JP2000511166A - ハルパゴフィタム プロカンベンス及び／又はハルパゴフィタム ゼイヘリ デンスから精製された抽出物、その製造方法及びその使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 ハルパゴフィタム プロカンベンス及び／又はハルパゴフィタム ゼイヘリ デンスから精製された抽出物は、水性及び／又は水性／アルコール性抽出物をn-ブタノールで飽和された水で溶解し、水で飽和されたn-ブタノールで抽出し、かつ、真空でn-ブタノールを除去することにより得ることができる。抽出物は、気管支喘息、大腸炎潰瘍、モルバス コロン、リウマチ型疾患及び薬剤、他の物質又は疾病により起こるリポキシゲナーゼ レベルの増加が見られる症状の治療のための薬剤の調製のために使用することができる。

Description

【発明の詳細な説明】 ハルパゴフィタム プロカンベンス及び／又は ハルパゴフィタム ゼイヘリデンス から精製された抽出物、その製造方法及びその使用 茶及びハルパゴフィタム プロカンベンス(Harpagophytum procumbens)からの抽 出物は、様々な症状、例えば、様々な種類の消化不良、リウマチ性疾患、産科系 のもの、損傷治癒、動脈石灰化像、アレルギー疾患等のために長い間民間医療に おいて推奨されてきた。 植物、その成分及びその化学構造については多く報告されているが、それに比べ て、薬理学的／毒物学的な研究は数が少ない。文献調査は、エルファルングセイ ルカンデ(Erfahrungsheilkunde)2、1995、ページ74から79に見ることができる。 水、メタノール及びn-ブタノールによる第２根(the secondary root)からの様々 な抽出物の研究は、A.Erdosらの「Plantamedica」、Journal of Medicinal Plan t Research、1978、vol.34、ページ97から108に見ることができる。この研究は 、上記の様な抽出物は、アセチルサリチル酸よりも低いアレルギー作用を顕著に 低下させる培地効果(medium-patent)を有するという早期報告を支持するもので ある。更に、この研究は、グリコシド ハルパゴシド(harpagoside)は、達成され た鎮痛性及び消炎性効果に寄与している唯一の物質ではない可能性があるという 結論にも導いた。この証拠は、全ての実験的モデルにおいて他の抽出物よりも顕 著なより良い効果を有することができなかった、85%のハルパゴシドを含む高度 精製抽出物H 25 C₃の活性により与えられた。 ラディックス ハルパゴフィチ(Radix Harpagophyti)からの抽出物のリウマチ性 疾患の治療における適性についての調査から(ウェンゼル(Wenzel)、P.、ウェジ ェナー(Wegener)、T.、DAZ 135、1131-1144)、ハルパゴフィタム抽出物は培地効 果の沈痛性及び強い消炎性活性を有していることが示された。両方の分野のため に、概して、シクロオキシゲナーゼ活性の阻害により実験的に測定された活性の 機構が主張されている(シメット(Simmet)ら、Thrombosis Res.67、123-134、199 2)。本発明の第一の目的は、高度に精製されたハルパゴシドよりも高い効率を有 する可能性のあるハルパゴフイタム プロカンベンス(Harpagophytum procumbens )から精製された及び可能なかぎり標準化された抽出物を提供することにある。 本発明の更なる目的は、他の適する出発材料の使用することにある。 これらの目的は、驚くべきことに、水性及び／又は水性／アルコール性(C₁-C₃) 抽出物スピッサム(spissum)及び／又は乾燥抽出物をn-ブタノールにより飽和さ れた水に溶解し、水で飽和されたn-ブタノールで抽出し、かつ、真空でn-ブタノ ールを除去することにより得ることができる抽出物により達成された。n-ブタノ ールはできる限り完全に除去する。ハルパゴフィタム プロカンベンスに加えて 、ハルパゴフィタム ゼイヘリ デンス(Harpagophytum zeyheri DENCE)も実質的 に同様の結果を得るために使用することができることが更に発見された。従って 、これらの２つの出発薬物のみ又は混合物を使用することがいずれの場合にも可 能である。 上記抽出物が、既に知られている及び以前使用されていた抽出物よりも何故効果 的であるのかは現在明らかにはされていない。グリコシドそのものは効果がない が、又は弱い効果のみを有すると示されていたため、文献がら、ハルパゴシドを 高濃縮する方法が有効であると予想することはできなかった。現在まで証明され ていない可能な１説は、実際の活性素因はハルパゴシドではなく、高度に精製さ れた場合に少なくとも部分的にハルパゴシドに混入される物質又は物質群である という説である。もう１つの可能な説は、様々な原因から共働作用をすることが できる相互依存的に作用する１以上の共存物質があるという説である。共存物質 は、同様に効果的である第２の又はそれ以上の物質又は胃腸系のハルパゴシドの 生物学的有効性又は安定性を増加させる１以上の物質である可能性もある。最後 に、本発明の方法により、アンタゴニストのように活性に影響を与える物質を多 重成分混合物から消耗又は除去することができるというものである。 これらの説の１つは、クロマトグラフィーによる実験において、水性抽出物、水 性／アルコール性抽出物、n-ブタノール抽出物及び本発明の抽出物をはっきりと 分類することができるという事実により支持される。本発明によれば、ハルパゴ シドの成分は、純粋n-ブタノールによる抽出物におけるものと同じ次数（order ）の量である。しかしながら、純粋n-ブタノール抽出物の効果は、本発明の抽出 物の効果よりも明らかに低い。水性又は水性／アルコール性(C₁-C₃)混合物は、 高収率で植物材料から実際に活性である素因又は相互依存的な作用素因を抽出す る能力がある可能性がある。そして、それらが抽出された後には、抽出物は容易 にn-ブタノールに溶解し、従って、ハルパゴシドと共に濃縮される。 ハルパゴシド単独で活性であるかということは現在まだ観察されていないが、ハ ルパゴシド含有量は本発明の調製物の「標準化」のために使用することができる 。 まだ完成していない更なる研究は、本発明の抽出物の更に優れた消炎性及び鎮痛 性作用がどこに基づいているのかを見つけることを課題にしている。第二物質又 は物質群のみに活性が基づいているのか、又はハルパゴシドに共働作用があるの かを解明することも可能になるであろう。 しかし、実施においては、ハルパゴフィタム プロカンベンス及びハルパゴフィ タム ゼイヘリ デンスの両方から調製することができる精製された優れて効果的 な標準化抽出物を提供する方法は、既に顕著な進歩である。 これらの抽出物は最初に経口投与形態、例えば、タブレット、カプセル、ジュー ス、シロップ又は溶液に加工することができる。 従って、本発明は、精製された抽出物のみを含むのではなく、それらの調製方法 及び気管支喘息、大腸炎潰瘍、モルバス コロン(Morbus Crohn)、リウマチ型疾 患、及び薬剤、他の物質又は疾病により起こるリポキシゲナーゼレベルの増加が 見られる症状の治療のための薬剤の調製のための使用を含む。 本発明の方法は、更に詳しく下記の実施例において例示される。実施例１ ハルパゴフィタム プロカンベンス及び／又はハルパゴフィタム ゼイヘリ デン スの乾燥第２保存根(secondary storage roots)200kgは、ミルで粒子サイズが12 mmよりも小さく、好ましくは８から10mmになるように粉砕される。2100kgの水を 添加した後、混合物は、大まかに70から85℃で16時間濾過される。上記方法で得 られた抽出物は、55℃で150mbarの低圧力下で乾燥物質含有量を65から75%にされ る。ハルパゴシド含有量は、約1.0から1.5%である。 上記の得られた水性ピルラー(pillular)抽出物(一次抽出物)約180kgは、乾燥含 有量の10倍のn-ブタノールで飽和された水と混合される。抽出物は、撹拌して完 全に溶解され、水で飽和されたn-ブタノールの同体積フラクションを用いて、30 ℃で液体／液体抽出にかけられる。続いて、相分離が行われる。下の水相は、更 に２回半分の体積n-ブタノールをそれぞれ用いて液体／液体抽出にかけられる。 ３つの抽出それぞれから得られたブタノール相は混合され、再度ブタノールで飽 和された水により洗浄される。混合されたブタノール相は、続いて約50から60℃ で、150から200mbarの低圧力下で、固体含有量が少なくとも50%である濃縮物が 得られるまで蒸発させる。 上記のように得られた約16kgのピルラー抽出物(二次抽出物)は、60から80℃で、 スプレー乾燥装置で本来そうであったように乾燥される。n-ブタノールは、実験 において完全に除去される。得られた乾燥抽出物は粉砕される。本発明の乾燥抽 出物は、HPLCからハルパゴシド含有量は約15から30%であり、約25から 35：1の薬物対抽出物の比(DER)を有している。実施例２ 実施例１により得られた水性ピルラー抽出物(一次抽出物)約180kgは、約80℃で スプレー乾燥法により乾燥される。30分間垂直ミキサーで処理し、それに続いて 最良の粒子サイズ、＜1mmなるように粉砕して、均一な乾燥抽出物(一次抽出物) を調製する。このハルパゴフィタム プロカンベンス及び／又はハルパゴフィタ ム ゼンヘリ デンスの乾燥水性抽出物は、約10倍のn-ブタノールで飽和された水 に溶解される(出発溶液)。この出発溶液は濾過され、同量の水で飽和されたn-ブ タノールにより分離される。相分離が起こる。上層のブタノール相は、ブタノー ルで飽和された水(比率1:1v/v)で再洗浄される。下層の水相は更に２回、合計で ３回、水で飽和されたブタノールで抽出される。混合されたブタノール相は真空 で乾燥するまで蒸発させる(200mbar、60℃)。水相も混合され、濃縮される。出 発溶液との比較実験で、水相及びブタノール相につて以下の結果を得た。この表から、水で飽和されたブタノールを用いた液体／液体抽出では、純粋なブ タノール抽出により得られる濃度と同様の収率の、ハルパゴシドの選択的な濃縮 を得られることが示された。 しかしながら、本発明の方法では、乾燥物質の大部分の量及びそこに含まれる二 次材料、例えば糖は水相に残り、一方ハルパゴシド、他のイリドイド(iridoid) 化合物及び他の活性成分はn-ブタノール相に移動する。実施例３ ハルパゴフィタム プロカンベンス デ カンドール(DE CANDOLLE)及び／又はハル パゴフィタム ゼンヘリ デンスの乾燥二次保存根200kgは、粒子の大きさが８か ら10mmになるようにミルで粉砕される。90%(v/v)エタノール約3600kgの添加の後 、混合物は、大まかに20から30℃で16時間濾過される。55℃で150mbarの低圧力 下で、上記のように得られた抽出物の乾燥物質含有量を＜95%にする。 これにより、６から12：１のDERを有する20がら30kgの乾燥抽出物が得られる。 ハルパゴシド含有量は約１から1.5%である。上記で使用された約180kgのExtr.ハ ルパゴフィタムe rad．spir．sicc．は、更に実施例１に記載されているように 加工される。 ハルパゴシド含有量は11.6m/m〔%〕であり、最初の抽出物の分量は0.9ｇであり 、抽出された物質の収率は8.6%である。ハルパゴシドの分量はO.112ｇである。 収率は93.４%である。薬物対抽出物の比DER_nativeは、出発溶液で３：1、ブタノ ール相で32：1である。 従って、この抽出物は更に高濃縮ハルパゴシドを含有している。上記のように得 られた抽出物のHPLCクロマトグラムは、実施例１及び２の抽出物のものと非常に 類似している。 シメット(Simmet)及びロエウ(Loew)博士による、水相のみの抽出物、n-ブタノー ルのみの抽出物及び本発明の抽出物の薬理学的比較研究は、同じ濃度のハルパゴ シドを有するn-ブタノール抽出物と比較して、本発明の抽出物は明らかに高い効 率を持つことを明らかにした。 以下の抽出物が試験された。 抽出物のシステイニル-LT生合成及びトロンボキサンB₂生合成に対する影響が試 験された。健康な男性対象(20から25歳)の全血液のそれぞれ２mlは、ヘパリン、 10E/ml(最終濃度)により血液凝固を阻止され、対応する試験抽出物と共に37℃で ポリスチレンチューブで15分間予備インキュベイションされる。この期間の後、 イオノフォル(Ionophor)A23187、10μＭ(最終濃度)が添加され、インキュベイシ ョンが37℃で更に60分間続けられた。遠心の後、血漿は除去され、１つのアリコ ットを残して、予め冷却された(−20℃、30分間)アセトンを用いてタンパク質沈 殿が行われた。サンプルは、低圧力下でロータベーターにより濃縮され、10 mM のトリス緩衝液、pH7.4で再度懸濁される。この物質は、システイニル-ロイコト リエン(LT)の放射免疫分析のために使用された。抗-システイニル-LT抗体は主と してLTC₄を認識するが、LTD₄及びLTE₄による交差反応のそれぞれ70%を担ってい る。標準曲線はLTC₄により作成された。トロンボキサン（TX）B₂は、血漿サンプ ルのアリコットの放射免疫法により直接観察された。結果は図１及び２にまとめ られている。 トロンボキサンB₂生合成における効果は同じであるが、システイニル-LT生合成 は明らかに異なっており、本発明の抽出物６番は明らかにより効果的であり、よ り選択的であるという結果を得た。 本発明の抽出物は、気管支喘息、大腸炎潰瘍、モルバス コロン、リウマチ型疾 患の症状及び薬剤、他の物質、又は疾患により起こるリポゲナーゼレベルの増加 が見られる症状のために使用することができる。 対照的に、100％メタノールによる抽出物(抽出物５番)の更なる薬理学的研究は 、システイニル-LT生合成における顕著な効果を有しておらず、一方、実施例３ の抽出物(抽出物８)は実施例２の抽出物６番と同様の高い活性を示した。 人工胃液及び腸液の研究は、ハルパゴシドは少なくとも２時間、純粋な形態及び 希釈形態の両方において安定であることを示した。薬物動力的研究は、最高の血 液レベルは、200から800mgの間の量の実施例２の抽出物の投与による吸収の後、 １から４時間以内に観察されることを示した。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 1. 水性及び／又は水性／アルコール性(C₁-C₃)ピルラー及び／又は乾燥抽出物 をn-ブタノールにより飽和された水に溶解し、水で飽和されたn-ブタノールで抽 出し、及び真空でn-ブタノールを除去することにより得ることができるハルパゴ フィタム プロカンベンス及び／又はハルパゴフィタム ゼンヘリ デンスから精 製された抽出物。 2. 水性及び／又は水性／アルコール性ピルラー及び／又は乾燥抽出物をn-ブタ ノール飽和された水に溶解し、かつ、得られた溶液を水で飽和されたn-ブタノー ルで抽出し、続いて真空でn-ブタノールを除去することを特徴とするハルパゴフ ィタム プロカンベンス及び／又はハルパゴフィタム ゼンヘリ デンスからの精 製された抽出物の調製方法。 3. 気管支喘息、大腸炎潰瘍、モルバスコロン、リウマチ型疾患、及び薬剤、他 の物質又は疾病により起こるリポキシゲナーゼレベルの増加が見られる症状の治 療のための薬剤の調製のための請求項１に記載のハルパゴフィタム プロカンベ ンス及び/又はハルパゴフィタム ゼイヘリデンスから精製された抽出物の使用。