JP2003189846A - 新規な微生物及びそれを用いた天然カロチノイドの製造方法 - Google Patents
新規な微生物及びそれを用いた天然カロチノイドの製造方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 入手容易な原料から、簡単かつ効率よくアス
タキサンチン及びカンサキサンチンを大量生産しうる方
法を提供する。 【解決手段】 ラビリンチュラ属スラウストキトリウム
種に属するアスタキサンチン及びカンサキサンチン生産
菌スラウストキトリウムエスピーＣＨＮ−３（ＦＥＲＭ
Ｐ−１８５５６）を培養し、菌体中にアスタキサンチ
ン及びカンサキサンチンを蓄積させたのち、菌体を分離
し、分離した菌体から溶媒抽出処理によりアスタキサン
チン及びカンサキサンチンを回収することにより製造す
る。
タキサンチン及びカンサキサンチンを大量生産しうる方
法を提供する。 【解決手段】 ラビリンチュラ属スラウストキトリウム
種に属するアスタキサンチン及びカンサキサンチン生産
菌スラウストキトリウムエスピーＣＨＮ−３（ＦＥＲＭ
Ｐ−１８５５６）を培養し、菌体中にアスタキサンチ
ン及びカンサキサンチンを蓄積させたのち、菌体を分離
し、分離した菌体から溶媒抽出処理によりアスタキサン
チン及びカンサキサンチンを回収することにより製造す
る。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ラビリンチュラ
（Ｌａｂｙｒｉｎｔｈｕｌａ）属スラウストキトリウム
（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）種に属する新規
な微生物及びそれを用いて天然カロチノイドのアスタキ
サンチン及びカンサキサンチンを製造する方法に関する
ものである。
（Ｌａｂｙｒｉｎｔｈｕｌａ）属スラウストキトリウム
（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）種に属する新規
な微生物及びそれを用いて天然カロチノイドのアスタキ
サンチン及びカンサキサンチンを製造する方法に関する
ものである。
【０００２】
【従来の技術】アスタキサンチン及びカンサキサンチン
は、微生物の菌体、藻類、微細藻類などの植物や動物に
天然カロチノイドとして広く存在する色素であり、老化
防止剤、解毒剤、ガン予防剤、養殖魚類の色調改善剤と
して利用されている。これらの天然カロチノイド中のア
スタキサンチンは、オキアミやズワイガニの殻から抽出
されているが、これらにおける含有量が極めて低い上
に、抽出条件がむずかしく、しかも海洋の限られたとこ
ろにのみ生息する生物資源であることから、安定した原
料供給を確保することが困難であるため、工業的生産に
は不向きである。
は、微生物の菌体、藻類、微細藻類などの植物や動物に
天然カロチノイドとして広く存在する色素であり、老化
防止剤、解毒剤、ガン予防剤、養殖魚類の色調改善剤と
して利用されている。これらの天然カロチノイド中のア
スタキサンチンは、オキアミやズワイガニの殻から抽出
されているが、これらにおける含有量が極めて低い上
に、抽出条件がむずかしく、しかも海洋の限られたとこ
ろにのみ生息する生物資源であることから、安定した原
料供給を確保することが困難であるため、工業的生産に
は不向きである。
【０００３】また、アスタキサンチンは赤色酵母（Ｐｈ
ａｆｆｉａ ｒｈｏｄｏｚｙｍａ）により生産される
が、この赤色酵母は増殖速度が遅く、生産量が少ない上
に、強固な細胞壁を有するため、生産されたアスタキサ
ンチンの抽出が困難な上に、（３Ｒ，３Ｒ´）体の含有
率が高く、化学構造が天然のアスタキサンチンとは反対
の配置をとる化合物を副生するため、生産効率が低くな
るのを免れない。
ａｆｆｉａ ｒｈｏｄｏｚｙｍａ）により生産される
が、この赤色酵母は増殖速度が遅く、生産量が少ない上
に、強固な細胞壁を有するため、生産されたアスタキサ
ンチンの抽出が困難な上に、（３Ｒ，３Ｒ´）体の含有
率が高く、化学構造が天然のアスタキサンチンとは反対
の配置をとる化合物を副生するため、生産効率が低くな
るのを免れない。
【０００４】そのほか、アスタキサンチンを生産する緑
藻類（Ｈａｅｍａｔｏｃｏｃｃｕｓｐｌｕｖｉａｌｉ
ｓ）も知られているが、これは増殖速度が遅く、細胞壁
が強固であるため、生産効率が低い上に、雑菌の汚染を
起しやすく、しかも特殊な培養装置を用いて強い光を照
射しながら培養する必要があるなど、製造上種々の制約
を伴うため、工業的に実施するには多くの問題がある。
藻類（Ｈａｅｍａｔｏｃｏｃｃｕｓｐｌｕｖｉａｌｉ
ｓ）も知られているが、これは増殖速度が遅く、細胞壁
が強固であるため、生産効率が低い上に、雑菌の汚染を
起しやすく、しかも特殊な培養装置を用いて強い光を照
射しながら培養する必要があるなど、製造上種々の制約
を伴うため、工業的に実施するには多くの問題がある。
【０００５】一方、カンサキサンチンについては、ある
種のキノコ、魚類、甲殻類中に存在し、またプレビバク
テリウム属、ロドコッカス属に属する微生物により生産
されることが知られており、化学合成により人工的に得
る方法も開発されているが、いずれも生産効率が低いた
め、工業的な生産は行われていない。
種のキノコ、魚類、甲殻類中に存在し、またプレビバク
テリウム属、ロドコッカス属に属する微生物により生産
されることが知られており、化学合成により人工的に得
る方法も開発されているが、いずれも生産効率が低いた
め、工業的な生産は行われていない。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、このような
事情のもとで、従来方法のもつ欠点を克服し、入手容易
な原料から、簡単かつ効率よくアスタキサンチン及びカ
ンサキサンチンを大量生産しうる方法を提供することを
目的としてなされたものである。
事情のもとで、従来方法のもつ欠点を克服し、入手容易
な原料から、簡単かつ効率よくアスタキサンチン及びカ
ンサキサンチンを大量生産しうる方法を提供することを
目的としてなされたものである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者は、瀬戸内海で
採取された海洋性微生物の生態について種々研究を重ね
た結果、その中にアスタキサンチン及びカンサキサンチ
ンの生産能力の高い新規な微生物が存在すること、した
がってこの微生物を培養することにより、アスタキサン
チン及びカンサキサンチンを効率よく製造しうることを
見出し、この知見に基づいて本発明をなすに至った。
採取された海洋性微生物の生態について種々研究を重ね
た結果、その中にアスタキサンチン及びカンサキサンチ
ンの生産能力の高い新規な微生物が存在すること、した
がってこの微生物を培養することにより、アスタキサン
チン及びカンサキサンチンを効率よく製造しうることを
見出し、この知見に基づいて本発明をなすに至った。
【０００８】すなわち、本発明は、ラビリンチュラ属ス
ラウストキトリウム種に属するアスタキサンチン及びカ
ンサキサンチン生産菌スラウストキトリウムエスピーＣ
ＨＮ−３（ＦＥＲＭ Ｐ−１８５５６）、及びこの微生
物を培養し、菌体中にアスタキサンチン及びカンサキサ
ンチンを蓄積させたのち、菌体を分離し、分離した菌体
から溶媒抽出処理によりアスタキサンチン及びカンサキ
サンチンを回収することを特徴とするアスタキサンチン
及びカンサキサンチンの製造方法を提供するものであ
る。
ラウストキトリウム種に属するアスタキサンチン及びカ
ンサキサンチン生産菌スラウストキトリウムエスピーＣ
ＨＮ−３（ＦＥＲＭ Ｐ−１８５５６）、及びこの微生
物を培養し、菌体中にアスタキサンチン及びカンサキサ
ンチンを蓄積させたのち、菌体を分離し、分離した菌体
から溶媒抽出処理によりアスタキサンチン及びカンサキ
サンチンを回収することを特徴とするアスタキサンチン
及びカンサキサンチンの製造方法を提供するものであ
る。
【０００９】
【発明の実施の形態】図１は、本発明の微生物の形態を
示す顕微鏡写真である。この図から分るように、本発明
の微生物は、ヤブレツボカビ類のスラウストキトリウム
（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）の特徴である球
形ないし長円球状の外質ネットをもつ細胞からなってお
り、かつサゲノジェネートソームが細胞体の１か所のみ
に存在し、そこから外質ネットを伸長させて基質に進入
又は付着する性質を有している。これらの点を参考にし
て、このものがヤブレツボカビ類に属すると判断され
た。
示す顕微鏡写真である。この図から分るように、本発明
の微生物は、ヤブレツボカビ類のスラウストキトリウム
（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）の特徴である球
形ないし長円球状の外質ネットをもつ細胞からなってお
り、かつサゲノジェネートソームが細胞体の１か所のみ
に存在し、そこから外質ネットを伸長させて基質に進入
又は付着する性質を有している。これらの点を参考にし
て、このものがヤブレツボカビ類に属すると判断され
た。
【００１０】また、図２に示す生活環が形成され、グル
コースやフルクトースのような糖、酵母エキス、コーン
ステーリカーのようなタンパク質などの有機物に富んだ
培地では、アメーバ状細胞が現れるが、この点はウルケ
ニア（Ｕｌｋｅｎｉａ）属とは大きく異なっているこ
と、及び２種類のべん毛を有する遊走子を形成する点で
スキゾキトリウム（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）種
と異なっていることから、スラウストキトリウムと同定
される［生物研究社発行，「海洋と生物１３２」，第２
３巻，第１号，第１５ページ（２００１）］。また１８
ＳｒＤＮＡに基づく分子系統樹においてもスラウストキ
トリウムであることの裏付けが得られた。
コースやフルクトースのような糖、酵母エキス、コーン
ステーリカーのようなタンパク質などの有機物に富んだ
培地では、アメーバ状細胞が現れるが、この点はウルケ
ニア（Ｕｌｋｅｎｉａ）属とは大きく異なっているこ
と、及び２種類のべん毛を有する遊走子を形成する点で
スキゾキトリウム（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）種
と異なっていることから、スラウストキトリウムと同定
される［生物研究社発行，「海洋と生物１３２」，第２
３巻，第１号，第１５ページ（２００１）］。また１８
ＳｒＤＮＡに基づく分子系統樹においてもスラウストキ
トリウムであることの裏付けが得られた。
【００１１】そして、本発明の微生物は、その栄養細胞
が卵形ないしは球形である点で、紡錘形のラビリンチュ
ラ種とは容易に区別されることから、ラビリンチュラ属
のスラウストキトリウム種に分類されるものである。こ
の種の菌は、海洋環境に広く存在し、従属栄養で増殖す
る、いわゆる海生菌として知られる。
が卵形ないしは球形である点で、紡錘形のラビリンチュ
ラ種とは容易に区別されることから、ラビリンチュラ属
のスラウストキトリウム種に分類されるものである。こ
の種の菌は、海洋環境に広く存在し、従属栄養で増殖す
る、いわゆる海生菌として知られる。
【００１２】本発明の微生物は、以下に示す菌学的性質
から、容易に公知の微生物と区別することができる。 Ｉ．形態学的性質 （１）細胞の大きさは、１０μｍで卵形である。 （２）１０μｍの卵形の遊走子にヘテロコントな鞭毛を
有し、運動をする。 ＩＩ．培養的性質 （１）糖質寒天培地で色はピンク、表面はツルツルで生
育は早い。 （２）液体培養では、２４時間で混濁し、ピンクの色を
呈する。１リットル当り３０ｇ以上のバイオマスが得ら
れる。 ＩＩＩ．生理的性質 （１）アスタキサンチンとカンサキサンチンを有して、
ピンク色である。 （２）有機無機の窒素利用して増殖する。 （３）ｐＨは５〜９、温度は１５〜３５℃が最適生育条
件である。 （４）グルコースやフルクトースを利用してＤＨＡ，Ｅ
ＰＡを多量につくる。これまでのラビリンチュラ属スラ
ウストキトリウム種は、ＤＨＡを高含量有し色素を有し
ていなかった。また、細菌に関しての試験においては、
いずれもマイナスであり、細菌の分類には該当しないこ
とが確認された。
から、容易に公知の微生物と区別することができる。 Ｉ．形態学的性質 （１）細胞の大きさは、１０μｍで卵形である。 （２）１０μｍの卵形の遊走子にヘテロコントな鞭毛を
有し、運動をする。 ＩＩ．培養的性質 （１）糖質寒天培地で色はピンク、表面はツルツルで生
育は早い。 （２）液体培養では、２４時間で混濁し、ピンクの色を
呈する。１リットル当り３０ｇ以上のバイオマスが得ら
れる。 ＩＩＩ．生理的性質 （１）アスタキサンチンとカンサキサンチンを有して、
ピンク色である。 （２）有機無機の窒素利用して増殖する。 （３）ｐＨは５〜９、温度は１５〜３５℃が最適生育条
件である。 （４）グルコースやフルクトースを利用してＤＨＡ，Ｅ
ＰＡを多量につくる。これまでのラビリンチュラ属スラ
ウストキトリウム種は、ＤＨＡを高含量有し色素を有し
ていなかった。また、細菌に関しての試験においては、
いずれもマイナスであり、細菌の分類には該当しないこ
とが確認された。
【００１３】このようにして、新菌であることが確認さ
れた本発明の微生物、すなわちスラウストキトリウムエ
スピーＣＨＮ−３は、受託番号ＣＨＮ−３（ＦＥＲＭ
Ｐ−１８５５６）として産業技術総合研究所特許寄託セ
ンターに寄託されている。
れた本発明の微生物、すなわちスラウストキトリウムエ
スピーＣＨＮ−３は、受託番号ＣＨＮ−３（ＦＥＲＭ
Ｐ−１８５５６）として産業技術総合研究所特許寄託セ
ンターに寄託されている。
【００１４】本発明の微生物は、海洋に生息する１０μ
ｍ程度の単細胞であり、例えば瀬戸内海の海水中から容
易に採取される。原体の採取は、海水中に黒松の花粉を
懸濁させ、数日放置したのち、松の花粉を分別し、花粉
表面に付着した微生物体を集めることにより行うことが
できる。
ｍ程度の単細胞であり、例えば瀬戸内海の海水中から容
易に採取される。原体の採取は、海水中に黒松の花粉を
懸濁させ、数日放置したのち、松の花粉を分別し、花粉
表面に付着した微生物体を集めることにより行うことが
できる。
【００１５】次に、このようにして採取した原体を、糖
類培地、すなわち糖類とペプトンを豊富に含む培養液
（例えば海水１リットル中にグルコース５０ｇとペプト
ン１ｇを含む培地）中で純粋培養する。本純粋培養は、
一定温度において光を連続照射しながら、通気撹拌条件
で行うのが好ましい。
類培地、すなわち糖類とペプトンを豊富に含む培養液
（例えば海水１リットル中にグルコース５０ｇとペプト
ン１ｇを含む培地）中で純粋培養する。本純粋培養は、
一定温度において光を連続照射しながら、通気撹拌条件
で行うのが好ましい。
【００１６】このようにして、培養で得られたスラウス
トキトリウムの細胞を乳鉢で破砕し１００％アセトンで
抽出し、ＯＤＳＣ１８のカラムを装着した高速液体クロ
マトグラフィー及び高速液体クロマトグラフィー質量分
析計で分離、同定した。このようにして得た液体クロマ
トグラムを図３に示した。その結果、色素はα‐、β‐
カロテン、エキネノン、カンサキサチン、フェノコキサ
ンチン、アスタキサンチンからなっていることが分っ
た。
トキトリウムの細胞を乳鉢で破砕し１００％アセトンで
抽出し、ＯＤＳＣ１８のカラムを装着した高速液体クロ
マトグラフィー及び高速液体クロマトグラフィー質量分
析計で分離、同定した。このようにして得た液体クロマ
トグラムを図３に示した。その結果、色素はα‐、β‐
カロテン、エキネノン、カンサキサチン、フェノコキサ
ンチン、アスタキサンチンからなっていることが分っ
た。
【００１７】本発明のスラウストキトリウムエスピーＣ
ＨＮ−３は、このようなα‐、β‐カロテン、エキネノ
ン、フェノコキサンチン、アスタキサンチンを生産し、
特にアスタキサンチン及びカンサキサチンを大量に細胞
内に保有することにより赤色に着色するが、これまで知
られているスラウストキトリウムが属するラビリンチュ
ラ属の微生物では、このような能力を有していることは
知られていなかった。
ＨＮ−３は、このようなα‐、β‐カロテン、エキネノ
ン、フェノコキサンチン、アスタキサンチンを生産し、
特にアスタキサンチン及びカンサキサチンを大量に細胞
内に保有することにより赤色に着色するが、これまで知
られているスラウストキトリウムが属するラビリンチュ
ラ属の微生物では、このような能力を有していることは
知られていなかった。
【００１８】このラビリンチュラ属のスラウストキトリ
ウム種に分類される微生物スラウストキトリウムエスピ
ーＣＨＮ−３は、糖類、有機窒素、無機塩からなる培地
（培養液）中で培養することができる。この際の糖類の
例としては、グルコース、ショ糖、フルクトースやそれ
らを含むもの、例えば水飴などを、有機窒素の例として
は、ペプトン、酵母エキスなどを、無機塩の例として
は、塩化ナトリウムや塩化カリ、無機リンなどを挙げる
ことができる。
ウム種に分類される微生物スラウストキトリウムエスピ
ーＣＨＮ−３は、糖類、有機窒素、無機塩からなる培地
（培養液）中で培養することができる。この際の糖類の
例としては、グルコース、ショ糖、フルクトースやそれ
らを含むもの、例えば水飴などを、有機窒素の例として
は、ペプトン、酵母エキスなどを、無機塩の例として
は、塩化ナトリウムや塩化カリ、無機リンなどを挙げる
ことができる。
【００１９】グルコース、有機窒素、光エネルギー、無
機のリンで生育する微生物であるが、その生産機能を最
大限に発揮させるためには光エネルギーとしての照度、
温度、培地中の元素組成及び酸素供給量を適切に調整す
ることが必要である。
機のリンで生育する微生物であるが、その生産機能を最
大限に発揮させるためには光エネルギーとしての照度、
温度、培地中の元素組成及び酸素供給量を適切に調整す
ることが必要である。
【００２０】例えば、純粋培養の条件としては、空気撹
拌、光照射は１，０００ルックス以上、温度は２０〜３
０℃、好ましくは２８℃前後である。培地中のリンの供
給源は、ＫＨ2ＰＯ4が好ましく、その量としては０．１
〜３ｇ／リットルの範囲が好ましい。また、ラビリンチ
ュラが生育できる範囲（海水１リットルにグルコース６
０ｇ、ペプトン１ｇ、ＫＨ2ＰＯ4１ｇ）の中で、生育が
止まると、培地中の栄養元素が一定になるように調整す
ることにより、アスタキサンチン及びカンサキサンチン
のそれぞれの生産量を選択的に高めることができる。こ
の培養は、ｐＨ４〜１２、好ましくはｐＨ６〜１０の範
囲で行われ、ｐＨが高くなるほど生産量は向上する。
拌、光照射は１，０００ルックス以上、温度は２０〜３
０℃、好ましくは２８℃前後である。培地中のリンの供
給源は、ＫＨ2ＰＯ4が好ましく、その量としては０．１
〜３ｇ／リットルの範囲が好ましい。また、ラビリンチ
ュラが生育できる範囲（海水１リットルにグルコース６
０ｇ、ペプトン１ｇ、ＫＨ2ＰＯ4１ｇ）の中で、生育が
止まると、培地中の栄養元素が一定になるように調整す
ることにより、アスタキサンチン及びカンサキサンチン
のそれぞれの生産量を選択的に高めることができる。こ
の培養は、ｐＨ４〜１２、好ましくはｐＨ６〜１０の範
囲で行われ、ｐＨが高くなるほど生産量は向上する。
【００２１】さらに、前記したように培養条件、特に培
地中の窒素源組成を変化させることにより、スラウスト
キトリウムへの刺激を強くすると、アスタキサンチン及
びカンサキサンチンの生産をさらに増加させることがで
きる。
地中の窒素源組成を変化させることにより、スラウスト
キトリウムへの刺激を強くすると、アスタキサンチン及
びカンサキサンチンの生産をさらに増加させることがで
きる。
【００２２】したがって、アスタキサンチン及びカンサ
キサンチンを高収率で製造するには、スラウストキトリ
ウムの生育環境条件を極限条件に保持して、アスタキサ
ンチン及びカンサキサンチンの生産機能を最大限に引き
出すのが有利である。それには、例えば酵母エキスを最
初の培地から減少させるのが効果的である。
キサンチンを高収率で製造するには、スラウストキトリ
ウムの生育環境条件を極限条件に保持して、アスタキサ
ンチン及びカンサキサンチンの生産機能を最大限に引き
出すのが有利である。それには、例えば酵母エキスを最
初の培地から減少させるのが効果的である。
【００２３】すなわち、培地から窒素源である酵母エキ
スを少なくすると、アスタキサンチンの含量が微生物体
（乾物）１ｇ中に１、５３７ｍｇという高い値に増大す
る。その時点で酵母エキスを含有しない培養液に変える
と、スラウストキトリウムの細胞に取り込まれる窒素が
存在しないので、アスタキサンチン含量が微生物体（乾
物）１ｇ中約２ｍｇに増大する。
スを少なくすると、アスタキサンチンの含量が微生物体
（乾物）１ｇ中に１、５３７ｍｇという高い値に増大す
る。その時点で酵母エキスを含有しない培養液に変える
と、スラウストキトリウムの細胞に取り込まれる窒素が
存在しないので、アスタキサンチン含量が微生物体（乾
物）１ｇ中約２ｍｇに増大する。
【００２４】また、本発明方法により、アスタキサンチ
ンを製造する場合には、最初酵母エキスを添加した培地
を用いて培養し、酵母エキスが消費された後は、窒素源
を補給せずに、窒素源無添加条件下で培養するのがよ
い。このようにして窒素源無添加培地で培養することに
より、通常のように窒素添加して行う場合に比べ、アス
タキサンチンの収量はそれぞれ５倍以上になる。また、
この際、酸素リッチの条件下で培養すると、アスタキサ
ンチンの収量を上げることができる。
ンを製造する場合には、最初酵母エキスを添加した培地
を用いて培養し、酵母エキスが消費された後は、窒素源
を補給せずに、窒素源無添加条件下で培養するのがよ
い。このようにして窒素源無添加培地で培養することに
より、通常のように窒素添加して行う場合に比べ、アス
タキサンチンの収量はそれぞれ５倍以上になる。また、
この際、酸素リッチの条件下で培養すると、アスタキサ
ンチンの収量を上げることができる。
【００２５】カンサキサンチンを製造する場合には、最
初酵母エキスを添加した培地を用いて培養し、酵母エキ
スが消費された後は、窒素源を補給し、絶えず窒素源添
加条件下で培養するのがよい。このようにして窒素源添
加培地で培養することにより、窒素無添加して行う場合
に比べ、カンサキサンチンの収量はそれぞれ４〜５倍以
上になる。
初酵母エキスを添加した培地を用いて培養し、酵母エキ
スが消費された後は、窒素源を補給し、絶えず窒素源添
加条件下で培養するのがよい。このようにして窒素源添
加培地で培養することにより、窒素無添加して行う場合
に比べ、カンサキサンチンの収量はそれぞれ４〜５倍以
上になる。
【００２６】次に、このようにして得られたアスタキサ
ンチン及びカンサキサンチンを多量に含む微生物から効
率的にアスタキサンチン及びカンサキサンチンを抽出す
るには、クロロホルム−メチルアルコール溶液を用いる
のが好ましい。
ンチン及びカンサキサンチンを多量に含む微生物から効
率的にアスタキサンチン及びカンサキサンチンを抽出す
るには、クロロホルム−メチルアルコール溶液を用いる
のが好ましい。
【００２７】このようにして、産生したアスタキサンチ
ン及びカンサキサンチンが微生物体から分離される。そ
して、次にその溶液をシリカゲル充填カラムを通し、メ
チルアルコール混合溶液で展開することにより、１００
％の収率でアスタキサンチン及びカンサキサンチンを回
収することができる。通常、メチルアルコール混合溶媒
としては、メチルアルコール９０〜９５体積％で残りが
クロロホルムのものが用いられる。
ン及びカンサキサンチンが微生物体から分離される。そ
して、次にその溶液をシリカゲル充填カラムを通し、メ
チルアルコール混合溶液で展開することにより、１００
％の収率でアスタキサンチン及びカンサキサンチンを回
収することができる。通常、メチルアルコール混合溶媒
としては、メチルアルコール９０〜９５体積％で残りが
クロロホルムのものが用いられる。
【００２８】
【実施例】次に実施例により本発明をさらに詳細に説明
するが、本発明はこれらによってなんら限定されるもの
ではない。
するが、本発明はこれらによってなんら限定されるもの
ではない。
【００２９】実施例１
瀬戸内海長浜地区の海水にクロマツの花粉を懸濁して採
取したスラウストキトリウムエスピーＣＨＮ−１を純化
したスラウストキトリウムエスピーＣＨＮ−３を、海水
中に、グルコース６０ｇ／リットル、ペプトン１ｇ／リ
ットル、リン酸二水素カリウム１ｇ／リットル及びリン
１ｇ／リットルを含む糖類に富んだ培地（ｐＨ５．０）
に接種し、温度２８℃、１０００ルックスの光照射下、
換気し、かき混ぜながら６日間培養した。次いで培養液
を遠心分離して、微生物体を捕集した。このようにして
得た顕微鏡写真を図１に示す。
取したスラウストキトリウムエスピーＣＨＮ−１を純化
したスラウストキトリウムエスピーＣＨＮ−３を、海水
中に、グルコース６０ｇ／リットル、ペプトン１ｇ／リ
ットル、リン酸二水素カリウム１ｇ／リットル及びリン
１ｇ／リットルを含む糖類に富んだ培地（ｐＨ５．０）
に接種し、温度２８℃、１０００ルックスの光照射下、
換気し、かき混ぜながら６日間培養した。次いで培養液
を遠心分離して、微生物体を捕集した。このようにして
得た顕微鏡写真を図１に示す。
【００３０】次に、上記の微生物をアセトン、クロロホ
ルム、メチルアルコールで抽出し、この抽出液をシリカ
ゲル（和光純薬社製，商品名「ワコーゲル」）を充填し
たカラムに通し、吸着させたのち、ヘキサン−クロロホ
ルム−メチルアルコールで展開することにより、海水１
リットル当りアスタキサンチン及びカンサキサンチンを
それぞれ８．８ｍｇ、６．５ｍｇ得た。微生物の含有量
（アスタキサンチン及びカンサキサンチンは微生物乾燥
体中での濃度）は、乾燥微生物体１ｇ中にアスタキサン
チン２．８ｍｇ、カンサキサンチン２．０ｍｇであっ
た。実施例１で得られるカロチノイドの高速液体クロマ
トグラムを図３に示す。図中の符号は以下の化合物に対
応するものである。１：アスタキサンチン、２：フェノ
コキサンチン、３：カンサキサンチン、４：エキネノ
ン、５：α‐カロチン、６：β‐カロチン。
ルム、メチルアルコールで抽出し、この抽出液をシリカ
ゲル（和光純薬社製，商品名「ワコーゲル」）を充填し
たカラムに通し、吸着させたのち、ヘキサン−クロロホ
ルム−メチルアルコールで展開することにより、海水１
リットル当りアスタキサンチン及びカンサキサンチンを
それぞれ８．８ｍｇ、６．５ｍｇ得た。微生物の含有量
（アスタキサンチン及びカンサキサンチンは微生物乾燥
体中での濃度）は、乾燥微生物体１ｇ中にアスタキサン
チン２．８ｍｇ、カンサキサンチン２．０ｍｇであっ
た。実施例１で得られるカロチノイドの高速液体クロマ
トグラムを図３に示す。図中の符号は以下の化合物に対
応するものである。１：アスタキサンチン、２：フェノ
コキサンチン、３：カンサキサンチン、４：エキネノ
ン、５：α‐カロチン、６：β‐カロチン。
【００３１】実施例２
海水中に、グルコース５０ｇ／リットル、ペプトン１ｇ
／リットル及びリン酸二水素カリウム１ｇ／リットルを
含む培地を用い、温度２３℃において、（イ）照度１０
００ルックスで培地を１００ｒｐｍで浸とう回転する培
養、（ロ）暗所で培地を１００ｒｐｍで浸とう回転する
培養、（ハ）照度１０００ルックスで静置する培養、及
び（ニ）照度１０００ルックスで空気を供給して撹拌す
る培養により、スラウストキトリウムエスピーＣＨＮ−
３を６日間培養した。その結果を表１に示す。
／リットル及びリン酸二水素カリウム１ｇ／リットルを
含む培地を用い、温度２３℃において、（イ）照度１０
００ルックスで培地を１００ｒｐｍで浸とう回転する培
養、（ロ）暗所で培地を１００ｒｐｍで浸とう回転する
培養、（ハ）照度１０００ルックスで静置する培養、及
び（ニ）照度１０００ルックスで空気を供給して撹拌す
る培養により、スラウストキトリウムエスピーＣＨＮ−
３を６日間培養した。その結果を表１に示す。
【００３２】
【表１】
【００３３】この表から分るように、静置培養ではほと
んどアスタキサンチンを生産しない。また振とう回転培
養では光を照射した方が多くのアスタキサンチンを得る
ことができる。さらに酸素供給を高めるために空気を供
給する方法を用いることにより、アスタキサンチンの収
量を１．８倍向上させることができた。このように培養
における好気条件を変えることにより、アスタキサンチ
ンの生成比を変えることができるし、培養液中の酸素濃
度を高めることによりアスタキサンチンの生成比率を高
めることができる。
んどアスタキサンチンを生産しない。また振とう回転培
養では光を照射した方が多くのアスタキサンチンを得る
ことができる。さらに酸素供給を高めるために空気を供
給する方法を用いることにより、アスタキサンチンの収
量を１．８倍向上させることができた。このように培養
における好気条件を変えることにより、アスタキサンチ
ンの生成比を変えることができるし、培養液中の酸素濃
度を高めることによりアスタキサンチンの生成比率を高
めることができる。
【００３４】実施例３
実施例１の糖類培地のｐＨを変化させた場合の実験を１
４日間継続し、アスタキサンチンの生産量を求め、グラ
フとして図４に示す。この図から明らかなように、ｐＨ
の上昇とともにアスタキサンチンの生産量は増大する。
４日間継続し、アスタキサンチンの生産量を求め、グラ
フとして図４に示す。この図から明らかなように、ｐＨ
の上昇とともにアスタキサンチンの生産量は増大する。
【００３５】
【発明の効果】本発明によると、特にアスタキサンチ
ン、カンサキサンチンを高含量で含むスラウストキトリ
ウムそのものを純粋に大量培養でき、かつこれからアス
タキサンチン及びカンサキサンチンを簡単に抽出分離す
ることができ、高収率で高純度のアスタキサンチン、カ
ンサキサンチン又は所望に応じアスタキサンチン及びカ
ンサキサンチンの組成の細胞を得ることができる。
ン、カンサキサンチンを高含量で含むスラウストキトリ
ウムそのものを純粋に大量培養でき、かつこれからアス
タキサンチン及びカンサキサンチンを簡単に抽出分離す
ることができ、高収率で高純度のアスタキサンチン、カ
ンサキサンチン又は所望に応じアスタキサンチン及びカ
ンサキサンチンの組成の細胞を得ることができる。
【図１】 本発明微生物の電子顕微鏡写真。
【図２】 スラウストキトリウムの生活環を示す説明
図。
図。
【図３】 実施例１で得た培養物の高速液体クロマトグ
ラム。
ラム。
【図４】 アスタキサンチンの生産量とｐＨの関係を示
すグラフ。
すグラフ。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ｃ１２Ｒ 1:645）
(Ｃ１２Ｐ 23/00
Ｃ１２Ｒ 1:645）
Ｆターム(参考） 4B018 MA01 MC01 MD07 MD85 ME06
ME08 ME10 MF01 MF13
4B064 AH01 CA02 CC07 CC12 CC30
DA01 DA10 DA11
4B065 AA57X BA22 BB15 BC02
BC06 BC50 CA08 CA41 CA43
CA44 CA52
Claims (6)
- 【請求項１】 ラビリンチュラ属スラウストキトリウム
種に属するアスタキサンチン及びカンサキサンチン生産
菌スラウストキトリウムエスピーＣＨＮ−３（ＦＥＲＭ
Ｐ−１８５５６）。 - 【請求項２】 請求項１記載の微生物を培養し、菌体中
にアスタキサンチン及びカンサキサンチンを蓄積させた
のち、菌体を分離し、分離した菌体から溶媒抽出処理に
よりアスタキサンチン及びカンサキサンチンを回収する
ことを特徴とするアスタキサンチン及びカンサキサンチ
ンの製造方法。 - 【請求項３】 培養をｐＨ４〜１２、酸素リッチの条件
下で行う請求項２記載の製造方法。 - 【請求項４】 培養を、栄養源として、ショ糖、グルコ
ース及びフルクトースの中から選ばれる少なくとも１種
の糖類を用いて行う請求項２又は３記載の製造方法。 - 【請求項５】 培養を光照射下で行う請求項２、３又は
４記載の製造方法。 - 【請求項６】 ラビリンチュラ属スラウストキトリウム
種に属するアスタキサンチン及びカンサキサンチン生産
菌スラウストキトリウムエスピーＣＨＮ−３（ＦＥＲＭ
Ｐ−１８５５６）の培養物、菌体又は菌体処理物。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002231126A JP3834626B2 (ja) | 2001-10-16 | 2002-08-08 | 新規な微生物及びそれを用いた天然カロチノイドの製造方法 |
| PCT/JP2002/010619 WO2003033683A1 (en) | 2001-10-16 | 2002-10-11 | Microorganism and production of carotinoid compounds thereby |
| US10/492,475 US7374908B2 (en) | 2001-10-16 | 2002-10-11 | Microorganism and production of carotinoid compounds thereby |
| CNB028203976A CN1276073C (zh) | 2001-10-16 | 2002-10-11 | 微生物及其类胡萝卜素化合物类产品 |
| EP02775336A EP1443104B1 (en) | 2001-10-16 | 2002-10-11 | Microorganism and production of carotinoid compounds thereby |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001-318746 | 2001-10-16 | ||
| JP2001318746 | 2001-10-16 | ||
| JP2002231126A JP3834626B2 (ja) | 2001-10-16 | 2002-08-08 | 新規な微生物及びそれを用いた天然カロチノイドの製造方法 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003189846A true JP2003189846A (ja) | 2003-07-08 |
| JP2003189846A5 JP2003189846A5 (ja) | 2005-10-27 |
| JP3834626B2 JP3834626B2 (ja) | 2006-10-18 |
Family
ID=27615497
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2002231126A Expired - Lifetime JP3834626B2 (ja) | 2001-10-16 | 2002-08-08 | 新規な微生物及びそれを用いた天然カロチノイドの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3834626B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005085465A1 (ja) * | 2004-03-04 | 2005-09-15 | Suntory Limited | アスタキサンチン含有脂質の製造方法 |
| US7888123B2 (en) | 2005-04-28 | 2011-02-15 | Fujifilm Corporation | Method for introducing a gene into labyrinthulomycota |
| CN114315677A (zh) * | 2021-12-31 | 2022-04-12 | 万华化学集团股份有限公司 | 一种光催化氧化制备角黄素的方法 |
-
2002
- 2002-08-08 JP JP2002231126A patent/JP3834626B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005085465A1 (ja) * | 2004-03-04 | 2005-09-15 | Suntory Limited | アスタキサンチン含有脂質の製造方法 |
| US7888123B2 (en) | 2005-04-28 | 2011-02-15 | Fujifilm Corporation | Method for introducing a gene into labyrinthulomycota |
| CN114315677A (zh) * | 2021-12-31 | 2022-04-12 | 万华化学集团股份有限公司 | 一种光催化氧化制备角黄素的方法 |
| CN114315677B (zh) * | 2021-12-31 | 2022-11-08 | 万华化学集团股份有限公司 | 一种光催化氧化制备角黄素的方法 |
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|---|---|
| JP3834626B2 (ja) | 2006-10-18 |
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