JP2003174867A - 新規微生物菌株、それを用いた植物病害防除剤および防除方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 イネの育苗時に発生する糸状菌性病害および
細菌性病害に対し、従来品より優れた防除効果を発揮
し、且つ環境汚染の少ない植物病害防除剤および防除方
法を提供する。 【解決手段】 バークホルデリア・セパシア（Burkhold
eria cepacia）ＡＢ１０２６７株を有効成分とするイネ
種子伝染性病害防除剤により、イネの種子および／また
は育苗土壌を処理することによって、イネの育苗時に発
生する種子伝染性病害を防除する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、イネの育苗時に発
生する糸状菌性病害および細菌性病害に対して防除能を
有するバークホルデリア属（Burkholderia属)に属する
新規微生物、それを有効成分とするイネの種子伝染性病
害防除剤、および、それを利用したイネの育苗時に発生
する糸状菌性病害および細菌性病害の防除方法に関する
ものである。

【０００２】

【従来の技術】イネ箱育苗時のイネ幼苗に発生する種子
伝染性病害の被害は、機械移植による箱育苗が普及する
とともに発病が増加しており、イネ育苗栽培で防除すべ
き重要な病害となっている。これらの病害のうち、ジベ
レラ・フジクロイ（Gibberellafujikuroi）に起因する
イネばか苗病等の糸状菌による病害、シュードモナス・
グルメ（Pseudomonas glumae）に起因するイネもみ枯細
菌病、シュードモナス・プランタリ（Pseudomonas plan
tarii）に起因するイネ苗立枯細菌病およびシュードモ
ナス・アベナエ(Pseudomonas avenae)に起因するイネ褐
条病等の細菌による病害は、特に防除困難である。

【０００３】これらの種子病害は、種子伝染により発病
することが知られており、生育期に防除することが困難
である。そのため、伝染性種子病害は、種子の段階で防
除する必要があり、病害防除のための薬剤による種子消
毒は、イネ栽培において重要な作業の一つとなってい
る。これらの病害が発生した苗は、本田へ移植すること
ができず、移植不能となり廃棄するほかなく、重要な問
題となっている。イネばか苗病を防除する薬剤には、ペ
フラゾエート、トリフミゾールなどが市販されている。
また、細菌性の立枯性病害を防除する薬剤には、銅剤、
オキソリニック酸などが市販されている。しかしなが
ら、オキソリニック酸剤には、近年、感受性の低下した
病原細菌の存在が指摘されており、充分な防除効果が得
られない事例がしばしば発生している。更に、種子消毒
剤の廃液処理が環境汚染の点で問題化しており、環境汚
染性の少ない防除資材の開発が不可欠である。

【０００４】近年、環境汚染の少ない農薬として、微生
物を利用した生物農薬が開発されており、一部は実用化
段階にきている。イネ種子伝染性病害防除においても、
生物防除に関する研究が行われている。細菌を利用した
生物防除剤としては、特開平７−０２５７１６号公報で
は、シュードモナス・セパシア（Pseudomonas cepaci
a）に属する細菌がイネ苗床で発生する病害防除に有効
なことが開示され、特開平９−１２４４２６号公報では
シュードモナス・グラディオリ（Pseudomonas gladiol
i）に属する細菌が、また、特開平９−１２４４２７号
公報ではシュードモナス属の一種（Pseudomonas sp.）
に属する細菌がそれぞれ、イネもみ枯細菌病、イネ立枯
細菌病、イネばか苗病の防除に有効なことが開示されて
いる。糸状菌を利用した生物防除剤としては、特開平１
１−２５３１５１号公報では、トリコデルマ・アトロビ
リデ（Trichoderma atroviride）に属する糸状菌が、イ
ネもみ枯細菌病、イネ苗立枯細菌病、イネ褐条病の防除
に有効なことが開示されている。また、バークホルデリ
ア・セパシア（Burkholderia cepacia）に関連する菌株
については、バークホルデリア・セパシア・コンプレッ
クス（Burkholderia cepacia complex）(Annual Review
of Phytopathology、第３９巻、２２５〜２５８頁、２
００１年)またはシュードモナス・セパシア（Pseudomon
as cepacia）菌縁種（特開平９−２５５５１３号公報）
が、フザリウム属（Fusarium属）、ピシュウム属（Phyt
hium属）、リゾクトニア属（Rhizoctonia属）等による
土壌病害に有効なことが示されている。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、新規
微生物を供試して、イネの育苗時に発生する糸状菌性病
害および細菌性病害に対し、従来品より優れた防除効果
を発揮し、且つ環境汚染の少ない植物病害防除剤および
防除方法を提供することである。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、上記イネ苗
の種子伝染性病害の防除に優れた効果を発揮しうるバー
クホルデリア属（Burkholderia属）に属する新規な微生
物菌株を見出した。さらに、本菌株を用いてイネ種子伝
染性病害の有用性を検討したところ、糸状菌性病害であ
るイネばか苗病、イネごま葉枯病、イネ苗いもち病、お
よび細菌性病害であるイネもみ枯細菌病、イネ苗立枯細
菌病、イネ褐条病に活性を示すことを見出した。その効
果は、以下に示した類似の細菌に比べて、低処理量で高
い防除効果を示すことを知見した。また、各種の処理方
法においても高い防除効果を示すことを見出し、本発明
を完成した。

【０００７】即ち、本発明は、イネの育苗時に発生する
種子伝染性病害に対して防除能を有するバークホルデリ
ア属（Burkholderia属）細菌を提供する。このバークホ
ルデリア属細菌としては、細菌がバークホルデリア・セ
パシア(Burkholderia cepacia)が好ましく、バークホル
デリア・セパシア(Burkholderia cepacia)ＡＢ１０２６
７株が特に好ましい。また、本発明は、バークホルデリ
ア属の細菌、好ましくはバークホルデリア・セパシア、
特に好ましくは、バークホルデリア・セパシアＡＢ１０
２６７株を有効成分として含有することを特徴とするイ
ネ種子伝染性病害防除剤を提供する。さらに、本発明
は、上記イネ種子伝染性病害防除剤により処理した病害
防除性イネ種子、病害防除性イネ育苗培体、またはこれ
らを含有するイネ育苗容器を提供する。

【０００８】さらに、本発明は、浸種前、浸種時、催芽
時または浸種後に、上記種子伝染性病害防除剤によりイ
ネの種子を浸漬、噴霧、塗布または粉衣処理することを
特徴とするイネの種子伝染性病害防除方法、および、播
種前、播種時または播種後に、上記種子伝染性病害防除
剤によりイネの育苗培体を潅注または混和処理すること
を特徴とするイネの種子伝染性病害防除方法を提供す
る。以下、本発明について詳しく説明する。

【０００９】本発明の防除剤に用いる微生物としては、
バークホルデリア属（Burkholderia属）に属し、イネに
病原性を示さない微生物が利用できる。好ましくは、バ
ークホルデリア・セパシア（Burkholderia cepacia）に
属する微生物であり、そのうちでも特に好ましい菌株と
しては、本発明者らが小麦栽培畑の小麦根圏土壌より分
離したバークホルデリア・セパシア（Burkholderia cep
acia）ＡＢ１０２６７株が挙げられる。ＡＢ１０２６７
株は、新規分離菌株であって、独立行政法人産業技術総
合研究所 特許生物寄託センターにおいて、バイオセー
フティーレベル２に相当する菌種に分類される菌株とし
て受託を拒否された。この菌株は、出願人により自己寄
託され、必要に応じて分譲可能なように出願人自身によ
り保管されている。

【００１０】本発明者らによって新たに分離されたバー
クホルデリア・セパシア（Burkholderia cepacia）ＡＢ
１０２６７株（以下、「ＡＢ１０２６７株」という。）
の菌学的性質を以下に示す。

【００１１】ＡＢ１０２６７株は、神奈川県厚木市内の
小麦栽培畑より採集した小麦根圏土壌より分離した細菌
であり、イネばか苗病を指標とした生物検定でばか苗病
に対し強い発病抑制効果を示した。なお、本菌株の同定
にあたっては、「新細菌培地学講座」（第２版、近代出
版、１９８８）、「医学細菌同定の手引き」（第２版、
近代出版、１９７２）、「細菌学実習提要」（丸善、１
９５８）に準じて実験を行い、実験結果を「Bergey's M
anual of Systematic Bacteriology」vol.1（１９８
４）および「International Journal of Systematic an
d Evolutionary Microbiology」に掲載されている論文
を参考にして同定した。

【００１２】ＡＢ１０２６７株の菌学的性質 （ａ）形態的特徴 （１）細胞形態：桿菌 （２）運動性：＋（懸滴法）。 （３）普通寒天培地上での生育：生育は中程度。コロニ
ー形態は円形、平滑で光沢を帯び、色調はクリーム色〜
黄色。 （４）５％シュークロース添加普通寒天培地上での生
育：生育は旺盛

【００１３】 （ｂ）生理生化学的性状 （１）グラム染色： − （２）OFテスト： Ｏ（Oxidative） （３）好気条件での生育： ＋ （４）嫌気条件での生育： − （５）栄養要求性： − （６）生育温度： １０℃ − １５℃ ＋ １９℃ ＋ ３７℃ ＋ ４２℃ ＋ ４４℃ − （７）食塩耐性： ０％ ＋ ２％ ＋ ５％ − １０％ − （８）生育ｐＨ： ｐＨ４．０ ± ｐＨ５．０ ＋ ｐＨ６．０ ＋ ｐＨ７．０ ＋ ｐＨ８．０ ＋ ｐＨ９．０ ＋ ｐＨ１０．０ ± （９）色素の産生： King培地Ｂ（水溶性色素の検出）：黄色の色素を産生する （１０）オキシダーゼ： − （１１）カタラーゼ： ＋ （１２）硝酸塩還元性： ＋ （１３）硫化水素産生： − （１４）ゼラチンの液化： ＋ （１５）インドールの産生： − （１６）マロン酸の利用性： ＋ （１７）ONPG（β−ガラクトシダーゼ）： ＋ （１８）エスクリンの分解性： ＋ （１９）クエン酸の利用性： ＋ （２０）Tween８０の分解： ＋ （２１）澱粉の分解： − （２２）アルギニン酸の分解： − （２３）Ｖ−Ｐテスト： − （２４）トリプトファンデアミナーゼ： − （２５）色素・薬剤の感受性： ０．０１％メチルグリーン −（非感受性） ０．０１％メチオニン − ０．０１％酢酸鉛 − （２６）デカルボキシラーゼ活性： Ｌ−リジン − Ｌ−アルギニン − Ｌ−オルニチン ＋ （２７）尿素の分解性： ＋ （２８）アセトアミド分解性： ＋ （２９）各種糖から酸の生成： Ｄ−グルコース ＋ Ｄ−キシロース ＋ Ｄ−マンノース ＋ ガラクトース ＋ Ｌ−アラビノース ＋ Ｄ−フルクトース − マルトース ＋ Ｌ−ラムノース − マンニトール − シュークロース ＋ ラクトース ＋ ミオ−イノシトール ＋ ソルビトール − トレハロース ＋ Ｄ−セロビオース ＋ ズルシトール − グリセロール − ラクトース − リボース ＋ ラフィノース − マルトース ＋ イヌリン − α−メチル−グルコース − サリシン ＋ （３０）炭素源の資化性 Ｄ−グルコース ＋ Ｄ−フルクトース ＋ Ｌ−アラビノース ＋ Ｄ−キシロース ＋ ガラクトース ＋ Ｄ−マンノース ＋ Ｄ−マンニトール ＋ セロビオース ＋ エリスリトール − ミオ−イノシトール ＋ Ｄ−アラビトール ＋ アドニトール ＋ ラムノース − ソルビトール ＋ グリセロール ＋ エタノール − Ｄ−リボース ＋ シュークロース ＋ トレハロース ＋ α−メチルグルコシド − プロピレングリコール − Ｌ−アラニン ＋ Ｌ−ヒスチジン − Ｌ−バリン ＋ Ｌ−アルギニン − Ｌ−セリン − （３１）ユビキノンの分子種： ユビキノン８（Ｑ８） （３２）ＤＮＡのＧＣ含量： ６６．４％

【００１４】以上のとおり、ＡＢ１０２６７株の主性状
は、黄色の水溶性色素を生産するグラム陰性の好気性桿
菌で、栄養要求性はなく、生育適温は３０℃〜３７℃の
中温菌であった。硝酸塩の還元性を有し、カタラーゼ陽
性、オキシダーゼ陰性であり、グルコースを好気的に分
解し、酸を生成する。ユビキノンの分子種はＱ８で、Ｄ
ＮＡのＧＣ含量は６６．４％であった。更に１６ＳｒＤ
ＮＡの相同性試験の結果、バークホルデリア・セパシア
（Burkholderia cepacia）と９９％以上の相同性を示し
た。

【００１５】これらの菌学的性質を総合して、本菌株を
バークホルデリア・セパシアと同定した。バークホルデ
リア・セパシア（「Microbiology and Immumology」第
３６巻、第１２５１〜１２７５頁、１９９２年）はシュ
ードモナス・セパシア（Pseudomonas cepacia）（「Ber
gey's Manual of Systematic Bacteriology」vol.1、第
１７４〜１７８頁、１９８４年参照）が新属として再分
類されたもので、ＤＮＡの相同性の研究から現在７つの
「genomover」（遺伝的に相同性の高いグループ）に分
けられており、そのうちの幾つかは新種として提唱され
ている（「Annual Review of Phytopathology」第３９
巻、第２２５〜２５８頁、２００１年）。この多様性に
富む種を総称して、「Burkholderia cepacia comolex」
という用語が用いられている。バークホルデリア・セパ
シアは、微生物農薬としての植物病原菌に対する拮抗作
用や、難分解性化合物分解活性などの様々な産業上有用
な活性を有することが知られている（「Annual Review
of Phytopathology」第３９巻、第２２５〜２５８頁、
２００１年等を参照）。

【００１６】ＡＢ１０２６７株はバークホルデリア・セ
パシアの基準株であるＡＴＣＣ２５４１６株の文献値
（「Microbiology and Immumology」第３６巻、第１２
５１〜１２７５頁、１９９２年に記載）と比べるとオキ
シダーゼ反応、硝酸塩の還元性、デカルボキシラーゼ試
験、食塩耐性、炭素源（アミノ酸）資化性などの幾つか
の表現形質において明確な相違点が見出された。また、
特開平７−０２５７１６号公報記載のシュードモナス・
セパシア(Pseudomonas cepacia) ＡＧＦ−１５８株と
は、オキシダーゼ反応、エスクリンの分解性、糖からの
酸生成、炭素源（アミノ酸）資化性の点で異なり、さら
に種子消毒効果でもＡＢ１０２６７株の方がより活性が
高い。

【００１７】一方、公知のバークホルデリア・セパシア
が示す微生物農薬としての活性は、バークホルデリア・
セパシアという「種（species）」に共通するものでは
なく、「株（Strain）」によって異なるものである。従
って、微生物農薬としての活性が公知であるとしても、
公知の菌株の有する活性より非常に優れた活性を有する
微生物の発見は、産業上重要であり、意義が有る。この
点で、後述するようにＡＢ１０２６７株の有する微生物
農薬としての活性は、公知の微生物よりも非常に高いた
め、産業上重要かつ意義有るものである。

【００１８】以上のようにＡＢ１０２６７株は、バーク
ホルデリア・セパシアの基準株とは分類学的性質が明確
に異なることおよびバークホルデリア・セパシアの分類
体系が未だに流動的であると判断されることより、ＡＢ
０２６７株を公知のものと区別するため、バークホルデ
リア・セパシア（Burkholderia cepacia）ＡＢ１０２６
７株と命名した。本微生物株は、出願人のもとにおいて
自己寄託されている。

【００１９】ＡＢ１０２６７株の培養には、特別な方法
を用いる必要はなく、菌株が増殖する培養方法であれ
ば、特に限定されるものでない。培地としては、微生物
が生育可能な炭素源、窒素源および無機物および必要な
生育促進物質を適当に含有する培地であればよく、天然
培地、合成培地のいずれでも利用できる。具体的な培地
を例示すると、白葉枯病菌培地II、普通寒天培地、ＰＤ
Ａ（ジャガイモ・デキストロース寒天）培地、ＰＳＡ
（ジャガイモ・サッカロース寒天）培地、ＰＰＧＡ（ジ
ャガイモ・ペプトン・グルコース寒天）培地、ＹＰＧＡ
（イースト・ペプトン・グルコース寒天）培地等をあげ
ることができる。培養に際しては、培養温度を１５℃〜
４２℃、好ましくは２７℃〜３３℃、培養日数を１〜４
日、好ましくは２〜３日、培地のｐＨを６．０〜８．
０、好ましくは６．８〜７．２に調整することが望まし
い。培養した後に遠心分離もしくは限外濾過膜による濃
縮により集菌を行い、培地成分を取り除く。この操作に
より菌体の濃度は、通常、１×１０¹²ｃｆｕ／ｍｌ〜５
×１０¹²ｃｆｕ／ｍｌ程度に濃縮される。

【００２０】本発明の菌株を用いたイネの種子伝染性病
害防除方法は、本菌株菌体を有効成分とする防除剤でイ
ネ種子を処理することにより行う。また、同様にして、
イネ育苗培体を本菌株で処理して、本菌株を育苗培体に
付着、含有させることによりイネ育苗培体を病害から防
除することができる。本発明は、主としてイネを対象と
しているが、他のイネ科植物の糸状菌性病害および細菌
性病害についても広く適用可能である。本発明における
イネの育苗時病害防除剤として用いる場合には、本菌株
の菌体または培養液を単独で用いてもよいが、微生物の
保存法（根井外喜男編、東京大学出版会、１９７７）で
示されているような凍結菌体を用いてもよい。すなわ
ち、遠心分離等の操作で濃縮した菌体を、サッカロース
などの保護剤に懸濁し、予備凍結した後、凍結乾燥機に
より作製した乾燥菌体を粉砕し、粉砕菌体を担体または
補助剤等と配合して常法により、例えば、粉剤、粒剤、
水和剤などの形態にして使用すると更に好ましい。好適
な担体としては、例えば、鉱物質粉末（カリオン、ベン
トナイト、クレー、タルク、ケイソウ土、バーミキュラ
イト、炭酸カルシウム、ホワイトカーボン、消石灰な
ど）、植物質粉末（大豆粉、小麦粉、澱粉など）等の固
体担体が挙げられる。また、補助剤としては、例えば、
カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、ゼラチン、ア
ルギン酸ナトリウム等が挙げられる。

【００２１】次に、本発明の防除剤の使用方法を述べ
る。通常、イネを育苗する場合、発芽程度を揃えるため
に、イネ種籾を一定期間水中に浸すいわゆる浸種作業を
行い、更に３２℃前後の温度に１日〜２日保って催芽を
行った後に、育苗土壌を充填した育苗箱に播種したり、
苗床に直接播種する。本発明にかかる防除剤は、病原菌
に感染したイネ種籾または感染のおそれのあるイネ種籾
に対して優れた防除効果を示し、イネの育苗時の少なく
ともひとつの時期、すなわち、浸種前、浸種時、浸種後
または催芽時のいずれか、またはこれらの時期の一つ以
上の時期に、イネの種子を浸漬、噴霧、塗布または粉衣
処理することにより、発病を著しく減少させる。また、
イネ種籾の播種前または播種後にイネの育苗培土に潅注
または混和処理することによっても発病苗が著しく減少
し、優れた防除効果を示す。使用量としては、製剤の剤
型、適用方法、適用場所、適用すべき病害の種類などに
応じて適宜変更可能であるが、例えば水和剤の場合は、
ＡＢ１０２６７株の菌体濃度は１０⁵〜１０¹²ｃｆｕ／
ｍｌ程度、好ましくは１０⁸〜１０¹⁰ｃｆｕ／ｍｌ程度
の範囲で使用することが望ましい。

【００２２】本発明にかかるバークホルデリア・セパシ
アＡＢ１０２６７株は、イネ育苗時に発生し、防除が困
難とされるイネばか苗病、イネもみ枯細菌病、イネ苗立
枯細菌病、イネ褐条病およびイネ苗いもち病、イネごま
葉枯病等のイネ種子伝染性病害を確実に防除することが
できる。

【００２３】

【実施例】以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に
説明するが、これらにより本発明を制限または限定する
ことを意図するものではない。また、当業者は、実施例
に例示しなかった多くの変法または修飾手段を用いるこ
とが可能であり、そのような変法または修飾は有効な手
段となり得る。

【００２４】＜実施例１＞バークホルデリア・セパシアＡＢ１０２６７株の培養 本実施例では、バークホルデリア・セパシアＡＢ１０２
６７株を培養した。菌の培養に用いた培地は、以下の組
成を有する白葉枯病菌培地II（ｐＨ６．８）であった。 サッカロース：２０．０ｇ ポリペプトン：５．０ｇ 酵母エキス：２．０ｇ グルタミン酸ナトリウム：２．０ｇ Ｋ₂ＨＰ０₄：２．０ｇ ＭｇＣｌ₂・６Ｈ₂Ｏ：１．０ｇ ＦｅＳＯ₄・７Ｈ₂０：０．０１ｇ イオン交換水：１０００ｍｌ 培地１１０ｍｌを分注した５００ｍｌ容量バッフル付き
三角フラスコ３本を１２１℃で２０分間滅菌し、培地１
本当たりＡＢ１０２６７株の斜面寒天培養菌体の１白金
耳を植菌した。

【００２５】その後、ロータリーシェーカー（１８０ｒ
ｐｍ）上で２７℃で３日間、回転振とう培養した。培養
終了後、培養液を遠心分離することにより、菌体の濃度
は、２×１０¹²ｃｆｕ／ｍｌ〜４×１０¹²ｃｆｕ／ｍｌ
程度に濃縮された。

【００２６】＜実施例２＞イネばか苗病に対する防除効果（自然感染籾） 実施例１で得られた濃縮菌体をイオン交換水に懸濁し、
ＡＢ１０２６７株の菌体懸濁液（２．１×１０⁹ｃｆｕ
／ｍｌ）を調整した。この菌体懸濁液に、イネばか苗病
罹病籾（品種：新潟早生、自然感染籾）を、１５℃、浸
種前２４時間浸漬処理（罹病籾と菌懸濁液の浸漬浴比は
１：１）した後、菌懸濁液を除き、これに水を加えて１
５℃で５日間浸漬（籾と水の浸漬浴比は１：２）した。
なお、浸種３日後に水交換を１回行った。その後、水を
捨て３２℃の催芽器内に１７時間保って催芽させた。育
苗培土（くみあい合成培土３号）を充填した育苗箱に催
芽種子を播種し、播種後２日間、３２℃の育苗庫内に静
置し出芽処理を行った。次に、出芽処理した苗を温室内
で１８日間管理した後、全苗について発病の有無（徒長
苗および枯死苗）を調査し、式１により発病苗率（％）
を、また式２により防除価（％）を算出した。そして、
本試験は３反復で行い、平均値を求めた。

【００２７】 発病苗率（％）＝（徒長苗＋枯死苗）／全調査苗数×１００・・・式１

【００２８】 防除価（％）＝（１−処理区の発病苗率÷無処理区の発病苗率）×１００・・・ 式２

【００２９】結果は以下の表１に示すとおり、ＡＢ１０
２６７株を処理した区は、イネばか苗病に対して高い発
病抑制効果を示した。

【００３０】

【表１】 （注）種子消毒剤Ａは、塩基性塩化銅、フルジオキソニ
ル、ペフラゾエートを含有する市販の種子消毒剤（モミ
ガードＣ水和剤）である（以下の表でも同じ）。

【００３１】＜実施例３＞イネ苗いもち病に対する防除効果（自然感染籾） 実施例１で得られた濃縮菌体を井戸水に懸濁し、ＡＢ１
０２６７株の菌体懸濁液（３．４×１０⁹ｃｆｕ／ｍ
ｌ）を調整した。この菌体懸濁液に、イネ苗いもち病罹
病籾（品種：コシヒカリ、自然感染籾）を、１５℃、浸
種前２４時間浸漬処理（罹病籾と菌懸濁液の浸漬浴比は
１：１）した後、菌懸濁液を除き、これに水を加えて１
５℃で５日間浸漬（籾と水の浸漬浴比は１：２）した。
なお、浸種３日後に水交換を１回行った。その後、育苗
培土（くみあい合成培土３号）を充填した育苗箱に浸種
した種子を播種し、播種後４日間、２４℃の育苗庫内に
静置し出芽処理を行った。次に、出芽処理した苗を透明
なビニールで周りを覆い保湿した状態で温室内で１８日
間管理した後、全苗について発病の有無（不完全葉、第
一葉鞘および枯死苗）を調査し、式３により発病苗率
（％）を、また上記式２により防除価（％）を算出し
た。そして、本試験は３反復で行い、平均値を求めた。

【００３２】 発病苗率（％）＝（発病苗＋枯死苗）／全調査苗数×１００・・・式３

【００３３】結果は以下の表２に示すとおり、ＡＢ１０
２６７株を処理した区は、イネ苗いもち病に対して高い
発病抑制効果を示した。

【００３４】

【表２】

【００３５】＜実施例４＞イネごま葉枯病に対する防除効果（自然感染籾） 実施例１で得られた濃縮菌体を井戸水に懸濁し、ＡＢ１
０２６７株の菌体懸濁液（３．４×１０⁹ｃｆｕ／ｍ
ｌ）を調整した。この菌体懸濁液に、イネごま葉枯病罹
病籾、（品種：日本晴、自然感染籾）を、１５℃、浸種
前２４時間浸漬処理（罹病籾と菌懸濁液の浸漬浴比は
１：１）した後、菌懸濁液を除き、これに水を加えて１
５℃で５日間浸漬（籾と水の浸漬浴比は１：２）した。
なお、浸種３日後に水交換を１回行った。その後、水を
捨て３２℃の催芽器内に１５時間保って催芽させた。育
苗培土（くみあい合成培土３号）を充填した育苗箱に催
芽種子を播種し、播種後２日間、３２℃の育苗庫内に静
置し出芽処理を行った。次に、出芽処理した苗を温室内
で１６日間管理した後、全苗について発病の有無を下記
に示した調査基準に従い調査し、式４により発病度
（％）を、また式５により防除価（％）を算出した。そ
して、本試験は３反復で行い、平均値を求めた。

【００３６】 調査基準：０＝健全 １＝鞘葉部に病徴が認められるが、生育は健全と同等 ２＝鞘葉部および第１葉に病徴が認められ、生育がやや劣る ３＝鞘葉部および第１葉または第２葉に病徴が認められ、生育が 著しく劣る

【００３７】 発病度（％）＝Σ（各指数×指数別苗数）／（３×調査苗数）×１００・・・式 ４

【００３８】 防除価（％）＝（１−処理区の発病度÷無処理区の発病度）×１００・・・式５

【００３９】結果は下記の表３に示すとおり、ＡＢ１０
２６７株を処理した区は、イネごま葉枯病に対して高い
発病抑制効果を示した。

【００４０】

【表３】

【００４１】＜実施例５＞イネもみ枯細菌病に対する防除効果（減圧接種籾） 実施例１で得られた濃縮菌体を水道水に懸濁し、ＡＢ１
０２６７株の菌体懸濁液（４．０×１０⁹ｃｆｕ／ｍ
ｌ）を調整した。この菌体懸濁液に、イネもみ枯細菌病
罹病籾（品種：コシヒカリ、減圧接種籾）を、１５℃、
浸種前２４時間浸漬処理（罹病籾と菌懸濁液の浸漬浴比
は１：１）した後、菌懸濁液を除き、これに水を加えて
１５℃で５日間浸漬（籾と水の浸漬浴比は１：２）し
た。なお、浸種３日後に水交換を１回行った。その後、
水を捨て３２℃の催芽器内に１５時間保って催芽させ
た。育苗培土（くみあい合成培土３号）を充填した育苗
箱に催芽種子を播種し、播種後２日間、３２℃の育苗庫
内に静置し出芽処理を行った。次に、出芽処理した苗を
温室内で１０日間管理した後、全苗について発病の有無
を下記に示した調査基準に従い調査し、上記式４により
発病度（％）を、また上記式５により防除価（％）を算
出した。そして、本試験は３反復で行い、平均値を求め
た。

【００４２】 調査基準：０＝健全 １＝葉身基部に白化症状が認められるが、生育は健全と同等 ２＝葉身基部に白化症状を呈し、生育が著しく劣る ３＝枯死

【００４３】結果は以下の表４に示すとおり、ＡＢ１０
２６７株を処理した区は、イネもみ枯細菌病に対して高
い発病抑制効果を示した。

【００４４】

【表４】 （注）種子消毒剤Ｂは、オキソリニック酸とペララゾエ
ートを含有する市販の種子消毒剤（ヘルシードスターナ
フロアブル）である（以下の表でも同じ）。

【００４５】＜実施例６＞イネ苗立枯細菌病に対する防除効果（開花期接種籾） 実施例１で得られた濃縮菌体を井戸水に懸濁し、ＡＢ１
０２６７株の菌体懸濁液（４．８×１０¹⁰、×１０⁹、
×１０⁸、×１０⁷ｃｆｕ／ｍｌ）を調整した。この菌体
懸濁液に、イネ苗立枯細菌病罹病籾（品種：コシヒカ
リ、開花期接種籾）を、１５℃、浸種前２４時間浸漬処
理（罹病籾と菌懸濁液の浸漬浴比は１：１）した後、菌
懸濁液を除き、これに水を加えて１５℃で５日間浸漬
（籾と水の浸漬浴比は１：２）した。なお、浸種３日後
に水交換を１回行った。その後、水を捨て３２℃の催芽
器内に１７時間保って催芽させた。育苗培土（くみあい
合成培土３号）を充填した育苗箱に催芽種子を播種し、
播種後２日間、３２℃の育苗庫内に静置し出芽処理を行
った。次に、出芽処理した苗を温室内で１６日間管理し
た後、全苗について発病の有無を以下に示した調査基準
に従い調査し、上記式４により発病度（％）を、また上
記式５により防除価（％）を算出した。そして、本試験
は３反復で行い、平均値を求めた。

【００４６】 調査基準：０＝健全 １＝第２葉身に白化症状が認められる ２＝第１葉身に白化症状を呈し、生育が著しく劣る ３＝枯死

【００４７】結果は表５に示すとおり、ＡＢ１０２６７
株を処理した区は、イネ苗立枯細菌病に対して高い発病
抑制効果を示した。

【００４８】

【表５】

【００４９】＜実施例７＞イネ褐条病に対する防除効果（開花期接種籾） 実施例１で得られた濃縮菌体をイオン交換水に懸濁し、
ＡＢ１０２６７株の菌体懸濁液（４．５×１０⁹ｃｆｕ
／ｍｌ）を調整した。この菌体懸濁液に、イネ褐条病罹
病籾（品種：コシヒカリ、開花期接種籾）を、１５℃、
浸種前２４時間浸漬処理（罹病籾と菌懸濁液の浸漬浴比
は１：１）した後、菌懸濁液を除き、これに水を加えて
１５℃で５日間浸漬（籾と水の浸漬浴比は１：２）し
た。なお、浸種３日後に水交換を１回行った。その後、
水を捨て３２℃の催芽器内に１７時間保って催芽させ
た。育苗培土（くみあい合成培土３号）を充填した育苗
箱に催芽種子を播種し、播種後２日間、３２℃の育苗庫
内に静置し出芽処理を行った。次に、出芽処理した苗を
温室内で１５日間管理した後、全苗について発病の有無
を以下に示した調査基準に従い調査し、上記式４により
発病度（％）を、また上記式５により防除価（％）を算
出した。そして、本試験は３反復で行い、平均値を求め
た。

【００５０】 調査基準：０＝健全 １＝不完全葉に病徴が認められる ２＝第１葉身に病徴が認められる ３＝第２葉身に病徴が認められるかまたは枯死

【００５１】結果は表６に示すとおり、ＡＢ１０２６７
株を処理した区は、イネ褐条病に対して高い発病抑制効
果を示した。

【００５２】

【表６】

【００５３】＜実施例８＞イネ苗立枯細菌病防除効果に対する処理法（開花期接種
籾） 実施例１で得られた濃縮菌体をイオン交換水に懸濁し、
ＡＢ１０２６７株の菌体懸濁液（６．４×１０⁹ｃｆｕ
／ｍｌ）を調整した。この菌体懸濁液に、イネ苗立枯細
菌病罹病籾（品種：コシヒカリ、開花期接種籾）を以下
に示す３種の方法で処理した。 （１）浸種前浸漬処理を１５℃で行い、浸種前２４時間
浸漬処理した（浸漬浴比＝１：１）。 （２）催芽時浸漬処理を３２℃で行い、１６時間浸漬処
理した（浸漬浴比＝１：１）。 （３）播種覆土前潅注処理として、覆土前に標準箱当た
り５００ｍｌの菌体懸濁液を潅注した。 その他の育苗作業については上記した方法に従った。３
種の方法で播種した苗は温室内で１４日間管理した後、
全苗について発病の有無を実施例６に示した調査基準に
従い調査し、上記式４により発病度（％）を、また上記
式５により防除価（％）を算出した。そして、本試験は
３反復で行い、平均値を求めた。

【００５４】結果は下記の表７に示すとおり、３種の処
理法でＡＢ１０２６７株を処理した区は、いずれもイネ
苗立枯細菌病に対して高い発病抑制効果を示した。

【００５５】

【表７】

【００５６】＜実施例９＞凍結乾燥菌体によるイネ苗立枯細菌病に対する防除効果
（自然感染籾） 実施例１で得られた濃縮菌体約０．５ｇを以下に示す保
護剤１〜３の１０ｍｌ溶液とよく混合した。 保護剤１：４０％サッカロース、１／３０Ｍリン酸緩衝
液（ｐＨ５．６） 保護剤２：４０％サッカロース、１／３０Ｍリン酸緩衝
液（ｐＨ７．０） 保護剤３：１０％スキムミルク、１％グルタミン酸ナト
リウム、蒸留水 保護剤と懸濁した菌体１．５ｍ１をアンプル管に入れ、
予備凍結した後に凍結乾燥機で凍結乾燥し、これを溶封
し１０℃で２６日間保管した。アンプルを開封後、イオ
ン交換水で懸濁し、ＡＢ１０２６７株の菌体懸濁液を調
整した。この菌体懸濁液に、イネ苗立枯細菌病罹病籾
（品種：コシヒカリ、自然感染籾）を、１５℃、浸種前
２４時間浸漬処理（罹病籾と菌懸濁液の浸漬浴比は１：
１）した後、菌懸濁液を除き、これに水を加えて１５℃
で５日間浸漬（籾と水の浸漬浴比は１：２）した。な
お、浸種３日後に水交換を１回行った。その後、水を捨
て３２℃の催芽器内に１７時間保って催芽させた。育苗
培土（くみあい合成培土３号）を充填した育苗箱に催芽
種子を播種し、播種後２日間、３２℃の育苗庫内に静置
し出芽処理を行った。次に、出芽処理した苗を温室内で
１６日間管理した後、全苗について発病の有無を実施例
６に示した調査基準に従い調査し、上記式４により発病
度（％）を、また上記式５により防除価（％）を算出し
た。そして、本試験は３反復で行い、平均値を求めた。

【００５７】結果は表８に示すとおり、３種の保護剤で
凍結乾燥したＡＢ１０２６７株の菌体懸濁液を処理した
区は、いずれもイネ苗立枯細菌病に対して高い発病抑制
効果を示した。

【００５８】

【表８】

【００５９】

【発明の効果】本発明の新規バークホルデリア属（Burk
holderia属）細菌およびそれを用いた植物病害防除剤お
よび防除方法によれば、イネの育苗時に発生する糸状菌
性病害であるイネばか苗病、イネ苗いもち病およびイネ
ごま葉枯病、細菌性病害であるイネもみ枯細菌病、イネ
苗立枯細菌病およびイネ褐条病などの種子伝染性病害に
対して発病を強く抑制する作用があり、現在これらの病
害を対象として使用されている農薬と同等以上の防除効
果が期待できる。また、本発明の方法によれば、イネ種
子の播種前、播種時、または播種後のいずれかの時期の
１回の処理で上記種子伝染性病害を同時に防除すること
が可能であり、現行のように数種類の薬剤を混用して使
用する必要がなく、一層の省力化、省資源化、環境保全
が促進される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） //(Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:01 Ｃ１２Ｒ 1:01） (72)発明者 池田 圭介 神奈川県厚木市戸田2385 (72)発明者 森山 知 神奈川県厚木市森の里２丁目10番１号 Ｆターム(参考） 2B051 AB01 BA09 BB02 BB14 4B065 AA01X AA87X AC20 BD11 CA47 4H011 AA01 BA01 BB21 BC18 DA15 DD03

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 イネの育苗時に発生する種子伝染性病害
   に対して防除能を有するバークホルデリア属（Burkhold
   eria属）細菌。
2. 【請求項２】 細菌がバークホルデリア・セパシア(Bur
   kholderia cepacia)である請求項１に記載の細菌。
3. 【請求項３】 細菌がバークホルデリア・セパシア(Bur
   kholderia cepacia)ＡＢ１０２６７株である請求項１に
   記載の細菌。
4. 【請求項４】 請求項１〜３に記載の細菌を有効成分と
   して含有することを特徴とするイネ種子伝染性病害防除
   剤。
5. 【請求項５】 細菌が凍結乾燥処理されていることを特
   徴とする請求項４に記載のイネ種子伝染性病害防除剤。
6. 【請求項６】 請求項４または５に記載のイネの種子伝
   染性病害防除剤で処理してなる病害防除性イネ種子。
7. 【請求項７】 請求項４または５に記載のイネの種子伝
   染性病害防除剤で処理してなる病害防除性イネ育苗培
   体。
8. 【請求項８】 請求項４または５に記載のイネの種子伝
   染性病害防除剤により処理してなる病害防除性イネ種子
   および／またはイネ育苗培体を含有することを特徴とす
   るイネ育苗容器。
9. 【請求項９】 浸種前、浸種時、催芽時または浸種後
   に、請求項４または５に記載のイネの種子伝染性病害防
   除剤によりイネの種子を浸漬、噴霧、塗布または粉衣処
   理することを特徴とするイネの種子伝染性病害防除方
   法。
10. 【請求項１０】 イネの種子の播種前、播種時または播
    種後に、請求項４または５に記載のイネの種子伝染性病
    害防除剤によりイネの育苗培体を潅注または混和処理す
    ることを特徴とするイネの種子伝染性病害防除方法。