JP2000515749A

JP2000515749A - Ａｇｅ―１ポリペプチド及び関連分子並びに方法

Info

Publication number: JP2000515749A
Application number: JP10508231A
Authority: JP
Inventors: ゲイリールブクン; ジェイソンモーリス; ヘイジチセンバーム
Original assignee: General Hospital Corp
Current assignee: General Hospital Corp
Priority date: 1996-08-07
Filing date: 1997-08-07
Publication date: 2000-11-28
Also published as: US7094889B2; CN1232497A; US20010016332A1; WO1998005761A1; EP0964917A4; EP0964917A1

Abstract

(57)【要約】実質的に純粋な複数のＡＧＥ−１ポリペプチド及び精製された複数のＤＮＡ、ベクター及びこれらポリペプチドをコードしている細胞を開示する。また、寿命の決定方法、ＡＧＥ−１配列を用いたアンタゴニストの単離方法を開示する。

Description

【発明の詳細な説明】ＡＧＥ−１ポリペプチド及び関連分子並びに方法発明の詳細な説明本発明は老化に関与するポリペプチド及び核酸の配列並びにそれらの利用方法に関する。アメリカ合衆国及び他の諸国における人口の平均年齢が増大するにつれて、老化過程を遅延させることに関心が高まっている。ＤＮＡの損傷の引き金となり、或いは、さもなければ、細胞に毒性を示す環境の諸要因は、寿命に良くない影響を及ぼしかねないことが長年容認されている。その上、この老化過程における遺伝子の役割が徐々に明らかになってきていることから、老化或いは老化に関与する遺伝子の探索が進められている。これらの遺伝子は、老化或いは死を遅らせる治療用の生成物をコードする可能性があるため重要である。また、これらがコードするタンパク質は、寿命を延ばし、或いは、老化に伴う諸症状の開始を遅らせる拮抗的タイプの薬物をデザインし又は分離するための標的として使用し得る。課題を解決するための手段全般的に、本発明は、ＡＧＥ−１ポリペプチドの実質的に純粋な標品、即ち、図６（配列番号１）のポリペプチドに対して少なくとも５０％（望ましくは７０％、或いは９０％）のアミノ酸配列の相同性を持つポリペプチドを特徴とする。好適には、前記のＡＧＥ−１ポリペプチドは、相当する位置において、図６（配列番号１）の以下のアミノ酸の内、５０％（望ましくは７０％或いは９０％）に及ぶ同一のアミノ酸を含む。即ち、このアミノ酸は、Ｇｌｙ−３２、Ｌｅｕ−７３、Ｈｉｓ−７８、Ｐｈｅ−８１、Ｇｌｕ−１０９、Ｐｈｅ−１１４、Ｌｅｕ− １２３、Ｌｅｕ−１２５、Ｐｈｅ−１２９、Ｌｙｓ−１８１、Ｓｅｒ−２０８、Ｌｙｓ−２１１、Ａｒｇ−３２１、Ｌｅｕ−３２５、Ｌｅｕ−３５１、Ｓｅｒ− ３５５、Ｍｅｔ−３７３、Ｌｅｕ−３８１、Ｌｅｕ−３９３、Ｔｈｒ−４３２、Ｔｙｒ−４５１、Ｇｌｕ−４７５、Ｐｒｏ−５０７、Ｉｌｅ−５１４、Ｇｌｙ− ５１８、Ｇｌｕ−５３０、Ｖａｌ−５３８、Ｌｅｕ−５８２、Ｔｙｒ−６０６、Ｐｒｏ−６４３、Ｐｈｅ−６６５、Ｌｅｕ−７４４、Ｌｅｕ−７４５、Ａｒｇ− ７６２、Ｌｅｕ−７８９、Ａｒｇ−７９４、Ａｌａ−８２７、Ａｒｇ−８２９、Ｔｒｐ−８３５、Ｓｅｒ−８４２、Ａｓｎ−９０５、Ｇｌｙ−９１７、Ａｓｐ− ９７５、Ｉｌｅ−９９０、Ａｓｐ−１００６、Ｈｉｓ−１０２０、Ｌｙｓ−１１０４、Ｔｈｒ−１１０５、Ｇｌｙ−１１３０、Ｐｈｅ−１１４０、及びＬｙｓ− １１４４である。８２７番目に相当するアミノがアラニンであることが特に望ましい。他の好適な実施の形態において、前記のＡＧＥ−１ポリペプチドは、動物、例えば、セノラブディティスエレガンス（Ｃａｅｎｈｏｒａｂｄｉｔｉｓｅｌｅｇａｎｓ）、或いは、哺乳類、例えば、ヒト由来のものである。本発明は、又、ＡＧＥ−１ポリペプチドの有用な断片を特徴とし、特に、好適な断片は、図６（配列番号１）の３６８番−６４１番、３８７番−１１４６番、１番−１５０番，１番−６５８番或いは１番−４０４番のアミノ酸を含む。関連した局面において、本発明は、上記ＡＧＥ−１ポリペプチドの何れかをコードするか、或いは、図４（配列番号２）の核酸配列に少なくと３０％（または、好ましくは４０％、５０％、７０％、８０％、或いは９０％）の同一性を有するＡＧＥ−１核酸配列を有し精製されたＤＮＡ（例えばｃＤＮＡ）が含まれる。更に、本発明は、図４（配列番号２）の６４番−８５２番、図４（配列番号２）の８６５番−９１２番のヌクレオチドに実質的に同一なＡＧＥ−１核酸、図４（配列番号２）の９１９番−９７５番のヌクレオチドと実質的に同一なＡＧＥ−１核酸配列を含む精製ＤＮＡ、図４（配列番号２）の１００３番−３０９０番のヌクレオチドと実質的に同一なＡＧＥ−１核酸配列を含む精製ＤＮＡ、図４（配列番号２）の３０９４番−３５０１番のヌクレオチドと実質的に同一なＡＧＥ−１核酸配列を含む精製ＤＮＡ、或いは、図４（配列番号２）の２６２０番−２６５５番のヌクレオチドと実質的に同一なＡＧＥ−１核酸配列を含む精製ＤＮＡを特徴とする。また、本発明は、それぞれ本発明の精製ＡＧＥ−１ＤＮＡを含むベクター及び細胞を特徴とし、並びに、細胞内発現のために配置されたＡＧＥ−１ポリペプチドをコードするＤＮＡで形質転換された細胞を提供し、さらに、前記形質転換細胞を前記ＤＮＡを発現する条件下で培養して、前記組換えＡＧＥ−１ポリペプチドを分離することを含む組換えＡＧＥ−１ポリペプチドの生成方法を特徴とする。本発明は更に本発明の精製ＤＮＡを上記の通り発現させることによって生成される組換えＡＧＥ−１ポリペプチドを特徴とし、又、ＡＧＥ−１ポリペプチドを特異的に認識して結合する実質的に純粋な抗体を特徴とする。加えて、本発明はＡＧＥ−１を調節（修飾）する物質を確認する方法を特徴とする。その第一の方法は、ＡＧＥ−１遺伝子の発現を減少させる能力のある調節物質の同定を含み、（ａ）ＡＧＥ−１遺伝子を発現する細胞を提供し、（ｂ）前記細胞を候補化合物と接触させること含み、前記候補化合物との接触に続いて起こるＡＧＥ−１発現の減少は調節物質の確認となる。第二の方法は、又、ＡＧＥ −１活性（例えば、キナーゼ活性）を減少させる能力のある調節物質の同定を含み、この方法は（ａ）ＡＧＥ−１ポリペプチドを発現する細胞を提供して、（ｂ）前記細胞を候補化合物と接触させることを含み、前記候補化合物との接触後のＡＧＥ−１活性（例えば、キナーゼ活性）の減少は調節物質の確認となる。両方法の好適な実施の形態において、前記ＡＧＥ−１遺伝子は、図６（配列番号１）に示されているアミノ酸配列に少なくとも５０％（又、望ましくは７０％或いは９０％）同一であるアミノ酸配列をコードし、或いはＡＧＥ−１ポリペプチドはその配列を含み、又、ＡＧＥ−１遺伝子或いはＡＧＥ−１ポリペプチドは、動物（例えば、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）、好適には、哺乳類（例えば、ヒト）由来のものである。他の好適な実施の形態において、本方法は、線虫、又は他の動物で実施されるか、或いは、本方法はインビトロにおけるＡＧＥ−１活性の解析を含む。本発明は更に前記の方法によって同定された調節物質、並びにこのような化合物をある哺乳類（例えば、ヒト）に投与することを含む哺乳類の寿命を増大する方法を特徴とする。加えて、本発明はある哺乳類（例えば、ヒト）における寿命を増大するための薬物を生成する方法を特徴とする。加えて、本発明はある動物の寿命を決定する方法を特徴とする。本方法は前記動物からの試料中のＡＧＥ−１遺伝子の発現、或いはＡＧＥ−１活性（例えば、キナーゼ活性）を測定することを含み、野性型試料と比較してＡＧＥ−１の発現、或いは活性の減少は前記動物の寿命の増大を示唆する。好適な実施の形態において、前記動物は哺乳類（例えば、ヒト）であり、ＡＧＥ−１遺伝子の発現は試料中のその量を検定して測られ（例えば、免疫学的方法）、或いは、ＡＧＥ−１遺伝子の発現は試料中のＡＧＥ−１のｍＲＮＡの量を検定して測られる（例えば、ＡＧＥ−１に特異的な核酸配列を用いるハイブリダイゼーション、又はＰＣＲ技法によって）。上記の方法を施行するためのキットも又本発明に含まれる。この様なキットは、好適にはＡＧＥ−１ポリペプチドを特異的に認識して結合する実質的に純粋な抗体を含み、又、抗体結合を検出して定量する手段を含むことがある。或いは、前記のキットがハイブリダイゼーション、又はＰＣＲの目的に有用なＡＧＥ−１核酸配列の全体、又は一断片を含んでいてもよく、又、ハイブリダイゼーション、又は増幅の生成物を検出して定量する手段を含んでいてもよい。「ＡＧＥ−１ポリペプチド」とは、老化の制御に関与するホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３−キナーゼ）を意味する。「タンパク質」或いは「ポリペプチド」とは、長さ、又は翻訳後の修飾（例えば、グリコシル化、あるいはリン酸化）の有無に拘わらず、アミノ酸の何らかの鎖を意味する。「実質的に純粋」とは、少なくとも重量（乾燥重量）として６０％が目的の化合物、例えば、前記のＡＧＥ−１ポリペプチド、或いはＡＧＥ−１に特異的な抗体である標品を意味する。前記の標品は、少なくとも７５％、更に好適には少なくとも９０％、最も好適には少なくとも９９％が重量で目的の化合物であることが望ましい。「純度」であるか否かは、適当な方法、例えば、カラムクロマトグラフィー、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、或いはＨＰＬＣ分析によって測定することが出来る。「精製されたＤＮＡ」とは、それが由来する生物の天然のゲノム上で直接両側に隣接するコード配列（一つは５’末端、及び一つは３’末端）と直接隣接していないＤＮＡを意味する。従って、前記の用語には、例えば、ベクターに、自律複製プラスミド、或いはウイルスに、原核生物或いは真核生物のゲノムＤＮＡに組み込まれている状態、又は、他の配列から独立した分離した分子として存在する状態（例えば、ｃＤＮＡ、或いは、ＰＣＲ又は制限エンドヌクレアーゼ処理によって生成されたゲノムＤＮＡ断片）の組換えＤＮＡを含む。前記の用語は、また、別の追加のポリペプチド配列をコードしているハイブリッド遺伝子の一部として含まれた組換えＤＮＡを含む。「実質的に同一な」核酸とは、同類アミノ酸置換、例えば、一つのアミノ酸の同クラスの他のアミノ酸による置換（例えば、グリシンの代わりにバリン、リジンの代わりにアルギニン）、或いは、前記ポリペプチドの機能を破壊しない前記アミノ酸配列の位置に局在する一つ又はそれ以上の非同類置換、欠損、或いは挿入によってのみ異なる核酸を意味する。コードされる配列は、図６（配列番号１）或いはそのＡＧＥ−１領域の配列（本明細書に記載の如く）にアミノ酸レベルで少なくとも３０％同一であることが望ましい。他の好適な実施の形態において、前記のコードされる配列は、図６（配列番号１）の配列、或いはそのＡＧＥ− １領域の配列にアミノ酸レベルで少なくとも４０％、好適には５０％、更に好適には６０％、最も好適には７０％同一である。なお別の好適な実施の形態において、前記のコードされる配列は、図６（配列番号１）の配列、或いはそのＡＧＥ −１領域の配列にアミノ酸レベルで少なくとも８０％、好適には８５％、更に好適には９０％、最も好適には９５％同一である。仮に、核酸配列が比較されるならば、「本質的に同一な」核酸配列は、図４（配列番号２）の配列、或いはそのＡＧＥ−１領域をコードする配列に、少なくとも３０％、更に好適には４０％、又最も好適には５０％同一な配列である。他の好適な実施の形態において、前記の実質的に同一な核酸配列は、図４（配列番号２）の配列、或いはＡＧＥ−１領域をコードする配列に、少なくとも７５％、更に好適には８５％、又最も好適には９５％同一な配列である。核酸配列を比較する長さは、一般に、少なくとも５０個のヌクレオチド、好適には、少なくとも６０個のヌクレオチド、更に好適には７５個のヌクレオチド、又、最も好適には１１０個のヌクレオチドである。相同性は、配列解析ソフトウエアにより一般的に解析される（例えば、１７１０ユニバーシティアベニュー、マジソン、ウイスコンシン５３７０５，ウイスコンシン大学バイオテクノロジーセンター、ジェネティックスコンピュータグループのシークエンスアナリシスソフトウエアパッケージ、ＢＬＡＳＴ或いはＰＩＬＥＵＰ／ＰＲＥＴＴＹＢＯＸプログラム）。この様なソフトウエアは、種々の置換、欠失、及び他の修飾に対する相同性の程度を割り当てることによって類似の配列を見つける。同類置換は、典型的に以下のグループ内の置換を含む、即ち、グリシン、アラニン；バリン、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン；セリン、トレオニン；リジン、アルギニン；及びフェニルアラニン、チロシンである。「発現のために局在化されている」とは、前記のＤＮＡ分子が、前記の配列の転写及び翻訳を指令するＤＮＡ配列に隣接して配置されていることを意味する（例えば、ＡＧＥ−１タンパク質の生成を容易にする）。「精製された抗体」とは、その抗体が天然で会合しているタンパク質及び天然由来の有機分子を、重量で少なくとも６０％除外されている抗体を意味する。好適には、前記の標品は、重量で、少なくとも７５％、更に好適には少なくとも９０％、また、最も好適には少なくとも９９％が抗体である。「特異的に結合する」とは、試料中のＡＧＥ−１ポリペプチドを認識して結合するが、実質的に他の分子を認識して結合しない抗体を意味する。ＡＧＥ−１に「特異的に結合する」抗体は、当業者に入手可能な標準の免疫学的技法の一つ或いはそれ以上を用いて（例えば、ウエスターンブロッティング、或いは免疫沈降法）、この様な生物学的な試料中のＡＧＥ−１タンパク質生成物を検出するのに十分である。「長命」とは、老化及び／或いは寿命の程度を意味する。「野性型の試料に比例して」とは、平均寿命の一人又はそれ以上の個体からの相応する組織に比例して、ということを意味する。平均寿命を有する個体は、ある人口の構成員の統計学的に有意な人数におけるＡＧＥ−１レベルを分析することによって決定することが出来る。「免疫学的方法」とは、抗体に基づく検出方法を含む何らかの測定法を意味し、特に制限はなく、ウエスターンブロッティング、免疫沈降法、及び直接並びに拮抗的ＥＬＩＳＡとＲＩＡ技法が含まれる。「検出するための手段」とは、目的の検出結果を十分に示唆する一つ或いは一連の構成成分を意味する。この様な手段には、測定或いは観察し得る少なくとも一つの標識が含まれ、特に制限はなく、放射活性、蛍光性、及び化学発光的な標識が含まれる。「ＡＧＥ−１ＲＮＡ」とは、あるＡＧＥ−１ＤＮＡ配列から転写されたメッセンジャ−ＲＮＡを意味する。「ハイブリダイゼーション技法」とは、ＤＮＡ−ＤＮＡ、ＲＮＡ−ＲＮＡ及びＤＮＡ−ＲＮＡ相互作用を含む核酸鎖同士間の特異的な相互作用（相補性に基づく）を含む何らかの検出検定法を意味する。この様なハイブリダイゼーション技法は、もし望むならば、ＰＣＲ増幅工程を含んでもよい。「キナーゼ活性」とは、ＡＧＥ−１が仲介するホスファチジルイノシトールＰ₃ （ＰＩＰ₃）の生成を意味する。本明細書に用いられている「調節物質」とは、ＡＧＥ−１の発現（即ち、転写、翻訳、或いは翻訳後のレベルにおける）を減少させるか、或いはＡＧＥ−１タンパク質の活性（即ち、例えば、ＡＧＥ−１タンパク質の一単位量当たりのキナーゼ活性の量）を低減させる能力のある何らかの化合物を意味する。本発明の他の特徴並びに利点は、以下の本発明についての詳細な説明、及び特許請求の範囲から明らかとなろう。図面の簡単な説明図１はａｇｅ−１（ｈｘ５４６）動物における欠陥母系ａｇｅ−１遺伝子活性を示すグラフである。この図の前記ａｇｅ−１（ｍｇ４４）染色体は、ｓｑｔ− １（ｓｃ１３）によりｃｉｓにマークされている。ａｇｅ−１（ｍｇ４４）のホモ接合の両親のａｇｅ−１（ｍｇ４４）の子供は左側に示されている。ａｇｅ− １（ｈｘ５４６）／ｓｑｔ−１（ｓｃ１３）ａｇｅ−１（ｍｇ４４）ヘテロ接合の両親の子供は中央に示されている。＋／ｓｑｔ−１（ｓｃ１３）ａｇｅ−１（ｍｇ４４）の両親の子供は右側に示されている。ｓｑｔ−１（ｓｃ１３）遺伝子マーカーが、ホモ接合ａｇｅ−１（ｍｇ４４）の子供を同定するために用いられた。他のマーカー、ｕｎｃ−４を、これも又ヌル対立遺伝子であるらしい他のａｇｅ−１対立遺伝子であるｍ３３３、及びｍｇ１０９（データ未掲載）をマークするために用いた場合にも同様の結果が得られた。動物は、示されている実験では２５℃で飼育された。ａｇｅ−１（ｈｘ５４６）／ｓｑｔ−１（ｓｃ１３）ａｇｅ−１（ｍｇ４４）の、ｓｑｔ−１（ｓｃ１３）ａｇｅ−１（ｍｇ４４）子供は、２５℃で１００％の浸透度を持って永続性幼虫として成長が止まっていることに注目されたい。これは、対照のａｇｅ−１（ｍｇ４４）両親のａｇｅ−１（ｍｇ４４）娘と同様である。ａｇｅ−１（ｍｇ４４）両親のａｇｅ−１（ｍｇ４４）娘の場合、これらの動物の６％（ｎ＝３０）が、Ｌ１或いはＬ２段階において成長を停止することが認められた。これらの発育停止動物の多くは、究極的には永続型様の幼虫及び不稔の成虫へと成長する。対照的に、＋／ｓｑｔ−１（ｓｃ１３）ａｇｅ−１（ｍｇ４４）のｓｑｔ−１（ｓｃ１３）ａｇｅ−１（ｍｇ４４）子供の１％は、２５℃で永続型幼虫として発育を停止する。ａｇｅ−１（ｈｘ５４６）／ｓｑｔ−１（ｓｃ１３）ａｇｅ−１（ｍｇ４４）子供は、丁度、＋／ｓｑｔ−１（ｓｃ１３）ａｇｅ−１（ｍｇ４４）子供の様に、稔性の成虫を形成する。このことは、ａｇｅ−１（ｈｘ５４６）は、十分に接合的であるが、しかし非永続型成長のための母系レベルのａｇｅ−１を発現しないことを示している。２０℃においては、ａｇｅ−１（ｈｘ５４６）／ｓｑｔ−１（ｓｃ１３）ａｇｅ−１（ｍｇ４４）のｓｑｔ−１（ｓｃ１３）ａｇｅ−１（ｍｇ４４）子供の中で永続性幼虫として発育を停止するものはより少なく、大抵のものは暗色で不稔性の永続性（持続性）様の動物として発育を継続する。この様な温度依存性の永続性の発育停止は、以前にａｇｅ−１（ｍｇ４４）に対して認められている（Ｇｏｔｔｌｉｅｂ，Ｓ．＆Ｒｕｖｋｕｎ，Ｇ．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１３７，１０７−１２０（１９９４））。我々は、高温における更に厳しい表現型をａｇｅ− １（ｈｘ５４６）の温度感受性に帰することは出来ない。それは野性型の永続型形成さえも温度依存性の過程であるからである（Ｇｏｌｄｅｎ，Ｊ．Ｗ．＆Ｒｉｄｄｌｅ，Ｄ．Ｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１：８１９ −８２３（１９８４））。２５℃とは異なり、２０℃においては、ａｇｅ−１（ｈｘ５４６）において、母系のａｇｅ−１活性が検出できる。ａｇｅ−１（ｍｇ４４）母のａｇｅ−１（ｍｇ４４）娘とは異なり、ａｇｅ−１（ｈｘ５４６）／ｓｑｔ−１（ｓｃ１３）ａｇｅ−１（ｍｇ４４）両親のｓｑｔ−１（ｓｃ１３）ａｇｅ−１（ｍｇ４４）子供の４％は稔性である（データ未掲載）（Ｇｏｔｔｌｉｅｂ，Ｓ．＆Ｒｕｖｋｕｎ，Ｇ．，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１３７，１０７−１２０（１９９４））。対照的に、２０℃においては、＋／ｓｑｔ−１（ｓｃ１３）ａｇｅ−１（ｍｇ４４）両親のｓｑｔ−１（ｓｃ１３）ａｇｅ−１（ｍｇ４４）子供の９３％は妊性（稔性）である。この図において、上付記号「a」は、一つの稔性の成虫が、組換えのｓｑｔ− １（ｓｃ１３）ａｇｅ−１（ｍｇ４４）／ｓｑｔ−１（ｓｃ１３）ａｇｅ−１（ｈｘ５４６）であったことを示唆している。二つの他のｓｑｔ−１（ｓｃ１３）ａｇｅ−１（ｍｇ４４）／ｓｑｔ−１（ｓｃ１３）ａｇｅ−１（ｈｘ５４６）組換え体は、別の実験で同じ親株から選抜された（データー不掲載）。上付記号「ｂ」は、すべての稔性Ｓｑｔ成虫が、三つのｓｑｔ−１（ｓｃ１３）ａｇｅ−１（ｍｇ４４）／ｓｑｔ−１（ｓｃ１３）組換え体を除き、Ｆ３（三代雑種）ですべてのＳｑｔ永続型を生成することを示唆している。前記組換え体の遺伝子型は、元の非永続型Ｓｑｔから個々の動物を選抜し、次いでその子供を調べることによって決定することが出来る。三つのｓｑｔ−１（ｓｃ１３）ａｇｅ−１（ｈｘ５４６）／ｓｑｔ−１（ｓｃ１３）ａｇｅ−１（ｍｇ４４）組換え体は、ａｇｅ−１（ｈｘ５４６）をｓｑｔ−１（ｓｃ１３）の右側にマップする。これは、三つの組み換え体が、毎回、ｓｑｔ−１（ｓｃｌ３）が、ａｇｅ−１（ｈｘ５４６）／ｓｑｔ−１（ｓｃ１３）ａｇｅ−１（ｍｇ４４）ヘテロ接合子内で、ａｇｅ−１（ｍｇ４４）から離れて組み換えられ、ａｇｅ −１（ｈｘ５４６）が、前記ｓｑｔ−１組換え染色体上に回収されることを示しているからである。ａｇｅ−１（ｈｘ５４６）は、またｓｑｔ−１（ｓｃｌ３）とｌｉｎ−２９に比例して三因子マップされ、ａｇｅ−１（ｍ３３３）の母系回収（救出）の欠損に基づき、２個のＬｉｎ非Ｓｑｔ組み換え体は、Ａｇｅであり、１０個のＳｑｔ非Ｌｉｎ組換え体は非Ａｇｅであった。このことは、ａｇｅ− １がｌｉｎ−２９の左側にマップされることを示している。これらの実験を行うために、ａｇｅ−１（ｈｘ５４６）の雄をｓｑｔ−１（ｓｃ１３）ａｇｅ−１（ｍｇ４４）両性体と２０℃で交配した。Ｆ１（一代雑種）非Ｓｑｔ非Ｄａｆ交雑の子供（３／３）が、別々の皿に選抜された。個々のヘテロ接合体は、プレートに２５、２０或いは１５℃で選別され、毎日（２０℃と２５℃）或いは２−３日毎に（２０℃と１５℃）移し替えられた。線虫は次いで数えられ、永続型と非永続型の数を、３日後（２５℃）、４日後（２０℃）、或いは７日後（１５℃）に記録した。遺伝子地図を作るために、ａｇｅ−１（ｈｘ５４６）雄をｓｑｔ−１（ｓｃ１３）ｌｉｎ−２９（ｎ３３３）／ｍｎＣ１両性体と交配し、個々の野性型交雑子孫を別々のプレートに選抜した。野性型、ＳｑｔＬｉｎ動物を区別し、又、ｍｎＣ１を持つ子孫は区別しないプレートを、Ｓｑｔ −非Ｌｉｎ及びＬｉｎ−非−Ｓｑｔである組み換え体について検査した。椎定組換え体を次いで個々のプレートに選抜し、ヘテロ接合の組み換え体からの子孫を選抜してホモ接合の組換え株を確立した。１０個のＳｑｔ−非Ｌｉｎ及び２個のＬｉｎ−非−Ｓｑｔ組換え体が、次いで、２５℃において、永続型構成に対して母系的にａｇｅ−１（ｍ３３３）を相補不能として記録された。ｕｎｃ−４（ｅ１２０）ａｇｅ−１（ｍ３３３）／ｍｎＣ１の雄を前記組換え体と交配した。前記のＬｉｎ−非−Ｓｑｔ組換え体は、接合に先立ち、微細注射針により陰門で開口した。野性型両性体の交雑子孫を２５℃で選抜し、それらの子孫をｕｎｃ−４（ｅ１２０）ａｇｅ−１（ｍ３３３）ホモ接合子孫が永続型幼虫として発育を停止するかどうかについて記録を取った。図２Ａは、前記ａｇｅ−１領域の物理的／遺伝的マップを示す模式図であり、遺伝的に左は図において左側に配置されている。ａｇｅ−１は、この遺伝的に方向づけられたマップ上では右から左へ転写される。前記のｓｑｔ−１ｌｉｎ−２９間隔内のコスミド及びＹＡＣクローンを、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓゲノムプロジェクトによって配置決定した。ｍｎＤｆ７５、ｍｎＤｆ７６、及びｍｎＤｆ８６、これらすべてはａｇｅ−１を相補し、ｓｑｔ−１を捕捉することが出来ないが、コスミドＣ２４Ｆ２と重複している。このことは、このコスミドをプローブとして用い、Ｄｆ／ｍｎＣ１ＤＮＡに対するサザーンブロットにより検出されることを示す（データ非掲載）。ｍｎＤｆ７６内の切断点であるが、ｍｎＤｆ７５或いはｍｎＤｆ８６内の切断点ではないものが、コスミドＷ１０Ｃ３内に検出され、これはＣ２４Ｆ２の左側において部分的に重複している。この様にして、ａｇｅ −１は、これらの欠損の切断点の右側に局在しているに違いないことが理解される。ｓｑｔ−１及びａｇｅ−１の両方を相補出来ないｍｎＤｆ９０に対するホモ接合の胚のｋｉｎ−６プライマーを用いるＰＣＲ分析によって、この欠失はｋｉｎ−６の左側へとＤＮＡを欠失させて、ａｇｅ−１をｋｉｎ−６の左側に配置する。コスミドＢ０３３４をプローブとして用いるサザーンブロットにより、ａｇｅ−１（ｍｇ５５）／ｍｎＣ１から分離されたＤＮＡ内の切断点は検出されるが、他のａｇｅ−１対立遺伝子或いはｍｎＣ１を持つ他の株から分離されたＤＮＡ内の切断点は検出されない。前記のａｇｅ−１の転写産物は一定の比例に従って描かれてはいない。図２Ｂは、サザーンブロット分析の写真である。この分析は、野性型（Ｎ２）（レーン１）、ａｇｅ−１（ｍｇ５５）／ｍｎＣ１（レーン２）及び三つのＤｆ／ｍｎＣ１対照株（レーン３，４，及び５）から分離されゲノムＤＮＡをＨｉｎｄＩＩＩで消化し、その切断片をファージ５Ｂの４ｋｂ長のＳａｌＩサブクローンから作られたプローブでハイブリダイゼーションを行うことにより実施した。ここで用いたプローブは、ＡＧＥ−１のＣ末端をコードする領域を検出する。ｍｇ５５を持つ株は、ｍｎＣ１上の野性型ａｇｅ−１対立遺伝子からの５．２ｋｂのＨｉｎｄＩＩＩ断片と前記ａｇｅ−１（ｍｇ５５）対立遺伝子からの部分的に改変された３．１ｋｂのＨｉｎｄＩＩＩ断片の両方を持ち、前記ｍｇ５５切断点が、コスミドＢ０３３４の最も右側か、或いはその周縁にあったことを示唆している。図２Ｃは、前記遺伝子を分離するために用いられたゲノムＤＮＡ及びｃＤＮＡクローンに隣接して展示されたａｇｅ−１の遺伝子構造を示す模式図である。遺伝子は遺伝子マップに対して１８０度回して、転写が左から右へと方向付けられている。白い箱は予想される翻訳されない領域を示唆する。ピリオッドは、配列がＲＴＰＣＲによって得られたスプライス部位を証明し、並びにｃＤＮＡであるＢ及びＣをＡに結合する配列を得る領域を示唆する。独立したｃＤＮＡＢ及びＣは、ラムダベクター内に互いに反対方向で配置され、この様にして独立したクローニング事態をあらわす。これらは、Ｎ末端でお互いの３０ｂｐ内で終わり、これらが前記のａｇｅ−１ｍＲＮＡの真実の末端を定義することを示唆している。三番目のｃＤＮＡ（未掲載）は、ｃＤＮＡＣの５ｂｐ内で終結し、ｃＤＮＡＣと同じ方向にある。図２Ａ、２Ｂ、及び２Ｃに示唆されたすべての欠失は、それらがｓｑｔ−１を相補出来ないことに基づいて分離された。ｓｑｔ−１及びｋｉｎ−６の両方からのプライマー対を用いるＰＣＲを、単一の発育停止のＬ１幼虫（ｍｎＤｆ７５、ｍｎＤｆ７６、ｍｎＤｆ８６）について、或いは、ヘテロ接合の欠損／ｍｎＣ１動物によって産まれた単一の死卵について行った。単一成虫／卵のＰＣＲ実験を行うために、単一の線虫、或いは卵を、２．５μｌのプロテイナーゼＫを含む線虫溶解緩衝液（５０ｍＭＫＣｌ、１０ｍＭトリスｐＨ８．２、２．５ｍＭＭｇ、０．４５％ＮＰ−４０、０．４５％Ｔｗｅｅｎ−２０、０．０１％ゼラチン、６０μｇ／ｍｌプロテイナーゼＫ）中に選抜した。ミネラルオイルを加え、チューブをドライアイス上で凍結し、６０℃で１時間、そして９５℃で１５分間インキュベートして溶解した。次いで、２．５μｌの線虫溶解緩衝液を加え、反応は、ｓｑｔ−１及びｋｉｎ−６プライマーに対する二つのＰＣＲ反応に分けた。前記のｓｑｔ−１プライマーは、ＣＴＣＴＧＧＴＴＣＡＴＴＴＣＣＣＡＡＣＣ（配列番号３）及びＴＧＴＡＡＣＴＣＡＣＣＴＡＧＴＣＴＴＣＧ（配列番号４）であった。前記のｋｉｎ−６プライマーは、ＡＡＣＡＡＴＴＡＣＡＧＧＣＣＧＡＴＣＣ（配列番号５）及びＡＴＧＣＣＡＣＧＣＡＡＧＡＡＡＣＴＣＡＣ（配列番号６）であった。ファージＢ及びＣは、ＢａｒｓｔａｅａｄランダムプライマーｃＤＮＡライブラリイ（ＲＢＩＩ）からＡＣＴベクター内に分離された。ファージＡは、Ａｈｒｉｎｇｅｒ段階の胚ライブラリイからｇｔ１０ベクター内に分離された。ファージΘ５Ｂは、ＢｒｏｗｎｉｎｇゲノムライブラリイからラムダＤａｓｈベクター内に分離回収された。ＲＴＰＣＲ実験用のＲＮＡは、混合発育段階にある線虫からグアニディニウムチオシアナートを用いて調製された。ｃＤＮＡの調製及びアンカー結合反応はＣｌｏｎｔｅｃｈ社の５’−ＡｍｐｌｉｆｉｎｄｅｒＲａｃｅキットを用いて行われた。３６μｇの総ＲＮＡを、ａｇｅ−１に特異的なプライマーを用いて逆転写した（配列、ＧＡＡＡＡＧＡＴＧＧＡＡＴＧＴＧＡＣＣＧ）（配列番号７）。ＰＣＲをキットからのアンカー結合反応されたプライマーと配列がＡＴＣＴＧＡＡＧＣＧＴＴＣＴＴＡＴＡＴＣ（配列番号８）であるプライマーとを用いて行われた（この配列は後に誤りがあることが発見された）。ネステッドＰＣＲは、アンカー結合反応されたＰＣＲプライマーを再度用い、及びその内側プライマー、ＴＧＣＴＣＣＡＴＴＴＴＣＴＣＣＧＡＴＣＣ（配列番号９）とを用いて行われた。図３は、ｃＤＮＡクローン、増幅された逆転写ＰＣＲ断片及び図１に記載されたゲノム領域の配列を決定することによって確定されたａｇｅ−１のアミノ酸配列である（配列番号１）。ＰＣＲによって生成された鋳型は、サブクローニングすることなく配列が決定され、多重分離物の配列を決定することによって証明された。ａｇｅ−１対立遺伝子は、ゲノム領域をＰＣＲで増幅することによって、又、サブクローニングをすることなく鋳型の配列を直接決定することによって配列が決定された。検出された各突然変異は、独立的に増幅された鋳型の配列決定することによって証明された。前記ＡＧＥ−１の配列の比較は、マウスのｐ１１０α（寄託番号Ｐ４２３３７）（配列番号１０）、ヒトのｐ１１０β（寄託番号Ｐ４２３３８）（配列番号１１）、及びヒトのｐ１１０γ（寄託番号Ｐ４８７３６）（配列番号１２）に対して行われた。灰色及び黒色で強調されている領域をＰｒｅｔｔｙｂｏｘによって選抜し、アミノ酸の類似性が高い領域を延長するにつれてＰｉｌｅｕｐプログラムによって整列された（ウイスコンシンパッケージに対するプログラムマニュアル、８版、１９９４年９月、ジェネンティックスコンピュータグループ、５７５ＳｃｉｅｎｃｅＤｒｉｖｅ、マジソン，ウイスコンシン，ＵＳＡ５３７１１）。四つの配列の内、三つにおける不変のアミノ酸が黒いボックスとして示されている。四つの正確な適合の内、三つによって強調される領域における同様のアミノ酸は、灰色のボックスとして強調されている。対立遺伝子の損傷は、変えられたアミノ酸の上に示されている。星印（＊）は、停止コドンにおける変化を示す。ａｇｅ−１（ｍｇ５５）を囲む枠は、前記ａｇｅ−１（ｍｇ５５）の切断点をマップした領域を示す。これらの実験において、配列決定が、Ｐｒｏｍｅｇａｆｍｏｌ配列決定キットを用い、ｃＤＮＡ、ＲＴＰＣＲ生成物、及び前記ａｇｅ−１突然変異体の対立遺伝子からのＰＣＲ増幅ゲノム領域について行われた。次いで、ＧＣＧプログラム、Ｔｒａｎｓｌａｔｅ、Ｐｉｌｅｕｐ、及びＰｒｅｔｔｙｂｏｘが用いられて前記の配列が解析された。図４は、一つのａｇｅ−１ｃＤＮＡの核酸配列である（配列番号２）。図５は、ＡＧＥ−１をマウスのｐ１１０αと整列させたものを示す模式図である。この模式図は、一定の比率に合わせてあり、１１４６個のアミノ酸からなるＡＧＥ−１配列に渡っている。Ｇａｐプログラムによってマウスのｐ１１０αの各ドメイン（領域）と、それと整列させたＡＧＥ−１の領域間で共有する同一性のパーセンテージが示されている。ｒａｓ及びｐ８５と標識されているドメインは、ｐ１１０αにおいて、それそれ、ｒａｓ及びｐ８５と結合することが証明されている。リピドキナーゼドメインは、すべてのリピドキナーゼと広範な同一性を共有するＡＧＥ−１の領域を含む。各々の点突然変異の凡その位置は、前記のパイルアップ（Ｐｉｌｅｕｐ）プログラムによって予言される推定のＡＧＥ−１ドメインに比例して示されている。図６は、一つのＡＧＥ−１ポリペプチドのアミノ酸配列である（配列番号１）。強調されているアミノ酸の位置は、（ヒトのキナーゼｐ１１０αにおけるアミノ酸とのそれらの同一性に基づき）ＡＧＥ−１変異体においておそらく不変である。発明の実施の形態以下に更に詳細に説明される様に、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓにおけるフェロモンで誘導される神経分泌シグナル系は、発育の停止と持続型休眠段階における劇的な寿命の増大を誘発する。ａｇｅ−１は、この神経内分泌経路における重要な遺伝子であり、その活性は非停止型の発育及び正常の老化の両方に必要である。本願に示される様に、ａｇｅ−１は、多数のｐ１１０ファミリイのホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３−キナーゼ）の触媒サブユニットのメンバーをコードする。四つのａｇｅ−１の突然変異対立遺伝子が、このＰＩ３−キナーゼ同族体（ホモログ）に影響を与える。この影響は、二つにおける損傷が、停止コドンであり、この停止コドンは前記キナーゼドメインに対してＮ末端の位置を指定し、その結果、前記タンパク質を切断して、おそらくヌル表現型となる。母系ａｇｅ−１活性は、増大された寿命に基づいて分離された一つのａｇｅ−１突然変異体において特異的に排除されている。母系の、或いは接合によるａｇｅ−１遺伝子活性の欠失は、長寿命を与えるが、発育停止は起こさない。一方、母系と接合による活性の両方の欠失は、永続型段階における停止を惹起する。これらのデータは、ＡＧＥ−１により仲介されるホスファチジル−イノシトール（３，４，５）Ｐ₃（ＰＩＰ₃）シグナリングの減少が、結果として、寿命の増大を招き、一方、このシグナリングの完全な欠如が発育停止に至ることを示唆している。Ｃ．ｅｒｅｇａｎｓ及び他の生物における休眠多くの動物門において、神経シグナル経路は、感覚からの入力を、自身の生理機能及び発育の内分泌制御と共役する。例えば、多くの無脊椎動物は、フェロモン、明／暗のサイクル、或いは温度によって引き起こされる神経的シグナルに応答してそれらの発育を変更又は停止する（Ｔａｕｂｅｒ，Ｍ．Ｊ．ら、ＳｅａｓｏｎａｌＡｄａｐｔａｔｉｏｎｏｆＩｎｓｅｃｔｓ（ニューヨーク、ＮＹ、１９８６）、Ｗｉｌｓｏｎ，Ｅ．Ｏ．、ＴｈｅＩｎｓｅｃｔＳｏｃｉｅｔｉｅｓ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ、１９９２））。線虫Ｃａｅｎｈｏｒａｂｄｉｔｉｓｅｌｅｇａｎｓは、特定の感覚ニューロンが永続型誘発フェロモンに露出された後、永続型休眠段階で発育を停止する（Ｒｉｄｄｌｅ，Ｄ．Ｌ．、ｉｎＴｈｅＤａｕｅｒＬａｒｖａｉｎＴｈｅＮｅｍａｔｏｄｅＣａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓｅｌｅｇａｎｓ（Ｗｏｏｄ，Ｗ．Ｂ．編纂）３９３ −４１２（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ、ＮＹ、１９８８））。永続型幼虫の形成は、挙動的、生理機能的、及び形態学的変化を含み、即ち、永続型幼虫は、脱皮のサイクル及び生殖系列の発育を中止し、食物の摂取を止めるが、分散挙動を開始し、又、分化した密封クチクラを分泌する（Ｒｉｄｄｌｅ，Ｄ．Ｌ．、ｉｎＴｈｅＤａｕｅｒＬａｒｖａｉｎＴｈｅＮｅｍａｔｏｄｅＣａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓｅｌｅｇａｎｓ（Ｗｏｏｄ，Ｗ．Ｂ．編纂）３９３−４１２（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ、ＮＹ、１９８８））。フェロモンのレベルが減少すると、永続型は回復して、正常の摂食及び脱皮サイクルに再び入り、稔性の成虫動物を生成する。永続型形成は、また、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓにおける正常の老化を中断させる。永続的な発育が停止された幼虫は、非永続型動物の寿命の８倍以上も生存し、永続型段階から救済された後の寿命に影響を与えない（Ｒｉｄｄｌｅ，Ｄ．Ｌ．、ｉｎＴｈｅＤａｕｅｒＬａｒｖａｉｎＴｈｅＮｅｍａｔｏｄｅＣａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓｅｌｅｇａｎｓ（Ｗｏｏｄ，Ｗ．Ｂ．編纂）３９３−４１２（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ、ＮＹ、１９８８））。永続型形成に伴う地球規模の形態学的及び寿命の変化のために、また、他の無脊椎動物における休眠における既知の内分泌的制御と類似するより（Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｃ．Ｍ．，Ｂｉｏｌ．Ｂｕｌｌ．１０３：１２０−１３８（１９５２））、神経内分泌経路は、永続型フェロモンを検出する感覚ニューロンに共役している可能性がある。永続型形成に影響を及ぼす多くの突然変異（ｄａｆ突然変異）が分離され、その特徴が検討されている（Ｒｉｄｄｌｅ，Ｄ．Ｌ．ら、Ｎａｔｕｒｅ２９０：６６８−６７１（１９８１）、Ｖｏｗｅｌｓ，Ｊ．Ｊ．＆Ｔｈｏｍａｓ，Ｊ．Ｈ．，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１３０：１０５−１２３（１９９２），Ｇｏｔｔｌｉｅｂ，Ｓ．＆Ｒｕｖｋｕｎ，Ｇ．，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１３７：１０７−１２０（１９９４））。これら突然変異は、二つの主要なクラスに分かれる。即ち、永続型誘引フェロモンの非存在下でさえ動物を永続型段階に入らせる永続型構成的（ｄａｆ−ｃ）突然変異、及び高フェロモン状態下でさえ永続型形成を阻止する永続型欠損的（ｄａｆ−ｄ）突然変異とである。これらの突然変異によって同定された遺伝子は、フェロモン感覚ニューロン、分泌細胞、及び標的組織からなる神経内分泌型の発育或いは機能における初段階を代表すると思われる遺伝の上下位性経路に整理されて来ている（Ｒｉｄｄｌｅ，Ｄ．Ｌ．ら、Ｎａｔｕｒｅ２９０：６６８−６７１（１９８１）、Ｖｏｗｅｌｓ，Ｊ．Ｊ．＆Ｔｈｏｍａｓ，Ｊ．Ｈ．，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１３０：１０５−１２３（１９９２），Ｇｏｔｔｌｉｅｂ，Ｓ．＆Ｒｕｖｋｕｎ，Ｇ．，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１３７：１０７−１２０（１９９４）、Ｔｈｏｍａｓ，Ｊ．Ｈ．，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１３４：１１０５−１１１７（１９９３））。これら遺伝子の内の二つ、ｄａｆ−１及びｄａｆ−４は、ＴＧＦ−β受容体の相同体をコードしており、これら受容体はフェロモンの情報伝達にこれを介したシグナル経路を取り込んでいる（Ｇｅｏｒｇｉ，Ｌ．Ｌ．ら、Ｃｅｌｌ６１：６３５−６４５（１９９０）、Ｅｓｔｅｖｅｚ，Ｍ．ら、Ｎａｔｕｒｅ３６５：６４４−６４９（１９９３））。永続型神経内分泌経路の機能を媒介する多くの遺伝子の中で、ｄａｆ−２、ｄａｆ−１６、及びｄａｆ−２３が、最も直接に寿命の制御に結び付けられて来ている（Ｋｅｎｙｏｎ，Ｃ．ら、Ｎａｔｕｒｅ３６６：４６１−４６４（１９９３）、Ｌａｒｓｅｎ，Ｐ．Ｌ．ら、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１３９：１５６７−１５８３（１９９５）、Ｄｏｒｍａｎ，Ｊ．Ｂ．ら、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１４１：１３９９（１９９５））。強力なｄａｆ−２対立遺伝子、及び母系に救出されない強力なｄａｆ−２３対立遺伝子は、フェロモン非存在下に永続型形成を誘発するが、温度感受性のｄａｆ−２対立遺伝子、或いは母系に救出されるｄａｆ−２３対立遺伝子は、永続型の幼虫を形成することなく寿命を２倍から３倍増大する（Ｋｅｎｙｏｎ，Ｃ．ら、Ｎａｔｕｒｅ３６６：４６１−４６４（１９９３）、Ｌａｒｓｅｎ，Ｐ．Ｌ．ら、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１３９：１５６７−１５８３（１９９５））。このことは、老化の調節が永続型形成から脱共役し得ることを示唆している。ｄａｆ−１６突然変異は、ｄａｆ−２並びにｄａｆ−２３突然変異体の永続型構成的な表現型、及び寿命の増大を抑制する（Ｋｅｎｙｏｎ，Ｃ．ら、Ｎａｔｕｒｅ３６６：４６１−４６４（１９９３）、Ｌａｒｓｅｎ，Ｐ．Ｌ．ら、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１３９：１５６７−１５８３（１９９５）、Ｄｏｒｍａｎ，Ｊ．Ｂ．ら、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１４１：１３９９（１９９５））。他のｄａｆ突然変異は、寿命に影響を与えず、又、ｄａｆ−１６突然変異によって効果的には抑制されない（Ｇｏｔｔｌｉｅｂ，Ｓ．＆Ｒｕｖｋｕｎ，Ｇ．，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１３７：１０７−１２０（１９９４）、Ｋｅｎｙｏｎ，Ｃ．ら、Ｎａｔｕｒｅ３６６：４６１−４６４（１９９３）、Ｌａｒｓｅｎ，Ｐ．Ｌ．ら、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１３９：１５６７−１５８３（１９９５））。この遺伝的上下位性の解析は、寿命を調節するｄａｆ−２、ｄａｆ−１６、ｄａｆ−２３サブ経路が、永続型経路のＴＧＦ−β成分の下流、或いはそれと平行して作用することを示唆している（Ｖｏｗｅｌｓ，Ｊ．Ｊ．＆Ｔｈｏｍａｓ，Ｊ．Ｈ．，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１３０：１０５−１２３（１９９２），Ｇｏｔｔｌｉｅｂ，Ｓ．＆Ｒｕｖｋｕｎ，Ｇ．，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１３７：１０７−１２０（１９９４））。ＡＧＥ−１のクローニング及び解析Ａｇｅ−１（ｈｘ５４６）は、寿命の増大を指標にした遺伝子スクリーンで分離された（Ｋｌａｓｓ，Ｍ．，ＭｅｃｈＡｇｉｎｇＤｅｖ．２２：２７９− ２８６（１９８３）、Ｆｒｉｅｄｍａｎ，Ｄ．Ｂ．＆Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｔ．Ｅ．，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１１８：７５−８６（１９８８））。ＡＧＥ−１（ｈｘ５４６）動物は、野性型の２倍長生きし、この寿命の増加は、ｄａｆ−２及びｄａｆ−２３突然変異体の寿命増大表現型の様に、ｄａｆ−１６における突然変異によって抑制される（Ｋｅｎｙｏｎ，Ｃ．ら、Ｎａｔｕｒｅ３６６：４６１− ４６４（１９９３）、Ｌａｒｓｅｎ，Ｐ．Ｌ．ら、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１３９：１５６７−１５８３（１９９５）、Ｄｏｒｍａｎ，Ｊ．Ｂ．ら、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１４１：１３９９（１９９５））。最近、井上とＴｈｏｍａｓは、通常、実験室の培養で用いられている温度よりも高い２７℃で、ａｇｅ−１（ｈｘ５４６）は、永続型構成的な表現型を持ち、ｄａｆ−２３の永続型構成的な対立遺伝子を相補出来ないことを示した。強力なｄａｆ−２３対立遺伝子（例えば、ｍ３３３、及びｍｇ４４）は、２７℃では一倍体で不十分（ｈａｐｌｏｉｎｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔ）であるので（データ不掲載）、この温度における相補性検定は解釈が困難である。我々は、ａｇｅ−１（ｈｘ５４６）及び永続型構成的なｄａｆ− ２３対立遺伝子を、この様な一倍体不全性のない、より低い温度で相補性検査をした（図１）。この結果は、前記のａｇｅ−１（ｈｘ５４６）が、三つのｄａｆ −２３永続型構成的な突然変異の対立遺伝子を相補することが出来ず、同一の遺伝子領域内に位置することを示唆する。従って、Ａｇｅ−１は、増大寿命対立遺伝子（ｈｘ５４６）及び、定義を下す突然変異の対立遺伝子がａｇｅ−１と名付けられていたので、以前は、ｄａｆ−２３と呼ばれた永続型構成的な突然変異の対立遺伝子（ｍｇ４４、ｍｇ５５，ｍ３３３、ｍｇ１０９）の両方を割り当てられた（Ｋｌａｓｓ，Ｍ．，ＭｅｃｈＡｇｉｎｇＤｅｖ２２：２７９ −２８６（１９８３）、Ｆｒｉｅｄｍａｎ，Ｄ．Ｂ．＆Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｔ．Ｅ．，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１１８：７５−８６（１９８８））。以下に示す様に、ａｇｅ−１（ｈｘ５４６）は、母系のａｇｅ−１遺伝子活性に特異的に欠陥があるが、一方、より強力な永続型構成的なａｇｅ−１対立遺伝子は、母系並びに接合体のａｇｅ−１遺伝子活性の両方に欠陥がある。ｓｑｔ−１（ｓｃ１３）でｃｉｓにマークされている前記ａｇｅ−１（ｍｇ４４）ヌル対立遺伝子（以下参照）が、この遺伝解析に用いられた（図１）。このａｇｅ−１対立遺伝子を持つ動物は、ただ、これら動物が、母系の、或いは接合子のａｇｅ−１の寄与を受けないならば、普通、永続型幼虫として発育を停止する（Ｇｏｔｔｌｉｅｂ，Ｓ．＆Ｒｕｖｋｕｎ，Ｇ．，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１３７：１０７−１２０（１９９４））。例えば、＋／ａｇｅ−１（ｍｇ４４）の母のａｇｅ−１（ｍｇ４４）の娘は、稔性の成虫に発育し、次いで、一腹の発育の停止したａｇｅ−１（ｍｇ４４）の永続型幼虫を産む（図１）。前記ａｇｅ−１（ｈｘ５４６）突然変異は、この母系の救済を阻止し、ａｇｅ−１（ｈｘ５４６）／ａｇｅ−１（ｍｇ４４）母から由来するａｇｅ−１（ｍｇ４４）娘は、永続型として発育を停止する（図１）。同様のａｇｅ−１（ｈｘ５４６）の母系救済の欠如は、恐らくもう一つのヌル対立遺伝子である（以下参照）ａｇｅ−１（ｍ３３３）ａｇｅ−１（ｍｇ１０９）（データ未発表）に対して観察された。前記のａｇｅ−１（ｈｘ５４６）の突然変異による母系のａｇｅ−１発現のみの中断と首尾一貫して、父系によって寄与されたａｇｅ−１（ｈｘ５４６）対立遺伝子は、ａｇｅ−１（ｍｇ４４）ホモ接合の母の子孫の永続型構成的な表現型を救済し、ａｇｅ−１（ｈｘ５４６）雄の、ａｇｅ−１（ｍｇ４４）／ａｇｅ−１（ｍｇ４４）両性体との交配によるａｇｅ−１（ｈｘ５４６）／ａｇｅ−１（ｍｇ４４）娘は、野性型雄との交配からの＋／ａｇｅ−１（ｍｇ４４）子孫と類似して、永続型幼虫として発育を停止しなかった（図１）。遺伝地図作製により、ａｇｅ−１（ｈｘ５４６）はｄａｆ−２３と同じ１．２マップ単位遺伝間隔でｓｑｔ −１とｌｉｎ−２９の間に配置された（図１）。以前の遺伝解析（Ｇｏｔｔｌｉｅｂ，Ｓ．＆Ｒｕｖｋｕｎ，Ｇ．，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１３７：１０７−１２０（１９９４））及び以下の分子解析によって示されている様に、大抵のａｇｅ−１対立遺伝子の前記永続型構成的な表現型は、恐らくヌル表現型である。ａｇｅ−１（ｈｘ５４６）は、大抵の温度において、永続型構成的ではなかった（Ｋｌａｓｓ，Ｍ．，ＭｅｃｈＡｇｉｎｇＤｅｖ２２：２７９−２８６（１９８３）、Ｆｒｉｅｄｍａｎ，Ｄ．Ｂ．＆Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｔ．Ｅ．，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１１８：７５−８６（１９８８））。これは、おそらく、この対立遺伝子の接合子のａｇｅ−１遺伝子活性が十分で、非停止型の発育を可能にしたからであろう。この突然変異体は、母系寄与のａｇｅ−１の減少が老化速度の低減を引き起こすので長命の可能性がある。同様に、＋／ａｇｅ−１（ｍｇ３３３）両親の、母系に救済された（ｍｇ３３３）ホモ接合子孫における接合子的表現の欠如も、又、永続型の発育停止なしで、寿命の延長をもたらすことになる（Ｌａｒｓｅｎ，Ｐ．Ｌ．ら、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１３９：１５６７−１５８３（１９９５））。これらの動物は、ａｇｅ−１（ｍｇ３３３）がヌル突然変異体であるので、母系のａｇｅ−１活性のみを持つ（以下参照）。この様にして、正常の老化は、母系及び接合子のａｇｅ−１活性の両方に依存する可能性があり、接合子のａｇｅ−１遺伝子活性、或いは低減した母系のａｇｅ−１遺伝子活性の非存在下では、寿命は増大する。接合子及び母系のａｇｅ−１遺伝子活性の非存在下では、動物は永続型の段階で発育を停止する。図１に展示されたデータが以下の表の型式で示されている。ａｇｅ−１（ｍｇ４４）染色体は、ｃｉｓにｓｑｔ−１（ｓｃ１３）でマークされ、又ａｇｅ−１（ｍｇ４４）／＋株は、ｍｎＣ１バランス染色体を＋染色体として持つ。２５℃における寿命は、Ｌ４段階から動物が軽い接触に応答する最後の日まで測定され、平均値±ｓ．ｅ．として表されている。ａｇｅ−１（ｈｘ５４６）／ｓｑｔ−１（ｓｃ１３）ａｇｅ−１（ｍｇ４４）のｓｑｔ−１（ｓｃ１３）ａｇｅ−１（ｍｇ４４）子孫が、２５℃において１００％の浸透度で永続型幼虫を形成することに注目されたい。これは、対照のａｇｅ−１（ｍｇ４４）両親のａｇｅ−１（ｍｇ４４）娘と同じである。両方の場合に生成される永続型幼虫は、暗色の小腸、咽頭及びクチクラの改変、及びこの段階の特徴である脱皮サイクルの停止を示す^3.5。対照的に、ｓｑｔ−１（ｓｃ１３）ａｇｅ−１（ｍｇ４４）／＋のｓｑｔ−１（ｓｃ１３）ａｇｅ−１（ｍｇ４４）子孫の９９％が永続型幼虫を形成せず、母系のａｇｅ−１活性が非永続型の発育を可能にするために十分であることを示している。これらの動物は、野性型の幼虫よりも２．６倍長生きをする。母系のａｇｅ−１の非存在下、接合子のａｇｅ−１（＋）は、正常の寿命、及び非永続型発育のための十分な活性を供給するが、接合子のａｇｅ −１（ｈｘ５４６）は、正常な寿命のための十分な活性を供給しない。同様の結果が、他のａｇｅ−１対立遺伝子ｍ３３３、及びｍｇ１０９で観察された（データ未発表）。我々は、ａｇｅ−１（ｈｘ５４６）を、１．２マップ単位でｓｑｔ −１とｌｉｎ２９の間隔に三因子マップした。この間隔にある２０個の組換え体の中で、４つは、ｓｑｔ−１とａｇｅ−１（ｈｘ５４６）の間に、１６個は、ａｇｅ−１と１ｉｎ２９の間にあった。このことは、ａｇｅ−１（ｈｘ５４６）が、ａｇｅ−１（ｍｇ４４）と同じ遺伝子間隔にマップすることを示している。このマッピングと矛盾せずに、遺伝子型ｓｑｔ−１（ｓｃ１３）ａｇｅ−１（ｍｇ４４）／ｓｑｔ−１（ｓｃ１３）ａｇｅ−１（ｈｘ５４６）のｓｑｔ組換え体が、ｓｑｔ−１（ｓｃ１３）ａｇｅ−１（ｍｇ４４）／ａｇｅ−１（ｈｘ５４６）線虫から分離された。野性型、或いはａｇｅ−１（ｈｘ５４６）雄がｓｑｔ−１（ｓｃ１３）ａｇｅ−１（ｍｇ４４）両性体に交配された。交雑子孫を２５℃で個別のプレートに選抜して、Ｆ₂子孫を３日後カウントした。遺伝子マッピングのために、組換え体をａｇｅ−１（ｈｘ５４６）／ｓｑｔ−１（ｓｃ１３）ｌｉｎ２９（ｎ３３３）両性体から選抜した。組換え体は、２５℃における永続型形成に対してａｇｅ−１（ｍ３３３）を母系的な相補不能について検査した。＊これら線虫の１％が永続型幼虫を形成し、又、２０％が不稔性の成虫となる。ａｇｅ−１が位置する１．２マップ単位のｓｑｔ−１とｌｉｎ２９の区間は、四つのコンティグ上の凡そ７００ｋｂのＤＮＡから成っている。物理的並びに遺伝的マップは、この領域で、五つの小さな染色体ＩＩの欠失を用いて関連付けられた。それらの欠失の幾つかは、ａｇｅ−１における突然変異を相補し、又、その幾つかは相補することが出来ない。Ａｇｅ−１は、コスミドＣ２４Ｆ２の右、或いはその上に位置すると決定された。それは、ｓｑｔ−１を相補出来ないが、ａｇｅ−１を相補するｍｎＤｆ７５、ｍｎＤｆ７６，及びｍんＤｆ８６欠失が、コスミドＣ２４Ｆ２によって検出出来る切断点を持っていたからである（図２Ａ）。Ａｇｅ−１は、ｓｑｔ−１及びａｇｅ−１の両方を相補出来ない欠失であるｍｎＤｆ９０に対するホモ接合の死卵が、ｋｉｎ−６に対するＤＮＡを含むが、ｓｑｔ−１を欠くことを決定するために、ＰＣＲを用いてクローンされたマーカーｋｉｎ−６（コスミドＣ４６Ｆ８上に位置する）の左に物理的にマップされた（図２Ａ）。これらの欠失は、ａｇｅ−１をコスミドクローンＣ２４Ｆ２及びＣ４６Ｆ８の間に、凡そ２４０ｋｂ間隔に位置づけた。この区間からのコスミドをサザーンブロット上にプローブとして用い、ａｇｅ−１（ｍｇ５５）ガンマー線で誘導した対立遺伝子に関連している切断点を捜索した。ａｇｅ−１（ｍｇ５５）は、遺伝的ｃｒｏｓｓにおいて染色体Ｉに偽連結を示すので（Ｇｏｔｔｌｉｅｂ，Ｓ．＆Ｒｕｖｋｕｎ，Ｇ．，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１３７：１０７−１２０（１９９４））、この対立遺伝子は、転座に関与していると推測され、ａｇｅ−１における切断点を示す最善の仮定の対立遺伝子であった。コスミドＢ０３３４ｋａｒａｎｏプローブ、及びＢ０３３４内の最も右よりの領域に重なり合うゲノムクローンからのプローブは、ａｇｅ−１（ｍｇ５５）／ｍｎＣ１に新規の切断点を検出したが、同じｍｎＣ１バランサー染色体を保持する対照のＤＮＡには検出しなかった（図２Ｂ，及び２Ｃ）。 C.elegansゲノムプロジェクト（Sulston，J．et al.，Nature 356:37-41(1992 )）に於いて、コスミドＢ０３３４の配列が決定された。ａｇｅ−１（ｍｇ５５）の切断点が検出された４ｋｂ領域のＤＮＡ配列の解析より、哺乳動物細胞のフォスファチジェルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３−キナーゼ）ｐ１１０触媒サブユニットの最後の８８アミノ酸と高い配列相同性を有する二つの椎定エクソンが検出された（Hiles，I.D．et al.，Cell 70:419-429(1992)）。Ｂ０３３４の右側に位置する領域は、ａｇｅ−１の残りの領域を含むと推定されているが、この領域についてはC.elegansゲノムプロジェクトによりコスミドまたはファージ内にクローニングされていなかった。そこで、Ｂ０３３４の右側に広がる領域のゲノムファージ及びｃＤＮＡクローンの単離を試みた。このａｇｅ−１のコーディング領域の配列を単離及び決定するために、逆転写されたＲＮＡのアンカーポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用いた（図２Ｃ）。ａｇｅ−１のスプライシングのパターンを確認するために、逆転写ＰＣＲ（ＲＴＰＣＲ）の後、予想されるスプライス接合部のゲノム配列決定を行った。ｃＤＮＡクローン及びアンカーＰＣＲの結果より予想された配列は、この予想されたコーディング配列と対応するゲノムフラグメントの配列が決定されたことにより、さらに確定的となった。三つの独立したｃＤＮＡクローンはそれぞれ互いに３０ベースペアー内に端部を有し、またこれらがコードする蛋白は哺乳動物細胞ｐ１１０と同一領域を占めるため、接合されたａｇｅ−１ｃＤＮＡが完成した可能性が高いとの結論に至った。C.elegans ａｇｅ−１ｃＤＮＡの核酸配列を図４に示す。ａｇｅ−１ＤＮＡ配列の解析により、１１８５アミノ酸残基からなるオープンリーディングフレームを有することが示された。ａｇｅ−１オープンリーディングフレームには、可能性のある翻訳開始部位であるインフレームのメチオニン残基が四つ含まれていることが示された。二番目のメチオニンがC.elegansの翻訳開始コンセンサスとより密接に適合することが示されたが、Ｋｏｚａｋ翻訳開始規則によればｍＲＮＡ中の第一番目のメチオニンが適当であった（Kozak，M.，N ucleic Acids Research 15:8125-8132(1987);Kozak，M.，PRoc．Natl．Acad．Sc i 92:2662-2666(1995);Krause，M．in Caenorhabditis elegans Modern Biologi cal Analysis of an Organism（ed．Epstein，H.F．& Shakes，D.C．）483-512 （San Diego，CA1995)）。第一番目の開始コドンから数えると、ａｇｅ−１は１１４６アミノ酸からなる蛋白をコードしていることが推定された（図３及び６）。この蛋白をコードするａｇｅ−１ゲノム領域は、四つのａｇｅ−１ＥＭＳにより誘導された対立遺伝子、ｍ３３３、ｍｇ４４、ｍｇ１０９及びｈｘ５４６を用いて配列の決定が行われた。これら四つの対立遺伝子のうち、三つのａｇｅ−１対立遺伝子（以下に述べる）から単離されたＤＮＡのコード領域内に於いて、ＧからＡへの点変異が生じていることが示された（これらはＥＭＳの変異導入から予想された変異である）。ａｇｅ−１（ｈｘ５４６）コード領域または３’ＵＴＲ内には変異は検出されなかった。この変異体は、母系のａｇｅ−１活性に特異的に影響があったことから、未だ配列が決定されていない隣接する転写調節領域内に変異が存在する可能性が考えられた。このことから、四つのａｇｅ−１変異体、ｍｇ５５、ｍｇ３３３、ｍｇ４４及びｍｇ１０９は、オープンリーディングフレームに影響を与える変異であるが、ａｇｅ−１遺伝子活性は保持していることが裏付けられている。ＡＧＥ−１蛋白は哺乳動物のフォスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３−キナーゼ）ｐ１１０触媒サブユニットのファミリーと密接に関与する（ Hiles，I.D．et al.，Cell 70:419-429(1992);Kapeller R．& Cantley，L.C.，B ioessays 16:565-576(1994)）。ＰＩ３−キナーゼは膜結合型シグナル分子、フォスファチジルイノシトールＰ₃（ＰＩＰ₃）を産生する（Riddle，D.L．in Th e Dauer Larva in The Nematode Caenorhabditis elegans．(ed.Wood,W.B.)393- 412（Cold Spring Harbor，NY，1988);Williams，C.M.，Biol．Bull．103:120-1 38(1952);Riddle，D.L．et al.，Nature 290:668-671（1981））。このＰＩＰ₃ は上流の受容体から未知のエフェクター分子へのシグナルの伝達を行うと考えられている（Kapeller R．& Cantley，L.C.，Bioessays 16:565-576(1994)）。現在、三つの既知のＰＩ３−キナーゼタイプが存在する。α及びβ ｐ１１０タイプは、調節ｐ８５またはｐ５５サブユニットにより活性化された受容体キナーゼを標的とする（Kapeller R．& Cantley，L.C.，Bioessays 16:565-57 6(1994)）。これら調節サブユニットは、こうした受容体及び他の蛋白上で燐酸化されたチロシンを認識するＳＨ２ドメインを有している（Kapeller R．& Cant ley，L.C.，Bioessays 16:565-576(1994);Liscovitch,M．& Cantley，L.C.，Cel l 81:659-662(1995);Carpenter，C.L．et al.，Molecular and Cellular Biolog y 13:1657-65(1993);Dhand，R．et al.，EMBO Journal 13:511-21（1994）;Pons ，S．et al.，Molecular and Cellular Biology 15:4453-65(1995)）。このｐ１１０αはまたはｐ１１０βタイプは、Ｎ−末端１３０アミノ酸残基を介してｐ８５と結合する（Kapeller R．& Cantley，L.C.，Bioessays 16:565-576(1994);Li scovitch，M.& Cantley，L.C.，Cell 81:659-662(1995);Carpenter，C.L.，et a l.，Molecular and Cellular Biology 13:1657-65(1993)）。ｐ１１０αはｐ８５サブユニットと同様に脂質を燐酸化することができる（Carpenter，C.L．et a l.，Holecular and Cellular Biology 13:1657-65(1993);Dhand，R．et al.，EM BO Journal 13:511-21(1994)）。ＰＩ３−キナーゼは、蛋白キナーゼカスケードを介してシグナルを伝達する可能性がある。ｐ１１０サブユニットの第三のタイプはｐ１１０γであり、これはヘテロ三量体Ｇ−蛋白と結合しそして間接的に曲がりくねった種々の受容体と結合すると予想されている（Stoyanov，B．et al .，Science 269:690-3(1995)）。ギャップ・ブラスト解析（ウィスコンシンパッケージとしてのプログラムマニュアル、Version 8，September 1994，Genetics Computer Group，575 Science Drive，Madison，Wisconsin，USA 53711）において、ＡＧＥ−１は、マウスｐ１１０αと２９．６％の相同性を、ヒトｐ１１０βと２９．８％の相同性を、そしてヒトｐ１１０γと２８．０％の相同性があることを示した。ＡＧＥ−１の大きなセグメントは、ｐ１１０ＰＩ−３キナーゼ蛋白とキナーゼ及び脂質キナーゼに於ける上流の保存された領域に対して４２％の配列相同性が示された（図３及び５）。ＡＧＥ−１と、ｐ８５が相互作用するｐ１１０α及びβに起因したｐ１１０蛋白とのＮ−末端の１３０アミノ酸における比較では、（Dhand，R．et al. ，EMBO Journal 13:511-21(1994)）、この領域に関してはＡＧＥ−１は、ｐ１１０β（１７．１％の相同性）またはｐ１１０γ（９．８％の相同性）よりもｐ１１０α（２２．０％の相同性）とより関連があることが示された。ＡＧＥ−１とｐ１１０αとの間の保存された領域に於けるアミノ酸残基の多くは、ｐ１１０α とｐ１１０βとの間でも同様に保存されていた。これらの領域では、４５％のアミノ酸配列の相同性が示された（図３）。ＡＧＥ−１とこれらｐ１１０キナーゼとがランダムに並ぶ（アライメントする）可能性は非常に低い。例えば、ｐ１１０αに対しては１０^-113であり、ｐ１１０βに対しては１０^-101及びｐ１１０γ に対しては１０^-93と予想される（これらは例えば、ＰＩ４−キナーゼとの１０^-22のランダムに並ぶ可能性やＤＮＡ修復キナーゼとの１０^-8のランダムに並ぶ可能性と比較した場合の値である）。ＡＧＥ−１に於ける保存された領域は、この蛋白が、Ｇ_βγ様のアダプター蛋白と結合するよりもｐ８５様のチロシンキナーゼアダプターと結合することを示している。しかしながら、蛋白の全長として比較すれば、マウスｐ１１０αは、ＡＧＥ−１よりも哺乳動物のｐ１１０他のクラスとより類似している（マウスｐ１１０αは、ヒトのｐ１１０βと４２．０％の相同性があり、ヒトのｐ１１０γに対して３４．５％の相同性があり、一方、ＡＧＥ−１に対しては３０．１％の相同性がある）。このことは、ＡＧＥ−１がＰＩ３−キナーゼクラスから分岐（進化）したであろうことを示している。ａｇｅ−１の母系効果が永続的構成的に保持された変異は、ヌル（機能的産物を生産しない）対立遺伝子であることが予想される。ａｇｅ−１（ｍｇ４４）は、ＡＧＥ−１の上流のキナーゼ領域及び保存された領域のほとんどが切断され短くされたＴｒｐ４０５アンバー変異である（図３）。この変異株は、ａｇｅ−１ヌル表現型を明らかにするための良い材料となる。ａｇｅ−１（ｍ３３３）変異は、ＡＧＥ−１蛋白の上流の保存された領域のほとんどが切除され短くされているＴｒｐ６５９オパール（終止）であり、そして、この変異はヌル対立遺伝子である可能性が高い。ａｇｅ−１（ｍｇ５５）では、ＡＧＥ−１蛋白からＣ−末端部位のキナーゼ領域及びａｇｅ−１３’ＵＴＲが除かれてブレークポイント（切断点）が形成されている（図２Ａ）。Ａｇｅ−１（ｍｇ１０９）は、ＡＧＥ− １及び哺乳動物のＰＩ３−キナーゼに於いて保存されている蛋白領域内の８４５位のアラニンがスレオニンに置換されている（図３）。ＡＧＥ−１及び哺乳動物ｐ１１０αの双方では、この位置がアラニンであり、一方、ｐ１１０β及びγ では、この位置がリジンである（図３）。高度に保存され、また厳格なａｇｅ−１（ｍｇ１０９）表現型より、この領域がＡＧＥ−１に於ける重要な機能を担っていることを示唆する。これらａｇｅ−１対立遺伝子の全ては、この中にはＡＧＥ−１蛋白が短くされたものが含まれているが、これらは永続的構成的な表現型を示し、この表現型は、野生型の母系遺伝子活性を示す。さらに、ヌル対立遺伝子であることが予想されるａｇｅ−１（ｍ３３３）対立遺伝子は、接合系のａｇｅ−１遺伝子活性ではなく母系の活性が与えられて劇的に寿命を増大させることが示されている（Lars en，P.L．et al.，Genetics 139:1567-1583(1995)）。これらのデータは、発育停止及び老化を調節する特定のシグナル伝達経路に於いて、ＡＧＥ−１ＰＩ３ −キナーゼのホモログが機能し、より一般的なＡＧＥ−１の要求と両立しないことを示す。さらに、このデータは、母系のＡＧＥ−１が起因したフォスファチジルイノシトールシグナル伝達が、老化を抑制するのではなく永続的な発育工程を停止させるために、接合系のＡＧＥ−１シグナル伝達の欠損を救済するために十分であることを示す。ａｇｅ−１（ｈｘ５４６）に於いて、母系のＡＧＥ−１フォスファチジルイノシトールシグナル伝達系を削除した場合にも寿命を延長させることができることが示されているため、これらデータは、正常の老化は、母系及び接合系ＡＧＥ−１の両方に由来するフォスファチジルイノシトールのシグナル伝達系に依存していることを示している。哺乳動物のＰＩ３−キナーゼとＡＧＥ−１との高い配列類似性は、ＰＩＰ₃ シグナル伝達が永続的な発育や老化を制御するために働くという種々の役割を示している。哺乳動物に於いては、ＰＩ３−キナーゼシグナル伝達が、神経発生と同様にホルモンシグナルに関与していることがわかっている。Ｔｒｋキナーゼ受容体を介する神経成長因子シグナル伝達やＰＣ１２細胞に於ける神経突起の過剰成長が、ＰＩ３−キナーゼ阻害剤ウオートマンニン(wortmannin)によって阻害される（Kimura，K．et al.，J．Biol．Chem 269:18961-7(1994);Yao，R．& C ooper，G.M.，Science 267:2003-6(1995)）。ＰＩ３−キナーゼは、肥満細胞からのヒスタミン分泌にも関与し（Yano,H．et al.,J.Biol.Chem．268:25846-25 856）、また、インシュリンホルモンの代謝調節の下流のシグナル誘導にも関与している（Levy-Toledano，R．et al.，J．Biol．Chem 269:31178-31182(19 94)）。神経内分泌経路に於いて要求されるであろう多くの過程は、例えば、神経発生及び分化そして標的組織、分泌イベント及び標的組織へのシグナル誘導等があり、こうした工程に於いて、ＰＩ３−キナーゼが作用する工程以前に複数の工程がある。ＡＧＥ−１が起因するＰＩＰ₃シグナル伝達は神経分泌経路の発達に於いて、またはフェロモンシグナルの経路に於ける誘導に於いて機能することが予想された。遺伝的なエピスタシス解析は、永続的なフェロモンシグナルの感覚的プロセッシングに、例えば分泌ニューロンまたは標的組織の発達または機能に関与するｄａｆ遺伝子の下流でａｇｅ−１が機能することを示唆している（Gottlieb，S ．& Ruvkun，G．Genetics 137:107-120(1994)）。ａｇｅ−１ヌル変異体が、永続的な停止を指標とし、母系由来として回収されるという現象は、ａｇｅ−１の初期の役割と一致する。永続的なフェロモンは、通常Ｌ１段階に於いて検出される（Riddle，D.L．in The dauer Larva in The Nematode Caenorhabditise lega ns．(ed．Wood，W.B.)393-412（Cold Spring Harbor，NY，1988)）。このことは、フェロモンシグナル誘導に於けるＡＧＥ−１機能が母系より供給されると仮定すれば、ａｇｅ−１ｍＲＮＡ、蛋白またはフォスファチジルイノシトールシグナル自身が、生殖系列からこのステージまで持続しなければならないことを示している。ａｇｅ−１がこの経路の発達に関与しているならば、胚発生の間、すなわち、永続的な神経内分泌経路に於いて、機能するであろう神経及び標的組織が作られるまでの間に、機能をすることが予想される。ａｇｅ−１変異体の長命の表現型は老化に於けるフォスファチジルイノシトールシグナル伝達の直接的な機能を示唆する。ａｇｅ−１遺伝子活性の破壊が、永続的な発育の不全により生存期間の延長をもたらすが、これら変異株の長命は永続的な発育の結果として単純に生じるものではないことを示唆している。より可能性があるとするならば、ＰＩ３−キナーゼ活性の低減が、発育の停止というよりも老化の進行率を低下させることを含めた永続的なプログラムのサブセットを誘導することである。好気的な代謝により生じるフリーラジカル副産物は、生体必須分子、例えばＤＮＡ、蛋白及び脂質を含む種々の分子にダメージを直接与えて老化を促進していることが示唆されている（Finch，C.E.，Longevity，Sene scence，and the Genome（Chicago，IL 1990)）。仮に、ＡＧＥ−１を介するフォスファチジルイノシトールシグナル伝達が、フリーラジカルのレベルを正常に調節しているとすると、変異体に於けるａｇｅ−１遺伝子活性に於ける低下やまたは未成熟のままでの状態の永続性は、寿命を延長させることになるであろう。実際に、ａｇｅ−１変異体及び未成熟の状態で停止しているものは、カタラーゼ及びスーパーオキシドジスムターゼのレベルが上昇しており、また薬剤や何らかの処置により誘導されたフリーラジカルに対する耐性が上昇していることが示されている（Larsen，P.，Proc．Natl．Acad．Sci．90:8905-8909(1993);VanFlete ren，J.R.，Biochem．J．292:605-608(1993)）。興味深いことに、ウォートマンニン感受性ＰＩ−３キナーゼは、哺乳動物の好中球によって死滅させられたバクテリア内に於けるスーパーオキシドラジカルの産生に必須である（Okada，T．et al.，J．Biol．Chem 269:3563-3567(1994);Thelen，M．et al.，Proc．Natl．A cad．Sci 91:4960-4(1994)）。ＰＩ−３キナーゼとしてのａｇｅ−１の同定は、永続的な遺伝的経路に於ける他の遺伝子が、ＰＩＰ₃シグナル伝達のインヴィヴォに於ける下流の標的分子を同定するのに役立つことを示している。ｄａｆ−２はａｇｅ−１と同様に永続的な及び老化のエピスタシス経路に於いて機能している（Vowels，J.J．& Thomas ，J.H.，Genetics 130:105-123(1992);Gottlieb，S．& Ruvkun，G.，Genetics 1 37:107-120(1994);Kenyon，C．et al.，Nature 366:461-464(1993);Larsen，P.L ．et al.，Genetics 139:1567-1583(1995);Dorman，J.B．et al.，Genetics 141 :1399(1995)）。ＤＡＦ−２は、ＰＩＰ₃シグナル伝達の下流を陽性に制御するターゲット、例えばｐ８５またはｐ５５等のＰＩ３−キナーゼ制御サブユニット、または上流の受容体である可能性が高い。ＰＩＰ₃シグナル伝達の陽性に制御する下流のターゲットの候補となる物質は、生化学的に検出されている（Liscov itch & L.C．Cantley，L.，Cell 77:324-34(1994);Tpler．A．et al.，The Jour nal of Biological Chemistry 269:32358-67(1994);Akimoto，K．et al.，The E MBO Journal 15:788-798(1996);Jones，P.F．et al.，Proc．Natl．Acad．Sci． 80:4171-5(1991);Franke，T.F．et al.，Cell 81:727-736(1995) ;Burgering，B.M.T．& Coffer，P.J.，Nature 376:599-602(1995)）。このような候補となる物質のインヴィヴォの機能は、ｄａｆ遺伝子の類似の性質の検出によって確認されるであろう。ＰＩＰ₃シグナル伝達の陰性に制御するターゲットは生化学的には検出されていない。遺伝的なデータは、ｄａｆ−１６がＰＩＰ₃ シグナル伝達の陰性に制御するターゲットである可能性があることを示している。ここで述べたａｇｅ−１変異体に於ける、寿命の延長及び永続的な発生段階の停止は、ＰＩＰ₃シグナル伝達の欠損の結果として生じるものであるが、このような現象は、ｄａｆ−１６に於ける変異によって抑制される（Vowels，J.J．& T homas，J.H.，Genetics 130:105-123(1992);Gottlieb．S．& Fuvkun，G.，Genet ics 137:107-120(1994);Kenyon，C．et al.，Nature 366:461-464(1993);Larsen ，P.L．et al.，Genetics 139:1567-1583(1995);Dorman，J.B．et al.，Genetic s 141:1399(1995)）。これらの観察結果は、正常の老化の進行を停止させないような条件に於いてＡＧＥ−１の小さな膜に結合したＰＩＰ₃の産物が、ＤＡＦ− １６活性を抑制的に制御して、C.elegansの生存期間を調節していることが考えられる。哺乳動物ＡＧＥ−１ポリペプチドのクローニング新規なＡＧＥ−１遺伝子及びｃＤＮＡの単離に続いて、さらにヒトを含む哺乳動物ＡＧＥ−１核酸配列の単離は、ここで以下に述べる配列及び標準的な技術を用いて行うことができる。特に、ＡＧＥ−１配列の全長及び一部を用いてＡＧＥ −１オリゴヌクレオチドプローブを設計することは容易である。また、ここでこのオリゴヌクレオチドプローブの中には変性させたオリゴヌクレオチドプローブも含まれる（例えば、与えられたアミノ酸配列をコードする可能性のある全ての核酸配列の混合物などである）。これらオリゴヌクレオチドはＤＮＡのいずれのストランドの配列に基づいて作成してもよい。単離された哺乳動物ＡＧＥ−１配列に対する模範的なプローブまたはプライマーは、好ましくはアミノ酸配列として保存された領域に関与するものであるが、具体的には、配列番号１３のアミノ酸配列８５２−８６４（ＩＦＫＮＧＤＤＬＲＱＤＭＬ）または図６（配列番号１）の配列番号１４のアミノ酸配列１１１１−１１１６（ＨＩＤＦＧＨ）である。こうしたプローブを設計及び調整する一般的な方法は、例えば以下の文献に記載されている。in Ausubel et al.，Current Protocols in Molecular Biology，199 6 Wlley & Sons，New York，NY;and Guide to Molecular Cloning Techniques， 1987，S.L．Berger and A.R．Kimmel，eds.，Academic Press，New York.。これらのオリゴヌクレオチドは、ＡＧＥ−１配列相補とハイブリッド形成させるためのプローブとしてまたはポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）クローニング法のプライマーとして用いることにより、ＡＧＥ−１遺伝子単離に役立てることができる。ここでＰＣＲ法が用いられる場合には、プライマーは適切なベタター内に増幅産物をクローニングさせることが可能となるように任意に設計することができる。ハイブダイゼーション技術及びこの方法は当業者に於いて周知であり、例えば以下の文献に記載されている。AusubelらによるSupra，and Guide to Molecular Cloning Techniques，supraである。また、所望であれば異なるオリゴヌクレオチドプローブの混合物を、組換えＤＮＡライブラリーのスクリーニングに用いてもよい。これらオリゴヌクレオチドは例えば当業者に於いて知られた方法によって³²Ｐを用いて標識される。そして、ここで検出可能に標識されたオリゴヌクレオチドは組み替えＤＮＡライブラリー由来のフィルターレプリカを探査をするために用いることができる。組み替えＤＮＡライブラリー（例えばヒトｃＤＮＡライブラリー）は当業者に於いて周知の方法に従って調整することができ、例えば上記に記載したAusubelらの文献に記載されている。またはこのライブラリーは市場から得ることもできる。近似したＡＧＥ−１配列の検出または単離を行うためには、高いストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件が用いられる。このような条件は約４２℃及び約５０％ホルムアルデヒド存在下でハイブリッド形成をさせ、第一の洗浄操作を約６５℃において、およそ２×ＳＳＣ及び１％ＳＤＳのバッファーを用いて行う、続いて、第二の洗浄操作では６５℃下で約０．１％ＳＤＳ、１×ＳＳＣバッファーを用いて行う。ここで述べるＡＧＥ−１遺伝子と低い配列相同性を有するＡＧＥ−１遺伝子の検出のための条件は低いストリンジェンシーで行う。例えば、ハイブリダイゼーションの条件はホルムアルデヒド非存在下に於いて４２℃で行い、第一の洗浄操作では６×ＳＳＣ及び約１％のＳＤＳのバッファーを用いて４２℃で行う。そして、第二の洗浄操作に於いては約６×ＳＳＣ及び約１％ＳＤＳバッファーを用いて５０℃の温度条件下で行う。上述したように、ＡＧＥ−１オリゴヌクレオチドはＰＣＲクローニング法に於いてプライマーとして用いることもできる。このようなＰＣＲ法は当業者に於いて周知であり、例えば次の文献に記載されている。in PCR Technology，H.A．Er lich,ed.，Stockton Press，London，1989;PCR Protocols:Aguide to Methods a nd Applications，M.A．Innis，D.H．Gelfand，J.J．Sninsky，and T.J．White ，eds.，Academic Press，Inc.，New York 1990;and Ausubel et al.，supra．ＡＧＥ−１配列における保存された領域（例えば上述したような領域）に対応した配列は、哺乳動物ＡＧＥ−１配列を単離する際に好適に用いることができる。ＡＧＥ−１ポプリペプチドの発現一般に本発明に従ったＡＧＥ−１ポリペプチドはＡＧＥ−１をコードしたｃＤＮＡフラグメントの全長または一部（例えば上述したｃＤＮＡの一つ）を適切な発現担体に挿入したものを適切な宿主細胞に形質転換することによって産生させることができる。分子生物学の分野における専門家に於いては組み替え蛋白を獲得するのに用いることができる発現システムのいずれも用いても良いと言うことは理解されるであろう。ここで用いることができる宿主細胞は、特に限定はなく本発明に於いては重要な要素とはならない。ＡＧＥ−１ポリペプチドは原核細胞宿主（例えば大腸菌）または真核細胞宿主（例えばサッカロマイセスセルビジエ、昆虫細胞、例えばＳｆ９またはＳｆ２１細胞、または哺乳動物細胞、例えばＣＯＳ１、ＮＩＨ３Ｔ３、またはＨｅＬａ細胞）に於いて産生させても良い。このような細胞は広範囲に於いて入手可能である（例えば、the American Type Culture Collec tion，Rockland，MD;上述したAusubel et al.,を参照されたい）。形質転換、形質導入の方法及び使用する発現単体の選択は選択した宿主のシステムに依存して決定することができる。形質転換、形質導入の方法は、上述したＡｕｓｕｂｅ１らの文献等に記載されている。また発現単体は広く提供されているもの、例えば、Cloning Vectors:A Laboratory Manual（P.H．Pouwels，et al.，1985，Su pp．1987）に記載されたものから選択することができる。一つの好適な発現システムはバキュロウィルスシステム（例えば、Ｓｆ９細胞及びＡｕｓｕｂｅｌらの方法を用いたシステム）である。もう一つのバキュロウィルスシステムはベクターｐＢａｃＰＡＫ９を用いて構成されており、これはＣｌｏｎｔｅｃｈ社（パロアルト、カリフォルニア州）から入手可能である。別の方法としては、ＡＧＥ−１ポリペプチドは哺乳動物システムに於いて、例えば安定的に形質導入された哺乳動物細胞ラインによるシステムに於いて取得することができる。哺乳動物細胞の安定的な形質導入に適した数種のベクターは、公共に於いて、例えば上述したＰｏｕｗｅｌｓらの文献等により人手可能である。またこうした細胞ラインの構築を行うための方法は公開された文献、例えばＡｕｓｕｂｅｌら（上述）等から得ることが可能である。一例としては、ＡＧＥ− １蛋白質をコードしたｃＤＮＡは、ジヒドロ葉酸リダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺伝子を担持した発現ベクターにクローニングされている。プラスミドのインテグレーションが生じ、その結果、ＡＧＥ−１蛋白をコードした遺伝子が宿主細胞の染色体内に導入された細胞は、この細胞培養液中に０．０１−３００マイクロＭのメトトレキサートを添加することにより選択することができる（上述したＡｕｓｕｂｅｌらに記載されている）。こうした優性選択はほとんどの細胞型に於いて実行をすることができる。組み替え蛋白の発現は、ＤＨＦＲに起因した導入遺伝子の増幅により上昇をさせることができる。遺伝子の増幅を伴った細胞ラインを選択する方法は、上述したＡｕｓｕｂｅｌらの文献に記載されている。こうした方法は一般には、メトトレキサートの濃度を徐々に上昇させた培養液中で細胞を培養することが含まれる。この目的に一般に用いられるＤＨＦＲを含む発現ベクターは、ｐＣＶＳＥＩＩ−ＤＨＦＲ及びｐＡｄＤ２６ＳＶ（Ａ）が含まれる（上述したＡｕｓｕｂｅｌらの文献に記載されている）。上述した宿主細胞のいずれかまたは好ましくはＤＨＦＲ欠損ＣＨＯ細胞ライン（例えば、CHO DHFR cells， ATCC Accession No．CRL 9096）宿主細胞下に於いて安定的な形質導入細胞ラインのＤＨＦＲ選択に好適であり、またはＤＨＦＲ基に起因した遺伝子増幅に好適である。他の別のアプローチに於いては、ＡＧＥ−１ポリペプチドはＴ７システムを用いてインヴィヴォまたは好ましくはインヴィトロに於いて生成される（例えば、上述したAusbelら、他の標準的な技法を参照されたい）。組み替えＡＧＥ−１蛋白を発現させた後は、この蛋白は例えば、アフィニティクロマトグラフィーを用いて単離される。一例として、抗ＡＧＥ−１蛋白抗体（例えば、後述したように生成されたもの）をカラムに吸着させこれを用いて、ＡＧＥ−１蛋白を単離することができる。この場合にはアフィニティクロマトグラフィーを行う前に、ＡＧＥ−１蛋白を保持する細胞の溶解及び分画が標準的な方法によって実施される（上述したＡｕｓｕｂｅlらの文献を参照）。単離された後、組み替え蛋白は必要に応じて、例えば高性能液体クロマトグラフィー（例えば、Fisher,Laboratory Techniques In Biochemistry And Molecul ar Biology，eds.，Work and Burdon，Elsevier，1980を参照）を用いてさらに精製することができる。本発明のポリペプチド、特に短いＡＧＥ−１ポリペプチドフラグメントは、化学合成によって生成してもよい（例えば、Solid Phase Peptide Synthesis，2nd ed.，1984 The pierce Chemical Co.，Rockford，ILに記載された方法により産生することができる）。ポリペプチドの発現及び精製のこれら一般的な技術はＡＧＥ−１フラグメントまたはその類似体（以下に述べる）の生成及び単離に用いても良い。抗ＡＧＥ−１抗体上述したＡＧＥ−１ポリペプチドを用いて抗ＡＧＥ−１抗体は、次の通り生成される。アミノ酸１０８９−１１６４をコードするＡＧＥ−１ｃＤＮＡフラグメントはＧＳＴと融合される。そして、この融合蛋白は標準的な方法を用い大腸菌内で生成される。この融合蛋白質は、標準的な方法によってグルタチオンカラム上で精製され、ウサギを免疫するために用いられる。得られた抗血清は、Ｆｉｎｎｅｙ及びＲｕｖｋｕｎの方法（Cell 63:895-905，1990）によってＧＳＴ−ＡＧＥ−１アフィニティカラム上で精製される。この抗血清は、ウエスタンブロット法によって、特異的にＧＳＴ−ＡＧＥ−１を認識することが示された。他のＡＧＥ−１特異的な抗体はこの技術または別の技術によって精製しても良い。例えば、ここに記載するＡＧＥ−１ポリペプチド（または免疫原性フラグメントまたは類似体）は、他のポロクローナル抗血清またはモノクローナル抗体を作るために用いても良い。ここで一つの特徴的な免疫原性フラグメントは、ＡＧＥ−１アミノ酸の５５０−９６５のフラグメントとして示されている。抗体を産生させるためのポリペプチドは、組み替え技術またはペプチド合成技術によって生成しても良い（例えば、Solid Phase Peptide Synthesis，supra;Ausubel et al.，supraを参照）。ポリクローナル用のペプチドは、必要であればキャリア蛋白質と結合させても良い。このようなキャリア蛋白質は、例えばＡｕｓｕｂｅｌらの文献に記載されたＫＬＨ等である。ＫＬＨ−ペプチドはフロイントアジュバンと混合され、そしてこの混合物をモルモット、ラットまたは好ましくはウサギに注入される。抗体は、ペプチド抗体アフィニティクロマトグラフィーのいずれの方法によって精製しても良い。一方、モノクローナル抗体は、ＡＧＥ−１ポリペプチドを（または免疫原性フラグメントまたは類似体）及び標準的なハイブリドーマ技術を用いて調整することができる（例えば、Kohler et al.，Nature 256:495，1975;Kohler et al.，E ur．J．Immunol．6:511,1976;Kohler et al.，Eur．J.Immunol.6:292，1976;Ham merling et al.，In Monoclonal ANtibodies and T Cell Hybridomas，Elsevier ，NY，1981;Ausubel et al.，supraを参照のこと）。取得したポリクローナルまたはモノクローナル抗体は、ウエスタンブロット法または免疫沈降解析（上述したＡｕｓｕｂｅｌらの文献に記載された方法によって）によりＡＧＥ−１に対する特異的な認識が試験される。ＡＧＥ−１を特異的に認識する抗体は、本発明に有用になると考えられる。こうした抗体は、例えば、哺乳動物に於いて、作り出されるＡＧＥ−１の濃度を測定またはモニターするために、またはＡＧＥ−１の産生を調節する物質をスクリーニングするために免疫解析法として用いても良い。抗ＡＧＥ−１抗体は、ＡＧＥ−１遺伝子を発現する細胞を同定するために用いても良い。ＡＧＥ−１ナンセンス対立遺伝子、例えばｍ３３３及びｍｇ４４（上述）から由来するサンプルは、抗血清の特異性を調べる際に陰性のコントロールとして用いることができる。ＡＧＥ−１発現または活性を調節する分子の同定及び適応ＡＧＥ−１ｃＤＮＡの単離及び老化過程に於けるその関与を知るために、ＡＧＥ−１発現または活性を減少させる分子（たとえば、ＡＧＥ−１アンタゴニスト）を同定することは有用である。一つのアプローチとしては、ＡＧＥ−１発現細胞の培養液中にアンタゴニスト分子を添加し、その際のＡＧＥ−１発現を測定することにより行うことができる。別の方法としては、アンタゴニスト候補物質を、直接動物（例えば線虫またはマウス）に注入しアンタゴニストをスクリーニングにより選択しても良い。ＡＧＥ−１発現は、例えば、ＡＧＥ−１核酸（またはそのフラグメント）をハイブリダイゼーションプローブとして用い、標準的なノザーンブロット解析（Ａｕｓｕｂｅｌら、上述）により測定される。候補物質の存在下に於けるＡＧＥ− １発現のレベルが、候補物質を添加しない同一の培養液または培養液中に培養された同一の細胞または試験動物に於いて測定された陰性のコントロールレベルと比較される。抗老化目的のための好適な調節因子であれば、ＡＧＥ−１発現の減少を引き起こすことができる。上記発現に於ける候補となる調節因子の効果は、ＡＧＥ−１特異的抗体（例えば、本書に於いて上述したＡＧＥ−１抗体）を用いてウエスタンブロット法の様な標準的な免疫学的検出技術または免疫沈降法と組み合わせて一般的なアプローチを用いて、ＡＧＥ−１蛋白産生のレベルを測定しても良い。また、有用な抗老化調節因子は、ＡＧＥ−１ポリペプチド産生を低下させるものとして同定される。候補となる調節因子は、精製された（または実質的に精製された）分子でも良く、または、混合物中に一成分として含まれたもの（例えば細胞から得られた抽出液またはその上清等の一成分）でも良い。混合物質を用いた解析に於いては、ＡＧＥ−１発現は、候補となる物質を含む集合体のサブセットを徐々に少なくしたもの（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌらの上述した文献に記載されている様な、標準的な精製技術、例えばＨＰＬＣまたはＦＰＬＣによって精製されたもの）を用い、単一物質または最小限の物質混合物としてＡＧＥ−１発現を調節することが示されるまでテストが行われる。別の方法として又は追加的に、候補となる物質は、天然のまたは組み替えＡＧＥ−１活性を拮抗する物質としてスクリーニングしてもよい。好ましいアプローチに於いては、候補となる物質の存在下に於いてまたは候補となる物質によって処理を行った後のキナーゼ活性（例えば、ＰＩ３−キナーゼ活性）は、同等の条件の下で候補物質不存在下に於けるその活性と比較される。さらに、こうしたスクリーニングは候補となる物質の集合体を用いて行ってもよく、この場合には、その集合体から一以上の有用な調節物質が段階的に単離される。キナーゼ活性は、いかなる標準的な解析法によって測定してもよい。例えば、ＴＬＣプレート上のＰＩＰ基質への³²Ｐ−ＡＴＰを転移させる酵素の活性をモニターすることによって測定してもよい（上述したように、例えば、whitman et a l.，Nature 322:644-646，1988 この文献に方法が開示されている）。または、キムラらの方法によって測定してもよい（J.Biol．Chem．269:18996-18967，199 4）。また、必要であれば活性を測定する前に、サンプルから酵素を単離してもよい。例えば、この単離は、ＡＧＥ−１特異的抗体との免疫沈降法によって行うことができる。本願に於いて記載するＡＧＥ−１変異体（例えば、ｍｇ４４、ｍ３３３、及びｍｇ１０９）は、これらインヴィトロ解析に於ける活性が減少することがわかっており、そのため、これらはコントロールサンプルとして用いてもよい。候補となるＡＧＥ−１アンタゴニストにはペプチドと同様に非ペプチド分子も含まれる場合がある（例えば、細胞の抽出液、哺乳動物細胞の血清、または哺乳動物細胞を培養した後の生育培地中で発見されたペプチドまたは非ペプチド型分子）。最も適当なＡＧＥ−１基質はＰＩＰ₂とその生成物ＰＩＰ₃であるため、ＰＩＰ₂とＰＩＰ₃との間の転移状態を模倣した薬物（ここでは転移アナログと言う）は、ＡＧＥ−１に起因したＰＩＰ₃の合成を抑制的に制御し、それによって寿命を増大させる物質としてよい候補である。ＡＧＥ−１基質とその生成物との双方は、膜に結合した物質群であるため、ＡＧＥ−１の作用を阻害する薬物は疎水性であることがよく、膜の透過性に関係する一般的な問題を低減するかまたは削除する可能性がある。細胞に於けるＡＧＥ−１発現また活性のレベルに影響を与えるものとして発見されたアンタゴニストは、動物モデル（例えば、線虫またはマウス）を用いて確認してもよい。ＡＧＥ−１発現またはＡＧＥ−１活性を低下させる分子は、本発明に特に有用になると考えられる。このような分子は、例えば、天然の細胞のＡＧＥ−１のレベルまたは活性を低下させ、それによって宿主動物の寿命を増加させるような治療目的に用いてもよい。治療用のＡＧＥ−１アンタゴニストは、薬学的に許容された希釈剤、単体または賦形剤を添加して適当な投与量単位として投与される。通常の薬学的な実施に於いては、患者にＡＧＥ−１を投与するための適切な処方または組成として提供することにより用いられる。投与に於いては血管内の投与することが好ましいが、他のいかなる投与の適切な方法を用いてもよく、例えば、非経口、皮下、筋内、頭蓋内、眼窩内、眼内、心室内、嚢内、脊椎内、槽内、腹腔内、鼻腔内、エアゾール、経口内を介して、前記薬剤を投与してもよい。治療用の処方は液状、または懸濁液の形状としてもよく、また経口投与に用いるためには、処方としては錠剤またはカプセル剤の形状としてもよい。さらに、鼻腔内投与としては、粉末、点鼻またはエアゾールの形状としてもよい。こうした方法は投与者に於いて周知であり、例えば、"Remington's Pharmaceu tical Sciences"に於いて記載されている。非経口投与のための処方は、例えば、賦形剤、滅菌水または生理食塩水を含有させてもよく、また、ポリエチレングリコールのようなポリアルキレングリコール、植物性油または水素添加ナフタレンを含有させてもよい。生物学的に互換性があり分解性の乳酸ポリマー、乳酸／グリコール酸共重合体、またはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン共重合体は、物質の放出（遊離）を調節するために用いてもよい。ＡＧＥ−１アンタゴニストを非経口的に運搬する他の重要なシステムは、エチレン−酢酸ビニル共重合体粒子、浸透圧ポンプ、移植可能な注入システム、及びリポソームが含まれる。吸入のための処方は賦形剤例えば、ラクトースを含有させてもよく、または、例えばポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル、グリココール酸及びデオキシコール酸を含む液状溶液としてもよく、または点鼻として投与するためには油性の溶液としてもよく、さらにまたはゲル状にしてもよい。必要であれば、ＡＧＥ−１アンタゴニストによる処置は他の抗老化治療と併用して行ってもよい。ＡＧＥ−１農薬ＡＧＥ−１アンタゴニストは新規な農薬、例えば、昆虫や線虫を制御するための農薬として用いてもよい。ＡＧＥ−１は休眠を調節するため、その作用を拮抗する物質は、食物に混合することにより、または生殖行為の時に併存させることにより不適切な休眠を誘導させることに用いてもよい（Tauber et al.，Seasona l Adaptation of Insects，1986，New York，NY，Oxfore University Press，P ．411）。このような農薬は非脊椎動物の休眠行為をターゲットにするものであり、そのため神経伝達に関与する現在の農薬に比べて、ヒトの健康に対する危険性をより低下させた農作物を作り出す際に有用となる。寿命の決定老化に役割を有してることから、ＡＧＥ−１ポリペプチド及び核酸配列は、生物（例えば、ヒト）の寿命を決定するために用いることができる。特に、ＡＧＥ −１を低下させることは寿命の延長に関与しているため、ＡＧＥ−１産生または活性のレベルに於ける低下は、宿主細胞が比較的ゆっくりと老化をし、また生存の期間が延長されたことを示す。ＡＧＥ−１発現のレベルまたはその活性は、いかなる標準的な技術によって解析してもよい。例えば、生物学的サンプルに於ける発現は、標準的なノザーンブロット解析によって測定してもよくまたはＰＣＲ（上記ＡｕｓｕｂｅｌらPCR Technology:Pri nciples and Applictions for DNA Amplification，ed.，H.A．Ehrlich，Stockt on Press，NYを参照）によって解析してもよい。別の方法としては免疫分析は、ＡＧＥ−１蛋白のレベルを検出またはモニターするために用いてもよい。ＡＧＥ−１特異的なポリクローナルまたはモノクローナル抗体（上述した方法によって産生されたもの）は、ＡＧＥ−１ポリペプチドのレベルを測定するためのいかなる標準的な免疫解析（例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット、またはＲＩＡ解析）に用いてもよい。この場合の比較対象は、野生型のＡＧＥ−１レベルを用いることができる。そして、ＡＧＥ−１産生の低下が検出された場合には寿命が延長したことが示される。免疫解析法の具体例は、例えば、上述したＡｕｓｕｂｅｌらに於いて記載されている。免疫組織学的な技術は、ＡＧＥ−１検出に用いてもよい。例えば、組織サンプルは個体から得たものでもよく、そして切片は、抗ＡＧＥ−１抗体及び標準的な検出システム（例えば、西洋わさびのペルオキシダーゼを融合させた二次抗体を含む）を用いて染色することによりＡＧＥ−１の存在を検出することができる。このような技術に関係する一般的なガイダンスは、例えば、Ｂａｎｃｒｏｆｔ及びＳｔｅｖｅｎｓ（Theory and Practice of Histological Techniques，Churchill Livingston e，1982）及び上述したＡｕｓｕｂｅｌらの文献に於いて見いだすことができる。ミスマッチ検出解析は、ＡＧＥ−１変異体を検出することができ、またそれによって寿命を決定してもよい。この種のアプローチは、出生前のスクリーニングに於いてＡＧＥ−１バリアントを検出するために用いてもよい。最後に、複合化した方法としては、ＡＧＥ−１蛋白産生（例えば、免疫学的な技術による）の評価と、比較的僅かしか存在しないＡＧＥ−１変異株（例えばポイントミューテーション）を同定するために設計された核酸による検出技術とが含まれる。標準的なミスマッチ検出解析は、当業者に於いて利用可能であり、その中から望ましい技術を用いることができる。このアプローチにより、ＡＧＥ− １に於ける変異は、ＡＧＥ−１発現の消失またはＡＧＥ−１生物学的活性の消失がもたらされたことによって検出される。この複合化方法の改良に於いては、ＡＧＥ−１活性は、いかなる適切なキナーゼ解析システム（例えば、Ｗｈｉｔｍａｎらの解析法、Nature322:644-646(1988);or Kimura et al.，J．Biol．Chem 26 9:18961-18967(1994)）を用いてキナーゼ活性として測定される。ＡＧＥ−１相互作用ポリペプチドＡＧＥ−１配列の単離はＡＧＥ−１蛋白と相互作用するポリペプチドの同定に役立つ。このようなポリペプチドをコードした配列は、いかなる標準的な２ハイブリッドシステム（例えば、Fields et al.，Nature340:245-246(1989);Yang et al.，Science 257:680-682(1992);Zervos et al.，Cell 72:223-232(1993)を参照）によって単離される。例えば、ＡＧＥ−１配列の全長またはその一部は、ＤＮＡ結合ドメイン（ＧＡＬ４またはＬｅｘＡＤＮＡ結合ドメイン等）と融合させてもよい。融合蛋白が、適切なＤＮＡ結合部位を保持したリポーター遺伝子（例えばｌａｃＺまたはＬＥＵ２リポーター遺伝子）の発現を活性化しないことが検出された場合には、この融合蛋白は相互作用するターケットとして用いられる。活性化領域（例えば、産生活性化領域）と融合させた候補となる相互作用蛋白は、宿主細胞内でＡＧＥ−１融合体と共に発現される。そして相互作用蛋白は、ＡＧＥ−１配列と結合する活性及びリポーター遺伝子発現を促進させる活性によって同定される。擬似的な陽性相互作用は、同等の活性化領域と融合させた無関係のテスト蛋白を用いたコントロール実験を実施することにより削除される（または。ここで必要であればこのようなテスト蛋白を多数用いて行うこともできる）。ＡＧＥ−１蛋白−蛋白相互作用が同定されると、この相互作用を破壊する物質スクリーニングを行ってもよい。こうした物質は、ＡＧＥ−１アンタゴニストの適当な候補となりうる。またこれら物質は、上述したいかなるアプローチにより検査されまたは確立される。これらの方法によって同定された物質は、上述した種々の目的のいかなるものにも用いてもよい。他の実施形態他の実施形態に於いて本発明は、図６（配列番号１）のＡＧＥ−１ポリペプチドと実質的に同一な蛋白のいかなるものも含まれる。このような相同体には、実質的に純粋な天然由来の哺乳動物細胞のＡＧＥ−１ポリペプチド（例えば、ヒトのＡＧＥ−１ポリペプチド）と同様に対立遺伝子の変異体や自然変異体、誘導された変異体が含まれる。またこの蛋白には高いストリンジェンシー条件、または、さほど好ましくはないが低いストリンジェンシー条件（例えば、少なくとも４０ヌクレオチド長のプローブを用い、４０度、２ＸＳＳＣの条件）に於いて図４（配列番号２）のＡＧＥ−１ＤＮＡ配列とハイブリッド形成をするＤＮＡによってコードされたものが含まれる。また、この蛋白質には、ＡＧＥ−１ポリペプチドとポリペプチドに対して誘導された抗血清と特異的に結合するものが含まれる。本発明には、さらに、天然に生じたＡＧＥ−１ポリペプチドのいかなる類似体も含まれる。この類似体は、アミノ酸配列を変化させることにより又は翻訳後の修飾によって、もしくは双方によって天然に生じたＡＧＥ−１蛋白と異ならせることができる。本発明に於ける類似体は、天然に生じたＡＧＥ−１アミノ酸配列と少なくとも５０％、さらに好ましくは６０％、最も好ましくは８５％または９５％の相同性を示す。この修飾は、インヴィヴォ及びインヴィトロの化学的な誘導体、例えば、アセチル化、カルボキシル化、燐酸化またはグリコシル化等が含まれる。このような修飾は、ポリペプチドの合成の際に若しくはプロセッシングの際に、または単離された後に修飾酵素と反応させることによって実施してもよい。この類似体は一次配列を変化させることにより、天然に生じたＡＧＥ−１ポリペプチドと異ならせてもよい。これらは、遺伝的な変異体を含み、天然に及び誘導された（例えば、放射線照射によってまたはエタンメチルスルホネートと作用させることにより任意の位置に変異を挿入することによって作り出したもの、または、Sambrook，Fritsch and Maniatis,Molecular Cloning:A Laboratory Ma nual（2D ed．CSH Press，1989，or Ausubel et al.，Supraに於いて記載された部位特異的変異挿入方法によって誘導されたもの）が含まれる。環状化ペプチド、環状化分子及びＬ−アミノ酸以外の残基例えばＤ−アミノ酸または非天然に生じたまたは合成アミノ酸、例えば、βまたはγアミノ酸、非天然下で生じたアミノ酸又は合成アミノ酸もまた含まれる。完全長のポリペプチドに加えてＡＧＥ−１ポリペプチドフラグメントも含まれる。本願に於いて用いる”フラグメント”という語は、少なくとも２０の連続したアミノ酸、好ましくは少なくとも３０の連続したアミノ酸、さらに好ましくは少なくとも５０の連続したアミノ酸そして最も好ましくは少なくとも６０−８０またはそれ以上の連続したアミノ酸を意味する。ＡＧＥ−１ポリペプチドのフラグメントは、当業者に於いて周知の方法によって作り出してもよく、または通常の蛋白プロセッシングから生じたものでもよい（例えば、生物学的活性に必要とされない発生時（初期）のポリペプチドからアミノ酸が除去されるか、または、代替のｍＲＮＡスプライシングまたは代替の蛋白プロセッシングによってアミノ酸が除去される）。本発明に於いて好ましいフラグメントは、これらに限定はされないが、例えば、図６（配列番号１）のアミノ酸３８７−６４１、３８７−１１４６、１−１３０、１−１５０、１−６５８、または１−４０４が含まれる。特定の目的のために、ＡＧＥ−１ポリペプチド配列の全長または一部は、他の蛋白と融合させてもよい（例えば組み替え手法による）。一例に於いては、ＡＧＥ−１はグリーン蛍光蛋白（ＧＦＰ）（Chalfie et al.，Science 263:802-805 ，1994）と融合させてもよい。このような融合蛋白は、例えば、候補となるまたは既知のＡＧＥ−１アンタゴニストで処理した後のＡＧＥ−１のインヴィヴォに於ける発現レベルをモニターするために用いることができる（例えば蛍光顕微鏡による）。本発明による方法は、いかなる哺乳動物、例えば、ヒト、家畜または牧畜に於ける寿命の決定またはＡＧＥ−１調節物質をスクリーニングするために用いられる。非ヒト哺乳動物を処置または診断する場合には、用いられるＡＧＥ−１ポリペプチド、核酸または抗体は好ましくはそれぞれの種に特異的であることが望ましい。本明細書に於いて記載した全ての文献及び特許出願は、本願に参考文献として包含される。他の実施例は以下の請求の範囲内に含まれる。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】平成１０年３月４日（１９９８．３．４）【補正内容】請求の範囲１．ＡＧＥ−１ポリペプチドまたはそのフラグメントの実質的に精製された調製品であって、ポリペプチドが図６（配列番号１）のポリペプチドと少なくとも５０％アミノ酸配列の相同性を有する調製品。２．前記ＡＧＥ−１ポリペプチドは、図６（配列番号１）のポリペプチドのうち以下のアミノ酸と、同位置におけるアミノ酸において５０％の相同性を有することを特徴とする請求の範囲１に記載の調製品。３．前記ＡＧＥ−１ポリペプチドには８２７位の等価なアミノ酸位置においてアラニンを含むことを特徴とする請求の範囲１に記載の調製品。４．ＡＧＥ−１ポリペプチドは動物から由来することを特徴とする請求の範囲１に記載の調製品。５．前記動物がC．elegansであることを特徴とする請求の範囲４に記載の調製品。６．前記動物が哺乳動物であることを特徴とする請求の範囲４に記載の調製品。７．前記哺乳動物がヒトであることを特徴とする請求の範囲６に記載の調製品。８．請求の範囲１のＡＧＥ−１ポリペプチドをコードする精製されたＤＮＡ。９．図４（配列番号２）の核酸配列と少なくとも３０％の相同性を有するＡＧＥ −１核酸配列からなる精製されたＤＮＡ。１０．ＡＧＥ−１核酸配列を含む精製されたＤＮＡであって、前記ＤＮＡ配列が図４（配列番号２）における６４から８５２のヌクレオチド、８６５から９１２のヌクレオチド、９１９から９７５のヌクレオチド、１００３から３０９０のヌクレオチド、３０９４から３５０１のヌクレオチドまたは２６２０から２６５５のヌクレオチドと実質的に同一な核酸配列から選択されることを特徴とするＤＮＡ配列。１１．請求の範囲８、９又は１０の精製されたＡＧＥ−ＩＤＮＡを含むベクター。１２．請求の範囲８、９又は１０のいずれかに記載の精製されたＡＧＥ−ＩＤＮＡを含む細胞。１３．組換えＡＧＥ−１ポリペプチドを生成する方法であって、（ａ）ＡＧＥ−１ポリペプチドを細胞内に導入し発現させるために、請求の範囲８、９又は１０のいずれかに記載のＤＮＡで形質転換した細胞を生成する工程と、（ｂ）前記形質転換細胞を前記ＤＮＡを発現させるための条件下で培養する工程と、（ｃ）組換えＡＧＥ−１ポリペプチドを単離する工程とを含む方法。１４．請求の範囲１３に記載の方法に従って生成された組換えＡＧＥ−１ポリペプチド。１５．ＡＧＥ−１ポリペプチドを特異的に認識し結合する実質的に純粋な抗体。１６．ＡＧＥ−１の発現を低下させ得るＡＧＥ−１調節因子を同定する方法であって、（ａ）請求の範囲８、９又は１０のいずれかに記載のＡＧＥ−１ＤＮＡを発現する細胞を準備する工程と、（ｂ）前記細胞に候補因子を接触させ、前記候補因子との接触によりＡＧＥ−１の発現が低下したときに調節因子と同定する工程を含むことを特徴とする方法。１７．ＡＧＥ−１活性を低下させ得るＡＧＥ−１調節因子を同定する方法であって、（ａ）ＡＧＥ−１ポリペプチドを発現する細胞を準備する工程と、（ｂ）前記細胞に候補因子を接触させ、前記候補因子との接触によりＡＧＥ−１活性が低下したときに調節因子と同定する工程を含むことを特徴とする方法。１８．請求の範囲１６又は１７のいずれかに記載の方法であって、前記ＡＧＥ− １遺伝子が図６（配列番号１）に示すアミノ酸配列と少なくとも５０％相同性を有するアミノ酸配列をコードし、又は、ＡＧＥ−１ポリペプチドが図６（配列番号１）に示すアミノ酸配列と少なくとも５０％の相同性を有するアミノ酸配列を有することを特徴とする方法。１９．前記ＡＧＥ−１遺伝子又は前記ＡＧＥ−１ポリペプチドが動物から由来することを特徴とする請求の範囲１６又は１７に記載の方法。２０．前記方法が線虫又は動物を用いて実施されることを特徴とする請求の範囲１６又は１７に記載の方法。２１．前記方法がin vitroにおけるＡＧＥ−１活性を測定することにより行なわれること特徴とする請求の範囲１６又は１７に記載の方法。２２．請求の範囲１６又は１７の方法により同定されたＡＧＥ−１調節因子。２３．請求の範囲２２の調節因子を治療に効果的な量において哺乳動物に投与することを含む哺乳動物における寿命を延長させる方法。２４．動物の寿命を決定する方法であって、動物由来の検体中のＡＧＥ−１遺伝子発現または活性を測定し、野生型検体と比べた際のＡＧＥ−１発現又は活性が低下している場合に当該動物の寿命が延長されていることを示すことを特徴とする方法。２５．動物が哺乳動物であることを特徴とする請求の範囲２４に記載の方法。２６．哺乳動物がヒトであることを特徴とする請求の範囲２４に記載の方法。２７．ＡＧＥ−１遺伝子発現が前記検体中のＡＧＥ−１ポリペプチド量を解析することより測定されることを特徴とする請求の範囲２４に記載の方法。２８．前記方法がキナーゼ活性を解析することを含むことを特徴とする請求の範囲２４に記載の方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｎ 1/21 5/10 9/12 9/12 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ａ (72)発明者チセンバームヘイジアメリカ合衆国マサチューセッツ州ベルモントチャンドラーストリート 43

Claims

【特許請求の範囲】１．ＡＧＥ−１ポリペプチドまたはそのフラグメントの実質的に精製された調製品であって、ポリペプチドが図６（配列番号１）のポリペプチドと少なくとも５０％アミノ酸配列の相同性を有する調製品。２．前記ＡＧＥ−１ポリペプチドは、図６（配列番号１）のポリペプチドのうち以下のアミノ酸と、同位置におけるアミノ酸において５０％の相同性を有することを特徴とする請求の範囲１に記載の調製品。３．前記ＡＧＥ−１ポリペプチドには８２７位の等価なアミノ酸位置においてアラニンを含むことを特徴とする請求の範囲１に記載の調製品。４．ＡＧＥ−１ポリペプチドは動物から由来することを特徴とする請求の範囲１に記載の調製品。５．前記動物がC．elegansであることを特徴とする請求の範囲４に記載の調製品。６．前記動物が哺乳動物であることを特徴とする請求の範囲４に記載の調製品。７．前記哺乳動物がヒトであることを特徴とする請求の範囲６に記載の調製品。８．請求の範囲１のＡＧＥ−１ポリペプチドをコードする精製されたＤＮＡ。９．図４（配列番号２）の核酸配列と少なくとも３０％の相同性を有するＡＧＥ −１核酸配列からなる精製されたＤＮＡ。１０．ＡＧＥ−１核酸配列を含む精製されたＤＮＡであって、前記ＤＮＡ配列が図４（配列番号２）における６４から８５２のヌクレオチド、８６５から９１２のヌクレオチド、９１９から９７５のヌクレオチド、１００３から３０９０のヌクレオチド、３０９４から３５０１のヌクレオチドまたは２６２０から２６５５のヌクレオチドと実質的に同一な核酸配列から選択されることを特徴とするＤＮＡ配列。１１．請求の範囲８、９又は１０の精製されたＡＧＥ−１ＤＮＡを含むベクター。１２．請求の範囲８、９又は１０のいずれかに記載の精製されたＡＧＥ−ＩＤＮＡを含む細胞。１３．組換えＡＧＥ−１ポリペプチドを生成する方法であって、（ａ）ＡＧＥ−１ポリペプチドを細胞内に導入し発現させるために、請求の範囲８、９又は１０のいずれかに記載のＤＮＡで形質転換した細胞を生成する工程と、（ｂ）前記形質転換細胞を前記ＤＮＡを発現させるための条件下で培養する工程と、（ｃ）組換えＡＧＥ−１ポリペプチドを単離する工程とを含む方法。１４．請求の範囲１３に記載の方法に従って生成された組換えＡＧＥ−１ポリペプチド。１５．ＡＧＥ−１ポリペプチドを特異的に認識し結合する実質的に純粋な抗体。１６．ＡＧＥ−１の発現を低下させ得るＡＧＥ−１調節因子を同定する方法であって、（ａ）請求の範囲８、９又は１０のいずれかに記載のＡＧＥ−１ＤＮＡを発現する細胞を準備する工程と、（ｂ）前記細胞に候補因子を接触させ、前記候補因子との接触によりＡＧＥ−１の発現が低下したときに調節因子と同定する工程を含むことを特徴とする方法。１７．ＡＧＥ−１活性を低下させ得るＡＧＥ−１調節因子を同定する方法であって、（ａ）ＡＧＥ−１ポリペプチドを発現する細胞を準備する工程と、（ｂ）前記細胞に候補因子を接触させ、前記候補因子との接触によりＡＧＥ−１活性が低下したときに調節因子と同定する工程を含むことを特徴とする方法。１８．請求の範囲１６又は１７のいずれかに記載の方法であって、前記ＡＧＥ− １遺伝子が図６（配列番号１）に示すアミノ酸配列と少なくとも５０％相同性を有するアミノ酸配列をコードし、又は、ＡＧＥ−１ポリペプチドが図６（配列番号１）に示すアミノ酸配列と少なくとも５０％の相同性を有するアミノ酸配列を有することを特徴とする方法。１９．前記ＡＧＥ−１遺伝子又は前記ＡＧＥ−１ポリペプチドが動物から由来することを特徴とする請求の範囲１６又は１７に記載の方法。２０．前記方法が線虫又は動物を用いて実施されることを特徴とする請求の範囲１６又は１７に記載の方法。２１．前記方法がin vitroにおけるＡＧＥ−１活性を測定することにより行なわれること特徴とする請求の範囲１６又は１７に記載の方法。２２．請求の範囲１６又は１７の方法により同定されたＡＧＥ−１調節因子。２３．請求の範囲２２の調節因子を治療に効果的な量において哺乳動物に投与することを含む哺乳動物における寿命を延長させる方法。２４．動物の寿命を決定する方法であって、動物由来の検体中のＡＧＥ−１遺伝子発現または活性を測定し、野生型検体と比べた際のＡＧＥ−１発現又は活性が低下している場合に当該動物の寿命が延長されていることを示すことを特徴とする方法。２５．動物が哺乳動物であることを特徴とする請求の範囲２４に記載の方法。２６．哺乳動物がヒトであることを特徴とする請求の範囲２４に記載の方法。２７．ＡＧＥ−１遺伝子発現が前記検体中のＡＧＥ−１ポリペプチド量を解析することより測定されることを特徴とする請求の範囲２４に記載の方法。２８．前記方法がキナーゼ活性を解析することを含むことを特徴とする請求の範囲２４に記載の方法。