JP2000514093A

JP2000514093A - Ｃｍｖ感染症の治療のための組成物および方法

Info

Publication number: JP2000514093A
Application number: JP10543041A
Authority: JP
Inventors: ドレイパー，ケネス・ジー; キスナー，ダニエル・エル; アンダーソン，ケビン・ピー; チャップマン，シャロン
Original assignee: Isis Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Ionis Pharmaceuticals Inc
Priority date: 1997-04-09
Filing date: 1998-04-07
Publication date: 2000-10-24
Also published as: EP0975654A1; AU7103398A; CA2285921C; CA2285921A1; KR100353924B1; AU725047B2; US6153595A; EP0975654A4; WO1998045314A1; KR20010006089A

Abstract

(57)【要約】本発明はＣＭＶ感染症の治療のための組成物および方法に関する。有効な抗ウイルス剤であるアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。好ましい態様では、オリゴヌクレオチドは少なくとも１個の２’−メトキシエトキシ修飾を含有し、キメラオリゴヌクレオチドであってもよい。

Description

【発明の詳細な説明】ＣＭＶ感染症の治療のための組成物および方法緒言本出願は、米国特許出願第07/1568,366号(90年８月16日出願、現在は取り下げ済み);第07/1927,506号(92年11月19日出願、現在は米国特許第5,591,720号として発行)；第08/1009,263号（93年１月25日出願、現在は米国特許第5,442,049号として発行）；および第08/233,711号（94年４月26日出願、現在は米国特許第5, 595,978号として発行）の一部継続出願であり、これらはそれぞれ本出願と同一の譲受人に譲渡され、その全体を本明細書の一部としてここに引用する。発明の背景本発明はアンチセンスオリゴヌクレオチドの設計および合成に関し、それを投与してサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の複製を阻害し、サイトメガロウイルス感染症を治療することができる。これらの化合物を予防的または治療的に使用してサイトメガロウイルスによる疾病の重症度を低減することができる。サイトメガロウイルスは、妊娠期間に始まる全ての年齢のヒトに感染する。ＣＭＶ感染症は広範囲の疾病の原因となり、それらには重度の先天性奇形、青少年の単核球症候群、および免疫を抑制した患者の胎児の播種性感染症がある。ＣＭＶは一般の人々に潜伏するウイルスとして非常に一般的なものであり、また、細胞媒介性免疫は宿主防衛においてその増殖を制御するための重要な要素であるため、ＣＭＶが免疫無防備状態の患者における主要な病原体であることは驚くべきことではない。ＣＭＶは健康な個体においては通常無害であるが、ＡＩＤＳ患者においては広範な器官における機能障害の主要な原因となり、患者の免疫系ではもはや抑制できなくなる。多くのＡＩＤＳ患者は持続性ＣＭＶウイルス血症を有する。中には、徴候がない時点でウイルス血症であったり、あるいは軽度の全身症状であるがカポジ肉腫も有するような患者もいる。他の生命の危険のある日和見感染をした時点では、ほとんど全ての患者はウイルス血症である。サイトメガロウイルス網膜炎は免疫無防備状態の患者にとって深刻な問題であり、多くの場合失明に至る。４０％までのＡＩＤＳ患者が疾病の最終段階でＣＭＶ網膜炎に冒されうるが、治療は困難であり、それは使用できる薬剤が毒性を有し、高価であり、そして留置カテーテルを介して静脈内投与する場合に最も効果があるためである。Cohen，J．Science 1995，268，368-9。また、免疫が抑制された患者は非常にＣＭＶ肺炎に感染しやすいが、これはヒトのウイルス性疾患の中で最も致死性の高いものの一つであり、ＣＭＶによって胃腸出血が起きる。Co henら．ibid。またサイトメガロウイルスはＨＩＶ感染からＡＩＤＳへの進行において役割を担いうるが、これは非トランスフォーム型の共感染Ｔ細胞においてＨＩＶ長末端反復配列（ＬＴＲ）の転写を刺激することによる。ＡＩＤＳ患者から得た副腎および脳の組織検査から、観察される副腎炎、脳炎、および末梢神経障害はＣＭＶ感染によって起こることが示唆されている。多くの抗ウイルス剤の研究にも関わらず、効果的なＣＭＶの治療はまだ開発されていない。インターフェロン、伝達因子、アデニンアラビノシド（Ａｒａ−Ａ）、アシクログアノシン（アシクロビア、ＡＣＶ）、およびこれらの薬剤の併用は、ＣＭＶ感染を制御するのに効果がなかった。前臨床および臨床データによれば、フォスカーネット（ＰＦＡ）およびガンシクロビル（ＤＨＰＧ）は抗ウイルス剤として限定された可能性を示している。ＤＨＰＧの研究は、ＣＭＶ網膜炎および大腸炎に対して効果を示した。ＤＨＰＧは処理した個体のほとんどに十分寛容性があると考えられるが、可逆的な好中球減少が発生すること、長期投与によってＣＭＶ耐性株が出現すること、そしてＣＭＶ肺炎に対して効果がないことから、この化合物の長期間の適用は制限される。より効果が高く、より毒性の低い治療の化合物および方法の開発が、急性および慢性への使用の両方に必要とされてい。本発明はＣＭＶ感染症の治療への別のアプローチ、すなわちアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用したサイトメガロウイルス遺伝子発現の阻害に向けられるものである。ＣＭＶを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドおよびそれらの化合物を使用する治療法は米国特許出願第07/1568,366号（90年８月16日出願、現在は取り下げ済み）；PCT/US91/05815号（91年８月14日出願）；米国特許出願第07/927,506号（92年11月19日出願、現在は米国特許5,591,720号として発行）；米国特許出願第08/009,263号（93年１月25日出願、現在は米国特許第 5,442,049号として発行）；および、米国特許出願第08/233,711号（94年４月26 日出願、現在は米国特許第5,595,978号として発行）に開示されており、これらはそれぞれ、その全体を本明細書の一部としてここに引用する。この研究の一部はAndersonら．Antimicrob．Agents and Chemother．1996，40，2004-2011に発表されている。また、ＣＭＶに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドはPariら，WO95/32213号およびAntimicrob．Agents and Chemother．1995，39，1157-116 1に開示されている。アンチセンスホスホロチオエートデオキシオリゴヌクレオチド薬剤、ＩＳＩＳ２９２２（ＳＥＱＩＤＮＯ：２２、フォミバーセン（Fomivirsen））は、ＡＩＤＳ患者のＣＭＶ網膜炎の進行の停止に臨床的に有効であることが証明されている。フォミバーセンに関する無作為で制御された中枢となる第３相臨床試験は進行中であり、単独治療、および経口ガンシクロビルとの併用の両方についてフォミバーセンの評価が行われている。結果は、制御されていないＣＭＶ網膜炎に罹患した患者において現在進行されているフォミバーセンのオープンラベル臨床試験から得られてきた。第１２回ヌクレオシド、ヌクレオチド、およびそれらの生物学的適用に関する国際円卓会議（Twelfth International Roundtable on Nu cleosides,Nucleotides and their Biological Applications）、La Jolla、CA 、1996年９月。フォミバーセンを、最初の３週間は週毎、その後は維持のために隔週毎に硝子体内注射で投与した。進行したＣＭＶ網膜炎に罹患し、他の治療に失敗した患者に３３０μｇの投与量で薬剤を投与したところ、迅速かつ持続的な疾患の緩解がみられた。持続的な疾患の緩解は、フォミバーセンを単独で、またはガンシクロビルとの併用治療で投与した患者に観察された。化合物は十分な寛容性があり、臨床的に許容しうる安全性を有し、処理しやすい局所的な眼部の炎症性合併症であることと全身性の副作用がないことに特徴があった。これにも関わらず、より低頻度の投与で患者のクオリティー・オブ・ライフを向上できるような、改良された薬剤の発見が望まれている。驚くべきことに現在では、２’−メトキシエトキシ修飾を含むフォミバーセンの類似体は、デオキシホスホロチオエート親化合物のフォミバーセン（ＩＳＩＳ２９２２ＳＥＱＩＤＮＯ：２２）に比較して、網膜において非常に安定である（残留時間が非常に長くなっている）ことが見出されている。発明の概要本発明は、ＣＭＶ感染症の治療のための組成物および方法に関する。ＣＭＶのＩＥ１、ＩＥ２、またはＤＮＡポリメラーゼ遺伝子を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを含有する組成物を提供する。好ましい態様では、オリゴヌクレオチドが少なくとも１個の２’−メトキシエトキシ修飾を有し、キメラオリゴヌクレオチドであってもよい。また、ＣＭＶを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドの投与による、ＣＭＶ感染症の阻害およびＣＭＶ感染症（特にＣＭＶ網膜炎）の治療のための方法も提供する。オリゴヌクレオチドは、単独、または第２の抗ウイルス剤との併用のいずれで投与してもよい。ある好ましい態様では、オリゴヌクレオチドを硝子体内に投与する。図の説明図−１は、オリゴヌクレオチド２７２５〜３２４６のサイトメガロウイルスに対する抗ウイルス活性を示す棒グラフである。図−２は、８種のオリゴヌクレオチドの０．０１〜１０μＭの投与量での抗ウイルス効果を示す折れ線グラフである。図−３は、３種のオリゴヌクレオチドの０．１〜１０μＭの投与量での抗ウイルス効果を示す折れ線グラフである。図−４は、ＩＳＩＳ２９２２、およびこの配列の変種で塩基の不一致を有するもの（ＩＳＩＳ４４３１、４４３２、４４３６、４４３３）の用量応答曲線を示す折れ線グラフである。図−５は、抗ウイルスアッセイにおけるＩＳＩＳ２９２２、１１９５０、１３３１２、および１３３１３の用量応答曲線を示す折れ線グラフである。図−６は、抗ウイルスアッセイにおけるＩＳＩＳ２９２２、１３５７８、および１３３１２の用量応答曲線を示す折れ線グラフである。図−７は、抗ウイルスアッセイにおけるＩＳＩＳ２９２２、１３５７５、１３５７６、１３５７７、および１３５７８の用量応答曲線を示す折れ線グラフである。図−８は、抗ウイルスアッセイにおけるＩＳＩＳ２９２２、１３５７２、１３５７３、および１３５７４の用量応答曲線を示す折れ線グラフである。図−９は、プラーク減少アッセイにおけるＩＳＩＳ２９２２、１３３１２、および１３５７８の用量応答曲線を示す折れ線グラフである。図−１０は、硝子体内注射後、種々の時点でのＩＳＩＳ２９２２およびＩＳＩＳ１３３１２の網膜濃度（μＭ）を示す折れ線グラフである。本発明の詳細な説明ヒト型ＣＭＶは大型でエンベロープを有するヘルペスウイルスであり、そのゲノムは長さ約２４０，０００ヌクレオチドの二本鎖ＤＮＡ分子からなる。このゲノムは全てのＤＮＡウイルスの中で最も複雑であり、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）のゲノムより約５０％大きい。無傷のウイルスＤＮＡは隣接する長いセグメント（Ｌ）および短いセグメント（Ｓ）からなり、そのそれぞれは繰返し配列の相同領域の側面にある独自のＤＮＡ配列の領域を含有する。群としては、ヒト型ＣＭＶ分離株は少なくとも８０％の配列ホモロジーを有し、そのためサイトメガロウイルスを亜群または亜型に分類することはほとんど不可能である。しかし、種々のＣＭＶのＤＮＡ調製の制限エンドヌクレアーゼのパターンの変化は疫学的に関連のない株において同定可能ではある。ＣＭＶのプロトタイプの株のＤＮＡ（ＡＤ１６９）はシークエンスされており、内輪の見積もりで１７５個の独自の翻訳のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含有することが報告されている。多くの予想されるＣＭＶ遺伝子産物は、他のヒト型ヘルペスウイルス遺伝子産物とホモロジーを示す。ヒトの許容線維芽細胞では、ＣＭＶ遺伝子の発現は遺伝的事象のカスケードによって調節されており、これは転写および翻訳レベルの両方に作用する。ＣＭＶ遺伝子発現は、極初期（ＩＥ）、初期、および後期の３段階に分類することができる。ウイルスの吸着、侵透、および被覆の解体に続き、一群のウイルス転写物、極初期メッセンジャーＲＮＡ（ＩＥｍＲＮＡ）が、シクロヘキシミドのような翻訳阻害剤の存在下でさえも１〜４時間以内に合成される。通常の感染過程ではＩＥｍＲＮＡが翻訳され、そのタンパク質産物が初期の転写事象の開始の手段となる。少なくとも４つのタンパク質がＩＥｍＲＮＡから合成され、その１つは糖タンパク質である。ＩＥ１およびＩＥ２タンパク質は他のＣＭＶ遺伝子に対する転写活性化因子であり、ＩＥ３タンパク質はインビトロでＮＩＨ３Ｔ３細胞を形質転換できるＣＭＶゲノムの領域を含有する。初期タンパク質は、ウイルスのＤＮＡ合成に先立って合成されるｍＲＮＡにコードされる。多くの初期タンパク質は、感染した細胞でのヌクレオチド代謝およびＤＮＡ合成において役割を果たす。ウイルスのＤＮＡ合成の開始後、後期ｍＲＮＡの転写は最大となり、おそらくこれはテンプレートが大量にあることが必要なことを反映している。後期ＣＭＶタンパク質にはウイルスエンベロープの糖タンパク質成分、ウイルスのキャップシッドタンパク質、そして、成熟ＣＭＶ粒子の集合もしくは構造の恒常性および／または感染細胞からの集合ウイルス粒子の出現に必要とされる他のタンパク質がある。ＣＭＶ遺伝子発現に対して作用する転写制御に加え、転写後制御の例がいくつかのＣＭＶタンパク質の生成に影響することが知られている。ｍＲＮＡのスプライシングはＨＳＶ遺伝子発現に観察されるのに比べてより一般的であり、同種のｍＲＮＡの５’非翻訳領域のヌクレオチド配列組成は少なくとも１つの初期ＣＭＶタンパク質の合成に影響を与えることが報告されている。ヒト型ＣＭＶゲノムはゲノム構造の点で、ヘルペスウイルスの中で最も複雑である。ヒト型ＣＭＶの複製欠損株は２つのウイルス遺伝子、極初期化合物(ＩＥ１またはＩＥ２)およびＤＮＡポリメラーゼについて単離されているだけである。これらの遺伝子はヒト型ＣＭＶ遺伝子発現に重要な役割を果たすことが知られている。それらはアンチセンス化合物の設計のための主要な標的として選択されてきた。治療のためのアンチセンスオリゴヌクレオチド設計のための第二の標的遺伝子は、単純ヘルペスウイルスの遺伝子との類推によって選択されてきた。そのような遺伝子は単純ヘルペスウイルスの複製に必須であるように、そして／またはアンチセンスの阻害に感受性があるように決定されてきた。最近アンチセンス阻害に感受性があることが見出された単純ヘルペスウイルスの４つの遺伝子産物は、ウイルス粒子の被包タンパク質（ＵＬ４８）、リボヌクレオチド還元酵素を構成する２つのタンパク質（ＵＬ３９、４０）、およびウイルス粒子のホスホトランスフェラーゼ（ＵＬ１３）である。現在研究されている他の単純ヘルペスウイルス遺伝子はＤＮＡ複製補助酵素（ＵＬ５、８、９、２９、４２、５２）および主要なキャップシッドタンパク質（ＵＬ３６）である。ＣＭＶは、これらの単純ヘルペスウイルスタンパク質のそれぞれと機能的に類似性がありうると同定されているタンパク質をコードする；これらの遺伝子は本発明に関連して、第二の標的として役立つように選択されたものである。ＣＭＶにおける極初期転写の分子生物学は、真核細胞における転写ユニットのものと同じくらい十分に明らかになっている。つまり、主要な極初期転写物（ＩＥ１）の合成はｍＲＮＡのキャップ部位の多くの５’反復単位によって制御されている。これらの反復は、細胞特異的、かつ分化特異的に作用することが知られている多くの転写応答分子に感受性がある。ＩＥ１のｍＲＮＡは大量にあるＲＮＡで、長さ１．９ｋｂであり、ＰＡＧＥ−ＳＤＳにおいて見かけの分子量が７２ｋＤａで移動するタンパク質をコードする。このタンパク質はウイルス粒子内に見出されており、それ自身の発現とＩＥ２遺伝子産物の発現を制御する。極初期転写の初期段階では、ＩＥ１ｍＲＮＡのみが細胞ＲＮＡポリメラーゼによって合成される。この感染の初期段階でＩＥＩｍＲＮＡのプロセシングによって少量のＩＥ２ｍＲＮＡが生成される。ある時間が経つと、ＩＥ１タンパク質のレベルが蓄積してＩＥ１遺伝子のプロモーター領域と結合し、ＩＥ１ｍＲＮＡの更なる転写を抑制し、これによってＩＥ２遺伝子のより弱い下流プロモーターがＩＥ２ｍＲＮＡの更なる合成を制御する。ＩＥ１遺伝子産物は増殖感染の際にウイルスの転写を増進するか、あるいはまた、潜伏状態からのウイルス遺伝子の発現を活性化するように作用しうると考えられてきた。ＩＥ１遺伝子のプロモータの、細胞の種類および分化またはホルモン応答要素はこの提案と一致する。ＩＥ２タンパク質は、細胞およびウイルス由来の既知の他の転写活性化タンパク質と同様の方法でＣＭＶの初期および後期遺伝子の多くを転写的に活性化する能力を有する。従って、ＩＥ２タンパク質はＣＭＶ遺伝子発現の主要なスイッチの一つであると考えられる。ＣＭＶ遺伝子の他の制御スイッチはＤＮＡポリメラーゼタンパク質である。後期ウイルス遺伝子の転写はウイルスのＤＮＡ複製の開始まではごく低レベルで作用し、その後、テンプレートの有効率の増加により後期遺伝子は活性化される。このテンプレートの有効率の増加で作用する正確な分子の状態は明確でないが、ウイルスのＤＮＡポリメラーゼの存在およびゲノムの複製は観察された作用に必須である。ＣＭＶ網膜炎は症状の重い感染症で、急速に失明に至ることも珍しくない。４０％までのＡＩＤＳ患者は疾病の最終段階でこの症状を有する。Cohenら,ibid。これは黄白色斑による網膜の混濁化が次第に拡大することを特徴とし、通常、主要な網膜血管係蹄の近隣で始まる網膜出血を伴う。患者は、中心窩または視神経に及ぶまで、あるいは網膜剥離が起こるまで、多くの場合無症状である。その後、急速に進行して失明に至る。最近使用される両薬剤、すなわち、ガンシクロビル（ＤＨＰＧ）、構造的にアシクロビルに関連するヌクレオシド類似体、（２−アミノ−１，９［［２−ヒドロキシ−１（ヒドロキシメチル）エトキシ］メチル］−６Ｈ−プリン−６−オン；９−［（１，３−ジヒドロキシ−２−プロポキシ）メチル］グアニン；２’− ノル−２’デオキシグアノシン）；およびフォスカーネット（ジヒドロキシホスフィンカルボン酸オキシド３ナトリウム塩；ホスホノホルメート３ナトリウム；カルボキンリン酸３ナトリウム）は限られた期間だけ有効であり、多くの患者で、維持療法中に感染が進行する。ガンシクロビルはＡＩＤＳ患者のＣＭＶ網膜炎の管理に有用であることが証明されている。導入療法は５ｍｇ／ｋｇで１日２回、１０〜１４日間行う；維持療法は５ｍｇ／ｋｇで１日１回である。残念ながら、維持療法を施与する際にも疾病が進行するのが一般的である。全身性のガンシクロビルは静脈内投与するのが最も一般的である。しかしながら、骨髄の抑制が通常の副作用であり、ジドブジン（ＡＺＴ）治療を同時に行っていれば、これが特に問題となる。ガンシクロビルの硝子体内投与が代替として使用されてきた。フォスカーネットの全身性投与（６０ｍｇ／ｋｇで一日３回１４日間の後、維持治療として９０ｍｇ／ｋｇ／日）は患者の余命を延長し、またＣＭＶ網膜炎にも有効であることが発見されているが、フォスカーネットは全身性ガンシクロビルより寛容性が低い。患者の中にはフォスカーネットとガンシクロビルの両方に不耐性となる者もあり、また両薬剤に不応答である、もしくは不応答になるＣＭＶ網膜炎を起こす者もいる。アンチセンスオリゴヌクレオチド剤、ＩＳＩＳ２９２２（フォミバーセン）は、ＡＩＤＳ患者のＣＭＶ網膜炎の進行を停止する臨床的効果があることが証明されている。持続的疾病の緩解はフォミバーセンを単独で、またはガンシクロビルとの併用治療で投与された患者にみられた。化合物は十分寛容性があると考えられたが、より低頻度の投与で患者のクオリティー・オブ・ライフを向上できるように改良された薬剤の発見が望まれる。アンチセンスデオキシホスホロチオエートオリゴヌクレオチドＩＳＩＳ２９２２（ＳＥＱＩＤＮＯ：２２；フォミバーセン）は、ヒト型ＣＭＶまたはＨＩＶ感染症の治療に現在使用されている化合物との併用での抗ウイルス活性について評価が行われてきた。ＩＳＩＳ２９２２の抗ヒト型ＣＭＶ活性はガンシクロビル（ＤＨＰＧ）またはフォスカーネットのものと相加的なもので、ＡＺＴまたはｄｄＣによって負の影響を受けない。まず、ＣＭＶ網膜炎に罹患した１０人の患者でＩＳＩＳ２９２２（ＳＥＱＩＤＮＯ：２２）の第１相試験を実施した。これらの患者はＨＩＶ陽性の患者であり、片眼または両眼がＣＭＶ網膜炎であると診断された。患者は、最初にガンシクロビルまたはフォスカーネットのいずれかで導入療法を受けた後のガンシクロビルまたはフォスカーネットによる維持療法で少なくとも１度は進行しており、これらの治療薬ではもはや効果的な治療ができなかった。３つの投与量（７５μｇ、１５０μｇ、および３００μｇ）が選択され、硝子体内の組成物濃度を、それぞれ約２μＭ、４μＭ、および８μＭとなるようにした。投与計画は動物での薬物動態学的研究に基づいて選択したが、週毎の投与に続き、隔週毎に維持投与するものであった。病変の状態に次いで、慣例的な眼部の臨床検査および眼底の写真撮影を行った。ＣＭＶ網膜炎では、最初の効験の終了点は疾病の進行の有無である。進行は以下のうちの１つとして定義される：新たな病変（直径７５０ミクロン）の出現：衛星病変を含む、ベースラインにある病変の辺縁の進出（７５０ミクロンの前線に沿って７５０ミクロン）。進行の臨床的痕跡は眼底写真で確認する。ベースラインにある病変の辺縁の曖昧さの変化も考慮するが、ただし辺縁の曖昧さが増加しても、進行を定義する初期事象の少なくとも１つを伴わない限り進行とは解釈しない。ガンシクロビルまたはフォスカーネットで進行したこれらの患者１０人のうち７人で、本発明の組成物による治療により疾病の進行が効果的に停止した。両眼に感染したある患者は、本発明の組成物による硝子体内治療が成功したが、ガンシクロビル療法だけではうまくいかなかった。この患者群では疾病の自然消失または回復は予期されない。現在行われている、他のＣＭＶ網膜炎治療がうまくいかなかった進行したＣＭＶ網膜炎患者に対するＩＳＩＳ２９２２（フォミバーセン）のオープンラベルの非管理臨床試験の結果が最近発表された。ＩＳＩＳ２９２２は、３３０μｇの投与量で迅速かつ持続的に疾病を緩解する。この持続的疾病の緩解はＩＳＩＳ２９２２を単一薬剤治療として、またはガンシクロビルとの併用治療として投与した患者に観察される。第１２回ヌクレオシド、ヌクレオチド、およびそれらの生物学的適用に関する国際円卓会議、La Jolla、CA、1996年９月。ＣＭＶに向けられた第二のアンチセンス薬剤は、現在臨床試験が始まっている。この化合物、ＧＥＭ１３２（Hybridon社）は両末端に修飾型ヌクレオチドを有するホスホロチオエートオリゴヌクレオチドであり、ヒト型ＣＭＶ遺伝子ＵＬ３６およびＵＬ３７のイントロン−エクソン境界を標的とする。硝子体内注射による投与を意図するものと考えられる。第２世代のオリゴヌクレオチド、フォミバーセン（ＳＥＱＩＤＮＯ：２２）のヌクレオチド配列を有するが数個の２’−メトキシエトキシ修飾を有するものが、現在、意外にも眼部において極めて安定であることが発見された。本発明によれば、ＣＭＶのＩＥ１、ＩＥ２、またはＤＮＡポリメラーゼ遺伝子を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。ある好ましい態様では、オリゴヌクレオチドは少なくとも１個の２’−メトキシエトキシ修飾を含有する。そのような修飾されたオリゴヌクレオチドは２’−デオキシ類似体に比較して、特に眼の硝子体での安定性が高いことが発見されている。オリゴヌクレオチド組成物は単独で、またはガンシクロビルもしくはフォスカーネットのような第２の抗ウイルス剤との併用で投与してもよい。この方法によりＣＭＶ感染症が阻害される。またこの方法は、ＣＭＶを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用してＣＭＶ感染症、特にＣＭＶ網膜炎を治療する。好ましい態様では、オリゴヌクレオチドは少なくとも１個の２’−メトキシエトキシ修飾を有する。別の好ましい態様では、オリゴヌクレオチドを硝子体内に投与する。本発明のオリゴヌクレオチドおよび医薬組成物は、局所治療または全身治療のいずれが好ましいかによって、そして治療する部位によって、種々の方法で投与してもよい。投与は局所（眼、膣、直腸、鼻腔内、経皮を含む）、経口、または非経口でもよい。眼部への投与に好ましい形態は硝子体内投与であり、硝子体内注射による投与および硝子体内インプラントの使用がある。ある化学修飾、特に１個以上の糖部分の２’位での修飾は、経口投与のためのオリゴヌクレオチドを安定化するために特に有用であると考えられる。２’−メトキシエトキシ修飾を有するオリゴヌクレオチドは経口投与に特に好適であると考えられる。非経口投与には点滴、輸液もしくは注射、皮下、腹膜内および筋肉内注射、例えば吸入法もしくは通気法のような肺投与、そして髄腔内もしくは心室内投与がある。局所投与のための製剤には、経皮パッチ、インプラント（特に硝子体内インプラント）、軟こう、ローション、クリーム、ジェル、滴剤、坐薬、スプレー、液体、およびパウダーがありうる。従来の薬剤キャリアー、水性、パウダー、または油性の基剤、増粘剤などが必要であるか、または好適でありうる。コーティングしたコンドーム、手袋なども有用でありうる。経口投与のための組成物には、パウダーもしくは顆粒、水溶性もしくは非水溶性媒質の懸濁液もしくは溶液、カプセル、サシェ剤、または錠剤がある。増粘剤、香味料、希釈剤、乳化剤、分散助剤、または結合剤が含まれてもよい。薬剤的に許容しうるキャリアーには生理食塩水および緩衝液があるが、それらに限定されるものではない。好適な薬剤的に許容しうるキャリアーは当該分野でよく知られ、例えばGennaro，Alfonso，編，Remington's Pharmaceutical Scien ces，第１８版（1990）に記載されている。Mack Publishing社，Easton，PAはこの分野の標準的な参考テキストである。薬剤キャリアーは、意図する投与経路および標準的な薬事経験に従って選択してもよい。例えば硝子体内注射には、オリゴヌクレオチドを緩衝液、好ましくは重炭酸緩衝液で投与するのが好ましい。静脈内投与には生理食塩水が好ましい。投薬は治療する疾病状態の重症度および感受性に依存し、治療過程は数日〜数カ月、または、回復するかもしくは疾病状態が軽減するまで継続される。最適な投薬計画は、患者の体内における薬剤の蓄積を測定して算定することができる。通常の技術を有する者は最適な投与量、投薬方法論、および反復率を容易に決定できる。最適な投与量は、個々のオリゴヌクレオチドの相対力価によって多様であり、一般的には、インビトロおよびインビボの動物モデルで効果的であることが見出されたＩＣ₅₀（５０％が阻害される濃度）またはＥＣ₅₀（５０％に有効である濃度）に基づいて算定することができる。一般に、投与量は体重ｋｇあたり０．０１μｇ〜１００ｇであり、日毎、週毎、月毎、もしくは年毎に１回以上、または２〜２０年毎に１回、投与してもよい。本発明にかかるオリゴヌクレオチドはＣＭＶを標的とする。通常の技術を有する当業者は、好ましいアンチセンスの標的に関する知識からそのようなオリゴヌクレオチドを調製してここに開示されるＣＭＶ感染症を調節することができる。異なる種、および種の中の異なる型に由来するサイトメガロウイルスの核酸配列には相違点が存在することが予測される。従って、例えば、種々のサイトメガロウイルスの種または株の領域はそれぞれの種に対して本質的に同一の機能を果たしており、遺伝情報の発現への干渉により種々の種または株で同様の結果が与えられると考えられる。たとえ種間のヌクレオチド配列の相違が確実に存在しても、このように考えられる。従って、本明細書に明記するヌクレオチド配列は、記載される特定の種または株に具象的なものであると理解される。異なる種のサイトメガロウイルスの相同または類似配列は本発明の範囲内であることは明確に予期される。本発明に従って使用されるオリゴヌクレオチドおよび類似体は、周知の固相合成法によって簡便かつ慣例的に合成してもよい。そのような合成の装置はApplie d Biosystemsを含むいくつかの販売者から販売されている。そのような合成のための他の方法のいずれを使用してもよいが、オリゴヌクレオチドの実際の合成はルーチン操作をする者の技量で十分できるものである。また、周知の通り、同様の技術を使用してホスホロチオエートおよび２’−修飾型誘導体のようなオリゴヌクレオチド類似体を調製する。種々の２’−および／または他の修飾をしたホスホルアミダイトは自動化した合成に使用するための市販品として入手できる。本発明では、サイトメガロウイルス核酸の選択された配列を標的とするヌクレオチド塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを提供する。核酸標的はＤＮＡ、ＲＮＡ、またはプレ−ＲＮＡであってもよい。本発明においては、選択された核酸に対するオリゴヌクレオチドの“標的化”は複数段階の過程である。通常この過程は、機能を調節すべき核酸配列の同定から開始する。これは例えば、その発現が特定の障害または疾病状態と関係するような細胞遺伝子（または遺伝子から転写されたｍＲＮＡ）、または感染因子由来の外来の核酸であってもよい。本発明では、標的はＣＭＶ遺伝子またはＣＭＶ遺伝子から転写されたｍＲＮＡである。標的化の過程はまた、オリゴヌクレオチドの相互作用が起き、結果として所望の効果、すなわちタンパク質発現の検出または調節のいずれかが得られるようなこの遺伝子内の部位の決定を含む。本発明においては、好ましい遺伝子内部位は遺伝子のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）の翻訳開始または停止コドンを含む領域である。当該分野で周知の通り、翻訳開始コドンは一般に５’−ＡＵＧ（転写されたｍＲＮＡ分子で；相当するＤＮＡ分子では５’−ＡＴＧ）であるため、翻訳開始コドンは“ＡＵＧコドン”、“スタートコドン”、または“ＡＵＧスタートコドン”とも呼ばれる。少数の遺伝子はＲＮＡ配列５’−ＧＵＧ、５’ −ＵＵＧ、または５’−ＣＵＧを有する翻訳開始コドンを有し、５’−ＡＵＡ、５’−ＡＣＧ、および５’−ＣＵＧはインビボで機能することが証明されている。更に、５’−ＵＵＵはインビトロで翻訳開始コドンとして機能する（Brigstoc k ら，Growth Factors 1990，4，45；Gelbertら，Somat．Cell．Mol．Genet．19 90，16，173；GoldおよびStormo：大腸菌およびサルモネラチフィムリウム(Esch erichia coli and Salmonellat yphimurium)：細胞および分子生物学（Celltlla r and Molecular Biology），第２巻，1987，Neidhardtら編，米国微生物学会， Washington，D.C.，p.1303）。従って、それぞれの場合の開始アミノ酸は一般にメチオニン（真核生物の場合）またはホルミルメチオニン（原核生物の場合）であるが、“翻訳開始コドン”および“スタートコドン”は多くのコドン配列を包含しうる。また、遺伝子は代替となるスタートコドンを２個以上含有しうることが当該分野で知られており、そのうちのいずれか１個が特定の細胞の型または組織において、または特定の一連の条件下において、翻訳開始に優先的に使用されて、種々のアミノ末端配列を有する関連ポリペプチドを生成しうる（Markussenら，Development 1995，121，3723；Gaoら，Cancer Res．1995，55 ，743；McDermottら，Gene 1992，117，193；Perriら，J．Biol．Chem．1991，2 66，12536；Frenchら，J．Virol．1989，63，3270；Pushpa-Rekhaら，J．Biol． Chem．1995，270，26993；Monacoら，J．Biol．Chem．1994，269，347;DeVirgil ioら，Yeast 1992，8，1043;Kanagasundaramら，Biochim．Biophys．Acta 1992 ，1171，198;Olsenら，Mol．Endocrinol．1991，5，1246；Saulら，Appl．Envir on．Microbiol．1990，56，3117；Yaoitaら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 1990 ，87，7090；Rogersら，EMB0 J．1990，9，2273）。本発明においては、“スタートコドン”および“翻訳開始コドン”とは、そのコドンの配列に関わらず、インビボでＣＭＶのＲＮＡ分子の翻訳を開始するのに使用されるコドンをいう。また当該分野で知られるように、遺伝子の翻訳終止コドン（または“停止コドン”）は３つの配列、すなわち５’−ＵＡＡ、５’−ＵＡＧ、および５’−ＵＧＡ（相当するＤＮＡ配列はそれぞれ５’−ＴＡＡ、５’− ＴＡＧ、および５’−ＴＧＡである）のうちの１つを有しうる。“開始コドン領域”および゛“翻訳開始コドン領域”とは、翻訳開始コドンからいずれかの方向（すなわち５’または３’の方向）にある連続する約２５〜約５０のヌクレオチドを包含するｍＲＮＡまたは遺伝子の部分をいう。同様に、“停止コドン領域” および“翻訳終止コドン領域”とは、翻訳終止コドンからいずれかの方向（すなわち５’または３’の方向）にある連続する約２５〜約５０のヌクレオチドを包含するｍＲＮＡまたは遺伝子の部分をいう。ｍＲＮＡプロセシング部位、特にスプライス部位またはスプライス連結部もまた好ましい標的部位でありうる。転写開始部位、または“５’キャップ部位”および５’キャップ領域（これはキャップされたｍＲＮＡの５’最末端にある約２５〜約５０の連続するヌクレオチドを包含する）もまた有効な標的でありうる。標的部位が同定されれば、標的に十分相補的である、すなわち十分な特異性で十分にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを選択して所望の効果を得る。本発明においては、“ハイブリダイゼーション”とは、通常は相反する核酸鎖上、または一本の核酸鎖の２つの領域にある相補的な塩基間の水素結合（ワトソン−クリック塩基対合としても知られる）を意味する。グアニンとシトシンは、それらの間に３つの水素結合が生成されることが知られている相補的な塩基の例である。アデニンおよびチミンは、それらの間に２つの水素結合が生成される相補的な塩基の例である。“特異的にハイブリダイズする”とは、標的とオリゴヌクレオチドまたは類似体との間に安定かつ特異的な結合が生じるに十分な程度の相補性をいう。当該分野では、オリゴヌクレオチドは特異的にハイブリダイズするために、その標的核酸配列と１００％相補的である必要はないと理解されている。あるオリゴヌクレオチドが特異的にハイブリダイズできるのは、そのオリゴヌクレオチドの標的への結合がメッセンジャーＲＮＡの正常な機能に干渉して有効性を失わせ、そして、十分な程度の相補性があるために、特異的結合が必要とされる条件下（すなわち、インビボアッセイもしくは治療処置の場合は生理学的条件下、または、インビトロアッセイの場合はアッセイが行われる条件下）においてオリゴヌクレオチドの非標的配列への非特異的結合が起こらない場合である。オリゴヌクレオチドとその相補的な標的との間の関係は、通常“アンチセンス ”と表される。オリゴヌクレオチドはＲＮＡの機能（タンパク質への翻訳、細胞質への転位、成熟、またはその全生物学的機能に必要な他の活性のいずれか）を阻害することができる。全てまたは一部の機能を果たすＲＮＡの欠損により、ウイルスの正常なライフサイクルを制御するゲノムの一部の欠損が起こる。現在では、ＣＭＶ感染症の緩和に効果的なオリゴヌクレオチドを設計できることが発見されている。オリゴヌクレオチドは約５〜約５０ヌクレオチドユニットの間であるのが好ましく、より好ましくは約８〜約２５ヌクレオチドの間である。オリゴヌクレオチドを１個以上の塩基、糖、またはバックボーンの位置で修飾して有効性を向上してもよい。そのような修飾によって、ヌクレアーゼに対するオリゴヌクレオチドの安定性を増加し、そして／または標的へのオリゴヌクレオチドの結合親和性を向上してもよい。安定性および結合親和性は共に、当業者によって日常的かつ容易に測定される。本発明においては、“オリゴヌクレオチド”という用語は、リボ核酸またはデオキシリボ核酸のオリゴマーまたはポリマーをさす。この用語は、天然存在型の核塩基、糖、および糖間の共有（バックボーン）結合からなるオリゴヌクレオチド、そして同様の機能をする非天然存在型部分を有するオリゴヌクレオチドを含む。多くの場合そのような修飾または置換されたオリゴヌクレオチドは天然型より好ましく、これは、例えば向上された細胞取り込み、向上された標的核酸に対する親和性、そしてヌクレアーゼ存在下での向上された安定性のような好ましい特性のためである。アンチセンスオリゴヌクレオチドおよび好ましい修飾についての検討は、De Mesmaekerら，Acc．Chem．Res．1995，28，366-374に見い出すことができる。本発明に描かれる好ましいオリゴヌクレオチドの特定の例には、修飾されたバックボーン、例えばホスホロチオエート、ホスホトリエステル、メチルホスホン酸、短鎖アルキルもしくはシクロアルキル糖間結合、または、短鎖ヘテロ原子もしくはヘテロ環糖間結合を含有するものがある。最も好ましいのはホスホロチオエートバックボーンを有するオリゴヌクレオチドおよびヘテロ原子バックボーンを有するオリゴヌクレオチド、特にＣＨ₂−ＮＨ−Ｏ−ＣＨ₂、ＣＨ₂−Ｎ（ＣＨ₃ ）−Ｏ−ＣＨ₂（メチレン（メチルイミノ）またはＭＭＩバックボーンとして知られる）、ＣＨ₂−Ｏ−Ｎ（ＣＨ₃）−ＣＨ₂、ＣＨ₂-Ｎ（ＣＨ₃）−Ｎ（ＣＨ₃） −ＣＨ₂、およびＯ−Ｎ（ＣＨ₃）−ＣＨ₂−ＣＨ₂バックボーンであり、ここで天然型ホスホジエステルバックボーンはＯ−Ｐ−Ｏ−ＣＨ₂と表される。De Mesmae kerら，Acc．Chem．Res．1995，28，366-374に開示されるアミドバックボーンも好ましい。またモルホリノバックボーン構造を有するオリゴヌクレオチドも好ましい（SummertonおよびWeller，米国特許第5,034,506号）。他の好ましい態様では、ペプチド核酸（ＰＮＡ）バックボーンのように、オリゴヌクレオチドのホスホジエステルバックボーンをポリアミドバックボーンに替え、核塩基を直接または間接的にポリアミドバックボーンのアザ窒素原子に結合させる（Nielsenら，S cience 1991，254，1497）。また、オリゴヌクレオチドは１個以上の置換された糖部分を含有してもよい。好ましいオリゴヌクレオチドは２’位に以下のうちの１つを含有する：ＯＨ、ＳＨ、ＳＣＨ₃、Ｆ、ＯＣＮ、ＯＣＨ₃ＯＣＨ₃、ＯＣＨ₃Ｏ（ＣＨ₂)_nＣＨ₃、Ｏ（ＣＨ₂）_nＮＨ₂、もしくはＯ（ＣＨ₂）_nＣＨ₃（式中ｎは１〜約１０である）；Ｃ₁ からＣ₁₀の低級アルキル、アルコキシアルコキシ（すなわち−Ｏ−アルキル−Ｏ −アルキル）、置換された低級アルキル、アルカリル、もしくはアラルキル；Ｃｌ；Ｂｒ；ＣＮ；ＣＦ₃；ＯＣＦ₃；Ｏ−、Ｓ−、もしくはＮ−アルキル_;Ｏ−、Ｓ−、もしくはＮ−アルケニル；ＳＯＣＨ₃；ＳＯ₂ＣＨ₃；ＯＮＯ₂；ＮＯ₂；Ｎ₃ ；ＮＨ₂；ヘテロシクロアルキル；ヘテロシクロアルカリル；アミノアルキルアミノ；ポリアルキルアミノ；置換されたシリル；ＲＮＡ開裂基；レポーター基；挿入基；オリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を向上する基；または、オリゴヌクレオチドおよび同様の特性を有する他の置換基の薬力学的特性を向上する基。好ましい修飾には２’−メトキシエトキシ（２’−Ｏ−ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＣＨ₃、２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）としても知られる）がある（Martinら，Helv ．Chim．Acta 1995，78，486）。他の好ましい修飾には２’−メトキシ（２’− Ｏ−ＣＨ₃）、２’−プロポキシ（２’−ＯＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₃）、および２’−フルオロ（２’−Ｆ）がある。同様の修飾をオリゴヌクレオチドの別の位置、特に３’末端ヌクレオチドにある糖の３’位および５’末端ヌクレオチドの５’位に施してもよい。またオリゴヌクレオチドは、ペントフラノシル基の位置にシクロブチルのような糖様のものを有してもよい。また、オリゴヌクレオチドは核塩基（当該分野では多くの場合、単に“塩基” と呼ばれる）の修飾または置換を付加的に、または代替として含有してもよい。ここで使用するところの“未修飾の”または“天然の”核塩基にはアデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、およびウラシル（Ｕ）がある。修飾された核塩基には、天然の核酸には稀にしか、あるいは一時的にしか見られない核塩基、例えばヒポキサンチン、６−メチルアデニン、５−ｍｅピリミジン、特に５−メチルシトシン（５−メチル−２’デオキシシトシンとも呼ばれ、また当該分野ではしばしば５−ｍｅ−Ｃと表される）、５−ヒドロキシメチルシトシン（ＨＭＣ）、グリコシルＨＭＣ、およびゲントビオシルＨＭＣ、そして合成核塩基、例えば２−アミノアデニン、２−チオウラシル、２−チオチミン、５−ブロモウラシル、５−ヒドロキシメチルウラシル、８−アザグアニン、７−デアザグアニン、Ｎ⁶（６−アミノヘキシル）アデニン、および２，６−ジアミノプリンがある。Kornberg,A.DNA Replication,W.H.Freeman & Co.,San Francisco，19 80，pp75-77；Gebeyehu，G．，ら，Nucl．Acids Res．1987，15，4513。当該分野で知られる“ユニバーサル”塩基、例えばイノシンを含めてもよい。５ −ｍｅ−Ｃ置換は０．６〜１．２℃で核酸デュープレックスの安定性を向上することが証明されており（Sanghvi，Y．S．アンチセンスの研究および適用(Antise nse Research and Applications),CrookeおよびLebleu編，CRC Press，Boca R． aton，1993，pp．276-278）、現在のところの好ましい塩基置換である。本発明のオリゴヌクレオチドの別の修飾には、オリゴヌクレオチドの活性もしくは細胞取り込みを向上する１個以上の部分または複合体のオリゴヌクレオチドへの化学結合が含まれる。そのような部分には以下の様な脂質部分があるが、それらに限定されるものではない：コレステロール部分、コレステリル部分（Lets ingerら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 1989，86，6553）、コール酸（Manohara nら，Bioorg．Med．Chem．Let．1994，4，1053）、チオエーテル（例えばヘキシル−Ｓ−トリチルチオール。Manoharanら，Ann．N．Y．Acad．Sci．1992，660， 306；Manoharanら，Bioorg．Med．Chem．Let．1993，3，2765）、チオコレステロール（Oberhauserら，Nucl．Acids Res．1992，20，533）、脂肪族鎖（例えばドデカンジオールまたはウンデシル残基。Saison−Behmoarasら，EMBO J．1991 ，10，111；Kabanovら，FEBS Lett．1990，259，327；Svinarchukら，Biochimie 1993，75，49）、リン脂質（例えばジ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロールまたはトリエチルアンモニウム１，２−ジ−Ｏ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロ−３−Ｈ−ホスホネート。Manoharanら，Tetrahedron Lett．1995，36，3651 ；Sheaら，Nucl．Acids Res．1990，18，3777）、ポリアミンもしくはポリエチレングリコール鎖（Manoharanら，Nucleosides & Nucleotides 1995，14，969）、あるいはアダマンタン酢酸（Manoharanら，Tetrahedron Lett．1995，36，365 1）のような脂質部分、パルミチル部分（Mishraら，Biochim．Biophys．Acta 19 95，1264，229）、または、オクタデシルアミンもしくはヘキシルアミノ−カルボニル−オキシコレステロール部分（Crookeら，J．Pharmacol．Exp．Ther．1996，277，923）。親油性部分を含有するオリゴヌクレオチド、およびそのようなオリゴヌクレオチドを調製する方法は当該分野で知られており、例えば、米国特許第5,138,045号、第5,218,105号、および第5,459,255号に記載されている。本発明のオリゴヌクレオチドはプロドラッグとして提供されてもよく、これは、一般的には体内において、開裂して活性のあるオリゴヌクレオチドを生成する部分を１つ以上含有する。プロドラッグ法の一例はImbachらのWO94/26764に記載されている。所定のオリゴヌクレオチドの全ての位置が一様に修飾される必要はなく、実際に、１個より多くの前述の修飾が単一のオリゴヌクレオチド中に、またはオリゴヌクレオチド中の単一のヌクレオシド内にでも、組み込まれていてもよい。また、本発明にはキメラオリゴヌクレオチドであるオリゴヌクレオチドも含まれる。本発明においては、“キメラの”オリゴヌクレオチド、または“キメラ”とは、２個以上の化学的に異なる領域を含有し、それぞれが少なくとも１個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドである。これらのオリゴヌクレオチドはある領域を少なくとも１つ含有するが、その領域ではオリゴヌクレオチドが修飾されて、それによってオリゴヌクレオチドのヌクレアーゼ分解に対する耐性が向上し、細胞取り込みが増加し、そして／または標的核酸への結合親和性が向上する。オリゴヌクレオチドの更なる領域はＲＮＡ：ＤＮＡまたはＲＮＡ：ＲＮＡハイブリッドを開裂できる酵素の基質として作用してもよい。例として、ＲＮアーゼＨは細胞エンドヌクレアーゼで、ＲＮＡ：ＤＮＡデュープレックスのＲＮＡ鎖を開裂する。従って、ＲＮアーゼＨの活性化によりＲＮＡ標的の開裂が起こり、それによって遺伝子発現のアンチセンスの阻害効果が大いに向上される。その結果、キメラオリゴを使用した場合には、同一の標的領域へハイブリダイズするホスホロチオエートデオキシオリゴヌクレオチドに比較して、より短いオリゴヌクレオチドで多くの場合同様の結果が得られる。ＲＮＡ標的の開裂はゲル電気泳動法によって、必要であれば当該分野で知られる核酸ハイブリダイゼーション法と合わせて、慣例的に検出することができる。一般的に、キメラオリゴヌクレオチドは“ギャップのある”オリゴヌクレオチド（または“ギャップマー”）であり、デオキシヌクレオチドの領域（“ギャップ”。好ましくは少なくとも４個の連続するデオキシヌクレオチドを含有する）の両側に、修飾されたヌクレオチド（好ましくは２’−糖修飾を有するヌクレオチド）の領域がある。好ましい態様では、隣接する領域（または“ウィング”）は２’−アルコキシまたは２’アルコキシアルコキシ修飾、より好ましくは２’−メトキシエトキシを含有する。好ましい態様では、バックボーンは全てホスホロチオエートであるか、または“ウィング ”がホスホジエステルで“ギャップ”がホスホロチオエートであってもよい。他の好ましい態様では、キメラオリゴヌクレオチドは“ウィングのある”オリゴヌクレオチド（または“ウィングマー”もしくは半キメラ）であってもよく、デオキシ“ギャップ”、好ましくは少なくとも４個の連続するデオキシヌクレオチドがあり、５’または３’側のいずれかに修飾されたヌクレオチドの領域が隣接する。この場合も隣接する領域（または“ウィング”）は好ましくは２’−アルコキシまたは２’アルコキシアルコキシ修飾、より好ましくは２’−メトキシエトキシを含有し、バックボーンは全てホスホロチオエートであるか、または“ウィング”がホスホジエステルで“ギャップ”がホスホロチオエートであってもよい。他のキメラオリゴヌクレオチドの構造も本発明に包含される。これらは糖、塩基またはバックボーンの他の修飾を、好ましくはオリゴヌクレオチドのウィングに含有してもよい。好ましい態様によれば、ｍＲＮＡはＣＭＶの複製を阻害するのに十分な程度に干渉される。従って、ＣＭＶのｍＲＮＡ部分と相互作用できるオリゴヌクレオチドが包含される。疾病を有する疑いのある動物を本発明に従って調製したオリゴヌクレオチドと接触させる。特に、本発明はサイトメガロウイルス感染症の処置に、予防的または治療的に有効であると考えられる。サイトメガロウイルス感染症を有する動物を本発明にかかるオリゴヌクレオチドを投与して治療する。通常の技術を有する者は、最適な投与量、投与の方法論、および反復率を動物の体重と状態に従って容易に決定できる。最適な投与計画は薬剤の体内蓄積の測定から算定することができ、例えば、動物でもヒトでも、血漿中、または適当であれば標的組織中の薬剤濃度を測定して算定してもよい。通常の技術を有する者は最適な投与量、投与の方法論、および反復率を容易に決定できる。最適な投与量は個々のオリゴヌクレオチドの相対力価によって異なってもよく、一般的に、インビトロおよびインビボの動物実験におけるＥＣ₅₀またはＩＣ₅₀に基づいて算定できる。例えば、所定の化合物の分子量（オリゴヌクレオチド配列および化学構造から得られる）と、例えばＩＣ₅₀のような有効量（実験に基づいて得られる）から、投与量（ｍｇ／ｋｇ）は慣例的に算出される。ヒト型ＣＭＶに相補的なアンチセンス化合物は、種々のアッセイで有効性、安定性、および毒性について試験されてきた。以下の記載は例証であり、本発明を制限することを意図するものではない。ＣＭＶのＩＥ１、ＩＥ２、およびＤＮＡポリメラーゼ遺伝子を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドの設計およびスクリーニングｍＲＮＡ配列内の選択された標的には、ｍＲＮＡの安定性、プロセシング、および／または翻訳効率を制御することが知られているｍＲＮＡの領域がある。これらの標的部位には５’キャップ部位および翻訳開始制御部位がある。ＩＥ１、ＩＥ２、およびＤＮＡポリメラーゼ遺伝子の標的配列を表−１に示す：表−１において、略語Ｉ／Ｅはイントロン／エクソン連結部を意味し、またＡＵＧ領域はＩＥ２のｍＲＮＡの翻訳開始領域であり、その転写はＩＥ２の特定のプロモーター領域によって制御される。略語“ｎｕｃｓｉｇ”はＩＥ２タンパク質の核局在化シグナルを意味する。ヒト型ＣＭＶに相補的なオリゴヌクレオチドを設計し、抗ウイルス活性を試験した。これらのオリゴヌクレオチドの配列および遺伝子標的を表−２に示す。試験したオリゴヌクレオチドのうち、８個はヒト型ＣＭＶのＤＮＡポリメラーゼをコードするｍＲＮＡに相補的であり、残りはＣＭＶの主要な極初期プロモーターから転写されたＲＮＡに相補的であった。このゲノム領域からの２つの主要なタンパク質産物（ＩＥ１およびＩＥ２）は共通のプロモーターから転写されるメッセンジャーＲＮＡから合成されるので、これらの化合物のうちの８個はＩＥ１およびＩＥ２ｍＲＮＡの両方に相補的である。３個の化合物はＩＥ１およびＩＥ２ｍＲＮＡにのみ相補的である。３個の化合物はＩＥ１ｍＲＮＡにのみ相補的であり、残りの５個はＩＥ２ｍＲＮＡに特異的である。５μＭのスクリーニング濃度で、全てのホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは未処理の細胞に比較してウイルスの複製を低下させることが証明された（図 −１）。５個のオリゴヌクレオチドはこの濃度で９０％より高いウイルスの阻害を示した。これらのオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ２９１８、ＳＥＱＩＤＮＯ：１：８；ＩＳＩＳ２９１９、ＳＥＱＩＤＮＯ：１９；ＩＳＩＳ２９２０、ＳＥＱＩＤＮＯ：２０；ＩＳＩＳ２９２１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２１；Ｉ：ＳＩＳ２９２２、ＳＥＱＩＤＮＯ：２２）は本発明の好ましい態様である。用量応答試験では、非特異的効果およびアンチセンスオリゴヌクレオチドによるＣＭＶの複製の配列特異的阻害の間で差異が認められた。化合物ＩＳＩＳ２９２２（ＳＥＱＩＤＮＯ：２２）、ＩＳＩＳ２８８２（ＳＥＱＩＤＮＯ：１２）、ＩＳＩＳ２９１８（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８）、ＩＳＩＳ２９１９（ＳＥＱＩＤＮＯ：１９）、およびＩＳＩＳ３３００（ＳＥＱＩＤＮＯ：２４、Ｐ＝Ｓ／２’−Ｏ−Ｍｅ）は全て、ＣＭＶに非相補的なランダム化したオリゴヌクレオチドより低い投与量でＣＭＶの複製阻害を示した（図− ２）。これらのオリゴヌクレオチドは好ましい。ＩＳＩＳ２９１８（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８）、ＩＳＩＳ２９１９（ＳＥＱＩＤＮＯ：１９）、およびＩＳＩＳ２９２２（ＳＥＱＩＤＮＯ：２２）はＩＥ２ＲＮＡ配列に相補的である。ＩＳＩＳ２８８２(ＳＥＱＩＤＮＯ：１２)およびＩＳＩＳ３３００（ＳＥＱＩＤＮＯ：２４、Ｐ＝Ｓ、2’−Ｏ−Ｍｅ)は、ＩＥＩおよびＩＥ２転写物の５’キャップ領域に相補的である。ランダム化したコントロールオリゴヌクレオチドに比較したＩＳＩＳ２９１９およびＩＳＩＳ２９２２の活性は、独立した用量応答試験で確認した（図−３）。極初期遺伝子およびＤＮＡポリメラーゼを標的とした更なるオリゴヌクレオチド一連の２１個のホスホロチオエートオリゴヌクレオチドを、抗ＣＭＶ活性について試験した。これらのオリゴヌクレオチドを表−３に示し、、比較のためにＩＳＩＳ−２９２２およびネガティブコントロールのオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ３３８３）も示す。この試験で、ネガティブコントロールが活性を示す投与量の１／３（またはそれ未満）でＣＭＶを阻害するオリゴヌクレオチド（この表でＩＣ₅₀＝１μＭ以下）が好ましい。ＩＳＩＳ２９２２およびＩＳＩＳ３２４６オリゴヌクレオチド配列の化学修飾キメラオリゴヌクレオチドを合成したが、このオリゴヌクレオチドの中心にあるヌクレオチドは２’−デオキシヌクレオチドであるが、隣接する領域は２’− Ｏ−メチル化したヌクレオチドである。これらのキメラオリゴヌクレオチドはホスホロチオエートバックボーン、およびＩＳＩＳ２９２２（ＳＥＱＩＤＮＯ：２２）と同一のヌクレオチド配列を有する。キメラオリゴヌクレオチドは、ＥＬＩＳＡアッセイでＣＭＶに対して活性があった。ＩＳＩＳ４３２５はどちらかの側に５個の２’−Ｏ−メチルヌクレオチドが隣接する１１個の２’−デオキシヌクレオチドを有するが、そのＩＣ₅₀は０．５μＭであった。ＩＳＩＳ４３２６はどちらかの側に７個の２’−Ｏ−メチルヌクレオチドが隣接する７個のデオキシヌクレオチドを有するが、そのＩＣ₅₀は０．８μＭであった。同一配列（ＳＥＱＩＤＮＯ：２２）を共有し、全てのヌクレオチドに２’ −Ｏ−メチル修飾を有するいくつかのオリゴヌクレオチドをこのアッセイで試験したところ、ＩＣ₅₀は２．０μＭ（ホスホロチオエートバックボーン）および＞５．０μＭ（ホスホジエステルバックボーン）であることが証明された。これらの値は、ネガティブコントロールのオリゴヌクレオチドで得られたＩＣ₅₀の、それぞれ８０％および＞２００％であった。ＩＳＩＳ３２４６（ＳＥＱＩＤＮＯ：２４）の化学修飾のＣＭＶに対する活性についても試験した。これらのオリゴヌクレオチドはヒト型ＣＭＶのＩＥｍＲＮＡの５’キャップ領域を標的とする。オリゴヌクレオチド、修飾、およびこれらのオリゴヌクレオチドのＩＣ₅₀を、類似するコントロールと共に表−４に示す。表−４においてＩＣ₅₀が１μＭ以下のオリゴヌクレオチドが好ましい。ＩＳＩ：Ｓ２９２２（フォミバーセン；ＳＥＱＩＤＮＯ：２２、Ｐ＝Ｓ）の抗ウイルス活性上記のスクリーニングで確定したように、ＩＳＩＳ２９２２、ヒト型ＣＭＶに相補的なホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは抗ウイルス活性を有することが、ＣＭＶ複製のＥＬＩＳＡによるアッセイを使用して発見された。このオリゴヌクレオチドは５μＭのスクリーニング濃度で９０％より高いウイルス阻害を示した。用量応答試験では、非特異的効果およびこのオリゴヌクレオチドによるＣＭＶの複製の配列特異的阻害の間に差異が認められた。化合物ＩＳＩＳ２９２２はＣＭＶに非相補的なランダム化したオリゴヌクレオチドより低い投与量でＣＭＶの複製阻害を示した。ランダム化したコントロールオリゴヌクレオチドに比較したＩＳＩＳ２９２２の活性は、独立した用量応答試験で確認した。オリゴヌクレオチド２９２２の抗ウイルス活性とガンシクロビルの抗ウイルス活性との比較は、同一のＥＬＩＳＡアッセイを使用した用量応答試験で、ウイルスでの感染の後、ガンシクロビルまたはオリゴヌクレオチドのいずれかを添加して行った。オリゴヌクレオチドは、ヒト型ＣＭＶのＡＤ１６９株０．１μＭに対するＩＳＩＳ２９２２のＩＣ₅₀（５０％の阻害に必要な濃度）で有効な抗ウイルス活性を示した。この試験におけるガンシクロビルのＩＣ₅₀は３μＭであり、ＩＳＩＳ２９２２はガンシクロビルより質量ベースで約３０倍の効力があることが示された。同様の結果が、２９２２およびガンシクロビルの抗ウイルス活性をヒト型ＣＭＶのＴｏｗｎｅ株で測定した際に得られた。プラーク減少アッセイで測定したところ、宿主細胞のＩＳＩＳ２９２２での処理により、ヒト型ＣＭＶがＮＨＤＦ細胞の単分子層上にプラークを生成する能力が低減した。１μＭの濃度で、プラーク生成は９９％より高く阻害された。ＮＨＤＦ細胞における感染性ヒト型ＣＭＶの生成を阻害するＩＳＩＳ２９２２の能力を、生成量減少アッセイを使用して測定した。細胞外および細胞内のウイルスの生成量を合わせて評価したところ、９０％および９９％の感染性ウイルスの生成阻害が、それぞれ１．２μＭおよび２．２μＭのＩＳＩＳ２９２２濃度で生じた。対照的に、ガンシクロビルによる９０％および９９％のＣＭＶ生成阻害は、それぞれ１６μＭおよ３６μＭの濃度でなければ得られなかった。コントロールオリゴヌクレオチドは、３μＭまでの投与量で感染性ＣＭＶの生成阻害を示さなかった。両極初期ポリペプチドの濃度をウェスタンブロット法で分析し、ＩＳＩＳ２９２２で処理したＣＭＶ感染細胞においては低下することが見出された。両タンパク質は０．３μＭのオリゴヌクレオチドでの処理の後、有意に減少し、１μＭのオリゴヌクレオチドで処理した細胞では検出されなかった。ＩＳＩＳ２９２２の極初期タンパク質の発現を阻害する能力を、ヒト型ＣＭＶ感染細胞の免疫蛍光染色を使用して定性的に確認した。１μＭの濃度のＩＳＩＳ２９２２での処理の後、感染後２４時間のヒト型ＣＭＶ感染細胞の核の免疫蛍光特性を示す細胞の数は１０％未満まで減少したが、オリゴヌクレオチドで処理していないコントロール細胞では７０％以上であった。また、蛍光強度もオリゴヌクレオチド処理細胞では減少していた。他の抗ウイルス剤と併用した場合のＩＳＩＳ２９２２の抗ウイルス活性ＩＳＩＳ２９２２をヒト型ＣＭＶまたはＨＩＶ感染症の治療に現在使用されている化合物と併用した場合の抗ウイルス活性について評価した。ＩＳＩＳ２９２２の抗ヒト型ＣＭＶ活性はガンシクロビル（ＤＨＰＧ）またはフォスカーネットのものに相加的なものであり、ＡＺＴまたはｄｄＣによる逆の効果はなかった。ＩＳＩＳ２９２２の配列に関連する配列を有するオリゴヌクレオチドの活性ＩＳＩＳ２９２２の配列を有するが、内側の部位に不一致を生じる１個以上のヌクレオチド置換を有するオリゴヌクレオチドを、ＥＬＩＳＡアッセイで、ヒト型ＣＭＶに対して試験した。驚くべきことに、４個までの内部の不一致は抗ウイルス活性が消失することなく許容されるが、ＩＳＩＳ２９２２のＲＮＡ補体とハイブリダイズしたこれらのオリゴヌクレオチドについて測定したＴｍ（融解温度）はそれぞれの不一致ごとに有意に低下することが見出された。これを図− ４に示す。対照的に、２９２２と同一配列を有するが、それぞれの末端から１個のヌクレオチドを除去した１９量体（ＩＳＩＳ４３７６）は、ＥＬＩＳＡアッセイにおいて５μＭまでの濃度で不活性であった。それぞれの末端から更にヌクレオチドを除去したオリゴヌクレオチド（１７量体）も不活性であった。これらのオリゴヌクレオチドおよびそのＣＭＶに対する活性を表−５に示す。表−５または図−４に示すようにコントロール(ＩＳＩＳ２９２２)の少なくとも５０％の活性を示すオリゴヌクレオチドが好ましい。オリゴヌクレオチドは５’から３’で示す。ハイフンはＩＳＩＳ２９２２配列に比較した欠損を示す。太字はＩＳＩＳ２９２２配列からの変更（不一致）を示す。抗ウイルス活性はＩＳＩＳ２９２２活性に対するパーセントとして表現され、以下の方程式で測定される：［ＥＣ₅₀（ＩＳＩＳ２９２２）／ＥＣ₅₀（オリゴヌクレオチド）］ｘ１００Ｔ_mは、ＩＳＩＳ２９２２に完全に相補的なＲＮＡ鎖に対して測定した。オリゴヌクレオチド標的配列の２９２２標的から片側またはその反対側へのシフトも活性に影響を与える。２９２２標的の４塩基下流の（３’末端側への）配列に相補的な２１量体（ＩＳＩＳ４３７７、ＳＥＱＩＤＮＯ：４２）はＥＬＩＳＡアッセイで活性を有したが、２９２２より高い投与量が必要であった。対照的に、２９２２標的配列の４塩基上流の（５’末端側への）配列に相補的な２１量体（ＩＳＩＳ４３７８、ＳＥＱＩＤＮＯ：４３）はＩＳＩＳ２９２２よりかなり低い投与量でも活性を示した。ＩＳＩＳ２９２２の臨床における有効性ＩＳＩＳ２９２２（フォミバーセン）については現在、管理されていないＣＭＶ網膜炎に罹患した患者における臨床試験がなされている。フォミバーセンは硝子体内注射で、最初の３週間は週毎、その後は維持治療として隔週毎に投与する。進行したＣＭＶ網膜炎に罹患し、他の治療法に失敗した患者に３３０μｇの薬剤を投与したところ、迅速かつ持続的な疾病の緩解が見られた。疾病の持続的緩解はフォミバーセン単独、またはガンシクロビルとの併用治療を施与した患者に見られた。２世代抗ＣＭＶ化合物フォミバーセンより更に低い頻度で（理想的には一ヶ月間隔で）投与でき、眼部の炎症作用をわずかしか、または全く起こさないアンチセンス化合物の発見が望まれていた。理想的には、化合物は十分なヌクレアーゼ耐性を示し、網膜での半減期が長く、そして最低限の眼部の局所的炎症（例えば毛様体炎）を起こし、更に十分な抗ウイルス活性を有する。現在、２世代オリゴヌクレオチドが開発されてきており、ＣＭＶに対する活性について評価が行われている。これらの化合物（表−６に示す）はＩＳＩＳ２９２２（ＳＥＱＩＤＮＯ：２２）と同一のヌクレオチド配列を有するが、少なくとも１個の２’−メトキシエトキシ修飾を有するキメラオリゴヌクレオチドである。特に好ましい２世代化合物はＩＳＩＳ１３３１２である。表−６に示すように、オリゴヌクレオチドＩＳＩＳ１３３１２の５’末端の７個のヌクレオチドは、糖の２’位が２’−Ｏ−（２−メトキシ）エチル（２’−メトキシエトキシまたはＭＯＥとも呼ばれる）で修飾されている。中央の７個のヌクレオチドはデオキシヌクレオチドであり、残りのヌクレオチドは２’−Ｏ−（２−メトキシ）エチル修飾を有するが、３’−末端の最後のヌクレオチドは合成を容易にするためにデオキシヌクレオチドである。分子中のシトシンは全て５−メチル− シトシンであり、全ての糖間結合はホスホロチオエートである。また、ＩＳＩＳ２９２２（ＰＳデオキシ）、そして、２’−メトキシエトキシもしくは２−Ｏ −メチル修飾および／または５’−メチルシトシン修飾されたＳＥＱＩＤＮＯ：２２を有する種々の２世代キメラ化合物も示す。ＩＳＩＳ１５１０３およびＩＳＩＳ１５１０４はＩＳＩＳ１５１０２（ＳＥＱＩＤＮＯ：２２）より１塩基短く、また５ｍｅＣを有する２’−メトキシエトキシギャップマーである。ＩＳＩＳ２９２２の２世代類似体の抗ウイルス活性ＩＳＩＳ１３３１２は、実施例およびAndersonら,Antimicrob.Agents and Chemother．1996，40，2004-2011に記載される線維芽細胞を使用した細胞培養抗ウイルスアッセイでＩＣ₅₀が０．３９μＭ（２つの試験結果、０．５および０．２７μＭの平均）であることが見出された。ＩＳＩＳ１３５７８も、ＳＥＱＩＤＮＯ：２２およびホスホロチオエートバックボーンを有するが最初の７個のヌクレオチド（５’末端）および最後の７個のヌクレオチド（３’末端）に２ ’−Ｏ−メチル修飾を、そして全ての２’−Ｏ−メチルシトシンに５−メチル塩基修飾を有し、そのＩＣ₅₀は約０．１μＭであり、これはこのアッセイでのＩＳＩＳ２９２２、２’−デオキシホスホロチオエート類似体のものと同等である。ＩＳＩＳ１１９５０（ＳＥＱＩＤＮＯ：２２、５−メチルシトシンを有する２’−デオキシホスホロチオエート）のＩＣ₅₀は約０．１７μＭであり、ＩＳＩＳ１３３１３（ＳＥＱＩＤＮＯ：２２、混合ＰＯ／ＰＳバックボーンを有する２’−ＭＯＥギャップマー）はこのアッセイで不活性であった。ＤＨＰＧ（ガンシクロビル）はこのアッセイで７．５μＭのＩＣ₅₀であった。このアッセイでＩＣ₅₀が１μＭ以下の化合物が好ましく、ＩＣ₅₀が０．５μＭ以下の化合物はより好ましい。ＩＳＩＳ１３３１２、ＩＳＩＳ１３５７８、およびＩＳＩＳ１１９５０は特に好ましい。図−５にＩＳＩＳ２９２２、ＩＳＩＳ１１９５０、ＩＳＩＳ１３３１２、およびＩＳＩＳ１３３１３の用量応答曲線を示す。ＩＳＩＳ２９２２、１１９５０、および１３３１２は高い方の投与量でほぼ完全にウイルスを減少させた。図−６にＩＳＩＳ２９２２、１３５７８、および１３３１２の用量応答曲線を示す。ＩＳＩＳ１３５７８（２’−Ｏ− メチル）およびＩＳＩＳ１３３１２（２’−メトキシエトキシまたは２’−ＭＯＥ）は共に、高い方の投与量でＩＳＩＳ２９２２（２’−デオキシ）に匹敵する活性を示した。図−７に“ウィングマー”２’−Ｏ−メチルオリゴヌクレオチドであるＩＳＩＳ１３５７５、１３５７６、１３５７７、そしてギャップマーであるＩＳＩＳ１３５７８の用量応答曲線を示す。高い方の投与量では、いずれもほぼ完全にウイルスを阻害する。“ウィングマー”２’メトキシエトキシ (２’−ＭＯＥ)オリゴヌクレオチドのＩＳＩＳ１３５７２、１３５７３、および１３５７４の結果を図−８に示す。ＳＥＱＩＤＮＯ：２２の２世代類似体についてもプラーク減少アッセイで試験した。ＩＳＩＳ２９２２のＩＣ₅₀は約０.０８μＭであった。ＩＳＩＳ１３５７８のＩＣ₅₀は約０．１μＭであった。ＩＳＩＳ１３３１２のＩＣ₅₀は約０．３５μＭであり、ＤＨＰＧのIＣ₅₀は約３．８μＭであった。これは図− ９に示す。ラビットにおける眼部の薬物動態／寛容能の予備実験を実施し、ＩＳＩＳ２９２２とＩＳＩＳ１３３１２を比較した。この実験では、投与量４または１０ μＭのオリゴヌクレオチドをウサギに１回投与し、全体の寛容性および眼部の薬物動態を評価した。オリゴヌクレオチドを１回の硝子体内注射で投与し（容量０ .０５ｍｌ）、２日後に眼部の試験と組織採集を行った。眼部試験により、賦形剤コントロールの眼（１２眼）、または４μＭ（１５眼）もしくは１０μＭ（２７眼）のＩＳＩＳ１３３１２で処理した眼のいずれにも、肉眼で見える病変は確認されなかった。４μＭまたは１０μＭのＩＳＩＳ２９２２を投与した眼には、眼部の炎症および毛様体炎（毛様体の炎症）の形跡があった。１０μＭのＩＳＩＳ２９２２で処理したウサギでの毛様体炎の発生率は約６０％であった。このウサギモデルは感受性が極めて高いように設計されており、ＩＳＩＳ２９２２はヒト患者に対処可能な局所的炎症を伴いつつ十分寛容性があることに留意すべきである。しかし、この実験の結果から、ＭＯＥキメラであるＩＳＩＳ１３３１２は、２’デオキシ類似体であるＩＳＩＳ２９２２より眼の寛容能がかなり向上されるという証拠が得られた。このことで２世代化合物であるＩＳＩＳ１３３１２はその親化合物であるＩＳＩＳ２９２２にまさる臨床的利点を有する。ＩＳＩＳ２９２２およびＩＳＩＳ１３３１２の網膜濃度を、ウサギへの投与後４５日まで、間隔をおいて測定した。４μＭおよび１０μＭの投与量（それぞれ図−１０に示す“網膜−４”および“網膜−１０”）では共に、処理後≧３０日で５〜１０μＭの濃度のオリゴヌクレオチドが網膜において測定された。この時点で、ＩＳＩＳ２９２２（点線）は検出されなかった。同様の実験をカニクイザルで実施しているが、予備実験の結果はウサギのデータと一致している。サルでは、１〜７．５μＭの濃度のＩＳＩＳ１３３１２が投与（１０〜４０μＭの投与量）の２８日後に網膜において検出されている。ＩＳＩＳ２９２２は投与後これまでに検出されていない。ＩＳＩＳ１３３１２で観察された網膜での思いがけなく長い残留時間により、この２世代化合物はＣＭＶ網膜炎の治療に、その親化合物であるＩＳＩＳ２９２２にまさる明らかで意外な利点を有する。患者への投与量は、ＩＳＩＳ２９２２に対する現在の効果的なプロトコール（治療開始時は週毎の投与、維持治療には隔週毎の投与）に比較してかなり減少できることが予想される。例えば、月１回の治療に減らしても、ＣＭＶ網膜炎患者のクオリティ・オブ・ライフを非常に向上し、コストの節約および他の利益にもなりうる。予備実験では、放射能標識した２’−メトキシエトキシオリゴヌクレオチドを腸管投与した場合、２０％以上の生物学的に利用可能な標識が生成されることが示している。網膜炎および他のＣＭＶ感染症、特に胃腸の感染症には、経口投与が非常に好ましい。以下の非制限的実施例で、本発明について更に例証する。実施例実施例１オリゴヌクレオチドの合成およびキャラクタリゼーションオリゴヌクレオチドはヨウ素による酸化を伴う標準的なホスホルアミダイト化学を使用して、自動化ＤＮＡ合成装置（Applied Biosystemsモデル380Ｂ）で合成した。β−シアノエチルジイソプロピル−ホスホルアミダイトはApplied Bios ystems（Foster City，CA）から購入した。ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドを得るために、標準的な酸化ボトルを０．２Ｍの３Ｈ−１，２−ベンゾジチオ−ル−３−オン１，１−ジオキサイド／アセトニトリル溶液で置換して亜リン酸結合のステップワイズのチオ化を行った。チオ化サイクルの待ち段階を６８秒まで延長し、次いでキャッピング段階を行った。２’−Ｏ−メチルホスホロチオエートオリゴヌクレオチドを合成したが、これには２’−Ｏメチルβ−シアノエチルジイソプロピルホスホルアミダイト（Chem genes，Needham MA）および修飾されていないオリゴヌクレオチドのための標準的なサイクルを使用し、ただしテトラゾールおよび塩基のパルス伝達後の待ち段階を３６０秒間に増加した。合成の開始に使用される３’−塩基は一般に、合成を容易にするために２’−デオキシリボヌクレオチドとした。２’−メトキシエトキシ（２’−Ｏ−ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＣＨ₃）置換基を有するオリゴヌクレオチドは、Martin Helv．Chim．Acta 1995，78，486-504の方法に従って合成してもよい。合成の開始に使用される３’−塩基は、合成を容易にするために２’−デオキシリボヌクレオチドであってもよい。５−メチル−２’−デオキシシチジンホスホルアミダイトは市販品で入手できる（Glen Research，Ste rling VA）。２’−メトキシエトキシ置換基を有する５−メチルシトシンを得るためには、以下の方法に従ってモノマーを合成した。２’−メトキシエトキシ−５−メチルシトシンモノマーの合成２，２’−無水［１−（β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−メチルウリジン］５−メチルウリジン（リボシルチミン。Yamasa，Choshi，Japanから市販品を入手可）（７２．０ｇ，０．２７９Ｍ）、炭酸ジフェニル（９０．０ｇ、０．４２０Ｍ）、および炭酸水素ナトリウム（２．０ｇ、０．０２４Ｍ）をＤＭＦ（３００ｍＬ）に添加した。混合液を撹拌しつつ加熱還流し、発生する二酸化炭素ガスを制御された方法で放出させた。１時間後、わずかに暗色となった溶液を減圧下で濃縮した。得られたシロップをジエチルエーテル（２．５Ｌ）に撹拌しながら注入した。生成物はゴム状となった。エーテルをデカントし、残渣を最小量のメタノール（約４００ｍＬ）に溶解した。溶液を新たなエーテル（２．５Ｌ）に注入し、固いゴム状物質を生成した。エーテルをデカントしゴム状物質を真空オーブンで乾燥して（６０℃、１ｍｍＨｇで２４時間）固体を得、粉砕して淡褐色の粉末とした（５７ｇ、粗収量８５％）。物質を更なる反応のために使用した。２’−Ｏ−メトキシエチル−５−メチルウリジン２，２’−無水−５−メチルウリジン（１９５ｇ、０．８１Ｍ）、トリス（２ −メトキシエチル）ホウ酸（２３１ｇ、０．９８Ｍ）、および２−メトキシエタノール（１．２Ｌ）を２Ｌのステンレス加圧容器に添加し、１６０℃に予熱した油浴に配置した。１５５〜１６０℃で４８時間加熱した後、容器を開け、溶液を蒸発乾固してＭｅＯＨ（２００ｍＬ）で破砕した。残渣を熱アセトン（１Ｌ）に懸濁した。不溶性の塩を濾過し、アセトン（１５０ｍＬ）で洗浄して濾液を蒸発させた。残渣（２８０ｇ）をＣＨ₃ＣＮ（６００ｍＬ）に溶解して蒸発させた。シリカゲルカラム（３ｋｇ）を、０．５％Ｅｔ₃ＮＨを含有するＣＨ₂Ｃｌ₂／アセトン／ＭｅＯＨ（２０：５：３）で充填した。残渣をＣＨ₂Ｃｌ₂（２５０ｍＬ）に溶解し、カラムへの負荷に先だってシリカ（１５０ｇ）に吸収させた。生成物を充填溶媒で溶出し、１６０ｇ（６３％）の生成物を得た。２’−Ｏ−メトキシエチル−５’−ジメトキシトリチル−５−メチルウリジン２’−Ｏ−メトキシエチル-５−メチルウリジン（１６０ｇ、０．５０６Ｍ）をピリジン（２５０ｍＬ）と共に蒸発させ、乾燥した残渣をピリジン（１．３Ｌ）に溶解した。第一の塩化ジメトキシトリチル（９４．３ｇ、０．２７８Ｍ）を添加し、混合液を室温で１時間撹拌した。第二の塩化ジメトキシトリチル（９４．３ｇ、０．２７８Ｍ）を添加し、反応混液を更に１時間撹拌した。次いでメタノール（１７０ｍＬ）を添加して反応を停止させた。ＨＰＬＣは約７０％の生成物の存在を示した。溶媒を蒸発させ、ＣＨ₃ＣＮ（２００ｍＬ）で破砕した。残渣をＣＨＣｌ₃（１．５Ｌ）に溶解し、２ｘ５００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ₃および２ｘ５００ｍＬの飽和ＮａＣｌで抽出した。有機相をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、濾過して蒸発させた。２７５ｇの残渣を得た。残渣を３．５ｋｇのシリカゲルカラムで精製したが、カラムは０．５％Ｅｔ₃ＮＨを含有するＥｔＯＡｃ／ヘキサン／アセトン（５：５：１）で充填および溶出した。精製画分を蒸発させ、１６４ｇの生成物を得た。更に約２０ｇを粗画分から得、総収量１８３ｇ（５７％）を得た。３’−Ｏ−アセチル−２’−Ｏ−メトキシエチル−５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−５−メチルウリジン２’−Ｏ−メトキシエチル−５’−ジメトキシトリチル−５−メチルウリジン（１０６ｇ、０．１６７Ｍ）、ＤＭＦ／ピリジン（５６２ｍＬのＤＭＦおよび１８８ｍＬのピリジンから調製した７５０ｍＬの３：１混合液）、および無水酢酸（２４．３８ｍＬ、０．２５８Ｍ）を混合し、室温で２４時間撹拌した。反応はｔｌｃでモニターしたが、最初にｔｌｃサンプルにＭｅＯＨを添加して反応を停止させた。ｔｌｃでの判断で反応が完了した時点でＭｅＯＨ（５０ｍＬ）を添加し、混合液を３５℃で蒸発させた。残渣をＣＨＣｌ₃（８００ｍＬ）に溶解し、２ｘ２００ｍＬの飽和炭酸水素ナトリウムおよび２ｘ２００ｍＬの飽和ＮａＣｌで抽出した。水相を２００ｍＬのＣＨＣｌ₃で逆抽出した。合一した有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させて１２２ｇの残渣を得た（約９０％の生成物）。残渣を３．５ｋｇのシリカゲルカラムで精製し、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（４：１）で溶出した。生成物の精製画分を蒸発させて９６ｇを得た（８４％）。３’−Ｏ−アセチル−２’−Ｏ−メトキシエチル−５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−５−メチル−４−トリアゾールウリジン第一の溶液を、３’−Ｏ−アセチル−２’−Ｏ−メトキシエチル−５’−Ｏ− ジメトキシトリチル−５−メチルウリジン（９６ｇ、０．１４４Ｍ）をＣＨ₃ＣＮ（７００ｍＬ）に溶解して調製し、取りおく。トリエチルアミン（１８９ｍＬ、１．４４Ｍ）を、トリアゾール（９０ｇ、１．３Ｍ）のＣＨ₃ＣＮ（１Ｌ）溶液に添加し、−５℃に冷却し、オーバーヘッドスターラーを使用して０．５時間撹拌した。ＰＯＣｌ₃を３０分間にわたって滴下添加し、撹拌した溶液を０〜１０℃に保持し、得られた混合液を更に２時間撹拌した。第一の溶液を４５分間にわたって、後者の溶液に滴下添加した。得られた反応混液を低温室で一晩保存した。反応混液から塩を濾過し、溶液を蒸発させた。残渣をＥｔＯＡｃ（１Ｌ）に溶解し、不溶性の固体を濾過して除去した。濾液を１ｘ３００ｍＬのＮａＨＣＯ₃ および２ｘ３００ｍＬの飽和ＮａＣｌで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥して蒸発させた。残渣をＥｔＯＡｃで破砕し、標記の化合物を得た。２’−Ｏ−メトキシエチル−５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−５−メチルシチジン３’−Ｏ−アセチル−２’−Ｏ−メトキシエチル−５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−５−メチル−４−トリアゾールウリジン（１０３ｇ、０．１４１Ｍ）をジオキサン（５００ｍＬ）およびＮＨ₄ＯＨ（３０ｍＬ）に混合した溶液を室温で２時間撹拌した。ジオキサン溶液を蒸発させ、残渣をＭｅＯＨ（２ｘ２００ｍＬ）と共沸した。残渣をＭｅＯＨ（３００ｍＬ）に溶解し、２リットルのステンレス加圧容器に移した。ＮＨ₃ガスで飽和したＭｅＯＨ（４００ｍＬ）を添加し、容器を１００℃で２時間加熱した（ｔｌｃは完全な変換を示した）。容器の内容物を蒸発乾固し、残渣をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）に溶解して飽和ＮａＣｌ（２００ｍＬ）で１回洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を蒸発させて標記の化合物８５ｇ（９５％）を得た。Ｎ⁴−ベンゾイル−２’−Ｏ−メトキシエチル−５’−Ｏ−ジメトキシトリチル −５−メチルシチジン２’−Ｏ−メトキシエチル−５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−５−メチルシチジン（８５ｇ、０．１３４Ｍ）をＤＭＦ（８００ｍＬ）に溶解し、無水安息香酸（３７．２ｇ、０．１６５Ｍ）を撹拌しながら添加した。３時間撹拌後、ｔｌｃは反応が約９５％完了していることを示した。溶媒を蒸発させ、残渣をＭｅＯＨ（２００ｍＬ）と共沸した。残渣をＣＨＣｌ₃（７００ｍＬ）に溶解して飽和ＮａＨＣＯ₃（２ｘ３００ｍＬ）および飽和ＮａＣｌ（２ｘ３００ｍＬ）で抽出し、ＭｇＳＯ₄で乾燥して蒸発させ、残渣を得た（９６ｇ）。残渣は、１．５ｋｇシリカカラムで、溶出溶媒として０．５％のＥｔ₃ＮＨを含有するＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：１）を使用してクロマトグラフィーを行った。純粋な生成物の画分を蒸発させ、標記の化合物９０ｇ（９０％）を得た。Ｎ⁴−ベンゾイル−２’−Ｏ−メトキシエチル−５’−Ｏ−ジメトキシトリチル −５−メチルシチジン−３’−アミダイトＮ⁴−ベンゾイル−２’−Ｏ−メトキシエチル−５’−Ｏ−ジメトキシトリチル-５−メチルシチジン（７４ｇ、０．１０Ｍ）をＣＨ₂Ｃｌ₂（１Ｌ）に溶解した。テトラゾールジイソプロピルアミン（７．１ｇ）および２−シアノエトキシ −テトラ（イソプロピル）ホスファイト（４０．５ｍＬ、０．１２３Ｍ）を窒素雰囲気下で撹拌しながら添加した。得られた混合液を室温で２０時間撹拌した（ｔｌｃは反応が９５％完了していることを示した）。反応混液を飽和ＮａＨＣＯ₃ （１ｘ３００ｍＬ）および飽和ＮａＣｌ（３ｘ３００ｍＬ）で抽出した。洗浄水溶液をＣＨ₂Ｃｌ₂（３００ｍＬ）で逆抽出して抽出物を合一し、ＭｇＳＯ₄で乾燥して濃縮した。得られた残渣は、１．５ｋｇシリカカラムで、溶出溶媒としてＥｔＯＡｃ／ヘキサン（３：１）を使用してクロマトグラフィーを行った。純粋画分を合一し、標記の化合物９０．６ｇ（８７％）を得た。制御された孔のガラスカラム（Applied Biosystems）からの開裂、および濃水酸化アンモニウムでの５５℃、１８時間の脱保護の後、０．５ＭＮａＣｌから２．５容量のエタノールで２回沈殿し、オリゴヌクレオチドを精製した。ゲル電気泳動法を、２０％アクリルアミド、８M尿素、４５ｍＭトリス−ホウ酸塩緩衝液、ｐＨ７．０で行った。オリゴデオキシヌクレオチドおよびホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、完全長の物質が８０％より多いことを電気泳動で判断した。実施例２アンチセンスオリゴヌクレオチドによるＣＭＶ複製阻害のＥＬＩＳＡアッセイヒト型サイトメガロウイルスのｍＲＮＡに相補的なオリゴヌクレオチドを、ＣＭＶ複製のＥＬＩＳＡを使用したアッセイで、抗ウイルス活性について試験した。正常なヒト真皮線維芽細胞（Clonetics社、San Diego CA）を血清非含有培養液（Clonetics）で培養し、９６ウェルのプレートに播種した。細胞が約８０％の集密度になった時点でオリゴヌクレオチドで前処理する。前処理の約２０時間後、培養液（オリゴヌクレオチドを含有）を注意深く注出し、加温した線維芽細胞基礎培養液（ＦＢＭ、Clonetics）で細胞を２回洗浄する。次いで、ウェル当たり１００μｌのＦＢＭで希釈したＣＭＶストックで細胞を感染させる。プレートを３７℃でインキュベートする。その後、培養液（ウイルスを含有）を注意深く注出し、新たなあらかじめ加温したＦＢＭ培養液１００μｌ／ウェルで置換する。プレートをしばらく３７℃でインキュベートした後、５μｌのオリゴヌクレオチド（ＦＢＭで希釈）をそれぞれのウェルの培養液に再導入する。２日後、再度細胞をオリゴヌクレオチドで同様に後処理する。６日目に、プレートをＥＬＩＳＡのために調製する。ＥＬＩＳＡのための調製には、培養液を注意深くプレートから注出し、ウェル当たり２００μｌの無水エタノールで細胞を固定する。細胞を３０分間室温で固定し、その後エタノールを除去してプレートを自然乾燥する。ＥＬＩＳＡに先立ち、２％ＢＳＡを含有するＰＢＳでプレートを保護する。保護溶液を除去し、１００μｌの抗ＣＭＶ抗体（１％ＢＳＡ含有ＰＢＳで１：２０００に希釈）を添加する。細胞を抗体中で３７℃で１時間インキュベートし、ＰＢＳで３回洗浄する。第二の抗体、ビオチニル化したヤギ抗マウスＩｇＧ（Bethesda Research Labs、MD）を１％ＢＳＡ含有ＰＢＳで１：１０００に希釈し、細胞と共に３７ ℃で１時間インキュベートする。次いで細胞を洗浄し、ストレプトアビジン−Ｂ −Ｄ−ガラクトシダーゼ中で３７℃で１時間インキュベートする。クロロフェノールレッド−Ｂ−Ｄ−ガラクトピラノシド（２０ｍｇを１０ｍｌの５０ｍＭリン酸Ｎａ、１．５ｍＭＭｇＣｌ₂に溶解）で発色し、プレートを１０分間振とうし、５７５ｎｍでの吸光度を測定した。実施例３プラーク減少アッセイ６ウエル培養プレートに、血清非含有ＦＧＭを用いて５００，０００細胞／ウェルの密度でＮＨＤＦ細胞を播種した。やや集密した単層をオリゴヌクレオチドで一晩前処理し、その後ウイルス感染に先だって３回洗浄を行い、残留するオリゴヌクレオチドを除去した。ＦＧＭに混合したヒト型ＣＭＶを、未処理の細胞で約１００プラーク／ウェルが形成されるのに十分な程度に希釈して細胞に添加した。２時間吸着させた後、ウイルスを除去し、細胞に１％シープラークアガロース（ＦＭＣ）と２Ｘ最少培地の１：１混合物を積層した。重複サンプルを計数し、平均値を、未処理の細胞で生成されるプラークに対するパーセントとして表した。実施例４生成量減少アッセイ６ウエル培養プレートに、血清非含有ＦＧＭまたは０．２％ＦＢＳ含有ＦＧＭを用いて５００，０００細胞／ウェルの密度でＮＨＤＦ細胞を播種した。やや集密した単層をオリゴヌクレオチドで一晩前処理した。細胞を３回洗浄して残留したオリゴヌクレオチドを除去した後、ＦＧＭに混合したウイルスを添加し、２時間吸着させた。次いでウイルスを除去し、細胞に新たなオリゴヌクレオチド含有培養液を積層した。ウイルスの総生成量を評価するために、感染させた細胞を８日間インキュベートし、培養液上清中にかきとって−８０℃で凍結保存した。回収したサンプルからの感染ウイルス生成量を、ＮＨＤＦ細胞の単層について標準的なプラークアッセイで重複測定した。吸着の後、１％シープラークアガロース（ＦＭＣ）と２Ｘ最少培地の１：１混合物からなるアガロース積層を細胞に適用した。８日間インキュベートした後、細胞をホルムアルデヒドで固定し、リン酸緩衝液に混合したメチレンブルーで一晩染色した。実施例５ヒト型ＣＭＶ極初期タンパク質の発現のウェスタンブロット測定ＣＭＶ感染ＮＨＤＦ細胞における極初期タンパク質の定常状態の濃度をウェスタンブロット分析で測定した。６ウェル培養プレートのやや集密したＮＨＤＦ細胞単層をオリゴヌクレオチドで処理し、上記のように感染させた。感染の４８時間後、培養液を吸引し、細胞を２００μｌの溶菌緩衝液（２０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．５；２０ｍＭＫＣ１；５ｍＭＥＤＴＡ；１％トリトンＸ− １００；０．１ｍＭロイペプチン；１０μｇ／ｍｌアプロチニン）中にかきとった。核と挫滅組織片に遠心分離した後（１５，０００ｘｇ、１０分間）、上清を新たなチューブに移し、１０μｌのサンプルからのタンパク質を電気泳動( 変性ドデシル硫酸ナトリウム、８％ポリアクリルアミドゲルで還元条件下)で分画した。分画したタンパク質を電気泳動的にニトロセルロースメンブランにトランスファーし、ＩＥ１およびＩＥ２タンパク質の両方に共有されるエピトープを認識するマウスモノクローナル抗体（ＭＡＢ８１０、Chemicon、Temecula、CA）を使用してＩＥ２ポリペプチドを検出した。アルカリホスファターゼ−ヤギ抗マウスＩｇＧを二次抗体として使用し、ＮＢＴおよびＢＣＩＰ（BRL Gibco、Gaith ersburg、MD）にブロットを展開した。実施例６ＣＭＶに感染したＮＨＤＦ細胞の免疫蛍光染色４チャンバー培養スライド（Costar）のウェル中のやや集密したＮＨＤＦ細胞をオリゴヌクレオチドで一晩（１５〜２０時間）前処理し、３ｐｆｕ／細胞のＭ．Ｏ．Ｉ．を使用してヒト型ＣＭＶに感染させ、３７℃で更に２４時間処理し、 −２０℃でエタノールで固定した。極初期タンパク質を、ウェスタンブロット分析に使用したのと同じモノクローナル抗体、ＭＡＢ８１０、およびローダミン− ヤギ抗マウスＩｇＧを使用して検出した。細胞を試験し、Nikonのエピ蛍光顕微鏡を使用して撮影した。実施例７第二世代化合物のＣＭＶ抗ウイルス活性抗ウイルス活性は本質的に実施例２に記載したように測定したが、ＥＬＩＳＡアッセイの代わりに、Andersonら,Antimicrob.Agents and Chemother．1996，40 ，2004-2011に記載される、ＤＮＡハイブリダイゼーションを使用するＣＭＶ検出システム（HYBRIWIX^TM、Diagnostic Hybrids社、Athens、OH）を行った。実施例８ウサギ硝子体内の毒物学／薬物動態学評価ダッチベルトウサギにオリゴヌクレオチドを硝子体内注射で単一投与した（注射量０．０５ｍｌ）。ウサギを３つの処理群に無作為に分別した。第１群はＩＳＩＳ２９２２を、左眼に４μＭ、右眼に１０μＭ投与した。第２群はＩＳＩＳ１３３１２を、左眼に４μＭ、右眼に１０μＭ投与した。第３群はＩＳＩＳ１３３１２を左眼に１０μＭ、右眼にコントロールの賦形剤を投与した。３つのウサギにそれぞれの時点で投薬した。処理または組織採集の日に全ての可能な眼について眼部検査（細隙灯検査および間接検査）を行った。組織の薬物動態のために、硝子体および網膜を採集して凍結した。オリゴヌクレオチド濃度は公表されている方法(Leedsら,Anal.Biochem.1996,235,36-43;Leedsら,Drug Metab.and Di sp．，印刷中)に従ってキャピラリーゲル電気泳動法で測定した。

【手続補正書】【提出日】平成１１年１０月１３日（１９９９．１０．１３）【補正内容】請求の範囲１．ヒト型サイトメガロウイルスのＩＥ1、ＩＥ２またはＤＮＡポリメラーゼをコードする核酸を標的とし、少なくとも１個の２’−Ｏ−ＣＨ₂ＣＨ₂−Ｏ−ＣＨ₃糖修飾を有し、かつサイトメガロウイルスの複製を阻害しうるアンチセンスオリゴヌクレオチド。２．ＳＥＱＩＤＮＯ：２２を有する、請求項１記載のオリゴヌクレオチド。３．ヒト型サイトメガロウイルスのＩＥ１、ＩＥ２またはＤＮＡポリメラーゼをコードする核酸を標的とし、かつサイトメガロウイルスの複製を阻害しうるアンチセンスオリゴヌクレオチド。４．ｍＲＮＡキャップ部位、ＡＵＧ領域、保存アミノ酸領域、またはＤＮＡポリメラーゼ遺伝子の塩基６０８−６９７もしくは１１０９−１１５９の間のＣＭＶ挿入領域の少なくとも一部を標的とする、請求項３記載のオリゴヌクレオチド。５．ＩＥ１遺伝子のｍＲＮＡキャップ部位、ＡＵＧ領域またはイントロン／エクソン連結領域の少なくとも一部を標的とする、請求項３記載のオリゴヌクレオチド。６．ＩＥ２遺伝子のＡＵＧ／キャップ部位、ＡＵＧ領域、ＩＥ２特異的イントロン／エクソン連結領域、または核局在シグナル領域の少なくとも一部を標的とする、請求項３記載のオリゴヌクレオチド。７．ＳＥＱＩＤＮＯ：３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、１５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、８９または９０を含有する、請求項３記載のオリゴヌクレオチド。８．少なくとも１個のバックボーン修飾を有する、請求項３記載のオリゴヌクレオチド。９．バックボーン修飾がホスホロチオエート修飾である、請求項８記載のオリゴヌクレオチド。１０．少なくとも１個の２’一糖修飾を有する、請求項３記載のオリゴヌクレオチド。１１．修飾が、２’−Ｏ−アルキル、２’−Ｏ−アルキル−Ｏ−アルキルまたは２−フルオロ修飾である、請求項１０記載のオリゴヌクレオチド。１２．２’−Ｏ−アルキル−Ｏ−アルキル修飾が２’−Ｏ−ＣＨ₂ＣＨ₂−Ｏ− ＣＨ₃修飾である、請求項１１記載のオリゴヌクレオチド。１３．少なくとも４個の連続するデオキシヌクレオチドを有するキメラオリゴヌクレーオチドである、請求項１０記載のオリゴヌクレオチド。１４．請求項１、請求項２または請求項３記載のオリゴヌクレオチドを含有する医薬組成物。１５．インビトロにおいてヒト型サイトメガロウイルス感染を阻害する方法であって、サイトメガロウイルスに感染されていると考えられる細胞、組織、または体液を、ヒト型サイトメガロウイルスのＩＥ１、ＩＥ２、またはＤＮＡポリメラーゼをコードする核酸を標的とし、少なくとも１個の２’−Ｏ−ＣＨ₂ＣＨ₂− Ｏ−ＣＨ₃糖修飾を有し、かつサイトメガロウイルスの複製を阻害しうるアンチセンスオリゴヌクレオチドと接触させることを含んでなる上記方法。１６．オリゴヌクレオチドがＳＥＱＩＤＮＯ：２２を含有する、請求項１５記載の方法。１７．インビトロにおいてヒト型サイトメガロウイルス感染を阻害する方法であってサイトメガロウイルスに感染されていると考えられる細胞、組織、または体液を、ヒト型サイトメガロウイルスのＩＥ１、ＩＥ２、またはＤＮＡポリメラーゼをコードする核酸を標的とし、かつサイトメガロウイルスの複製を阻害しうるアンチセンスオリゴヌクレオチドと接触させることを含んでなる上記方法。１８．インビトロにおいてヒト型サイトメガロウイルス感染を阻害する方法であって、サイトメガロウイルスに感染されていると考えられる細胞、組織、または体液を、ＳＥＱＩＤＮＯ：２２および少なくとも１個の２’−Ｏ−ＣＨ₂ ＣＨ₂−Ｏ−ＣＨ₃糖修飾を有し、かつサイトメガロウイルスの複製を阻害しうるアンチセンスオリゴヌクレオチドと接触させることを含んでなる上記方法。１９．オリゴヌクレオチドが少なくとも４個の連続するデオキシヌクレオチドを有するキメラオリゴヌクレオチドである、請求項２２記載の方法。２０．サイトメガロウイルス感染症を有する疑いのある患者を治療するための医薬組成物であって、ヒト型サイトメガロウイルスのＩＥ２をコードする核酸を標的とし、少なくとも１個の２’−Ｏ−ＣＨ₂ＣＨ₂−Ｏ−ＣＨ₃糖修飾を有し、かつサイトメガロウイルスの複製を阻害しうるアンチセンスオリゴヌクレオチドを有効量含有する組成物。２１．オリゴヌクレオチドがＳＥＱＩＤＮＯ：２２を含有する、請求項２０記載の組成物。２２．オリゴヌクレオチドが、少なくとも４個の連続するデオキシヌクレオチドを有するキメラオリゴヌクレオチドである、請求項２０記載の組成物。２３．サイトメガロウイルス網膜炎を有する疑いのある患者を治療するための医薬組成物であって、ヒト型サイトメガロウイルスのＩＥ１、ＩＥ２、またはＤＮＡポリメラーゼをコードする核酸を標的とし、かつサイトメガロウイルスの複製を阻害しうるアンチセンスオリゴヌクレオチドを有効量含有する組成物。２４．サイトメガロウイルス感染症を有する疑いのある患者を治療するための医薬組成物であって、ＳＥＱＩＤＮＯ：２２および少なくとも１個の２’− Ｏ−ＣＨ₂ＣＨ₂−Ｏ−ＣＨ₃糖修飾を有し、かつサイトメガロウイルスの複製を阻害しうるアンチセンスオリゴヌクレオチドを有効量含有する組成物。２５．オリゴヌクレオチドが少なくとも４個の連続するデオキシヌクレオチドを有するキメラオリゴヌクレオチドである、請求項２４記載の組成物。２６．感染症がサイトメガロウイルス網膜炎である、請求項２４記載の組成物。２７．サイトメガロウイルス網膜炎を有する疑いのある患者を治療するための医薬組成物であって、ヒト型サイトメガロウイルスの核酸を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを有効量含有する組成物。２８．硝子体内注射用である、請求項２７記載の組成物。２９．少なくとも投与の２８日後に網膜において検出しうるアンチセンスオリゴヌクレオチド。３０．該投与が硝子体内注射による、請求項２９記載のオリゴヌクレオチド。３１．バックボーン修飾がペプチド核酸修飾である、請求項８記載のオリゴヌクレオチド。３２．ＳＥＱＩＤＮＯ：２２の少なくとも１０塩基部分を含有する、請求項３１記載のオリゴヌクレオチド。３３．ＳＥＱＩＤＮＯ：２２を有するホスホロチオエートオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドの５’−末端から数えてヌクレオチド１−７のそれぞれが、２’−Ｏ−ＣＨ₂ＣＨ₂−Ｏ−ＣＨ₃糖修飾を有し、ヌクレオチド８−１４が２’−デオキシヌクレオチドであり、ヌクレオチド１５−２０のそれぞれが２’−Ｏ−ＣＨ₂ＣＨ₂−Ｏ−ＣＨ₃糖修飾を有し、かつヌクレオチド２１が２’−デオキシヌクレオチドであるかまたは２’−Ｏ−ＣＨ₂ＣＨ₂−Ｏ−ＣＨ₃ 糖修飾を有していてもよく、そしてオリゴヌクレオチド中のすべてのシチジンヌクレオチドが５−メチルシチジンである、上記ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド。３４．ヒトにおけるサイトメガロウイルス感染症を予防するための組成物であって、請求項１または請求項３３記載のオリゴヌクレオチドの有効量を含有してなる組成物。３５．Ａ組成物ヒトにおけるサイトメガロウイルス網膜炎を予防するための組成物であって、請求項１または請求項３３記載のオリゴヌクレオチドの有効量を含有してなる組成物。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者アンダーソン，ケビン・ピーアメリカ合衆国カリフォルニア州92009, カールズバッド，ラ・グラン・ヴィア 2772 (72)発明者チャップマン，シャロンアメリカ合衆国ノース・カロライナ州 28747，レイク・トクサウェイ，コールド・マウンテン・ロード 162

Claims

【特許請求の範囲】１．ヒト型サイトメガロウイルスのＩＥ１、ＩＥ２、またはＤＮＡポリメラーゼをコードする核酸を標的とし、少なくとも１個の２’−Ｏ−ＣＨ₂ＣＨ₂−Ｏ− ＣＨ₃糖修飾を有し、かつサイトメガロウイルスの複製を阻害しうるアンチセンスオリゴヌクレオチド。２．ＳＥＱＩＤＮＯ：２２を有する、請求項１記載のオリゴヌクレオチド。３．ヒト型サイトメガロウイルスのＩＥ１、ＩＥ２、またはＤＮＡポリメラーゼをコードする核酸を標的とし、かつサイトメガロウイルスの複製を阻害しうるアンチセンスオリゴヌクレオチド。４．ｍＲＮＡキャップ部位、ＡＵＧ領域、保存アミノ酸領域、またはＤＮＡポリメラーゼ遺伝子の塩基６０８〜６９７もしくは１１０９〜１１５９の間のＣＭＶ挿入領域の少なくとも一部を標的とする、請求項３記載のオリゴヌクレオチド。５．ＩＥ１遺伝子のｍＲＮＡキャップ部位、ＡＵＧ領域、またはイントロン／エクソン連結領域の少なくとも一部を標的とする、請求項３記載のオリゴヌクレオチド。６．ＩＥ２遺伝子のＡＵＧ／キャップ部位、ＡＵＧ領域、ＩＥ２特異的イントロン／エクソン連結領域、または核局在シグナル領域の少なくとも一部を標的とする、請求項３記載のオリゴヌクレオチド。７．ＳＥＱＩＤＮＯ：３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、８９、または９０を含有する、請求項３記載のオリゴヌクレオチド。８．少なくとも１個のバックボーン修飾を有する、請求項３記載のオリゴヌクレオチド。９．バックボーン修飾がホスホロチオエート修飾である、請求項８記載のオリゴヌクレオチド。１０．少なくとも１個の２’−糖修飾を有する、請求項３記載のオリゴヌクレオチド。１１．修飾が２’−Ｏ−アルキル、２’−Ｏ−アルキル−Ｏ−アルキル、または２’−フルオロ修飾である、請求項１０記載のオリゴヌクレオチド。１２．２’−Ｏ−アルキル−Ｏ−アルキル修飾が２’−Ｏ−ＣＨ₂ＣＨ₂−Ｏ− ＣＨ₃修飾である、請求項１１記載のオリゴヌクレオチド。１３．少なくとも４個の連続するデオキシヌクレオチドを有するキメラオリゴヌクレオチドである、請求項１０記載のオリゴヌクレオチド。１４．請求項１、請求項２、または請求項３記載のオリゴヌクレオチドを含有する医薬組成物。１５．ヒト型サイトメガロウイルス感染症を阻害する方法であって、サイトメガロウイルスに感染されていると考えられる細胞、組織、または体液を、ヒト型サイトメガロウイルスのＩＥ１、ＩＥ２、またはＤＮＡポリメラーゼをコードする核酸を標的とし、少なくとも１個の２’−Ｏ−ＣＨ₂ＣＨ₂−Ｏ−ＣＨ₃糖修飾を有し、かつサイトメガロウイルスの複製を阻害しうるアンチセンスオリゴヌクレオチドと接触させることを含んでなる上記方法。１６．オリゴヌクレオチドがＳＥＱＩＤＮＯ：２２を含有する、請求項１５記載の方法。１７．方法がインビトロで行われる、請求項１５記載の方法。１８．方法がインビボで行われる、請求項１５記載の方法。１９．ヒト型サイトメガロウイルス感染症を阻害する方法であって、サイトメガロウイルスに感染されていると考えられる細胞、組織、または体液を、ヒト型サイトメガロウイルスのＩＥ１、ＩＥ２、またはＤＮＡポリメラーゼをコードする核酸を標的とし、かつサイトメガロウイルスの複製を阻害しうるアンチセンスオリゴヌクレオチドと接触させることを含んでなる上記方法。２０．方法がインビトロで行われる、請求項１９記載の方法。２１．方法がインビボで行われる、請求項１９記載の方法。２２．ヒト型サイトメガロウイルス感染症を阻害する方法であって、サイトメガロウイルスに感染されていると考えられる細胞、組織、または体液を、ＳＥＱＩＤＮＯ：２２および少なくとも１個の２’−Ｏ−ＣＨ₂ＣＨ₂−Ｏ−ＣＨ₃糖修飾を有し、かつサイトメガロウイルスの複製を阻害しうるアンチセンスオリゴヌクレオチドと接触させることを含んでなる上記方法。２３．方法がインビトロで行われる、請求項２２記載の方法。２４．方法がインビボで行われる、請求項２２記載の方法。２５．オリゴヌクレオチドが少なくとも４個の連続するデオキシヌクレオチドを有するキメラオリゴヌクレオチドである、請求項２２記載の方法。２６．サイトメガロウイルス感染症を有する疑いのある患者を治療する方法であって、該患者に、ヒト型サイトメガロウイルスのＩＥ２をコードする核酸を標的とし、少なくとも１個の２’−Ｏ−ＣＨ₂ＣＨ₂−Ｏ−ＣＨ₃糖修飾を有し、かつサイトメガロウイルスの複製を阻害しうるアンチセンスオリゴヌクレオチドを有効量含有する医薬組成物を投与することを含んでなる上記方法。２７．オリゴヌクレオチドがＳＥＱＩＤＮＯ：２２を含有する、請求項２６記載の方法。２８．オリゴヌクレオチドが少なくとも４個の連続するデオキシヌクレオチドを有するキメラオリゴヌクレオチドである、請求項２６記載の方法。２９．サイトメガロウイルス網膜炎を有する疑いのある患者を治療する方法であって、該患者に、ヒト型サイトメガロウイルスのＩＥ１、ＩＥ２、またはＤＮＡポリメラーゼをコードする核酸を標的とし、かつサイトメガロウイルスの複製を阻害しうるアンチセンスオリゴヌクレオチドを有効量含有する医薬組成物を投与することを含んでなる上記方法。３０．サイトメガロウイルス感染症を有する疑いのある患者を治療する方法であって、該患者に、ＳＥＱＩＤＮＯ：２２および少なくとも１個の２’−Ｏ −ＣＨ₂ＣＨ₂−Ｏ−ＣＨ₃糖修飾を有し、かつサイトメガロウイルスの複製を阻害しうるアンチセンスオリゴヌクレオチドを有効量含有する医薬組成物を投与することを含んでなる上記方法。３１．オリゴヌクレオチドが少なくとも４個の連続するデオキシヌクレオチドを有するキメラオリゴヌクレオチドである、請求項３０記載の方法。３２．感染症がサイトメガロウイルス網膜炎である、請求項３０記載の方法。３３．サイトメガロウイルス網膜炎を有する疑いのある患者を治療する方法であって、該患者に、ヒト型サイトメガロウイルスの核酸を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを有効量含有する医薬組成物を硝子体内投与することを含んでなる上記方法。３４．医薬組成物を硝子体内注射で投与する、請求項３３記載の方法。３５．サイトメガロウイルス感染症を有する疑いのある患者を治療する方法であって、該患者に、有効量のヒト型サイトメガロウイルスのＩＥ１、ＩＥ２、またはＤＮＡポリメラーゼを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを第二の抗ウイルス剤と併用して投与することを含んでなる上記方法。３６．第二の抗ウイルス剤がフォスカーネット、ガンシクロビル、またはアンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項３５記載の方法。３７．サイトメガロウイルス感染症を有する疑いのある患者を治療する方法であって、該患者に、有効量の第一の抗ウイルス剤を硝子体内投与し、有効量の第二の抗ウイルス剤を静脈内投与することを含んでなる上記方法。３８．第一および第二の抗ウイルス剤が、独立して、フォスカーネット、ガンシクロビル、またはアンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項３７記載の方法。３９．少なくとも投与の２８日後に網膜において検出しうるアンチセンスオリゴヌクレオチド。４０．該投与が硝子体内注射による、請求項３９記載のオリゴヌクレオチド。４１．バックボーン修飾がペプチド核酸修飾である、請求項８記載のオリゴヌクレオチド。４２．ＳＥＱＩＤＮＯ：２２の少なくとも１０塩基部分を含有する、請求項４１記載のオリゴヌクレオチド。４３．ＳＥＱＩＤＮＯ：２２を有するホスホロチオエートオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドの５’−末端から数えてヌクレオチド１〜７のそれぞれが２’−Ｏ−ＣＨ₂ＣＨ₂−Ｏ−ＣＨ₃糖修飾を有し、ヌクレオチド８〜１４が２’−デオキシヌクレオチドであり、ヌクレオチド１５〜２０のそれぞれが２’−Ｏ−ＣＨ₂ＣＨ₂−Ｏ−ＣＨ₃糖修飾を有し、かつヌクレオチド２１が２’−デオキシヌクレオチドであるかまたは２’−Ｏ−ＣＨ₂ＣＨ₂−Ｏ−ＣＨ₃ 糖修飾を有していてもよく、そしてオリゴヌクレオチド中の全てのシチジンヌクレオチドが５−メチルシチジンである上記ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド。４４．ヒトにおけるサイトメガロウイルス感染症を予防する方法であって、該ヒトに、有効量の請求項１記載のオリゴヌクレオチドを含有する医薬組成物を投与することを含んでなる上記方法。４５．ヒトにおけるサイトメガロウイルス感染症を予防する方法であって、該ヒトに、有効量の請求項４３記載のオリゴヌクレオチドを含有する医薬組成物を投与することを含んでなる上記方法。４６．ヒトにおけるサイトメガロウイルス網膜炎を予防する方法であって、該ヒトに、有効量の請求項１記載のオリゴヌクレオチドを含有する医薬組成物を投与することを含んでなる上記方法。４７．ヒトにおけるサイトメガロウイルス網膜炎を予防する方法であって、該ヒトに、有効量の請求項４３記載のオリゴヌクレオチドを含有する医薬組成物を投与することを含んでなる上記方法。