JP2000516211A

JP2000516211A - 血管形成抑制化合物

Info

Publication number: JP2000516211A
Application number: JP10506372A
Authority: JP
Inventors: マシューズ，バリー・ロス; ホーラン，ジョージ
Original assignee: Biomolecular Research Institute Ltd
Current assignee: Biomolecular Research Institute Ltd
Priority date: 1996-07-17
Filing date: 1997-07-17
Publication date: 2000-12-05
Also published as: AU715761B2; ES2260796T3; PT927217E; KR20000067876A; DE69735810T2; EP0927217B1; ATE325154T1; AUPO104496A0; DK0927217T3; CA2262862C; CN1161128C; AU3330297A; EP0927217A4; CN1225654A; US6426067B1; NZ333488A; BR9710375A; KR100564714B1; EP0927217A1; CA2262862A1

Abstract

(57)【要約】患者に、(ｉ)多数の側鎖基を有する直鎖状非炭水化物ポリマーであって、その側鎖基の少なくとも一つにアニオンまたはカチオン含有部分が結合もしくは連結しているもの、および(ii)多数の末端基を持つデンドリマーであって、その末端基の少なくとも一つにアニオンまたはカチオン含有部分が結合もしくは連結しているもの、から選択される化合物の有効量を投与することからなる、ヒトまたはヒト以外の動物である患者における、予防的または治療的血管形成抑制方法。

Description

【発明の詳細な説明】血管形成抑制化合物発明の分野本発明は血管形成の抑制に有効であって、それゆえ再狭窄の予防、創傷治癒の促進および腫瘍細胞転移の抑制に、ヘパリンなどの硫酸化多糖類に代えて使用することができる化合物に関する。発明の背景血管形成の抑制や血管形成と関係する障害および症状の治療に硫酸化多糖類を使用することは既に開示されている。すなわち、国際特許出願番号PCT/GB95/005 15(WO95/24907；この内容は参考文献として本明細書の一部を構成するものとする)には、これらの障害および症状の治療におけるヘパリンとその他の硫酸化多糖類、例えばポリ硫酸ペントサンやデキストラン硫酸などの使用が論議されており、また血管平滑筋細胞増殖を抑制することによる再狭窄の予防、細胞外マトリックスに貯蔵された活性型増殖因子の放出を活性化することによる創傷治癒の促進、およびヘパラナーゼ活性を抑制することによる腫瘍細胞転移の抑制に、もう一つの硫酸化多糖類・ラミナリン硫酸(その活性はヘパリンの抗凝固活性の約30 ％に過ぎない)を使用することが開示されている。国際特許出願番号PCT/AU95/00350(WO95/34595)には、多数の末端基を持つポリアミドアミンデンドリマーやポリリシンデンドリマーなどのデンドリマーを含んでなる一群の抗ウイルス化合物であって、その末端基の少なくとも一つがそれに結合もしくは連結したアニオンまたはカチオン含有部分(特に硫酸含有部分、カルボン酸含有部分またはトリメチルアンモニウム含有部分)を持つものが開示されている。本発明は、直鎖状非炭水化物ポリマーまたは樹状ポリマーにイオン基を連結することによって形成されるポリイオン性物質の、血管形成の抑制における使用およびそれに関連する障害と症状の治療における使用を提供するものである。発明の概要本発明によれば、ヒトまたはヒト以外の動物である患者の血管形成の予防的または治療的抑制法であって、当該患者に、 (i)多数の側鎖基を持つ直鎖状非炭水化物ポリマーであって、その側鎖基の少なくとも一つにアニオンまたはカチオン含有部分が結合もしくは連結しているもの、および (ii)多数の末端基を持つデンドリマーであって、その末端基の少なくとも一つにアニオンまたはカチオン含有部分が結合もしくは連結しているものから選択される化合物の有効量を投与することからなる方法が提供される。本発明方法での使用に特に好ましい化合物は、その側鎖基にスルホン酸含有部分、カルボン酸含有部分、リン酸またはホスホン酸含有部分、ボロン酸含有部分、ノイラミン酸またはシアル酸含有部分、もしくは４位または他の位置が修飾されたノイラミン酸またはシアル酸を含有する部分が連結している直鎖状ポリマー、および、スルホン酸含有部分、カルボン酸含有部分、リン酸またはホスホン酸含有部分、ボロン酸含有部分、ノイラミン酸またはシアル酸含有部分、もしくは４位または他の位置が修飾されたノイラミン酸またはシアル酸を含有する部分がその末端基に連結しているデンドリマーである。本発明の方法で使用されるこれらの化合物を、ここではそれぞれ直鎖状ポリイオン性ポリマーまたはポリイオン性デンドリマーと呼ぶこととし、本明細書とそれに続く請求の範囲で使用するこれらの用語は、それらポリマーまたはデンドリマーそのものだけでなく、それらの医薬的または獣医学的に許容できる塩(例えばナトリウム塩、カリウム塩またはカルシウム塩などのアルカリ金属塩もしくはアルカリ土類金属塩)をも包含する。発明の詳細な説明本発明に従って使用される好ましい化合物には、(i)下記一般式Ｉの直鎖状ポリイオン性ポリマー：［式中、Ｒは直鎖状ポリマー骨格を形成する非炭水化物モノマー単位、Ｘはモノマー単位Ｒの側鎖基上の任意の連結基、Ａはアニオン含有部分を表わす］と、(ii)下記一般式IIのポリイオン性デンドリマー：［式中、Ｉはイニシエーター、Ｚは内部分岐単位、ｎはデンドリマーの世代数を表わす整数、Ａはアニオン含有部分を表わし、これは任意の連結基Ｘを介して内部分岐単位Ｚに連結されていてもよい］が含まれる。本発明によれば好ましい直鎖状ポリイオン性ポリマーは、直鎖状非炭水化物ポリマー骨格(多数のモノマー単位Ｒからなるもの)に対するアニオン部分(Ａ)の結合(連結基(Ｘ)を介した結合であってもよい)によって形成されるポリアニオン性物質である。得られたポリアニオン性直鎖状ポリマーは望ましい分子量分布のメジアン値を与えるような反復単位の重量範囲分布を持つ。分子量分布のメジアン値は1,000〜1,000,000、好ましくは10,000〜600,000である。モノマー単位Ｒは好ましくはアミノまたはアミド部分であり、アミノ酸部分がより好ましい。とりわけ好ましいモノマー単位はリシン部分である。種々の分子量範囲を持つポリ-Ｌ-リシンはシグマ・ケミカル・カンパニーから市販されている。アニオン部分Ａは、直鎖状ポリマー骨格上の反応性側鎖基に直接または種々の機能性連結基Ｘ(例えばエステル、アミド、エーテル、チオエーテル、アミン、ウレア、チオウレア、カーバメートおよび炭酸エステルなどが挙げられるが、これらに限るわけではない)を介して連結することができる。任意の連結基Ｘはポリマーとアニオン部分Ａの間のスペーサーとして機能することもでき、これはアルキル鎖(置換基または分枝を有していてもよい)、アルコキシ、ポリアルコキシ、アルキルチオまたはポリアルキルチオ鎖(置換基を有していてもよい)、もしくはアルケニル、多重アルケニル、アルキニルまたは多重アルキニル鎖(置換基を有していてもよい)からなりうる。好適なスペーサー鎖には、式：-(CH₂)_n-Ｚ-(CH₂)_n-［式中、Ｚは-CH₂-、-CH=CH-、-Ｃ≡Ｃ-、-Ｏ-または-Ｓ-を表わし、ｎは１から15までの整数である］で示される基がある。デンドリマーは、最初のコア分子から始まって「世代」ごとに連続的な層または段(stage)が付加されて高度に規則正しい三次元的なポリマー化合物を構築する一連の反復反応によって形成される高度に分岐した高分子化合物である。デンドリマーは次に挙げる構成を特徴とする：i．イニシエーター(I)(これは１または複数の反応部位を持ちうるもので、点状であってもよいし、デンドリマーの最終的トポロジーに影響を及ぼす程度の実質的な大きさを持つものであってもよい )；ii．上記イニシエーターに結合した分岐反復単位(Ｚ)の層；iii．デンドリマーの表面に結合(連結基(上述の連結基Ｘなど)を介した結合であってもよい)した機能性末端基(アニオン部分Ａなど)。本発明では樹状構造をイオン部分結合用の骨格として使用する。本発明はここに詳述する球状デンドリマーに限定されるわけではなく、どのような樹状構造に基いてもよい。形状と構成の両面でデンドリマーの多様性は当業者によく知られている。デンドリマーの製造法はよく知られており、例えば米国特許第4,289,872号および同第4,410,688号(これらはリシン単位の層に基くデンドリマーについて開示している)や、米国特許第4,507,466号、同第4,558,120号、同第4,568,737号および同第4,587,329号(これらはポリアミドアミンを含むその他の単位に基くデンドリマーまたはPAMAMデンドリマーについて開示している)に開示されている。これらの米国特許に開示されているデンドリマーは、表面修飾剤、金属キレート剤、解乳化剤または油/水エマルジョン、製紙における湿潤紙力増強剤、および塗料などの水性製剤での粘度調節剤などとしての使用に適すると述べられている。また米国特許第4,289,872号と同4,410,688号は、リシン単位に基くデンドリマーを医薬調製用基剤として使用しうることを示唆している。国際特許公開番号WO88/01178、WO88/01179およびWO88/01180には、デンドリマーがもう１つの物質、例えば担持された医薬用または農業用物質と複合体化または結合している複合体が開示されている。また国際特許公開番号WO95/24221には、生物反応修飾物質となりうる担体物質と会合した少なくとも一つのデンドリマーと、任意に標的指向因子とからなる樹状ポリマー複合体が開示されている。これらの特許公開公報は上述の米国特許と共に様々なデンドリマーとその製造法を広く開示しており、これら各刊行物の開示内容は参考文献として本明細書の一部を構成するものとする。本明細書で使用する「デンドリマー」という用語は最も広義に解釈されるべきものであり、特許公開番号WO88/01178、WO88/01179およびWO88/01180に開示されているようなこれらデンドリマーのあらゆる形態と組成をその範囲に包含するものである。またこの用語は、上記特許公開公報に開示されているような連結または架橋されたデンドリマーをも包含する。本発明の好ましいデンドリマーは、少なくとも２つの樹状分岐が共有結合している多価コアを含み、好ましくは少なくとも二世代にわたって広がっている。とりわけ好ましいデンドリマーはポリアミドアミン(PAMAN)デンドリマー、PAMAM(E DA)デンドリマーおよびポリリシンデンドリマーである。本発明によれば、直鎖状ポリマー上の側鎖基またはデンドリマーの表面にある末端基のうちの少なくとも一つ、好ましくは相当数が、それに共有結合したアニオンまたはカチオン含有部分を持つ。直鎖状ポリマーの側鎖またはデンドリマーの分岐鎖は、続いてアニオンまたはカチオン部分と反応させることができるアミノ基またはその他の機能性反応基(例えばOH、SHなど)を末端に持ちうる。直鎖状ポリマーの側鎖基またはデンドリマーの末端基がアミン基である場合、アニオンまたはカチオン含有部分はアミド結合やチオウレア結合を含む種々の官能基によってデンドリマーに連結することができる。直鎖状ポリマーの側鎖基またはデンドリマーの末端基に結合できる好ましいアニオンまたはカチオン含有部分としては、スルホン酸含有部分、カルボン酸含有部分(ノイラミン酸含有部分、シアル酸含有部分、修飾ノイラミン酸含有部分、修飾シアル酸含有部分を含む)、ボロン酸含有部分、リン酸またはホスホン酸含有部分(エステル化されたリン酸含有部分とエステル化されたホスホン酸含有部分を含む)およびトリメチルアンモニウム含有部分が挙げられる。アミノ基または他の側鎖基もしくは末端基に結合または連結できる好適なアニオンおよびカチオン含有部分には例えば次に挙げる基がある(式中、ｎはゼロまたは正の整数、より具体的にはｎはゼロまたは１から20までの整数を表わす)： ―NH(CH₂)_nSO₃ ^- ―(CH₂)_nSO₃ ^- ―Ar(SO₃ ^-)_n ―CH₂CH(SO₃ ^-)COOH ―CH(SO₃ ^-)CH₂COOH ArX(CH₂)_nSO₃ ^- X=O，S，NH ―(CH₂)_n ⁺NMe₃ ―Ar(N⁺Me₃)_n ―Ar(CH₂N⁺Me₃)_n ―ArXP(=O)(OR)₂ X=O，CH₂，CHF，CF₂ R=アルキル、アリール、H，Na ―ArXP(=O)(OR¹)(NR²R³) X=O，CH₂，CHF，CF₂ R¹=アルキル、アリール,H，Na 、R²，R³=アルキル、アリール ―Ar[P(=O)(OR)₂]_n R=アルキル、アリール、H，Na n=1-3 ―Ar[B(OH)₂]_n n=1-3 ―Ar[COOH]_n n=1-3 上記の部分の他に、種々のノイラミン酸またはシアル酸含有部分や修飾ノイラミン酸または修飾シアル酸含有部分も、本発明に従って側鎖基または末端基に結合もしくは連結することができる。これらの部分としては、ノイラミン酸の様々なＮ-およびＯ-置換誘導体、具体的にはＮ-アセチル、Ｏ-アセチルおよびＮ-グリコリル誘導体などといったＮ-およびＯ-アシル誘導体、ならびにノイラミン酸基が修飾されている部分、具体的にはその４位がアミノ、アミド、シアノ、アジドまたはグアニジノ基で置換されているものがある。本発明のアニオン性またはカチオン性の直鎖状ポリマーとデンドリマーは、当業者によく知られる標準的な化学法で製造できる。好適な方法を下記実施例に例示する。既述のごとく、本発明のアニオン性またはカチオン性の直鎖状ポリマーとデンドリマーは血管形成を阻害することが認められている。したがって本発明の方法には、患者の血管形成の抑制、新血管の成長が関与する慢性炎症、糖尿病性網膜症、乾癬およびリウマチ様関節炎などの症状の治療ならびに関連する疾患と症状の治療(例えば血管平滑筋細胞増殖を阻害することによる再狭窄の予防、細胞外マトリックスに貯蔵された活性型増殖因子の放出を活性化することによる創傷治癒の促進、血管形成を抑制することによる腫瘍細胞転移の抑制などを含むが、これらに限るわけではない)が含まれる。本発明の、もう一つの側面としては、ヒトまたはヒト以外の動物の患者における血管形成を予防的または治療的に抑制するための医薬組成物または獣医用組成物であって、上に概説したアニオン性またはカチオン性の直鎖状ポリマーもしくはデンドリマーを、少なくとも一種類の医薬的または獣医学的に許容できる担体もしくは希釈剤と共に含むものを提供する。このような組成物の調剤は当業者にはよく知られている。好適な医薬的に許容できる担体および/または希釈剤としては、従来の溶媒、分散媒質、充填剤、固形担体、水溶液、被覆剤、抗細菌・抗真菌剤、等張性吸収遅延剤などのすべてが挙げられる。このような医薬的に活性な物質用の媒質および薬剤の使用は当技術分野でよく知られており、例えば「レンミントンズ・ファーマシューティカル・サイエンス」Remington's Pharmaceutical Sciences(第18版、マック・パブリッシング・カンパニー(Mack Publishing Company)、米国ペンシルヴェニア州)などに開示されている。有効成分と適合しないものでない限り、従来の媒質または薬剤は本発明の医薬組成物において使用し得る。補助的な有効成分もこれらの組成物に含めることができる。投与を簡便にするとともに投与量の均一性を確保するには、組成物を投与単位製剤として製剤することがとりわけ有利である。本明細書にいう投与単位製剤とは、処置されるヒトへの１回投与量として適当な物理的に分離した単位を指し、各単位製剤には所望の治療効果を生むように計算された予定の有効成分量を必要な医薬担体および/または希釈剤と共に含有する。本発明の新規投与単位製剤の仕様は、(a)有効成分に特有の特徴と達成しようとする治療効果および(b)当該有効成分をその特定の治療用に調合する技術に固有の制限事項によって決定され、これらに直接依存する。さらなる側面として本発明は、血管形成を抑制することによるヒトまたはヒト以外の動物である患者の予防的または治療的処置または該予防的または治療的処置用の薬剤の製造における、上に概説したアニオン性またはカチオン性の直鎖状ポリマーもしくはデンドリマーの有効量の使用を提供するものである。様々な投与経路を利用することができる。選択する方法は、当然、治療する特定の症状と治療効果に必要な投与量に依存するだろう。一般的に言って本発明の方法は、医学的に許容できる任意の投与法(すなわち臨床的に許容できない有害な作用を引き起こすことなく本発明の有効成分の治療レベルをもたらす任意の方法)を使って実施することができる。そのような投与法としては経口、直腸、局所、経鼻、吸入、経皮または非経口(例えば皮下、筋肉内および静脈内)経路が挙げられる。経口投与用製剤にはカプセル剤、錠剤、トローチ剤などの分離した単位製剤がある。その他の経路には、髄液への直接的な髄腔内投与、当業者によく知られている種々のカテーテルおよびバルーン血管形成装置などによる直接導入、および標的領域への実質内注射がある。本組成物は単位製剤形で便利に提供することができ、製薬技術分野でよく知られる任意の方法で製造できる。そのような方法には、有効成分を１または複数の補助成分を構成する担体と混合する段階が含まれる。一般に本組成物は、有効成分を液状担体、細かく砕いた固形担体またはその両方と均一かつ完全に混合した後、必要であればその生成物を成形することによって製造される。経口投与用の本発明組成物は、カプセル剤、カシェ剤、錠剤またはトローチ剤などの分離した単位であってそれぞれが予定した量の有効成分を含有するものとして、リポソームに封入して、あるいはシロップ剤、エリキシル剤またはエマルジョンなどといった水性液体または非水性液体中の懸濁液として提供しうる。非経口投与用組成物は、有効成分の滅菌水性製剤(好ましくは受容者の血液と等張性のもの)を含むと便利である。この水性製剤は、適当な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用する既知の方法に従って製剤できる。滅菌注射用製剤は、例えばポリエチレングリコール溶液のような、非毒性の非経口的に許容できる希釈剤または溶剤を使った滅菌済の注射可能な溶液または懸濁液であってもよい。使用が可能な許容できる賦形剤および溶剤には、水、リンゲル液、等張食塩溶液などがある。また滅菌済の固定油も溶剤または懸濁媒質として便利に使用される。この目的には、合成モノグリセリドや合成ジグリセリドを含めて任意の無刺激固定油を使用できる。またオレイン酸などの脂肪酸も注射用製剤の製造に利用できる。有効成分を鼻腔内にまたは吸入によって、例えば有効成分を含有する微細分散エアロゾルなどとして投与するように設計された系で送達するために有効成分を調剤することもできる。その他の送達系には徐放性送達系がある。好ましい徐放性送達系は、徐放性ペレットまたは徐放性カプセル中の本発明有効成分を放出させうるものである。様々なタイプの徐放性送達系を利用できる。それらには(a)有効成分をマトリックス内に含んでいる浸食系や(b)有効成分が制御された速度でポリマーを通して浸透する拡散系などがあるが、これらに限るわけではない。またポンプ型ハードウェア送達系も使用でき、それらの一部は埋め込みに適している。有効成分は予防的または治療的に有効な量で投与される。予防的または治療的に有効な量とは、所望の効果を少なくとも部分的に達成するのに必要な量、または処置されるその症状の発生を遅延させ、その進行を抑制し、あるいはその発生または進行を完全に停止させるのに必要な量を意味する。そのような量は当然、処置される症状、その症状の重篤度、および年齢、体調、体格、体重および併用する処置を含む個々の患者のパラメーターに依存するだろう。これらの要因は当業者にはよく知られており、日常的な実験だけで扱うことができる。一般的には最大量(すなわち堅実な医学的判断に従った最高の安全量)を使用することが好ましい。しかし医学的理由、心理学的理由またはその他の事実上任意の理由から、より低い用量または耐容量を投与してもよいことは、当業者には理解されるだろう。有効成分の経口日用量は一般的には約0.01mg/kg/日〜1000mg/kg/日になるだろう。最初は少量(0.01〜1mg)を投与し、その後、最大約1000mg/kg/日まで用量を増やしてもよい。対象の反応がそれらの用量では不十分である場合は、患者の耐容性が許す範囲で、さらに高い用量(またはより限局的な別の送達経路によるより高い有効量)を使用してもよい。化合物の全身レベルを適切な値にするには、一日あたり複数回の投与が考慮される。本発明の有効成分は獣医用組成物の形でも使用に供され、それら組成物は例えば当技術分野で慣用の方法によって製造できる。このような獣医用組成物の例としては、 (a)例えば水薬(例：水性または非水性の溶液もしくは懸濁液)、錠剤またはボーラス、飼料に添加するための散剤、顆粒剤またはペレット、舌に適用するためのペーストなどといった経口投与、外用に適したもの、 (b)例えば滅菌済の溶液または懸濁液などの皮下、筋肉内または静脈内注射などによる非経口投与や、(それが適当であれば)乳房内注射(この場合、懸濁液または溶液は乳頭を通して乳房に導入される)による非経口投与に適したもの； (c)例えば皮膚に適用されるクリーム剤、軟膏もしくは噴霧剤などといった局所適用に適したもの、または (d)例えば膣坐薬、クリーム剤またはフォームなどの腟内投与に適したものが挙げられる。この明細書とそれに続く請求の範囲を通して、文脈上特段の必要がない限り、「含む(含んでなる)」という用語とその活用形は、明記した整数または整数群の包含を意味するが、その他の整数または整数群の除外を意味するわけではないと解される。本発明のさらなる特徴は下記の実施例から明らかになるだろうが、これらの実施例は発明を限定するものではなく、例示のために記載するものである。下記の実施例において、PAMAMデンドリマーとは米国特許第4,507,466号、同第4,558,12 0号、同第4,568,737号および同第4,587,329号に詳述されているようなアンモニアコアに基くポリアミドアミンデンドリマーを、PAMAM(EDA)デンドリマーとはエチレンジアミンコアに基くポリアミドアミンデンドリマーを、またBHAlys_xlys_yl ys_zデンドリマーとは米国特許第4,289,872号と同第4,410,688号に開示されているようなベンズヒドリルアミンコアとリシン分岐単位に基くポリリシン非対称デンドリマーを指す。ポリアミドアミンデンドリマーPAMAM1.0、PAMAM2.0、PAMAM3 .0、PAMAM4.0、PAMAM5.0またはそれ以上の世代、PAMAM4.0(EDA)、およびポリリシンデンドリマーBHAlyslys₂、BHAlyslys₂lys₄、BHAlyslys₂lys₄lys₈およびBHAl yslys₂lys₄lys₈lys₁₆、 BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆lys₃₂、BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆lys₃₂lys₆₄またはそれ以上の世代は、上に挙げた米国特許番号4289872、4410688、4507466、4558120 、4568737および4578239、国際特許公開番号WO88/01178、WO88/01179、WO88/011 80およびWO95/24221に開示されているように製造した。実施例１スルホン酸末端型デンドリマーを与える樹状ポリマーと2-アクリルアミド-2-メチルプロパンスルホン酸の反応Ａ．PAMAM1.0 2-アクリルアミド-2-メチルプロパンスルホン酸(0.41g；2.0mmol)の水(3ml)溶液を撹拌したものに、固形炭酸ナトリウム(0.13g；1.0mmol)をゆっくり加えた。気体の発生が停止した後の溶液のpHは8.0だった。次いでその溶液にPAMAM1.0(0. 12g；0.33mmol)の水(1ml)溶液を添加し、続いて水酸化ベンジルトリメチルアンモニウムの40％水溶液を４滴加えた。次にその溶液を窒素下に60°で３日間加熱した後、濃縮した。残渣をゲル濾過(セファデックスＧ10；水)で精製した後、凍結乾燥することにより、スルホン化PAMAM1.0デンドリマーを灰白色固体(0.51g) として得た。¹Hおよび¹³C NMRスペクトルは、ジアルキル化およびモノアルキル化PAMAM1.0デンドリマーの混合物(約70：30)を示した。¹³C nmr(D₂O)：δ31.0， 31.1，37.1，37.7，41.3，48.6，51.5，53.1，53.4，55.6，56.2，61.2，61.5， 178.3，179.0，179.8 Ｂ．PAMAM2.0 上述のようにしてPAMAM2.0を2-アクリルアミド-2-メチルプロパンスルホン酸と反応させた。粗生成物をゲル濾過(セファデックスＧ10；水)で精製した後、凍結乾燥して、灰白色固体を得た。¹Hおよび¹³C NMRスペクトルはジアルキル化およびモノアルキル化PAMAM2.0デンドリマーの混合物(約65：35)を示した。¹³C nm r(D₂O)：δ31.0，31.1，37.1，37.7，41.3，48.7，51.5，53.4，55.6，56.2，61 .2，61.5，178.4，179.0，179.1，179.6 水酸化ベンジルトリメチルアンモニウムを省いて上記の反応を繰返したところ、同様の結果が得られた。Ｃ．PAMAM3.0 BRI2783 わずかに過剰の炭酸ナトリウムを使用した点と水酸化ベンジルトリメチルアンモニウムを省いた点以外は上と同様にして、PAMAM3.0を2-アクリルアミド-2-メチルプロパンスルホン酸と反応させた。¹Hおよび¹³C NMRスペクトルはジアルキル化およびモノアルキル化PAMAM3.0デンドリマーの混合物(約50：50)を示した。¹³ C nmr(D₂O)：δ31.0，31.1，36.9，37.4，41.1，48.6，51.5，53.4，55.7，56 .2，61.1，61.5，178.2，178.9，179.0，179.8 Ｄ．PAMAM4.0 BRI2784 PAMAM3.0について上述したように、PAMAM4.0を2-アクリルアミド-2-メチルプロパンスルホン酸と反応させた。¹Hおよび¹³C nmrスペクトルはジアルキル化およびモノアルキル化PAMAM4.0デンドリマーの混合物(約35：65)を示した。¹³C nm r(D₂O)：δ31.0，31.1，36.9，37.3，41.1，48.5，51.5，53.5，55.7，56.2，61 .1，61.5，178.1，178.9，179.0，179.8 実施例２スルホアセトアミドナトリウム塩末端型デンドリマーの製造Ａ．PAMAMI.0 PAMAM1.0(0.18g；0.5mmol)のDMF(3ml)溶液を撹拌したものに、ブロモ酢酸4-ニトロフェニル(0.40g；1.5mmol)の乾燥DMF(1ml)溶液を加えた。得られた黄色溶液を室温で20時間撹拌してニンヒドリン試験を行なったところ、結果は陰性だった。その溶液を濃縮(30°/0.1mmHg)して黄色油状物を得た。この油状物を水とクロロホルムに分配し、その水層を分離し、クロロホルムで洗浄(2回)し、最後に酢酸エチルで洗浄した。その水溶液を濃縮(35°/25mmHg)することにより、ブロモアセチル化されたPAMAM1.0デンドリマーを黄色油状物(0.36g；100％)として得た。¹³C nmr(D₂O)：δ32.8，33.3，43.0，43.5，54.4，174.5，176.4 上記ブロモアセチル化PAMAM1.0デンドリマー(0.36g；0.5mmol)の水(5ml)溶液に亜硫酸ナトリウム(0.2g；1.6mmol)の水(1ml)溶液を加え、その溶液を室温で11 日間放置した。その黄色溶液を濃縮して黄色がかった固体(0.60g)を得た。¹³C n mr(D₂O)：δ34.4，43.1，43.4，54.0，61.7，171.3，177.2 上述の一連の反応は、ブロモアセチル化デンドリマーを単離することなく、単に第一反応から得た粗製水系抽出物に亜硫酸ナトリウム溶液を添加することによっても行なうことができるだろう。Ｂ．PAMAM2.0 方法１： PAMAM2.0(0.10g；0.1mmol)のDMF(3ml)溶液を撹拌したものに、ブロモ酢酸4-ニトロフェニル(0.18g；0.7mmol)の乾燥DMF(1ml)溶液を加えた。得られた黄色溶液を室温で20時間撹拌してニンヒドリン試験を行なったところ、結果は陰性だった。つぎにその溶液をかき混ぜながら水(150ml)に加え、その混合物をクロロホルム(3回)と酢酸エチルで抽出した。その粗製ブロモアセチル化デンドリマー溶液に亜硫酸ナトリウム(0.1g；0.8mmol)の水(1ml)溶液を加え、その混合物を室温で３日間放置した。次にその黄色溶液を濃縮することにより黄色の固体残渣を得て、それをゲル濾過(セファデックスLH20；水)で精製することにより、スルホアセトアミドナトリウム塩末端型PAMAM2.0デンドリマー(103mg)を得た。¹³C nmr(D₂O )：δ33.0，35.7，36.0，37.7，40.3，43.0，43.2，53.4，53.7，56.0，61.6，1 71.2，174.6，178.5 方法２：固形アセチルチオ酢酸スクシンイミジル(67mg；0.33mmol)をPAMAM2.0(52mg；0 .05mmol)の乾燥DMF(2ml)溶液に加え、得られた溶液を室温で２日間撹拌した。次にその混合物を濃縮(30°/10^-3mmHg)して油状残渣を得た。その残渣を水とクロロホルムに分配し、その水層を分離して濃縮することにより、粘稠な油状物(117 mg)を得た。¹Hおよび¹³C nmrはその油状物がアシル化デンドリマーとＮ-ヒドロキシスクシンイミドの混合物であることを示した。ゲル濾過(セファデックスＧ1 0；水)により、アセチルチオアセトアミド末端型PAMAM2.0デンドリマーの純粋な試料(29mg)を得た。¹³C nmr(D₂O)：δ34.0，34.2，37.3，43.0，43.1，43.3，53 .5，54.0，56.3，175.4，177.2，177.5 次に、40％ギ酸水溶液(7ml)に溶解した上記機能化デンドリマーを、ギ酸(2ml) 中に新たに調製した過ギ酸(1.6mmol)の氷冷溶液に加えた。その混合物を０°で１時間撹拌した後、室温で20時間撹拌した。次に過剰の過酸を分解するために少量の活性炭を加え、その混合物を30分間撹拌した後、濾過し濃縮して粘稠な油状物を得た。その粗生成物を水に溶解し、重炭酸ナトリウム水溶液でpHを9.0に調節し、それをセファデックスＧ10のカラムに通すことによって脱塩した。凍結乾燥によって得た白色固体(20mg)は、分光学的に方法１で得た物質と本質的に同じだった。¹³ C nmr(D₂O)：δ33.0，38.7，42.9，43.0，43.1，53.9，54.3，56.5，61.6，17 1.2，176.4，177.0 実施例３スルホスクシンアミド酸ナトリウム塩末端型デンドリマーの製造Ａ．PAMAM1.0 PAMAM1.0(0.12g；0.33mmol)の乾燥DMF(3ml)溶液を撹拌したものに、固形無水マレイン酸(0.11g；1.1mmol)を加えた。この混合物は無水物が溶解するにつれて少し温かくなって褐色を帯びた。得られた溶液を室温で終夜撹拌した。次にその溶液を濃縮(30°/10^-4mmHg)して粘稠な油状物を得た。¹Hおよび¹³C nmr(D₂O)は、PAMAM1.0のトリスアミドへの完全な変換と多少のマレイン酸とを示した。¹³C nmr(D₂O)：δ33.1，42.8，43.1，54.3，135.0，137.1，169.1，171.9，173.3 次にその粗製トリスアミドを水(4ml)に溶解し、固形亜硫酸ナトリウム(0.20g ；1.6mmol)を加えた。得られた溶液を室温で４日間放置した後、濃縮した。¹Hおよび¹³C nmr(D₂O)は、位置異性スルホスクシンアミド酸ナトリウム塩末端型PAMA M1.0デンドリマーの1：1混合物と多少のスルホコハク酸とを示した。この粗生成物をゲル濾過(セファデックスＧ10；水)で精製してスルホスクシンアミド酸ナトリウム塩末端型PAMAM1.0デンドリマーの試料(107mg)を得た。¹³C nmr(D₂O)：δ3 3.3，39.6，40.0，42.9，43.1，54.0，67.9，69.4，173.8，176.3，177.6，181. 8 Ｂ．PAMAM2.0 位置異性スルホスクシンアミド酸ナトリウム塩末端型PAMAM2.0デンドリマーの混合物を上述のように製造した。¹³C nmr PAMAM2.0マレインアミド酸誘導体(D₂O)：δ32.8，33.0，38.7，42.9，53.8，54.3，56.5，135.2，136.8，169 .2，171.9，173.5，174.6。¹³C nmr PAMAM2.0スルホスクシンアミド酸ナトリウム塩誘導体(D₂O)：δ37.0，40.1，41.1，43.0，43.2，43.9，53.0，53.3，55.5 ，68.0，69.4，173.8，177.6，179.1，179.5，179.8，182.3 Ｃ．PAMAM4.0 BRI6038 PAMAM4.0(51mg；0.01mmol)の乾燥DMF(2ml)溶液を撹拌したものに固形無水マレイン酸(60mg；0.6mmol)を加えた。その混合物はまず濁ったが、すぐに透明な溶液になった。その透明溶液を室温で終夜撹拌した。次にその溶液を濃縮(35°/10^-4 mmHg)して粘稠な油状物を得た。¹Hおよび¹³C nmr(D₂O)はPAMAM4.0のポリアミドへの完全な変換と、多少のマレイン酸とを示した。次にその粗製ポリアミドを水(2ml)に溶解し、亜硫酸ナトリウム(126mg；1.0mmol)の水(2ml)溶液を加えた。得られた溶液を室温で２日間放置した後、濃縮した。¹Hおよび¹³C nmr(D₂O)は位置異性スルホスクシンアミド酸ナトリウム塩末端型PAMAM4.0デンドリマーの混合物と、多少のスルホコハク酸とを示した。その粗生成物をゲル濾過(セファデックスLH20；水)で精製することにより、24個の位置異性スルホスクシンアミド酸基を末端に持つPAMAM4.0(90mg)の試料を得た。実施例４Ｎ-(2-スルホエチル)スクシンアミドナトリウム塩末端型デンドリマーの製造ａ．Ｎ-(2-スルホエチル)スクシンアミド酸テトラブチルアンモニウム塩の製造 2-アミノエチルスルホン酸テトラブチルアンモニウム塩(1.83g；5.0mmol)の乾燥ジクロロメタン(30ml)溶液を撹拌したものに固形無水コハク酸(0.5g；5.0mmol )を加えた。無水コハク酸はゆっくりと溶解した。生成した濁った溶液を室温で終夜撹拌した。その混合物を濾過し、濾液を濃縮して粘稠な油状物(2.41g)を得た。¹³C nmrは、所望のモノアミドへの完全な変換と、少量のコハク酸とを示した。大過剰のジエチルエーテルへのジクロロメタン溶液の滴下によって生成物の沈殿を繰返し、Ｎ-(2-スルホエチル)スクシンアミド酸テトラブチルアンモニウム塩を白色固体(1.762g；76％)として得た。融点125〜127℃。ｂ．Ｎ-(2-スルホエチル)スクシンアミド酸4-ニトロフェニル・テトラブチルアンモニウム塩の製造Ｎ-(2-スルホエチル)スクシンアミド酸テトラブチルアンモニウム塩(94mg；0. 20mmol)のジクロロメタン(2ml)溶液を撹拌したものに、ジシクロヘキシルカルボジイミド(45mg；0.22mmol)の乾燥ジクロロメタン(1ml)溶液を加え、その混合物を室温で終夜撹拌した。得られた懸濁液を濾過し、濾液を濃縮して粗製活性エステルを得て、それをさらに精製することなく使用した。Ａ．Ｎ-(2-スルホエチル)スクシンアミドナトリウム塩末端型PAMAMデンドリマーの製造 PAMAM4.0 BRI2786 50％ＤＭＦ水溶液(3ml)に溶解したPAMAM4.0(51.5mg；0.01mmol)を撹拌した溶液に、粗製Ｎ-(2-スルホエチル)スクシンアミド酸4-ニトロフェニル・テトラブチルアンモニウム塩(0.30mmol)の乾燥DMF(1ml)溶液を加え、得られた黄色溶液を室温で終夜撹拌した。次にその混合物を濃縮(35°/10^-5mmHg)し、その黄色残渣を水とクロロホルムに分配した。水層を分離し、クロロホルム(2回)と酢酸エチルで洗浄した後、濃縮して黄色油状物(134mg)を得た。その粗生成物をアンバーライトIR120(Na)のカラムに通すことによってナトリウム塩に変換し、85mgの生成物を得た。この物質をさらにゲル濾過(セファデックスLH20；水)で精製することにより、Ｎ-(2-スルホエチル)スクシンアミドナトリウム塩末端型PAMAM4.0デンドリマー(45mg)を得た。¹³C nmr(D₂O)：δ33.2，33.6，35.5，39.0，39.5，42 .8，43.2，53.8，54.1，54.4，56.6，176.5，176.9，177.2，178.9，179.4。Ｎ-(2-スルホエチル)スクシンアミド(ナトリウム塩)基を末端に持つ類似の PAMAM1.0デンドリマーとPAMAM3.0(BRI2785)デンドリマーも同様に製造した。 ¹³C nmr PAMAM3.0誘導体(D₂O)：δ33.4，35.5，39.0，39.5，42.9，42.3，53. 8，54.1，54.3，56.5，176.4，176.9，177.4，178.9，179.4。 ¹³C nmr PAMAM1.0誘導体(D₂O)：δ34.9，35.5，39.5，42.9，43.1，53.7，54. 1，179.0，179.1，179.3。Ｂ．Ｎ-(2-スルホエチル)スクシンアミドナトリウム塩末端型ポリリシンデンドリマーの製造 BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆BRI2789 乾燥ジクロロメタン(1ml)に懸濁したBHAlyslys₂lys₄lys₈DBL₁₆(36.5mg；5.0μ ｍｏｌ)にトリフルオロ酢酸(1ml)を加え、得られた溶液を窒素下に室温で２時間撹拌した後、濃縮した。残渣を乾燥DMSO(2ml)に溶解し、トリエチルアミンでpH を8.5に調節した。次に、粗製Ｎ-(2-スルホエチル)スクシンアミド酸4-ニトロフェニル・テトラブチルアンモニウム塩(約0.2mmol)のDMSO(1ml)溶液を滴下し、その混合物を室温で終夜撹拌した。次にその黄色溶液を濃縮(50°/10^-5mmHg)し、その黄色残渣を水とクロロホルムに分配した。水層を分離し、クロロホルム(3回 )と酢酸エチルで洗浄した後、濃縮して油状物(99mg)を得た。その粗生成物をアンバーライトIR120(Na)のカラムに通すことによってナトリウム塩に変換し、81m gの物質を得た。この物質をゲル濾過(セファデックスLH20；水)でさらに精製して、Ｎ-(2-スルホエチル)スクシンアミドナトリウム塩末端型BHAlyslys₂lys₄lys₈ lys₁₆デンドリマー(39mg)を得た。¹³C nmr(D₂O)：δ27.0，32.3，35.2，35.3， 35.6，35.7，39.5，43.5，54.1，58.5，131.5，132.0，133.3，145.1，177.8，1 78.0，178.4，178.8，178.9，179.2，179.7，179.8。Ｎ-(2-スルホエチル)スクシンアミド(ナトリウム塩)基を末端に持つ類似のBHA lyslys₂、BHAlyslys₂lys₄(BRI2787)およびBHAlyslys₂lys₄lys₈(BRI2788)も同様に製造した。 ¹³C nmr BHAlyslys₂lys₄lys₈誘導体(D₂O)：δ26.9，32.3，35.1，35.3，35.6 ，35.7，39.5，43.5，54.1，58.5，131.6，131.9，132.2，132.3，133.2，133.3 ，145.0，145.2，177.2，177.8，177.9，178.0，178.2，178.3，178.6，178.7， 178.8，178.9，179.2，179.3，179.7，179.8。 ¹³C nmr BHAlyslys₂lys₄誘導体(D₂O)：δ26.9，32.3，35.1，35.4，35.7，35. 8，39.5，43.5，54.1，58.5，61.8，131.7，132.0，132.2，132.3，133.2，133. 3，145.0，145.1，177.3，178.0，178.3，178.4，178.7，178.9，179.0，179.3 ，179.7，179.8。 ¹³C nmr BHAlyslys₂誘導体(D₂O)：δ26.9，27.1，32.2，32.3，34.7，34.8，3 5.1，35.3，35.6，35.7，39.5，43.4，54.1，58.6，61.8，131.7，131.9，132.2 ，132.3，133.3，144.9，145.0，177.7，178.4，178.8，179.0，179.3，180.0。実施例５ 4-スルホフェニルチオウレアナトリウム塩末端型デンドリマーの製造Ａ．PAMAM4.0 BRI2791 PAMAM4.0(300mg；0.0582mmol)の水(10ml)溶液に固形4-スルホフェニルイソチオシアネートナトリウム塩一水和物(500mg；1.96mmol)を加え、得られた溶液を窒素下に53°で２時間加熱した後、冷却した。その溶液を濃縮し、その黄色固体残渣をゲル濾過(セファデックスLH20；水)で精製した。純粋な画分を合わせて凍結乾燥することにより、4-スルホフェニルチオウレアナトリウム塩末端型PAMAM4 .0デンドリマーを綿毛様白色固体(370mg)として得た。それぞれ3、6、12および48個の4-スルホフェニルチオウレア(ナトリウム塩)基を末端に持つ類似のPAMAM1.0、PAMAM2.0(BRI2790)、PAMAM3.0およびPAMAM5.0(BR I2991)デンドリマーも同様に製造した。Ｂ．PAMAM4.0(EDA) BRI6045 PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)の水(4ml)溶液に固形4-スルホフェニルイソチオシアネートナトリウム塩一水和物(130mg；0.5mmol)を加え、得られた溶液を窒素下に53°で２時間加熱した後、冷却した。その溶液を濃縮し、その固体残渣をゲル濾過(セファデックスLH20；水)で精製した。純粋な画分を合わせて凍結乾燥することにより、32個の4-スルホフェニルチオウレア(ナトリウム塩)基を末端に持つPAMAM4.0を綿毛状白色固体(136mg)として得た。Ｃ．BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆ BRI2792 窒素下で乾燥ジクロロメタン(4ml)に懸濁したBHAlyslys₂lys₄lys₈DBL₁₆(0.73g ；0.1mmol)にトリフルオロ酢酸(4ml)を加えた。活発な気体の発生が短時間観察された。得られた溶液を室温で２時間撹拌した後、濃縮した。シロップ状の残渣を水(5ml)に溶解し、その溶液をアンバーライトIRA-401(OH)のカラムに通し、濾液を濃縮することにより、BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆を粘稠な油状物(0.49g)として得た。その油状物を水(5ml)に再溶解し、Ｎ,Ｎ-ジメチル-Ｎ-アリルアミン緩衝液(pH9.5；3ml)を加えた。次に固形4-スルホフェニルイソチオシアネートナトリウム塩一水和物(1.30g；5.1mmol)を加え、得られた溶液を窒素下に53°で２時間加熱した後、冷却した。その溶液を濃縮し、その茶色がかった固体残渣をゲル濾過(セファデックスLH20；水)で精製した。純粋な画分を合わせ、アンバーライトIR120(Na)のカラムに通し、凍結乾燥することにより、4-スルホフェニルチオウレア(ナトリウム塩)末端型BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆デンドリマーを綿毛状白色固体(374mg)として得た。それぞれ16、64および128個の4-スルホフェニルチオウレア(ナトリウム塩)基を末端に持つ類似のBHAlyslys₂lys₄lys₈、BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆lys₃₂(BRI29 92)およびBHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆lys₃₂lys₆₄(BRI2993)デンドリマーも同様に製造した。実施例６ 3,6-ジスルホナフチルチオウレアナトリウム塩末端型デンドリマーの製造Ａ．ＰＡＭＡＭ4.0 BRI2923 PAMAM4.0(51mg；0.01mmol)の水(3ml)溶液に固形3,6-ジスルホナフチルイソチオシアネートナトリウム塩(160mg；0.41mmol)を加え、得られた溶液を窒素下に5 3℃で２時間加熱した後、冷却した。その溶液を濃縮し、その褐色固体残渣をゲル濾過(セファデックスLH20；水）で精製した。純粋な画分を合わせて濃縮することにより、3,6-ジスルホナフチルチオウレアナトリウム塩末端型PAMAM4.0デンドリマーを茶色がかった固体(73mg)として得た。 3,6-ジスルホナフチルチオウレア(ナトリウム塩)基を末端に持つ類似のPAMAM2 .0デンドリマーも同様に製造した。Ｂ．PAMAM4.0(EDA)BRI6046 PAMAM4.0(EDA)(74mg；0.01mmol)の水(4ml)溶液に固形3,6-ジスルホナフチルイソチオシアネートナトリウム塩(220mg；0.57mmol)を加え、得られた溶液を窒素下に53°で２時間加熱した後、冷却した。その溶液を濃縮し、その茶色がかった固体残渣をゲル濾過(セファデックスLH20；水)で精製した。純粋な画分を合わせて濃縮することにより、32個の3,6-ジスルホナフチルチオウレア(ナトリウム塩) 基を末端に持つPAMAM4.0を黄褐色固体(148mg)として得た。Ｃ．BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆BRI2999 窒素下で乾燥ジクロロメタン(2ml)に懸濁した BHAlyslys₂lys₄lys₈DBL₁₆(73mg；0.01mmol)にトリフルオロ酢酸(2ml)を加えた。活発な気体の発生が短時間観察された。得られた溶液を室温で２時間撹拌した後、濃縮した。シロップ状の残渣を水(5ml)に溶解し、その溶液をアンバーライトI RA-401(OH)のカラムに通し、その濾液を濃縮することによって、 BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆を粘稠な油状物として得た。その油状物を水(5ml)に再溶解し、N,N-ジメチル-N-アリルアミン緩衝液(pH9.5；3ml)を加えた。次に固形3 ,6-ジスルホナフチルイソシアネートナトリウム塩(234mg；0.60mmol)を加え、得られた溶液を窒素下に53°で２時間加熱した後、冷却した。その溶液を濃縮し、その茶色がかった固体残渣をゲル濾過(セファデックスLH20；水)によって精製した。純粋な画分を合わせ、アンバーライトIR120(Na)のカラムに通し、凍結乾燥することにより、32個の3,6-ジスルホナフチルチオウレア(ナトリウム塩)基を末端に持つBHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆を綿毛状灰白色固体(119mg)として得た。実施例７ 4-スルホナフチルチオウレアナトリウム塩末端型デンドリマーの製造 PAMAM4.0 BRI2997 PAMAM4.0(51mg；0.01mmol)の水(5ml)溶液に固形4-スルホナフチルイソチオシアネートナトリウム塩(180mg；0.5mmol)を加え、その混合物を窒素下に53°で２時間加熱した後、冷却した。得られた懸濁液から水分を真空下に蒸留し、その灰白色固体残渣をゲル濾過(セファデックスLH20；水)で精製した。純粋な画分を合わせて凍結乾燥することにより、4-スルホナフチルチオウレアナトリウム塩末端型PAMAM4.0デンドリマーを綿毛状白色固体(60mg)として得た。実施例８ 3,5-ジスルホフェニルチオウレアナトリウム塩末端型デンドリマーの製造 PAMAM4.0 BRI6039 PAMAM4.0(63mg；0.012mmol)の水(3ml)溶液に固形3,5-ジスルホフェニルイソチオシアネートナトリウム塩(110mg；0.32mmol)を加え、得られた溶液を窒素下に5 3°で２時間加熱した後、冷却した。その溶液を濃縮し、その茶色がかった固体残渣をゲル濾過(セファデックスG25；水)で精製した。純粋な画分を合わせて濃縮することにより、24個の3,5-ジスルホフェニルチオウレア(ナトリウム塩）基を末端に持つPAMAM4.0を灰白色固体(110mg)として得た。実施例９ 3,6,8-トリスルホナフチルチオウレアナトリウム塩末端型デンドリマーの製造 PAMAM4.0 BRI2998 水(2ml)に溶解したPAMAM4.0(51mg；0.01mmol)とN,N-ジメチル-N-アリルアミン緩衝液(pH9.5；1ml)に固形3,6,8-トリスルホナフチルイソチオシアネートナトリウム塩(250mg；0.5mmol)を加え、その混合物を窒素下に53°で２時間加熱した後、冷却した。その混合物を真空下に濃縮して橙色の固体を得た。その残留固体を水(2ml)に溶解し、短いアンバーライトIR-120(Na)カラムに通した。次に濾液を濃縮して、その残渣をゲル濾過(セファデックスLH20；水)で精製した。純粋な画分を合わせて凍結乾燥することにより、3,6,8-トリスルホナフチルチオウレアナトリウム塩末端型PAMAM4.0デンドリマーを灰白色固体(102mg)として得た。実施例10 4-(スルホメチル)ベンズアミドナトリウム塩末端型デンドリマーの製造 PAMAM4.0 BRI6040 PAMAM4.0(70mg；0.014mmol)の乾燥DMSO(4ml)溶液に固形4-(クロロメチル)安息香酸4-ニトロフェニル(200mg;0.68mmol)を加え、得られた黄色溶液を室温で２時間撹拌した。次にその溶液を濃縮(10^-4mmHg；40°）し、残渣を水とジクロロメタンの混合物(1：1)で抽出した。残った固体物質をDMSO(5ml)に溶解し、亜硫酸ナトリウム(130mg；1mmol)の水(3ml)溶液を加えた。その結果生成したわずかに濁った混合物を４日間放置した後、さらに水(2ml)を加えたところ、透明で均一な黄色溶液が生成した。次にその溶液をまず40°/25mmHgで濃縮し、次いで50°110^-4ｍｍＨｇで濃縮することにより、粗生成物を得た。その粗生成物をゲル濾過(セファデックスG25；水)で精製して、24個の4-(スルホメチル)ベンズアミド(ナトリウム塩)基を末端に持つPAMAM4.0(24mg)を得た。実施例11 4-スルホベンズアミド末端型デンドリマーの製造 PAMAM4.0(DEA) BRI6116 0.1Mホウ酸緩衝液(pH8.5；５ml)に溶解したPAMAM4.0(EDA)(35mg；0.005mmol) に固形4-スルホ安息香酸N-ヒドロキシスクシンイミジルナトリウム塩(100mg;0.3 mmol)を加え、その溶液を室温で２時間撹拌した。得られた乳状の溶液はこの段階でpHが4.5だった。次に1M炭酸ナトリウム溶液(1ml)を加えて透明な溶液とし、それを濃縮することにより、粗生成物を白色固体として得た。その粗生成物をゲル濾過(セファデックスG25；水)で精製して、32個の4-スルホベンズアミド(ナトリウム塩)基を末端に持つPAMAM4.0(EDA)を得た(47mg)。実施例12 N-(4-スルホフェニル)プロパンアミドナトリウム塩末端型デンドリマーの製造 PAMAM4.0(EDA) BRI6117 PAMAM4.0(EDA)(78mg；0.011mmol)の水(4ml)溶液を撹拌したものに、固形N-(4- スルホフェニル)アクリルアミドナトリウム塩(250mg；1mmol)と固形炭酸ナトリウム(106mg；1mmol)を順次加えた。得られた溶液を窒素下で４日間撹拌した後、凍結乾燥して、綿毛状の白色固体を得た。その粗生成物をゲル濾過(セファデックスLH20；水)で精製して、64個のN-(4-スルホフェニル)プロパンアミド(ナトリウム塩)基を末端に持つPAMAM4.0(EDA)を得た(206mg)。¹³C nmrは極微量のモノアルキル化末端アミノ基と思われるものを示した。実施例13 4-スルホフェニルウレアナトリウム塩末端型デンドリマーの製造 PAMAM4.0(EDA) BRI6115 スルファニル酸ナトリウム塩(195mg；1mmol)の乾燥DMSO(3ml)溶液を炭酸N,N'- ジスクシンイミジル(530mg；2mmol)の乾燥DMSO(4ml)溶液に滴下し、得られた茶色がかった溶液を室温で20時間撹拌した。乾燥DMSO(1ml)に溶解したPAMAM4.0(ED A)(75mg；0.011mmol)を加え、その溶液をさらに18時間撹拌した。次にその溶液を高真空下(10^-5mmHg；35°)で濃縮して、黄色がかった半固体を得た。その粗生成物をDMSO(4ml)に溶解し、その溶液をよく撹拌した酢酸エチル200mlに加えた。沈殿した白色固体を濾過によって集め、酢酸エチル(2回)とエーテル(2回)で洗浄した後、乾燥することによって白色粉末(275mg)を得た。この物質をさらにゲル濾過(セファデックスLH20；水)で精製して、32個の4-スルホフェニルウレア(ナトリウム塩)基を末端に持つPAMAM4.0(EDA)を得た(106mg)。実施例14 塩化N,N,N-トリメチルグリシンアミド末端型デンドリマーの製造 BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆ BRI2922 乾燥ジクロロメタン(2ml)に懸濁したBHAlyslys₂lys₄lys₈DBL₁₆(220mg；30μｍｏｌ)にトリフルオロ酢酸(4ml)を加え、得られた溶液を窒素下に室温で２時間撹拌した後、濃縮した。その残渣を乾燥DMSO(5ml)に溶解し、トリエチルアミンでp Hを8.5に調節した。次に固形塩化Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルグリシン4-ニトロフェニル(0.50g；1.8mmol)を加え、その混合物を室温で終夜撹拌した。次にその濁った溶液を濃縮(50°/10^-5mmHg)し、残渣を水とジクロロメタンに分配した。水層を分離し、ジクロロメタン(3回)と酢酸エチルで洗浄した後、濃縮して油状物(1.128g)を得た。その粗生成物をゲル濾過(セファデックスLH20；水)で精製して、N,N,N-トリメチルグリシンアミド末端型BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆デンドリマー(116mg)を得た。¹³C nmr(D₂O)：δ25.5，30.5，30.8，33.4，42.1，56.5,57 .1，67.5，68.1，166.7，167.0，167.1，176.0，176.2。実施例15 ４−トリメチルアンモニウムベンズアミド末端型デンドリマーの製造 PAMAM4.0 BRI6043 ヨウ化４-トリメチルアンモニウム安息香酸(154mg；0.5mmol)の乾燥ＤＭＦ(4m l)溶液に1,1'-カルボニルジイミダゾール(85mg；0.52mmol)を加え、その混合物をアルゴン下に室温で２時間撹拌した。この期間中に白色固体が溶液から分離した。次にPAMAM4.0(58mg；0.011mmol)の乾燥DMF(2ml)溶液を加え、その混合物を室温で終夜撹拌した。この期間後、沈殿物の大半が溶解しており、その溶液のニンヒドリン試験は陰性だった。その混合物を濃縮(10^-4mmHg；30°)して白色固体残渣を得た。その粗生成物をゲル濾過（セファデックスLH20；10％AcOH)で精製して、24個の4-トリメチルアンモニウムベンズアミド基を末端とするPAMAM4.0を酢酸塩(89mg)として得た。６個の4-トリメチルアンモニウムベンズアミド基を末端に持つ類似のPAMAM2.0 デンドリマーも同様に製造した。実施例16 4-(トリメチルアンモニウムメチル)ベンズアミド末端型デンドリマーの製造 PAMAM4.0 BRI6044 PAMAM4.0(52mg；0.01mmol)の乾燥DMSO(3ml)溶液を撹拌したものに固形4-(クロロメチル）安息香酸4-ニトロフェニル(150mg；0.5mmol)を加えた。得られた黄色溶液を室温で20時間撹拌してニンヒドリン試験を行なったところ、結果は陰性だった(pH約8.5)。次にその溶液を濃縮(10^-5mmHg；４０°)し、残渣を水とジクロロメタンの混合物(1：1)と共に振盪した。不溶性のゲル様物質を濾過によって集め、水(2回)およびジクロロメタン(2回)で洗浄した後、風乾した。この粗製4-(クロロメチル)ベンズアミド末端型デンドリマーを25％トリメチルアミン水溶液(20ml)に溶解し、その黄色溶液を終夜放置した。次にその溶液を濃縮し、残渣を水(5ml)に溶解し、その溶液をアンバーライトIRA-401(OH)のカラムに通した。無色の濾液を濃縮して粘稠な油状物を得て、それをゲル濾過(セファデックスG10；10％AcOH)で精製することにより、24個の4-(トリメチルアンモニウムメチル)ベンズアミド基を末端に持つPAMAM4.0(90mg)を得た。実施例17 N-(2-アセトキシエチル)-N,N-(ジメチルアンモニウム)メチルカルボキサミド末端型デンドリマーの製造 PAMAM4.0 臭化N-(2-アセトキシエチル)-N-(カルボキシメチル)-N,N-ジメチルアンモニウム(135mg；0.5mmol)の乾燥DMF(3ml)溶液に固形1,1'-カルボニルジイミダゾール( 85mg；0.52mmol)を加え、得られた溶液を窒素下に２時間撹拌した。次にPAMAM4. 0(60mg；0.012mmol)のDMF(2ml)溶液を加えたところ、直ちに凝集性の沈殿が生成し、それはゆっくりと再溶解した。その混合物を２日間撹拌した後、濃縮(10^-4m mHg；40°)して粘稠な油状物を得た。その粗生成物をゲル濾過(セファデックスG 10；10％AcOH)で精製することにより、24個のN-(2-アセトキシエチル)-N,N-(ジメチルアンモニウム)メチルカルボキサミド基を末端に持つPAMAM4.0(64mg)を得た。実施例18 グアニジノ末端型デンドリマーの製造 PAMAM4.0 BRI6042 PAMAM4.0(63mg；0.012mmol)と硫酸メチルチオプソイドウレア(170mg；0.61mmo l)の水(5ml)溶液(pH10.5)を窒素下に80°で２時間加熱した。次にその溶液を濃縮し、残渣をゲル濾過(セファデックスG10；10％AcOH)で精製することにより、2 4個のグアニジノ基を末端に持つPAMAM4.0を酢酸塩(107mg)として得た。６個のグアニジノ基を末端に持つ類似のPAMAM2.0デンドリマーも同様に製造した。実施例19 4-(［1,4,8,11-テトラアザシクロテトラデカン］メチル)ベンズアミド末端型デンドリマーの製造 PAMAM4.0 BRI6041 pH7のリン酸緩衝液(10ml)に溶解した1-(4-カルボキシフェニル)メチル-1,4,8, 11-テトラアザシクロテトラデカン四塩酸塩(120mg；0.25mmol)、N-ヒドロキシスクシンイミド(60mg；0.52mmol)および1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド塩酸塩(250mg；1.3mmol)を室温で１時間放置した後、pH7のリン酸緩衝液(10ml)に溶解したPAMAM4.0(32mg；0.006mmol)を加えた。その混合物を２日間放置した後、濃縮した。残渣をゲル濾過(セファデックスLH20；10％AcOH) で精製することにより、IHおよび13Cnmrから判断して約12個の4-(［1,4,8,11-テトラアザシクロテトラデカン］メチル)ベンズアミド基を末端に持つPAMAM44.0(8 0mg)を得た。次にその生成物を水に溶解し、アンバーライトIRA-401(Cl)樹脂のカラムに通した後、濃縮した。その残渣を水(1ml)に溶解し、濃塩酸(1ml)を加え、その溶液をエタノール(30ml)で希釈することによって白色固体を沈殿させた。その固体を濾過によって集めた(68mg)。¹Hおよび¹³C nmrはやはり末端アミノ基が約50％機能化されていることを示した。実施例20 4-カルボキシ-3-ヒドロキシベンジルアミン末端型デンドリマーの製造 PAMAM4.0(EDA)BRI61l9 水(4ml)中のPAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)、4-ホルミル-2-ヒドロキシ安息香酸(83mg；0.5mmol)および炭酸水素ナトリウム(42mg；0.5mmol)の混合物にシアノホウ水素化ナトリウム(32mg；0.5mmol)を加えた。その不均一な橙色の混合物を室温で４時間撹拌したところ、均一になった。次にその橙色溶液を濃縮し、残渣をゲル濾過(セファデックスLH20；水)で精製することにより、約32個の4-カルボキシ-3-ヒドロキシベンジルアミン基を末端に持つPAMAM4.0(EDA)を得た(91mg) 。¹Hおよび¹³C nmr(D₂O)はほとんどの末端アミノ基がモノアルキル化されていることを示すが、ジアルキル化の形跡も若干示し、どちらのスペクトルも幅広いピークを示す。¹³C nmr(D₂O)：δ37.0，41.1，50.9，53.4，55.5，55.8，61.5，12 0.9，122.2，122.4，132.3，132.7，135.0，135.8，163.5，163.7，169.0，178. 6，179.3。実施例21 4-カルボキシフェニルアミド末端型デンドリマーの製造 PAMAM4.0(EDA) PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)の水(20ml)溶液に固形4-カルボキシフェニルイソチオシアネート(86mg；0.48mmol)を加えた。生成した濁った溶液のpHをNaHC O₃飽和溶液で９に調節し、室温で24時間撹拌しておいた。次にその反応混合物を濾過し、濾液を濃縮することによって白色固体残渣を得て、それをゲル濾過(セファデックスLH20；水)で精製した後、凍結乾燥することにより、生成物を白色の綿毛状固体(68mg)として得た。実施例22 3,5-ジカルボキシフェニルアミド末端型デンドリマーの製造 PAMAM4.0(EDA) PAMAM4.0(EDA)(70mg；0.01mmol)の水(5ml)溶液に固形3,5-ジカルボキシフェニルイソチオシアネート(112mg；0.5mmol)を加えた。生成した濁った溶液のpHを1M Na₂CO₃溶液で10に調節し、窒素下に53°で２時間加熱した。次にその反応混合物を濾過し、濾液を濃縮することにより茶色がかった固体残渣を得て、それをゲル濾過(セファデックスLH20；水)で精製した後、凍結乾燥することにより、生成物を淡褐色固体(112mg)として得た。実施例23 4-ホスホノオキシフェニルチオウレアナトリウム塩末端型デンドリマーの製造 PAMAM4.0(EDA) PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)の水(20ml)溶液に固形4-ホスホノオキシフェニルイソチオシアネートナトリウム塩(251mg)を加えた。得られた溶液(pH9.0)を窒素下に室温で24時間撹拌した。次にその反応混合物を濃縮することによって白色固体残渣を得て、それをゲル濾過(セファデックスLH20；水)で精製した後、凍結乾燥することにより、生成物を綿毛状白色固体(86mg)として得た。実施例24 4-(ホスホノメチル)フェニルチオウレアナトリウム塩末端型デンドリマーの製造 PAMAM4.0(EDA) PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)の水(30ml)溶液に固形4-(ホスホノメチル)フェニルイソチオシアネートナトリウム塩(97mg)を加えた。NaHCO₃飽和溶液を定期的に添加することによってpHを８に維持しながら、得られた溶液を窒素下に室温で３時間撹拌した。次にその反応混合物を濃縮することによって白色固体残渣を得て、それをゲル濾過(セファデックスLH20；水)によって精製した後、凍結乾燥することにより、生成物を綿毛状白色固体(102mg)として得た。実施例25 4-(ホスホノメチル)フェニルチオウレアエチルナトリウム塩末端型デンドリマーの製造 PAMAM4.0(EDA) PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)のDMF(30ml)溶液に固形4-(ホスホノメチル)フェニルイソチオシアネートエチルナトリウム塩(109mg)を加えた。 NaHCO₃飽和溶液を定期的に添加することによってpHを８に維持しながら、得られた溶液を窒素下に室温で17時間撹拌した。次にその反応混合物を濃縮することにより白色固体残渣を得て、それをゲル濾過(セファデックスLH20；水)で精製した後、凍結乾燥することにより、生成物を綿毛状白色固体(30mg)として得た。実施例26 4-スルホフェニルチオウレアナトリウム塩末端型ポリリシンの製造水(20ml)とN,N-ジメチル-N-アリルアミン緩衝液(pH9.5；15ml)の混合液に溶解したポリ-L-リシン(15-30K)(シグマ・ケミカル・カンパニー)(1.0g)に固形4-スルホフェニルイソチオシアネートナトリウム塩一水和物(2.55g；10mmol)を加えた。得られた混合物を窒素下に53℃で３時間加熱してニンヒドリン試験を行なったところ、結果は陰性だった。冷却した混合物を濾過し、濾液を濃縮して灰色の固体残渣を得た。その固体残渣を水に再溶解し、アンバーライトIR120(Na)のカラムに通した後、濃縮した。その粗生成物をゲル濾過(セファデックスLH20；水) によって精製し、凍結乾燥することにより、4-スルホフェニルチオウレアナトリウム塩末端型ポリ-L-リシンBRI2995を白色綿毛状の固体(1.25g)として得た。分子量画分が1-4K(BRI2994)、4-15K(BRI2967)、150-300K(BRI2996)のスルホフェニルチオウレアナトリウム塩末端型ポリリシンも同様に製造した。実施例27 3,6-ジスルホナフチルチオウレアナトリウム塩末端型ポリリシンの製造水(2ml)とN,N-ジメチル-N-アリルアミン緩衝液(pH9.5，2ml)の混合液に溶解したポリ-L-リシン(15-30K)(50mg)に固形3,6-ジスルホナフチルイソチオシアネートナトリウム塩(200mg；0.51mmol)を加えた。得られた混合物を窒素下に53℃で３時間加熱してニンヒドリン試験を行なったところ、その結果は陰性だった。冷却した混合物を濾過し、濾液を濃縮して茶色がかった固体残渣を得た。その固体残渣を水に再溶解し、アンバーライトIR120(Na)のカラムに通した後、濃縮した。その粗生成物をゲル濾過(セファデックスLH20；水)で精製し、凍結乾燥することにより、3,6-ジスルホナフチルチオウレアナトリウム塩末端型ポリ-L -リシンBRI6047を白色綿毛状の固体(87mg)として得た。実施例28 C_n-アルキル結合2-チオシアロシド末端型のデンドリマーと直鎖状ポリマーの製造［(8-オクタン酸N-ヒドロキシスクシンイミドエステル)5-アセトアミド-4,7,8 ,9-テトラ-O-アセチル-3,5-ジデオキシ-2-チオ-D-グリセロ-α-D-ガラクト-2-ノヌロピラノシド］オン酸メチルは次の手法で製造した。 5-アセトアミド-4,7,8,9-テトラ-O-アセチル-2-S-アセチル-3,5-ジデオキシ-2 -チオ-D-グリセロ-α-D-ガラクト-2-ノヌロピラノソン酸メチル(Hasegawaら，19 86)(100mg)の乾燥ジメチルホルムアミド(1ml)溶液に、8-ブロモオクタン酸(41mg )とジエチルアミン(280mg)を加え、その溶液を20℃で17時間撹拌した。溶媒を真空下に除去し、残渣を酢酸エチルと氷冷５％塩化水素酸に分配した。有機層を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を留去して残渣(130mg)を得た。これを酢酸エチル(5ml)に溶解し、N-ヒドロキシスクシンイミド(26mg)とジシクロヘキシルカルボジイミド(46mg)を加えた。その混合物を20℃で17時間撹拌した後、白色の沈殿を濾去した。濾液を濃縮し、酢酸エチルを溶離液とするシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。生成物含有画分を合わせて溶媒を留去することにより、白色の泡状物97mgを得た。71％。次に挙げる化合物を同様に製造した：［(11-ウンデカン酸N-ヒドロキシスクシンイミドエステル)5-アセトアミド-4, 7,8,9-テトラ-O-アセチル-3,5-ジデオキシ-2-チオ-D-グリセロ-α-D-ガラクト-2 -ノヌロピラノシド］オン酸メチル［(酢酸N-ヒドロキシスクシンイミドエステル)5-アセトアミド-4,7,8,9-テトラ-O-アセチル-3,5-ジデオキシ-2-チオ-D-グリセロ-α-D-ガラクト-2-ノヌロピラノシド］オン酸メチル［(4-ブタン酸N-ヒドロキシスクシンイミドエステル)5-アセトアミド-4,7,8,9 -テトラ-O-アセチル-3,5-ジデオキシ-2-チオ-D-グリセロ-α-D-ガラクト-2-ノヌロピラノシド］オン酸メチル［(4-メチル安息香酸N-ヒドロキシスクシンイミドエステル)5-アセトアミド-4 ,7,8,9-テトラ-O-アセチル-3,5-ジデオキシ-2-チオ-D-グリセロ-α-D-ガラクト- 2-ノヌロピラノシド］オン酸メチル A．PAPAM［EDA］4.0[(8-オクタンアミド)-5-アセトアミド-3,5-ジデオキシ-2-チオ-D-グリセロ-α-D-ガラクト-2-ノヌロピラノシド酸]₃₂ BRI6112 不活性雰囲気下にあるPAMAM［EDA］4.0(50mg)の乾燥ジメチルスルホキシド(4m l)溶液に、[(8-オクタン酸N-ヒドロキシスクシンイミドエステル)5-アセトアミド-4,7,8,9-テトラ-O-アセチル-3,5-ジデオキシ-2-チオ-D-グリセロ-α-D-ガラクト-2-ノヌロピラノシド]オン酸メチル(300mg)を加え、その溶液を20℃で60時間撹拌した。溶媒を真空下に除去し、残渣をメタノール(2ml)に溶解した。この溶液を、メタノールを溶離液とするセファデックスLH20でのサイズ排除クロマトグラフィーにかけた。溶媒の留去により、生成物PAMAM［EDA］4.0［［(8-オクタンアミド)5-アセトアミド-4,7,8,9-テトラ-O-アセチル-3,5-ジデオキシ-2-チオ- D-グリセロ-α-D-ガラクト-2-ノヌロピラノシド］オン酸メチル］₃₂を白色粉末として得た。182mg。93％。これを次の方法で遊離のシアロシドに変換した： 20℃でアルゴン下にあるPAMAM［EDA］4.0[[(8-オクタンアミド)5-アセトアミド-4,7,8,9-テトラ-O-アセチル-3,5-ジデオキシ-2-チオ-D-グリセロ-α-D-ガラクト-2-ノヌロピラノシド]オン酸メチル]₃₂(182mg)の乾燥メタノール(3ml)溶液に、新たに調製したナトリウムメトキシドの0.19Mメタノール溶液(7ml)を加え、その混合物を2.5時間撹拌した。溶媒を留去し、残渣を水(10ml)に溶解し、３時間撹拌した。この溶液を、水を溶離液とするセファデックスLH20でのサイズ排除クロマトグラフィーにかけた。凍結乾燥により、PAPAM［EDA］4.0 [(8-オクタンアミド)-5-アセトアミド-3,5-ジデオキシ-2-チオ-D-グリセロ-α-D-ガラクト- 2-ノヌロピラノシド酸]₃₂を淡いレモン色の粉末として得た。110mg。77％。同様の手法で次に挙げる化合物を製造した： PAMAM［EDA］4.0[(11-ウンデカンアミド)-5-アセトアミド-3,5-ジデオキシ-2-チオ-D-グリセロ-α-D-ガラクト-2-ノヌロピラノシド酸]₃₂BRI6147 PAMAM［EDA］4.0[(アセトアミド)-5.アセトアミド-3,5-ジデオキシ-2-チオ-D- グリセロ-α-D-ガラクト-2-ノヌロピラノシド酸]₃₂BRI6121 PAMAM［EDA］4.0[(4-メチルベンズアミド)-5-アセトアミド-3,5-ジデオキシ-2 -チオ-D-グリセロ-α-D-ガラクト-2-ノヌロピラノシド酸]₃₂BRI6120 B．BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆[(8-オクタンアミド)-5-アセトアミド-3,5-ジデオキシ-2-チオ-D-グリセロ-α-D-ガラクト-2-ノヌロピラノシド酸]₃₂ BRI6169 トリフルオロ酢酸(2ml)とジクロロメタン(2ml)の混合物に溶液したBHAlyslys₂ lys₄lys₈lys₁₆(t-Boc)₃₂(20.3mg)を20℃で２時間撹拌した後、溶媒を真空下に除去した。残渣を乾燥ジメチルスルホキシド(1ml)に溶解し、ジイソプロピルエチルアミン(25mg)と[(8-オクタン酸N-ヒドロキシスクシンイミドエステル)5-アセトアミド-4,7,8,9-テトラ-O-アセチル-3,5-ジデオキシ-2-チオ-D-グリセロ-α-D -ガラクト2-ノヌロピラノシド]オン酸メチル(78mg)を加えた。その混合物をアルゴン下に20℃で60時間撹拌した後、溶媒を真空下に除去した。残渣を、新たに調製したナトリウムメトキシドの0.1Mメタノール溶液(2.5ml)に溶解し、その混合物をアルゴン下に20℃で３時間撹拌した。溶媒を留去し、残渣を水(1ml)に溶解して、17時間撹拌した。その溶液を、水を溶離液とするセファデックスLH20でのサイズ排除クロマトグラフィーにかけた。凍結乾燥により、生成物BHAlyslys₂ly s₄lys₈lys₁₆[(8-オクタンアミド)-5-アセトアミド-3,5-ジデオキシ-2-チオ-D-グリセロ-α-D-ガラクト-2-ノヌロピラノシド酸]₃₂を白色粉末として得た。44mg。 86％。 C．ポリ-L-リジル[(8-オクタンアミド)-5-アセトアミド-3,5.ジデオキシ-2-チオ -D-グリセロ-α-D-ガラクト2-ノヌロピラノシド酸]_n BRI6150 乾燥ジメチルスルホキシド(1ml)に溶解した分子量150〜300Kdのポリ-L-リシン臭化水素酸塩(22mg)に、ジイソプロピルエチルアミン(15mg)と[(8-オクタン酸N- ヒドロキシスクシンイミドエステル)5-アセトアミド-4,7,8,9-テトラ-O-アセチル-3,5-ジデオキシ-2-チオ-D-グリセロ-α-D-ガラクト-2-ノヌロピラノシド]オン酸メチル(90mg)を加えた。その混合物をアルゴン下に20℃で60時間撹拌した後、溶媒を真空下に除去した。残渣を、新たに調製したナトリウムメトキシドの0.5Mメタノール溶液(4ml)に溶解し、その混合物をアルゴン下に20℃で48時間撹拌した。溶媒を留去し、その残渣を水(1.5ml)に溶解し、24時間撹拌した。この溶液を、水を溶離液とするセファデックスLH20でのサイズ排除クロマトグラフィーにかけた。凍結乾燥により、生成物ポリリジル[(8-オクタンアミド)-5-アセトアミド-3,5-ジデオキシ-2-チオ-D-グリセロ-α-D-ガラクト-2-ノヌロピラノシド酸]_nを白色粉末として得た。49mg。94％。実施例29 シアル酸の４位が修飾されている樹状シアロシドの製造 4-アジド-5-アセトアミド-7,8,9−トリ-O-アセチル-2-S-アセチル-3,4,5−トリデオキシ-2-チオ-D-グリセロ-α-D-ガラクト-2-ノヌロピラノソン酸メチルを次の手順で製造した。4-アジド-5-アセトアミド-7,8,9−トリ-O-アセチル-2-クロロ-3,4,5-トリデオキシ-D-グリセロ-β-D-ガラクト-2-ノヌロピラノソン酸(Sa besan,1994)(5g)の乾燥ジクロロメタン(150ml)溶液に、チオール酢酸カリウム微粉末(5.8g)を加え、その懸濁液を20℃で48時間激しく撹拌した。その混合物を濾過し、溶媒を留去して淡褐色泡状物(5.2g)を得た。必要な生成物を調製用逆相HP LC［C₁₈，30％アセトニトリル/水］により白色泡状物(3.9g，72％)として単離した。［(8-オクタン酸N-ヒドロキシスクシンイミドエステル)4-アジド-5-アセトアミド-7,8,9−トリ-O-アセチル-3,4,5-トリデオキシ-2-チオ-D-グリセロ-α-Dガラクト-2-ノヌロピラノシド］オン酸メチルを次の手順で製造した。 4-アジド-5-アセトアミド-7,8,9−トリ-O-アセチル-2-S-アセチル-3,4,5-トリデオキシ-2-チオ-D-グリセロ-α-D-ガラクト-2-ノヌロピラノソン酸メチル(300m g)の乾燥ジメチルホルムアミド(3.5ml)溶液に、8-ブロモオクタン酸(155mg)とジエチルアミン(1.26ml)を加え、その溶液を20℃で17時間撹拌した。溶媒を真空下に除去し、残渣を酢酸エチルと氷冷10％塩化水素酸に分配した。有機層を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を留去して黄色泡状物(385mg)を得た。これを酢酸エチル(20ml)に溶解し、N-ヒドロキシスクシンイミド(95mg)とジシクロヘキシルカルボジイミド(175mg)を加えた。その混合物を20℃で17時間撹拌した後、白色沈殿物を濾去した。濾液を濃縮し、調製用逆相HPLC[C₁₈，30％アセトニトリル/水]で精製することにより、白色の泡状物(340mg，83％)を得た。Ａ．PAMAM［EDA］4.0[(8-オクタンアミド)-4-アジド-5-アセトアミド-3,4,5-トリデオキシ-2-チオ-D-グリセロ-α-D-ガラクト-2-ノヌロピラノシド酸]₃₂BRI614 6 不活性雰囲気下にあるPAMAM［EDA］4.0(72mg)の乾燥ジメチルスルホキシド(5m l)溶液に、［(8-オクタン酸N-ヒドロキシスクシンイミドエステル)4-アジド-5- アセトアミド-7,8,9−トリ-O-アセチル-3,4,5−トリデオキシ-2-チオ-D-グリセロ-α-D-ガラクト-2-ノヌロピラノシド］オン酸メチル(318mg)を加え、その溶液を20℃で60時間撹拌した。溶媒を真空下に除去し、残渣をメタノール(2ml)に溶解した。この溶液を、メタノールを溶離液とするセファデックスLH20でのサイズ排除クロマトグラフィーにかけた。溶媒の留去により、生成物PAMAM［EDA］4.0[ [(8-オクタンアミド)4-アジド-5-アセトアミド-7,8,9-トリ-O-アセチル-3,4,5- トリデオキシ-2-チオ-D-グリセロ-α-D-ガラクト-2-ノヌロピラノシド]オン酸メチル]₃₂を白色の泡状物(225mg，81％）として得た。遊離のシアロシドは次の方法で得た：アルゴン下20℃にあるPMAM［EDA］4.0[[(8-オクタンアミド)4-アジド-5-アセトアミド-7,8,9-トリ-O-アセチル-3,4,5-トリデオキシ-2-チオ-D-グリセロ-α-D -ガラクト-2-ノヌロピラノシド]オン酸メチル]₃₂(215mg)の乾燥メタノール(1ml) 溶液に、新たに調製したナトリウムメトキシドの1Mメタノール溶液(1ml)を加え、その混合物を３時間撹拌した。溶媒を留去し、残渣を水(2ml)に溶解し、17時間撹拌した。その溶液を、水を溶離液とするセファデックスLH20でのサイズ排除クロマトグラフィーにかけた。凍結乾燥により、生成物PAMAM［EDA］4.0[(8-オクタンアミド)-4-アジド-5-アセトアミド-3,4,5-トリデオキシ-2-チオ-D-グリセロ-α-D-ガラクト-2-ノヌロピラノシド酸]₃₂を綿毛状の白色粉末(160mg，90％) として得た。 B．PAMAM［EDA］4.0[(8-オクタンアミド)-4-アミド-5-アセトアミド-3,4,5-トリデオキシ-2-チオ-D-グリセロ-α-D-ガラクト-2-ノヌロピラノシド酸]₃₂BRI6149 ピリシン(40ml)と水(20ml)の混合液に溶解したPAMAM［EDA］4.0[(8-オクタンアミド)-4-アジド-5-アセトアミド-3,4,5-トリデオキシ-2-チオ-D-グリセロ-α-D-ガラクト-2-ノヌロピラノシド酸]₃₂(25mg)に、20℃で５日間、硫化水素ガスの気流をゆっくりと通過させた。次に過剰の硫化水素を除去するため、その溶液中に窒素を２時間吹込んだ。その溶液を蒸発乾固し、残渣を水(5ml)に取り出し、0.45μｍ膜フィルターに通すことによって硫黄を除去した。凍結乾燥により、生成物PAMAM[EDA]4.0[(8-オクタンアミド)-4-アミノ-5-アセトアミド-3,4,5 -トリデオキシ-2-チオ-D-グリセロ-α-D-ガラクト-2-ノヌロピラノシド酸]₃₂を綿毛状の白色粉末(23mg，96％)として得た。実施例30 ボロン酸末端型デンドリマーの製造 4-カルボキシフェニルボロン酸N-ヒドロキシスクシンイミドエステル 4-カルボキシフェニルボロン酸(500mg)の乾燥ジメチルホルムアミド(5ml)溶液にN-ヒドロスクシンイミド(380mg)とジシクロヘキシルカルボジイミド(680mg)を加えた。その混合物を20℃で64時間撹拌した後、白色沈殿物を濾去した。溶媒を真空下に除去し、残渣を酢酸エチル(100ml)に溶解した。その溶液を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を留去することにより白色固体を得て、それをアセトニトリル/水から細かい針状物(730mg，92％）として結晶化した。 PAMAM［EDA］4.0[4-ベンズアミドボロン酸]₃₂BRI6160 不活性雰囲気下にあるPAMAM［EDA］4.0(69mg)の乾燥ジメチルスルホキシド(5m l)溶液に4-カルボキシフェニルボロン酸N-ヒドロキシスクシンイミドエステル(1 30mg)を加え、その溶液を20℃で65時間撹拌した。その濃厚なスラリーに1M炭酸ナトリウム溶液(1ml)を加え、その透明な溶液をさらに24時間撹拌した。溶媒を真空下に除去し、残渣を10％アンモニア溶液(5ml)に溶解した。その溶液を、10 ％アンモニア溶液を溶離液とするセファデックスLH20でのサイズ排除クロマトグラフィーにかけた。溶媒の留去により、生成物PAMAM［EDA］4.0[4-ベンズアミドボロン酸]₃₂を白色の綿毛状固体(110mg，94％)として得た。実施例31 3,6-ジスルホナフチルチオウレアナトリウム塩末端型デンドリマーの製造 BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆lys₃₂ BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆DBL₃₂(147mg)の乾燥ジクロロメタン(2ml)懸濁液を撹拌したものにトリフルオロ酢酸(2ml)を加え、得られた溶液を窒素下に室温で２時間撹拌した後、濃縮した。残渣をN,N-ジメチル-N-アリルアミン緩衝液(pH9.5 ；５ml)に溶解した後、固形3,6-ジスルホナフチルイソチオシアネート(400mg)を加えた。次にその混合物のpHを1M炭酸ナトリウムの添加によって9.5に調節し、その溶液を窒素下に53℃で３時間加熱した。その反応混合物を濃縮し、残渣を水に再溶解し、その溶液をアンバーライトIR120(Na)のカラムに通した。濾液を濃縮して得た粗生成物をゲル濾過（セファデックスLH20；水)で精製することにより、64個の3,6-ジスルホナフチルウレア(ナトリウム塩)基を持つBHAlyslys₂lys₄ lys₈lysl₁₆lys₃₂を白色の綿毛状固体(175mg)として得た。実施例32 3,5-ジスルホフェニルチオウレアナトリウム塩末端型デンドリマーの製造 BHAlyslys₂lyｓ₄lys₈lys₁₆lys₃₂ BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆DBL₃₂(300mg)の乾燥ジクロロメタン(3ml)懸濁液を撹拌したものにトリフルオロ酢酸(3ml)を加え、得られた溶液を窒素下に室温で２時間撹拌した後、濃縮した。残渣を水に溶解し、その溶液をアンバーライトIRA4 01(OH)のカラムに通し、濾液を濃縮して粘稠な油状物(187mg)を得た。その油状物をピリシン/水１：１混合液(8ml)に溶解し、固形3,5-ジスルホフェニルイソチオシアネート(680mg；2mmol)を加えた。得られた溶液を窒素下に53℃で３時間加熱した。，次にその溶液を濃縮して白色固体残渣を得た。その粗生成物をゲル濾過（セファデックスLH20；水)で精製することにより、64個の3,5-ジスルホフェニルウレア(ナトリウム塩)基を持つBHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆lys₃₂を白色の綿毛状固体として得た。実施例33 3,5-ジカルボキシフェニルチオウレアナトリウム塩末端型デンドリマーの製造 BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆lys₃₂ BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆DBL₃₂(300mg；0.2mmol)の乾燥ジクロロメタン(3ml) 懸濁液を撹拌したものにトリフルオロ酢酸(3ml)を加え、得られた溶液を窒素下に室温で２時間撹拌した後、濃縮した。残渣を水に溶解し、その溶液をアンバーライトIRA401(OH)のカラムに通し、濾液を濃縮して粘稠な油状物(186mg)を得た。その油状物をピリシン/水１：１混合液(8ml)に溶解し、3,5-ジカルボキシフェニルイソチオシアネートナトリウム塩(450mg；2mmol)を加えた。得られた溶液を窒素下に53℃で13時間加熱した。次にその溶液を濃縮して白色固体残渣を得た。その粗生成物をゲル濾過（セファデックスLH20；水)で精製することにより、64 個の3,6-ジカルボキシフェニルウレア(ナトリウム塩)基を持つBHAlyslys₂lys₄ly s₈lys₁₆lys₃₂を白色の綿毛状固体として得た。実施例34 4-ホスホノオキシフェニルチオウレアナトリウム塩末端型デンドリマーの製造 BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆lys₃₂ BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆DBL₃₂(147mg;0.01mmol)の乾燥ジクロロメタン(2ml) 懸濁液を撹拌したものにトリフルオロ酢酸(2ml)を加え、得られた溶液を窒素下に室温で２時間撹拌した後、濃縮することにより、粘稠な油状物を得た。その油状物をN,N-ジメチル-N-アリルアミン緩衝液(pH9.5；5ml)に溶解し、固形4 -ホスホノオキシフェニルイソチオシアネート(250mg)を加えた。得られた溶液の pHを1M炭酸ナトリウムで10に調節し、その混合物を窒素下に53℃で３時間加熱した。次にその溶液を濃縮して白色固体残渣を得た。その残渣を水に再溶解し、その溶液をアンバーライトIR120(Na)のカラムに通し、濾液を濃縮した。次に、その残渣をゲル濾過(セファデックスLH20；水)で精製することにより、64個の4-ホスホノオキシフェニルウレア(ナトリウム塩)基を持つBHAlyslys₂yls₄lys₈lys₁₆l ys₃₂を白色の綿毛状固体(150mg)として得た。実施例35 4-ホスホノフェニルチオウレアナトリウム塩末端型デンドリマーの製造 BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆lys₃₂ BHAlyslys₂lys₄lys₈lys₁₆DBL₃₂(147mg；0.０₁mmol)の乾燥ジクロロメタン(2ml )懸濁液を撹拌したものにトリフルオロ酢酸(2ml)を加え、得られた溶液を窒素下に室温で２時間撹拌した後、濃縮することにより、粘稠な油状物を得た。その油状物をN,N-ジメチル-N-アリルアミン緩衝液(pH9.5；5ml)に溶解し、固形4 -ホスホノフェニルイソチオシアネート(250mg)を加えた。得られた溶液のpHを炭酸水素ナトリウム飽和溶液で９に調節し、その混合物を窒素下に53℃で３時間加熱した。次にその溶液を濃縮して白色固体残渣を得た。その残渣を水に再溶解し、その溶液をアンバーライトIR120(Na)のカラムに通し、濾液を濃縮した。次に残渣をゲル濾過(セファデックスLH20；水)で精製して、凍結乾燥することにより、64個の4-ホスホノフェニルウレア(ナトリウム塩)基を持つBHAlyslys₂lys₄lys₈ lys₁₆lys₃₂BRI6196を白色の綿毛状固体(152mg)として得た。実施例36 4,6-ジホスホノナフチルチオウレアナトリウム塩末端型デンドリマーの製造 PAMAM4.0 4,6-ジホスホノナフチルイソチオシアネート(165mg)の水(2ml)溶液を、PAMAM4 .0(51mg;0.01mmol)の水(2ml)溶液に加えた。その混合物のpHを炭酸水素ナトリウム飽和溶液で9.5に調節し、その混合物を室温で１時間激しく撹拌した後、窒素下に53℃で３時間加熱した。次にその混合物を濾過し、濾液を濃縮して褐色の固体残渣を得た。その粗生成物をゲル濾過（セファデックスG25；水)で精製し、凍結乾燥することにより、24個の4,6-ジホスホノナフチルチオウレア(ナトリウム塩)基を末端に持つPAMAM4.0を褐色固体(81mg)として得た。実施例37 フルオレセインチオウレア末端型デンドリマーの製造 PAMAM4.0(EDA) PAMAM4.0(EDA)(74mg；0.01mmol)の水(3ml)溶液に固形フルオレセインイソシアネート(188mg)を加えた。炭酸水素ナトリウム飽和溶液を加えてpHを９に調節し、得られた均一溶液を室温で終夜撹拌してから濃縮した。その橙色の残渣をゲル濾過(セファデックスLH20；水)で精製し、凍結乾燥することにより、21個のフルオレセインチオウレア基を末端に持つPAMAM4.0(EDA)を綿毛状の橙色固体(193mg) として得た。実施例38 (フェニル-3-ボロン酸)チオウレアナトリウム塩末端型デンドリマーの製造 PAMAM4.0(EDA) PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)の水(5ml)溶液に固形(フェニル-3-ボロン酸) イソチオシアネート(100mg；0.5mmol)を加えた。1M炭酸ナトリウムを加えて該イソチオシアネートを溶解した(pH約10)。次にその混合物を窒素下に53℃で２時間加熱した後、濾過し、濾液を濃縮して茶色がかった固体残渣を得た。その粗生成物をゲル濾過(セファデックスLH20；水)で精製し、凍結乾燥することにより、32 個の(フェニル-3-ボロン酸)チオウレア基を末端に持つPAMAM4.0(EDA)を白色の綿毛状固体(87mg)として得た。実施例39 3,5-ジカルボキシフェニルチオウレアナトリウム塩末端型ポリリシンの製造ポリ-L-リシン臭化水素酸塩(4-15K)(Simga Chemical Company)(50mg)の水(2ml)溶液を、3,5-ジカルボキシフェニルイソチオシアネートナトリウム塩(305mg)の水( 3ml)溶液に加え、得られた溶液のpHを炭酸水素ナトリウム水溶液で９に調節した。次にその溶液を窒素下に53℃で４時間加熱した。その溶液を冷却、濾過し、濾液を濃縮して灰白色固体残渣を得た。その粗生成物をゲル濾過(セファデックスL H20；水)で精製し、凍結乾燥して、3,5-ジカルボキシフェニルチオウレアナトリウム塩末端型ポリ-L-リシンを白色の綿毛状固体(71mg)として得た。実施例40 4-(ホスホノメチル)フェニルチオウレアナトリウム塩末端型ポリリシンの製造ピリシン/水１：１混合液に溶解したポリ-L-リシン臭化水素酸塩(30-70K)(シグマ・ケミカル・カンパニー)(50mg)に固形4-(ホスホノメチル）フェニルイソチオシアネート(231mg；1.0mmol)を加えた。その混合物のpHを1M炭酸ナトリウムで 9.5に調節し、その溶液を窒素下に53℃で終夜加熱した。その混合物を冷却、濾過し、濾液を濃縮して褐色の固体残渣を得た。その粗生成物をゲル濾過(セファデックスLH20；水)で精製して、褐色固体(82mg)を得た。実施例41 1-ホスホノオキシフェニル-4-チオウレア末端型ポリ-L-リシンの製造 53℃で加熱撹拌したポリ-L-リシン臭化水素酸塩(50mg；シグマP2636，30-70キロダルトン)の水(10ml)溶液に、4-ホスホノオキシフェニルイソチオシアネート( 153mg)を加え、その混合物のpHを1M炭酸ナトリウム溶液で9.5〜10に調節した。その混合物を53℃で５時間加熱撹拌した後、濾過した。その透明な溶液を、水を溶離液とするセファデックスLH20でのゲル濾過によって精製した。溶出液を凍結乾燥して生成物を白色の泡状物として得た。77mg，94％。実施例42 ベンズアミド-4-ボロン酸末端型ポリ-L-リシンの製造ポリ-L-リシン臭化水素酸塩(50mg；シグマP2636，30-70キロダルトン)のDMSO( 10ml)溶液に、不活性雰囲気下で、4-カルボキシフェニルボロン酸N-ヒドロキシスクシンイミドエステル(90mg)と1M炭酸ナトリウム溶液(2ml)を加え、その混合物を20℃で60時間撹拌した。溶媒を真空下に除去し、残渣を水(5ml)に溶解して濾過した。その透明な溶液を、水を溶離液とするヤファデックスLH20でのゲル濾過によって精製した。溶出液を凍結乾燥することにより、生成物を白色の泡状物として得た。50mg，90％。実施例43 Ｉ．漿尿膜(CAM)アッセイフォークマン(1985)によって最初に開示されマラゴウダキス(Maragoudakis)ら (1988)によって改良されたインビボCAM血管形成モデルを使用した。簡単に述べると、新鮮な受精卵を37℃で４日間インキュベートした後、卵殼に窓(ウインド) をあけてCAMを露出させた。このウインドをセロファンテープで覆い、卵を孵卵器に戻して第９日まで置き、この田こ試験化合物を適用した。試験化合物は滅菌プラスチックディスク(10mm)に載せて滅菌条件下に乾燥させた。対照ディスク(P BS含有)は試験物質を含むディスクから1cm離してCAM上においた。炎症反応を防ぐため、全てのディスクに酢酸コルチゾン(100μｇ/ディスク，シグマ)の滅菌溶液を含めた。化合物を含ませ、乾燥させたディスクを裏返しにして、CAMに載せ、ウインドを覆って卵を第11日まで保温し、この日に血管形成を評価した。 CAMアッセイにおける血管形成の形態学的評価形態学的評価のために卵を上述のように処置した。第11日に卵を10％緩衝ホルマリン(ジャンセン・キミカ(Janssen Chimica)，ベルギー・ヘール)で満たし、プラスチックディスクを取り除き、卵を少なくとも４時間、室温に維持した。ディスクの周囲を広く切り取ってガラススライド上に置き、血管密度指数(血管数として表される)をハリスーフーカー(Harris-Hooker)らの方法(1983)で測定した。 II．ラット大動脈アッセイニコシア(Nicosia)ら(1990)が初めて報告したラット大動脈リングモデルを使用した。簡単に述べると、アガロース(ファルマシア・バイオテックAB，スウェーデン・ウプサラ)の滅菌1.5％溶液を培養皿に注ぎ、ゲル化させた。そのアガロースゲルにそれぞれ直径10mmと17mmの同心円を２つパンチすることによってアガロースリングを作った。そのリングの内側と外側の余分なアガロースを取り除いた。そのリングを６ウェルプレート（ナウンシオン(Nuncion)，デンマーク・ロスキレ)の各ウェルに３つずつ移した。３月齢の雄ウィスターラットから胸部大動脈を得た。大動脈は直ちに無血清最少必須培地(MEM)を入れた培養皿に移した。大動脈壁を傷つけるため、大動脈の周囲の線維脂肪組織を注意深く取り除いた。大動脈リングの薄い切片(厚さ0.5mm)を切出し、無血清培地で連続して12回洗浄することで十分にすすいだ。その大動脈リングを培養プレート中の培養リングに移す前に、各アガロースウェルの底部を150μｌの凝固性フィブリノゲンで被覆した。フィブリンゲルが形成し終わった後、大動脈リングをそのアガロースウェルに移し、アガロースウェルの中心に据えた。次にそのアガロースウェルを凝固性フィブリノゲンで完全に満たした。部分精製ウシフィブリノゲン(シグマ)を無血清培地に溶解して濃度を3mg/mlにした。フィブリノゲン溶液lmlに50μｌ/ml ウシトロンビン溶液(シグマ)20μｌを添加することによって凝固させた。フィブリンゲルは室温で30秒以内に形成された。フィブリンがゲル化した後、20％ＦＣＳ(ギブコ)、10mM Hepes(ギブコ)および1mM L-グルタミン(ギブコ)を補足したME M培地6mlを６ウェルプレートの各ウェルに加え、その培地に試験化合物を適当な濃度で添加した。ラット大動脈リングアッセイのための血管形成定量法培養物を倒立顕微鏡下に毎日検査し、採点した。微小血管の成長は微小血管成長曲線を使って表わす。微小血管ネットワークの三次元的錯綜のため、200〜250 を超える微小血管の形成が一般的である(Nicosiaら，1990)。微小血管数を数える観察者による誤差が大きいので、形成した微小血管は0(血管なし)から10(最大血管数)までの尺度で採点した。結果 I.CAMアッセイ・BRI2995とBRI6112はより高い濃度(50pglcam)でも評価したが、BRI2995の場合は50％の胚が死んだ。生き残った卵は73％の血管密度抑制を示した。 BRI6112はこの濃度で毒性を示さなかった。しかし観測された血管密度の抑制はわずかだった(−16％）。臨床試験が行われている２種類の化合物、TNP-470(50μ/cam)とポリ硫酸ペントサン(PPS)(50μｇ)を参照化合物として含めた。これらは血管密度をそれぞれ2 1％±16および42％±28の減少させた。しかしPPSはこの濃度で胚の80％を死なせた。 II. ラット大動脈アッセイ BRI2995、BRI2996およびBRI2999は20μｇ/mlおよび100μｇlmlの濃度で (ほとんど)完全に微小血管の形成を抑制した。 BRI6196は20μｇ/mlと100μｍｇ/mlでほぼ完全な抑制を示し、また４μｇ/ml でも抑制を示した。 BRI2923とBRI6039は100μｇ/mlの濃度で微小血管の成長を減少させた。参考文献：１．フォークマン(Folkman J.)(1985)ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー(J.Biol.Chem.)267:10931-10934 ２．ハリスーフーカー(Harris-Hooker S.A.)ら(1983)ジャーナル・オブ・セル・フィジオロジー(J.Cell.Physiol).114:302-310 ３．ハセガワ(Hasegawa A.)ら(1986)ジャーナル・オブ・カーボハイドレート・ケミストリー(J．Carbohydrate Chemistry).5(1)：11-19 ４．マラゴウダキス(Maragoudakis M.E.)ら(1988)テシュー・セル(Tissue Cell. ) 20:531-539 ５．ニコシアとオティネッティ(Nicosia R.F.and ttinetti A.)(1990)セル・デヴェロップメント・バイオロジー(Cell Dev.Bio.)26:119-128 ６．サベサン(Sabesan S.)(1994)バイオーオーがニック・アンド・メディシナル・ケミストリー・レターズ(Bio-Organic and Medicinal Chemistry Letters.)4( 20):2457-2460

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ

Claims

【特許請求の範囲】１．患者にｉ．多数の側鎖基を有する直鎖状非炭水化物ポリマーであって、その側鎖基の少なくとも一つにアニオンまたはカチオン含有部分が結合もしくは連結しているもの、および ii．多数の末端基を持つデンドリマーであって、その末端基の少なくとも一つにアニオンまたはカチオン含有部分が結合もしくは連結しているものから選択される化合物の有効量を投与することからなる、ヒトまたはヒト以外の動物である患者における、予防的または治療的血管形成抑制方法。２．該化合物が次に示す一般式Ｉの直鎖状ポリイオン性ポリマーである請求項１記載の方法：［式中、Ｒは直鎖状ポリマー骨格を形成する非炭水化物モノマー単位、Ｘはモノマー単位Ｒの側鎖基上の任意の連結基、およびＡはアニオン含有部分を表わす］。３．直鎖状ポリマーの分子量分布のメジアン値が1,000から1,000,000である，請求項２記載の方法．４．分子量分布のメジアン値が10,000から600,000である、請求項３記載の方法。５．該直鎖状ポリマーにおいて該モノマー単位Ｒがアミン部分またはアミド部分である請求項２記載の方法。６．該直鎖状ポリマーにおいて該モノマー単位Ｒがリシンまたは他のアミノ酸部分である請求項５記載の方法。７．該直鎖状ポリマーにおいて、該連結基Ｘが存在する場合、それがエステル、アミド、エーテル、チオエーテル、アミン、ウレア、チオウレア、カーバメートおよび炭酸エステルからなる群より選択される機能性連結基である請求項２記載の方法。８．該直鎖状ポリマーにおいて、該連結基Ｘが存在する場合、それが置換基または分枝を持ってもよいアルキル鎖、置換されていてもよいアルコキシ、ポリアルコキシ、アルキルチオまたはポリアルキルチオ鎖、置換されていてもよいアルケニル、多重アルケニル、アルキニルまたは多重アルキニル鎖、および式：-(CH₂ )_n-2-(CH₂)_n-(式中、Ｃは-CH₂-、CH=CH-、-Ｃ≡Ｃ-、-Ｏ-または-Ｓ-を表わし、ｎは１から15までの整数である)からなる群より選択されるスペーサー基である請求項２記載の方法。９．該化合物が、少なくとも２つの樹状分岐構造に共有結合した多価コアを含みかつ少なくとも二世代にわたって広がっているデンドリマーである請求項１記載の方法。 10．該デンドリマーがアンモニアコアに基くポリアミドアミンデンドリマーである請求項９記載の方法。 11．該デンドリマーがエチレンジアミンコアに基くポリアミドアミンデンドリマーである請求項９記載の方法。 12．該デンドリマーがベンズヒドリルアミンまたは他の適当なコアに基くポリリシンデンドリマーである請求項９記載の方法。 13．該化合物が次に示す一般式IIのポリイオン性デンドリマーである請求項９記載の方法：［式中、Ｉはイニシエーター、Ｚは内部分岐単位、ｎはデンドリマーの世代数を表わす整数である；またＡはアニオン含有部分を表わし、これは任意の連結基Ｘを介して内部分岐単位Ｚに連結されていてもよい］。 14．該化合物において１または複数の該アニオンまたはカチオン含有部分がアミド結合またはチオウレア結合によって直鎖状ポリマーまたはデンドリマーのアミン、スルフヒドリル、ヒドロキシまたは他の反応性機能性側鎖または末端基に結合している請求項1〜13のいずれかに記載の方法。 15．該化合物において該アニオン含有部分が、スルホン酸含有部分、カルボン酸含有部分(ノイラミン酸含有部分、シアル酸含有部分、修飾ノイラミン酸含有部分および修飾シアル酸含有部分を含む)、ボロン酸含有部分、リン酸含有部分およびホスホン酸含有部分(エステル化されたリン酸含有部分およびホスホン酸含有部分を含む)からなる群より選択される請求項1〜14のいずれかに記載の方法。 16．該化合物において、直鎖状ポリマーまたはデンドリマーのアミノまたは他の反応性機能性側鎖または末端基に結合している１または複数の部分が次に挙げる基(式中、ｎは０または正の整数を表わす)から選択される請求項1〜15のいずれかに記載の方法： ―NH(CH₂)_nSO₃ ^- ―(CH₂)_nSO₃ ^- ―AR(SO₃ ^-)_n ―CH₂CH(SO₃ ^-)COOH ―CH(SO₃ ^-)CH₂COOH ArX(CH₂)_nSO₃ ^- X=O，S，NH ―(CH₂)_n ⁺NMe₃ ―Ar(N⁺Me₃)_n ―Ar(CH₂N⁺Me₃)_n ―ArXP(=O)(OR)₂ X=O，CH₂，CHF，CF₂ R=アルキル、アリール、H，Na ―ArXP(=O)(OR¹)(NR²R³) X=O，CH₂，CHF，CF₂ R¹=アルキル、アリール,H，Na 、R²，R³=アルキル、アリール ―Ar[P(=O)(OR)₂]_n R=アルキル、アリール、H，Na n=1-3 ―Ar[B(OH)₂]_n n=1-3 ―Ar[COOH]_n n=1-3 17．該化合物が次に挙げる化合物からなる群より選択される請求項１または請求項２記載の方法：ｉ．4-スルホフェニルチオウレア末端型ポリ-Ｌ-リシン； ii．3,6-ジスルホナフチルチオウレア末端型ポリ-Ｌ-リシン； iii．(8-オクタミド)-5-アセトアミド-3,5-ジデオキシ-2-チオ-Ｄ-グリセロ- α-Ｄ-ガラクト-2-ノヌロピラノシド酸末端型ポリ-Ｌ-リシン； iv．3,5-ジカルボキシフェニルチオウレア末端型ポリ-Ｌ-リシン；ｖ．4-(ホスホノメチル)フェニルチオウレア末端型ポリ-Ｌ-リシン； vi．1-ホスホノオキシフェニル-4-チオウレア末端型ポリ-Ｌ-リシン；および vii．ベンズアミド-4-ボロン酸末端型ポリ-Ｌ-リシン。 18．該化合物が次に挙げる化合物からなる群より選択される請求項１または請求項９記載の方法：ｉ．アルキルスルホン酸末端型デンドリマー； ii．スルホアセトアミド末端型デンドリマー； iii．スルホスクシンアミド酸末端型デンドリマー； iv．Ｎ-(2-スルホエチル)スクシンアミド末端型デンドリマー；ｖ．4-スルホフェニルチオウレア末端型デンドリマー； vi．3,6-ジスルホナフチルチオウレア末端型デンドリマー； vii．4-スルホナフチルチオウレア末端型デンドリマー； viii．3,5-ジスルホフェニルチオウレア末端型デンドリマー： ix．3,6,8-トリスルホナフチルチオウレア末端型デンドリマー：ｘ．4-(スルホメチル)ベンズアミド末端型デンドリマー： xi．4-スルホベンズアミド末端型デンドリマー； xii．Ｎ-(4-スルホフェニル)プロパンアミド末端型デンドリマー； xiii．4-スルホフェニルウレア末端型デンドリマー； xiv．Ｎ,Ｎ,Ｎ-トリメチルグリシンアミド末端型デンドリマー； xv．4-トリメチルアンモニウムベンズアミド末端型デンドリマー； xvi．4-(トリメチルアンモニウムメチル)ベンズアミド末端型デンドリマー； xvii．Ｎ-(2-アセトキシエチル)-Ｎ,Ｎ-(ジメチルアンモニウム)メチルカルボキシアミド末端型デンドリマー； xviii．グアニジノ末端型デンドリマー； xix．4-(［1,4,8,11-テトラアザシクロテトラデカン］メチル)ベンズアミド末端型デンドリマー； xx．4-カルボキシ-3-ヒドロキシベンジルアミン末端型デンドリマー； xxi．4-カルボキシフェニルアミド末端型デンドリマー； xxii．3,5-ジカルボキシフェニルアミド末端型デンドリマー； xxiii．4-ホスホノオキシフェニルチオウレア末端型デンドリマー； xxiv．4-(ホスホノメチル)フェニルチオウレア末端型デンドリマー； xxv．エチル-4-(ホスホノメチル)フェニルチオウレア末端型デンドリマー； xxvi．(8-オクタンアミド)-5-アセトアミド-3,5-ジデオキシ-2-チオ-Ｄ-グリセロ-α-Ｄ-ガラクト-2-ノヌロピラノシド酸末端型デンドリマー； xxvii．(11-ウンデカンアミド)-5-アセトアミド-3,5-ジデオキシ-2-チオ-Ｄ- グリセロ-α-Ｄ-ガラクト-2-ノヌロピラノシド酸末端型デンドリマー； xxviii．(アセトアミド)-5-アセトアミド-3,5-ジデオキシ-2-チオ-Ｄ-グリセロ-α-Ｄ-ガラクト-2-ノヌロピラノシド酸末端型デンドリマー； xxix．(4-ブタンアミド)-5-アセトアミド-3,5-ジデオキシ-2-チオ-Ｄ-グリセロ-α-Ｄ-ガラクト-2-ノヌロピラノシド酸末端型デンドリマー； xxx．(4-メチルベンズアミド)-5-アセトアミド-3,5-ジデオキシ-2-チオ-Ｄ-グリセロ-α-Ｄ-ガラクト-2-ノヌロピラノシド酸末端型デンドリマー； xxxi．(8-オクタンアミド)-4-アジド-5-アセトアミド-3,4,5-トリデオキシ-2- チオ-Ｄ-グリセロ-α-Ｄ-ガラクト-2-ノヌロピラノシド酸末端型デンドリマー； xxxii．(8-オクタンアミド)-4-アミノ-5-アセトアミド-3,4,5-トリデオキシ-2 -チオ-Ｄ-グリセロ-α-Ｄ-ガラクト-2-ノヌロピラノシド酸末端型デンドリマー； xxxiii．4-ベンズアミドボロン酸末端型デンドリマー； xxxiv．3,5-ジカルボキシフェニルチオウレア末端型デンドリマー； xxxv．4-ホスホノフェニルチオウレア末端型デンドリマー； xxxvi．4,6-ジホスホノナフチルチオウレア末端型デンドリマー； xxxvii．フルオレセインチオウレア末端型デンドリマー；および xxxviii．(フェニル-3-ボロン酸)チオウレア末端型デンドリマー。 19．該処置が、患者における血管形成の抑制、慢性炎症、糖尿病性網膜症、乾癬、慢性関節リウマチおよび新血管の成長が関与するその他の症状の処置、血管平滑筋細胞増殖の抑制による再狭窄の防止、細胞外マトリックスに貯蔵された活性型増殖因子の放出の活性化による創傷治癒の促進、および血管形成の抑制による腫瘍細胞転移の抑制を含む請求項1〜18のいずれかに記載の方法。 20．請求項1〜18のいずれかに規定したアニオン性またはカチオン性直鎖状ポリマーまたはデンドリマーを少なくとも一つの医薬的または獣医学的に許容できる担体または希釈剤と共に含む、ヒトまたはヒト以外の動物における血管形成の予防的または治療的抑制用医薬組成物または獣医用組成物。 21．ヒトまたはヒト以外の動物における予防的または治療的血管形成抑制処置、または該処置のための医薬の製造における請求項1〜18のいずれかに規定したアニオン性またはカチオン性直鎖状ポリマーまたはデンドリマーの使用。 22．多数の末端基を持つデンドリマーを含んでなる化合物であって、該末端基の少なくとも一つがそれに結合または連結したアニオン含有部分を持ち、該アニオン含有部分が、ｉ．2-チオシアル酸部分以外のノイラミン酸含有部分およびシアル酸含有部分； ii．修飾されたノイラミン酸含有部分およびシアル酸含有部分； iii．ボロン酸含有部分；および iv．エステル化されたリン酸含有部分およびホスホン酸含有部分を含む、リン酸含有部分およびホスホン酸含有部分からなる群より選択される化合物。 23．該デンドリマーが少なくとも２つの樹状分岐構造に共有結合した多価コアを含みかつ少なくとも二世代にわたって広がっている請求項22記載の化合物。 24．該デンドリマーがアンモニアコアに基くポリアミドアミンデンドリマーである請求項22または請求項23記載の化合物。 25．該デンドリマーがエチレンジアミンコアに基くポリアミドアミンデンドリマーである請求項22または請求項23記載の化合物。 26．該デンドリマーがベンズヒドリルアミンまたはその他の適当なコアに基くポリリシンデンドリマーである請求項22または23記載の化合物。 27．該アニオン含有部分がアミド結合またはチオウレア結合によって該デンドリマーの末端アミン、スルフヒドリル、ヒドロキシまたはその他の反応性末端官能基に結合している請求項22〜28のいずれかに記載の化合物。 28．i．4-ホスホノオキシフェニルチオウレア末端型デンドリマー； ii．4-(ホスホノメチル)フェニルチオウレア末端型デンドリマー； iii．エチル-4-(ホスホノメチル)フェニルチオウレア末端型デンドリマー； iv．(8-オクタンアミド)-5-アセトアミド-3,5-ジデオキシ-2-チオ-Ｄ-グリセロ-α- Ｄ-ガラクト-2-ノヌロピラノシド酸末端型デンドリマー；ｖ．(11-ウンデカンアミド)-5-アセトアミド-3,5-ジデオキシ-2-チオ-Ｄ-グリセロ-α-Ｄ-ガラクト-2-ノヌロピラノシド酸末端型デンドリマー； vi．(アセトアミド)-5-アセトアミド-3,5-ジデオキシ-2-チオ-Ｄ-グリセロ-α -Ｄ-ガラクト-2-ノヌロピラノシド酸末端型デンドリマー； vii．(4-ブタンアミド)-5-アセトアミド-3,5-ジデオキシ-2-チオ-Ｄ-グリセロ -α-Ｄ-ガラクト-2-ノヌロピラノシド酸末端型デンドリマー； viii．(4-メチルベンズアミド)-5-アセトアミド-3,5-ジデオキシ-2-チオ-Ｄ- グリセロ-α-Ｄ-ガラクト-2-ノヌロピラノシド酸末端型デンドリマー； ix．(8-オクタンアミド)-4-アジド-5-アセトアミド-3,4,5-トリデオキシ-2-チオ-Ｄ-グリセロ-α-Ｄ-ガラクト-2-ノヌロピラノシド酸末端型デンドリマー；ｘ．(8-オクタンアミド)-4-アミノ-5-アセトアミド-3,4,5-トリデオキシ-2-チオ-Ｄ-グリセロ-α-Ｄ-ガラクト-2-ノヌロピラノシド酸末端型デンドリマー； xi．4-ベンズアミドボロン酸末端型デンドリマー； xii．4-ホスホノフェニルチオウレア末端型デンドリマー； xiii．4,6-ジホスホノナフチルチオウレア末端型デンドリマー；および xiv．(フェニル-3-ボロン酸)チオウレア末端型デンドリマーからなる群より選択される請求項22記載の化合物。