫原の投与から始まって、続いて第３日目にＧＭ−ＣＳＦを投与し、そしてさらに第５日目に更なる免疫原の投与を行うものとすることができる。その後、免疫原およびＧＭ−ＣＳＦが投与されない期間をおいて、その中断の後繰り返して免疫化を行うようにして、このようなパターンの免疫化を、例えば２から１０回、最も好ましくは２から４回繰り返すのがよいであろう。また、このような一定期間の免疫化と中断とを所与のプロトコールにおいて繰り返すことができる。使用される免疫原とＧＭ−ＣＳＦの量は特定の使用によって、異なるものとすることができる。しかし、免疫原の一回の投与量は、好ましくは概して約１０ｕｇから約５０００ｕｇであり、さらに好ましくは約５０ｕｇから約２５００ｕｇであり、最も好ましくは約１００ｕｇから約１０００ｕｇである。ＧＭ−ＣＳＦについては、一回の投与量あたり、１０ｕｇから約１００ｕｇの投与量が好ましい。可能な投与方法は、皮内の、皮下の、および静脈内の投与、持効性製剤の形態の皮下挿入などを含む。当業者に周知のすべての投与形態が本発明に含まれる。ここに記載した好適な分子を“腫瘍”拒絶抗原、および“腫瘍”拒絶抗原前駆体と称したが、治療上、および診断上の関係におけるそれらの使用はガン自体を越える範囲に及ぶことを意図している。骨折整復の母斑（diaplastic nevis）のような、それ自体ガンではないが、それを患う個体の細胞が実際にトランスフォーメーションによって特徴づけられる病的状態は当業者に周知である。すべてのそのような状態が本発明によって意図される範囲に含まれる。本発明の他の態様は、当業者にとって明らかであり、ここで繰り返す必要はない。ここに使用した用語および表現は、限定ではなく記載の用語として使用されたものであり、従って、これらの用語および表現を使用するに当たって、図示および記載された特徴構成又はその一部のいかなる均等物も除外する意図は無く、本発明の枠内で様々な改変が可能であると理解される。 (1)一般情報： (i)出願人：ヤーガー，エルケ；クヌート，アレクサンダー (ii)発明の名称：免疫原性分子および、アジュバントとして顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子を含有する組成物 (iii)配列の数：６ (iv)連絡先: (A)宛名：フェルフェ・アンド・リンチ (B)通り名：サード・アベニュー805 (C)都市名：ニューヨーク・シティ (D)州名：ニューヨーク (E)国名：アメリカ合衆国 (F)郵便番号： 10022 (v) コンピュータ読み取り可能フォーム (A)媒体型式: 3.5インチフロッピーディスク，360kbメモリ (B)コンピュータ： IBM PS/2 (C)オペレーティング・システム： PC-DOS (D)ソフトウェア：ワードパーフェクト(Wordperfect) (vi)現在の出願データ： (A)出願番号： (B)出願日： (C)分類： 435 (vii)先の出願データ： (A)出願番号： 08/598,909 (B)出願日： 1996年２月９日 (C)分類： 435 (viii)弁理士／代理人情報： (A)氏名：ハンソン，ノーマン，ディ (B)登録番号： 30,946 (C)参照／書類番号： LUD5438-PCT (ix)通信情報： (A)電話： (212)688-9200 (B)ファックス： (212)838-3884

Claims

【特許請求の範囲】１．免疫原性組成物であって（ａ）免疫原、および（ｂ）前記組成物においてアジュバントとして作用するのに十分な量の顆粒球 −マクロファージコロニー刺激因子、とからなる免疫原性組成物。２．前記免疫原がタンパク質である、請求項１の免疫原性組成物。３．前記免疫原がペプチドである、請求項１の免疫原性組成物。４．前記タンパク質が腫瘍拒絶抗原前駆体である、請求項２の免疫原性組成物。５．前記ペプチドが腫瘍拒絶抗原である、請求項３の免疫原性組成物。６．前記腫瘍拒絶抗原が細胞表面上でＨＬＡ−Ａ２分子に結合する、請求項５の免疫原性組成物。７．前記腫瘍拒絶抗原が、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号５、および配列番号６からなるグループから選択される、請求項６の免疫原性組成物。８．前記組成物が（ａ）および（ｂ）の別々の部分からなる、請求項１の免疫原住組成物。９．免疫原性応答を発生させる方法であって、それを必要とする対象に、（ｉ）アジュバントとして有効な量のＧＭ−ＣＳＦ、それに続いて（ｉｉ）免疫原とを投与することからなる免疫原性応答を発生させる方法。１０．更に、前記ＧＭ−ＣＳＦの投与に先立って前記対象に追加量の前記免疫原を投与することを含む、請求項９の方法。１１．前記ＧＭ−ＣＳＦの投与後約２日から約２週間までに前記免疫原を投与することからなる、請求項９の方法。１２．前記ＧＭ−ＣＳＦの投与前約２日から約２週間までに追加量の前記免疫原を投与することからなる、請求項１０の方法。１３．前記免疫原を１回の投与量当たり約１０ｕｇから約１０００ｕｇの範囲の量投与する、請求項９の方法。１４．前記免疫原性応答が、細胞溶解性Ｔ細胞応答である、請求項９の方法。１５．前記タンパク質を１回の投与量当たり約１０ｕｇから約１００ｕｇの範囲の量投与することからなる、請求項１４の方法。１６．前記ＧＭ−ＣＳＦを１回の投与量当たり約１０ｕｇから約５０００ｕｇの範囲の量投与することからなる、請求項９の方法。１７．前記ＧＭ−ＣＳＦを１回の投与量当たり約１０ｕｇから約１００ｕｇの範囲の量投与することからなる、請求項１６の方法。