JP2002000283A - カンジダ菌種の高塩耐性突然変異体によりエリスリトールを製造するための発酵方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】本発明は、カンジダ菌種の塩耐性突然変異体
［カンジダ・マグノリアエ(Candida magnoliae) SR101:
KCCM-10160］を用いてエリスリトールを高い生産性で
製造するための発酵方法に関する。 【解決手段】培養の環境条件、例えば培地成分、ｐＨ、
温度、通気率および撹拌速度などを最適化することによ
り、エリスリトールを最大限に産生させる最適発酵条件
下でエリスリトールを製造する発酵方法による。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、カンジダ菌種の塩
耐性突然変異体［カンジダ・マグノリアエ(Candida mag
noliae) SR101: KCCM-10160］を用いてエリスリトール
を高い生産性で製造するための発酵方法に関し、更に詳
しくは、培養の環境条件、例えば培地成分、ｐＨ、温
度、通気率および撹拌速度などを最適化して、エリスリ
トールを最大限に産生させる最適条件下でエリスリトー
ルを製造するための発酵方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】四炭素糖アルコールの一つであるエリス
リトールは天然に存在する物質であり、自然界に広く分
布している。他の大部分のポリオールと同様に、これは
海草およびマッシュルームの代謝物質または貯蔵化合物
である。メロン、ブドウおよび西洋梨のような果実もま
たエリスリトールを含有している。エリスリトールは、
多くの場合バクテリア、菌類および酵母によって産生さ
れるので、ワインまたはビールのような発酵食品系、お
よび加工野菜、例えば醤油または東洋ビーンペーストた
る味噌の中にも、しばしば存在している。

【０００３】エリスリトールは、１０％溶液でショ糖の
６０〜７０％の甘さを有する中甘味性増量剤である。そ
の高い正の溶液エンタルピーは、結晶性物質に強い冷却
効果を与える。エリスリトールはショ糖に極めて近い味
を持ち、苦い後味がないので、アスパルテームのような
強甘味料と組み合わせて味を改善するのに理想的であ
る。

【０００４】分子が小さいため、エリスリトールは強い
束一性、即ち強い氷点降下および沸点上昇効果だけでな
く、高い浸透圧を有する。その低い吸湿性および溶液粘
度が相まって、食品の水分活性を低下させたり制御する
のに極めて有用である。その天然起源、例えば果実およ
び野菜からのエリスリトールの生産は、量が比較的少な
いので実際的ではない。エリスリトールは、メソ−酒石
酸塩の還元、4,6-o-エチリデン-D-グルコースの酸化お
よび還元、デアルデヒド澱粉の加水分解、または水素添
加によって化学的に製造することができる。化学的方法
によるエリスリトールの製造は高価であると認められて
きたので、微生物を用いて効果的にエリスリトールを製
造する代替方法を開発するのは価値あることである。

【０００５】エリスリトールは、微生物学的方法によ
り、好浸透性酵母、特にトルロプシス(Torulopsis)属の
種、例えばトルロプシス・マグノリアエ(T. magnolia
e)、トルロプシス・ベラチリス(T. veratilis)およびト
ルロプシス・カンジダ(T. candida)；エンドマイコプシ
ス・コダチ(Endomycopsis chodati)；ハンセヌラ・スペ
リクルサ(Hansenula supelliculsa)；ピキア・ミソ(Pic
hia miso)；モニリエラ・トメントーサ変種ポリニス(Mo
nilliella tomentosa var. pollinis)；トリゴノプシス
・バリアビリス(Trigonopsis variabilis)；トリコスポ
ロノイデス(Trichosporonoides)；カンジダ・ゼイラノ
イデス(Candida zeylanoides)；およびオーレオバシジ
ウム(Aureobasidium)を用いて産生させることができ
る。ロイコノストク・オエノス(Leuconostoc oenos)の
ような幾つかのバクテリアもまたエリスリトールを産生
できる。モニリエラ・トメントーサ変種ポリニスは、グ
ルコース３５．７％を含有する培地上でエリスリトール
を４５．６％の収率で産生した。この株を用いたエリス
リトールの産生は、グリセロールおよびリビトールなど
のような副生物のため、工業的規模には適用されなかっ
た。エリスリトールの工業的生産は、オーレオバシジウ
ムの突然変異体で実施されてきた。この突然変異体は、
日研化学および日本の国立研究所の共同研究により単離
され、開発された。この突然変異体は、グルコース２
２．５％を含有する培地上で４７．６％の収率および２
ｇ／Ｌ―ｈの容量生産性でエリスリトールを産生した。
しかしながら、この菌類の培養は酵母の培養よりも一層
困難さを有している。

【０００６】したがって、この発明では、自然界から単
離されたカンジダ種の野生酵母株を、ＥＭＳ（エチル−
メタノールスルホネート）処理により突然変異させた。
突然変異体の一つは、グルコースからのエリスリトール
収率、容量生産性および塩耐性において野生株よりも優
れた特性を有する。カンジダ種の突然変異体を使用する
ことにより、最大限のエリスリトール産生のための培養
環境条件の最適化が行われた。

【０００７】

【発明の概要】本発明の目的は、エリスリトールを高い
生産性で製造するために、カンジダ・マグノリアエ(Can
dida magnoliae) SR101の新規な突然変異体細胞を提供
することであり、この新規細胞は、ブダペスト条約に基
づき１９９９年５月２１日に韓国微生物カルチャーセン
ターに受託番号KCCM-10160として寄託された。

【０００８】本発明の他の目的は、韓国微生物カルチャ
ーセンターに受託番号KCCM-10160として寄託されたカン
ジダ・マグノリアエ(Candida magnoliae) SR101の突然
変異体細胞を用いてエリスリトールを最大限に産生させ
るための最適発酵方法を提供することである。この方法
は、 i)単糖類また二糖類培地を、下記の発酵条件： a) エリスリトールの最大産生のための培地組成が、１
０〜５０(w/v)％のグルコース、０．２〜２．０(w/v)％
の酵母エキス、０．１〜１０(w/v)％のＫＨ₂ＰＯ₄、
０．１〜５．０(w/v)％の（ＮＨ₄）₂ＳＯ₄および０．０
１〜１．０(w/v)％のＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏを含有する、 b) 培地のｐＨが６〜８である、 c) 培養温度が２６〜３０℃である、 d) 通気率が培地体積当たり毎分０．７５〜２．０体積
の空気である（vvm）、 e) 撹拌速度が３００〜１２００ｒｐｍである、に制御
することにより、細胞により発酵させる工程、 ii) エリスリトール産生期中の培養液に、ＫＣｌ含有溶
液をその濃度が２〜１０％となるように連続的または間
欠的に添加する工程、 iii) 発酵培養物から細胞を除去する工程、および iv) 前記工程iii)の発酵培養物からエリスリトールを分
離して回収する工程を含む。

【０００９】

【発明の具体的な説明】本発明は、カンジダ・マグノリ
アエの変異体細胞を用い、培養条件を最適化することに
より、エリスリトールを高い収率および高い容量生産性
で得る方法に関する。本発明に用いられる突然変異体細
胞は、下記の方法により単離される。

【００１０】カンジダ菌種はコーム(comb)からスクリー
ニングされた。コームの一片を、グルコース４０％およ
び酵母エキス１．０％を含有する培地中に移し、３０℃
でインキュベートした。培養液を希釈し、グルコース２
０％、酵母エキス１．０％および寒天２．０％を含有す
る寒天プレート上で３０℃にてインキュベートした。得
られたコロニーを、グルコース１０％および酵母エキス
１．０％からなる発酵培地上でインキュベートした後、
培養液を遠心して細胞を除去し、上澄み液をエリスリト
ール定量のため分析した。高エリスリトール産生株をエ
リスリトール産生のために選別した。この株はMicroche
ck Co. によりカンジダ・マグノリアエ(Candida magnol
iae)であると同定された。

【００１１】この株を、グルコース２．０％、酵母エキ
ス１．０％およびペプトン１．０％を含有する成長培地
上でインキュベートした。成長させた後、培養液を、グ
ルコース１０％、酵母エキス０．８％、ペプトン０．３
％および寒天２．０％を含有する寒天プレート上に広
げ、次いで得られたコロニーを、グルコース０．１％、
酵母エキス１．０％および寒天２．０％を含有する胞子
形成培地上に移した。形成された胞子をオートクレーブ
処理蒸留水で採取し、１０ｍＭの2-メルカプトエタノー
ルを３０分間添加して、リチカーゼ(lyticaze)０．５ｍ
ｇ／ｍｌで４時間処理することにより選別した。

【００１２】選別された胞子をＥＭＳ（エチルメタノー
ルスルホネート）で処理し、３０％のグルコース、１８
％のＫＣｌ、０．１％の酵母エキスおよび２．０％の寒
天を含有する培地上でインキュベートした。高塩耐性突
然変異体を選別するために急速成長する突然変異体とし
て、単一のコロニーを選別した。選別されたコロニーを
発酵培地上に移し、エリスリトール産生活性を振盪フラ
スコ中で試験した。

【００１３】３０℃および２４０ｒｐｍで７２時間イン
キュベートした後、高エリスリトール産生突然変異体を
選別した。最終的に、突然変異体細胞として成長コロニ
ーを単離し、得られたものを本発明における産生株とし
て使用した。これらの突然変異体細胞は、ブダペスト条
約に基づき韓国微生物カルチャーセンターに受託番号KC
CM-10160として寄託された。

【００１４】以下に、突然変異体細胞を用いてエリスリ
トールを産生させるための発酵方法を説明する。種培養 カンジダ・マグノリアエの細胞(KCCM-10160)を、４０〜
６０ｍＬの成長培地（グルコース２．０％、ペプトン
１．０％、酵母エキス１．０％）を含有する２５０−ｍ
Ｌフラスコ中で３０℃および２４０ｒｐｍにて４８時間
培養し、この種培養物を、主培養でエリスリトールを産
生させるために２５０−ｍｌフラスコまたは５−Ｌ発酵
器に移した。

【００１５】主培養 発酵培地でのフラスコ実験を、２６〜３０℃および３０
０〜１２００ｒｐｍで６０〜１００時間行った。発酵培
地は、炭素源としてのグルコース１０〜５０％および酵
母エキス０．２〜２．０％からなり、無機源として、
０．１〜５．０％の（ＮＨ₄）₂ＳＯ₄、０．１〜１０％
のＫＨ₂ＰＯ₄および０．０１〜１．０％のＭｇＳＯ₄・
７Ｈ₂Ｏを用いた。実験目的のためグルコース濃度を調
節した。発酵器中でのバッチ培養および供給バッチ培養
を、２６〜３０℃および初期ｐＨ７で行った。通気率は
０．７５〜２．０ｖｖｍの範囲であった。撹拌速度は３
００〜１２００ｒｐｍであった。供給バッチ培養は、グ
ルコース１０〜４０％を連続的または間欠的に添加する
ことにより、グルコース濃度５〜１０％で行った。

【００１６】発酵法は、好ましくは供給バッチ法によ
る。培地中のグルコースが完全に消費された後、炭水化
物分析カラムを装着した高速液体クロマトグラフィーに
よりエリスリトール量を測定する。乾燥細胞重量は、６
００ｎｍでの光学密度と乾燥細胞重量との関係から作成
された検量線を用いて評価される。グルコースはジニト
ロサリチル酸法により測定される。

【００１７】測定されたエリスリトール収率は、グルコ
ース消費の３５〜５５％であり、容積生産性は０．７ｇ
／Ｌ−ｈである。最後に、発酵培地を遠心して細胞およ
び他の残留物を除去し、上澄み液を濾過して透析し、エ
リスリトールを得る。

【００１８】

【実施例】本発明を下記の実施例により更に詳細に説明
する。実施例は単なる例示であって、本発明はこれらに
限定されるものではない。

【００１９】

【実施例Ｉ】 突然変異体細胞の単離 カンジダ菌種をコーム(comb)からスクリニーングした。
コームの一片を、グルコース４０％および酵母エキス
１．０％を含有する培地中に移し、３０℃でインキュベ
ートした。培養液を希釈し、グルコース２０％、酵母エ
キス１．０％および寒天２．０％を含有する寒天プレー
ト上で３０℃にてインキュベートした。得られたコロニ
ーを、グルコース１０％および酵母エキス１．０％から
なる発酵培地上でインキュベートした後、培養液を遠心
して細胞を除去し、上澄み液を分析してエリスリトール
量を決定した。エリスリトール産生のために、高エリス
リトール産生株を選別した。この株はMicrocheck Co.
によりカンジダ・マグノリアエ(Candida magnoliae)で
あると同定された。

【００２０】この株を、グルコース２．０％、酵母エキ
ス１．０％およびペプトン１．０％を含有する成長培地
上で３０℃にて４８時間インキュベートした。成長させ
た後、培養液を、グルコース１０％、酵母エキス０．８
％、ペプトン０．３％および寒天２．０％を含有する寒
天プレート上に広げ、３０℃で３６時間インキュベート
し、次いで得られたコロニーを、グルコース０．１％、
酵母エキス１．０％および寒天２．０％を含有する胞子
形成培地上に移した。胞子は４℃で４日後に形成され
た。形成された胞子をオートクレーブ処理蒸留水で採取
し、１０ｍＭの2-メルカプトエタノールを３０分間添加
して、リチカーゼ(lyticaze)０．５ｍｇ／ｍｌ(100,000
単位)で４時間処理することにより胞子を選別した。選
別された胞子をＥＭＳで３０分間処理した。チオスルフ
ェート５％の添加により反応を停止させた。胞子を、３
０％のグルコース、１８％のＫＣｌ、０．１％の酵母エ
キスおよび２．０％の寒天を含有する培地上でインキュ
ベートし、高塩耐性突然変異体を選別した。急速成長す
る突然変異体として、単一のコロニーを選別した。選別
されたコロニーを発酵培地５０ｍＬ上に移し、エリスリ
トール産生活性を２５０ｍＬ振盪フラスコ中で試験し
た。３０℃および２４０ｒｐｍで７２時間インキュベー
トした後、高エリスリトール産生の突然変異体を選別し
た。最終的に、成長コロニーを単離し、突然変異体細胞
として得て、本発明における産生株として使用した。こ
れらの突然変異体細胞は、韓国微生物カルチャーセンタ
ーに受託番号KCCM-10160として寄託された。

【００２１】

【実施例II】 突然変異体細胞の発酵によるエリスリト
ールの産生 カンジダ・マグノリアエの突然変異体細胞(KCCM-10160)
を、５０ｍＬの成長培地（グルコース２．０％、ペプト
ン１．０％、酵母エキス１．０％）を含有する２５０−
ｍＬフラスコ中で３０℃および２４０ｒｐｍにて４８時
間培養し、この種培養物を、主培養でエリスリトールを
産生させるために２５０−ｍｌフラスコに移した。発酵
培地でのフラスコ実験を、２８℃、初期ｐＨ７および２
４０ｒｐｍで８４時間行った。発酵培地は、炭素源とし
ての２５％のグルコースおよび０．５％の酵母エキス、
０．２％の（ＮＨ₄）₂ＳＯ₄、０．５％のＫＨ₂ＰＯ₄お
よび０．０４％のＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏからなっていた。

【００２２】８４時間の発酵の後、炭水化物分析カラム
を装着したＨＰＬＣにより、１０％グルコースからのエ
リスリトール量を測定した。得られたエリスリトールは
２５ｇ／Ｌであり、容積生産性は０．３０ｇ／Ｌ−ｈで
ある。

【００２３】

【比較例Ｉ】 野生型細胞の発酵によるエリスリトール
の産生 カンジダ・マグノリアエの野生型細胞を、５０ｍＬの成
長培地（グルコース２．０％、ペプトン１．０％、酵母
エキス１．０％）を含有する２５０−ｍＬフラスコ中で
３０℃および２４０ｒｐｍにて４８時間培養し、この種
培養物を、エリスリトール産生用の２５０−ｍｌフラス
コに移した。発酵培地でのフラスコ実験を、２８℃、初
期ｐＨ７および２４０ｒｐｍで１０８時間行った。発酵
培地は、炭素源としての２５％のグルコースおよび０．
５％の酵母エキス、０．２％の（ＮＨ₄）₂ＳＯ₄、０．
５％のＫＨ₂ＰＯ₄および０．０４％のＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂
Ｏからなっていた。

【００２４】１０８時間の発酵の後、炭水化物分析カラ
ムを装着したＨＰＬＣにより、１０％グルコースからの
エリスリトール量を測定した。得られたエリスリトール
は１７ｇ／Ｌであり、容積生産性は０．１６ｇ／Ｌ−ｈ
である。

【００２５】

【実施例III】 エリスリトール産生に対する初期ｐＨ
の効果 カンジダ・マグノリアエの突然変異体細胞(KCCM-10160)
を、５０ｍＬの成長培地（グルコース２．０％、ペプト
ン１．０％、酵母エキス１．０％）を含有する２５０−
ｍＬフラスコ中で３０℃および２４０ｒｐｍにて４８時
間培養し、この種培養物を、エリスリトール産生用の２
５０−ｍｌフラスコに移した。発酵培地でのフラスコ実
験を、２８℃および２４０ｒｐｍで８４時間行った。発
酵培地は、炭素源としての２５％のグルコースおよび
０．５％の酵母エキス、０．２％の（ＮＨ₄）₂ＳＯ₄、
０．５％のＫＨ₂ＰＯ₄および０．０４％のＭｇＳＯ₄・
７Ｈ₂Ｏからなっていた。エリスリトール産生に対する
ｐＨの効果を調査した。

【００２６】８４時間の発酵の後、炭水化物分析カラム
を装着したＨＰＬＣにより、初期ｐＨ５．０でのエリス
リトール量を測定した。得られたエリスリトールは２
１．４ｇ／Ｌであり、容積生産性は０．２５ｇ／Ｌ−ｈ
である。８４時間の発酵の後、炭水化物分析カラムを装
着したＨＰＬＣにより、初期ｐＨ６．０でのエリスリト
ール量を測定した。得られたエリスリトールは２３．６
ｇ／Ｌであり、容積生産性は０．２８ｇ／Ｌ−ｈであ
る。

【００２７】８４時間の発酵の後、炭水化物分析カラム
を装着したＨＰＬＣにより、初期ｐＨ７．０でのエリス
リトール量を測定した。得られたエリスリトールは２
５．０ｇ／Ｌであり、容積生産性は０．３０ｇ／Ｌ−ｈ
である。８４時間の発酵の後、炭水化物分析カラムを装
着したＨＰＬＣにより、初期ｐＨ８．０でのエリスリト
ール量を測定した。得られたエリスリトールは１８．６
ｇ／Ｌであり、容積生産性は０．２２ｇ／Ｌ−ｈであ
る。

【００２８】

【実施例IV】 エリスリトール産生に対する温度の効果 カンジダ・マグノリアエの突然変異体細胞(KCCM-10160)
を、５０ｍＬの成長培地（グルコース２．０％、ペプト
ン１．０％、酵母エキス１．０％）を含有する２５０−
ｍＬフラスコ中で３０℃および２４０ｒｐｍにて４８時
間培養し、この種培養物を、エリスリトール産生用の２
５０−ｍｌフラスコに移した。発酵培地でのフラスコ実
験を、初期ｐＨ７．０および２４０ｒｐｍで８４時間行
った。発酵培地は、炭素源としての２５％のグルコース
および０．５％の酵母エキス、０．２％の（ＮＨ₄）₂Ｓ
Ｏ₄、０．５％のＫＨ₂ＰＯ₄および０．０４％のＭｇＳ
Ｏ₄・７Ｈ₂Ｏからなっていた。エリスリトール産生に対
する温度の効果を調査した。

【００２９】８４時間の発酵の後、炭水化物分析カラム
を装着したＨＰＬＣにより、２６℃でのエリスリトール
量を測定した。得られたエリスリトールは１５．０ｇ／
Ｌであり、容積生産性は０．１８ｇ／Ｌ−ｈである。８
４時間の発酵の後、炭水化物分析カラムを装着したＨＰ
ＬＣにより、２８℃でのエリスリトール量を測定した。
得られたエリスリトールは２５．０ｇ／Ｌであり、容積
生産性は０．３０ｇ／Ｌ−ｈである。

【００３０】８４時間の発酵の後、炭水化物分析カラム
を装着したＨＰＬＣにより、３０℃でのエリスリトール
量を測定した。得られたエリスリトールは２０．７ｇ／
Ｌであり、容積生産性は０．２５ｇ／Ｌ−ｈである。

【００３１】

【実施例Ｖ】 エリスリトール産生に対するＫＣｌ濃度
の効果 カンジダ・マグノリアエの突然変異体細胞(KCCM-10160)
を、５０ｍＬの成長培地（グルコース２．０％、ペプト
ン１．０％、酵母エキス１．０％）を含有する２５０−
ｍＬフラスコ中で３０℃および２４０ｒｐｍにて４８時
間培養し、この種培養物を、エリスリトール産生用の２
５０−ｍｌフラスコに移した。発酵培地でのフラスコ実
験を、２８℃および２４０ｒｐｍで８４時間行った。発
酵培地は、炭素源としての２５％のグルコースおよび
０．５％の酵母エキス、０．２％の（ＮＨ₄）₂ＳＯ₄、
０．５％のＫＨ₂ＰＯ₄および０．０４％のＭｇＳＯ₄・
７Ｈ₂Ｏからなっていた。エリスリトール産生に対する
ＫＣｌ濃度の効果を調査した。

【００３２】８４時間の発酵の後、炭水化物分析カラム
を装着したＨＰＬＣにより、０．０％ＫＣｌでのエリス
リトール量を測定した。得られたエリスリトールは２
５．０ｇ／Ｌであり、容積生産性は０．３０ｇ／Ｌ−ｈ
である。８４時間の発酵の後、炭水化物分析カラムを装
着したＨＰＬＣにより、１．０％ＫＣｌでのエリスリト
ール量を測定した。得られたエリスリトールは２５．２
ｇ／Ｌであり、容積生産性は０．３０ｇ／Ｌ−ｈであ
る。

【００３３】８４時間の発酵の後、炭水化物分析カラム
を装着したＨＰＬＣにより、３．０％ＫＣｌでのエリス
リトール量を測定した。得られたエリスリトールは２
３．３ｇ／Ｌであり、容積生産性は０．２８ｇ／Ｌ−ｈ
である。８４時間の発酵の後、炭水化物分析カラムを装
着したＨＰＬＣにより、５．０％ＫＣｌでのエリスリト
ール量を測定した。得られたエリスリトールは２７．６
ｇ／Ｌであり、容積生産性は０．３３ｇ／Ｌ−ｈであ
る。

【００３４】８４時間の発酵の後、炭水化物分析カラム
を装着したＨＰＬＣにより、６．０％ＫＣｌでのエリス
リトール量を測定した。得られたエリスリトールは２
６．５ｇ／Ｌであり、容積生産性は０．３２ｇ／Ｌ−ｈ
である。

【００３５】

【比較例II】 野生型細胞を用いたエリスリトール産生
に対するＫＣｌ濃度の効果 カンジダ・マグノリアエの野生型細胞を、５０ｍＬの成
長培地（グルコース２．０％、ペプトン１．０％、酵母
エキス１．０％）を含有する２５０−ｍＬフラスコ中で
３０℃および２４０ｒｐｍにて４８時間培養し、この種
培養物をエリスリトール産生用の２５０−ｍｌフラスコ
に移した。発酵培地でのフラスコ実験を、２８℃および
２４０ｒｐｍで１０８時間行った。発酵培地は、炭素源
としての２５％のグルコースおよび０．５％の酵母エキ
ス、０．２％の（ＮＨ₄）₂ＳＯ₄、０．５％のＫＨ₂ＰＯ
₄および０．０４％のＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏからなってい
た。エリスリトール産生に対するＫＣｌ濃度の効果を調
査した。

【００３６】１０８時間の発酵の後、炭水化物分析カラ
ムを装着したＨＰＬＣにより０．０％ＫＣｌでのエリス
リトール量を測定した。得られたエリスリトールは１
７．０ｇ／Ｌであり、容積生産性は０．１６ｇ／Ｌ−ｈ
である。１０８時間の発酵の後、炭水化物分析カラムを
装着したＨＰＬＣにより１．０％ＫＣｌでのエリスリト
ール量を測定した。得られたエリスリトールは２４．０
ｇ／Ｌであり、容積生産性は０．２２ｇ／Ｌ−ｈであ
る。

【００３７】１０８時間の発酵の後、炭水化物分析カラ
ムを装着したＨＰＬＣにより２．０％ＫＣｌでのエリス
リトール量を測定した。得られたエリスリトールは２
３．７ｇ／Ｌであり、容積生産性は０．２６ｇ／Ｌ−ｈ
である。１０８時間の発酵の後、炭水化物分析カラムを
装着したＨＰＬＣにより３．０％ＫＣｌでのエリスリト
ール量を測定した。得られたエリスリトールは１４．２
ｇ／Ｌであり、容積生産性は０．１３ｇ／Ｌ−ｈであ
る。

【００３８】

【実施例VI】 発酵器中での通気率の変化によるエリス
リトールの産生カンジダ・マグノリアエの突然変異体細
胞(KCCM-10160)を、５０ｍＬの成長培地（グルコース
２．０％、ペプトン１．０％、酵母エキス１．０％）を
含有する２５０−ｍＬフラスコ中で３０℃および２４０
ｒｐｍにて４８時間培養し、この種培養物を、エリスリ
トール産生用の５−Ｌ発酵器に移した。発酵培地での発
酵器実験を、２８℃、初期ｐＨ７．０および５００ｒｐ
ｍで行った。発酵培地は、炭素源としての２５％のグル
コースおよび０．５％の酵母エキス、０．２％の（ＮＨ
₄）₂ＳＯ₄、０．５％のＫＨ₂ＰＯ₄、５．０％のＫＣｌ
および０．０４％のＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏからなってい
た。エリスリトール産生に対する通気率の効果を調査し
た。

【００３９】２０５時間の発酵の後、炭水化物分析カラ
ムを装着したＨＰＬＣにより、０．７５ｖｖｍでのエリ
スリトール量を測定した。得られたエリスリトールは１
３１．２ｇ／Ｌであり、容積生産性は０．６４ｇ／Ｌ−
ｈである。２０５時間の発酵の後、炭水化物分析カラム
を装着したＨＰＬＣにより、１．００ｖｖｍでのエリス
リトール量を測定した。得られたエリスリトールは１４
３．３ｇ／Ｌであり、容積生産性は０．７０ｇ／Ｌ−ｈ
である。

【００４０】２０５時間の発酵の後、炭水化物分析カラ
ムを装着したＨＰＬＣにより、１．５０ｖｖｍでのエリ
スリトール量を測定した。得られたエリスリトールは１
２５．０ｇ／Ｌであり、容積生産性は０．６１ｇ／Ｌ−
ｈである。

【００４１】

【実施例VII】 発酵器中でのグルコース濃度の変化に
よるエリスリトールの産生 カンジダ・マグノリアエの突然変異体細胞(KCCM-10160)
を、５０ｍＬの成長培地（グルコース２．０％、ペプト
ン１．０％、酵母エキス１．０％）を含有する２５０−
ｍＬフラスコ中で３０℃および２４０ｒｐｍにて４８時
間培養し、この種培養物を、エリスリトール産生用の５
−Ｌ発酵器に移した。発酵培地での発酵器実験を、２８
℃、初期ｐＨ7.0、１．０ｖｖｍおよび５００ｒｐｍで
行った。発酵培地は、炭素源としてのグルコースおよび
０．５％の酵母エキス、０．２％の（ＮＨ₄）₂ＳＯ₄、
０．５％のＫＨ₂ＰＯ₄、５．０％のＫＣｌおよび０．０
４％のＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏからなっていた。エリスリト
ール産生に対するグルコース濃度の効果を調査した。

【００４２】６３時間の発酵の後、炭水化物分析カラム
を装着したＨＰＬＣにより、１０％グルコースでのエリ
スリトール量を測定した。得られたエリスリトールは２
９．１ｇ／Ｌであり、容積生産性は０．４６ｇ／Ｌ−ｈ
である。１２０時間の発酵の後、炭水化物分析カラムを
装着したＨＰＬＣにより、１５％グルコースでのエリス
リトール量を測定した。得られたエリスリトールは６
４．９ｇ／Ｌであり、容積生産性は０．５４ｇ／Ｌ−ｈ
である。

【００４３】１６０時間の発酵の後、炭水化物分析カラ
ムを装着したＨＰＬＣにより、２０％グルコースでのエ
リスリトール量を測定した。得られたエリスリトールは
８７．２ｇ／Ｌであり、容積生産性は０．５５ｇ／Ｌ−
ｈである。２０５時間の発酵の後、炭水化物分析カラム
を装着したＨＰＬＣにより、２５％グルコースでのエリ
スリトール量を測定した。得られたエリスリトールは１
４３ｇ／Ｌであり、容積生産性は０．７０ｇ／Ｌ−ｈで
ある。

【００４４】２０５時間の発酵の後、炭水化物分析カラ
ムを装着したＨＰＬＣにより、３０％グルコースでのエ
リスリトール量を測定した。得られたエリスリトールは
１１７ｇ／Ｌであり、容積生産性は０．５７ｇ／Ｌ−ｈ
である。

【００４５】

【実施例VIII】 発酵器中でのショ糖濃度の変化による
エリスリトールの産生 カンジダ・マグノリアエの突然変異体細胞(KCCM-10160)
を、５０ｍＬの成長培地（グルコース２．０％、ペプト
ン１．０％、酵母エキス１．０％）を含有する２５０−
ｍＬフラスコ中で３０℃および２４０ｒｐｍにて４８時
間培養し、この種培養物を、エリスリトール産生用の５
−Ｌ発酵器に移した。発酵培地での発酵器実験を、２８
℃、初期ｐＨ７．０、１．０ｖｖｍおよび５００ｒｐｍ
で行った。発酵培地は、炭素源としてのショ糖および
０．５％の酵母エキス、０．２％の（ＮＨ₄）₂ＳＯ₄、
０．５％のＫＨ₂ＰＯ₄、５．０％のＫＣｌおよび０．０
４％のＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏからなっていた。エリスリト
ール産生に対するショ糖濃度の効果を調査した。

【００４６】６５時間の発酵の後、炭水化物分析カラム
を装着したＨＰＬＣにより、１０％ショ糖でのエリスリ
トール量を測定した。得られたエリスリトールは２６．
１ｇ／Ｌであり、容積生産性は０．４０ｇ／Ｌ−ｈであ
る。１５４時間の発酵の後、炭水化物分析カラムを装着
したＨＰＬＣにより、２０％ショ糖でのエリスリトール
量を測定した。得られたエリスリトールは７８．３ｇ／
Ｌであり、容積生産性は０．５１ｇ／Ｌ−ｈである。

【００４７】１７５時間の発酵の後、炭水化物分析カラ
ムを装着したＨＰＬＣにより、２０％ショ糖でのエリス
リトール量を測定した。得られたエリスリトールは１０
５ｇ／Ｌであり、容積生産性は０．６０ｇ／Ｌ−ｈであ
る。２５０時間の発酵の後、炭水化物分析カラムを装着
したＨＰＬＣにより、４０％ショ糖でのエリスリトール
量を測定した。得られたエリスリトールは１２６ｇ／Ｌ
であり、容積生産性は０．５０ｇ／Ｌ−ｈである。

【００４８】

【発明の効果】本発明におけるカンジダ・マグノリアエ
KCCM-10160は、グルコースまたはショ糖からエリスリト
ールを高い収率および高い生産性で産生させることがで
き、気泡の発生が殆どなく、グリセロールのような副生
物を生成せず、その結果、回収が容易である。これらの
利点はエリスリトールの可能な商業的製造にとって極め
て重要である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） (Ｃ１２Ｎ 1/16 (Ｃ１２Ｎ 1/16 Ｇ Ｃ１２Ｒ 1:72） Ｃ１２Ｒ 1:72） (Ｃ１２Ｎ 1/16 (Ｃ１２Ｎ 1/16 Ａ Ｃ１２Ｒ 1:72） Ｃ１２Ｒ 1:72） (72)発明者 セオ ジン ホー 大韓民国 キュングギ−ドー スングナム −シ ブーンダング−ク セオヒュン−ド ング 292 インクワング エーピーティ ー． 311−601 (72)発明者 リュウ イェン ウー 大韓民国 ソウル カングナム−ク アプ クジュング−ドング ヒュンダイ エーピ ーティー． 31−1005 (72)発明者 ジュング ソー リュン 大韓民国 ソウル ソングパ−ク チャム シル−ドング 86 アジア スンソーチョ ン エーピーティー． １−901 (72)発明者 キム サング ヨング 大韓民国 キュングギ−ドー クワングミ ュング−シ チュルサン−３−ドング ジ ョーゴング エーピーティー． 1214− 404 Ｆターム(参考） 4B064 AC05 CA06 CC06 CC07 CC09 CC10 CC12 CD02 DA10 4B065 AA73X AC08 AC14 BA18 BB02 BC02 BC03 BC05 BC09 BC10 CA05 CA07 CA41

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】韓国微生物カルチャーセンターに受託番号
   KCCM-10160として寄託されたカンジダ・マグノリアエ(C
   andida magnoliae) SR101の突然変異体細胞を用いてエ
   リスリトールを産生させるための発酵方法であって、こ
   の方法は、 i)単糖類また二糖類培地を、下記の発酵条件： a) エリスリトールの最大産生のための培地組成が、１
   ０〜５０(w/v)％のグルコース、０．２〜２．０(w/v)％
   の酵母エキス、０．１〜１０(w/v)％のＫＨ₂ＰＯ₄、
   ０．１〜５．０(w/v)％の（ＮＨ₄）₂ＳＯ₄および０．０
   １〜１．０(w/v)％のＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏを含有する、 b) 培地のｐＨが６〜８である、 c) 培養温度が２６〜３０℃である、 d) 通気率が培地体積当たり毎分０．７５〜２．０体積
   の空気である、 e) 撹拌速度が３００〜１２００ｒｐｍであるに制御す
   ることにより、細胞により発酵させる工程、 ii) エリスリトール産生期中の培養液に、ＫＣｌ含有溶
   液をその濃度が２〜１０％となるように連続的または間
   欠的に添加する工程、 iii) 発酵培養物から細胞を除去する工程、および iv) 前記工程iii)の発酵培養物からエリスリトールを分
   離して回収する工程を含む。
2. 【請求項２】 カンジダ・マグノリアエSR101の新規細
   胞(KCCM-10160)。