JP2000507441A - 植物病原生物 Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓに対する耐性の源としてのＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対して耐性があるトマト植物（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）を包含する。Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対して耐性のあるＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ植物を使用して、本発明のトマト植物を構築する。本発明で使用される好ましいＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍは、ＬＡ２５３３として示される。

Description

【発明の詳細な説明】植物病原生物 Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓに対する耐性の 源としてのＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ 発明の背景 １世紀以上の間、トマトおよびポテト植物における斑点病（ｌａｔｅ ｂｌｉ ｇｈｔ）は、植物育種者に懸念の原因になってきた。斑点病は、寒冷で湿潤な気 候を示す地域によくあり、湿度が高い雨季には壊滅的であり得る。斑点病は、世 界中の問題であるが、米国東部、メキシコおよび極東において特に問題となって いる。 斑点病は、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ（Ｐ．ｉｎｆｅｓ ｔａｎｓ）と呼ばれる真菌によって起こされる。Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉ ｎｆｅｓｔａｎｓは、植物残骸、ジャガイモ塊茎、及びナス科雑草（Ｓｏｌａｎ ａｃｅｏｕｓｗｅｅｄｓ）で生き延びることができる。この真菌の胞子は、一般 に風雨の強い期間の間、ばら撤かれる。一方、この真菌は、感染した植物の残骸 および果実に伝染する。トマト植物の葉、 茎および果実に付着した胞子は、植物組織にすぐに感染して、組織の崩壊そして 最終的な植物の死を引き起こし得る。 現在のところ、トマトのＰ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓについて記載された２つの生 理学的病原型（ｒａｃｅ）がある。第一は、耐性遺伝子を含まない市販の品種に 病原性のあるＰ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０である。第二は、Ｐｈ₁耐性遺伝 子を含む市販の品種に病原性のあるＰ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型１である。 １９５２年に、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓに対する耐性が、野生トマト近縁系統 Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍで報告された。 この耐性は、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０のトマト株に対する耐性を付与す る単一の優性遺伝子（Ｐｈ₁；公式的にはＴＲ₁として知られる）によって付与さ れることが分かった。しかし、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型１のトマト株は、 Ｐｈ₁によって付与される耐性を克服する。Ｇａｌｌｅｇｌｙ，Ｍ．Ｅ．、「ト マトにおける斑点病真菌類に対する耐性（Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｔｈｅ Ｌａｔｅ Ｂｌｉｇｈｔ Ｆｕｎｇｕｓ ｉｎ Ｔｏｍａｔｏ）」、キャンベ ル植物科学セミナー（Ｃｅｍｐｂｅｌｌ Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｓｅｍｉｎａｒ）、１１６頁（１９６０年）参照。さらに、多 遺伝子耐性は、トマト系Ｗｅｓｔ Ｖｉｒｇｉｎｉａ７００（Ｐ１２０４９９６ ）で同定された。この耐性は、完全ではなく、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０ および１に対する耐性のみが得られる。環境条件が、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病 原型１の発生に好ましい場合、これらの耐性植物は、重大な病害を被った。 栽培されたトマト、Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍは、米 国および世界中で最も重要な野菜の内の１つであり、毎年、米国だけで数百万ト ンが生産されている。上記作物の商業的重要性により、栽培品種を改善する一定 の努力がなされてきた。したがって、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型１に耐病性 を示す栽培トマト品種が必要とされる。 Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型１のトマト株に対する耐性の源として使用でき る新規Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ栽培品種 を開示することが本発明の目的である。Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および １のトマト株に耐性であり、且つ、野外において発病圧が高い場合でもＰ．ｉｎ ｆｅｓｔａｎｓ病原型１に対する耐性を示す Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ植物を提供することがこの発 明の別の目的である。発明の要旨 本発明は、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対して耐性 であるトマト植物（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）を生産 する方法を包含する。これらの植物は、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および １に対する耐性を付与する新規対立遺伝子を含むことが見出されたＬｙｃｏｐｅ ｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ植物を、Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉ ｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍと交雑させることによって製造される。交雑を行 った後、種子を収集し、植物に再生する。生じた植物を、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎ ｓ病原型０および１のトマト株に対する耐性について評価する。耐性を示す植物 を、同定し、選択する。これらの選択された耐性植物は、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎ ｓ病原型０および１のトマト株に耐性である商業的に許容しうる品種を得るため に、所望の表現型を示す他のＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ 系と戻し交雑させる。この方法は、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１の トマト株に耐性であるトマト植物（Ｌｙｃ ｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）になる種子を生産するのにも使用 できる。 Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対する新規耐性を示すことが見出 され、続いてＬ．ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍとの交雑に使用されたＬｙｃｏｐｅｒｓ ｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ選択物は、ＬＡ２５３３として示 され、それは、本発明者によってＨｏｐｅ８４とも呼ばれた。 本発明の植物は、プロトプラスト融合によっても生成できる。プロトプラスト 融合によって植物を生成するために、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１ のトマト株に耐性であるＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏ ｌｉｕｍのプロトプラストを、Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕ ｍのプロトプラストと一緒に得る。その後、２種のプロトプラストは、当業者に 知られる標準プロトプラスト融合方法を使用することによって融合される。得ら れた異質遺伝子細胞を植物に再生して、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および １のトマト株に対する耐性について評価する。耐性植物を同定し選択する。 本発明の方法にしたがって製造されたＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ植物は、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマ ト株に対して耐性であり、野外において発病圧が高い場合でもＰ．ｉｎｆｅｓｔ ａｎｓ病原型１に対する耐性を示す。 本発明は、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対して耐性 を付与する対立遺伝子を包含するトマト植物および上記トマト植物によって生成 される種子も包含する。発明の詳細な説明 本発明は、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓのトマト株に対して耐性であるトマト植物 （Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）の創出を包含する。Ｐ． ｉｎｆｅｓｔａｎｓのトマト株にさらされたときに、ある植物が、病徴を示さな いか、または感受性植物に比較して実質的に少ない病徴しか示さない場合、当該 植物は、耐病性であると言われる。本発明の植物はＰ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原 型０および１のトマト株に対して耐性であるので、新規である。 本発明の発明者は、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対 する耐性を付与する対立遺伝子を含有するＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐ ｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ 植物を発見した。これらのＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆ ｏｌｉｕｍ植物は、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対し て耐性であるトマト植物（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ） の創出に使用できる。例えば、ＬＡ２５３３として示されるＬｙｃｏｐｅｒｓｉ ｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍを用いて、本発明の植物を創出した 。ＬＡ２５３３として示されるＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌ ｉｆｏｌｉｕｍは、本発明者によってＨｏｐｅ８４とも呼称される。ＬＡ２５３ ３（Ｈｏｐｅ８４）の種子は、ブタペスト条約の規定によってメリーランド２０ ８５２、パークローン・ドライブ１２３０１のｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙ ｐｅ ＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託された。上記種子は、１９９ ５年１２月１４日に寄託され、ＡＴＣＣ受託番号９７３８２を受けた。さらに、 ＬＡ２５３３（Ｈｏｐｅ８４）は、請求により、カリフォルニア州、デイビスの カリフォルニア大学デイビスにあるリック・センターから入手可能でもある。 本発明者は、ＬＡ２５３３植物が、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１ のトマト株に耐性を示すことを発見した。こ の知見が得られるまでは、ＬＡ２５３３として示される植物のＰ．ｉｎｆｅｓｔ ａｎｓ病原型０および１に対する耐性は、知られていなかった。ＬＡ２５３３と して示されるＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ植 物は、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対する耐性を付与 する対立遺伝子を含有する。しかし、当業者は、当該対立遺伝子を含有し、Ｐ． ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に耐性である任意のＬｙｃｏｐ ｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍを本発明に使用することが できることを認識する。 本発明の植物は、伝統的な育種技術によって製造することができる。例えば、 ＬＡ２５３３として示されるＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉ ｆｏｌｉｕｍ植物の種子を使用できる。ＬＡ２５３３の種子を、温室または野外 で播種する。得られた植物を、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマ ト株にさらす。充分に発病圧をかけた後、最良の耐性を示す植物体を選択する。 Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対する耐性は、２つの方法で測定す ることがきる。Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓに対する耐性を測定する第一の方法は、 「温室スクリーン」と呼ばれるものを使用することを包含する。温室スクリーン では、トマト実生を、第５本葉（ｔｒｕｅｌｅａｆ）が出現し始めるまで育成す る。この時点で、植物に、１ミリリットルの溶液当たり１０，０００胞子嚢の濃 度で、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型１の胞子嚢懸濁液を散布する。接種後、当 該植物を、２４時間、１００％湿度のチャンバー内に置く。次に、それらを湿潤 チャンバーから温室ベンチに移して発病させる。およそ７日で耐性植物を同定し 、選択する。その後、当該植物に、同様の方法でＰ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型 ０の懸濁液を用いて２回目の散布をすることができる。しかし、Ｐ．ｉｎｆｅｓ ｔａｎｓ病原型１に耐性のあるトマト植物がおそらく同様に病原型０にも耐性で あることが当業者に一般によく知られているので、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原 型０に対する耐性について植物を度々試験する必要はない。 Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対する耐性を測定する第２の方法 は、野外スクリーンを包含する。野外スクリーンは、気候条件が自然の感染およ び発病に好ましい野外に実生を移植することを包含する。発病後、植物が果実を つけ始めた頃、耐性植物を同定し、選択する。 本発明の発明者は、本発明の方法によて製造された植物がＰ．ｉｎｆｅｓｔａ ｎｓ病原型０および１に対して耐性であるかまたは感受性であるかを評価するた めに発病評価区分のスケールを考案した。発病評価区分のスケールは、１から５ の数字で示され、それらの数字は以下の意味を有する：１は、病斑がないかまた は葉のみに小さな病斑があることに対応し；２は、葉に病斑がないかまたは小さ な病斑があり、葉の病班が拡大し葉柄に小さな病斑（直径２ｍｍ）があることに 対応し；３は、葉に病斑がないかまたは小さな病斑があり、葉の病斑が拡大して 葉柄に小さな病斑（直径２ｍｍ）があり、かつ葉柄の病斑を拡大していることに 対応し；４は、葉に病斑がないかまたは小さな病斑があり、葉の病斑が拡大して 葉柄に小さな病斑（直径２ｍｍ）があり、葉柄の病斑が拡大し、かつ茎に小さな 病斑（直径２ｍｍ）があることに対応し；そして５は、葉に病斑がないかまたは 小さな病斑があり、葉の病斑が拡大して葉柄に小さな病斑（直径２ｍｍ）があり 、葉柄の病斑が拡大し、茎に小さな病斑（直径２ｍｍ）があり、かつ茎の病斑が 拡大するか、または植物が死滅することに対応する。３未満の発病評価区分スケ ールを示す植物は、耐性であると考えられる一方で、３またはそ れより大きい発病評価区分スケールを示す植物は、感受性であると考えられる。 伝統的に、ほどんどの植物育種者は、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓに耐性を示すト マトを評価したり、同定したりそして選択したりしていない。ほとんどの育種者 は、この真菌の存在がそれらの全体の作物を壊滅させ得るという懸念を持たず、 Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓについて研究しない。その代わり、ほとんどの育種者は 、上記真菌にそれらの作物に影響を及ぼさせないよう努力するなかで、殺菌剤を 散布してＰ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓを防除する。 その後、最善の耐性を示す植物を、１方の植物から得た花粉を他方の柱頭に載 せることによって、市販のトマト植物（Ｌ．ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）と交雑させ る。トマト果実が発生した後、種子を収集する。種子は、植物体に育成され、耐 病性について評価される。耐性植物は選択され、植物型（有限対無限）、果実サ イズ、形状、香り、色および長い貯蔵寿命のような所望の表現型の特徴を保持す る市販のトマト植物と戻し交雑できる。所望の表現型特徴を持ち、Ｐ．ｉｎｆｅ ｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に耐性である品種が得られるまで、戻し 交雑 を継続し得る。生じる植物は、野外において、高い発病圧下でもＰ．ｉｎｆｅｓ ｔａｎｓ病原型１に対して安定である。 Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍが閉鎖花であることに注目 するのは興味深い。したがって、Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌ ｌｉｆｏｌｉｕｍとＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍとの間で 交雑受粉が、ヒトの技術介入なしになされるということは野外では非常におこり にくい。Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対する耐性を付与する対立 遺伝子についての同定、選択および戻し交雑が自然に起こることもありそうにな い。 プロトプラスト融合も、本発明の植物を創出するのに使用できる。例えば、第 一のプロトプラストを、ＬＡ２５３３として示されるＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍから得、第二のプロトプラストを、Ｌｙｃ ｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍから得る。その後、２種プロトプラ ストを、当業界でよく知られた従来のプロトプラスト融合方法を使用して融合さ せる。 例えば、プロトプラスト融合は、融合緩衝液、すなわち、膜を融合させる高い ｐＨ溶液の存在下で、凝集を起こすポリエチ レングリコール（ＰＥＧ）を用いることによって達成できる。このような体細胞 ハイブリダイゼーションは、種間雑種又はその変形種の製造についてＳｕｎｄｂ ｅｒｇら（Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ、４３、１５５（１９８６年）：参照に よりここに援用する）によって開示された条件下で達成し得る。しかし、当業者 は、プロトプラスト融合が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を用いる以外の 方法でも達成できることを認識する。例えば、プロトプラストは、Ｋｏｏｐら（ １９８９年)「細胞生物学での電気穿孔法および電気融合（Ｅｌｅｃｔｒｏｐｏ ｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｅｌｅｃｔｒｏｆｕｓｉｏｎ ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ ｌｏｇｙ ）」、Ｎｅｕｍａｎら編、３５５−３６５貞で「高等植物の予備選択単 一プロトプラストおよびサブプロトプラストを用いた電界誘導融合および細胞再 構築（Ｅｌｅｃｔｒｉｃ Ｆｉｅｌｄ−ｉｎｄｕｃｅｄ Ｆｕｓｉｏｎ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｐｒｅｓｅｌｅｃｔｅ ｄ Ｓｉｎｇｌｅ Ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔｓ ａｎｄ Ｓｕｂｐｒｏｔｏｐｌａ ｓｔｓ ｏｆ Ｈｉｇｈｅｒ Ｐｌａｎｔｓ）」（参照によりここに援用する） で記載されるとおり電界誘導融合法を使用することによって融合し 得る。さらに、プロトプラスト融合は、Ｈａｕｐｔｍａｎｎら、「アミノ酸類似 体耐性の相補性によって選択されるニンジン対タバコの体細胞ハイブリッド（Ｃ ａｒｒｏｔ×Ｔｏｂａｃｃｏ Ｓｏｍａｔｉｃ Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｓ Ｓ ｅｌｅｃｔｅｄ ｂｙ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ａｎａｌｏｇ Ｒｅｓｉｓｔａ ｎｃｅ Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ）」、第６回国際プロトプラストシン ポジウム、バーゼル、１９８３年８月１２−１６日（参照によりここで援用する ）によって記載されるとおり、デキストランおよびポリビニルアルコールを用い て達成できる。 非限定的例示として、本発明の実施例を以下に示す。 実施例１ 数種の異なる植物を、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ耐性の有無について評価した。 以下の種子を得た。ＬＡ３７３として示されるＬ．ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌ ｉｕｍ、ＬＡ１３３８として示されるＬ．ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ ｖａｒ．ｃｅ ｒａｓｉｆｏｒｍｅ、ＬＡ１３７５として示されるＬ．ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆ ｏｌｉｕｍ、ＬＡ２６５０として示されるＬ．ｈｉｒｓｕｔｕｍ、およびＬＡ２ ５３３（Ｈｏｐｅ８４）として示 されるＬ．ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ。これらの種子の全ては、カリフ ォルニア州、デイビス（Ｄａｖｉｓ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）のカリフォルニア 大学デイビス校にあるリック・センターから得た。Ｈｏｐｅ３３は、Ｐ．ｉｎｆ ｅｓｔａｎｓ病原型０および１に耐性を示すトマトの系統である。Ｃｅｌｅｂｒ ｉｔｙおよびＦａｎｄａｎｇｏは、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓにいかなる耐性をも 示さない市販の品種である。 種子を温室で播種した。トマト種子を土壌（５０％ビートモス、５０％砂）に 播き、温室（日中７５°Ｆおよび夜間７０℃の温度）にあるベンチに載せ、必要 に応じて潅瀧した。トマトの実生が第５本葉段階に達したとき、それらにＰ．ｉ ｎｆｅｓｔａｎｓ病原型１を接種した。実生に、１ミリリットルの溶液当たり１ ０，０００胞子嚢の濃度で、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓの胞子嚢の懸濁液を流れ落 ちるようになるまで散布した。接種後、植物を１００％湿度のチャンバー内に２ ４時間に置いた。次に、植物の覆いを除き、発病させた。接種後およそ７日目に 、以下の発病評価区分を用いて耐性植物を同定し選択した。上で記述されたこれ らの同じ系統を、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０についても同じ方法で評価し た。発病評価区分 ： １＝病斑がないかまたは葉のみに小さな病斑がある。 ２＝上述に加えて、葉の病斑が拡大して葉柄に小さな病斑（直径２ｍｍ）がある 。 ３＝上述に加えて、葉柄の病斑が拡大している。 ４＝上述に加えて、茎に小さな病斑（直径２ｍｍ）がある。 ５＝上述に加えて、茎の病斑が拡大しているか、または植物が死滅する。 発病評価区分の結果を、表１に示す。 上記表により、ＬＡ２５３３として示されるＬ．ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌ ｉｕｍ植物は、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対して高いレベルの 耐性を示した一方で、ＬＡ３７３および１３７５として示されるＬ．ｐｉｍｐｉ ｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ系統は、高レベルの耐性を示さなかったことが分る。 実施例２ ＬＡ２５３３として示され、Ｈｏｐｅ８４とも呼称されるＬ．ｐｉｍｐｉｎｅ ｌｌｉｆｏｌｉｕｍ植物を、Ｆｌａ７０６５として示されるトマト（Ｌ．ｅｓｃ ｕｌｅｎｔｕｍ）植物と交雑させた。植物Ｆｌａ７０６５は、フロリダのフロリ ダ大学でＪａｙ Ｓｃｏｔｔ博士の育種プログラムから得られた、有限の、大き な果実の、均一な緑の、フレッシュマーケットの、確定的近交育種系である。こ の交雑から得られた種子（Ｆ１）を、土壌に播き、温室で育成し、実施例１で先 に記述したとおりに、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型１で接種した。このスクリ ーンから得た実生のすべてが、実施例１に記述したのと同じ発病評価区分を用い て、１または２と評価され、それによって、それらがＰ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病 原型０および１に耐性であったことが示された。これは、耐性に関与する遺伝子 が優性形態で遺伝することを示唆する。 実施例３ 実施例２で記述されたＦ１植物を、自家受粉させた。この（Ｆ２）から得た実 生を、土壌に植え、温室で育成した。数週間後、この実生を、野外に移植し、ド ロップ灌慨により給水し、成熟するまで成長させた。開花前に、挿木を取り、土 壌に移植し、温室で育成した。２週間後、挿木を取り、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ 病原型１の胞子嚢（濃度：１０，０００胞子嚢／ミリリットル）で接種し、２４ 時間１００％湿度のチャンバー内に置いた。２４時間後、植物を移動し、発病さ せた。１４日後、挿木を、１〜５の発病評価区分スケールで評価した。使用した 発病評価区分は、以下のものであった：罹病格付け ： １＝病斑がないかまたは葉のみに小さな病斑がある。 ２＝上述に加えて、葉の病斑が拡大して葉柄に小さな病斑（直径２ｍｍ）がある 。 ３＝上述に加えて、葉柄の病斑が拡大している。 ４＝上述に加えて、茎に小さな病斑（直径２ｍｍ）がある。 ５＝上述に加えて、茎の病斑が拡大しているか、または植物が死滅する。 Ｆ２植物の発病評価区分による評価を表２に示す。 ２．９またはそれ未満の発病評価区分を示す系統は耐性であると見なされた一 方で、３．０またはそれより大きい発病評価区分を示す系統は感受性であると見 なされた（７１系統耐性：２４系統感受性）。表２にあるデータは、３：１の耐 性対感受性の比を支持し、これは、耐性遺伝子座が優性遺伝である場合に期待さ れる値である。一方、多くの系は、２．０〜２．８の間の発病評価区分を示した 。本発明者は、この系は、異型接合体であり得ると確信する。そしてこれが真実 であれば、これは、耐性が部分的に優性であり、同型接合体植物が、異型接合体 植物より高いレベルの耐性を示すことを示唆する。 実施例４ 実施例３で記述されたＦ２植物を、自家受粉させた。この（Ｆ３）から得た実 生を、土壌に植え、温室で育成した。数週間後、この実生を、気候条件が、Ｐ． ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型１の自然感染および発病に好ましい野外に移植した。 感受性の対照植物（Ｃｅｌｅｂｒｉｔｙ）が死滅したことで、発病圧が高いこと が明らかである。植物が果実を付け始めたときに、植物を、１〜５の発病評価区 分スケールで評価した。使用した発病評価区分は、以下のものであった：罹病格付け ： １＝病斑がないかまたは葉のみに小さな病斑がある。 ２＝上述に加えて、葉の病斑が拡大して葉柄に小さな病斑（直径２ｍｍ）がある 。 ３＝上述に加えて、葉柄の病斑が拡大している。 ４＝上述に加えて、茎に小さな病斑（直径２ｍｍ）がある。 ５＝上述に加えて、茎の病斑が拡大しているか、または植物が死滅する。 結果を、以下の表３に示す。 上述の結果は、実施例３で記載されたＦ２植物から得た結果を確認する。Ｆ２ 植物で確認された同型接合体耐性（９４ＦＨ９８、９４ＦＨ９９、９４ＦＨ１１ ４、９４ＦＨ１２０、９４ＦＨ１２１、９４ＦＨ１４８、９４ＦＨ１６２、９４ ＦＨ１７０、および感受性（９４ＦＨ９５、９４ＦＨ１１０、９４ＦＨ１１６、 ９４ＦＨ１２８、９４ＦＨ１２９、９４ＦＨ１５５、９４ＦＨ１７８、９４ＦＨ １８８）植物は、Ｆ３植物で同じ発病評価区分を示した。耐性が、多数の遺伝子 （多遺伝子複合体）により付与された場合、その結果３：１の比に分離できず、 同型接合体耐性植物は、例示された様に容易にそして迅速に同定できない。 これらの具体例は、本発明のいくつかの態様を例示することを意図するもので あるから、ここに記載されそして請求される本発明は、ここに開示された特定の 具体例による範囲に限定されない。すべての同等の実施態様は、本発明の範囲内 にあることが意図される。実際、ここに示されそして記述されるものに加えて、 様々な本発明の修正は、上記記載から当業者には明らかである。このような修正 は、添付の請求項の範囲内に入ることも意図される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，Ｓ Ｄ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ， ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，Ｈ Ｕ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ， ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者 ワトスン，ジヨン・クレイグ フランス国、エフ―30250・ジユナ、シユ マン・ドユ・ビドウルル（番地なし) (72)発明者 バリニユー，ステイーブン・マーク アメリカ合衆国、フロリダ・33912、フオ ート・マイヤース、アイドルワイルド・ス トリート・6765

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマ ト株に対して耐性のあるトマト植物を生産する方法であって、 ａ． Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のト マト株に対して耐性のあるＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆ ｏｌｉｕｍ植物を供し、 ｂ． Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ植物と、段階ａで供 されたＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ植物を交 雑させ、 ｃ． 段階ｂでの交雑から得られた種子を収集し、 ｄ． 該種子を植物に再生させ、 ｅ． 段階ｄの植物を、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原 型０および１に対する耐性について評価し、及び ｆ． Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対 して耐性である植物を同定して選択する、 段階を包含する方法。 ２． さらに、所望の表現型の特徴を示すＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕ ｌｅｎｔｕｍ植物と、段階ｆで選択された植物を戻し交雑させ、交雑から得られ た種子を収集し、該種子を植物に再生させ、該植物をＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対する耐性について評価し 、及び、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対 して耐性である植物を同定して選択する段階を包含する、請求項１に記載の方法 。 ３． 植物を発病評価区分スケールを用いて評価し、発病評価区分が１〜５の数 字系［ここで、１は、病斑がないかまたは葉のみに小さな病斑があることに対応 し；２は、葉に病斑がないかまたは小さな病斑があり、かつ葉の病斑が拡大して 葉柄に小さな病斑（直径２ｍｍ）があることに対応し；３は、葉に病斑がないか または小さな病斑があり、葉の病斑が拡大して葉柄に小さな病斑（直径２ｍｍ） があり、かつ葉柄の病斑が拡大していることに対応し；４は、葉に病斑がないか または小さな病斑があり、葉の病斑が拡大して葉柄に小さな病斑（直径２ｍｍ） があり、葉柄の病斑が拡大し、かつ茎に小さな病斑（直径２ｍｍ）があることに 対応し；及び、５は、葉に病斑がないかまた は小さな病斑があり、葉の病斑が拡大して葉柄に小さな病斑（直径２ｍｍ）があ り、葉柄の病斑が拡大し、茎に小さな病斑（直径２ｍｍ）があり、かつ茎の病斑 が拡大しているか、または植物が死滅することに対応する］からなる、請求項１ に記載の方法。 ４． Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ植物がＬ Ａ２５３３である、請求項１に記載の方法。 ５． Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ植物がＡ ＴＣＣ受託番号９７３８２号を有するＬＡ２５３３である、請求項４に記載の方 法。 ６． Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマ ト株に対して耐性であるトマト植物を生産する方法であって、 ａ． ＡＴＣＣ受託番号９７３８２号を有するＬＡ２５３３として示されるＬ ｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ植物を、Ｌｙｃｏ ｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ植物と交雑させ、 ｂ． 段階ａでの交雑から得られる種子を収集し、 ｃ． 該種子を植物に再生させ、 ｄ． 段階ｃの植物を、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原 型０および１に対する耐性について評価し、及び ｅ． Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対 して耐性である植物を同定して選択する、段階を包含する方法。 ７． さらに、段階ｅで選択された植物を、所望の表現型の特徴を示すＬｙｃｏ ｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ植物と戻し交雑させ、交雑から得られ た種子を収集し、該種子を植物に再生させ、該植物をＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対する耐性について評価し 、及び、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対 して耐性である植物を同定して選択する段階を包含する、請求項６に記載の方法 。 ８． 植物を発病評価区分スケールを用いて評価し、発病評価区分が１〜５の数 字系［ここで、１は、病斑がないかまたは葉のみに小さな病斑があることに対応 し；２は、葉に病斑がないかまたは小さな病斑があり、かつ葉の病斑が拡大して 葉柄に小さな病斑（直径２ｍｍ）があることに対応し；３は、葉に病斑 がないかまたは小さな病斑があり、葉の病斑が拡大して葉柄に小さな病斑（直径 ２ｍｍ）があり、かつ葉柄の病斑が拡大していることに対応し；４は、葉に病斑 がないかまたは小さな病斑があり、葉の病斑が拡大して葉柄に小さな病斑（直径 ２ｍｍ）があり、葉柄の病斑が拡大し、かつ茎に小さな病斑（直径２ｍｍ）があ ることに対応し；及び、５は、葉に病斑がないかまたは小さな病斑があり、葉の 病斑が拡大して葉柄に小さな病斑（直径２ｍｍ）があり、葉柄の病斑が拡大し、 茎に小さな病斑（直径２ｍｍ）があり、かつ茎の病斑が拡大しているか、または 植物が死滅することに対応する］からなる、請求項６に記載の方法。 ９． Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対し て耐性であるトマト植物を生産する方法であって、 ａ． Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のト マト株に対して耐性のあるＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆ ｏｌｉｕｍ植物から得たプロトプラストを、Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃ ｕｌｅｎｔｕｍ植物から得たプロトプラストと融合させ、 ｂ． 得られた異質遺伝子細胞をＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎｅｓｃｕｌｅｎｔ ｕｍ植物に再生させて、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型 ０および１のトマト株に対する耐性について評価し、及び、 ｃ． Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対 して耐性である植物を同定して選択する、段階を包含する方法。 １０． Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ植物が ＬＡ２５３３である、請求項９に記載の方法。 １１． Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ植物が ＡＴＣＣ受託番号９７３８２号を有するＬＡ２５３３である、請求項１０に記載 の方法。 １２． 請求項１、６または９の方法によって生産された、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈ ｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対して耐性であるト マト植物。 １３． 請求項１２の植物によって生産された種子。 １４． 請求項１、６または９の方法によって生産された、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈ ｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対する耐性を付与す る対立遺伝子を含むトマ ト植物。 １５． 請求項１４の植物によって生産された種子。 １６． ａ． Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のト マト株に対して耐性のあるＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆ ｏｌｉｕｍ植物を供し、 ｂ． Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ植物と、段階ａで供 されたＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ植物を交 雑させ、 ｃ． 段階ｂでの交雑から生じる種子を収集し、 ｄ． 該種子を植物に再生させ、 ｅ． 段階ｄの植物を、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原 型０および１に対する耐性について評価し、 ｆ． Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対 して耐性である植物を同定して選択し、 ｇ． 段階ｆの植物を、所望の表現型の特徴を示すＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ植物と戻し交雑させ、 ｈ． 段階ｇの交雑から生じる種子を収集して、ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマ ト株に対して耐性のあるトマト植物を得る、 段階を包含する方法によって生成された、ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅ ｓｔａｎｓ病原型０および１に対して耐性のあるトマト植物。 １７． ａ． Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のト マト株に対して耐性のあるＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆ ｏｌｉｕｍ植物から得たプロトプラストを、Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃ ｕｌｅｎｔｕｍ植物から得たプロトプラストと融合させ、 ｂ． 得られた異質遺伝子細胞をＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎｅｓｃｕｌｅｎｔ ｕｍ植物に再生させて、ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型 ０および１のトマト株に対する耐性について評価し、及び、 ｃ． Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対 して耐性である植物を同定して選択する、段階を包含する方法によって生成され た、ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対して 耐性であるトマト植物。 １８． Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のト マト株に対して耐性のあるトマト植物となる種子を生産する方法であって、 ａ． Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のト マト株に対して耐性のあるＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆ ｏｌｉｕｍ植物を供し、 ｂ． Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ植物と、段階ａで供 されたＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ植物を交 雑させ、 ｃ． Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のト マト株に対して耐性のあるトマト植物になる段階ｂでの交雑から得られた種子を 収集する、 段階を包含する方法。 １９． Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のト マト株に対して耐性のあるトマト植物となる種子を生産する方法であって、 ａ． Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のト マト株に対して耐性のあるＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆ ｏｌｉｕｍ植物を供し、 ｂ． Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ植物と、段階ａで供 されたＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ植物を交 雑させ、 ｃ． 段階ｂでの交雑から得られた種子を収集し、 ｄ． 該種子を植物に再生させ、 ｅ． 段階ｄの稙物を、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原 型０および１に対する耐性について評価し、 ｆ． Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対 して耐性である植物を同定して選択し、 ｇ． 段階ｆの植物を、所望の表現型の特徴を示すＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ植物と戻し交雑させ、 ｈ． Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のト マト株に対して耐性のあるトマト植物になる、段階ｇから得た種子を収集する、 段階を包含する方法。 ２０． Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ植物が ＬＡ２５３３である、請求項１６、１７、１８または１９に記載の方法。 ２１． Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆ ｏｌｉｕｍ植物がＡＴＣＣ受託番号９７３８２号を有するＬＡ２５３３である、 請求項２０に記載の方法。