JP2003169683A - 新規脱共役蛋白質ｍｔ００２９ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【課題】 新規な脱共役蛋白質の遺伝子及び蛋白質と、
該蛋白質に対する活性調節剤の効率的な評価方法を提供
する。 【解決手段】 特定の塩基配列からなるＤＮＡ及び該Ｄ
ＮＡにコードされる脱共役蛋白質、該ＤＮＡ配列に対す
るアンチセンス核酸、該蛋白質の活性調節物質の評価方
法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新規な脱共役蛋白
質、該蛋白質をコードするＤＮＡ及びその断片、該ＤＮ
Ａを含む発現ベクター、該発現ベクターで形質転換され
た形質転換細胞、該蛋白質若しくはその断片に反応性を
有する抗体、該蛋白質の活性または発現を調節する物質
のスクリーニング方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】脱共役蛋白質（ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ
ｐｒｏｔｅｉｎ：ＵＣＰ）はミトコンドリア内膜に存在
し、酸化的リン酸化の脱共役に働く蛋白質である。ミト
コンドリアでの電子伝達系とＡＴＰ合成は内膜でのプロ
トン濃度勾配によって共役している。ＵＣＰはこのプロ
トン濃度勾配を短絡的に解消する特殊なチャネルであ
り、ＵＣＰが活性化されると酸化基質の化学エネルギー
はＡＴＰ合成に利用されず熱へと変換される。ＵＣＰの
このような機能は、寒冷環境下でふるえによらずに体温
を維持する場合や過食によるエネルギー収支の乱れを調
節する場合など、酸化的リン酸化によるＡＴＰ産生効率
を積極的に低下させ熱産生を行う必要がある場合に重要
な役割を果たすと考えられている（Ｓａｉｔｏｕ、医学
のあゆみ，Ｖｏｌ．１８５；５９６−５９９（１９９
７））。

【０００３】ＵＣＰは現在までに、ＵＣＰ−１（Ａｑｕ
ｉｌａら、ＥＭＢＯ Ｊ．，Ｖｏｌ．４；２３６９−２
３７６（１９８５））、ＵＣＰ−２（Ｆｌｅｕｒｙら、
Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．,Ｖｏｌ．１５；２６９−２７２
（１９９７）、ＵＣＰ−３（Ｂｏｓｓら、ＦＥＢＳ Ｌ
ｅｔｔ．,Ｖｏｌ．４０８；３９−４２（１９９
７））、ＵＣＰ−４（Ｍａｏら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔ
ｔ．，Ｖｏｌ．４４３；３２６−３３０（１９９
９））、ＵＣＰ−５（Ｙｕら、ＦＡＳＥＢ Ｊ．，Ｖｏ
ｌ．１４；１６１１−１６１８（２０００））という５
つのアイソフォームが知られている。いずれも全長３０
０残基程度のアミノ酸配列からなり、約１００個のアミ
ノ酸からなるドメインが３つ繰り返された構造で、各ド
メインに２つ、計６つの膜貫通領域が存在する。ＵＣＰ
−１は主にＢＡＴ(褐色脂肪組織)に、ＵＣＰ−２は全身
の組織に、ＵＣＰ−３は主に骨格筋に、ＵＣＰ−４は脳
特異的に、ＵＣＰ−５は脳、精巣に多く存在することが
知られている。ＵＣＰ−１の発現低下マウスやＫＯマウ
ス（Ｅｎｅｒｂａｃｋら、Ｎａｔｕｒｅ,Ｖｏｌ．３８
７；９０−９４（１９９７）、Ｌｏｗｅｌｌら、Ｎａｔ
ｕｒｅ，Ｖｏｌ．３６６；７４０−７４２（１９９
３））は明らかな熱産生能力の低下や肥満を示し、脂肪
特異的なＵＣＰ−２過剰発現マウス（笠岡宜代ら、肥満
研究、ＶＯＬ．６；６４（２０００））および骨格筋特
異的ＵＣＰ−３過剰発現マウス（Ｃｌａｐｈａｍら、Ｎ
ａｔｕｒｅ，Ｖｏｌ．４０６；４１５−４１８（２００
０））では体重減少や血糖低下作用が見られることが知
られている。

【０００４】このように肥満や糖尿病との関連性が明ら
かにされるに伴い、脱共役蛋白質は生活習慣病の創薬標
的として注目されており、新たな脱共役蛋白質の単離同
定が望まれている。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、新規な脱共
役蛋白質とその遺伝子を同定することにより、生活習慣
病の予防並びに治療に有用な医薬及び方法を提供するも
のである。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明は、新規な遺伝子
（ｍｔ００２９とする）、当該遺伝子にコードされる新
規な脱共役蛋白質（ＭＴ００２９）に関する。また、当
該遺伝子を用いて形質転換した宿主細胞、該形質転換細
胞を用いた組換えＭＴ００２９の生産方法を提供する。

【０００７】（核酸）本発明は、ＭＴ００２９（後に詳
しく述べる）をコードする遺伝子ｍｔ００２９を提供す
る。遺伝子ｍｔ００２９とは具体的には、配列番号２に
示すアミノ酸配列からなる脱共役蛋白質をコードするＤ
ＮＡのことであり、配列番号１に示すｃＤＮＡのほか該
ｃＤＮＡの由来するゲノムＤＮＡも含まれる。該遺伝子
はヒトＨｅｐ−Ｇ１細胞から単離同定することができる
が、本明細書に開示された配列を基に、一般的なハイブ
リダイゼーション等の遺伝子工学的手法を用いたクロー
ニングやホスホアミダイト法などの化学合成的手法によ
り調製されるＤＮＡであってもよい。その形態としては
ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡの他、化学合成ＤＮＡなどが含
まれるが、特に制限はない。本発明のＤＮＡは１本鎖で
あっても、それに相補的な配列を有するＤＮＡやＲＮＡ
と結合して２重鎖、３重鎖を形成していても良い。ま
た、当該ＤＮＡは、ホースラディッシュペルオキシダー
ゼ（ＨＲＰＯ）等の酵素や放射性同位体、蛍光物質、化
学発光物質等で標識されていてもよい。

【０００８】また、ｍｔ００２９の塩基配列が提供され
れば、これより導かれるＲＮＡの配列や、相補的なＤＮ
ＡおよびＲＮＡの配列などは一義的に決定されるので、
本発明は、本発明のＤＮＡに対応するＲＮＡあるいは本
発明のＤＮＡと相補的な配列を有するＤＮＡおよびＲＮ
Ａもまた提供するものと理解すべきである。

【０００９】さらに、本発明のＤＮＡは、配列番号１に
記載の塩基配列と９０％以上の同一性を示すＤＮＡをも
含むものである。

【００１０】配列番号１に記載の塩基配列からなるＤＮ
Ａに対しては、該ＤＮＡにコードされる蛋白質が脱共役
蛋白質であれば、塩基配列のバリエーションが許容され
る。例えば、いわゆるコドン縮重による同一アミノ酸残
基をコードする複数のコドンの存在や、種々の人為的処
理例えば部位特異的変異導入、変異剤処理によるランダ
ム変異、制限酵素切断によるＤＮＡ断片の変異・欠失・
連結等により、部分的にＤＮＡ配列が変化したものであ
っても、これらＤＮＡ変異体が配列番号１に記載のＤＮ
Ａと配列番号１に記載のＤＮＡと９０％以上の同一性を
示し、かつ脱共役蛋白質をコードするＤＮＡであれば、
配列番号１に示したＤＮＡ配列との相違に関わらず、本
発明の範囲内のものである。

【００１１】上記のＤＮＡ変異の程度は、配列番号１に
記載のＤＮＡ配列と９０％以上、好ましくは９５％以上
の同一性を有するものが許容範囲内である。ＤＮＡ配列
の同一性の判断には、ＢＬＡＳＴ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏ
ｌ．，３６；２９０−３００（１９９３）、Ｊ．Ｍｏ
ｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５；４０３−１０（１９９０））
を用いることができる。また、ハイブリダイズする程度
としては、例えばＤＩＧＤＮＡ Ｌａｂｅｌｉｎｇ ｋ
ｉｔ（ロシュ・ダイアグノスティックス社Ｃａｔ Ｎ
ｏ．１１７５０３３）でプローブをラベルした場合に、
３２℃のＤＩＧＥａｓｙ Ｈｙｂ溶液（ロシュ・ダイア
グノスティックス社Ｃａｔ Ｎｏ．１６０３５５８）中
でハイブリダイズさせ、６５℃の０．１×ＳＳＣ溶液
（０．１％（ｗ／ｖ）ＳＤＳを含む）中でメンブレンを
洗浄するストリンジェントな条件（１×ＳＳＣは０．１
５Ｍ ＮａＣｌ、０．０１５Ｍ クエン酸ナトリウムで
ある）でのサザンハイブリダイゼーションで、配列番号
１に記載の核酸にハイブリダイズする程度であればよ
い。

【００１２】配列番号１に記載の塩基配列からなるＤＮ
Ａあるいはその部分断片は、糖尿病、肥満、高脂血症等
本発明の蛋白質が関与する疾患の特異的プローブとして
有用であると考えられる。

【００１３】本発明のＤＮＡは、ＭＴ００２９を大量に
生産するために使用することができる。該ＤＮＡはま
た、酵素等で標識して、組織における本発明の蛋白質の
発現状況を検査するために使用することができる。すな
わち、該ＤＮＡをプローブとして使用し、細胞における
本発明の蛋白質の発現量を、ｍＲＮＡ発現量を指標とし
て確認することにより、本発明の蛋白質の製造に適した
細胞やその培養条件を決定することができるほか、本発
明の蛋白質が関連する疾患、特に糖尿病、肥満、高脂血
症等の診断を行うことも可能である。

【００１４】また、本発明のＤＮＡの一部をプライマー
として使用したＰＣＲ−ＲＦＬＰ（Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉ
ｏｎ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｌｅｎｇｔｈ ｐｏｌｙｍｏ
ｒｐｈｉｓｍ）法、ＰＣＲ−ＳＳＣＰ（Ｓｉｎｇｌｅ
ｓｔｒａｎｄ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍ
ｏｒｐｈｉｓｍ）法、シークエンシング等の方法によ
り、核酸配列上の異常あるいは多型を検査・診断するこ
とができる。

【００１５】また、本発明のＤＮＡを生体内の細胞に導
入し、本発明の蛋白質の発現または活性が損なわれてい
ることによる疾患の遺伝子治療にも使用することができ
る。また、本発明のＤＮＡを生体内の細胞に導入し、該
細胞のエネルギー消費を高めることにより肥満などの体
質を改善し、生活習慣病を解消するといった遺伝子治療
に使用することも可能である。

【００１６】本発明のＤＮＡは、形質転換細胞の調製、
さらには該形質転換細胞を用いた組換え蛋白質ＭＴ００
２９の生産方法、あるいはＭＴ００２９の発現を特異的
に抑制する化合物の探索に大いに有用である。

【００１７】本発明における形質転換細胞は当業者に公
知の技術を適用して調製することが可能であり、例え
ば、市販されあるいは当業者が一般に入手容易な様々な
ベクターを利用して、適当な宿主細胞へ本発明のＤＮＡ
を組み入れることが可能である。その際、遺伝子ｍｔ０
０２９をプロモーターやエンハンサーに代表される発現
制御遺伝子の影響下におくことで、遺伝子ｍｔ００２９
の宿主細胞内での発現を任意にコントロールすることが
可能である。この手法は、形質転換された宿主細胞を用
いたＭＴ００２９の生産において好適に用いられる他、
遺伝子ｍｔ００２９の発現制御機構の研究あるいは該遺
伝子の発現を調節し得る物質の探索などにも応用するこ
とが可能となる。

【００１８】例えば、任意の被験物質と遺伝子ｍｔ００
２９を含むベクターで形質転換された細胞とを適当な条
件下で接触させることで、被験物質の遺伝子ｍｔ００２
９の発現を促進あるいは抑制する作用を有する物質を探
索し、あるいは評価を行うことができる。

【００１９】また、本発明であるＤＮＡと公知の方法と
を組み合わせて、マウスまたはその他の適当な動物を基
にトランスジェニック動物を作製することが出来る。さ
らに、本発明の遺伝子ｍｔ００２９を利用すれば、ヒト
以外の動物からヒトｍｔ００２９に相当する遺伝を破壊
したいわゆるノックアウト動物を作製することも可能で
ある。このモデル動物の物理学的、生物学的、病理学的
及び遺伝子的特徴を分析することにより、本発明に係る
遺伝子及び蛋白質の機能を解明することが可能となる。
さらに、そのようにして内在性遺伝子が破壊された該動
物に本発明のヒトｍｔ００２９を導入することにより、
ヒトｍｔ００２９のみを有するモデル動物を作製するこ
とも可能となる。かかるトランスジェニック動物、特に
本発明である遺伝子ｍｔ００２９あるいは蛋白質ＭＴ０
０２９を大量に発現しているあるいは逆にこれらを欠い
た動物を観察すれば、遺伝子ｍｔ００２９あるいは蛋白
質ＭＴ００２９の機能を特定することが可能となる。さ
らに、このモデル動物は、該導入されたヒトＭＴ００２
９をターゲットとした薬剤の開発、評価に有用である。
遺伝子ｍｔ００２９あるいは蛋白質ＭＴ００２９に特異
的に作用しあるいは機能を補完する物質等を、生体レベ
ルで調べることが可能となり、この様にして得た物質
は、ＭＴ００２９が特異的に機能する生体制御に働く薬
物となることが期待される。

【００２０】（蛋白質ＭＴ００２９）ｍｔ００２９にコ
ードされる蛋白質ＭＴ００２９は、配列番号２に示すア
ミノ酸配列からなる脱共役蛋白質である。

【００２１】ＭＴ００２９はヒトＵＣＰ−１と２８８ア
ミノ酸残基にわたり同一性が２８％および相同性が４５
％、ヒトＵＣＰ−２と２９３アミノ酸残基にわたり同一
性が２８％および相同性が４３％、ヒトＵＣＰ−３と２
９６アミノ酸残基にわたり同一性が２８％および相同性
が４４％、ヒトＵＣＰ−４と２９９アミノ酸残基にわた
り同一性が３０％および相同性が５０％、ヒトＵＣＰ−
５と２９３アミノ酸残基にわたり同一性が３０％および
相同性が４８％認められる。ＵＣＰ―１、２、３間では
互いに７０％以上の相同性を示し、ＵＣＰ−４、５は他
のアイソフォームと５０−６０％の相同性を有する。こ
れに対しＭＴ００２９は他のアイソフォームと４０−５
０％の相同性を示すに留まる。また、ＭＴ００２９はほ
ぼ全身に発現が観察されるものの、心臓、白血球、活性
化白血球、骨格筋には発現しておらず、既知のＵＣＰと
は異なる発現プロファイルを示す。

【００２２】このことから、ＭＴ００２９は、他の脱共
役蛋白質分子にはない特徴的な役割を果たしていること
が強く推認される。従って、ＭＴ００２９を標的とした
医薬化合物、特にＭＴ００２９に対して高い選択性を有
する医薬化合物は、望外の生理作用を示さないなどの従
来にはない特徴を備えた医薬となり得るものと期待され
る。なお、公知の蛋白質との相同性検索の結果、ＭＴ０
０２９と全長にわたってアミノ酸配列で９１％の同一性
および９５％の相同性、核酸配列で８８％の同一性を有
するクローン、マウスｐｕｔａｔｉｖｅ（ＧｅｎＢａｎ
ｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ: ＢＡＢ２５０４８）が存在す
ることが明らかになった。しかし、マウスｐｕｔａｔｉ
ｖｅ（ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ: ＢＡＢ２
５０４８）については、ＦＡＮＴＯＭデータベース（ｈ
ｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｓｃ．ｒｉｋｅｎ．ｇｏ．ｊｐ
／ｅ／ＦＡＮＴＯＭ／、ｃｌｏｎｅＩＤ：１８１００１
２Ｈ１１）上にＭｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｃａｒｒ
ｉｅｒ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｐｒ
ｏｔｅｉｎというアノテーションはあるものの、蛋白質
としてどのような機能を有するのかについては何ら示さ
れておらず、実証もされていない。これに対し本発明
は、ＭＴ００２９の発現プロファイル、機能解析を通し
て、本発明の蛋白質が新規な脱共役蛋白質であることを
示し、生活習慣病の予防・治療に有用な蛋白質であるこ
とを明らかにしたものである。

【００２３】なお、脱共役蛋白質である限り、配列番号
２に示す蛋白質のアミノ酸配列において、１以上のアミ
ノ酸が置換、欠失、および／もしくは付加したアミノ酸
配列からなるポリペプチドあるいは蛋白質も本発明の範
囲内である。

【００２４】蛋白質の構成要素となるアミノ酸残基側鎖
は、疎水性、電荷、大きさなどにおいてそれぞれ異なる
が、実質的に蛋白質全体の３次元構造（立体構造とも言
う）に影響を与えないという意味で保存性の高い幾つか
の関係が知られている。例えば、アミノ酸残基の置換に
ついては、グリシン（Ｇｌｙ）とプロリン（Ｐｒｏ）、
Ｇｌｙとアラニン（Ａｌａ）またはバリン（Ｖａｌ）、
ロイシン（Ｌｅｕ）とイソロイシン（Ｉｌｅ）、グルタ
ミン酸（Ｇｌｕ）とグルタミン（Ｇｌｎ）、アスパラギ
ン酸（Ａｓｐ）とアスパラギン（Ａｓｎ）、システイン
（Ｃｙｓ）とスレオニン（Ｔｈｒ）、Ｔｈｒとセリン
（Ｓｅｒ）またはＡｌａ、リジン（Ｌｙｓ）とアルギニ
ン（Ａｒｇ）、等が挙げられる。また、Ａｌａ、Ｖａ
ｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、メチオニン（Ｍｅｔ）、
フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、トリプトファン（Ｔｒ
ｐ）、Ｇｌｙ、Ｃｙｓは、共に非極性アミノ酸に分類さ
れるため、互いに似た性質を有すると考えられる。非荷
電極性アミノ酸としては、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、チロシン
（Ｔｙｒ）、Ａｓｎ、Ｇｌｎが挙げられる。酸性アミノ
酸としては、ＡｓｐおよびＧｌｕが挙げられる。塩基性
アミノ酸としてはＬｙｓ、Ａｒｇ、ヒスチジン（Ｈｉ
ｓ）が挙げられる。また、上述の意味の保存性を損なう
場合でも、なおその蛋白質の本質的な機能、本発明にお
いては脱共役蛋白質としての機能を失わない変異も当業
者に多く知られている。さらに、異なる生物種間に保存
される同種の蛋白質が、幾つかのアミノ酸が集中あるい
は分散して欠失あるいは挿入されていてもなお本質的な
機能を保持している例も多く認められている。

【００２５】従って、配列番号２に示したアミノ酸配列
上の幾つかのアミノ酸残基の置換、挿入、欠失等による
変異蛋白質であっても、その変異蛋白質が脱共役蛋白質
としての活性を有する限り、これらは本発明の範囲内に
あるものと言うことができる。ここにいう脱共役蛋白質
の活性とは、例えば、本発明の蛋白質を発現させるため
の発現ベクターにより組み換えた形質転換細胞におい
て、ミトコンドリア膜電位を減少させる活性活性、また
は、糖取り込み速度、糖代謝速度あるいは脂肪酸酸化速
度のいずれかを増加させる活性のことであり、具体的に
は実施例４に示す方法により確認することができる。幾
つかのアミノ酸残基が異なっていても、配列番号２に記
載のアミノ酸配列からなるＭＴ００２９と実質的に同質
の機能を有するものは、本発明の範囲内であるといえ
る。従って、本発明の蛋白質を発現させるための発現ベ
クターにより組み換えた形質転換細胞において、ミトコ
ンドリア膜電位を減少させる活性活性、または、糖取り
込み速度、糖代謝速度あるいは脂肪酸酸化速度のいずれ
かを増加させる活性が性質的に同質であればよく、該活
性の強弱の変動、または糖鎖結合の相違などによる該蛋
白質の分子量の量的変化などは許容されると解されるべ
きである。

【００２６】このようなアミノ酸の改変は、遺伝子多型
等によって生ずる変異の様に自然界において認められる
他、当業者に公知の方法、例えばＮＴＧなどの変異誘発
剤を用いた突然変異誘発法や種々の組換え遺伝子手法を
用いた部位特異的変異法を利用して、人為的に行うこと
ができる。アミノ酸の変異部位および個数は、変異蛋白
質が脱共役蛋白質である限り特に制限はないが、変異個
数は通常数十アミノ酸以内、好ましくは１０アミノ酸以
内、さらに好ましくは１または数個以下である。

【００２７】また配列番号２のアミノ酸配列と９６％以
上、より好ましくは９８％以上、の相同性を有するアミ
ノ酸配列からなる脱共役蛋白質も本発明の範囲内のもの
である。アミノ酸配列の相同性の判断には、ＢＬＡＳＴ
（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．，３６；２９０−３００（１
９９３）、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５；４０３−
１０（１９９０））を用いることができる。

【００２８】本発明の蛋白質またはその部分断片ペプチ
ドは、該蛋白質の活性を調節する物質の探索に使用する
ことが出来る。探索を通じて得られる化合物等は、本発
明の蛋白質が関連する疾患、例えば肥満、糖尿病、高脂
血症等の生活習慣病に対する有効な治療薬または予防薬
となることが期待される。

【００２９】（抗体）本発明はさらにＭＴ００２９に結
合する抗体を提供する。本発明の抗体は、ＭＴ００２９
全体あるいはその部分ペプチドを抗原として得られる、
ＭＴ００２９のみを特異的に認識する抗体であり、モノ
クローナル抗体及び／またはポリクローナル抗体が含ま
れる。また、免疫グロブリンの構造、物理化学的性質や
免疫学的性質として分類される５つのクラス（ＩｇＧ，
ＩｇＡ，ＩｇＭ，ＩｇＤ，ＩｇＥ）、あるいはＨ鎖のタ
イプによるサブクラスのいずれに属するものであっても
よい。さらに、免疫グロブリンを例えばペプシンで分解
したときのＦ（ａｂ’） _２、パパインで分解したときの
Ｆａｂなどのフラグメントであっても、またキメラ抗体
やヒト化抗体であってもよい。これらの抗体は、ＭＴ０
０２９の研究的あるいは臨床的な検出等に有用である。

【００３０】（アンチセンス核酸）本発明は、生体内に
おいて核酸レベルでのＭＴ００２９生合成を抑制するこ
とのできる、いわゆるアンチセンス核酸を提供する。か
かるアンチセンス核酸は、ＭＴ００２９をコードするｍ
ＲＮＡを作り出すのに必要なゲノム領域からｐｒｅ−ｍ
ＲＮＡへの転写段階、ｐｒｅ−ｍＲＮＡから成熟ｍＲＮ
Ａへのプロセッシング段階、核膜通過段階、蛋白への翻
訳段階のいずれかで、遺伝子情報を担うＤＮＡもしくは
ＲＮＡに結合し、遺伝情報の伝達の正常な流れに影響を
与えて蛋白質の発現を調節するものを意味し、遺伝子ｍ
ｔ００２９の核酸配列の全体あるいはいずれかの部分に
相補する配列からなるものであってもよい。好ましく
は、配列番号１に記載の核酸配列に相当あるいは相補す
る配列から成る核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡを含む）である。
また、ゲノム領域から転写されるｍＲＮＡがイントロン
構造あるいは５’末端や３’末端に非翻訳領域を含む形
であるときは、かかる非翻訳部分の配列に相当あるいは
相補するアンチセンス核酸も本発明のアンチセンス核酸
と同等の機能を有するものとなろう。

【００３１】本発明のアンチセンス核酸は、ＤＮＡやＲ
ＮＡの他、その立体構造や機能がＤＮＡあるいはＲＮＡ
と類似する各種誘導体のすべてを含むものである。例え
ば、３’末端もしくは５’末端に他の物質が結合した核
酸、オリゴヌクレオチドの塩基、糖、リン酸の少なくと
もいずれか１つにおいて置換や修飾が生じた核酸、天然
には存在しないような塩基、糖あるいはリン酸を有する
核酸、糖−リン酸骨格以外の骨格（バックボーン）を有
する核酸等が挙げられる。これらの核酸は、ヌクレアー
ゼ耐性、組織選択性、細胞透過性、結合力の少なくとも
１つが高められた誘導体として好適である。すなわち、
ＭＴ００２９の活性発現を抑制し得る機能を有する限
り、核酸の形態に制限はない。

【００３２】また本発明では、一般的には、ステム・ル
ープを形成しているｍＲＮＡのループ部分にハイブリダ
イズするような塩基配列、すなわちステム・ループを形
成している領域の塩基配列に相補的な塩基配列をもつア
ンチセンス核酸が好適である。あるいは、翻訳開始コド
ン付近、リボソーム結合部位、キャッピング部位、スプ
ライス部位に結合するようなアンチセンス核酸、すなわ
ちこれらの部位の配列に相補的な配列を有するアンチセ
ンス核酸も、一般に高い発現抑制効果が期待できる点で
好ましい。

【００３３】この様なアンチセンス核酸を細胞内に取り
込ませ、効率的に作用させるためには、本発明のアンチ
センス核酸の鎖長は１５塩基以上３０塩基以下、好まし
くは１５塩基以上２５塩基以下、より好ましくは１８塩
基以上２２塩基以下の塩基数からなる塩基配列からなる
ものが好適である。

【００３４】本発明のアンチセンス核酸の発現抑制効果
は、公知の手法、例えば本発明の遺伝子の発現制御領
域、５’非翻訳領域、翻訳開始部位近傍領域または翻訳
領域の一部等を含むＤＮＡとルシフェラーゼ等のレポー
ター遺伝子を連結した発現プラスミドを作製し、ｉｎ
ｖｉｔｒｏ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ反応（プロメ
ガ社：Ｒｉｂｏ ｍａｘ ｓｙｓｔｅｍ等）とｉｎ ｖ
ｉｔｒｏ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ反応（プロメガ社：
Ｒａｂｂｉｔ Ｒｅｔｉｃｕｌｏｃｙｔｅ Ｌｙｓａｔ
ｅ Ｓｙｓｔｅｍ等）を併用する系のような本発明の遺
伝子が転写または翻訳される環境下で候補物質を系に添
加し、該レポーター遺伝子の発現量を測定することによ
り評価することができる。

【００３５】本発明のアンチセンス核酸は、生体内にお
けるｍｔ００２９の発現を抑制することができるので、
ＭＴ００２９が関連する疾患の予防・治療剤として有用
である。

【００３６】

【発明の実施の形態】（核酸）本発明のＤＮＡをＤＮＡ
ライブラリーから得る例としては、適当なゲノムＤＮＡ
ライブラリーやｃＤＮＡライブラリーを、ハイブリダイ
ゼーションによるスクリーニング法や、抗体を用いたイ
ムノスクリーニング法等でスクリーニングし、目的のＤ
ＮＡを有するクローンを増殖させ、そこから制限酵素等
を用いて切り出す方法がある。ハイブリダイゼーション
法によるスクリーニングは、配列番号１に記載の塩基配
列もしくはその一部を有するＤＮＡを^３２Ｐ等でラベル
してプローブとし、任意のゲノムＤＮＡライブラリーま
たはｃＤＮＡライブラリーに対して、公知の方法で（例
えば、Ｍａｎｉａｔｉｓ Ｔ．等，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｃｌｏｎｉｎｇ，ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕ
ａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８２年）行う
ことができる。イムノスクリーニング法で用いる抗体
は、後述する本発明の抗体を使用することができる。本
発明の新規ＤＮＡはまた、ゲノムＤＮＡライブラリーも
しくはｃＤＮＡライブラリーを鋳型とするＰＣＲ（Ｐｏ
ｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ）に
よっても得る事ができる。ＰＣＲは、配列番号１に記載
の塩基配列をもとに、センスプライマー、アンチセンス
プライマーを作製し、任意のＤＮＡライブラリーに対
し、公知の方法（例えばＭｉｃｈａｅｌ Ａ．Ｉ．等，
ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ
Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，
Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１９９０年参照）等を
行って、本発明のＤＮＡを得る事もできる。上記各種方
法で使用するＤＮＡライブラリーは、本発明のＤＮＡを
有するＤＮＡライブラリーを選択して使用する。当該Ｄ
ＮＡライブラリーは、本発明のＤＮＡを有するライブラ
リーであれば、いかなるものも使用可能であり、市販の
ＤＮＡライブラリーを使用したり、本発明のＤＮＡを有
する細胞からＤＮＡライブラリーを作製するのに適した
細胞を選び公知の方法（Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ 等、Ｍ
ｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，ａ Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ２ｎｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９年参照）に従って、ＤＮＡ
ライブラリーを作製し、利用することができる。

【００３７】また、本明細書に開示された配列を基にホ
スホアミダイト法などの化学合成的手法により調製する
ことも可能である。

【００３８】本発明のＤＮＡを含む組換えベクターは、
環状、直鎖状等いかなる形態のものであってもよい。か
かる組換えベクターは、本発明のＤＮＡの全部または一
部に加え、必要ならば他の塩基配列を有していてもよ
い。他の塩基配列とは、エンハンサーの配列、プロモー
ターの配列、リボゾーム結合配列、コピー数の増幅を目
的として使用される塩基配列、シグナルペプチドをコー
ドする塩基配列、他のポリペプチドをコードする塩基配
列、ポリＡ付加配列、スプライシング配列、複製開始
点、選択マーカーとなる遺伝子の塩基配列等のことであ
る。本発明の組換えベクターの好ましい一例は、発現ベ
クターである。

【００３９】遺伝子組換えに際しては、適当な合成ＤＮ
Ａアダプターを用いて翻訳開始コドンや翻訳終止コドン
を本発明のＤＮＡに付加したり、あるいは塩基配列内に
適当な制限酵素切断配列を新たに発生させあるいは消失
させることも可能である。これらは当業者が通常行う作
業の範囲内であり、本発明のＤＮＡを基に任意かつ容易
に加工することができる。

【００４０】また本発明のＤＮＡを保持するベクター
は、使用する宿主に応じた適当なベクターを選択して使
用すればよく、プラスミドの他にバクテリオファージ、
バキュロウイルス、レトロウイルス、ワクシニアウイル
ス等の種々のウイルスを用いることも可能であり、特に
制限はない。

【００４１】本発明の遺伝子の発現は、該遺伝子固有の
プロモーター配列の制御下に発現させることができる。
かかる発現系を用いれば、本発明の遺伝子の転写を促進
あるいは抑制する物質の探索がより有利に行える。ある
いは、本発明の遺伝子の上流に別の適当な発現プロモー
ターを該遺伝子固有のプロモーター配列に接続あるいは
置き換えて使用することもできる。この場合に使用する
プロモーターは、宿主及び発現の目的に応じて適宜選択
すればよく、例えば宿主が大腸菌である場合にはＴ７プ
ロモーター、ｌａｃプロモーター、ｔｒｐプロモータ
ー、λＰＬプロモーターなどが、宿主が酵母である場合
にはＰＨＯ５プロモーター、ＧＡＰプロモーター、ＡＤ
Ｈプロモーター等が、宿主が動物細胞である場合にはＳ
Ｖ４０由来プロモーター、レトロウイルスプロモーター
等を例示できるが、当然ながらこれらには限定されな
い。

【００４２】ＤＮＡをベクターに導入する方法は公知で
ある（Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ等、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｃｌｏｎｉｎｇ，ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕ
ａｌ２ｎｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒ
ｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ニューヨーク（Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ），１９８９年、参照）。すなわち、ＤＮＡ
とベクターをそれぞれ適当な制限酵素で消化し、得られ
たそれぞれの断片を、ＤＮＡリガーゼを用いてライゲー
ションさせればよい。

【００４３】（蛋白質）本発明の蛋白質は、該蛋白質を
発現している細胞や組織から調製することができ、また
ペプチド合成機（例えば、ペプチドシンセサイザー４３
３Ａ型、アプライドバイオシステムズ ジャパン株式会
社製）を使用した化学合成法でも、また原核生物あるい
は真核生物から選択される適当な宿主細胞を用いた組換
え方法によっても調製することができる。しかしなが
ら、その純度の面から遺伝子工学的な手法による生産な
らびに組換え型蛋白質が好ましい。

【００４４】本発明の形質転換細胞は、適当な宿主細胞
を本発明の組み換えベクターにより形質転換させること
で得ることができる。前項の組換えベクターを用いて形
質転換させる宿主細胞には特に制限はなく、Ｅ．ｃｏｌ
ｉ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓあるいはＳ．ｃｅｒｅｖｉｓ
ｉａｅに代表される遺伝子工学手法において利用可能な
下等細胞、昆虫細胞、ＣＯＳ７細胞、ＣＨＯ細胞、Ｈｅ
Ｌａ細胞に代表される動物細胞など多くの細胞が、本発
明に対しても利用可能である。

【００４５】組換えベクターを宿主細胞に導入する方法
としては、エレクトロポレーション法、プロトプラスト
法、アルカリ金属法、リン酸カルシウム沈澱法、ＤＥＡ
Ｅデキストラン法、マイクロインジェクション法、ウイ
ルス粒子を用いる方法等の公知方法（実験医学臨時増
刊、遺伝子工学ハンドブック１９９１年３月２０日発
行、羊土社、参照）があるが、いずれの方法を用いても
構わない。

【００４６】当該蛋白質を遺伝子工学的に生産するに
は、上述の形質転換細胞を培養して培養混合物を回収
し、当該蛋白質を精製する。形質転換細胞の培養は、一
般的な方法で行うことができる。形質転換細胞の培養に
ついては各種の成書（例、「微生物実験法」社団法人日
本生化学会編、株式会社東京化学同人、１９９２年）が
あるので、それらを参考にして行うことができる。

【００４７】培養混合物から本発明の蛋白質を精製する
方法としては、蛋白質の精製に通常使用されている方法
の中から適切な方法を適宜選択して行うことができる。
すなわち、塩析法、限外濾過法、等電点沈澱法、ゲル濾
過法、電気泳動法、イオン交換クロマトグラフィー、疎
水性クロマトグラフィーや抗体クロマトグラフィー等の
各種アフィニティークロマトグラフィー、クロマトフォ
ーカシング法、吸着クロマトグラフィーおよび逆相クロ
マトグラフィー等、通常使用され得る方法の中から適切
な方法を適宜選択し、必要によりＨＰＬＣシステム等を
使用して適当な順序で精製を行えば良い。

【００４８】また、本発明の蛋白質を他の蛋白質（例、
免疫グロブリンのＦｃ断片）やタグ（例、グルタチオン
Ｓトランスフェラーゼ、プロテインＡ、ヘキサヒスチジ
ンダグ、ＦＬＡＧタグその他）との融合蛋白質として発
現させることも可能である。発現させた融合型は、適当
なプロテアーゼ（例、トロンビン、エンテロキナーゼそ
の他）を用いて切り出すことが可能であり、ときとして
蛋白質の調製をより有利に行うことが可能となる。ま
た、免疫グロブリンのＦｃ断片を用いた場合などは、二
量体形成能を賦与するなど、本発明の蛋白質の活性また
は機能を向上または修飾することが可能である。本発明
の蛋白質の精製は当業者に一般的な手法を適宜組み合わ
せて行えばよく、特に融合蛋白質の形態で発現させたと
きは、その形態に特徴的な精製法を採用することが好ま
しい。

【００４９】また、組換えＤＮＡ分子を利用して無細胞
系の合成方法（Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．：
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ ２ｎｄ ｅｄ．
（１９８９年））で得る方法も、遺伝子工学的に生産す
る方法の１つである。

【００５０】この様に本発明の蛋白質は、それ単独の形
態でも別種の蛋白質との融合蛋白質の形態でも調製する
ことができるが、これらのみに制限されるものではな
く、本願発明の蛋白質を更に種々の形態へと変換させる
ことも可能である。例えば、蛋白質に対する種々の化学
修飾、ポリエチレングリコール等の高分子との結合、不
溶性担体への結合など、当業者に知られている多種の手
法による加工が考えられる。また、用いる宿主によって
は糖鎖の付加の有無あるいはその程度にも違いが認めら
れる。かかる場合にあっても、ＭＴ００２９としての脱
共役蛋白質の活性を有する限りにおいて、なお、本発明
であると理解されたい。

【００５１】本発明の蛋白質は、抗体を作製するための
抗原として使用し、あるいは該蛋白質に結合する物質や
該蛋白の活性を調節する物質のスクリーニングに使用す
ることができ、有用である。

【００５２】本発明のＭＴ００２９は、上述のような形
質転換細胞、特に動物細胞を培養することにより、その
ミトコンドリア膜上に目的分子を高発現させることが可
能である。一方、ＭＴ００２９の適当な断片を可溶性タ
ンパクとして製造する場合には、当該断片をコードする
ＤＮＡを用いて上述のように形質転換細胞を調製し、該
形質転換細胞を培養することにより培養上清中に分泌さ
せることにより製造することができる。

【００５３】一方、ＭＴ００２９が形質転換細胞のペリ
プラズムまたは細胞質内に存在する場合は、適当な緩衝
液に懸濁した細胞に対して、例えば超音波処理、凍結融
解処理、あるいはリゾチーム処理などを行って細胞壁お
よび／または細胞膜を破壊した後、遠心分離やろ過など
の方法で本発明の蛋白質を含有する膜画分を得、さらに
該膜画分を適当な界面活性剤を用いて可溶化して粗溶液
を調製する。そして、当該粗溶液から定法により目的蛋
白質を単離、精製することができる。

【００５４】（トランスジェニック動物）本発明のｍｔ
００２９を用いれば、トランスジェニック非ヒト哺乳動
物を作製することができる。このトランスジェニック非
ヒト哺乳動物も本願の発明に属する。該トランスジェニ
ック非ヒト哺乳動物は、トランスジェニック動物の製造
において通常使用されるような定法（例、発生工学実験
マニュアル、講談社サイエンティフィク発行、勝木元也
編、野村達次監修、１９８７年）に従って作製すること
ができる。すなわち、本発明の遺伝子または組換えベク
ターを非ヒト動物の全能性細胞に導入し、この細胞を個
体へと発生させ、体細胞のゲノム中に導入遺伝子が組み
込まれた個体を選別する。

【００５５】具体的には、例えば、トランスジェニック
マウスの場合には、正常Ｃ５７Ｂｌａｃｋ／６マウスか
ら取得した前核期受精卵にｍｔ００２９遺伝子が発現可
能なように構築されたＤＮＡを直接注入する。より具体
的には、適切なプロモーターの下流にｍｔ００２９遺伝
子を接続して導入したコンストラクトを作製し、その後
必要であれば原核生物由来の配列を可能な限り除去した
直鎖状ＤＮＡを得て、これを前核期受精卵前核に微細な
ガラス針を用いて直接注入する。該受精卵を仮親として
別の偽妊娠マウスの子宮に移植する。偽妊娠マウスは一
般的にＩＣＲ雌マウスを、精管を切断または結紮した雄
マウスと交配して作製する。移植胚由来の仔の組織より
ゲノムＤＮＡを抽出し、ＰＣＲ法またはサザンブロッテ
ィング法にてｍｔ００２９遺伝子の導入の有無を確認し
トランスジェニックマウスを得る。例えば、既報（Ｃｌ
ａｐｈａｍら、Ｎａｔｕｒｅ，Ｖｏｌ．４０６；４１５
−４１８（２０００））のとおり、骨格筋に特異的にＭ
Ｔ００２９を過剰発現するトランスジェニックマウスを
作成、８週令から８週間、高脂肪食を負荷後、生化学
的、病理学的検討を行うことにより、対照マウスに比
し、トランスジェニックマウスにおいては有意に体重、
体脂肪量、血糖値、血清インスリン値、血清ＴＧ、ＦＦ
Ａ値の低下が観察できるものと予想される。

【００５６】また、ｍｔ００２９（またはｍｔ００２９
のマウス相同遺伝子）の塩基配列に基づいて、いわゆる
「ノックアウトマウス」を作製することができる。本発
明における「ノックアウトマウス」とは、本発明のマウ
ス由来のタンパクをコードする内在性遺伝子がノックア
ウト（不活性化）されたマウスであり、例えば相同組換
えを応用したポジティブネガティブセレクション法（米
国特許第５，４６４，７６４号公報、同５，４８７，９
９２号公報、同５，６２７，０５９号公報 、Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，Ｖｏｌ．８
６；８９３２−８９３５（１９８９）、Ｎａｔｕｒｅ，
Ｖｏｌ．３４２；４３５−４３８（１９８９）など）を
用いて作製することができ、このようなノックアウトマ
ウスも本発明の一態様である。また、最近、中大動物に
おいても核移植によるクローン動物の作出が可能となっ
た。これに伴い本技術を用いたＴＧおよびＫＯ動物の作
出も実際に行われるようになった。すなわち体細胞、あ
るいは生殖系列の細胞に対しｍｔ００２９（または各動
物におけるｍｔ００２９の相同遺伝子）の塩基配列に基
づいて、ＥＳ細胞に対して行うのと同様に相同組換えを
行い、得られた細胞から核を得て、その核を用いてクロ
ーン動物を得ることができる。該動物はｍｔ００２９
（または各動物におけるｍｔ００２９の相同遺伝子）が
失われたノックアウト動物である。または、上述の方法
と同様、任意の動物の任意の細胞にｍｔ００２９（また
は各動物におけるｍｔ００２９の相同遺伝子）遺伝子を
導入し、その核を用いてクローン動物を得る事によりＴ
Ｇ動物を作製する事も可能である。このようなノックア
ウト非ヒト動物およびトランスジェニック非ヒト動物は
その種に関わらず本発明の一態様である。

【００５７】（抗体）本発明の抗体は、ポリクローナル
抗体、モノクローナル抗体いずれも公知方法を参考にし
て得ることができる（例えば、免疫実験操作法、日本免
疫学会編、日本免疫学会発行、参照）。以下に簡単に説
明する。

【００５８】当該新規抗体を得るには、まず動物に、免
疫抗原として本発明の蛋白質を必要に応じてフロイント
の完全アジュバント（ＦＣＡ）や不完全アジュバント
（ＦＩＡ）等の適切なアジュバントとともに接種し、必
要があれば２〜４週間の間隔で追加免疫する。追加免疫
後、採血を行い、抗血清を得る。抗原として用いる本発
明の蛋白質は、それが抗体の作製に使用しうる精製度の
ものであればいかなる方法で得られたものであってもよ
い。本発明の蛋白質の部分ポリペプチドも免疫抗原とし
て好適に使用しうる。免疫抗原として使用するポリペプ
チドが、低分子のポリペプチド、すなわち約１０〜２０
アミノ酸からなるポリペプチドである場合には、それを
キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）等のキャ
リアと結合させて抗原として使用すればよい。免疫する
動物はいかなるものであっても良いが、好ましくは通常
当業者で免疫学的な実験に使用されるラット、マウス、
ウサギ、ヒツジ、ウマ、ニワトリ、ヤギ、ブタ、ウシ等
から、目的の抗体を産生しうる動物種を選択して使用す
ることが好ましい。

【００５９】ポリクローナル抗体は、得られた抗血清を
精製することによって得る事が出来る。精製は、塩析、
イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマ
トグラフィー等の公知方法を適宜組み合わせて行えば良
い。

【００６０】モノクローナル抗体を得るには以下のよう
に行う。すなわち、免疫した動物から脾細胞もしくはリ
ンパ球等の抗体産生細胞を採取し、ポリエチレングリコ
ール、センダイウイルス、電気パルス等を用いる公知方
法によって、ミエローマ細胞株等と融合し、ハイブリド
ーマを作製する。その後、本発明の蛋白質に結合する抗
体を産生しているクローンを選択して培養し、その選択
されたクローンの培養上清を精製することによって得れ
ば良い。精製は、塩析、イオン交換クロマトグラフィ
ー、アフィニティークロマトグラフィー等の公知方法を
適宜組み合わせて用いれば良い。

【００６１】また、遺伝子工学的な方法を用いても当該
新規抗体が得られる。例えば、本発明蛋白質またはその
部分ポリペプチドで免疫した動物の脾臓細胞、リンパ球
あるいは、本発明蛋白質またはその部分ポリペプチドに
対するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマか
らｍＲＮＡを採取し、これをもとにｃＤＮＡライブラリ
ーを作製する。抗原と反応する抗体を産生しているクロ
ーンをスクリーニングし、得られたクローンを培養し、
培養混合物から目的とする抗体を公知方法を組み合わせ
て精製することができる。抗体を治療に使用する場合に
は、免疫原性の点からヒト化抗体が好ましい。ヒト化抗
体は、免疫系をヒトのものと入れ替えたマウス（例 Ｎ
ａｔ． Ｇｅｎｅｔ． １５；１４６−１５６（１９９
７））を免疫することにより調製することが出来る。ま
た、モノクローナル抗体の超可変領域を用いてヒト化抗
体を遺伝子工学的に調製することもできる（Ｍｅｔｈｏ
ｄｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２０３；９９−１２１
（１９９１））。

【００６２】（アンチセンス核酸）アンチセンス核酸
は、公知方法で製造することができる（例えば、Ｓｔａ
ｎｌｅｙ Ｔ．ＣｒｏｏｋｅおよびＢｅｒｎａｌｄ Ｌ
ｅｂｌｅｕ編、ｉｎ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａ
ｒｃｈ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ＣＲＣ出
版、フロリダ、１９９３年）。天然のＤＮＡやＲＮＡで
あれば、化学合成機を使用して合成し、あるいはｍｔ０
０２９を鋳型としてＰＣＲ法により本発明のアンチセン
ス核酸を得ることができる。また、メチルフォスフォネ
ート型やフォスフォロチオエート型等、誘導体の中には
化学合成機（たとえばアプライドバイオシステムズ ジ
ャパン株式会社製、Ｅｘｐｅｄｉｔｅ Ｍｏｄｅｌ ８
９０９）を使用して合成できるものもある。この場合に
は、化学合成機に添付されたマニュアルに従って操作を
行い、得られた合成産物を、逆相クロマトグラフィー等
を用いたＨＰＬＣ法により精製することによっても、ア
ンチセンス核酸を得ることができる。

【００６３】本発明のＤＮＡやアンチセンス核酸を診断
用のプローブとして使用する場合には、それらを公知の
方法に従い、ラジオアイソトープ、酵素、蛍光物質、あ
るいは発光物質等で標識する。次に、検体からＤＮＡも
しくはｍＲＮＡを公知方法で調製し、これを被検物質と
して、前記標識プローブを加えて反応させた後、洗浄し
て未反応の前記標識プローブを除去する。被検物質中
に、遺伝子ＭＴ００２９もしくはＲＮＡが含まれていれ
ば、当該アンチセンス核酸はそれらと結合する。結合形
成の有無は、標識した酵素、蛍光物質、発光物質、ある
いは放射性同位元素等による発光、蛍光、放射能等を指
標として知ることができる。

【００６４】本発明のＤＮＡ、アンチセンス核酸または
組換えベクターを医薬用途に使用する場合には、医薬品
として使用するのに適した純度のものを、薬理学的に許
容されうる使用方法で使用することが好ましい。

【００６５】本発明のＤＮＡ、アンチセンス核酸あるい
は組換えベクターは、それらを直接適当な溶媒に溶解も
しくは懸濁して使用してもよいし、リポソーム中に封入
したり、適当なベクターに組み込んだ形にして使用して
もよい。また、必要に応じて、薬理学的に許容され得る
補助成分を添加し、注射剤、錠剤、カプセル剤、点眼
剤、クリーム剤、座剤、噴霧剤、パップ剤等適当な剤型
にして使用してもよい。薬理学的に許容され得る補助成
分とは、溶媒、基剤、安定化剤、防腐剤、溶解剤、賦形
剤、緩衝剤等のことである。

【００６６】本発明のＤＮＡ、アンチセンス核酸あるい
は組換えベクターは、上述のような剤型とした場合、患
者の年齢や、性別、疾患の種類、程度に応じて、その投
与方法、その投与量を設定して使用することができる。
すなわち、病態を改善するのに適した量を、経口投与、
あるいは、吸入、経皮投与、点眼、膣内投与、関節内投
与、直腸投与、静脈内投与、局所投与、筋肉内投与、皮
下投与、腹腔内投与等から適当な方法を選んで投与すれ
ばよい。

【００６７】（スクリーニング方法）本発明は、本発明
の蛋白質、該蛋白質を発現している形質転換細胞、本発
明のＤＮＡ、該ＤＮＡを含む組換えベクターまたは該組
換えベクターで形質転換された形質転換細胞を用いるこ
とを特徴とし、本発明の蛋白質の機能または発現を調節
する物質をスクリーニング方法に関する。より具体的に
は、（１）候補物質を用意し、本発明の蛋白質または該
蛋白質を発現している形質転換細胞に該候補物質を接触
させ、該候補物質が本発明の蛋白質の活性を調節する作
用を有するかどうかを判定することからなる方法、
（２）候補物質を用意し、本発明のＤＮＡを含む組換え
ベクターまたは該組換えベクターで形質転換された形質
転換細胞に該候補物質を接触させ、該候補物質がｍｔ０
０２９遺伝子の発現を調節する作用を有するかどうかを
判定することからなる方法などが挙げられる。（１）の
例としては、実施例４に示す系において、候補物質存在
下／非存在下における本発明の蛋白質の活性を測定し、
非存在下に比べて存在下において本発明の蛋白質の活性
を増加または減少させる候補物質を選択する方法が挙げ
られる。（２）の例としては、ｍｔ００２９遺伝子の発
現制御領域、５’非翻訳領域、翻訳開始部位近傍領域ま
たは翻訳領域の一部等を含むＤＮＡとルシフェラーゼ等
のレポーター遺伝子を連結した発現プラスミドを作製
し、本発明の遺伝子が転写または翻訳されるような環境
下で該レポーター遺伝子の発現量を候補物質の存在下／
非存在下で測定し、候補物質の転写促進活性または転写
抑制活性を確認する方法が挙げられる。本発明の遺伝子
の発現制御領域や５’非翻訳領域は公知の方法で取得す
ることが可能である（新細胞工学実験プロトコール（秀
潤社）、１９９３年）。

【００６８】上述のスクリーニング方法あるいはトラン
スジェニック動物を用いた探索を通じて得られる化合物
等は、生活習慣病に対する有効な治療薬または予防薬と
なることが期待される。候補物質としては蛋白質、ペプ
チド、オリゴヌクレオチド、合成化合物、天然由来化合
物、醗酵生成物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽
出液などが挙げられるがこれに限定されず、新規物質で
も公知物質でもよい。

【００６９】

【実施例】以下の実施例により本発明を更に詳述する
が、本発明はこれら実施例に限定して理解されるべきも
のではない。

【００７０】実施例１ ｍｔ００２９ｃＤＮＡのクロー
ニング ｍｔ００２９のクローニング以下の方法で行った。即
ち、センスプライマー１（５’−ＣＣＣ ＧＣＴ ＴＴ
Ｃ ＴＧＡ ＣＡＣ ＣＣＡ ＴＴＴ−３’）及びアン
チセンスプライマー１（５’−ＧＡＧ ＡＣＴ ＧＧＧ
ＡＡＡ ＧＣＧＧＣＴ ＧＴＴ−３’）を作製し、Ｈ
ｕｍａｎ Ｐｌａｃｅｎｔａ ｃＤＮＡＬｉｂｒａｒｙ
（ＴａＫａＲａ）を鋳型にＰｙｒｏｂｅｓｔ ＤＮＡ
Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（ＴａＫａＲａ）を用いてＰＣＲ
を行った。反応サイクルは９４℃で３０秒加熱した後に
９４℃ ３０秒、５５℃ ３０秒、７２℃ ６０秒を３
０サイクル行い、最後に７２℃で１８０秒加温した。得
られた約１．０ｋｂのＤＮＡ断片をアガロースゲル電気
泳動にて分離、精製した。次にＴａＫａＲａ ＢＬＫ
Ｋｉｔ（ＴａＫａＲａ）を用いて、この精製断片の末端
平滑化とリン酸付加反応を行い、ｐＵＣ１８のＳｍａＩ
サイトに挿入した。コンピテントセルＥ．ｃｏｌｉ Ｊ
Ｍ１０９（ＴａＫａＲａ）をｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉ
ｏｎしＭＴ００２９ ｃＤＮＡを含むプラスミドＭＴ０
０２９−５を得た。このプラスミドには配列番号２で表
される３００個のアミノ酸からなる新規な蛋白質をコー
ドする、配列番号１で表される９００塩基の塩基配列か
らなるオープンリーディングフレームを含む、全長９８
８塩基対の塩基配列（配列番号３）からなるｃＤＮＡが
含まれていた。尚、プラスミドＭＴ００２９−５は、国
際微生物寄託機関である独立行政法人産業技術総合研究
所特許生物寄託センターに、受託番号ＦＥＲＭＰ−１８
６５０として寄託されている。

【００７１】実施例２ ｃＤＮＡクローン及びその推定
蛋白質の相同性解析 相同性の検索にはＢＬＡＳＴ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏ
ｌ．，３６；２９０−３００（１９９３）、Ｊ．Ｍｏ
ｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５；４０３−１０（１９９０））
を用いて、局部的な配列の一致を検索した。ｃＤＮＡ配
列から推定される蛋白質配列を相同性検索をおこなうｂ
ｌａｓｔｐプログラムを用いてＧｅｎｂａｎｋ蛋白質デ
ータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌ
ｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）に対しＢＬＡＳＴ相同性検索を
行った。その結果、３００残基にわたりマウスｐｕｔａ
ｔｉｖｅ（ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ： Ｂ
ＡＢ２５０４８）との相同性が９５％および同一性が９
１％、２９０残基にわたりショウジョウバエＣＧ８３２
３ ｇｅｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔ（ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃ
ｃｅｓｓｉｏｎ： ＡＡＦ５８２８８）との相同性が６
６％および同一性が４７％、２９３残基にわたりショウ
ジョウバエＣＧ１８３２７ ｇｅｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔ
（ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＡＡＦ５８２
８７）との相同性が６６％および同一性が４６％、３０
０残基にわたり酵母ＭＩＴＯＣＨＯＮＤＲＩＡＬ ＣＡ
ＲＲＩＥＲ ＰＲＯＴＥＩＮ（ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃ
ｅｓｓｉｏｎ： Ｐ３２３３２）との相同性が５６％お
よび同一性が３７％みられた。

【００７２】モチーフデータベースであるＰＲＯＳＩＴ
Ｅデータベース （ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｘｐａｓ
ｙ．ｃｈ／ｐｒｏｓｉｔｅ／）を用いて、推定される蛋
白質配列の機能について、ＰＲＯＳＩＴＥデータベース
に対しパターン検索した結果、１９番目２５８番目のア
ミノ酸残基にＭｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｅｎｅｒｇ
ｙ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｓｉｇｎａ
ｔｕｒｅ［ＰＲＯＳＩＴＥ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＰＳ
００２１５］がみられた。

【００７３】隠れマルコフモデルを用いた相同性検索プ
ログラムであるＨＭＭＥＲ （Ｒ．Ｄｕｒｂｉｎ，
Ｓ． Ｅｄｄｙ， Ａ． Ｋｒｏｇｈ， Ｇ． Ｍｉｔ
ｃｈｉｓｏｎ．， Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒ
ｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ．，（１９９８））を用いてタン
パク質ドメインデータベースであるＰｆａｍ （ｈｔｔ
ｐ：／／ｗｗｗ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋ／Ｐｆａｍ
／； Ｅ．Ｌ．Ｌ．Ｓｏｎｎｈａｍｍｅｒ， Ｓ．Ｒ．
Ｅｄｄｙ， ａｎｄ Ｒ． Ｄｕｒｂｉｎ．， Ｐｒ
ｏｔｅｉｎｓ ．，２８， ｐｐ．４０５−４２０（１
９９７））に検索を実施した結果、有為な相同性のある
ドメインとしてアミノ酸番号２から２９５番目にＭｉｔ
ｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｃａｒｒｉｅｒ ｐｒｏｔｅｉ
ｎｓ［Ｐｆａｍ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ： ＰＦ００１５
３］が見出された。

【００７４】重み行列を用いた膜貫通予測プログラムｔ
ｍａｐ （Ｐｅｒｓｓｏｎ Ｂ，Ａｒｇｏｓ Ｐ ．，
Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．， ２３７， ｐｐ．１８２
−９２ （１９９４））により膜貫通ヘリックスの予測
をおこなったところ、１００番目から１２８番目のアミ
ノ酸残基の２９残基及び、２０４番目から２３２番目の
アミノ酸残基の２９残基において膜貫通領域が予測され
た。また、各種ＵＣＰ（ヒトＵＣＰ―１、ヒトＵＣＰ―
２、ヒトＵＣＰ―３、ヒトＵＣＰ―４）とのマルチプル
アライメントを図１に示す。

【００７５】実施例３ ＲＴ−ＰＣＲを用いた発現プロ
ファイルの解析 ＲＴ−ＰＣＲによるｍｔ００２９の組織発現プロファイ
ル解析を行った。解析に用いたヒトＲＮＡは以下の通り
である。ヒト冠動脈内皮細胞（ＨＣＡＥＣ）から定法に
より全ＲＮＡを調製した。また、ヒト末梢血由来白血球
を１００μｇ／ｍｌのＰＨＡ存在あるいは非存在下で２
４時間培養した後に全ＲＮＡを定法により調製した。さ
らにヒトの肺、腎臓、膵臓、肝臓、胸腺、脾臓、心臓、
胎盤、子宮、精巣、前立腺、骨格筋、脳の全ＲＮＡをＣ
ＬＯＮＴＥＣＨ社より、大腸、小腸の全ＲＮＡについて
はＢｉｏＣｈａｉｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅより購入し
た。次に、これら各全ＲＮＡ ６μｇよりオリゴｄＴプ
ライマーを用いて１本鎖ｃＤＮＡの合成を定法に従って
行った。逆転写酵素としてはＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔII
ＲＮａｓｅ Ｈ⁻Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉ
ｐｔａｓｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いた。また、
ＰＣＲに用いたｍｔ００２９特異的なプライマーの配列
はセンスプライマー（５’− ＡＣＡ ＴＡＣ ＣＡＧ
ＣＧＧ ＣＡＣ ＴＡＣ Ｃ−３’）、アンチセンス
プライマー（５’−ＧＴＧ ＧＡＧ ＧＡＡ ＣＣＧ
ＡＣＧ ＡＴＡ ＡＣ−３’）である。解析した結果は
図２の通りである。

【００７６】実施例４ 哺乳細胞での発現および活性の
測定 （１）発現プラスミドｐｃＤＮＡ−ＭＴ００２９の構築 ＭＴ００２９を蛋白質として得るために、ＣＭＶプロモ
ーターの下流にｍｔ００２９遺伝子を挿入したプラスミ
ド、ｐｃＤＮＡ−ＭＴ００２９、を以下の方法で構築し
た。実施例１で得られたプラスミドＭＴ００２９−５を
ＨｉｎｄＩＩＩおよびＥｃｏＲＩで消化して得られた約
１０００ｋｂ断片（ＭＴ００２９配列を含む）と、ＣＭ
Ｖプロモーターを有するプラスミドｐｃＤＮＡ３．１を
同様にＨｉｎｄＩＩＩおよびＥｃｏＲＩで消化した断片
を、ライゲーションし（Ｌｉｇａｔｉｏｎ Ｈｉｇｈ，
東洋紡）、ＪＨ５コンピテント細胞へ形質転換した。
得られたコロニーをＰＣＲで解析を行い、目的のプラス
ミドｐｃＤＮＡ−ＭＴ００２９を得た。 （２）ＳｋＭＣ細胞（ヒト骨格筋細胞株）、Ｌ６細胞
（マウス骨格筋由来細胞株）、Ｃ２Ｃ１２細胞（マウス
骨格筋由来細胞株）を用いたＭＴ００２９の発現および
活性の確認 発現プラスミドｐｃＤＮＡ−ＭＴ００２９を下記の方法
で上記３種の培養細胞株に導入し、蛋白質の発現を行
う。すなわち、上記３種の細胞のいずれかを６穴ウェル
プレートに播種後、ＦｕＧＥＮＥ６（ロシュ・ダイアグ
ノスティックス社）とｐｃＤＮＡ−ＭＴ００２９を添付
プロトコールに従い混合し添加する。５％ＣＯ２、３７
℃の条件下で４８時間培養した後に、既報（例、Ｇａｒ
ｃｉａ−Ｍａｒｔｉｎｅｚら、ＦＡＳＥＢ Ｊ．，Ｖｏ
ｌ．１５；２０３３−２０３５（２００１）Ｘｉｎｇ
Ｘｉａｎ Ｙｕら、ＦＡＳＥＢ Ｊ．，Ｖｏｌ．１４；
１６１１−１６１８（２０００））の方法に従い、細胞
を回収、ミトコンドリアを単離、蛍光色素を用い膜電位
を測定する。対照としてＭＴ００２９配列を有さないｐ
ｃＤＮＡ３．１プラスミドを導入した細胞と比較するこ
とにより、ＭＴ００２９導入細胞におけるミトコンドリ
ア膜電位の低下を確認できる。また上記の既報の他、公
知の方法に従い、糖取り込み速度、糖代謝速度または脂
肪酸酸化速度の測定を行うことによりＭＴ００２９の活
性を確認することができる。ｐｃＤＮＡ−ＭＴ００２９
により組み換えた形質転換細胞においては、ミトコンド
リア膜電位の低下、または糖取り込み速度、糖代謝速
度、あるいは脂肪酸酸化速度の増加が予想される。以下
にその結果の１例を示す。Ｌ６細胞における糖取り込み
速度の測定を既報（Ｈｕｐｐｅｒｔｚ Ｃ．ら、Ｊ．Ｂ
ｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．２７６；１２５２０−１
２５２９（２００１））の方法に従って行った。ｐｃＤ
ＮＡ３．１プラスミドを導入した細胞では１９．４±
０．５（ｐｍｏｌ／ｍｇｐｒｏｔｅｉｎ／ｍｉｎ、ｎ＝
４）であったのに対し、ｐｃＤＮＡ−ＭＴ００２９プラ
スミドを導入した細胞では２３．１±０．８（ｐｍｏｌ
／ｍｇ ｐｒｏｔｅｉｎ／ｍｉｎ、ｎ＝４）であり、Ｍ
Ｔ００２９発現細胞では有意な（Ｐ<０．０１）糖取り
込み速度増大効果が認められた。

【発明の効果】本発明のＭＴ００２９は、生活習慣病の
発症あるいは進行に対してその原因となり得る蛋白質で
あり、糖尿病、肥満、高脂血症等の予防あるいは治療の
ための医薬品の開発において、極めて有用である。

【００７７】また、遺伝子ｍｔ００２９は、アンチセン
ス医薬品として、また遺伝子治療において利用すること
ができる。さらに、ＭＴ００２９またはその断片に反応
性を有する抗体及びその抗体の一部は、生体内でのＭＴ
００２９機能を制御する抗体医薬品として有用である。

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. <110> RIKEN <120> Novel human uncoupling protein MT0029 <130> 46211 <160> 3 <170> PatentIn Ver. 2.1 <210> 1 <211> 900 <212> DNA <400> 1 atggacttct tgatgagtgg cctggcagcc tgcggggcct gtgtattcac caatcccctg 60 gaggtggtga agaccaggat gcagttgcaa ggagaactgc aggcccctgg cacataccag 120 cggcactacc gaaatgtctt ccatgccttc atcaccatcg gcaaggtgga tggccttgct 180 gccctgcaga aaggcctggc ccccgccctc ttgtaccagt tcctgatgaa tggcatccga 240 ctgggcacct atgggctggc tgaggctggg ggctacctgc acacagccga aggcacccac 300 agtcctgccc gcagcgcagc agctggggcc atggctgggg tcatgggagc ctacttgggg 360 agccccatct acatggtgaa gacacacctg caggcacagg cagcctcaga aattgctgta 420 gggcaccagt ataagcatca gggcatgttt caggcgctaa ccgagattgg ccagaaacat 480 ggtctggtgg ggttatggcg tggggctctg ggcggcctgc cccgagttat cgtcggttcc 540 tccacccagc tgtgcacctt ctcatccacc aaggacctcc tgagccagtg ggagatcttt 600 cctccccaga gctggaagtt ggcgctggtg gctgccatga tgagtggcat tgcagttgtc 660 ttggccatgg caccctttga tgtggcctgc acaaggctct acaaccagcc cacagatgca 720 cagggcaagg gcctcatgta ccgggggata ctggacgctc tgctgcagac agctcggacc 780 gagggcattt ttggcatgta caagggtata ggtgcctcct acttccgcct cggcccccac 840 accatcctct ccctcttctt ctgggaccag ctgcgctccc tctactacac agacactaaa 900 <210> 2 <211> 300 <212> PRT <400> 2 Met Asp Phe Leu Met Ser Gly Leu Ala Ala Cys Gly Ala Cys Val Phe 1 5 10 15 Thr Asn Pro Leu Glu Val Val Lys Thr Arg Met Gln Leu Gln Gly Glu 20 25 30 Leu Gln Ala Pro Gly Thr Tyr Gln Arg His Tyr Arg Asn Val Phe His 35 40 45 Ala Phe Ile Thr Ile Gly Lys Val Asp Gly Leu Ala Ala Leu Gln Lys 50 55 60 Gly Leu Ala Pro Ala Leu Leu Tyr Gln Phe Leu Met Asn Gly Ile Arg 65 70 75 80 Leu Gly Thr Tyr Gly Leu Ala Glu Ala Gly Gly Tyr Leu His Thr Ala 85 90 95 Glu Gly Thr His Ser Pro Ala Arg Ser Ala Ala Ala Gly Ala Met Ala 100 105 110 Gly Val Met Gly Ala Tyr Leu Gly Ser Pro Ile Tyr Met Val Lys Thr 115 120 125 His Leu Gln Ala Gln Ala Ala Ser Glu Ile Ala Val Gly His Gln Tyr 130 135 140 Lys His Gln Gly Met Phe Gln Ala Leu Thr Glu Ile Gly Gln Lys His 145 150 155 160 Gly Leu Val Gly Leu Trp Arg Gly Ala Leu Gly Gly Leu Pro Arg Val 165 170 175 Ile Val Gly Ser Ser Thr Gln Leu Cys Thr Phe Ser Ser Thr Lys Asp 180 185 190 Leu Leu Ser Gln Trp Glu Ile Phe Pro Pro Gln Ser Trp Lys Leu Ala 195 200 205 Leu Val Ala Ala Met Met Ser Gly Ile Ala Val Val Leu Ala Met Ala 210 215 220 Pro Phe Asp Val Ala Cys Thr Arg Leu Tyr Asn Gln Pro Thr Asp Ala 225 230 235 240 Gln Gly Lys Gly Leu Met Tyr Arg Gly Ile Leu Asp Ala Leu Leu Gln 245 250 255 Thr Ala Arg Thr Glu Gly Ile Phe Gly Met Tyr Lys Gly Ile Gly Ala 260 265 270 Ser Tyr Phe Arg Leu Gly Pro His Thr Ile Leu Ser Leu Phe Phe Trp 275 280 285 Asp Gln Leu Arg Ser Leu Tyr Tyr Thr Asp Thr Lys 290 295 300 <210> 3 <211> 988 <212> DNA <400> 3 cccgctttct gacacccatt tttactttct tactcttggg tcagttcctg ctacagctat 60 cccaccatgg acttcttgat gagtggcctg gcagcctgcg gggcctgtgt attcaccaat 120 cccctggagg tggtgaagac caggatgcag ttgcaaggag aactgcaggc ccctggcaca 180 taccagcggc actaccgaaa tgtcttccat gccttcatca ccatcggcaa ggtggatggc 240 cttgctgccc tgcagaaagg cctggccccc gccctcttgt accagttcct gatgaatggc 300 atccgactgg gcacctatgg gctggctgag gctgggggct acctgcacac agccgaaggc 360 acccacagtc ctgcccgcag cgcagcagct ggggccatgg ctggggtcat gggagcctac 420 ttggggagcc ccatctacat ggtgaagaca cacctgcagg cacaggcagc ctcagaaatt 480 gctgtagggc accagtataa gcatcagggc atgtttcagg cgctaaccga gattggccag 540 aaacatggtc tggtggggtt atggcgtggg gctctgggcg gcctgccccg agttatcgtc 600 ggttcctcca cccagctgtg caccttctca tccaccaagg acctcctgag ccagtgggag 660 atctttcctc cccagagctg gaagttggcg ctggtggctg ccatgatgag tggcattgca 720 gttgtcttgg ccatggcacc ctttgatgtg gcctgcacaa ggctctacaa ccagcccaca 780 gatgcacagg gcaagggcct catgtaccgg gggatactgg acgctctgct gcagacagct 840 cggaccgagg gcatttttgg catgtacaag ggtataggtg cctcctactt ccgcctcggc 900 ccccacacca tcctctccct cttcttctgg gaccagctgc gctccctcta ctacacagac 960 actaaataac agccgctttc ccagtctc 988

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、ヒト脱共役蛋白質間の相同性を示す。

【図２】図２は、ｍｔ００２９の組織発現分布を示す。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｑ 1/02 ４Ｃ０８５ 5/10 1/68 Ａ ４Ｃ０８６ Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ ４Ｈ０４５ 1/68 33/50 Ｚ Ｇ０１Ｎ 33/15 33/53 Ｍ 33/50 Ａ６１Ｋ 31/7088 33/53 39/395 Ｄ // Ａ６１Ｋ 31/7088 Ｎ 38/00 45/00 39/395 48/00 Ａ６１Ｐ 3/04 45/00 3/06 48/00 3/10 Ａ６１Ｐ 3/04 43/00 １１１ 3/06 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 3/10 5/00 Ａ 43/00 １１１ Ａ６１Ｋ 37/02 Ｆターム(参考） 2G045 AA34 AA35 BB20 CB01 DA13 FB02 FB03 FB12 GC18 4B024 AA01 AA11 BA80 CA04 DA02 DA05 DA06 DA11 DA12 EA02 EA04 GA11 HA12 4B063 QA19 QA20 QQ08 QQ43 QR08 QR42 QR56 QS25 QS34 QX02 4B065 AA01X AA57X AA72X AA90X AA92Y AA93X AA93Y AB01 BA02 CA23 CA24 CA44 CA46 4C084 AA02 AA03 AA06 AA07 AA13 AA17 BA35 BA44 CA01 CA53 MA13 MA17 MA22 MA23 MA24 MA28 MA31 MA32 MA35 MA37 MA52 MA56 MA58 MA59 MA63 MA65 MA66 NA14 ZA702 ZC332 ZC352 ZC412 4C085 AA13 AA14 AA16 BB11 BB24 CC02 CC04 CC05 CC13 CC23 DD23 DD34 DD35 DD38 DD62 DD63 DD86 DD88 EE01 GG02 GG03 GG04 GG05 GG06 GG08 4C086 AA01 AA02 AA03 AA04 EA16 MA01 MA04 MA13 MA17 MA22 MA23 MA24 MA28 MA31 MA32 MA35 MA37 MA52 MA56 MA58 MA59 MA60 MA63 MA65 MA66 NA14 ZA70 ZC33 ZC35 ZC41 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA10 CA40 DA75 EA27 EA50 FA72 FA74

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 以下の（ａ）または（ｂ）のＤＮＡ； （ａ）配列番号：１に記載の塩基配列からなるＤＮＡ； （ｂ）配列番号：１のＤＮＡと９０％以上の同一性を有
   し、かつ脱共役蛋白質をコードするＤＮＡ。
2. 【請求項２】 請求項１に記載のＤＮＡにコードされる
   蛋白質。
3. 【請求項３】 以下の（ａ）または（ｂ）の蛋白質； （ａ）配列番号：２に記載のアミノ酸配列からなる蛋白
   質； （ｂ）配列番号：２のアミノ酸配列においてアミノ酸が
   欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列からなる脱
   共役蛋白質。
4. 【請求項４】 請求項１に記載のＤＮＡを含む組換えベ
   クター。
5. 【請求項５】 請求項４に記載の組換えベクターにより
   形質転換された形質転換細胞。
6. 【請求項６】 請求項２または請求項３に記載の蛋白質
   の発現を抑制するアンチセンス核酸。
7. 【請求項７】 核酸配列が、請求項１に記載のＤＮＡの
   全部または一部に相補する配列である、請求項６に記載
   のアンチセンス核酸。
8. 【請求項８】 請求項２または請求項３に記載の蛋白質
   もしくはその部分ペプチドに対する抗体。
9. 【請求項９】 請求項２または請求項３に記載の蛋白質
   あるいは該蛋白質を発現している形質転換細胞と候補物
   質とを接触させ、候補物質存在下と非存在下における該
   蛋白質の活性を検出し、非存在下に比べて該蛋白質の活
   性を増加または減少させる物質を選択することを特徴と
   する、該蛋白質の活性調節作用を示す物質の検索方法。
10. 【請求項１０】 請求項４に記載の組換えベクターまた
    は請求項５に記載の形質転換細胞と候補物質とを接触さ
    せ、候補物質存在下と非存在下における請求項１に記載
    のＤＮＡの発現レベルを検出し、非存在下に比べて該Ｄ
    ＮＡの発現を増加または減少させる物質を選択すること
    を特徴とする、請求項１に記載のＤＮＡの発現調節作用
    を示す物質の検索方法。