JP2003199569A - ストレプトベルティシリウム・ラダカヌムのトランスグルタミナーゼ遺伝子及び該遺伝子によってコードされるトランスグルタミナーゼ - Google Patents
ストレプトベルティシリウム・ラダカヌムのトランスグルタミナーゼ遺伝子及び該遺伝子によってコードされるトランスグルタミナーゼInfo
- Publication number
- JP2003199569A JP2003199569A JP2001383649A JP2001383649A JP2003199569A JP 2003199569 A JP2003199569 A JP 2003199569A JP 2001383649 A JP2001383649 A JP 2001383649A JP 2001383649 A JP2001383649 A JP 2001383649A JP 2003199569 A JP2003199569 A JP 2003199569A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- transglutaminase
- dna molecule
- amino acid
- seq
- gene
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- General Preparation And Processing Of Foods (AREA)
- Jellies, Jams, And Syrups (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【課題】 産業上有用なトランスグルタミナーゼを低コ
ストで大量に得る。 【解決手段】 ストレプトベルティシリウム・ラダカヌ
ムのトランスグルタミナーゼをコードするＤＮＡ分子、
該ＤＮＡ分子を含む発現ベクター、該発現ベクターを含
む宿主細胞、該ＤＮＡ分子にコードされたトランスグル
タミナーゼ及び該トランスグルタミナーゼの産業的プロ
セスにおける使用を提供する。
ストで大量に得る。 【解決手段】 ストレプトベルティシリウム・ラダカヌ
ムのトランスグルタミナーゼをコードするＤＮＡ分子、
該ＤＮＡ分子を含む発現ベクター、該発現ベクターを含
む宿主細胞、該ＤＮＡ分子にコードされたトランスグル
タミナーゼ及び該トランスグルタミナーゼの産業的プロ
セスにおける使用を提供する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、トランスグルタミ
ナーゼをコードする新規ＤＮＡ分子及び該分子によって
コードされるトランスグルタミナーゼに関する。
ナーゼをコードする新規ＤＮＡ分子及び該分子によって
コードされるトランスグルタミナーゼに関する。
【０００２】
【従来の技術】トランスグルタミナーゼは、タンパク質
中のグルタミンの側鎖であるγ−カルボキサミド基とリ
ジンの側鎖であるε−アミノ基との間のイソペプチド結
合の形成を触媒するＣａ2+依存性酵素である。トランス
グルタミナーゼは、ゼラチン質架橋ゲルの製造や、繊維
束表面の架橋の誘導、チーズ製品の製造等の食品加工に
用いることができる。また、トランスグルタミナーゼを
慢性的創傷の治療に用いたり、生物学的接着剤として使
用することもできる。
中のグルタミンの側鎖であるγ−カルボキサミド基とリ
ジンの側鎖であるε−アミノ基との間のイソペプチド結
合の形成を触媒するＣａ2+依存性酵素である。トランス
グルタミナーゼは、ゼラチン質架橋ゲルの製造や、繊維
束表面の架橋の誘導、チーズ製品の製造等の食品加工に
用いることができる。また、トランスグルタミナーゼを
慢性的創傷の治療に用いたり、生物学的接着剤として使
用することもできる。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】トランスグルタミナー
ゼは細胞外にも細胞内にも見い出されている。これまで
に多くの動物と数種の植物に由来する多種多様なトラン
スグルタミナーゼが同定され特徴づけられた。モルモッ
ト等の動物由来のトランスグルタミナーゼは、低コスト
で大量に得ることが困難であるため、残念ながら産業上
実用的ではない。微生物由来のトランスグルタミナーゼ
は僅か数種類、即ちストレプトベルティシリウム・モバ
ラエンス(Streptoverticillium mobaraense)、ストレプ
トベルティシリウム・シナモネウム(Streptoverticilli
um cinnamoneum)及びストレプトベルティシリウム・グ
リセオカルネウム(Streptoverticillium griseocarneu
m)種由来のトランスグルタミナーゼ（米国特許第５，１
５６，９５６号）、並びにストレプトマイセス・ラベン
デュラエ(Streptomyces lavendulae)と考えられる種由
来のトランスグルタミナーゼ（米国特許第５，２５２，
４６９号）が開示されているにすぎない。ウー（Ｗｕ）
らによれば、スクリーニングされた菌株のなかではスト
レプトベルティシリウム・ラダカヌム(Streptoverticil
lium ladakanum)のトランスグルタミナーゼが最も高活
性である（ウーら、１９９６年、Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｇ
ｒｉｃ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．３４（２）：２２８〜４
０）。
ゼは細胞外にも細胞内にも見い出されている。これまで
に多くの動物と数種の植物に由来する多種多様なトラン
スグルタミナーゼが同定され特徴づけられた。モルモッ
ト等の動物由来のトランスグルタミナーゼは、低コスト
で大量に得ることが困難であるため、残念ながら産業上
実用的ではない。微生物由来のトランスグルタミナーゼ
は僅か数種類、即ちストレプトベルティシリウム・モバ
ラエンス(Streptoverticillium mobaraense)、ストレプ
トベルティシリウム・シナモネウム(Streptoverticilli
um cinnamoneum)及びストレプトベルティシリウム・グ
リセオカルネウム(Streptoverticillium griseocarneu
m)種由来のトランスグルタミナーゼ（米国特許第５，１
５６，９５６号）、並びにストレプトマイセス・ラベン
デュラエ(Streptomyces lavendulae)と考えられる種由
来のトランスグルタミナーゼ（米国特許第５，２５２，
４６９号）が開示されているにすぎない。ウー（Ｗｕ）
らによれば、スクリーニングされた菌株のなかではスト
レプトベルティシリウム・ラダカヌム(Streptoverticil
lium ladakanum)のトランスグルタミナーゼが最も高活
性である（ウーら、１９９６年、Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｇ
ｒｉｃ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．３４（２）：２２８〜４
０）。
【０００４】トランスグルタミナーゼをコードする遺伝
子は、ストレプトベルティシリウムｓｐ．Ｓ−８１１２
［ワシズ（Ｗａｓｈｉｚｕ）ら、１９９４年、Ｂｉｏｓ
ｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５８
（１）：８２〜７］、ストレプトベルティシリウム・シ
ナモネウム［ペイスターナック（Ｐａｓｔｅｒｎａｃ
ｋ）ら、１９９８年、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２
５７（３）：５７０〜６］、ストレプトマイセス・ライ
ディクス(Streptomyces lydicus)（ＷＯ ９，６０６，
９３１）及びバチルス・スブティリス（Bacillus subti
lis）［コバヤシ（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ）ら、１９９８
年、Ｊ．Ｇｅｎ．Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４
４：８５〜９１］からクローニングされている。
子は、ストレプトベルティシリウムｓｐ．Ｓ−８１１２
［ワシズ（Ｗａｓｈｉｚｕ）ら、１９９４年、Ｂｉｏｓ
ｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５８
（１）：８２〜７］、ストレプトベルティシリウム・シ
ナモネウム［ペイスターナック（Ｐａｓｔｅｒｎａｃ
ｋ）ら、１９９８年、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２
５７（３）：５７０〜６］、ストレプトマイセス・ライ
ディクス(Streptomyces lydicus)（ＷＯ ９，６０６，
９３１）及びバチルス・スブティリス（Bacillus subti
lis）［コバヤシ（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ）ら、１９９８
年、Ｊ．Ｇｅｎ．Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４
４：８５〜９１］からクローニングされている。
【０００５】なお、現在の遺伝子工学技術によって、酵
素を大量に得ることが比較的容易になった。酵素の大量
生産は、酵素をコードする遺伝子を単離し、その酵素の
塩基配列を決定し、その酵素をコードする遺伝子を含む
組換えＤＮＡを作製し、この組換えＤＮＡを、微生物、
動物細胞又は植物細胞に導入し、得られた形質転換体を
培養することにより達成される。
素を大量に得ることが比較的容易になった。酵素の大量
生産は、酵素をコードする遺伝子を単離し、その酵素の
塩基配列を決定し、その酵素をコードする遺伝子を含む
組換えＤＮＡを作製し、この組換えＤＮＡを、微生物、
動物細胞又は植物細胞に導入し、得られた形質転換体を
培養することにより達成される。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明の一目的は、トラ
ンスグルタミナーゼをコードする配列を含む単離精製さ
れたＤＮＡ分子であって、前記核酸が非常にストリンジ
ェントな条件下で配列番号１（図２の６８３〜１９１５
番）に示す配列又はその相補鎖にハイブリダイズする、
前記ＤＮＡ分子を提供することにある。
ンスグルタミナーゼをコードする配列を含む単離精製さ
れたＤＮＡ分子であって、前記核酸が非常にストリンジ
ェントな条件下で配列番号１（図２の６８３〜１９１５
番）に示す配列又はその相補鎖にハイブリダイズする、
前記ＤＮＡ分子を提供することにある。
【０００７】本発明の他の目的は、本発明のＤＮＡ分子
を含む発現ベクターを提供することにある。
を含む発現ベクターを提供することにある。
【０００８】本発明の他の目的は、本発明の発現ベクタ
ーを含む宿主細胞を提供することにある。
ーを含む宿主細胞を提供することにある。
【０００９】本発明の他の目的は、本発明のＤＮＡ分子
によってコードされるアミノ酸配列を含むポリペプチド
を提供することにある。
によってコードされるアミノ酸配列を含むポリペプチド
を提供することにある。
【００１０】
【発明の実施の形態】本発明は、ストレプトベルティシ
リウム・ラダカヌムから得られるトランスグルタミナー
ゼをコードする新規ＤＮＡ分子を特徴とする。更に本発
明は、そのコードされた高活性なトランスグルタミナー
ゼを発現する構築物を提供する。
リウム・ラダカヌムから得られるトランスグルタミナー
ゼをコードする新規ＤＮＡ分子を特徴とする。更に本発
明は、そのコードされた高活性なトランスグルタミナー
ゼを発現する構築物を提供する。
【００１１】定義
本明細書において用いる「単離精製された」という用語
は、ＤＮＡ分子又はタンパク質の配列決定、複製及び／
又は発現が可能となるよう、当該ＤＮＡ分子又はタンパ
ク質を、本来の細胞環境から、及び細菌ゲノムの他のコ
ード領域を含む集合体(association with other coding
regions)から、インビトロで単離することを指す。好
ましくは、本発明の単離精製されたＤＮＡ分子は単一の
コード領域を有する。当該ＤＮＡ分子は単一のコード領
域を含むが、そのＤＮＡ分子の機能に悪影響を及ぼさな
い別のヌクレオチドを含んでもよい。例えば、５’及び
３’非翻訳領域に、可変数のヌクレオチドが含まれてい
てもよい。この別のヌクレオチドは、上記単一のコード
領域の外側にあることが好ましい。
は、ＤＮＡ分子又はタンパク質の配列決定、複製及び／
又は発現が可能となるよう、当該ＤＮＡ分子又はタンパ
ク質を、本来の細胞環境から、及び細菌ゲノムの他のコ
ード領域を含む集合体(association with other coding
regions)から、インビトロで単離することを指す。好
ましくは、本発明の単離精製されたＤＮＡ分子は単一の
コード領域を有する。当該ＤＮＡ分子は単一のコード領
域を含むが、そのＤＮＡ分子の機能に悪影響を及ぼさな
い別のヌクレオチドを含んでもよい。例えば、５’及び
３’非翻訳領域に、可変数のヌクレオチドが含まれてい
てもよい。この別のヌクレオチドは、上記単一のコード
領域の外側にあることが好ましい。
【００１２】本明細書において用いる「アミノ酸配列」
という用語は、天然のタンパク質分子のアミノ酸配列を
指す。「アミノ酸配列」という用語や、「ポリペプチ
ド」、「タンパク質」等の用語は、アミノ酸配列を、上
記タンパク質分子に関連する、完全な天然(native)のア
ミノ酸配列に限定することを意図するものではない。ア
ミノ酸配列として、オリゴペプチド、ペプチド、ポリペ
プチド及びタンパク質の配列；それらの断片や一部；並
びに天然由来のあるいは合成の分子が挙げられる。
という用語は、天然のタンパク質分子のアミノ酸配列を
指す。「アミノ酸配列」という用語や、「ポリペプチ
ド」、「タンパク質」等の用語は、アミノ酸配列を、上
記タンパク質分子に関連する、完全な天然(native)のア
ミノ酸配列に限定することを意図するものではない。ア
ミノ酸配列として、オリゴペプチド、ペプチド、ポリペ
プチド及びタンパク質の配列；それらの断片や一部；並
びに天然由来のあるいは合成の分子が挙げられる。
【００１３】本明細書において用いる「欠損」という用
語は、それぞれアミノ酸配列又はヌクレオチド配列にお
いてそれぞれ１個以上のアミノ酸又はヌクレオチド残基
が欠落している変化を指す。
語は、それぞれアミノ酸配列又はヌクレオチド配列にお
いてそれぞれ１個以上のアミノ酸又はヌクレオチド残基
が欠落している変化を指す。
【００１４】本明細書において用いる「挿入」又は「付
加」という用語は、天然分子と比較して、それぞれアミ
ノ酸配列又はヌクレオチド配列に１個以上のアミノ酸又
はヌクレオチド残基が付加されたことによる変化を指
す。
加」という用語は、天然分子と比較して、それぞれアミ
ノ酸配列又はヌクレオチド配列に１個以上のアミノ酸又
はヌクレオチド残基が付加されたことによる変化を指
す。
【００１５】本明細書において用いる「ベクター」とい
う用語は、核酸分子であって、それ自身と結合している
別の核酸を運搬することができる核酸分子を指す。好ま
しいベクターの１種として、エピソーム、即ち、染色体
外複製が可能な核酸が挙げられる。好ましいベクター
は、自己複製が可能であり、且つ、それ自身が結合して
いる核酸を発現させることが可能なものである。ベクタ
ーの内、それ自身がオペラティブに連結されている遺伝
子に対して発現を指令することができるベクターを本明
細書において「発現ベクター」と称する。一般に、ＤＮ
Ａ組換え技術に有用な発現ベクターは「プラスミド」の
形態であることが多い。プラスミドとは、一般に、ベク
ターの形態では染色体に結合していない環状二本鎖ＤＮ
Ａループを指す。
う用語は、核酸分子であって、それ自身と結合している
別の核酸を運搬することができる核酸分子を指す。好ま
しいベクターの１種として、エピソーム、即ち、染色体
外複製が可能な核酸が挙げられる。好ましいベクター
は、自己複製が可能であり、且つ、それ自身が結合して
いる核酸を発現させることが可能なものである。ベクタ
ーの内、それ自身がオペラティブに連結されている遺伝
子に対して発現を指令することができるベクターを本明
細書において「発現ベクター」と称する。一般に、ＤＮ
Ａ組換え技術に有用な発現ベクターは「プラスミド」の
形態であることが多い。プラスミドとは、一般に、ベク
ターの形態では染色体に結合していない環状二本鎖ＤＮ
Ａループを指す。
【００１６】本明細書において用いる「宿主細胞」とい
う用語は、プラスミド等のベクターに感染可能な宿主の
細胞を指す。本発明に適切な宿主として、本技術分野に
おいてにおいて従来通常用いられている宿主が挙げられ
る。
う用語は、プラスミド等のベクターに感染可能な宿主の
細胞を指す。本発明に適切な宿主として、本技術分野に
おいてにおいて従来通常用いられている宿主が挙げられ
る。
【００１７】核酸
本発明の一目的は、トランスグルタミナーゼをコードす
る配列を含む単離精製されたＤＮＡ分子であって、前記
核酸が非常にストリンジェントな条件下において配列番
号１（図２〜５の６８３〜１９１５番）に示す配列又は
その相補鎖にハイブリダイズする、単離精製されたＤＮ
Ａ分子を提供することにある。より好ましくは、このＤ
ＮＡ分子は、配列番号２に示すアミノ酸配列（図２〜５
の６８３〜１９１５番にコードされるアミノ酸）を有す
るトランスグルタミナーゼをコードする。最も好ましく
は、このＤＮＡ分子は、配列番号１に示す完全(complet
e)ヌクレオチド配列で表される。
る配列を含む単離精製されたＤＮＡ分子であって、前記
核酸が非常にストリンジェントな条件下において配列番
号１（図２〜５の６８３〜１９１５番）に示す配列又は
その相補鎖にハイブリダイズする、単離精製されたＤＮ
Ａ分子を提供することにある。より好ましくは、このＤ
ＮＡ分子は、配列番号２に示すアミノ酸配列（図２〜５
の６８３〜１９１５番にコードされるアミノ酸）を有す
るトランスグルタミナーゼをコードする。最も好ましく
は、このＤＮＡ分子は、配列番号１に示す完全(complet
e)ヌクレオチド配列で表される。
【００１８】類似配列を有する核酸は、非常にストリン
ジェントな条件下でハイブリダイゼーションを行うこと
によって検出される。非常にストリンジェントな条件と
は、０．を含む緩衝液中でのハイブリダイゼーション、
例えば、０．２５ＭのＮａ2ＨＰＯ4（ｐＨ７．４）、７
％のドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、１％のウシ血
清アルブミン（ＢＳＡ）及び１．０ｍＭのエチレンジア
ミン四酢酸（ＥＤＴＡ、ｐＨ８）を含む６５℃の緩衝液
中でハイブリダイズさせ、次いで、６５℃の０．１％Ｓ
ＤＳ及び０．１×ＳＳＣ（０．１×ＳＳＣは０．０１５
Ｍ塩化ナトリウムと０．００１５Ｍクエン酸三ナトリウ
ムとを含む：ｐＨ７．０）を用いて３回洗浄することを
云う。
ジェントな条件下でハイブリダイゼーションを行うこと
によって検出される。非常にストリンジェントな条件と
は、０．を含む緩衝液中でのハイブリダイゼーション、
例えば、０．２５ＭのＮａ2ＨＰＯ4（ｐＨ７．４）、７
％のドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、１％のウシ血
清アルブミン（ＢＳＡ）及び１．０ｍＭのエチレンジア
ミン四酢酸（ＥＤＴＡ、ｐＨ８）を含む６５℃の緩衝液
中でハイブリダイズさせ、次いで、６５℃の０．１％Ｓ
ＤＳ及び０．１×ＳＳＣ（０．１×ＳＳＣは０．０１５
Ｍ塩化ナトリウムと０．００１５Ｍクエン酸三ナトリウ
ムとを含む：ｐＨ７．０）を用いて３回洗浄することを
云う。
【００１９】本技術分野で知られている各種方法を用い
て、本発明のトランスグルタミナーゼをコードする配列
を突然変異させることにより、プロモーターの強さやコ
ードされたタンパク質の配列等に目的とする変化を生じ
させてもよい。このような突然変異により生じるＤＮＡ
配列やその生成物は、本明細書に記載した配列と実質的
に類似しているであろう。即ち、このＤＮＡ配列や生成
物においてそれぞれ少なくとも１個のヌクレオチド又は
アミノ酸が異なり、その違いはヌクレオチド又はアミノ
酸は少なくとも２個であるが、約１０個以下であろう。
この変化は、置換、挿入、又は欠損であることができ
る。
て、本発明のトランスグルタミナーゼをコードする配列
を突然変異させることにより、プロモーターの強さやコ
ードされたタンパク質の配列等に目的とする変化を生じ
させてもよい。このような突然変異により生じるＤＮＡ
配列やその生成物は、本明細書に記載した配列と実質的
に類似しているであろう。即ち、このＤＮＡ配列や生成
物においてそれぞれ少なくとも１個のヌクレオチド又は
アミノ酸が異なり、その違いはヌクレオチド又はアミノ
酸は少なくとも２個であるが、約１０個以下であろう。
この変化は、置換、挿入、又は欠損であることができ
る。
【００２０】本発明のＤＮＡの単離に有用な方法は数種
類ある。例えば、酵素タンパク質を精製し、次いで、こ
の酵素タンパク質のアミノ酸マイクロシークエンシング
を直接行うか又は限定的切断(limited cleavage)後に行
う方法が挙げられる。得られた部分アミノ酸配列を用い
て縮重オリゴヌクレオチドプローブ又はプライマーを設
計することができ、このプローブ又はプライマーは、ポ
リメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）による非縮重の固有のヌ
クレオチド配列の合成に用いることができる。このヌク
レオチド配列は、ＤＮＡライブラリーのスクリーニング
用プローブとして用いることができる。精製されたタン
パク質に対し産生された抗体を用いてＤＮＡ発現ライブ
ラリーからＤＮＡクローンを単離することもできる。別
法として、類縁酵素のＤＮＡ分子配列をクローニング計
画の出発点として用いてもよい。この方法は「相同性に
よるクローニング（cloning by homology）」と称され
ることが多い。異種からの配列情報を利用する別法で
は、異種の類縁ＤＮＡ分子のうち配列の相同性が高い短
い領域を利用し、ポリメラーゼ連鎖反応配列増幅法（Ｐ
ＣＲ）を行うことにより、「種特異的」な非縮重ヌクレ
オチド配列を得る。次いで、この配列を、ＤＮＡライブ
ラリースクリーニングに用いたり、直接ＰＣＲベースの
ＤＮＡクローニングにも用いることができる。
類ある。例えば、酵素タンパク質を精製し、次いで、こ
の酵素タンパク質のアミノ酸マイクロシークエンシング
を直接行うか又は限定的切断(limited cleavage)後に行
う方法が挙げられる。得られた部分アミノ酸配列を用い
て縮重オリゴヌクレオチドプローブ又はプライマーを設
計することができ、このプローブ又はプライマーは、ポ
リメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）による非縮重の固有のヌ
クレオチド配列の合成に用いることができる。このヌク
レオチド配列は、ＤＮＡライブラリーのスクリーニング
用プローブとして用いることができる。精製されたタン
パク質に対し産生された抗体を用いてＤＮＡ発現ライブ
ラリーからＤＮＡクローンを単離することもできる。別
法として、類縁酵素のＤＮＡ分子配列をクローニング計
画の出発点として用いてもよい。この方法は「相同性に
よるクローニング（cloning by homology）」と称され
ることが多い。異種からの配列情報を利用する別法で
は、異種の類縁ＤＮＡ分子のうち配列の相同性が高い短
い領域を利用し、ポリメラーゼ連鎖反応配列増幅法（Ｐ
ＣＲ）を行うことにより、「種特異的」な非縮重ヌクレ
オチド配列を得る。次いで、この配列を、ＤＮＡライブ
ラリースクリーニングに用いたり、直接ＰＣＲベースの
ＤＮＡクローニングにも用いることができる。
【００２１】本技術分野で周知の標準的な生化学的手順
により、オリゴヌクレオチドプローブを用いて様々なサ
ンプル中の本発明ＤＮＡ分子を検出して増幅することが
できる。例えば、標識プローブを用いたサザン又はノー
ザンブロットハイブリダイゼーション法を用いることが
できる。別法としてＰＣＲ法を用いることができ、増幅
されたＰＣＲ産物の核酸配列決定を行うことによりＤＮ
Ａ中の突然変異を検出することができる。
により、オリゴヌクレオチドプローブを用いて様々なサ
ンプル中の本発明ＤＮＡ分子を検出して増幅することが
できる。例えば、標識プローブを用いたサザン又はノー
ザンブロットハイブリダイゼーション法を用いることが
できる。別法としてＰＣＲ法を用いることができ、増幅
されたＰＣＲ産物の核酸配列決定を行うことによりＤＮ
Ａ中の突然変異を検出することができる。
【００２２】発現ベクター及び宿主系
本発明の他の目的は、配列番号１に示すＤＮＡ分子を含
む発現ベクターを提供することにある。生物学的に活性
なトランスグルタミナーゼを発現させるために、トラン
スグルタミナーゼをコードする核酸配列を適切な発現ベ
クターに挿入することができる。この適切な発現ベクタ
ーとは、挿入されたコード配列の転写及び翻訳に必要な
要素を有するベクターである。本発明によれば、本技術
分野において当業者に周知の方法を用いて、図１に示す
ＤＮＡ分子と適切な転写調節要素及び翻訳調節要素とを
含む発現ベクターを構築することができる。この方法の
例として、インビトロでの組換えＤＮＡ技術、合成技
術、及びインビボでの遺伝子組換えが挙げられる。
む発現ベクターを提供することにある。生物学的に活性
なトランスグルタミナーゼを発現させるために、トラン
スグルタミナーゼをコードする核酸配列を適切な発現ベ
クターに挿入することができる。この適切な発現ベクタ
ーとは、挿入されたコード配列の転写及び翻訳に必要な
要素を有するベクターである。本発明によれば、本技術
分野において当業者に周知の方法を用いて、図１に示す
ＤＮＡ分子と適切な転写調節要素及び翻訳調節要素とを
含む発現ベクターを構築することができる。この方法の
例として、インビトロでの組換えＤＮＡ技術、合成技
術、及びインビボでの遺伝子組換えが挙げられる。
【００２３】本発明の他の目的は、配列番号１に示すＤ
ＮＡ分子を含む発現ベクターを含む宿主細胞を提供する
ことにある。本発明によれば、宿主にトランスグルタミ
ナーゼをコードする配列を含ませ、それを発現させるた
めに、多くの宿主系を利用することができる。この宿主
の例として、組換えバクテリオファージ、プラスミド又
はコスミドＤＮＡ発現ベクターにより形質転換された細
菌等の微生物；酵母発現ベクターにより形質転換された
酵母；ウイルス発現ベクターに感染した昆虫細胞系；ウ
イルス発現ベクター又は細菌発現ベクターにより形質転
換された植物細胞系；又は動物細胞系が挙げられるが、
これらに限定されない。好ましくは、ベクターは、トラ
ンスグルタミナーゼを発現するようストレプトマイセス
・リビダンス(Streptomyces lividans)に形質転換され
る。
ＮＡ分子を含む発現ベクターを含む宿主細胞を提供する
ことにある。本発明によれば、宿主にトランスグルタミ
ナーゼをコードする配列を含ませ、それを発現させるた
めに、多くの宿主系を利用することができる。この宿主
の例として、組換えバクテリオファージ、プラスミド又
はコスミドＤＮＡ発現ベクターにより形質転換された細
菌等の微生物；酵母発現ベクターにより形質転換された
酵母；ウイルス発現ベクターに感染した昆虫細胞系；ウ
イルス発現ベクター又は細菌発現ベクターにより形質転
換された植物細胞系；又は動物細胞系が挙げられるが、
これらに限定されない。好ましくは、ベクターは、トラ
ンスグルタミナーゼを発現するようストレプトマイセス
・リビダンス(Streptomyces lividans)に形質転換され
る。
【００２４】ポリペプチド
本発明の他の目的は、配列番号１に示すＤＮＡ分子によ
ってコードされるアミノ酸配列を含むポリペプチドを提
供することにある。好ましくは、このポリペプチドは、
配列番号２に示すアミノ酸配列を含む。
ってコードされるアミノ酸配列を含むポリペプチドを提
供することにある。好ましくは、このポリペプチドは、
配列番号２に示すアミノ酸配列を含む。
【００２５】本発明のポリペプチドを大量に得ることが
可能である。発現宿主を用いて従来法に従いタンパク質
を単離精製してもよい。発現宿主からライセート（溶解
分離物）を調製してもよく、このライセートを、ＨＰＬ
Ｃ、排除クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、アフィニ
ティークロマトグラフィー、又は他の精製技術を用いて
精製することができる。精製されたタンパク質の純度
は、通常、少なくとも約８０％であり、好ましくは、純
度は少なくとも約９０％であり、１００％まで至り得
る。純粋であるとは、他のタンパク質や細胞壊死組織片
を含まないことを意味する。
可能である。発現宿主を用いて従来法に従いタンパク質
を単離精製してもよい。発現宿主からライセート（溶解
分離物）を調製してもよく、このライセートを、ＨＰＬ
Ｃ、排除クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、アフィニ
ティークロマトグラフィー、又は他の精製技術を用いて
精製することができる。精製されたタンパク質の純度
は、通常、少なくとも約８０％であり、好ましくは、純
度は少なくとも約９０％であり、１００％まで至り得
る。純粋であるとは、他のタンパク質や細胞壊死組織片
を含まないことを意味する。
【００２６】有用性
本発明のＤＮＡ分子をトランスグルタミナーゼのコード
化に用いることができる。このＤＮＡ分子を大量に発現
させることにより、トランスグルタミナーゼが大量に生
産される。得られたトランスグルタミナーゼは、タンパ
ク質のゲル化；小麦粉の焼成品質の改良；タンパク質、
脂肪及び水からのペースト状食品若しくは食品成分の製
造；濃縮牛乳(milk concentrate)からのチーズ製造；ミ
ンチ肉や魚肉製品の結合(binding)；食品タンパク質の
味と食感の改良；皮加工におけるカゼイン仕上げ；及び
靴磨き等、様々な産業用途に用いられる。
化に用いることができる。このＤＮＡ分子を大量に発現
させることにより、トランスグルタミナーゼが大量に生
産される。得られたトランスグルタミナーゼは、タンパ
ク質のゲル化；小麦粉の焼成品質の改良；タンパク質、
脂肪及び水からのペースト状食品若しくは食品成分の製
造；濃縮牛乳(milk concentrate)からのチーズ製造；ミ
ンチ肉や魚肉製品の結合(binding)；食品タンパク質の
味と食感の改良；皮加工におけるカゼイン仕上げ；及び
靴磨き等、様々な産業用途に用いられる。
【００２７】以下に示す実施例は、例示を目的とするも
のであって、本発明はこれら実施例によって何ら限定さ
れるものではない。
のであって、本発明はこれら実施例によって何ら限定さ
れるものではない。
【００２８】
【実施例】実施例１ ストレプトベルティシリウム・ラ
ダカヌムのトランスグルタミナーゼ遺伝子 Ａ．ストレプトベルティシリウム・ラダカヌムのトラン
スグルタミナーゼ遺伝子のクローニング （１）ストレプトベルティシリウム・モバラエンスのト
ランスグルタミナーゼ遺伝子断片のＰＣＲ増幅及び精製 ２種類のアミノ酸断片ＦＤＥＥＫＧＦ及びＫＶＫＱＧＷ
Ｐに従い縮重プライマーを設計した。これらのアミノ酸
断片は、ワシズらが１９９４年にクローニングしたスト
レプトベルティシリウム Ｓ−８１１２（ワシズ．
Ｋ．，ら、Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．５８（１）：８２−７）のトランスグルタ
ミナーゼアミノ酸配列のうち縮重度が最も低い領域であ
る。この２種の縮重プライマーを以下に示す。 5'-aaaaacctgaaaccctt(ct)ga(ct)ga(ag)ga(ag)aa(ag)gg
(gact)tt-3' and 5'-cttatcaacggatacggcca(gatc)cc(tc)tg(tc)tt(gact)a
c(tc)tt-3'. また、２種のネステド（ｎｅｓｔｅｄ）プライマーを以
下に示す。 5'-aaaaacctgaaaccc-3' and 5'-cttatcaacggatac-3'. ストレプトベルティシリウム・モバラエンス ＣＣＲＣ
１２１６５のトランスグルタミナーゼ遺伝子の部分断
片をネステド−ＰＣＲにより増幅及び精製した。その結
果、約６５０ｂｐにＤＮＡバンドが見られた。これはＰ
ＣＲ産物の計算長（６４４ｂｐ）に対応する。得られた
ＤＮＡの配列を図１（配列番号３）に示す。ストレプト
ベルティシリウム・モバラエンス ＣＣＲＣ １２１６
５は、台湾、新竹所在の食品工業開発研究所（Food Ind
ustry Research and Development Institute：ＦＩＲＤ
Ｉ）の株保存研究機関（Culture Collection and Resea
rchCenter）のカタログに記載されている。
ダカヌムのトランスグルタミナーゼ遺伝子 Ａ．ストレプトベルティシリウム・ラダカヌムのトラン
スグルタミナーゼ遺伝子のクローニング （１）ストレプトベルティシリウム・モバラエンスのト
ランスグルタミナーゼ遺伝子断片のＰＣＲ増幅及び精製 ２種類のアミノ酸断片ＦＤＥＥＫＧＦ及びＫＶＫＱＧＷ
Ｐに従い縮重プライマーを設計した。これらのアミノ酸
断片は、ワシズらが１９９４年にクローニングしたスト
レプトベルティシリウム Ｓ−８１１２（ワシズ．
Ｋ．，ら、Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．５８（１）：８２−７）のトランスグルタ
ミナーゼアミノ酸配列のうち縮重度が最も低い領域であ
る。この２種の縮重プライマーを以下に示す。 5'-aaaaacctgaaaccctt(ct)ga(ct)ga(ag)ga(ag)aa(ag)gg
(gact)tt-3' and 5'-cttatcaacggatacggcca(gatc)cc(tc)tg(tc)tt(gact)a
c(tc)tt-3'. また、２種のネステド（ｎｅｓｔｅｄ）プライマーを以
下に示す。 5'-aaaaacctgaaaccc-3' and 5'-cttatcaacggatac-3'. ストレプトベルティシリウム・モバラエンス ＣＣＲＣ
１２１６５のトランスグルタミナーゼ遺伝子の部分断
片をネステド−ＰＣＲにより増幅及び精製した。その結
果、約６５０ｂｐにＤＮＡバンドが見られた。これはＰ
ＣＲ産物の計算長（６４４ｂｐ）に対応する。得られた
ＤＮＡの配列を図１（配列番号３）に示す。ストレプト
ベルティシリウム・モバラエンス ＣＣＲＣ １２１６
５は、台湾、新竹所在の食品工業開発研究所（Food Ind
ustry Research and Development Institute：ＦＩＲＤ
Ｉ）の株保存研究機関（Culture Collection and Resea
rchCenter）のカタログに記載されている。
【００２９】（２）ストレプトベルティシリウム・モバ
ラエンスのトランスグルタミナーゼ遺伝子部分断片をプ
ローブとして用いたストレプトベルティシリウム・ラダ
カヌムの完全トランスグルタミナーゼ遺伝子のプロービ
ング 上記６４４ｂｐのＤＮＡをサザンブロット実験のプロー
ブとして用いた。ストレプトベルティシリウム・ラダカ
ヌムのゲノムの以下に示す制限酵素切断断片にシグナル
が検出された：８．４ｋｂ ＢａｍＨＩ ＤＮＡ、６ｋ
ｂ ＢｃｌＩＤＮＡ、９ｋｂ ＮｃｏＩ ＤＮＡ及び
７．５ｋｂ ＰｓｔＩ ＤＮＡ。ストレプトベルティシ
リウム・ラダカヌムは、台湾、新竹所在の食品工業開発
研究所（ＦＩＲＤＩ）の株保存研究機関のカタログに記
載されている（受託番号ＣＣＲＣ１２４２２）。
ラエンスのトランスグルタミナーゼ遺伝子部分断片をプ
ローブとして用いたストレプトベルティシリウム・ラダ
カヌムの完全トランスグルタミナーゼ遺伝子のプロービ
ング 上記６４４ｂｐのＤＮＡをサザンブロット実験のプロー
ブとして用いた。ストレプトベルティシリウム・ラダカ
ヌムのゲノムの以下に示す制限酵素切断断片にシグナル
が検出された：８．４ｋｂ ＢａｍＨＩ ＤＮＡ、６ｋ
ｂ ＢｃｌＩＤＮＡ、９ｋｂ ＮｃｏＩ ＤＮＡ及び
７．５ｋｂ ＰｓｔＩ ＤＮＡ。ストレプトベルティシ
リウム・ラダカヌムは、台湾、新竹所在の食品工業開発
研究所（ＦＩＲＤＩ）の株保存研究機関のカタログに記
載されている（受託番号ＣＣＲＣ１２４２２）。
【００３０】トランスグルタミナーゼ遺伝子を含む上記
ＤＮＡ断片を精製するために、ストレプトベルティシリ
ウム・ラダカヌムのゲノムＤＮＡをＮｃｏＩで切断し、
電気泳動にて分離した。精製された９ｋｂのＤＮＡを、
ＮｃｏＩで切断したｐＭＴＬ２３ベクターに挿入し、大
腸菌(Escherichia coli)ＤＨ５αに形質転換することに
よりＤＮＡライブラリーを作成した。上記６４４ｂｐ
ＤＮＡをプローブとして再び使用してコロニーハイブリ
ダイゼーション実験を行い、ストレプトベルティシリウ
ム・ラダカヌムのトランスグルタミナーゼ遺伝子を含む
組換えベクターを選び出した。ＮｃｏＩ断片は配列決定
に用いるには大きすぎるので、トランスグルタミナーゼ
遺伝子を含む３．２ｋｂのＫｐｎＩ断片をクローニング
し、ｐＭＴ２３ベクターのＫｐｎＩ切断部位に挿入した
（ｐＡＥ０２１とした）後、配列決定を行った。Ｋｐｎ
Ｉ断片の３２４１ヌクレオチド配列を図２〜５に示す。
この配列を、ＧＣＧから入手したコドン選好ソフトウェ
ア（ｃｏｄｏｎｐｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｏｆｔｗａｒ
ｅ）を用いて解析した結果、遺伝子はＫｐｎＩ断片の配
列（図２〜５）の７００番目付近から１９００番目付近
までのヌクレオチドにあると推定された。この遺伝子が
ストレプトベルティシリウム・ラダカヌムのトランスグ
ルタミナーゼ遺伝子である。上記ヌクレオチド配列から
提案されるアミノ酸配列も図２〜５に示されるものであ
り、４１０個のアミノ酸から構成され、分子量は４５７
８０．２ダルトンである。ストレプトベルティシリウム
・ラダカヌムの成熟トランスグルタミナーゼは、８０番
目のアミノ酸から開始し、３３１個のアミノ酸から構成
され（図２〜５の下線部分）、分子量が３７９２２．３
ダルトン、等電点が７．０７と提案されている。
ＤＮＡ断片を精製するために、ストレプトベルティシリ
ウム・ラダカヌムのゲノムＤＮＡをＮｃｏＩで切断し、
電気泳動にて分離した。精製された９ｋｂのＤＮＡを、
ＮｃｏＩで切断したｐＭＴＬ２３ベクターに挿入し、大
腸菌(Escherichia coli)ＤＨ５αに形質転換することに
よりＤＮＡライブラリーを作成した。上記６４４ｂｐ
ＤＮＡをプローブとして再び使用してコロニーハイブリ
ダイゼーション実験を行い、ストレプトベルティシリウ
ム・ラダカヌムのトランスグルタミナーゼ遺伝子を含む
組換えベクターを選び出した。ＮｃｏＩ断片は配列決定
に用いるには大きすぎるので、トランスグルタミナーゼ
遺伝子を含む３．２ｋｂのＫｐｎＩ断片をクローニング
し、ｐＭＴ２３ベクターのＫｐｎＩ切断部位に挿入した
（ｐＡＥ０２１とした）後、配列決定を行った。Ｋｐｎ
Ｉ断片の３２４１ヌクレオチド配列を図２〜５に示す。
この配列を、ＧＣＧから入手したコドン選好ソフトウェ
ア（ｃｏｄｏｎｐｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｏｆｔｗａｒ
ｅ）を用いて解析した結果、遺伝子はＫｐｎＩ断片の配
列（図２〜５）の７００番目付近から１９００番目付近
までのヌクレオチドにあると推定された。この遺伝子が
ストレプトベルティシリウム・ラダカヌムのトランスグ
ルタミナーゼ遺伝子である。上記ヌクレオチド配列から
提案されるアミノ酸配列も図２〜５に示されるものであ
り、４１０個のアミノ酸から構成され、分子量は４５７
８０．２ダルトンである。ストレプトベルティシリウム
・ラダカヌムの成熟トランスグルタミナーゼは、８０番
目のアミノ酸から開始し、３３１個のアミノ酸から構成
され（図２〜５の下線部分）、分子量が３７９２２．３
ダルトン、等電点が７．０７と提案されている。
【００３１】Ｂ．ストレプトマイセス・リビダンスにお
けるストレプトベルティシリウム・ラダカヌムのトラン
スグルタミナーゼ遺伝子の発現 ｐＡＥ０２１をＢｇｌＩＩ及びＢａｍＨＩで切断した。
その結果得られた、トランスグルタミナーゼ遺伝子を含
む３．２ｋｂのＤＮＡ断片を精製し、これをｐＩＪ７０
２のＢｇｌＩＩ切断部位に挿入し、ｐＡＥ０５１及びｐ
ＡＥ０５２とした（図６のＡ及びＢ）。ｐＡＥ０５２を
ストレプトマイセス・リビダンス ＪＴ４６内で発現さ
せ、上清中のトランスグルタミナーゼの活性を２４時間
毎に測定した。形質転換クローンのトランスグルタミナ
ーゼ活性は、７２時間後に最大値１．４６Ｕ／ｍｌを示
す（図７）。細胞外培地のストレプトベルティシリウム
・ラダカヌムトランスグルタミナーゼ特異抗体分析を行
った結果、成熟トランスグルタミナーゼ及び非改変又は
部分的改変トランスグルタミナーゼが検出され、その分
子量は４５．８ｋＤ〜３８ｋＤの間に分布していた。上
記結果は、ストレプトマイセス・リビダンスＪＴ４６が
トランスグルタミナーゼを大量に発現したことを示す。
けるストレプトベルティシリウム・ラダカヌムのトラン
スグルタミナーゼ遺伝子の発現 ｐＡＥ０２１をＢｇｌＩＩ及びＢａｍＨＩで切断した。
その結果得られた、トランスグルタミナーゼ遺伝子を含
む３．２ｋｂのＤＮＡ断片を精製し、これをｐＩＪ７０
２のＢｇｌＩＩ切断部位に挿入し、ｐＡＥ０５１及びｐ
ＡＥ０５２とした（図６のＡ及びＢ）。ｐＡＥ０５２を
ストレプトマイセス・リビダンス ＪＴ４６内で発現さ
せ、上清中のトランスグルタミナーゼの活性を２４時間
毎に測定した。形質転換クローンのトランスグルタミナ
ーゼ活性は、７２時間後に最大値１．４６Ｕ／ｍｌを示
す（図７）。細胞外培地のストレプトベルティシリウム
・ラダカヌムトランスグルタミナーゼ特異抗体分析を行
った結果、成熟トランスグルタミナーゼ及び非改変又は
部分的改変トランスグルタミナーゼが検出され、その分
子量は４５．８ｋＤ〜３８ｋＤの間に分布していた。上
記結果は、ストレプトマイセス・リビダンスＪＴ４６が
トランスグルタミナーゼを大量に発現したことを示す。
【００３２】
【配列表】
【図１】 ストレプトベルティシリウム・モバラエンス
ＣＣＲＣ １２１６５のトランスグルタミナーゼ遺伝
子の部分断片（６４４ｂｐ）を示す。
ＣＣＲＣ １２１６５のトランスグルタミナーゼ遺伝
子の部分断片（６４４ｂｐ）を示す。
【図２】 ＫｐｎＩ断片の３２４１ヌクレオチド配列
と、ＫｐｎＩ断片の第２のオープンリーディングフレー
ムの７００番目付近から１９００番目付近までのヌクレ
オチドに相当する遺伝子とを示す。
と、ＫｐｎＩ断片の第２のオープンリーディングフレー
ムの７００番目付近から１９００番目付近までのヌクレ
オチドに相当する遺伝子とを示す。
【図３】 ＫｐｎＩ断片の３２４１ヌクレオチド配列
と、ＫｐｎＩ断片の第２のオープンリーディングフレー
ムの７００番目付近から１９００番目付近までのヌクレ
オチドに相当する遺伝子とを示す。
と、ＫｐｎＩ断片の第２のオープンリーディングフレー
ムの７００番目付近から１９００番目付近までのヌクレ
オチドに相当する遺伝子とを示す。
【図４】 ＫｐｎＩ断片の３２４１ヌクレオチド配列
と、ＫｐｎＩ断片の第２のオープンリーディングフレー
ムの７００番目付近から１９００番目付近までのヌクレ
オチドに相当する遺伝子とを示す。
と、ＫｐｎＩ断片の第２のオープンリーディングフレー
ムの７００番目付近から１９００番目付近までのヌクレ
オチドに相当する遺伝子とを示す。
【図５】 ＫｐｎＩ断片の３２４１ヌクレオチド配列
と、ＫｐｎＩ断片の第２のオープンリーディングフレー
ムの７００番目付近から１９００番目付近までのヌクレ
オチドに相当する遺伝子とを示す。
と、ＫｐｎＩ断片の第２のオープンリーディングフレー
ムの７００番目付近から１９００番目付近までのヌクレ
オチドに相当する遺伝子とを示す。
【図６】 プラスミドｐＡＥ０５１及びｐＡＥ０５２の
制限酵素切断地図を示す。
制限酵素切断地図を示す。
【図７】 ストレプトマイセス・リビダンスＪＴ４６内
におけるプラスミドｐＡＥ０５１の発現活性を示す。
におけるプラスミドｐＡＥ０５１の発現活性を示す。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ｃ１２Ｒ 1:465）
(71)出願人 501343282
ＮＯ．331， ＦＯＯＤ ＲＯＡＤ．，
ＨＳＩＮＣＨＵ 300， ＴＡＩＷＡＮ,
Ｒ．Ｏ．Ｃ.
(72)発明者 イ−シン リン
台湾，シンチュウ 300，フード ロー
ド．，ナンバー331
(72)発明者 チャン−シェシュ リウ
台湾，シンチュウ 300，フード ロー
ド．，ナンバー331
(72)発明者 ウェン−シェン チュー
台湾，シンチュウ 300，フード ロー
ド．，ナンバー331
Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA03 AA05 BA10 CA01
CA04 DA05 DA08 EA04 FA02
GA11 HA01 HA03
4B035 LC01 LC03 LC16 LE02 LE04
LG15 LG34 LG44 LK04 LP41
4B050 CC01 CC03 CC07 DD02 LL02
LL10
4B065 AA01Y AA50X AB01 BA01
BA21 CA29 CA41 CA44 CA60
Claims (13)
- 【請求項１】 トランスグルタミナーゼをコードする配
列を含む単離精製されたＤＮＡ分子であって、前記核酸
は、非常にストリンジェントな条件において配列番号１
（図２〜５中、６８３番から１９１５番まで）で示す配
列又はその相補鎖にハイブリダイズするものであるＤＮ
Ａ分子。 - 【請求項２】 配列番号２で示すアミノ酸配列（該アミ
ノ酸は図２〜５中、６８３番から１９１５番までによっ
てコードされる）を有するトランスグルタミナーゼをコ
ードする、請求項１に記載の単離精製されたＤＮＡ分
子。 - 【請求項３】 配列番号１で示す配列を含む、請求項１
に記載の単離精製されたＤＮＡ分子。 - 【請求項４】 請求項１に記載のＤＮＡ分子を含む発現
ベクター。 - 【請求項５】 請求項２に記載のＤＮＡ分子を含む、請
求項４に記載の発現ベクター。 - 【請求項６】 請求項３に記載のＤＮＡ分子を含む、請
求項４に記載の発現ベクター。 - 【請求項７】 請求項４に記載のベクターを含む宿主細
胞。 - 【請求項８】 請求項５に記載のベクターを含む、請求
項７に記載の宿主細胞。 - 【請求項９】 請求項６に記載のベクターを含む、請求
項７に記載の宿主細胞。 - 【請求項１０】 ストレプトマイセス・リビダンス(Str
eptomyces lividans)である、請求項７に記載の宿主細
胞。 - 【請求項１１】 配列番号１で示すＤＮＡ分子によって
コードされるアミノ酸配列を含むポリペプチド。 - 【請求項１２】 配列番号２で示すアミノ酸配列を含
む、請求項１１に記載のポリペプチド。 - 【請求項１３】 タンパク質のゲル化；小麦粉の焼成品
質の改良；タンパク質、脂肪及び水からペースト状食品
若しくは食品成分の製造；濃縮牛乳からのチーズ製造；
ミンチ肉や魚肉製品の結合；食品タンパク質の味と食感
の改良；皮加工におけるカゼイン仕上げ；及び靴磨きに
用いるための請求項１１に記載のポリペプチド。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001383649A JP2003199569A (ja) | 2001-12-17 | 2001-12-17 | ストレプトベルティシリウム・ラダカヌムのトランスグルタミナーゼ遺伝子及び該遺伝子によってコードされるトランスグルタミナーゼ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001383649A JP2003199569A (ja) | 2001-12-17 | 2001-12-17 | ストレプトベルティシリウム・ラダカヌムのトランスグルタミナーゼ遺伝子及び該遺伝子によってコードされるトランスグルタミナーゼ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003199569A true JP2003199569A (ja) | 2003-07-15 |
Family
ID=27639475
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001383649A Pending JP2003199569A (ja) | 2001-12-17 | 2001-12-17 | ストレプトベルティシリウム・ラダカヌムのトランスグルタミナーゼ遺伝子及び該遺伝子によってコードされるトランスグルタミナーゼ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2003199569A (ja) |
Cited By (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2033662A1 (en) | 2004-01-21 | 2009-03-11 | Novo Nordisk Health Care AG | Transglutaminase mediated conjugation of peptides |
| WO2010102886A1 (en) | 2009-02-19 | 2010-09-16 | Novo Nordisk A/S | Modification of factor viii |
| WO2011015649A1 (en) | 2009-08-06 | 2011-02-10 | Novo Nordisk Health Care Ag | Growth hormones with prolonged in-vivo efficacy |
| WO2011089255A1 (en) | 2010-01-22 | 2011-07-28 | Novo Nordisk Health Care Ag | Growth hormones with prolonged in-vivo efficacy |
| WO2011145126A2 (en) | 2010-05-19 | 2011-11-24 | Università Degli Studi Di Padova | A method for the preparation of conjugates based on transglutaminase |
| WO2013092983A2 (en) | 2011-12-23 | 2013-06-27 | Innate Pharma | Enzymatic conjugation of polypeptides |
| US8513192B2 (en) | 2009-01-22 | 2013-08-20 | Novo Nordisk A/S | Stable growth hormone compounds resistant to proteolytic degradation |
| WO2014140300A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Innate Pharma | Solid phase tgase-mediated conjugation of antibodies |
| US8865868B2 (en) | 2008-08-06 | 2014-10-21 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Conjugated proteins with prolonged in vivo efficacy |
| WO2015006728A2 (en) | 2013-07-11 | 2015-01-15 | Usera Aimee | Site-specific chemoenzymatic protein modifications |
| US9211342B2 (en) | 2010-01-22 | 2015-12-15 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Stable growth hormone compounds resistant to proteolytic degradation |
| WO2015191883A1 (en) | 2014-06-12 | 2015-12-17 | Dophen Biomedical | Homogenous antibody drug conjugates via enzymatic methods |
| US9427478B2 (en) | 2013-06-21 | 2016-08-30 | Innate Pharma | Enzymatic conjugation of polypeptides |
| US10036010B2 (en) | 2012-11-09 | 2018-07-31 | Innate Pharma | Recognition tags for TGase-mediated conjugation |
| US10071169B2 (en) | 2013-06-20 | 2018-09-11 | Innate Pharma | Enzymatic conjugation of polypeptides |
| US10132799B2 (en) | 2012-07-13 | 2018-11-20 | Innate Pharma | Screening of conjugated antibodies |
| WO2019092148A1 (en) | 2017-11-10 | 2019-05-16 | Innate Pharma | Antibodies with functionalized glutamine residues |
| WO2020257525A1 (en) | 2019-06-20 | 2020-12-24 | Cspc Dophen Corporation | Modified il-2 proteins, peg conjugates, and uses thereof |
| US11045523B2 (en) | 2013-04-05 | 2021-06-29 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Formulation of growth hormone albumin-binder conjugate |
| CN113999862A (zh) * | 2020-07-28 | 2022-02-01 | 四川大学 | 一种谷氨酰胺转氨酶的异源表达及其应用 |
| WO2022264963A1 (ja) * | 2021-06-14 | 2022-12-22 | 天野エンザイム株式会社 | トランスグルタミナーゼを含む酵素剤及びその用途 |
-
2001
- 2001-12-17 JP JP2001383649A patent/JP2003199569A/ja active Pending
Cited By (43)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2842576A1 (en) | 2004-01-21 | 2015-03-04 | Novo Nordisk Health Care AG | Transglutaminase mediated conjugation of peptides |
| EP2368579A1 (en) | 2004-01-21 | 2011-09-28 | Novo Nordisk Health Care AG | Transglutaminase mediated conjugation of peptides |
| EP2033662A1 (en) | 2004-01-21 | 2009-03-11 | Novo Nordisk Health Care AG | Transglutaminase mediated conjugation of peptides |
| US8865868B2 (en) | 2008-08-06 | 2014-10-21 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Conjugated proteins with prolonged in vivo efficacy |
| US8513192B2 (en) | 2009-01-22 | 2013-08-20 | Novo Nordisk A/S | Stable growth hormone compounds resistant to proteolytic degradation |
| WO2010102886A1 (en) | 2009-02-19 | 2010-09-16 | Novo Nordisk A/S | Modification of factor viii |
| WO2011015649A1 (en) | 2009-08-06 | 2011-02-10 | Novo Nordisk Health Care Ag | Growth hormones with prolonged in-vivo efficacy |
| US8841249B2 (en) | 2009-08-06 | 2014-09-23 | Novo Nordisk A/S | Growth hormones with prolonged in-vivo efficacy |
| WO2011089255A1 (en) | 2010-01-22 | 2011-07-28 | Novo Nordisk Health Care Ag | Growth hormones with prolonged in-vivo efficacy |
| US8779109B2 (en) | 2010-01-22 | 2014-07-15 | Novo Nordisk Health Care Ag | Growth hormones with prolonged in-vivo efficacy |
| US9211342B2 (en) | 2010-01-22 | 2015-12-15 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Stable growth hormone compounds resistant to proteolytic degradation |
| US9695226B2 (en) | 2010-01-22 | 2017-07-04 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Growth hormones with prolonged in-vivo efficacy |
| WO2011145126A2 (en) | 2010-05-19 | 2011-11-24 | Università Degli Studi Di Padova | A method for the preparation of conjugates based on transglutaminase |
| WO2013092998A1 (en) | 2011-12-23 | 2013-06-27 | Innate Pharma | Enzymatic conjugation of antibodies |
| US10675359B2 (en) | 2011-12-23 | 2020-06-09 | Innate Pharma | Enzymatic conjugation of antibodies |
| WO2013092983A2 (en) | 2011-12-23 | 2013-06-27 | Innate Pharma | Enzymatic conjugation of polypeptides |
| US9717803B2 (en) | 2011-12-23 | 2017-08-01 | Innate Pharma | Enzymatic conjugation of polypeptides |
| US9764038B2 (en) | 2011-12-23 | 2017-09-19 | Innate Pharma | Enzymatic conjugation of antibodies |
| US10132799B2 (en) | 2012-07-13 | 2018-11-20 | Innate Pharma | Screening of conjugated antibodies |
| EP3564259A2 (en) | 2012-11-09 | 2019-11-06 | Innate Pharma | Recognition tags for tgase-mediated conjugation |
| US10036010B2 (en) | 2012-11-09 | 2018-07-31 | Innate Pharma | Recognition tags for TGase-mediated conjugation |
| WO2014140300A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Innate Pharma | Solid phase tgase-mediated conjugation of antibodies |
| US10611824B2 (en) | 2013-03-15 | 2020-04-07 | Innate Pharma | Solid phase TGase-mediated conjugation of antibodies |
| US11045523B2 (en) | 2013-04-05 | 2021-06-29 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Formulation of growth hormone albumin-binder conjugate |
| US10071169B2 (en) | 2013-06-20 | 2018-09-11 | Innate Pharma | Enzymatic conjugation of polypeptides |
| US9427478B2 (en) | 2013-06-21 | 2016-08-30 | Innate Pharma | Enzymatic conjugation of polypeptides |
| US10434180B2 (en) | 2013-06-21 | 2019-10-08 | Innate Pharma | Enzymatic conjugation of polypeptides |
| US10975120B2 (en) | 2013-07-11 | 2021-04-13 | Novartis Ag | Site-specific chemoenzymatic protein modifications |
| EP3613755A1 (en) | 2013-07-11 | 2020-02-26 | Novartis AG | Lysine-specific chemoenzymatic protein modifications using microbial transglutaminase |
| WO2015006728A2 (en) | 2013-07-11 | 2015-01-15 | Usera Aimee | Site-specific chemoenzymatic protein modifications |
| US9359400B2 (en) | 2013-07-11 | 2016-06-07 | Novartis Ag | Site-specific chemoenzymatic protein modifications |
| JP2017519045A (ja) * | 2014-06-12 | 2017-07-13 | シー・エス・ピー・シー ドフェン コーポレーションＣｓｐｃ Ｄｏｐｈｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ | 酵素的方法による均一抗体薬物コンジュゲート |
| US10471037B2 (en) | 2014-06-12 | 2019-11-12 | Cspc Dophen Corporation | Homogenous antibody drug conjugates via enzymatic methods |
| US10639291B2 (en) | 2014-06-12 | 2020-05-05 | Cspc Dophen Corporation | Homogenous antibody drug conjugates via enzymatic methods |
| US10357472B2 (en) | 2014-06-12 | 2019-07-23 | Cspc Dophen Corporation | Homogenous antibody drug conjugates via enzymatic methods |
| WO2015191883A1 (en) | 2014-06-12 | 2015-12-17 | Dophen Biomedical | Homogenous antibody drug conjugates via enzymatic methods |
| US11285128B2 (en) | 2014-06-12 | 2022-03-29 | CSPC Megalith Biopharmaceutical Co., Ltd. | Homogenous antibody drug conjugates via enzymatic methods |
| EP4082564A1 (en) | 2014-06-12 | 2022-11-02 | CSPC Megalith Biopharmaceutical Co., Ltd. | Homogenous antibody drug conjugates via enzymatic methods |
| WO2019092148A1 (en) | 2017-11-10 | 2019-05-16 | Innate Pharma | Antibodies with functionalized glutamine residues |
| WO2020257525A1 (en) | 2019-06-20 | 2020-12-24 | Cspc Dophen Corporation | Modified il-2 proteins, peg conjugates, and uses thereof |
| CN113999862A (zh) * | 2020-07-28 | 2022-02-01 | 四川大学 | 一种谷氨酰胺转氨酶的异源表达及其应用 |
| WO2022264963A1 (ja) * | 2021-06-14 | 2022-12-22 | 天野エンザイム株式会社 | トランスグルタミナーゼを含む酵素剤及びその用途 |
| JPWO2022264963A1 (ja) * | 2021-06-14 | 2022-12-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2003199569A (ja) | ストレプトベルティシリウム・ラダカヌムのトランスグルタミナーゼ遺伝子及び該遺伝子によってコードされるトランスグルタミナーゼ | |
| JP6569662B2 (ja) | 新規タンパク質脱アミド酵素 | |
| JP2022025068A (ja) | メチロトローフ酵母の遺伝子操作の発現構築物および方法 | |
| EP1084257B1 (en) | A STRAIN E.COLI JM83/pKP2 TRANSFORMED WITH A NOVEL PLASMID AND PHYTASE PRODUCED THEREFROM | |
| US6660510B2 (en) | Transglutaminase gene of Streptoverticillium ladakanum and the transglutaminase encoded therefrom | |
| Engel et al. | Murein-metabolizing enzymes from Escherichia coli: existence of a second lytic transglycosylase | |
| JP2002513283A (ja) | 組換え分子の発現に有用なｒｎａ結合タンパク質及び結合部位 | |
| CN108841851B (zh) | 一种利用食源安全性宿主表达谷氨酰胺转氨酶的方法 | |
| US5712147A (en) | DNA encoding Bacillus licheniformis PWD-1 keratinase | |
| JP3087575B2 (ja) | ヘプタプレニル二リン酸合成酵素およびそれをコードするｄｎａ | |
| JP3364972B2 (ja) | 魚由来トランスグルタミナーゼ遺伝子 | |
| JP3549210B2 (ja) | プラスミド | |
| JP2020522999A (ja) | グルコースオキシダーゼＣｎＧＯＤＡ及びその遺伝子ならびに使用 | |
| JP2003284553A (ja) | 生理活性タンパク質 | |
| CN100351379C (zh) | 拉达卡链轮丝菌的转谷氨酰胺酶基因及其编码的转谷氨酰胺酶 | |
| JP4191479B2 (ja) | エビのアルカリホスファターゼ | |
| ES2257853T3 (es) | Construcciones para la expresion controlada de genes recombinantes en celulas procariotas. | |
| WO2021256518A1 (ja) | 新規トランスグルタミナーゼ | |
| CN118994326B (zh) | 虾白斑综合征病毒vp28重组蛋白及其制备方法与应用 | |
| US6534286B1 (en) | Protein production in Aureobasidium pullulans | |
| JPH06292584A (ja) | 変異型ピルビン酸脱水素酵素複合体のｅ１蛋白質 遺伝子及び変異型ピルビン酸脱水素酵素複合体のｅ１蛋白質 | |
| US20240352091A1 (en) | Animal free- alpha-lactalbumin and beta-lactoglobulin fusion milk proteins and a process for preparing the same | |
| JP3477746B2 (ja) | 魚由来トランスグルタミナーゼ遺伝子 | |
| CN101175859B (zh) | 蛋白质的生产方法 | |
| JP2003250586A (ja) | 新規タンパク質分解酵素 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20050208 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20050509 |
|
| A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20050512 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20051011 |