JP2000509407A - 前立腺癌の治療に有効なコンジュゲート - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 遊離した前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）による選択的タンパク質分解によって開裂され得るアミノ酸配列を有するオリゴペプチドと公知の細胞毒性物質とから成る化学的コンジュゲートが開示されている。このようなコンジュゲートは前立腺癌及び良性前立腺過形成（ＢＰＨ）の治療に有用である。

Description

【発明の詳細な説明】 前立腺癌の治療に有効なコンジュゲート 発明の背景 １９９４年には米国で２０万人の男性が前立腺癌と診断され、３８，０００人 の米国人男性がこの病気で死亡するであろうと予想されている（Ｇａｒｎｉｃｋ ，Ｍ．Ｂ．（１９９４）Ｔｈｅ Ｄｉｌｅｍｍａｓ ｏｆ Ｐｒｏｓｔａｔｅ Ｃａｎｃｅｒ．Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ，Ａｐｒｉｌ：７２− ８１）。このように前立腺癌は米国人男性で（皮膚癌を除けば）最も診断数の多 い悪性腫瘍であり、米国人男性の癌関連の死因としては（肺癌に次いで）二番目 に多い。 前立腺特異的抗原（ＰＳＡ，Ｐｒｏｓｔａｔｅ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ａｎｔｉ ｇｅｎ）は、ほぼ全面的にヒト前立腺上皮から産生されヒト精液中に０．５〜２ ．０ｍｇ／ｍｌのレベルで存在する３３ｋＤａの一本鎖の糖タンパク質である（ Ｎａｄｊｉ，Ｍ．，Ｔａｂｅｒ，Ｓ．Ｚ．，Ｃａｓｔｒｏ，Ａ．，ら（１９８１ ）Ｃａｎｃｅｒ ４８：１２２９；Ｐａｐｓｉｄｅｒｏ，Ｌ．，Ｋｕｒｉｙａｍ ａ，Ｍ．，Ｗａｎｇ，Ｍ．ら（１９８１）． ＪＮＣＩ６６：３７；Ｑｕｉ，Ｓ．Ｄ．，Ｙｏｕｎｇ，Ｃ．Ｙ．Ｆ．，Ｂｉｈａ ｒｔｚ，Ｄ．Ｌ．ら（１９９０），Ｊ．Ｕｒｏｌ．１４４：１５５０；Ｗａｎｇ ，Ｍ．Ｃ．，Ｖａｌｅｎｚｕｅｌａ，Ｌ．Ａ．，Ｍｕｒｐｈｙ，Ｇ．Ｐ．ら（１ ９７９）．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｕｒｏｌ．１７：１５９）。単一の糖質ユニットが４ ５位のアスパラギン残基に結合し、全分子量の２〜３ｋＤａを構成している。Ｐ ＳＡはキモトリプシン様特異性をもつプロテアーゼである（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓ ｓｏｎ，Ａ．，Ｌａｕｒｅｌｌ，Ｃ．Ｂ．，Ｌｉｌｊａ，Ｈ．（１９９０）．Ｅ ｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９４：７５５−７６３）。精液封入ゲル中の主要 タンパク質であるセメノゲリンＩ、セメノゲリンＩＩ及びフィブロネクチンのタ ンパク質分解によって射精の際に形成されるゲル構造を溶解させるは主としてＰ ＳＡであることが証明されている（Ｌｉｌｊａ，Ｈ．（１９８５）Ｊ．Ｃｌｉｎ ．Ｉｎｖｅｓｔ．７６：１８９９；Ｌｉｌｊａ，Ｈ．，Ｏｌｄｂｒｉｎｇ，Ｊ． ，Ｒａｎｎｅｖｉｋ，Ｇ．ら（１９８７）．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８０ ：２８１；ＭｃＧｅｅ，Ｒ．Ｓ．，Ｈｅｒｒ，Ｊ．Ｃ．（１９８８）．Ｂｉｏｌ ．Ｒｅｐｒｏｄ．３９：４９９）。ゲル形成タンパク質のＰＳＡ 介在タンパク質分解によってセメノゲリンＩ及びセメノゲリンＩＩの複数の可溶 性フラグメント並びにフィブロネクチンの可溶性フラグメントが生成され、同時 に、射精液の液化及び運動性精子の漸進的遊離が生じる（Ｌｉｌｊａ，Ｈ．，Ｌ ａｕｒｅｌｌ，Ｃ．Ｂ．（１９８４）．Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｉ ｎｖｅｓｔ．４４：４４７：ＭｃＧｅｅ，Ｒ．Ｓ．，Ｈｅｒｒ，Ｊ．Ｃ．（１９ ８７）．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．３７：４３１）。更に、ＰＳＡはＩＧＦＢＰ −３（インスリン様成長因子結合タンパク質３）をタンパク質分解的に分解し、 ＩＧＦによるＰＳＡ分泌細胞の増殖を特異的に刺激する（Ｃｏｈｅｎら（１９９ ２）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏ．＆ Ｍｅｔａ．７５：１０４６−１０５３）。 アルファ１−アンチキモトリプシンと複合体を形成したＰＳＡは血清ＰＳＡの 主要な分子形態であり、検出される血清ＰＳＡの９５％はこの形態である（Ｃｈ ｒｉｓｔｅｎｓｓｏｎ，Ａ．，Ｂｊｏｒｋ，Ｔ．，Ｎｉｌｓｓｏｎ，Ｏ．，ら（ １９９３）．Ｊ．Ｕｒｏｌ．１５０：１００−１０５；Ｌｉ１ｊａ，Ｈ．，Ｃｈ ｒｉｓｔｅｎｓｓｏｎ，Ａ．，Ｄａｈｌｅｎ．Ｕ．（１９９１）．Ｃｌｉｎ．Ｃ ｈｅｍ．３７：１６１８−１６２５；Ｓ ｔｅｎｍａｎ，Ｕ．Ｈ．，Ｌｅｉｎｏｖｅｎ，Ｊ．，Ａｌｆｔｈａｎ，Ｈ．ら（ １９９１）．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５１：２２２−２２６）。アルファ１−ア ンチキモトリプシンと複合体を形成するためには成熟した酵素活性形態のＰＳＡ が必要なので、前立腺組織（正常組織、良性過形成組織または悪性組織）はこの 形態のＰＳＡを主として放出する（Ｍａｓｔ，Ａ．Ｅ．，Ｅｎｇｈｉ１ｄ，Ｊ． Ｊ．，Ｐｉｚｚｏ，Ｓ．Ｖ．ら（１９９１）．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０ ：１７２３−１７３０；Ｐｅｒｌｍｕｔｔｅｒ，Ｄ．Ｈ．，Ｇｌｏｖｅｒ，Ｇ． Ｉ．，Ｒｉｖｅｔｎａ，Ｍ．ら（１９９０）．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：３７５３−３７５７）。従って、前立腺ＰＳＡ分泌細胞 の微細環境では、ＰＳＡはいかなる阻害分子にも複合していない成熟した酵素活 性形態に加工され分泌されると考えられる。ＰＳＡはまたアルファ２−マクログ ロブリンと安定な複合体を形成するが、この結果としてＰＳＡのカプセル化及び ＰＳＡエピトープの完全な喪失が生じるので、この複合体形成が生体内でどのよ うな意味を有するかに関しては未だ解明されていない。複合体非形成の遊離ＰＳ Ａの形態は血清ＰＳＡの少数部分を構成する（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｓ ｏｎ，Ａ．，Ｂｊｏｒｋ，Ｔ．，Ｎｉｌｓｓｏｎ，Ｏ．ら（１９９３）．Ｊ．Ｕ ｒｏｌ．１５０：１００−１０５；Ｌｉｌｊａ，Ｈ．，Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｓｏ ｎ，Ａ．，Ｄａｈｌｅｎ，Ｕ．（１９９１）．Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．３７：１６ １８−１６２５）。この形態の血清ＰＳＡのサイズは、精液中のＰＳＡのサイズ と同様である（Ｌｉｌｊａ，Ｈ．，Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｓｏｎ，Ａ．，Ｄａｈｌ ｅｎ，Ｕ．（１９９１）．Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．３７：１６１８−１６２５）。 しかしながら、遊離形態の血清ＰＳＡがチモーゲンであるのか、内部開裂された 不活性形態の成熟ＰＳＡであるのか、または、酵素活性を発現するＰＳＡである のか、に関しては未だ解明されていない。しかしながら、血清中には未反応のア ルファ１−アンチキモトリプシン及びアルファ２−アンチキモトリプシンの双方 が遊離形態の３３ｋＤａのＰＳＡの検出血清レベルに比較してかなりのモル過剰 量（１００〜１，０００倍）で存在するので、遊離形態の血清ＰＳＡが酵素活性 を発現するとは考え難い（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｓｏｎ，Ａ．，Ｂｊｏｒｋ，Ｔ． ，Ｎｉｌｓｓｏｎ，Ｏ．ら（１９９３）．Ｊ．Ｕｒｏｌ．１５０：１００−１０ ５；Ｌｉｌｊａ，Ｈ．，Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｓｏｎ，Ａ．， Ｄａｈｌｅｎ，Ｕ．（１９９１）．Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．３７：１６１８−１６ ２５）。 上記の正常血清のＰＳＡ濃度は良性前立腺過形成及び前立腺の外科的外傷後に も報告されているが（Ｌｉｌｊａ，Ｈ．，Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｓｏｎ，Ａ．，Ｄ ａｈｌｅｎ，Ｕ．（１９９１）．Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．３７：１６１８−１６２ ５）、血清中のＰＳＡ測定値は前立腺の腺癌の治療をモニターするために有用で ある（Ｄｕｆｆｙ，Ｍ．Ｓ．（１９８９）．Ａｎｎ．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ ．２６：３７９−３８７；Ｂｒａｗｅｒ，Ｍ．Ｋ．ａｎｄ Ｌａｎｇｅ，Ｐ．Ｈ ．（１９８９）．Ｕｒｏｌ．Ｓｕｐｐｌ．５：１１−１６；Ｈａｒａ，Ｍ．ａｎ ｄＫｉｍｕｒａ，Ｈ．（１９８９）．Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１１３： ５４１−５４８）。また、広がった転移前立腺癌に罹患し前立腺摘出手術を受け た患者では血清ＰＳＡが高レベルで検出されるので、前立腺転移が免疫反応性Ｐ ＳＡを分泌することも判っている（Ｆｏｒｄ，Ｔ．Ｆ．，Ｂｕｔｃｈｅｒ，Ｄ． Ｎ．，Ｍａｓｔｅｒｓ，Ｒ．Ｗ．ら（１９８５）．Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｕｒｏｌｏｇ ｙ ５７：５０−５５）。従って、ＰＳＡのタンパク質分解活性によって活性化 される細胞毒性化合物は前 立腺細胞特異的及びＰＳＡ分泌前立腺転移特異的でなければならない。 本発明の目的は、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）による選択的タンパク質分解に よって開裂されかつ親水性置換基を有する環状アミノ酸を含むオリゴペプチドを 細胞毒性物質と共に含んでいることを特徴とする、前立腺癌の治療に有用な新規 な抗癌組成物を提供することである。 本発明の別の目的は、新規な抗癌組成物の投与から成る前立腺癌の治療方法を 提供することである。発明の概要 遊離した前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）による選択的タンパク質分解によって開 裂されかつ親水性置換基を有する環状アミノ酸を含むアミノ酸配列から成るオリ ゴペプチドと公知の細胞毒性物質とから成る化学的コンジュゲートが開示されて いる。このようなコンジュゲートは、前立腺癌及び良性前立腺過形成（ＢＰＨ） の治療に有用である。発明の詳細な説明 本発明は、前立腺癌の治療に有用な新規な抗癌組成物に関する。本発明の組成 物は、細胞毒性物質に直接または化学的リン カーを介して共有結合されたオリゴペプチドから成る。オリゴペプチドは、遊離 した前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）によって選択的に認識されかつ遊離した前立腺 特異的抗原の酵素活性によってタンパク質分解的に開裂され得るオリゴマーから 選択されている。オリゴペプチドと細胞毒性物質とのこのような組合せをコンジ ュゲートと呼ぶ。 本発明のコンジュゲートは更に、親水性置換基を有する環状アミノ酸をオリゴ ペプチドの一部として組込んでいることを特徴とする。この環状アミノ酸はコン ジュゲートに水溶性を与える。このような親水性環状アミノ酸の非限定例として は、ヒドロキシル化、ポリヒドロキシル化及びアルコキシル化プロリン及びピペ コリン酸部分がある。 理想的には、ＰＳＡによるタンパク質分解によって開裂される部位を含むオリ ゴペプチドが直接または化学的リンカーを介して細胞毒性物質に結合されている とき、細胞毒性物質は完全な形態を維持しているが細胞毒性活性は顕著に低下し ているかまたは欠如している。同じく理想的には、結合オリゴペプチドがタンパ ク質分解によって開裂部位で開裂されたとき、細胞毒性物質の細胞毒性活性が有 意に増加するかまたは非修飾の細胞 毒性物質の活性が回復される。 更に、オリゴペプチドは、ＰＳＡ以外のタンパク質分解酵素の存在下では開裂 しないかまたは遊離した酵素活性ＰＳＡの存在下のオリゴペプチドの開裂に比較 して遥かに緩慢な速度で開裂するオリゴペプチドから選択されるのが好ましい。 上記の理由から、オリゴペブチドが短いペプチド配列、好ましくは１０アミノ 酸未満のペプチド配列から成るのが望ましい。最も好ましくは、オリゴペプチド は７個または６個のアミノ酸から成る。コンジュゲートが好ましくは短いアミノ 酸配列を含むので、コンジュゲートの溶解度は、通常は疎水性をもつ細胞毒性物 質成分に大きく影響される。従って、本発明のコンジュゲートの環状アミノ酸の 親水性置換基は、細胞毒性物質に起因するこのような疎水性を相殺するかまたは 低下させるように選択される。 本発明のこの目的を実現するために、必須とは言えないまでも好ましいコンジ ュゲートの実施態様では、オリゴペプチド及び任意に存在する化学的リンカーが 、組織の近傍に存在する遊離ＰＳＡ及び他の何らかの先天的タンパク質分解酵素 のタンパク質分解活性によって細胞毒性物質から分離され、その結果と して、細胞毒性物質、または、オリゴペプチド／リンカーユニットの部分を保持 しなからも細胞毒性を維持している細胞毒性物質が、タンパク質分解的開裂場所 の生理的環境に提示される。医薬として許容されるコンジュゲートの塩も勿論本 発明に包含される。 直接共有結合によってまたは化学的リンカーを介して細胞毒性物質とコンジュ ゲートを形成するオリゴペプチドは、遊離ＰＳＡによって最高度に認識され遊離 ＰＳＡによって最も容易にタンパク質分解的に開裂されるオリゴペプチドである 必要はない。従って、このような抗癌組成物に組込むために選択されるオリゴペ プチドは、遊離ＰＳＡによる選択的タンパク質分解による開裂、及び、このよう な開裂によって生じる細胞毒性物質−タンパク質分解残基のコンジュゲート（ま たは理想的状態としては非修飾の細胞毒性物質）の細胞毒性活性の双方に基づい て選択される。タンパク質分解性ＰＳＡに関して使用された“選択的”なる用語 は、遊離ＰＳＡによる本発明のオリゴペプチド成分の開裂速度がランダムなアミ ノ酸配列から成るオリゴペプチドの開裂速度に比べて促進されていることを意味 する。従って、本発明のオリゴペプチド成分は遊離ＰＳＡの好ましい基質 である。“選択的”なる用語はまた、オリゴペプチドがオリゴペプチド中の２つ の特定アミノ酸の間で遊離ＰＳＡによってタンパク質分解的に開裂されることを 意味する。 本発明のオリゴペプチド成分は、遊離した前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）によっ て選択的に認識されかつ遊離した前立腺特異的抗原の酵素活性によってタンパク 質分解的に開裂され得る。このようなオリゴペプチドは以下の配列から選択され たオリゴマーから成る： （ａ）ＨａａＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒ（配列：１）； （ｂ）ＨａａＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒ（配列：２）； （ｃ）ＨａａＸａａＬｙｓＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒ（配列：３）； （ｄ）ＨａａＸａａＬｙｓＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒ（配列：４）； （ｅ）ＨａａＸａａｈＡｒｇＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒ（配列：５）； （ｆ）ＨａａＸａａｈＡｒｇＣｈａＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒ（配列：６）； （ｇ）ＨａａＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＸａａ（配列：７）； （ｈ）ＨａａＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＸａａ（配列：８）； （ｉ）ＨａａＸａａＳｅｒＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＸａａ（配列：９； （ｊ）ＨａａＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＸａａ（配列１０：）； 式中、Ｈａａは親水性部分で置換された環状アミノ酸であり、Ｘａａは任意のア ミノ酸であり、ｈＡｒｇはホモアルギニンであり、Ｃｈａはシクロヘキシルアラ ニンであり、Ｃｈｇはシクロヘキシルグリシンである。 本発明の実施態様において、オリゴペプチドは以下の配列から選択されたオリ ゴマーから成る： （ａ）ＨａａＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＳｅｒＬｅｕ（配列：１１）； （ｂ）ＨａａｘａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＡｌａ（配列：１２）； （ｃ）ＡｌａＨａａＸａａＳｅｒＴｙｒＴｙｒ｜Ｓｅｒ（配列：１３）； （ｄ）ＡｌａＡｓｎＨａａＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜Ｓｅｒ（配列：１４）； （ｅ）ＨａａＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＴｈｒ（配列：１５）； （ｆ）ＨａａＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＴｈｒ（配列：１６）； （ｇ）ＨａａＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＳｅｒ（配列：１７）； （ｈ）ＨａａＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＳｅｒ（配列：１８； （ｉ）ＨａａＸａａＬｙｓＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＳｅｒ（配列：１９）； （ｊ）ＨａａＸａａｈＡｒｇＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＳｅｒ（配列：２０） ； （ｋ）ＨａａＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＬｅｕ（配列：２１）； （ｌ）ＨａａＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＬｅｕ（配列：２２）； （ｍ）ＨａａＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＬｅｕ（配列：２３）； （ｎ）ＨａａＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＬｅｕ（配列：２４）； （ｐ）ＨａａＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＮｌｅ（配列：２５）； （ｑ）ＨａａＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＮｌｅ（配列：２６）； （ｒ）ＨａａＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＴＩＣ（配列：２７）； （ｓ）ＨａａＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＴＩＣ（配列：２８）； （ｔ）ＨａａＸａａＳｅｒＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＬｅｕ（配列：２９）； （ｕ）ＨａａＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＬｅｕ（配列：３０）； （ｖ）ＨａａＸａａＳｅｒＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＮｌｅ（配列：３１）； （ｗ）ＨａａＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＮｌｅ（配列：３２）； （ｘ）ＨａａＸａａＳｅｒＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＴＩＣ（配列：３３）； （ｙ）ＨａａＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＴ１Ｃ（配列：３４）； （ｚ）ｈＡｒｇＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＬｅｕ（配列：３５）； （ａａ）ｈＡｒｇＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＬｅｕ（配列：３６）。 本発明のより好ましい実施態様ではオリゴペプチドは以下の配列から選択され たオリゴマーから成る： （ａ）４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＴｙｒＣｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒ（配列：３７）； （ｂ）４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＡｌａ （配列：３８）； （ｃ）Ａｌａ−４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＴｙｒＴｙｒ｜Ｓｅｒ（配列：３９）； （ｄ）ＡｌａＡｓｎ４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜Ｓｅｒ（配列：４０ ）； （ｅ）４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＴｈｒ（配列：４１ ）； （ｆ）４−ＨｙｐＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＴｈｒ（配列：４２）； （ｇ）４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒｅｒ（配列：４３） ； （ｈ）４−ＨｙｐＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＳｅｒ（配列：４４）； （ｉ）４−ＨｙｐＸａａＬｙｓＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＳｅｒ（配列：４５ ）； （ｊ）４−ＨｙｐＸａａｈＡｒｇＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＳｅｒ（配列：４ ６）； （ｋ）４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＬｅｕ（配列：４７ ）； （ｌ）４−ＨｙｐＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＬｅｕ（配列：４８）； （ｍ）４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＬｅｕ（配列：４９）； （ｎ）４−ＨｙｐＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＬｅｕ（配列：５０）； （ｐ）４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＮｌｅ（配列：５１）； （ｑ）４−ＨｙｐＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＮｌｅ（配列：５２）； （ｒ）４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＴＩＣ（配列：５３）； （ｓ）４−ＨｙｐＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＴＩＣ（配列：５４）； （ｔ）４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＬｅｕ（配列：５５）； （ｕ）４−ＨｙｐＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＬｅｕ（配列：５６）； （ｖ）４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＮｌｅ（配列：５７）； （ｗ）４−ＨｙｐＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＮｌｅ（配列：５８）； （ｘ）４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＴＩＣ（配列：５９）； （ｙ）４−ＨｙｐＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＴＩＣ（配列：６０）。 式中、４−Ｈｙｐは４−ヒドロキシプロリンであり、Ｘａａは任意のアミノ酸 であり、ｈＡｒｇはホモアルギニンであり、Ｃｈａはシクロヘキシルアラニンで あり、Ｃｈｇはシクロヘキシルグリシンである。 より好ましい実施態様ではＸａａは好ましくはＡｌａ、Ｓｅｒ及びＩｌｅから 選択される。 上記及び発明の詳細な説明の他の箇所で使用された“アミノ酸配列から成るオ リゴマー”なる用語は、約３〜約１００個のアミノ酸残基から成りそのアミノ酸 配列中に記載の特定アミノ酸配列を含み従って記載のアミノ酸配列の内部で遊離 ＰＳＡによってタンパク質分解的に開裂されるオリゴマーを意味する。好ましく は、オリゴマーは５〜１０個のアミノ酸残基から成る。従って例えば、オリゴマ ー：ｈＡｒｇＳｅＲ⁴−ＨｙｐＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＬｅｕ（配列：６１）は、 アミノ酸配列：４−ＨｙｐＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＬｅｕ（配列：５６）を含み、 従って本発明に包含されるであろう。 ペプチド化学の平均的な知識をもつ技術者は、生物学的に活性のオリゴペプチ ド中の幾つかのアミノ酸が相同的、等量的及 び／または等電的な別のアミノ酸によって置換され、得られた修飾オリゴペプチ ド中で出発オリゴペプチドの生物活性が保存されることを容易に理解できよう。 幾つかの非天然アミノ酸及び修飾された天然アミノ酸も本発明のオリゴペプチド 中の対応する天然アミノ酸に置換するために使用され得る。従って例えば、チロ シンは３−ヨードチロシン、２−メチルチロシン、３−フルオロチロシン、３− メチルチロシン、などによって置換され得る。更に例えば、リシンはＮ’−（２ −イミダゾリル）リシンなどによって置換され得る。アミノ酸置換の非限定的代 表例を以下に列挙する：出発アミノ酸 （１つまたは複数の）置換アミノ酸 Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｌｙｓ、オルニチン Ａｓｎ Ｇｌｎ Ａｓｐ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｇｌｎ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｖａｌ，Ｌｅｕ，Ｍｅｔ，Ｎｌｅ Ｌｅｕ Ｉｌｅ，Ｖａｌ，Ｍｅｔ，Ｎｌｅ Ｌｙｓ Ａｒｇ、オルニチン Ｍｅｔ Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｎｌｅ，Ｖａｌ オルニチン Ｌｙｓ，Ａｒｇ Ｐｈｅ Ｔｙｒ，Ｔｒｐ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｔｒｐ Ｐｈｅ，Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ｐｈｅ，Ｔｒｐ Ｖａｌ Ｌｅｕ， Ｉｌｅ，Ｍｅｔ，Ｎｌｅ。 従って例えば、以下のオリゴペプチドは平均的な当業者に公知の技術で合成で き、本発明のコンジュゲートに組込まれると遊離ＰＳＡによってタンパク質分解 的に開裂されると予測される： Ａｓｎ４−ＨｙｐＩｌｅＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜Ｓｅｒ（配列：６２）； Ａｓｎ４−ＨｙｐＶａｌＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜Ｓｅｒ（配列：６３）； ４−ＨｙｐＡｌａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒ（配列： ６４）； （３，４−ジヒドロキシプロリン）ＡｌａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒ（ 配列：６５）； ３−ヒドロキシプロリンＳｅｒＣｈｇＧｌｎ｜Ｓｅｒ（配列：６６）； ４−ＨｙｐＡｌａＳｅｒＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒ（配列：６７）。 アミノ酸配列内部に含まれている記号“｜”は、遊離ＰＳＡによってタンパク 質分解的に開裂される配列内部の点位置を示す。 本発明の化合物は非対称中心を有していてもよく、ラセミ体、ラセミ混合物及 び個別の立体異性体の形態で生成されることができ、光学異性体を含む可能なす べての異性体が本発明に包含される。特に注釈がない限り、記載のアミノ酸は天 然の“Ｌ”立体配置を有すると理解されたい。 本文及び表に使用した以下の略号は以下のアミノ酸及び基を表す： ｈＲまたはｈＡｒｇ：ホモアルギニン； ｈＹまたはｈＴｙｒ：ホモチロシン； Ｃｈａ：シクロヘキシルアラニン； Ａｍｆ：４−アミノメチルフェニルアラニン； ＤＰＬ：２−（４，６−ジメチルピリミジニル）リシン； （イミダゾリル）Ｋ：Ｎ’−（２−イミダゾリル）リシン； Ｍｅ２ＰＯ３−Ｙ：Ｏ−ジメチルホスホチロシン； Ｏ−Ｍｅ−Ｙ：Ｏ−メチルチロシン； ＴＩＣ：１，２，３，４−テトラヒドロ−３−イソキノリンカルボン酸； ＤＡＰ：１，３−ジアミノプロパン； ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸； ＡＡ：酢酸； ３ＰＡＬ：３−ピリジル−アラニン； ４−Ｈｙｐ：４−ヒドロキシプロリン； Ａｂｕ：アルファ−アミノ酪酸； Ｔｈｉ：チエニルアラニン。 本発明のオリゴペプチド−細胞毒性物質コンジュゲートのようなペプチジル治 療薬がアセチル、ベンゾイル、ピバロイルなどの適当な保護基によって保護され た任意のオリゴペプチド置換基の末端アミノ部分を有するのが好ましいことは当 業界で公 知であり、本発明でもそのように理解されている。末端アミノ基がこのように保 護されているとき、温血動物の血漿中に存在するアミノペプチダーゼの作用によ る当該ペプチジル治療薬の酵素的分解は抑制または抑止される。 このような保護基はまた、親水性官能価の存在に基づいて選択される親水性ブ ロッキング基を含む。コンジュゲートの親水性を強化し従ってコンジュゲートの 水溶性を強化するブロッキング基の非限定例は、ヒドロキシル化アルカノイル、 ポリヒドロキシル化アルカノイル、ヒドロキシル化アロイル、ポリヒドロキシル 化アロイル、ポリエチレングリコール、グリコシレート類、糖類及びクラウンエ ーテル類である。Ｎ−末端の非天然のアミノ酸部分もまた、アミノペプチダーゼ によるこのような酵素的分解を改善し得る。 好ましくはＮ−末端保護基は： （ａ）アセチル、 （ｂ） （ｃ） （ｄ） から選択され、 式中の、 Ｒ¹及びＲ²は独立に、 （ａ）水素、 （ｂ）未置換または置換アリール、未置換または置換複素環、Ｃ₃−Ｃ₁₀シク ロアルキル、Ｃ₂−Ｃ₆アルケニル、Ｃ₂−Ｃ₆アルキニル、ハロゲン、Ｃ₁−Ｃ₆ペ ルフルオロアルキル、Ｒ³Ｏ−、Ｒ³Ｃ（Ｏ）ＮＲ³−、（Ｒ³）₂ＮＣ（Ｏ）−、 Ｒ³ ₂Ｎ−Ｃ（ＮＲ³）−、Ｒ⁴Ｓ（Ｏ）_mＮＨ、ＣＮ、ＮＯ₂、Ｒ³Ｃ（Ｏ）−、Ｎ₃ 、−Ｎ（Ｒ³）₂またはＲ⁴ＯＣ（Ｏ）ＮＲ³−、 （ｃ）未置換のＣ₁−Ｃ₆アルキル、 （ｄ）置換Ｃ₁−Ｃ₆アルキルであり、置換Ｃ₁−Ｃ₆アルキルの置換基が未置換 または置換アリール、未置換または置換複素環、Ｃ₃−Ｃ₁₀シクロアルキル、Ｃ₂ −Ｃ₆アルケニル、Ｃ₂−Ｃ₆アルキニル、Ｒ³Ｏ−、Ｒ⁴Ｓ（Ｏ）_mＮＨ、Ｒ³Ｃ（ Ｏ）ＮＲ³−、（Ｒ³）₂ＮＣ（Ｏ）−、Ｒ³ ₂Ｎ−Ｃ（ＮＲ³）−、ＣＮ、Ｒ³Ｃ（ Ｏ）−、Ｎ₃、−Ｎ（Ｒ³）₂またはＲ⁴ＯＣ（Ｏ）ＮＲ³−から選択されるか、ま たは、 Ｒ¹とＲ²とが一緒に−（ＣＨ₂）ｓ−を形成し、ここに炭素原子の１つがＯ、 Ｓ（Ｏ）ｍ、−ＮＣ（Ｏ）−、ＮＨ及び−Ｎ（ＣＯＲ⁴）−から選択された部分 によって任意に置換されており、 Ｒ³は、水素、アリール、置換アリール、複素環、置換複素環、Ｃ₁−Ｃ₆アル キル及びＣ₃−Ｃ₁₀シクロアルキルから選択され、 Ｒ⁴は、アリール、置換アリール、複素環、置換複素環、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル及 びＣ₃−Ｃ₁₀シクロアルキルから選択され、 ｍは０、１または２、 ｎは１、２、３または４ ｐは０または１〜１００の整数、 ｑは０または１、但しｐが０のときはｑが１であり、 ｒは１〜１０の整数であり、 ｓは３、４または５である。 好ましくは、ｒが１、２または３である。 本発明のコンジュゲートのオリゴペプチドは、前出の用語“Ｈａａ”によって 表される親水性部分で置換された環状アミノ酸を含む。このアミノ酸はまた、式 ： によって示すことができ、 式中の、 Ｒ⁵はＨＯ−及びＣ₁−Ｃ₆アルコキシから選択され、 Ｒ⁶は水素、ハロゲン、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、ＨＯ−及びＣ₁−Ｃ₆アルコキシか ら選択され、 ｔは３または４である。 式： で示される構造は、５員環または６員環の環状アミン部分を表し、このような環 状アミンは任意にフェニル環またはシクロヘキシル環に融合し得る。このような 環状アミン部分の非限定例としては以下の特定構造： がある。 本発明のコンジュゲートは非対称中心を有していてもよく、ラセミ体、ラセミ 混合物及び個別の立体異性体として生成されることができ、光学異性体を含むす べての可能な異性体が本発明に包含される。任意の置換基に２回以上の変異（例 えば、アリール、複素環、Ｒ³など）が発生するとき、各変異の定義は発生毎に 独立している。例えば、ＨＯ（ＣＲ¹Ｒ²）₂−はＨＯＣＨ₂ＣＨ₂−、ＨＯＣＨ₂Ｃ Ｈ（ＯＨ）−、ＨＯＣＨ（ＣＨ₃） ＣＨ（ＯＨ）−などを表す。また、置換基及び／または変異の組合せは、このよ うな組合せの結果として安定な化合物が得られる限りは許容される。 本文中で使用された“アルキル”及びアラルキルのアルキル部分及び同様の用 語は、特定された数の炭素原子を有する分枝状及び直鎖状の飽和脂肪族炭化水素 基を意味する。“アルコキシ”なる用語は、指定された数の炭素原子を有してお り酸素ブリッジを介して結合されたアルキル基を表す。 本文中で使用された“シクロアルキル”なる用語は、特定された数の炭素原子 を有する非芳香族の環状炭化水素基を意味する。シクロアルキル基の例は、シク ロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどである。 “アルケニル”基は、特定された数の炭素原子を有しており１つまたは複数の 二重結合を有している基を意味する。アルケニル基の例は、ビニル、アリル、イ ソプロペニル、ペンテニル、ヘキセニル、ヘプテニル、シクロプロペニル、シク ロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、１−プロペニル、２−ブテ ニル、２−メチル−２−ブテニル、イソプレニル、ファルネシル、ゲラニル、ゲ ラニルゲラニルなどである。 “アルキニル”基は、特定された数の炭素原子を有しており１つの三重結合を 有している基を意味する。アルキニル基の例は、アセチレン、２−ブチニル、２ −ペンチニル、３−ペンチニルなどである。 本文中で使用された“ハロゲン”または“ハロ”なる用語は、フルオロ、クロ ロ、ブロモ及びヨードを意味する。 本文中で使用された“アリール”及びアラルキル及びアロイルのアリール部分 は、各環が７員以下の任意の安定な単環または二環の炭素環であって少なくとも １つの環が芳香族であるものを意味する。このようなアリール要素の例は、フェ ニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、ビフェニル、フェナント リル、アントリルまたはアセナフチルである。 本文中で使用された複素環または複素環式なる用語は、飽和または不飽和であ り炭素原子とＮ、Ｏ及びＳから成るグループから選択された１〜４個のヘテロ原 子とから成る安定な５〜７員環の単環または安定な８〜１１員環の二環の複素環 を表し、上記に定義の複素環のいずれかがベンゼン環に融合した任意の二環の基 を包含する。複素環は任意のヘテロ原子または炭素原子に結合して安定な構造を 形成する。このような複素環要素の 非限定例は、アゼピニル、ベンズイミダゾリル、ベンズイソキサゾリル、ベンゾ フラザニル、ベンゾピラニル、ベンゾチオピラニル、ベンゾフリル、ベンゾチア ゾリル、ベンゾチエニル、ベンズオキサゾリル、クロマニル、シンノリニル、ジ ヒドロベンゾフリル、ジヒドロベンゾチエニル、ジヒドロベンゾチオピラニル、 ジヒドロベンゾチオピラニルスルホン、フリル、イミダゾリジニル、イミダゾリ ニル、イミダゾリル、インドリニル、インドリル、イソクロマニル、イソインド リニル、イソキノリニル、イソチアゾリジニル、イソチアゾリル、イソチアゾリ ジニル、モルホリニル、ナフチリジニル、オキサジアゾリル、２−オキソアゼピ ニル、オキサゾリル、２−オキソピペラジニル、２−オキソピペリジニル、２− オキソピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ピリジル、ピラジニル、ピ ラゾリジニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピロリジニル、ピロ リル、キナゾリニル、キノリニル、キノキサリニル、テトラヒドロフリル、テト ラヒドロイソキノリニル、テトラヒドロキノリニル、チアモルホリニル、チアモ ルホリニルスルホキシド、チアゾリル、チアゾリニル、チエノフリル、チエノチ エニル及びチエニルである。 本文中で使用された“置換Ｃ_1-6アルキル”、“置換アリール”及び“置換複 素環”なる用語は、化合物の残りの部分への結合点に加えて１〜３個の置換基を 含む部分を意味する。このような追加の置換基は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ₃、Ｎ Ｈ₂、Ｎ（Ｃ₁−Ｃ₆アルキル）₂、ＮＯ₂、ＣＮ、（Ｃ₁−Ｃ₆アルキル）Ｏ−、− ＯＨ、（Ｃ₁−Ｃ₆アルキル）Ｓ（Ｏ）_m−、（Ｃ₁−Ｃ₆アルキル）Ｃ（Ｏ）ＮＨ −、Ｈ₂Ｎ−Ｃ（ＮＨ）−、（Ｃ₁−Ｃ₆アルキル）Ｃ（Ｏ）−、（Ｃ₁−Ｃ₆アル キル）ＯＣ（Ｏ）−、Ｎ₃、（Ｃ₁−Ｃ₆アルキル）ＯＣ（Ｏ）ＮＨ−及びＣ₁−Ｃ₂₀ アルキルから選択される。 “１〜１０の整数”なる用語は、数１及び１０とその間の整数とを表す。“１ 〜１００の整数”なる用語は、数１及び１００とその間の整数とを表す。 Ｒ¹とＲ²とが一緒に−（ＣＨ₂）ｓ−を形成するとき、このように定義される 環状部分及びヘテロ原子含有環状部分の非限定例は、式：で示される。 本文中で使用された“ＰＥＧ”なる用語は、指定された数のエチレンオキシサ ブユニットを有する複数のポリエチレングリコール含有置換基を表す。従って、 ＰＥＧ（２）なる用語は、 を表し、ＰＥＧ（６）なる用語は、 を表す。 本文中で使用された“（２Ｒ）（２，３−ジヒドロキシプロ ビオニル）”なる用語は、以下の構造： を表す。 本文中で使用された“（２Ｒ，３Ｓ）２，３，４−トリヒドロキシブタノイル ”なる用語は、以下の構造： を表す。 本発明のコンジュゲートは所与の生物学的応答を変更するために使用できるの で、細胞毒性物質が従来の化学的治療薬に限定されると考えてはならない。例え ば、細胞毒性物質は所望の生物活性を有するタンパク質またはポリペプチドであ ってもよい。このようなタンパク質としては例えば、アブリン、リシンＡ、シュ ードモナス外毒素またはジフテリア毒素のような毒素；腫瘍壊死因子、α−イン ターフェロン、β−インターフェロン、神経成長因子、血小板由来増殖因子、組 織プラスミノー ゲンアクチベーターのようなタンパク質；または、例えばリンホカイン、インタ ーロイキン−１(“ＩＬ−１”）、インターロイキン−２（“ＩＬ−２”）、イ ンターロイキン−６（“ＩＬ−６”）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子 （“ＧＭ−ＣＳＦ”）、顆粒球コロニー刺激因子（“Ｇ−ＣＳＦ”）または他の 成長因子のような生物学的応答調節剤がある。 好ましい細胞毒性物質としては一般的に、アルキル化剤、抗増殖剤、チューブ リン結合剤などがある。好ましいクラスの細胞毒性物質としては例えば、アント ラサイクリンファミリーの薬剤、ビンカアルカロイド系の薬剤、マイトマイシン 、ブレオマイシン、細胞毒性ヌクレオシド、タキサン（ｔａｘａｎｅｓ）、プテ リジンファミリーの薬剤、ジエネン（ｄｉｙｅｎｅｓ）及びボドフィロトキシン がある。これらのクラスの特に有効な成員は例えば、ドキソルビシン、カルミノ マイシン、ダウノルビシン、アミノプテリン、メソトレキセート、メトプテリン 、ジクロロ−メソトレキセート、マイトマイシンＣ、ポルフィロマイシン、５− フルオロウラシル、６−メルカプトプリン、シトシンアラビノシド、ポドフィロ トキシン、または、エトポシドもしくはリン酸エトポシドのようなボドフィロト キシン誘導体、 メルファラン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ロイロシジン、ビンデシン、 ロイロシン、タキソールなどである。他の有効な細胞毒性物質としては、エスト ラムスチン、シスプラチン及ひシクロホスファミドがある。当業者は、本発明の コンジュゲートを形成する化合物の反応を促進するために所望の細胞毒性物質を 化学的に修飾し得る。 本発明に極めて好ましい細胞毒性物質のグループは以下の式で示される薬剤を 含む：式（１）のメソトレキセートのグループ： 式中の、 Ｒ¹²はアミノまたはヒドロキシ； Ｒ⁷は水素またはメチル； Ｒ⁸は水素、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨード； Ｒ⁹はヒドロキシまたはカルボン酸の塩を補完する部分； を表す。式（２）のマイトマイシンのグループ： 式中の、 Ｒ¹⁰は水素またはメチルを表す。式（３）のブレオマイシンのグループ： 式中の、 Ｒ¹¹はヒドロキシ、アミノ、Ｃ₁−Ｃ₃アルキルアミノ、ジ（Ｃ₁−Ｃ₃アルキル ）アミノ、Ｃ₄−Ｃ₆ポリメチレンアミノ、 を表す。式（４）のメルファラン： 式（５）の６−メルカプトプリン： 式（６）のシトシンアラビノシド： 式（７）のポドフィロトキシン： 式中の、 Ｒ¹³は水素またはメチル； Ｒ¹⁴はメチルまたはチエニル； またはそのリン酸塩を表す。式（８）のビンカアルカロイドグループの薬剤： 式中の、 Ｒ¹⁵は、Ｈ、ＣＨ₃またはＣＨＯ； Ｒ¹⁷及びＲ¹⁸が個別に存在するときはＲ¹⁸はＨでＲ¹⁶とＲ¹⁷の一方がエチルで 他方がＨまたはＯＨを表す； Ｒ¹⁷とＲ¹⁸とが結合した炭素と共にオキシラン環を形成するときはＲ¹⁶はエチ ルを表す； Ｒ¹⁹は、水素、（Ｃ₁−Ｃ₃アルキル）−ＣＯまたはクロロ置換（Ｃ₁−Ｃ₃アル キル）−ＣＯを表す。式（９）のジフルオロヌクレオシド： 式中の、 Ｒ²¹は式： のいずれか１つによって示される塩基であり、 式中の、 Ｒ²²は水素、メチル、ブロモ、フルオロ、クロロまたはヨード； Ｒ²³は−ＯＨまたは−ＮＨ２； Ｒ²⁴は水素、ブロモ、クロロまたはヨードを表す。式（１０）のアントラサイクリン抗生物質： 式中、 Ｒａは、−ＣＨ₃、−ＣＨ₂ＯＨ、−ＣＨ₂ＯＣＯ（ＣＨ₂）₃ＣＨ₃または−ＣＨ₂ ＯＣＯＣＨ（ＯＣ₂Ｈ₅）₂であり、 Ｒ^bは、−ＯＣＨ₃、−ＯＨまたは−Ｈであり、 Ｒ^cは、−ＮＨ₂、−ＮＨＣＯＣＦ₃、４−モルホリニル、３−シアノ−４−モ ルホリニル、１−ピペリジニル、４−メトキシ−１−ビペリジニル、ベンジルア ミン、ジベンジルアミン、シアノメチルアミンまたは１−シアノ−２−メトキシ エチルアミンであり、 Ｒ^dは、−ＯＨ、−ＯＴＨＰまたは−Ｈであり、 Ｒ^eは、−ＯＨまたは−Ｈであるが、Ｒ⁵が−ＯＨまたは−ＯＴＨＰであるとき はＲ⁶は−ＯＨでない。式（１１）のエストラムスチン： 式（１２）のシクロホスファミド： 最も好ましい薬剤は上記の式（１０）のアントラサイクリン抗生物質である。 当業者は、この構造式が当業界で異なる属名または種名をもつ薬剤または薬剤の 誘導体から成る化合物を包含することを理解されよう。以下の表１は本発明で特 に好適に使用される多数のアントラサイクリン薬剤をその属名または種名と共に 表す。 表１に示した化合物のうちで最も好ましい細胞毒性物質はドキソルビシン、ビ ンブラスチン及びデスアセチルビンブラスチンである。ドキソルビシン（本文中 ては“ＤＯＸ”とも呼ぶ）は、式中のＲａが−ＣＨ₂ＯＨ、Ｒ^bが−ＯＣＨ₃、Ｒ^c が−ＮＨ₂、Ｒ^dが−ＯＨ及びＲ^eが−Ｈを表す式（１０）のアントラサイクリン である。 細胞毒性物質が好ましい細胞毒性物質ドキソルビシンから成る本発明のオリゴ ペプチド−細胞毒性物質のコンジュゲートは以下の一般式Ｉ： によって示される化合物または医薬として許容されるその塩であり、 式中の、 オリゴペプチドは、遊離した前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）によって選択的に認 識され、遊離した前立腺特異的抗原の酵素活性によってタンパク質分解的に開裂 され得るオリゴペプチドであって、このオリゴペプチドは式： の環状アミノ酸を含み、 Ｃ末端カルボニルはドキソルビシンのアミンに共有結合されており、 Ｒは、 （ａ）水素、 （ｂ）−（Ｃ＝Ｏ）Ｒ^1a、 （ｃ） （ｄ） （ｅ） から選択され、 Ｒ¹及びＲ²は独立に、水素、ＯＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆アルコキシ、 Ｃ₁−Ｃ₆アラルキル及びアリールから選択され、 Ｒ^1aは、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、ヒドロキシル化アリール、ポリヒドロキシル化ア リールまたはアリールであり、 Ｒ⁵は、ＨＯ−及びＣ₁−Ｃ₆アルコキシから選択され、 Ｒ⁶は、水素、ハロゲン、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、ＨＯ−及びＣ₁−Ｃ₆アルコキシ から選択され、 ｎは、１、２、３または４であり、 ｐは、０または１〜１００の整数であり、 ｑは、０または１であり、ｐが０ならばｑが１であり、 ｒは、１〜１０の整数であり、 ｔは、３または４である。 オリゴペプチド−細胞毒性物質のコンジュゲートまたはその光学異性体または 医薬として許容されるその塩の好ましい実施態様においては、 環状アミノ酸が、 であり、 Ｒは、 （ａ）水素、 （ｂ）−（Ｃ＝Ｏ）Ｒ^1a、 （ｃ） （ｄ） （ｅ） （ｆ） （ｇ）から選択され、 Ｒ¹及びＲ²は独立に、水素、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル及びアリールから選択され、 Ｒ^1aは、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルまたはアリールであり、 ｎは１、２、３または４であり、 ｎ’は、０、１、２または３であり、 ｐは、０または１〜１４の整数であり、 ｑは０または１であり、ｐが０ならばｑは１であり、 ｒは、１〜１０の整数であり、 ｔは、３である。 以下の化合物は、本発明のオリゴペブチド−細胞毒性物質のコンジュゲートま たはその光学異性体または医薬として許容されるその塩の特定例である： 式中のＸは： を表す。 細胞毒性物質が好ましい細胞毒性物質ビンブラスチンまたはデスアセチルビン ブラスチンである本発明のオリゴペプチド−細胞毒性物質のコンジュゲートは以 下の一般式ＩＩ：で示される化合物または医薬として許容されるその塩であり、 式中の、 オリゴペプチドは、遊離した前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）によって特異的に認 識され、遊離した前立腺特異的抗原の酵素活性によってタンパク質分解的に開裂 され得るオリゴペプチドであり、このオリゴペブチドは、式： の環状アミノ酸を含み、 ＸＬは、−ＮＨ−（ＣＨ₂）ｕ−ＮＨ−であり； Ｒは、 （ａ）水素、 （ｂ）−（Ｃ＝Ｏ）Ｒ^1a、 （ｃ） （ｄ） （ｅ） から選択され、 Ｒ¹及びＲ²は独立に、水素、ＯＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆アルコキシ、 Ｃ₁−Ｃ₆アラルキル及びアリールから選択され、 Ｒ^1aは、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、ヒドロキシル化アリール、ポリヒドロキシル化ア リールまたはアリールであり、 Ｒ¹⁹は、水素、（Ｃ₁−Ｃ₃アルキル）−ＣＯまたはクロロ置換（Ｃ₁−Ｃ₃アル キル）−ＣＯであり、 ｎは、１、２、３または４であり、 ｐは、０または１〜１００の整数であり、 ｑは、０または１であり、ｐが０ならばｑは１であり； ｒは、１、２または３であり、 ｔは、３または４であり、 ｕは、１、２、３、４または５である。 細胞毒性物質が好ましい細胞毒性物質ビンブラスチンまたはデスアセチルビン ブラスチンである本発明のオリゴペプチド−細胞毒性物質のコンジュゲートの別 の実施態様は、一般式ＩＩＩ： で示される化合物または医薬として許容されるその塩であり、 式中の、 オリゴペプチドは遊離した前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）によって特異的に認識 され、遊離した前立腺特異的抗原の酵素活性によってタンパク質分解的に開裂さ れ得るオリゴペプチドであり、このオリゴペプチドは式： の環状アミノ酸を含み、 Ｒｇ及びＲｈは独立に、水素、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル−ＯＨ、 Ｃ₁−Ｃ₆アルキル−ジ−ＯＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル−トリ−ＯＨ、及び、 から選択され、但しＲ^d及びＲ^eの少なくとも１つが水素またはＣ₁−Ｃ₆アルキル でないか、または、 Ｒ^gとＲ^hとが一緒に−ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＣＨ₂ＣＨ₂−ジラジカルを形成し、 Ｒ¹⁹は、水素、（Ｃ₁−Ｃ₃アルキル）−ＣＯまたはクロロ置換（Ｃ₁−Ｃ₃アル キル）−ＣＯであり、 ｐは、０または１〜１００の整数であり、 ｑは０または１であり、ｐが０ならばｑは１である。 以下の化合物は、本発明のオリゴペプチド−デスアセチルビンブラスチンのコ ンジュゲートまたはその光学異性体または医薬として許容されるその塩の特定例 である： 本発明のオリゴペプチド、ペプチドサブユニット及びペプチド誘導体（いずれ も“ペプチド”と呼ばれる）は、慣用のペプチド合成法、好ましくは固相法によ って構成アミノ酸から合成できる。次いでペプチドを逆相高性能液体クロマトグ ラフイー（ＨＰＬＣ）によって精製する。 標準的ペプチド合成法は例えば、以下の著作に開示されている：Ｓｃｈｒｏｅ ｄｅｒら，“Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ”，Ｖｏｌ．Ｉ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐ ｒｅｓｓ １９６５；Ｂｏｄａｎｓｋｙら，“Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓ ｉｓ”,Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９６６；ＭｃＯ ｍｉｅ（編）“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，１９７３；Ｂａｒａｎｙら ，“ＴｈｅＰｅｐｔｉｄｅｓ：Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏ ｌｏｇｙ”２，Ｃｈａｐｔｅｒ １ ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８ ０及びＳｔｅｗａｒｔら，“Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎ ｔｈｅｓｉｓ”，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃ ａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９８４。これらの論文の教示は参照によっ て本発明に含まれるものとする。 標準的ペプチド合成法によって本発明のコンジュゲートに組み込まれる親水性 置換基を有する適宜置換された環状アミノ酸自体は市販製品でもよく、または当 業界に公知の技術もしくは本文中に記載の技術によって容易に合成される。例え ば、適宜置換されたプロリンの合成は以下の論文及びその引用文献に記載されて いる：Ｊ．Ｅｚｑｕｅｒｒａら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６０：２９２５−２９ ３０（１９９５）；Ｐ．Ｇｉｌｌ ａｎｄ Ｗ．Ｄ．Ｌｕｂｅｌｌ，Ｊ．Ｏｒｇ ．Ｃｈｅｍ．６０：２６５８−２６５９（１９９５）；及びＭ．Ｗ．Ｈｏｌｌａ ｄａｙら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３４：４５７−４６１（１９９１）。これら の論文の教示は参照によって本発明に含まれるものとする。 本発明の化合物の医薬として許容される塩は、例えば無毒性の無機または有機 の酸から形成された本発明化合物の慣用の無毒性塩を包含する。このような慣用 の無毒性塩の例としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、 硝酸などの無機酸に由来の塩、及び、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコー ル酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエ ン酸、アスコルビン酸、パモ酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル 酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２−アセトキシ 安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタン二スルホ ン酸、シュウ酸、イセチオン酸、トリフルオロ酢酸などの有機酸に由来の塩があ る。 ＰＳＡ開裂部位を含むオリゴペプチドと細胞毒性物質とから成る本発明のコン ジュゲートはまた、医薬品化学業界で公知の技術によって合成され得る。例えば 、細胞毒性物質の遊離アミン部分をオリゴペプチドのカルボキシル末端に共有結 合させてアミド結合を形成してもよい。また、オリゴペプチドのアミン部分と細 胞毒性物質のカルボキシル部分とを共有結合させることによってアミド結合を形 成してもよい。これらの目的で、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル） −１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート(ＨＢＴＵ として公知)及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物(ＨＯＢＴとして公知 )、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ），Ｎ−エチル−（３−ジメチル アミノプロピル）−カルボジイミド（ＥＤＣ）、ジフェニルホスホリルアジド（ ＤＰＰＡ）、 ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−（ジメチルアミノ）ホスホニ ウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）などの試薬を単独でまたは組合せて 使用し得る。 更に、本発明のコンジュゲートはＰＳＡ開裂部位と細胞毒性物質との非ペプチ ジル結合によって形成され得る。例えば、細胞毒性物質のヒドロキシル部分を介 して細胞毒性物質をオリゴペプチドのカルボキシル末端に共有結合させてエステ ル結合を形成してもよい。このためには、ＨＢＴＵとＨＯＢＴとの併用、ＢＯＰ とイミダゾールとの併用、ＤＣＣとＤＭＡＰとの併用などの方法で試薬を使用し 得る。また、カルボン酸をニトロフェニルエステルなどの形成によって活性化し 、ＤＢＵ（１，８−ジアザビシクロ〔５，４，０〕ウンデソ−７−エン）の存在 下で反応させてもよい。 本発明のコンジュゲートはまた、リンカーユニットを介してオリゴペプチドを 細胞毒性物質に結合させることによって形成し得る。このようなリンカーユニッ トとしては例えばビスカルボニルアルキルジラジカルがあり、この場合、細胞毒 性物質のアミン部分がリンカーユニットと結合してアミド結合を形成し、オリゴ ペプチドのアミノ末端がリンカーユニットの他端と結合 して同じくアミド結合を形成する。逆に、細胞毒性物質のカルボニル部分がリン カーユニットのアミンの一方に共有結合し、リンカーユニットの他方のアミンが オリゴペプチドのＣ末端に共有結合するジアミノアルキルジラジカルリンカーユ ニットも有用であろう。遊離ＰＳＡが存在しないときは生理的環境に安定である がＰＳＡのタンパク質分解性開裂部位が開裂されると開裂し得る他のリンカーユ ニットも考察できる。更に、ＰＳＡのタンパク質分解性開裂部位が開裂されると 細胞毒性物質に結合した状態で維持されるが非修飾の細胞毒性物質に比べて開裂 後の細胞毒性物質誘導体の細胞毒性活性が有意に低下しないようなリンカーユニ ットも使用し得る。 本発明の化合物の合成においては、分子の他の部分に所望の反応を惹起すると きに出発化合物及び中間体の種々の反応性官能基を保護する必要があることは当 業者に理解されよう。所望の反応の完了後または所望の任意の時期に、通常は、 例えば加水分解手段または水素添加手段によってこのような保護基を除去する。 このような保護及び脱保護の段階は有機化学で常用の手段である。本発明化合物 の製造中に有用な保護基の教示に関しては、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐ ｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ，ＭｃＯｍｉｅ，ｅｄ．，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，ＮＹ（１９７３）；及びＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐ ｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ，Ｇｒｅｅｎｅ，ｅｄ．，Ｊｏ ｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ，ＮＹ（１９８１）を参照するとよい。 非限定例を挙げると、有用なアミノ保護基は例えば、ホルミル、アセチル、ジ クロロアセチル、プロピオニル、ヘキサノイル、３，３−ジエチルヘキサノイル 、γ−クロロブトリルなどのＣ₁−Ｃ₁₀アルカノイル基；ｔｅｒｔ−ブトキシカ ルホニル、ベンジルオキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、４−ニトロベ ンジルオキシカルボニル、フルオレニルメチルオキシカルボニル、シンナモイル オキシカルボニルなどのＣ₁−Ｃ₁₀アルコキシカルボニル及びＣ₅−Ｃ₁₅アリール オキシカルボニル；２，２，２−トリクロロエトキシカルボニルのようなハロ− （Ｃ₁−Ｃ₁₀）−アルコキシカルボニル基；ベンジル、フェネチル、アリル、ト リチルなどのＣ₁−Ｃ₁₅アリールアルキル及びアルケニル基などである。他の常 用のアミノ保護基は、メチルまたはエチルアセトアセテートのようなβ−ケト− エステ ルで製造されるエナミンの形態の保護基である。 有用なカルボキシ保護基は例えば、メチル、ｔｅｒｔ−ブチル、デシルのよう なＣ₁−Ｃ₁₀アルキル基；２，２，２−トリクロロエチル及び２−ヨードエチル のようなハロ−Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル；ベンジル、４−メトキシベンジル、４−ニ トロベンジル、トリフェニルメチル、ジフェニルメチルのようなＣ₅−Ｃ₁₅アリ ールアルキル；アセトキシメチル、プロピオンオキシメチルなどのＣ₁−Ｃ₁₀ア ルカノイルオキシメチル；及び、フェンアシル、４−ハロフェンアシル、アリル 、ジメチルアリル、トリメチルシリルのようなトリ−（Ｃ₁−Ｃ₃アルキル）シリ ル、β−ｐ−トルエンスルホニルエチル、β−ｐ−ニトロフェニルチオエチル、 ２，４，６−トリメチルベンジル、β−メチルチオエチル、フタルイミドメチル 、２，４−ジニトロ−フェニルスルフェニル、２−ニトロベンズヒドリルなどの 基及び近縁の基である。 また、有用なヒドロキシ保護基は例えば、ホルミル基、クロロアセチル基、ベ ンジル基、ベンズヒドリル基、トリチル基、４−ニトロベンジル基、トリメチル シリル基、フェンアシル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、メトキシメチル基、テトラヒ ドロピラニ ル基などである。 以下の反応スキームは、好ましい実施態様としてアントラサイクリン抗生物質 ドキソルビシンとオリゴペプチドとの組合せを用いた本発明のコンジュゲートの 合成を示す。 反応スキームＩ反応スキームＩＩ反応スキームＩＩＩ反応スキームＩＶ反応スキームＶ 反応スキームＶＩは、オリゴペプチドをビンカアルカロイド細胞毒性物質ビン ブラスチンと併用する本発明の治療方法で使用されるコンジュケートの製造を示 す。オリゴペプチドのＮ末端をビンブラスチンに結合する方法は従来文献に開示 されている（Ｓ．Ｐ．Ｋａｎｄｕｋｕｒｉら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２８：１ ０７９−１０８８（１９８５））。 反応スキームＶＩＩはビンブラスチンがオリゴペプチドのＣ末端に結合した本 発明のオリゴペプチドとビンカアルカロイド細胞毒性物質ビンブラスチンとのコ ンジュゲートの製造を示す。１，３−ジアミノプロパンをリンカーとして使用し た場合だけを示す。ビンブラスチンのカルボニルとオリゴペプチドのＣ末端との 間に使用される他のスペーサーユニットも考えられる。更に、反応スキームＶＩ Ｉは、リンカーユニットを付加した後でＣ−４−位のヒドロキシ部分を再度アセ チル化するコンジュゲートの合成を示す。出願人らは、デスアセチルビンブラス チンコンジュゲートも有効であり、反応スキームＶＩＩからリンカーの第一アミ ンを保護し中間体を無水酢酸と反応させ次いでアミンを脱保護する段階を削除す ることによって製造できることを知見した。他の位置のオリゴペプチドとビンブ ラスチンの 官能基とのコンジュゲーションは当業者に容易であり、前立腺癌の治療に有用な 化合物を与えると期待できる。 また、本発明の治療方法で使用される親水性置換基を有する環状アミノ酸から 成るオリゴペプチドのＮ末端がビンブラスチンのような１つの細胞毒性物質に結 合され、同時にＣ末端が同じ細胞毒性物質またはドキソルビシンのような異なる 細胞毒性物質に結合されたコンジュゲートを製造し得ることも理解されよう。反 応スキームＶＩＩＩはこのような多重細胞毒性物質コンジュゲートの合成を示す 。このような多重細胞毒性コンジュゲートは１種類だけの細胞毒性物質を含むコ ンジュケートよりも有利であろう。 反応スキームＶＩ反応スキームＶＩ（続き）反応スキームＶＩＩ反応スキームＶＩＩ（続き）反応スキームＶＩＩＩ反応スキームＶＩＩＩ（続き）本発明のオリゴペプチド−細胞毒性物質のコンジュゲートは、本発明のコンジュ ゲートと医薬として許容される担体、賦形剤または希釈剤とから成る医薬組成物 の形態で患者に投与される。本文中で使用された“医薬として許容される”なる 用語は、ヒト、ウマ、ブタ、ウシ、ネズミ、イヌ、ネコなどの温血動物または他 の哺乳動物並びに鳥類またはその他の温血動物の治療または診断に有用な担体、 賦形剤または希釈剤などの物質を意味する。好ましい投与経路は、非経口、特に 、静注、筋肉内、皮下、腹腔内またはリンパ管内経路である。このような製剤は 、当業者に周知の担体、希釈剤または賦形剤を用いて調製できる。調製に関して は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉ ｅｎｃｅｓ ，１６ｔｈ ｅｄ．，１９８０,Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｏｓｏｌら編、を参照するとよい。このような組成物は、血清 タンパク質例えばヒト血清アルブミンのようなタンパク質、リン酸塩、その他の 塩または電解質のようなバッファまたは緩衝用物質などを含有する。適当な希釈 剤は例えば、無菌水、等張生理食塩水、希釈デキストロース水溶液、グリセリン 、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなどの多価アルコー ルまたはその混合物である。組成物は、フェネチルアルコール、メチル及びプロ ピルパラベン、チメルソールなどの防腐剤を含有し得る。所望の場合、組成物は 、メタ亜硫酸水素ナトリウムまたは亜硫酸水素ナトリウムのような酸化防止剤を 約０．０５〜約０．２０重量％含有し得る。 本文中で使用された“組成物”なる用語は、特定された成分を特定量で含有す る生成物、及び、特定された量の特定成分の組合せによって直接または間接に得 られる任意の生成物を意味する。 静脈内投与のためには好ましくは、患者に対するコンジュゲートの投与量が約 ０．０１〜約１ｇになるように組成物を調製する。好ましくは、コンジュゲート の投与量は約０．２ｇ〜約１ｇの範囲であろう。本発明のコンジュゲートは、治 療すべき疾病状態または調節すべき生物作用、コンジュゲートの投与方法、患者 の年齢、体重及び病状などの要因並びに主治医の判断する他の要因に応じて広い 投与量の範囲で有効である。従って、所与の患者に投与される量は患者毎に個々 に決定する必要がある。 特定の試薬及び反応条件を以下の実施例で概説するが、本発 明の要旨及び範囲に包含される変更が可能であることは当業者に理解されよう。 従って以下の実施例に示す調製物及び製造方法は本発明の非限定的な代表例であ ると理解されたい。実施例 実施例１ ＰＳＡ介在開裂部位を含むオリゴペプチドの合成： Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓの４３０Ａモデルの全自動ペプチドシ ンセサイザーを使用し、二重結合によるアミノ酸導入プロトコルを用い、ブロッ クしたオリゴペプチドを固相合成によって製造した。液体フッ化水素酸で処理し てオリゴペプチドを脱保護し樹脂支持体から分離した。逆相Ｃ１８シリカカラム で、水性０．１％トリフルオロ酢酸／アセトニトリル勾配を用い、分取高圧液体 クロマトグラフィーによってオリゴペプチドを精製した。オリゴペプチドの同定 及び均質性は、アミノ酸組成解析、高圧液体クロマトグラフイー、高速原子衝撃 質量スペクトル分析によって確認した。この方法で合成したオリゴペプチドを表 ２に示す。 ４−トランス−Ｌ−Ｈｙｐはトランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンである。 ジヒドロ−Ｐｒｏは３，４−ジヒドロ−Ｌ−プロリンである。実施例２ 遊離ＰＳＡによるオリゴペプチド認識の評価： 実施例１に記載の手順で製造したオリゴペプチドを個別に、ＰＳＡ消化バッフ ァ（１２ｍＭのトリス（ヒドロキシメチル）−アミノメタン，ｐＨ８．０、２５ ｍＭのＮａＣｌ、０．５ｍＭのＣａＣｌ₂）に溶解し、溶液をモル比１００：１ でＰＳＡに添加した。あるいは、ＰＳＡ消化バッファとして５０ｍＭのトリス（ ヒドロキシメチル）−アミノメタン，ｐＨ７．４、１４０ ｍＭのＮａＣｌを使用した。種々の反応時間後、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を 最終濃度１％（容量／容量）まで加えて反応を停止させる。あるいは、１０ｍＭ のＺｎＣｌ₂を加えて反応を停止させる。反応停止後の反応液を、逆相Ｃ１８カ ラムで、水性０．１％ＴＦＡ／アセトニトリル勾配を用いるＨＰＬＣによって分 析した。評価の結果を表２に示す。表２は、表示のオリゴペプチドを酵素活性の 遊離ＰＳＡによって５０％開裂するために要した時間の量（分）を示す。遊離ア ミン部分（即ち、ｈＡｒｇ、Ｏｒｎ，Ｌｙｓ及び／または３ＰＡＬ）を含むオリ ゴペプチドはＴＦＡ塩として試験した。他の全部のオリゴペプチドは中性化合物 として試験した。実施例３ 〔Ｎ−Ａｃ−（４−トランス−Ｌ−Ｈｙｐ）〕−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｃｈｇ−Ｇｌ ｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ（配列６８）の製造 ： 段階Ａ：〔Ｎ−Ａｃ−（４−トランス−Ｌ−Ｈｙｐ（Ｂｚｌ）〕−Ａｌａ−Ｓｅｒ（Ｂｚ ｌ）Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）Ｌｅｕ−ＰＡＭ樹脂（３−１） ０．５ミリモル（０．６７ｇ）のＢｏｃ−Ｌｅｕ−ＰＡＭ樹脂を出発材料とし 、保護されたペプチドを４３０Ａ ＡＢＩペプチドシンセサイザーで合成した。 プロトコルでは、保護されたアミノ酸：Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）、Ｂｏｃ−Ｇ ｌｎ、Ｂｏｃ−Ｃｈｇ、Ｂｏｃ−Ａｌａ、Ｎ−Ｂｏｃ−（４−トランス−Ｌ−Ｈ ｙｐ（Ｂｚｌ））の各々を４倍の過剰量（２ミリモル） で使用した。結合はメチル−２−ピロリジノン中のＤＣＣ及びＨＯＢＴ活性化を 用いて行った。Ｎ末端アセチル基の導入には酢酸を使用した。メチレンクロリド 中の５０％ＴＦＡを使用してＢｏｃ基を除去し、ＴＦＡ塩をジイソプロピルエチ ルアミンで中和した。合成の完了後、ペプチド樹脂を乾燥すると中間体３−１が 得られた。段階Ｂ ：〔Ｎ−Ａｃ−（４−トランス−Ｌ−Ｈｙｐ）〕−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｃｈｇ−Ｇｌ ｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−ＯＨ（３−２） １．２ｇの保護されたペプチド樹脂（３−１）をアニソール（２ｍｌ）の存在 下のＨＦ（２０ｍｌ）で０℃で１時間処理した。ＨＦの蒸発後、残渣をエーテル で洗浄し、濾過し、Ｈ₂Ｏ（２００ｍｌ）で抽出した。濾液を凍結乾燥すると中 間体３−２が得られた。段階Ｃ ：〔Ｎ−Ａｃ−（４−トランス−Ｌ−Ｈｙｐ）〕−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｃｈｇ−Ｇｌ ｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ １． １５７ｇ（１．４５ミリモル）の上記中間体（３−２）をＤＭＳＯ（３ ０ｍｌ）に溶解し、ＤＭＦ（３０ｍｌ）で希釈 した。溶液に、５１６ｍｇ（０．８９ミリモル）のドキソルビシン、０．３１０ ｍｌのジイソプロピルエチルアミン（１．７８ミリモル）を順次添加した。撹拌 溶液を冷却し（０℃）、０．２７６ｍｌのジフェニル−ホスホリルアジド（１． ２８ミリモル）を添加した。３０分後、追加の０．２７６ｍｌ（１．２８ミリモ ル）のＤＰＰＡを添加し、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）でｐＨを〜 ７．５（ｐＨペーパー）に調整した。冷却した反応液（０℃）のｐＨをＤＩＥＡ で〜７．５に更に３時間維持し、反応液を０〜４℃で一夜撹拌した。１８時間後 、反応液（システムＡを用いた分析用ＨＰＬＣによって反応の完了を確認）を濃 縮して油にした。未精製の生成物をバッファＡ＝０．１％のＮＨ₄ＯＡｃ−Ｈ₂Ｏ ；Ｂ＝ＣＨ₃ＣＮを用いる分取ＨＰＬＣによって精製した。未精製の生成物を４ ００ｍｌの１００％のバッファＡに溶解し、濾過し、Ｃ−１８逆相ＨＰＬＣラジ アル圧縮カラム（Ｗａｔｅｒｓ，Ｄｅｌｔａ−Ｐａｋ，１５μＭ，１００Åで精 製した。１００％Ａから６０％Ａまでの段階的勾配を流速７５ｍｌ／分（ＵＶ＝ ２１４ｎｍ）で使用した。生成物の均質な画分（システムＡを用いるＨＰＬＣで 評価）をプールし凍結乾燥した。生成物をＨ₂Ｏ（３００ｍｌ） に溶解し、濾過し、凍結乾燥すると、精製された標題化合物が得られた。システムＡを用いるＨＰＬＣ条件 カラム：Ｖｙｄａｃ１５ｃｍ＃２１８ＴＰ５４１５，Ｃ１８ 溶出剤：９５：５（Ａ：Ｂ）〜５：９５（Ａ：Ｂ）の勾配（４５分間） 流速：１．５ｍｌ／分 波長：２１４ｎＭ，２５４ｎＭ 保持時間：ドキソルビシン＝１３．６６分 Ａｃ−Ｈｙｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−ＯＨ＝１０ ．８分 Ａｃ−Ｈｙｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｃｈｇ−Ｇ１ｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ＝１ ８．２分物理的特性 段階Ｃの生成物は以下の物理的／化学的特性を有している。 分子式：Ｃ₆₂Ｈ₈₅Ｎ₉Ｏ₂₃ 分子量：１３２３．６ 高分解能ＥＳ質量スペクトル：１３４１．７（ＮＨ₄ ⁺） ＨＰＬＣ：システムＡ カラム：Ｖｙｄａｃ１５ｃｍ＃２１８ＴＰ５４１５，Ｃ１８ 溶出液：９５：５（Ａ：Ｂ）〜５：９５（Ａ：Ｂ）の勾配（４５分間）。Ａ＝０ ．１％ＴＦＡ／Ｈ₂Ｏ，Ｂ＝０．１％ＴＦＡ／アセトニトリル 流速：１．５ｍｌ／分 波長：２１４ｎｍ，２５４ｎｍ 保持時間：１８．２分 アミノ酸組成分析１：理論 測定 Ａｌａ（１） １．００ Ｓｅｒ（２） １．８８ Ｃｈｇ（１） ０．９１ Ｇｌｎ²（１） １．００（Ｇｌｕとして） Ｈｙｐ（１） ０．８０ Ｌｅｕ（１） １．０１ ペプチド含量：０．６５７μモル／ｍｇ 注：¹２０時間、１００℃、６ＮのＨＣｌ ²ＧｌｎがＧｌｕに変換されている。 表３は、適当なアミノ酸残基及びブロッキング基アシル化を 使用して実施例３に記載の手順で製造した他のペプチド−ドキソルビシンのコン ジュゲートを示す。 実施例４ 〔Ｎ−グルタリル−（４−トランス−Ｌ−Ｈｙｐ）〕−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｃｈｇ −Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ（配列７１） 段階Ａ：〔Ｎ−グルタリル（ＯＦｍ）−（４−トランス−Ｌ−Ｈｙｐ）〕−Ａｌａ−Ｓｅ ｒ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−ＰＡＭ樹脂 ０．５ミリモル（０．６７ｇ）のＢｏｃ−Ｌｅｕ−ＰＡＭ樹脂を出発材料とし 、保護されたペプチドを４３０Ａ ＡＢＩペプチドシンセサイザーで合成した。 プロトコルでは、保護されたアミノ酸：Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）、Ｆｍｏｃ −Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）、Ｆｍｏｃ−Ｃｈｇ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ、Ｂｏｃ−（４−ト ランス−Ｌ−Ｈｙｐ）の各々を４倍の過剰量（２ミリモル）で使用した。メチル −２−ピロリジノン中のＤＣＣ及びＨＯＢＴ活性化を使用して結合させた。Ｎ− 末端グルタリル基の導入にはグルタル酸のモノフルオレニルメチルエステル〔グ ルタリル（ＯＦｍ）〕を中間体として使用した。２０％ピペリジンを使用してＦ ｍｏｃ基を除去した。酸感受性保護基Ｂｏｃ、Ｔｒｔ及びｔＢｕをメチレンクロ リド中の５０％ＴＦＡで除去した。ＴＦＡ塩をジイソプロピルエチルアミンで中 和した。合成の終了後、ペプチド樹脂を乾燥すると標題化合物が得られた。段階Ｂ ：〔Ｎ−グルタリル（ＯＦｍ）−（４−トランス−Ｌ−Ｈｙｐ）〕−Ａｌａ−Ｓｅ ｒ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−ＯＨ 段階Ａで得られた保護されたペプチド樹脂１．２ｇをＨＦ（２０ｍｌ）と共に 、アニソール（２ｍｌ）の存在下で０℃で１時間処理した。ＨＦの蒸発後、残渣 をエーテルで洗浄し、濾過し、ＤＭＦで抽出した。ＤＭＦ濾液（７５ｍｌ）を濃 縮乾固し、Ｈ₂Ｏで研和した。不溶性生成物を濾過し、乾燥すると、標題化合物 が得られた。段階Ｃ ：〔Ｎ−グルタリル（ＯＦｍ）−（４−トランス−Ｌ−Ｈｙｐ）〕−Ａｌａ−Ｓｅ ｒ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ 上記の段階Ｂで得られた中間体（１．３３ｇ，１．２７ミリモル）をＤＭＳＯ （６ｍｌ）及びＤＭＦ（６９ｍｌ）に溶解した。溶液にドキソルビシン塩酸塩５ ９９ｍｇ（１．０３ミリモル）を添加し、次いで３７６μｌのジイソプロピルエ チルアミン（２．１６ミリモル）を添加した。撹拌溶液を冷却し（０℃）、３２ ４μｌのジフェニルホスホリルアジド（１．５ミリモル）を添加した。３０分後 、追加の３２４μｌのＤＰＰＡを添加 し、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）でｐＨを〜７．５（ｐＨペーパー ）に調整した。冷却した反応液（０℃）のｐＨをＤＩＥＡでｐＨ〜７．５に更に ３時間維持し、反応液を０〜４℃で一夜撹拌した。反応液（システムＡを用いた 分析用ＨＰＬＣで反応完了を確認）を濃縮すると油状の標題化合物が得られた。段階Ｄ ：Ｎ−グルタリル−（４−トランス−Ｌ−Ｈｙｐ）〕−Ａｌａ−Ｓｅｒ− Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ 上記の段階Ｃで得られた生成物をＤＭＦ（５４ｍｌ）に溶解し、冷却し（０℃ ）、１４ｍｌのピペリジンを添加した。溶液を濃縮乾固し、分取ＨＰＬＣで精製 した。（Ａ＝０．１％ＮＨ₄ＯＡｃ−Ｈ₂Ｏ；Ｂ＝ＣＨ₃ＣＮ）。未精製の生成物 を１００ｍｌの８０％バッファＡに溶解し、濾過し、Ｃ−１８逆相ＨＰＬＣラジ アル圧縮カラム（Ｗａｔｅｒｓ，Ｄｅｌｔａ−Ｐａｋ， １５μ，１００Å）で 精製した。８０％Ａから６７％Ａまでの段階的勾配を流速７５ｍｌ／分（ｕｖ＝ ２１４ｎｍ）で使用した。生成物の均質な画分（システムＡを用いるＨＰＬＣで 評価）をプールし凍結乾燥した。生成物を上記ＨＰＬＣカラムを用いて更に精製 した。バッファＡ＝１５％酢酸−Ｈ₂Ｏ；Ｂ＝１５％ 酢酸−メタノール。生成物を１００ｍｌの２０％バッファＢ／８０％バッファＡ に溶解し、精製した。２０％Ｂから８０％Ｂまでの段階的勾配を流速７５ｍｌ／ 分（ｕｖ＝２６０ｎｍ）で使用した。生成物の均質な画分（システムＡを用いる ＨＰＬＣで評価）をプールし、濃縮し、Ｈ₂Ｏから凍結乾燥すると、精製された 標題化合物が得られた。システムＡを用いるＨＰＬＣ条件 カラム：Ｖｙｄａｃ１５ｃｍ＃２１８ＴＰ５４１５，Ｃ１８ 溶出剤：９５：５（Ａ：Ｂ）〜５：９５（Ａ：Ｂ）の勾配（４５分間）。Ａ＝０ ．１％ＴＦＡ／Ｈ₂Ｏ，Ｂ＝０．１％ＴＦＡ／アセトニトリル 流速：１．５ｍｌ／分 波長：２１４ｎｍ，２５４ｎｍ 保持時間：ドキソルビシン＝１３．６６分 〔Ｎ−グルタリル（ＯＦｍ）−（４−トランス−Ｌ−Ｈｙｐ）〕−Ａｌａ−Ｓｅ ｒ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−ＯＨ＝１９．６６分 〔Ｎ−グルタリル（ＯＦｍ）−（４−トランス−Ｌ−Ｈｙｐ）〕−Ａｌａ−Ｓｅ ｒ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ ＝２４．８分 〔Ｎ−グルタリル−（４−トランス−Ｌ−Ｈｙｐ）〕−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｃｈｇ −Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ＝１８．３分 高分解能ＥＳ質量スペクトル：１４１８．７８（Ｎａ⁺） ＨＰＬＣ：システムＡ カラム：Ｖｙｄａｃ１５ｃｍ＃２１８ＴＰ５４１５，Ｃ１８ 溶出液：９５：５（Ａ：Ｂ）〜５：９５（Ａ：Ｂ）の勾配（４５分間）。Ａ＝０ ．１％ＴＦＡ／Ｈ₂Ｏ，Ｂ＝０．１％ＴＦＡ／アセトニトリル 流速：１．５ｍｌ／分 波長：２１４ｎｍ，２５４ｎｍ 保持時間：１８．３分 アミノ酸組成分析１：理論 測定 Ａｌａ（１） ０．９９ Ｓｅｒ（２） ２．０２ Ｃｈｇ（１） １．００ Ｇ１ｎ²（１） １．０１（Ｇｌｕとして） Ｈｙｐ （１） ０．９９ Ｌｅｕ （１） １．００ ペプチド含量：０．６８２μモル／ｍｇ 注：¹２０時間、１００℃、６ＮのＨＣｌ ²ＧｌｎがＧｌｕに変換されている。 表４は、適当なアミノ酸残基及びブロッキング基アシル化を使用して実施例４ に記載の手順で製造した他のペプチド−ドキソルビシンのコンジュゲートを示す 。 実施例５ （４−トランス−Ｌ−Ｈｙｐ）−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌ ｅｕ−Ｄｏｘ（配列７０）の製造 段階Ａ：Ｆｍｏｃ（４−トランス−Ｌ−Ｈｙｐ（Ｂｚｌ））−Ａｌａ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ） Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）Ｌｅｕ−ＰＡＭ樹脂 ０．５ミリモル（０．６７ｇ）のＢｏｃ−Ｌｅｕ−ＰＡＭ樹脂を出発材料とし 、保護されたペプチドを４３０Ａ ＡＢＩペプチドシンセサイザーで合成した。 プロトコルでは、保護され たアミノ酸：Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）、Ｂｏｃ−Ｇｌｎ、Ｂｏｃ−Ｃｈｇ、Ｂ ｏｃ−Ａｌａ、Ｎ−Ｂｏｃ−（４−トランス−Ｌ−Ｈｙｐ（Ｂｚｌ））の各々を ４倍の過剰量（２ミリモル）で使用した。メチル−２−ピロリジノン中のＤＣＣ 及びＨＯＢＴ活性化を用いて結合させた。Ｎ−末端保護基を導入するためにＦｍ ｏｃ−ＯＳｕ（Ｆｍｏｃのスクシナミジルエステル）を使用した。Ｂｏｃ基の除 去にはメチレンクロリド中の５０％ＴＦＡを使用し、ＴＦＡ塩をジイソプロピル エチルアミンで中和した。合成の終了後、ペプチド樹脂を乾燥すると中間体が得 られた。段階Ｂ ：Ｆｍｏｃ−（４−トランス−Ｌ−Ｈｙｐ）−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ− Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−ＯＨ 段階Ａで得られた保護されたペプチド樹脂１．１ｇをＨＦ（２０ｍｌ）と共に アニソール（２ｍｌ）の存在下で０℃で１時間処理した。ＨＦの蒸発後、残渣を エーテルで洗浄し、濾過し、Ｈ２Ｏ（２００ｍｌ）で抽出した。濾液を凍結乾燥 すると、標題の中間体が得られた。段階Ｃ ：Ｆｍｏｃ−（４−トランス−Ｌ−Ｈｙｐ）−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ− Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ 段階Ｂで得られた中間体０．２７４ｇをＤＭＳＯ（１０ｍｌ）に溶解し、ＤＭ Ｆ（１０ｍｌ）で希釈した。溶液に１０４ｍｇのドキソルビシン塩酸塩、６２μ ｌのジイソプロピルエチルアミンを順次添加した。撹拌溶液を冷却し（０℃）、 ５６μｌのジフェニルホスホリルアジドを添加した。３０分後、追加の５６μｌ のＤＰＰＡを添加し、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）でｐＨを〜７． ５（ｐＨペーパー）に調整した。冷却した反応液（０℃）のｐＨをＤＩＥＡで〜 ７．５に維持した。４時間後、反応液（システムＡを用いる分析用ＨＰＬＣで反 応完了を確認）を濃縮すると油状生成物が得られた。段階Ｄ ：（４−トランス−Ｌ−Ｈｙｐ）−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌ ｅｕ−Ｄｏｘ 段階Ｃで得られた上記生成物をＤＭＦ（１Ｏｍｌ）に溶解し、冷却し（０℃） 、４ｍｌのピペリジンを添加した。溶液を濃縮乾固し、分取ＨＰＬＣで精製した 。（Ａ＝０．１％ＮＨ₄ＯＡｃ −Ｈ₂Ｏ；Ｂ＝ＣＨ₃ＣＮ）。未精製の生成物を１００ｍｌの９０％バッファＡに 溶解し、濾過し、Ｃ−１８逆相ＨＰＬＣラジアル圧縮カラム（Ｗａｔｅｒｓ，Ｄ ｅｌｔａ−Ｐａｋ， １５μ，１００Å）で精製した。９０％Ａ〜６５％Ａの段 階的勾配を流速７５ｍｌ／分（ｕｖ＝２１４ｎｍ）で使用した。生成物の均質な 画分（システムＡを用いるＨＰＬＣで評価）をプールし凍結乾燥した。システムＡを用いるＨＰＬＣ条件 カラム：Ｖｙｄａｃ１５ｃｍ＃２１８ＴＰ５４１５，Ｃ１８ 溶出剤：９５：５（Ａ：Ｂ）〜５：９５（Ａ：Ｂ）の勾配（４５分間）。Ａ＝０ ．１％ＴＦＡ／Ｈ₂Ｏ，Ｂ＝０．１％ＴＦＡ／アセトニトリル 流速：１．５ｍｌ／分 波長：２１４ｎｍ，２５４ｎｍ 保持時間：ドキソルビシン＝１３．６６分 Ｆｍｏｃ−（４−トランス−Ｌ−Ｈｙｐ）−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ− Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−ＯＨ＝１８．６分 Ｆｍｏｃ−（４−トランス−Ｌ−Ｈｙｐ）−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ− Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ＝２３．８分 （４−トランス−Ｌ−Ｈｙｐ）−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌ ｅｕ−Ｄｏｘ＝１７．６分 分子式：Ｃ₆₀Ｈ₈₃Ｎ₉Ｏ₂₂ 分子量：１２８１．５６ 高分解能ＥＳ質量スペクトル：１２８２．５９（ＭＨ⁺） ＨＰＬＣ：システムＡ カラム：Ｖｙｄａｃ１５ｃｍ＃２１８ＴＰ５４１５，Ｃ１８ 溶出液：９５：５（Ａ：Ｂ）〜５：９５（Ａ：Ｂ）の勾配（４５分間）。Ａ＝０ ．１％ＴＦＡ／Ｈ２０，Ｂ＝０．１％ＴＦＡ／アセトニトリル 流速：１．５ｍｌ／分 波長：２１４ｎｍ，２５４ｎｍ 保持時間：１７．６分 アミノ酸組成分析１：理論 測定 Ａｌａ（１） １．００ Ｓｅｒ（２） １．９４ Ｃｈｇ（１） ０．９４ Ｇｌｎ²（１） １．０５（Ｇｌｕとして） Ｈｙｐ （１） ０．９６ Ｌｅｕ （１） １．０３ ペプチド含量：０．６９０μモル／ｍｇ 注：¹２０時間、１００℃、６ＮのＨＣｌ ²ＧｌｎがＧｌｕに変換されている。実施例６ オリコゴペプチド−ドキソルビシンコンジュゲートの遊離ＰＳＡによる認識の評 価 実施例３〜５に記載の手順で製造したコンジュケートの各々を、ＰＳＡ消化バ ッファ（１２ｍＭのトリス（ヒドロキシメチル）−アミノメタン，ｐＨ８．０、 ２５ｍＭのＮａＣｌ、０．５ｍＭのＣａＣｌ₂）に溶解し、溶液をモル比１００ ：１でＰＳＡに添加した。あるいは、ＰＳＡ消化バッファとして５０ｍＭのトリ ス（ヒドロキシメチル）−アミノメタン，ｐＨ７．４と１４０ｍＭのＮａＣｌと を使用した。種々の反応時間後にトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を最終濃度１％（ 容量／容量）まで添加して反応を停止させた。あるいは、１０ｍＭのＺｎＣｌ₂ で反応を停止させた。反応停止させた反応液を逆相Ｃ−１８カラムで水性０．１ ％ＴＦＡ／アセトニトリル勾配を用いるＨＰＬ Ｃで分析した。評価の結果を表３に示す。表３は、表記のオリゴペプチド−細胞 毒性物質のコンジュゲートを酵素活性遊離ＰＳＡによって５０％開裂するために 必要な時間（分）を示す。コンジュゲートに塩を示していないときは遊離コンジ ュゲートを試験した。実施例４及び５に記載のオリゴペプチド−細胞毒性物質の コンジュゲートについて、酵素活性遊離ＰＳＡによるコンジュゲートの５０％開 裂に必要な時間（分）を評価すると、これらのコンジュゲートでは５０％開裂が ２時間以内に生じていた。実施例７ ドキソルビシンのペプチジル誘導体の細胞毒性のｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ Ａｌａｍａｒ Ｂｌｕｅアッセイを用い、非修飾ドキソルビシンによって殺傷 されることが分かっている一連の細胞に対する実施例３及び４に記載の手順で製 造した開裂可能なオリゴペプチド−ドキソルビシンコンジュゲートの細胞毒性を 評価した。より詳細には、９６ウェルプレート中のＬＮＣａｐ前立腺腫瘍細胞（ 酵素活性ＰＳＡを発現する）またはＤｕＰＲＯ細胞の培養物を、種々の濃度の所 与のコンジュゲート（プレートウェル の最終容量２００μｌ）を含む培地（ダルベッコの最小必須培地−α〔ＭＥＭ− α〕）で培養した。細胞を３７℃で３日間インキュベートし、２０μｌのＡｌａ ｍａｒ Ｂｌｕｅをアッセイウェルに添加した。細胞を更にインキュベートし、 ＡｌａｍａｒＢ１ｕｅ添加の４時間及び７時間後にＥＬ−３１０ＥＬＩＳＡリー ダーを用いアッセイプレートを５７０ｎｍ及び６００ｎｍの２つの波長で読み取 った。種々の濃度のコンジュゲートで試験した培養物の相対生存率を対照（コン ジュゲート非含有）培養物と比較して算出した。この評価のいくつかの結果を表 ５に示す。塩が示されていないときは、遊離コンジュケートを試験した。 実施例８ ペプチジル−細胞毒性物質のコンジュゲートのｉｎ ｖｉｖｏ有効性 ＬＮＣａＰ．ＦＧＣ細胞またはＤｕＰＲＯ−１細胞をトリプシン処理し、増殖 培地に再懸濁させ、２００×ｇで６分間遠心した。細胞を無血清ＭＥＭ−αに再 懸濁させ、カウントした。所望数の細胞を含むこの溶液の適量を円錐遠心管に移 し、上記同様に遠心し、低温のＭＥＭ−α Ｍａｔｒｉｇｅｌ（Ｃｏｌｌａｂｏ ｒａｔｉｖｅ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｎｅｗ Ｂｅｄｆｏ ｒｄ，Ｍａｓｓ．）の１：１混合物の適量に再懸濁させた。動物に接種するまで 懸濁液を氷上に維持した。 Ｈａｒｌａｎ Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙの雄のヌードマウス（１０〜１ ２週齢）を麻酔をかけずに抑制し、２２Ｇ針を用いた皮下注射で０．５ｍｌの細 胞懸濁液を左脇腹に接種した。マウス一匹あたり、約５×１０５のＤｕＰＲＯ細 胞または１．５×１０７のＬＮＣａＰ．ＦＧＣ細胞を接種した。 腫瘍細胞の接種後、マウスの以下のプロトコルのいずれかによって処理する。プロトコルＡ ： 細胞接種の１日後、動物に０．１〜０．５ｍｌの被検コンジュゲート、ドキソ ルビシンまたはビヒクル対照（滅菌水）を腹 腔内投与する。コンジュゲート及びドキソルビシンの投与量は最初は非致死的最 大量であるか、その後はもっと低い力価にしてもよい。２４時間おきに５日間継 続して同量を投与する。１０日後、マウスの血液サンプルを採取し、血清ＰＳＡ レベルを測定する。同様の血清ＰＳＡレベルを５〜１０日おきに測定する。５． ５週後にマウスを殺し、存在する腫瘍の重量を測定し、血清ＰＳＡを再度測定す る。アッセイの開始時及び終了時の動物の体重を測定する。プロトコルＢ ： 細胞接種の１０日後、動物の血液サンプルを採取し、血清ＰＳＡレベルを測定 する。血清ＰＳＡレベルに従って動物をグループ分けする。細胞接種の１４〜１ ５日後、０．１〜０．５ｍ１の被検コンジュゲート、ドキソルビシンまたはビヒ クル対照（滅菌水）を動物に腹腔内投与する。コンジュゲート及びドキソルビシ ンの投与量は最初は非致死的最大量であるが、その後はもっと低い力価にしても よい。２４時間おきに５日間継続して同量を投与する。血清ＰＳＡ清レベルを５ 〜１０日おきに測定する。５．５週後にマウスを殺し、存在する腫瘍の重量を測 定し、血清ＰＳＡを再度測定する。アッセイの開始時及び終了 時の動物の体重を測定する。プロトコルＣ ： 細胞接種の１日後、動物に０．１〜０．５ｍｌの被検コンジュゲート、ドキソ ルビシンまたはビヒクル対照（滅菌水）を腹腔内投与する。コンジュゲート及び ドキソルビシンの投与量は最初は非致死的最大量であるが、その後はもっと低い 力価にしてもよい。７日おきに５週間継続して同量を投与する。マウスを殺す直 前または同時に血清ＰＳＡレベルを測定する。５．５週後にマウスを殺し、存在 する腫瘍の重量を測定する。アッセイの開始時及び終了時の動物の体重を測定す る。実施例９ 内因性非ＰＳＡプロテアーゼによるコンジュゲートのタンパク質分解開裂のｉｎ ｖｉｔｒｏ定量 段階Ａ ：タンパク質分解組織抽出物の調製 全部の手順を４℃で行う。適当な動物を殺し、適当な組織を単離し、液体窒素 に保存する。凍結組織を乳鉢と乳棒で微粉砕し、微粉砕組織をＰｏｔｔｅｒ−Ｅ ｌｖｅｊｅｈホモジェナイザーに移し、２倍量のバッファＡ（１．１５％のＫＣ ｌを含む５０ｍＭのトリス，ｐＨ７．５）を添加する。次に先ず弛みの あるサイズの乳棒、次いでぴったりしたサイズの乳棒で２０回ずつすり潰して組 織を破壊する。ホモジェネートを揺動バケットロータ（ＨＢ４−５）で１０，０ ００×ｇで遠心し、ペレットを廃棄し、上清を１００，０００×ｇ（Ｔｉ７０） で遠心する。上清（サイトゾル）を保存する。 ペレットを上記のバッファＡと同量のバッファＢ(１.１５％のＫＣｌを含む１ ０ｍＭのＥＤＴＡ，ｐＨ７．５)に再懸濁させる。懸濁液をｄｏｕｎｃｅホモジ ェナイザーで均質化し、溶液を１００，０００×ｇで遠心する。上清を廃棄し、 ペレット（膜）を上記のバッファの１／２量のバッファＣ（０．２５Ｍのショ糖 を含む１０ｍＭのリン酸カリウムバッファ，ｐＨ７．４）に再懸濁させ、ｄｏｕ ｎｃｅホモジェナイザーで均質化する。 ２つの溶液（サイトゾル及び膜）のタンパク質含量をブラッドフォードアッセ イによって定量する。次にアッセイアリコートを取り出し、液体Ｎ₂で凍結する 。アリコートを−７０℃で保存する。段階Ｂ ：タンパク質分解開裂アッセイ 各時点で、２０マイクログラムのペプチド−ドキソルビシンコンジュゲートと 段階Ａに記載のごとく調製し反応バッファ中 でブラッドフォードによって定量した１５０マイクログラムの組織タンパク質と を、バッファ（５０ｍＭのトリス、１４０ｍＭのＮａＣｌ，ｐＨ７．２）中の最 終容量２００マイクロリットルの溶液に入れる。アッセイ反応を０、３０、６０ 、１２０及び１８０分間進行させ、沸騰した熱湯中に９０秒間維持して直ちに反 応を停止させる。反応生成物をＶＹＤＡＣ Ｃ１８１５ｃｍカラムを用い、水／ アセトニトリル（３０分間で５％から５０％までのアセトニトリル）中のＨＰＬ Ｃによって分析する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 31/517 Ａ６１Ｋ 31/517 31/675 31/675 31/704 31/704 31/7048 31/7048 31/7064 31/7064 38/00 Ａ６１Ｐ 13/08 Ａ６１Ｐ 13/08 35/00 35/00 Ｃ０７Ｋ 7/06 ＺＮＡＺ Ｃ０７Ｋ 7/06 ＺＮＡ Ａ６１Ｋ 37/02 (31)優先権主張番号 ６０／０４２，９２１ (32)優先日 平成９年４月４日(1997．4．4) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号 ９７１８１６０．６ (32)優先日 平成９年８月28日(1997．8．28) (33)優先権主張国 イギリス（ＧＢ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，Ｓ Ｄ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＵ ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ， ＣＵ，ＣＺ，ＥＥ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，Ｊ Ｐ，ＫＧ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ， ＲＯ，ＲＵ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，Ｔ Ｒ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ (72)発明者 フエン，ドン―メイ アメリカ合衆国、ニユー・ジヤージー・ 07065、ローウエイ、イースト・リンカー ン・アベニユー・126 (72)発明者 デツフオ―ジヨーンズ，デボラ アメリカ合衆国、ニユー・ジヤージー・ 07065、ローウエイ、イースト・リンカー ン・アベニユー・126

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．オリゴペプチドに結合した細胞毒性物質から成り、オリゴペプチドが遊離し た前立腺特異的抗原による選択的タンパク質分解によって開裂されるアミノ酸配 列から成り、結合手段が共有結合であるかまたは化学的リンカーであり、前記ア ミノ酸配列が親水性置換基を有する少なくとも１つの環状アミノ酸を含んでいる ことを特徴とする前立腺癌の治療に有用なコンジュゲートまたは医薬として許容 されるその塩。 ２．細胞毒性物質が、 （ａ）アントラサイクリンファミリーの薬剤、 （ｂ）ビンカアルカロイド薬剤、 （ｃ）マイトマイシン、 （ｄ）ブレオマイシン、 （ｅ）細胞毒性ヌクレオシド、 （ｆ）プテリンファミリーの薬剤、 （ｇ）ジエネン、 （ｈ）エストラムスチン、 （ｉ）シクロホスファミド、 （ｊ）タキサン、及び、 （ｋ）ポドフィロトキシン のクラスから選択された細胞毒性物質のクラスの成員であることを特徴とする請 求項１に記載のコンジュゲートまたは医薬として許容されるその塩。 ３．細胞毒性物質が、 （ａ）ドキソルビシン、 （ｂ）カルミノマイシン、 （ｃ）ダウノルビシン、 （ｄ）アミノプテリン、 （ｅ）メソトレキセート、 （ｆ）メトプテリン、 （ｇ）ジクロロ−メソトレキセート、 （ｈ）マイトマイシンＣ、 （ｉ）ポルフィロマイシン、 （ｊ）５−フルオロウラシル、 （ｋ）６−メルカプトプリン、 （ｌ）シトシンアラビノシド、 （ｍ）ポドフィロトキシン、 （ｎ）エトポシド、 （ｏ）リン酸エトポシド、 （ｐ）メルファラン、 （ｑ）ビンブラスチン、 （ｒ）ビンクリスチン、 （ｓ）ロイロシジン、 （ｔ）ビンデシン、 （ｕ）エストラムスチン、 （ｖ）シスプラチン、 （ｗ）シクロホスファミド、 （ｘ）タキソール、 （ｙ）ロイロシン から選択されることを特徴とする請求項１に記載のコンジュゲートまたは医薬と して許容されるその塩。 ４．細胞毒性物質がドキソルビシン及びビンブラスチンまたはその細胞毒性誘導 体から選択されることを特徴とする請求項２に記載のコンジュゲート。 ５．細胞毒性物質がドキソルビシンまたはその細胞毒性誘導体から選択されるこ とを特徴とする請求項２に記載のコンジュゲート。 ６．オリゴペプチドが、 （ａ）ＨａａＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒ（配列１）； （ｂ）ＨａａＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒ（配列２）； （ｃ）ＨａａＸａａＬｙｓＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒ（配列３）； （ｄ）ＨａａＸａａＬｙｓＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒ（配列４）； （ｅ）ＨａａＸａａｈＡｒｇＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒ（配列５）； （ｆ）ＨａａＸａａｈＡｒｇＣｈａＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒ（配列６）； （ｇ）ＨａａＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＸａａ（配列７）； （ｈ）ＨａａＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＸａａ（配列８）； （ｉ）ＨａａＸａａＳｅｒＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＸａａ（配列９）； （ｊ）ＨａａＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＸａａ（配列１０）； 〔式中、Ｈａａは親水性部分で置換された環状アミノ酸であり、Ｘａａは任意 のアミノ酸であり、ｈＡｒｇはホモアルギニ ンであり、Ｃｈａはシクロヘキシルアラニンであり、Ｃｈｇはシクロヘキシルグ リシンである〕から選択されたオリゴマーから成ることを特徴とする請求項１に 記載のコンジュケート。 ７．オリゴペプチドが、 （ａ）ＨａａＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒ（配列１１）； （ｂ）ＨａａＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＡｌａ（配列１２）； （ｃ）ＡｌａＨａａＸａａＳｅｒＴｙｒＴｙｒ｜Ｓｅｒ（配列１３）； （ｄ）ＡｌａＡｓｎＨａａＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜Ｓｅｒ（配列１４）； （ｅ）ＨａａＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＴｈｒ（配列１５）： （ｆ）ＨａａＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＴｈｒ（配列１６）； （ｇ）ＨａａＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＳｅｒ（配列１７）； （ｈ）ＨａａＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＳｅｒ（配列１８）； （ｉ）ＨａａＸａａＬｙｓＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＳｅｒ（配列１９）； （ｊ）ＨａａＸａａｈＡｒｇＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＳｅｒ（配列２０）； （ｋ）ＨａａＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＬｅｕ（配列２１）； （ｌ）ＨａａＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＬｅｕ（配列２２）； （ｍ）ＨａａＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＬｅｕ（配列２３）； （ｎ）ＨａａＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＬｅｕ（配列２４）； （ｐ）ＨａａＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＮｌｅ（配列２５）； （ｑ）ＨａａＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＮｌｅ（配列２６）； （ｒ）ＨａａＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＴＩＣ（配列２７）； （ｓ）ＨａａＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＴＩＣ（配列２８）； （ｔ）ＨａａＸａａＳｅｒＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＬｅｕ（配列２９）； （ｕ）ＨａａＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＬｅｕ（配列３０）； （ｖ）ＨａａＸａａＳｅｒＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＮｌｅ（配列３１）； （ｗ）ＨａａＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＮｌｅ（配列３２）； （ｘ） ＨａａＸａａＳｅｒＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＴＩＣ（配列３３）； （ｙ）ＨａａＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＴＩＣ（配列３４）； （ｚ）ｈＡｒｇＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＬｅｕ（配列３５）； （ａａ）ｈＡｒｇＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＬｅｕ（配列３６） から選択されたオリゴマーから成ることを特徴とする請求項１に記載のコンジュ ゲート。 ８．オリゴペプチドが、 （ａ）４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒ（配列３７）； （ｂ）４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＡｌａ（配列３８）； （ｃ）Ａｌａ４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＴｙｒＴｙｒ｜Ｓｅｒ（配列３９）； （ｄ）ＡｌａＡｓｎ４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜Ｓｅｒ（配列４０） ； （ｅ）４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＴｈｒ（配列４１） ； （ｆ）４−ＨｙｐＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＴｈｒ（配列４２）； （ｇ）４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＳｅｒ（配列４３） ； （ｈ）４−ＨｙｐＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＳｅｒ（配列４４）； （ｉ）４−ＨｙｐＸａａＬｙｓＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＳｅｒ（配列４５） ； （ｊ）４−ＨｙｐＸａａｈＡｒｇＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＳｅｒ（配列４６ ）； （ｋ）４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＬｅｕ（配列４７） ； （ｌ）４−ＨｙｐＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＬｅｕ（配列４８）； （ｍ）４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＬｅｕ（配列４９）； （ｎ）４−ＨｙｐＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＬｅｕ（配列５０）； （ｐ）４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＮｌｅ（配列５１）； （ｑ）４−ＨｙｐＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＮｌｅ（配列５２）； （ｒ）４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＴＩＣ（配列５３）； （ｓ）４−ＨｙｐＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＴＩＣ（配列５４）； （ｔ）４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＬｅｕ（配列５５）； （ｕ）４−ＨｙｐＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＬｅｕ（配列５６）； （ｖ）４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＮｌｅ（配列５７）； （ｗ）４−ＨｙｐＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＮｌｅ（配列５８）； （ｘ）４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＴＩＣ（配列５９）； （ｙ）４−ＨｙｐＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＴＩＣ（配列６０） 〔式中、４−Ｈｙｐは４−ヒドロキシプロリンであり、Ｘａａは任意のアミノ 酸であり、ｈＡｒｇはホモアルギニンであり、Ｃｈａはシクロヘキシルアラニン であり、Ｃｈｇはシクロヘキシルグリシンである〕から選択されたオリゴマーか ら成ることを特徴とする請求項１に記載のコンジュゲート。 ９．親水性置換基を有する環状アミノ酸が、式：の置換基から選択され、式中の、 Ｒ⁵がＨＯ−及びＣ₁−Ｃ₆アルコキシから選択され、 Ｒ⁶が水素、ハロゲン、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、ＨＯ−及びＣ₁−Ｃ₆アルコキシから 選択され、 ｔが３または４であることを特徴とする請求項１に記載のコンジュゲート。 １０．前立腺癌の治療に有用な式Ｉ： 〔式中、 オリゴペプチドは遊離した前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）によって選択的に認識 されかつ遊離した前立腺特異的抗原の酵素活性によってタンパク質分解的に開裂 され得るオリゴペプチドであって、オリゴペプチドは、式：の環状アミノ酸を含んでおり、 Ｃ末端カルボニルはドキソルビシンのアミンに共有結合しており、 Ｒは、 （ａ）水素、 （ｂ）−（Ｃ＝Ｏ）Ｒ^1a、 （ｃ） （ｄ） （ｅ） から選択され、 Ｒ¹及びＲ²は独立に、水素、ＯＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆アルコキシ、 Ｃ₁−Ｃ₆アラルキル及びアリールから選択され、 Ｒ^1aは、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、ヒドロキシル化アリール、ポリヒドロキシル化ア リールまたはアリールであり、 Ｒ⁵は、ＨＯ−及びＣ₁−Ｃ₆アルコキシから選択され、 Ｒ⁶は、水素、ハロゲン、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、ＨＯ−及びＣ₁−Ｃ₆アルコキシ から選択され、 ｎは１、２、３または４、 ｐは０または１〜１００の整数、 ｑは０または１であり、ｐが０のときはｑは１であり、 ｒは１〜１０の整数であり、 ｔは３または４である〕 のコンジュゲートまたは医薬として許容されるその塩。 １１．環状アミノ酸が式： を有しており、 Ｒが、 （ａ）水素、 （ｂ）−（Ｃ＝Ｏ）Ｒ^1a、 （ｃ） （ｄ） （ｅ） （ｆ） （ｇ） から選択され、 Ｒ¹及びＲ²は独立に水素、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル及びアリールから選択され、 Ｒ^1aはＣ₁−Ｃ₆−アルキルまたはアリールであり ｎは１，２、３または４、 ｎ’は０、１、２または３、 ｐは０または１〜１４の整数、 ｑは０または１、但しｐが０のときｑは１、 ｒは１〜１０の整数、 ｔは３であることを特徴とする請求項１０に記載のコンジュゲートまたはその 光学異性体または医薬として許容されるその塩。 １２．オリゴペプチドが、 （ａ）４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒ（配列３７）； （ｂ）４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＡｌａ（配列３８）； （ｃ）Ａｌａ４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＴｙｒＴｙｒ｜Ｓｅｒ（配列３９）； （ｄ）ＡｌａＡｓｎ４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜Ｓｅｒ（配列４０） ； （ｅ）４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＴｈｒ（配列４１） ； （ｆ）４−ＨｙｐＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＴｈｒ（配列４２）； （ｇ）４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＳｅｒ（配列４３） ； （ｈ）４−ＨｙｐＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＳｅｒ（配列４４）； （ｉ）４−ＨｙｐＸａａＬｙｓＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＳｅｒ（配列４５） ； （ｊ）４−ＨｙｐＸａａｈＡｒｇＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＳｅｒ（配列４６ ）； （ｋ）４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＬｅｕ（配列４７） ； （ｌ）４−ＨｙｐＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＳｅｒＬｅｕ（配列４８）； （ｍ）４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＬｅｕ（配列４９）； （ｎ）４−ＨｙｐＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＬｅｕ（配列５０）； （ｐ）４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＮｌｅ（配列５１）； （ｑ）４−ＨｙｐＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＮｌｅ（配列５２）； （ｒ）４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＴＩＣ（配列５３）； （ｓ）４−ＨｙｐＴｙｒＧｌｎ｜ＳｅｒＴＩＣ（配列５４）； （ｔ）４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＬｅｕ（配列５５）； （ｕ）４−ＨｙｐＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＬｅｕ（配列５６）； （ｖ）４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＮｌｅ（配列５７）； （ｗ）４−ＨｙｐＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＮｌｅ（配列５８）； （ｘ）４−ＨｙｐＸａａＳｅｒＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＴＩＣ（配列５９）； （ｙ）４−ＨｙｐＣｈｇＧｌｎ｜ＳｅｒＴＩＣ（配列６０） 〔式中、４−Ｈｙｐは４−ヒドロキシプロリンであり、Ｘａａは任意のアミノ 酸であり、ｈＡｒｇはホモアルギニンであり、Ｃｈａはシクロヘキシルアラニン であり、Ｃｈｇはシクロヘキシルグリシンである〕から選択されたアミノ酸配列 から成るオリゴマーであることを特徴とする請求項１０に記載のコンジュゲート またはその光学異性体または医薬として許容されるその塩。 １３．Ｘａａがアラニンまたはイソロイシンであることを特徴とする請求項１２ に記載のコンジュゲートまたはその光学異性体または医薬として許容されるその 塩。 １４．式： 〔式中、Ｘは、式： から選択される〕の化合物から選択されることを特徴とする請求項１０に記載の コンジュゲートまたはその光学異性体または医薬として許容されるその塩。 １５．配列：で示されることを特徴とする請求項１０に記載のコンジュゲートまたはその光学 異性体または医薬として許容されるその塩。 １６．〔Ｎ−Ａｃ−（４−トランス−Ｌ−Ｈｙｐ）〕−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｃｈｇ −Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ（配列６８）で示される請求項１０に記載のコンジュゲートまたはその光学異性体または医薬 として許容されるその塩。 １７．式： で示される請求項１０に記載のコンジュゲートまたはその光学異性体または医薬 として許容されるその塩。 １８．式： で示される請求項１０に記載のコンジュゲートまたはその光学異性体または医薬 として許容されるその塩。 １９．式ＩＩ： 〔式中、 オリゴペプチドは遊離した前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）によって特異的に認識 されかつ遊離した前立腺特異的抗原の酵素活性によってタンパク質分解的に開裂 され得るオリゴペプチドであって、オリゴペブチドは、式： の環状アミノ酸を含んでおり、 ＸＬは、ＮＨ−（ＣＨ₂）ｕ−ＮＨ−であり、 Ｒは、 （ａ）水素、 （ｂ）−（Ｃ＝Ｏ）Ｒ¹ａ、 （ｃ） （ｄ） （ｅ） から選択され、 Ｒ¹及びＲ²は独立に、水素、ＯＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆アルコキシ、 Ｃ₁−Ｃ₆アラルキル及びアリールから選択され、 Ｒ^1aは、Ｃ₁−Ｃ₆−アルキル、ヒドロキシル化アリール、 ポリヒドロキシル化アリールまたはアリールであり、 Ｒ¹⁹は、水素、（Ｃ₁−Ｃ₃アルキル）−ＣＯ、またはクロロ置換（Ｃ₁−Ｃ₃ア ルキル）−ＣＯであり、 ｎは１、２、３または４、 ｐは０または１〜１００の整数、 ｑは０または１、但しｐが０のときはｑは１、 ｒは１、２または３、 ｔは３または４、 ｕは１、２、３、４または５である〕で示される請求項１に記載のコンジュゲ ートまたは医薬として許容されるその塩。 ２０．式： から選択される請求項１６に記載のコンジュゲートまたは医薬として許容される その塩または光学異性体。 ２１．式ＩＩＩ： 〔式中、 オリゴペプチドは遊離した前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）によって特異的に認識 されかつ遊離した前立腺特異的抗原の酵素活性によってタンパク質分解的に開裂 され得るオリゴペプチドであり、このオリゴペプチドは式： の環状アミノ酸を含んでおり、 Ｒｇ及びＲｈは独立に、水素、Ｃ₁−Ｃ₆−アルキル、−Ｃ₁−Ｃ₆−アルキル− ＯＨ、−Ｃ₁−Ｃ₆−アルキル−ジ−ＯＨ、−Ｃ₁−Ｃ₆−アルキル−トリ−ＯＨ及 び から選択され、但しＲ^d及びＲ^eの少なくとも１つが水素またはＣ₁−Ｃ₆アルキル でないか、または、 Ｒ^gとＲ^hとが一緒に−ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＣＨ₂ＣＨ₂−ジラジカルを形成し、 Ｒ¹⁹は、水素、（Ｃ₁−Ｃ₃アルキル）−ＣＯまたはクロロ置換（Ｃ₁−Ｃ₃アル キル）−ＣＯであり、 ｐは、０または１〜１００の整数であり、 ｑは０または１、但しｐが０ならばｑは１である〕で示される請求項１に記載 のコンジュゲートまたは医薬として許容されるその塩。 ２２．式： で示される請求項１８に記載のコンジュゲートまたは医薬として許容されるその 塩または光学異性体。 ２３．医薬担体と医薬担体に分散した治療有効量の請求項１に記載の化合物とか ら成る医薬組成物。 ２４．医薬担体と医薬担体に分散した治療有効量の請求項１０に記載の化合物と から成る医薬組成物。 ２５．医薬担体と医薬担体に分散した治療有効量の請求項１４に記載の化合物と から成る医薬組成物。 ２６．医薬担体と医薬担体に分散した治療有効量の請求項１７ に記載の化合物とから成る医薬組成物。 ２７．治療有効量の請求項２３に記載の組成物を治療を要する哺乳動物に投与す ることから成る前立腺癌の治療方法。 ２８．治療有効量の請求項２４に記載の組成物を治療を要する哺乳動物に投与す ることから成る前立腺癌の治療方法。 ２９．治療有効量の請求項２５に記載の組成物を治療を要する哺乳動物に投与す ることから成る前立腺癌の治療方法。 ３０．治療有効量の請求項２６に記載の組成物を治療を要する哺乳動物に投与す ることから成る前立腺癌の治療方法。 ３１．治療有効量の請求項２３に記載の組成物を治療を要する哺乳動物に投与す ることから成る良性前立腺過形成の治療方法。 ３２．治療有効量の請求項２４に記載の組成物を治療を要する哺乳動物に投与す ることから成る良性前立腺過形成の治療方法。 ３３．治療有効量の請求項２５に記載の組成物を治療を要する哺乳動物に投与す ることから成る良性前立腺過形成の治療方法。 ３４．治療有効量の請求項２６に記載の組成物を治療を要する哺乳動物に投与す ることから成る良性前立腺過形成の治療方法。 ３５．請求項１に記載の化合物と医薬として許容される担体との組合せから成る 医薬組成物。 ３６．請求項１に記載の化合物と医薬として許容される担体とを組合せる医薬組 成物の製造方法。