JP2003235569A - ラクトバチルス属微生物および飼料添加物 - Google Patents
ラクトバチルス属微生物および飼料添加物Info
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【課題】 馬の胃粘膜上皮細胞に対する良好な付着性お
よび定着性、下痢の発生予防効果、早期腸内フローラ形
成促進効果、および各種抗生物質耐性を有するラクトバ
チルス（Lactobacillus）属に属する微生物、およびそ
の微生物を含有する飼料添加物の提供。 【解決手段】１６ｓｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列を相同性
９７％以上で含み、且つその他の細菌分類学的手法によ
りラクトバチルスイクイ（Lactobacillus equi）と同定
されるラクトバチルス（Lactobacillus）属に属する微
生物。
よび定着性、下痢の発生予防効果、早期腸内フローラ形
成促進効果、および各種抗生物質耐性を有するラクトバ
チルス（Lactobacillus）属に属する微生物、およびそ
の微生物を含有する飼料添加物の提供。 【解決手段】１６ｓｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列を相同性
９７％以上で含み、且つその他の細菌分類学的手法によ
りラクトバチルスイクイ（Lactobacillus equi）と同定
されるラクトバチルス（Lactobacillus）属に属する微
生物。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ラクトバチルス
（Lactobacillus）属に属する新規微生物およびその微
生物を含有する飼料添加物に関するものである。
（Lactobacillus）属に属する新規微生物およびその微
生物を含有する飼料添加物に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】近年、多くの家畜動物、例えば馬に対し
て生菌を添加した飼料が使用されており、病気の予防や
治療、発育を促進するなど各種有用なものとして知られ
ている。例えば、軽種馬生産現場における馬飼育管理の
問題の一つには、種々のストレス状態から誘発される下
痢等の身体症状が挙げられる。馬は豚や牛に比べてもと
もと腸内細菌が少ない動物（例えば豚１×１０１０個に
対して馬は１×１０８個の比率）であり、そのうえ環境
変化により極端に減少するので、腸内細菌の生態系を構
成する腸内フローラが障害を受け、バランスを崩すこと
により下痢症などが起こる。このような症状は、消化吸
収能力の低下、成長および免疫力の低下といった生理学
的機能に悪影響を及ぼすことから軽種馬生産現場に与え
る経済的損耗は大きい。このような症状を改善するため
に生菌、中でも乳酸菌を添加した飼料が使用されてい
る。しかし、従来の生菌（中でも乳酸菌）を添加した飼
料は、馬の有用腸内フローラの形成促進には働かず症状
の改善に至らないこともあり、効果を示すには早期に安
定した腸内フローラを形成させることが望まれる。
て生菌を添加した飼料が使用されており、病気の予防や
治療、発育を促進するなど各種有用なものとして知られ
ている。例えば、軽種馬生産現場における馬飼育管理の
問題の一つには、種々のストレス状態から誘発される下
痢等の身体症状が挙げられる。馬は豚や牛に比べてもと
もと腸内細菌が少ない動物（例えば豚１×１０１０個に
対して馬は１×１０８個の比率）であり、そのうえ環境
変化により極端に減少するので、腸内細菌の生態系を構
成する腸内フローラが障害を受け、バランスを崩すこと
により下痢症などが起こる。このような症状は、消化吸
収能力の低下、成長および免疫力の低下といった生理学
的機能に悪影響を及ぼすことから軽種馬生産現場に与え
る経済的損耗は大きい。このような症状を改善するため
に生菌、中でも乳酸菌を添加した飼料が使用されてい
る。しかし、従来の生菌（中でも乳酸菌）を添加した飼
料は、馬の有用腸内フローラの形成促進には働かず症状
の改善に至らないこともあり、効果を示すには早期に安
定した腸内フローラを形成させることが望まれる。
【０００３】また、本発明者らは、以前馬の胃粘膜上皮
細胞には乳酸桿菌が層を成して付着して住み着いてお
り、また、胃潰瘍の部分ではこれらの乳酸桿菌の層が消
失し、かわってグラム陽性球菌が感染巣を形成している
ことを見出している（Appl. Environ. Microbiol.,６
６：５０３０−５０３４、２０００）。これらのことか
ら乳酸桿菌の胃粘膜上皮細胞に対する付着性は、胃潰瘍
発生に対して防御的に働いていることが示唆された。し
かし、従来馬に投与される乳酸桿菌は、宿主である馬の
胃粘膜上皮細胞への付着性やその定着性が低く、投与直
後に流出してしまう問題が生じており、また投与した乳
酸桿菌の宿主特異性が明らかにされたものではない。ま
た、そのような乳酸菌類が子馬の飼育時の疾病予防、伝
染予防に必要な各種抗生物質に対しての感受性、耐性が
十分であるとはいえないものである。
細胞には乳酸桿菌が層を成して付着して住み着いてお
り、また、胃潰瘍の部分ではこれらの乳酸桿菌の層が消
失し、かわってグラム陽性球菌が感染巣を形成している
ことを見出している（Appl. Environ. Microbiol.,６
６：５０３０−５０３４、２０００）。これらのことか
ら乳酸桿菌の胃粘膜上皮細胞に対する付着性は、胃潰瘍
発生に対して防御的に働いていることが示唆された。し
かし、従来馬に投与される乳酸桿菌は、宿主である馬の
胃粘膜上皮細胞への付着性やその定着性が低く、投与直
後に流出してしまう問題が生じており、また投与した乳
酸桿菌の宿主特異性が明らかにされたものではない。ま
た、そのような乳酸菌類が子馬の飼育時の疾病予防、伝
染予防に必要な各種抗生物質に対しての感受性、耐性が
十分であるとはいえないものである。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の目的
は、例えば馬の胃粘膜上皮細胞に対する良好な付着性お
よび定着性、下痢の発生予防効果、早期腸内フローラ形
成促進効果、および各種抗生物質耐性を有するラクトバ
チルス（Lactobacillus）属に属する微生物、およびそ
の微生物を含有する飼料添加物を提供することにある。
は、例えば馬の胃粘膜上皮細胞に対する良好な付着性お
よび定着性、下痢の発生予防効果、早期腸内フローラ形
成促進効果、および各種抗生物質耐性を有するラクトバ
チルス（Lactobacillus）属に属する微生物、およびそ
の微生物を含有する飼料添加物を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、馬の腸内
に常在する乳酸桿菌の分布、構成を調べる過程で、優勢
菌種として広く分布する一群の未同定菌株を分離し、鋭
意探索した結果、ラクトバチルス属に属する微生物の中
に、馬の胃粘膜上皮細胞に対して良好に付着し、下痢の
発生予防効果があり、早期腸内フローラ形成促進効果に
有効な新規微生物が存在することを見出し、上記目的を
達成することができた。
に常在する乳酸桿菌の分布、構成を調べる過程で、優勢
菌種として広く分布する一群の未同定菌株を分離し、鋭
意探索した結果、ラクトバチルス属に属する微生物の中
に、馬の胃粘膜上皮細胞に対して良好に付着し、下痢の
発生予防効果があり、早期腸内フローラ形成促進効果に
有効な新規微生物が存在することを見出し、上記目的を
達成することができた。
【０００６】すなわち本発明は、配列表の配列番号１に
示す１６ｓｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列を相同性９７％以
上で含み、且つ以下の（イ）および（ロ）の化学分類学
的性質を有するラクトバチルス（Lactobacillus）属に
属する微生物を提供するものである： （イ）ＧＣ含量が３８〜４０ｍｏｌ％、（ロ）近縁菌種
の基準株とのＤＮＡ−ＤＮＡハイブリダイゼーションに
より同定されない。
示す１６ｓｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列を相同性９７％以
上で含み、且つ以下の（イ）および（ロ）の化学分類学
的性質を有するラクトバチルス（Lactobacillus）属に
属する微生物を提供するものである： （イ）ＧＣ含量が３８〜４０ｍｏｌ％、（ロ）近縁菌種
の基準株とのＤＮＡ−ＤＮＡハイブリダイゼーションに
より同定されない。
【０００７】また本発明は、前記微生物が、ラクトバチ
ルス イクイ（Lactobacillus equi）ＹＩＴ ０４８３株
（寄託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１８６７７号）である前記の
微生物を提供するものである。
ルス イクイ（Lactobacillus equi）ＹＩＴ ０４８３株
（寄託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１８６７７号）である前記の
微生物を提供するものである。
【０００８】また本発明は、前記の微生物の培養物およ
び／または該微生物菌体を有効成分として含有すること
を特徴とする飼料添加物を提供するものである。
び／または該微生物菌体を有効成分として含有すること
を特徴とする飼料添加物を提供するものである。
【０００９】
【発明の実施の形態】本発明の微生物の分離：本発明の
微生物は、例えば以下に示すスクリーニング法により純
粋分離することができる。健康馬の新鮮糞便を採取し、
直ちにAnaeroPack（三菱ガス化学社製）を用いて嫌気条
件とし、低温下（０〜４℃）で実験室に移送する。新鮮
糞便をグローブボックス内で希釈液（組成：０．０２２
５％リン酸水素二カリウム、０．０４５％塩化ナトリウ
ム、０．０２２５％硫酸アンモニウム、０．００２３％
塩化カルシウム、０．００２３％硫酸マグネシウム、
０．０２２５％リン酸水素カリウム、０．０００１％レ
サズリン、０．３％炭酸ナトリウム、０．０５％システ
イン塩酸塩）を加えて均一化した後、さらに適宜希釈
し、その一部をＬＢＳ寒天培地（組成：１％カゼイン水
解物、０．５％イーストエキストラクト、０．６％リン
酸カリウム、０．２％クエン酸アンモニウム、２％デキ
ストロース、０．１％ポリソルベート８０、２．５％酢
酸ナトリウム、０．０５７５％硫酸マグネシウム、０．
０１２％硫酸マンガン、０．００３４％硫酸鉄、１．５
％寒天；ｐＨ５．５（Becton Dickinson社製））に１０
０μｌ接種し、嫌気条件下で３７℃、３日間塗抹培養す
る。生育したコロニーから釣菌し、ＭＲＳ寒天培地（組
成：１％バクトプロテオーゼペプトン Ｎｏ．３、１％
バクトビーフエキストラクト、０．５％バクトイースト
エキストラクト、２％バクトデキストロース、０．１％
ポリソルベート８０、０．２％クエン酸アンモニウム、
０．５％酢酸ナトリウム、０．０１％硫酸マンガン、
０．００５％硫酸マグネシウム、０．２％リン酸水素二
カリウム、１．５％寒天；ｐＨ６．８（Difco社製））
に塗抹培養（嫌気条件下で３７℃、３日間）を２〜３回
繰返して、純粋培養を行うことができる。このようにし
て純粋培養した本発明の微生物を以下に述べるような方
法で同定する。
微生物は、例えば以下に示すスクリーニング法により純
粋分離することができる。健康馬の新鮮糞便を採取し、
直ちにAnaeroPack（三菱ガス化学社製）を用いて嫌気条
件とし、低温下（０〜４℃）で実験室に移送する。新鮮
糞便をグローブボックス内で希釈液（組成：０．０２２
５％リン酸水素二カリウム、０．０４５％塩化ナトリウ
ム、０．０２２５％硫酸アンモニウム、０．００２３％
塩化カルシウム、０．００２３％硫酸マグネシウム、
０．０２２５％リン酸水素カリウム、０．０００１％レ
サズリン、０．３％炭酸ナトリウム、０．０５％システ
イン塩酸塩）を加えて均一化した後、さらに適宜希釈
し、その一部をＬＢＳ寒天培地（組成：１％カゼイン水
解物、０．５％イーストエキストラクト、０．６％リン
酸カリウム、０．２％クエン酸アンモニウム、２％デキ
ストロース、０．１％ポリソルベート８０、２．５％酢
酸ナトリウム、０．０５７５％硫酸マグネシウム、０．
０１２％硫酸マンガン、０．００３４％硫酸鉄、１．５
％寒天；ｐＨ５．５（Becton Dickinson社製））に１０
０μｌ接種し、嫌気条件下で３７℃、３日間塗抹培養す
る。生育したコロニーから釣菌し、ＭＲＳ寒天培地（組
成：１％バクトプロテオーゼペプトン Ｎｏ．３、１％
バクトビーフエキストラクト、０．５％バクトイースト
エキストラクト、２％バクトデキストロース、０．１％
ポリソルベート８０、０．２％クエン酸アンモニウム、
０．５％酢酸ナトリウム、０．０１％硫酸マンガン、
０．００５％硫酸マグネシウム、０．２％リン酸水素二
カリウム、１．５％寒天；ｐＨ６．８（Difco社製））
に塗抹培養（嫌気条件下で３７℃、３日間）を２〜３回
繰返して、純粋培養を行うことができる。このようにし
て純粋培養した本発明の微生物を以下に述べるような方
法で同定する。
【００１０】本発明の微生物の分類学的性質：本発明の
微生物の（ａ）形態的性質、（ｂ）培養的性質、（ｃ）
生理学的性質および（ｄ）化学分類学的性質について以
下に示す。（ａ）形態的性質 （１）細菌の形：桿状 （２）細菌の大きさ：０．６〜０．８×１．３〜３．５
μｍ （３）細菌の多形性：無 （４）運動性：無 （５）胞子：無
微生物の（ａ）形態的性質、（ｂ）培養的性質、（ｃ）
生理学的性質および（ｄ）化学分類学的性質について以
下に示す。（ａ）形態的性質 （１）細菌の形：桿状 （２）細菌の大きさ：０．６〜０．８×１．３〜３．５
μｍ （３）細菌の多形性：無 （４）運動性：無 （５）胞子：無
【００１１】（ｂ）培養的性質（生育状態）
（１）ＭＲＳ寒天平板培養：３７℃、２日間培養によっ
て、直径２ｍｍ程度の白色、スムースコロニーを生じ
る。 （２）ＭＲＳ液体培養：３７℃、２４時間の培養によっ
て、良好な発育が見られ、静置しておくと沈殿を生じ
る。
て、直径２ｍｍ程度の白色、スムースコロニーを生じ
る。 （２）ＭＲＳ液体培養：３７℃、２４時間の培養によっ
て、良好な発育が見られ、静置しておくと沈殿を生じ
る。
【００１２】図１は、本発明の微生物をＭＲＳ寒天培地
で３７℃、２日間培養した時の生育状態を示した図であ
る。
で３７℃、２日間培養した時の生育状態を示した図であ
る。
【００１３】（ｃ）生理学的性質
（１）グラム染色性：陽性
（２）硝酸塩の還元：陰性
（３）インドールの生成：陰性
（４）硫化水素の生成：陰性
（５）デンプンの加水分解：陰性
（６）色素の生成：陰性
（７）カタラーゼ反応：陰性
（８）酸素に対する態度：通性嫌気性
（９）乳酸発酵：ホモ型
（１０）グルコースからＤＬ乳酸の生成：陽性
（１１）糖類から酸およびガスの生成の有無
酸生成有り：ガラクトース、グルコース、フルクトー
ス、マンニトール、マルトース、ラクトース、メリビオ
ース、シュクロース、ラフィノース。 酸生成無し：グリセロール、エリスリトール、Ｄ−アラ
ビノース、Ｌ−キシロース、アドニトール、ｂ−メチル
Ｄ−キシロシド、ソルボース、ドルシトール、イノシト
ール、ａ−メチルＤ−マンノシド、ａ−メチルＤ−グル
コシド、アミグダリン、セロビオース、トレハロース、
メレジトース、スターチ、グリコーゲン、キシリトー
ル、ゲンチオビオース、Ｄ−リキソース、Ｄ−タガトー
ス、Ｄ−フコース、Ｌ−フコース、Ｄ−アラビトール、
Ｌ−アラビトール、グルコネート、２−ケト−グルコネ
ート、５−ケト−グルコネート。 以上の糖発酵性状は、ＡＰＩ ５０ ＣＨ system（BioMe
rieux）を用いた。
ス、マンニトール、マルトース、ラクトース、メリビオ
ース、シュクロース、ラフィノース。 酸生成無し：グリセロール、エリスリトール、Ｄ−アラ
ビノース、Ｌ−キシロース、アドニトール、ｂ−メチル
Ｄ−キシロシド、ソルボース、ドルシトール、イノシト
ール、ａ−メチルＤ−マンノシド、ａ−メチルＤ−グル
コシド、アミグダリン、セロビオース、トレハロース、
メレジトース、スターチ、グリコーゲン、キシリトー
ル、ゲンチオビオース、Ｄ−リキソース、Ｄ−タガトー
ス、Ｄ−フコース、Ｌ−フコース、Ｄ−アラビトール、
Ｌ−アラビトール、グルコネート、２−ケト−グルコネ
ート、５−ケト−グルコネート。 以上の糖発酵性状は、ＡＰＩ ５０ ＣＨ system（BioMe
rieux）を用いた。
【００１４】（ｄ）化学分類学的性質
（ＧＣ含量の測定およびＤＮＡ−ＤＮＡハイブリダイゼ
ーション） 本発明の微生物のＧＣ含量の測定、および本発明の微生
物と近縁菌種の基準株とのＤＮＡ−ＤＮＡハイブリダイ
ゼーションは、以下の方法に従って行うことができる。
ＧＣ含量の測定方法は、常法の高速液体クロマトグラフ
ィーを用いた Ezakiらの方法（文献名：FEMS Microbiol
Lett ５５，１２７−１３０、１９９０）により行うこ
とができる。測定されたＧＣ含量は、３８〜４０ｍｏｌ
％である。ＤＮＡ−ＤＮＡハイブリダイゼーションは、
常法の蛍光標識マイクロプレート法（Int J Syst Bacte
riol ３９，２２４−２２９、１９８９）により行うこ
とができる。以下の２０株の近縁菌種の基準株（全てラ
クトバチルス（Lactobacillus）属）を、本発明の微生
物と比較するのに使用できる。
ーション） 本発明の微生物のＧＣ含量の測定、および本発明の微生
物と近縁菌種の基準株とのＤＮＡ−ＤＮＡハイブリダイ
ゼーションは、以下の方法に従って行うことができる。
ＧＣ含量の測定方法は、常法の高速液体クロマトグラフ
ィーを用いた Ezakiらの方法（文献名：FEMS Microbiol
Lett ５５，１２７−１３０、１９９０）により行うこ
とができる。測定されたＧＣ含量は、３８〜４０ｍｏｌ
％である。ＤＮＡ−ＤＮＡハイブリダイゼーションは、
常法の蛍光標識マイクロプレート法（Int J Syst Bacte
riol ３９，２２４−２２９、１９８９）により行うこ
とができる。以下の２０株の近縁菌種の基準株（全てラ
クトバチルス（Lactobacillus）属）を、本発明の微生
物と比較するのに使用できる。
【００１５】L. acidophilus YIT 0070 (ATCC 4356T)、
L. agilis YIT 0253 (JCM 1187T)、 L. amylovorus YI
T 0211 (JCM 1126T)、 L. animalis YIT 0256 (JCM 567
0T)、 L. brevis YIT 0076 (ATCC 14869T)、 L. buchne
ri YIT 0077 (ATCC 4005T)、 L. casei YIT 0180 (ATCC
334T)、 L. coryniformis subsp. coryniformis YIT 0
237 (JCM 1164T)、 L. crispatus YIT 0212 (JCM 118
5T)、 L. fermentum YIT 0081 (ATCC 14931T)、 L. gas
seri YIT 0192 (DSM 20243T)、 L. graminis YIT 0260
(NRIC 1775T)、 L. johnsonii YIT 0219 (JCM 2012T)、
L. murinus YIT 0239 (JCM 1717T)、 L. plantarum YI
T 0102 (ATCC 14917T)、 L. reuteri YIT 0197 (JCM 11
12T)、 L. rhamnosus YIT 0105 (ATCC 7469T)、 L. rum
inis YIT0221 (JCM 1152T)、 L. salivarius subsp. sa
licinius YIT 0089 (ATCC 11742 T)および L. salivariu
s subsp. salivarius YIT 0104 (ATCC 11741T)。
L. agilis YIT 0253 (JCM 1187T)、 L. amylovorus YI
T 0211 (JCM 1126T)、 L. animalis YIT 0256 (JCM 567
0T)、 L. brevis YIT 0076 (ATCC 14869T)、 L. buchne
ri YIT 0077 (ATCC 4005T)、 L. casei YIT 0180 (ATCC
334T)、 L. coryniformis subsp. coryniformis YIT 0
237 (JCM 1164T)、 L. crispatus YIT 0212 (JCM 118
5T)、 L. fermentum YIT 0081 (ATCC 14931T)、 L. gas
seri YIT 0192 (DSM 20243T)、 L. graminis YIT 0260
(NRIC 1775T)、 L. johnsonii YIT 0219 (JCM 2012T)、
L. murinus YIT 0239 (JCM 1717T)、 L. plantarum YI
T 0102 (ATCC 14917T)、 L. reuteri YIT 0197 (JCM 11
12T)、 L. rhamnosus YIT 0105 (ATCC 7469T)、 L. rum
inis YIT0221 (JCM 1152T)、 L. salivarius subsp. sa
licinius YIT 0089 (ATCC 11742 T)および L. salivariu
s subsp. salivarius YIT 0104 (ATCC 11741T)。
【００１６】本発明の微生物は、上記近縁菌種の基準株
とのＤＮＡ−ＤＮＡハイブリダイゼーションで同定され
ないことから、さらに、常法によりの本発明の微生物の
１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列決定を行う。
とのＤＮＡ−ＤＮＡハイブリダイゼーションで同定され
ないことから、さらに、常法によりの本発明の微生物の
１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列決定を行う。
【００１７】（１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列決定）
本発明の微生物は、ＰＣＲによる遺伝子の増幅および１
６ＳｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列決定を、常法（Microbio
l Immunol ４２，６６１−６６７、１９９８）に従って
行うことができる。決定した本発明の微生物の１６Ｓｒ
ＲＮＡ遺伝子の塩基配列を配列表の塩基配列１に示す。
塩基配列１に対し相同性９７％以上であれば、本発明の
微生物と考えられる。
本発明の微生物は、ＰＣＲによる遺伝子の増幅および１
６ＳｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列決定を、常法（Microbio
l Immunol ４２，６６１−６６７、１９９８）に従って
行うことができる。決定した本発明の微生物の１６Ｓｒ
ＲＮＡ遺伝子の塩基配列を配列表の塩基配列１に示す。
塩基配列１に対し相同性９７％以上であれば、本発明の
微生物と考えられる。
【００１８】（系統解析）本発明の微生物の１６ＳｒＲ
ＮＡ遺伝子の塩基配列は、DNA Data Bank of Japanから
得た既知の近縁菌（ラクトバチルス属微生物）の塩基配
列情報を用いて、解析ソフトCLUSTAL W（Thompson et a
l., 1994）で系統解析し、本発明の微生物と近縁菌との
相同性を調べた。
ＮＡ遺伝子の塩基配列は、DNA Data Bank of Japanから
得た既知の近縁菌（ラクトバチルス属微生物）の塩基配
列情報を用いて、解析ソフトCLUSTAL W（Thompson et a
l., 1994）で系統解析し、本発明の微生物と近縁菌との
相同性を調べた。
【００１９】（近縁菌との相同性）
L. cypricasei CCUG 42961：９１．７％
L. salivarius-salicinius DSM 20554：９３．８％
L. aviarius DSM 20655：９１．４％
L. ruminis DSM 20403：９３．４％
L. agilis DSM 20509：９４．７％
L. mali DSM 20444：９２．１％
L. animalis DSM 20602：９０．７％
L. murinus DSM 20452：９０．１％
さらに、上記相同性の結果に基づいて系統樹を作成し
た。図２は、既知のラクトバチルス属微生物と本発明の
微生物との関係を示した系統樹の図である。図中の分岐
点に示された数値は、ブートストラップ信頼値である。
た。図２は、既知のラクトバチルス属微生物と本発明の
微生物との関係を示した系統樹の図である。図中の分岐
点に示された数値は、ブートストラップ信頼値である。
【００２０】以上の分類学的性質により、本発明の微生
物は、いままでに報告されていない新規な乳酸桿菌であ
ると判断され、ラクトバチルス イクイ（Lactobacillus
equi）と命名した。また、ラクトバチルス イクイ（La
ctobacillus equi） ＹＩＴ０４８３株を独立行政法人
産業技術総合研究所に、微生物寄託番号「ＦＥＲＭＰ−
１８６７７号」として寄託した。
物は、いままでに報告されていない新規な乳酸桿菌であ
ると判断され、ラクトバチルス イクイ（Lactobacillus
equi）と命名した。また、ラクトバチルス イクイ（La
ctobacillus equi） ＹＩＴ０４８３株を独立行政法人
産業技術総合研究所に、微生物寄託番号「ＦＥＲＭＰ−
１８６７７号」として寄託した。
【００２１】本発明の微生物の調製方法は特に限定され
ず、常法により行えばよい。例えば、ラクトバチルス属
微生物の増殖可能なＭＲＳ broth（Difco Laboratories
社製）、ＧＡＭ broth（日水社製）培地に接種し、３７
℃で１〜２日間培養して得られる。その後、遠心分離等
の手段を用いて、菌体を回収すればよいが、培養液をそ
のまま使用してもよい。
ず、常法により行えばよい。例えば、ラクトバチルス属
微生物の増殖可能なＭＲＳ broth（Difco Laboratories
社製）、ＧＡＭ broth（日水社製）培地に接種し、３７
℃で１〜２日間培養して得られる。その後、遠心分離等
の手段を用いて、菌体を回収すればよいが、培養液をそ
のまま使用してもよい。
【００２２】本発明の微生物は、馬の胃粘膜上皮細胞に
対する良好な付着性および定着性を示すことができる。
本発明の微生物の培養物および／または該微生物菌体
を、定期的に馬に投与することで、胃潰瘍の発生予防に
有用である。微生物の培養物および／または該微生物菌
体をそのまま使用してもよいが、下記に説明する菌体を
含む飼料添加物として使用してもよい。
対する良好な付着性および定着性を示すことができる。
本発明の微生物の培養物および／または該微生物菌体
を、定期的に馬に投与することで、胃潰瘍の発生予防に
有用である。微生物の培養物および／または該微生物菌
体をそのまま使用してもよいが、下記に説明する菌体を
含む飼料添加物として使用してもよい。
【００２３】飼料添加物の製法：本発明は、本発明の微
生物の菌体を飼料添加物として、飼料に添加して使用す
ることができ、特に馬用の飼料添加物とすることが好ま
しい。該菌体を含む飼料添加物は、下痢の発生予防効
果、早期腸内フローラ形成促進効果等の生理効果を与え
るものであり、当該効果は、馬に対し特に顕著である。
生物の菌体を飼料添加物として、飼料に添加して使用す
ることができ、特に馬用の飼料添加物とすることが好ま
しい。該菌体を含む飼料添加物は、下痢の発生予防効
果、早期腸内フローラ形成促進効果等の生理効果を与え
るものであり、当該効果は、馬に対し特に顕著である。
【００２４】飼料添加物の製造には、本発明の微生物を
培養して回収した菌体および／または培養物を使用する
ことができる。前記培養物は、液体培地で培養した菌体
を含む液体培養物であることができる。菌数が多いほど
上記の生理効果を高められるが、菌体の培養管理等の作
業性、コスト面、投与の簡便さ等を考慮すれば、菌体の
投与量は、例えば馬一頭に対し、１日に１×１０１０〜
１×１０１２ｃｆｕ（コロニー形成単位）程度、特に１
×１０１０〜１×１０１１ｃｆｕ程度が好ましい。菌体
は生菌体をそのまま用いてもよく、または凍結乾燥等の
処理を行った保存性の高い菌体を用いてもよく、または
ブドウ糖、ショ糖、乳糖、グルタミン酸、アスコルビン
酸、脱脂乳、卵アルブミン、澱粉、カゼイン、シューク
ロース等の賦形剤と共に用いてもよい。なお、死菌体で
は上記の生理効果が低いため生菌体を用いることが好ま
しい。
培養して回収した菌体および／または培養物を使用する
ことができる。前記培養物は、液体培地で培養した菌体
を含む液体培養物であることができる。菌数が多いほど
上記の生理効果を高められるが、菌体の培養管理等の作
業性、コスト面、投与の簡便さ等を考慮すれば、菌体の
投与量は、例えば馬一頭に対し、１日に１×１０１０〜
１×１０１２ｃｆｕ（コロニー形成単位）程度、特に１
×１０１０〜１×１０１１ｃｆｕ程度が好ましい。菌体
は生菌体をそのまま用いてもよく、または凍結乾燥等の
処理を行った保存性の高い菌体を用いてもよく、または
ブドウ糖、ショ糖、乳糖、グルタミン酸、アスコルビン
酸、脱脂乳、卵アルブミン、澱粉、カゼイン、シューク
ロース等の賦形剤と共に用いてもよい。なお、死菌体で
は上記の生理効果が低いため生菌体を用いることが好ま
しい。
【００２５】本発明の飼料添加物は、これを単独で経口
投与してもよいが、各種糖質、タンパク質、脂質、繊維
質、ビタミン類、ミネラル類等と共に、散剤もしくはペ
レット状の飼料形態として用いれば、上記のような効果
が得られやすく好ましい。特に、脂質、繊維質を含有す
る飼料と共に用いれば、飼料効率を向上させ、軽種馬経
営状好ましい。このとき、用いる脂質や繊維質の種類
は、特に限定されず、大豆粕、アルファルファミール、
ふすま等の馬用飼料として使用可能なものであればいず
れを用いてもよい。また、飼料の製造は、常法により行
えばよく、具体的には製造時定量となるように混合すれ
ばよい。
投与してもよいが、各種糖質、タンパク質、脂質、繊維
質、ビタミン類、ミネラル類等と共に、散剤もしくはペ
レット状の飼料形態として用いれば、上記のような効果
が得られやすく好ましい。特に、脂質、繊維質を含有す
る飼料と共に用いれば、飼料効率を向上させ、軽種馬経
営状好ましい。このとき、用いる脂質や繊維質の種類
は、特に限定されず、大豆粕、アルファルファミール、
ふすま等の馬用飼料として使用可能なものであればいず
れを用いてもよい。また、飼料の製造は、常法により行
えばよく、具体的には製造時定量となるように混合すれ
ばよい。
【００２６】
【実施例】以下、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に
説明するが、本発明はこれらに限定されるものではな
い。
説明するが、本発明はこれらに限定されるものではな
い。
【００２７】［実施例１］
（生菌体製法）ＭＲＳ培地（Difco Laboratories社製）
５Ｌを１０Ｌ容フラスコに入れ、ｐＨを６．８に調整し
て高圧加熱滅菌し、ラクトバチルス イクイ ＹＩＴ ０
４８３株を１０７個植菌し、３７℃、２４時間静置培養
して培養液を得た。この培養液を１，５００×Ｇで遠心
分離し、集菌して得られた菌体は５ｇ／Ｌであった。
５Ｌを１０Ｌ容フラスコに入れ、ｐＨを６．８に調整し
て高圧加熱滅菌し、ラクトバチルス イクイ ＹＩＴ ０
４８３株を１０７個植菌し、３７℃、２４時間静置培養
して培養液を得た。この培養液を１，５００×Ｇで遠心
分離し、集菌して得られた菌体は５ｇ／Ｌであった。
【００２８】［実施例２］
（馬の胃粘膜上皮細胞に対する菌の付着性試験）実施例
１で得られた培養液を１，５００×Ｇで遠心分離し、菌
体を回収し、緩衝液（組成：０．８％ＮａＣｌ；０．１
２１％Ｋ２ＨＰＯ４；０．０３４％ＫＨ ２ＰＯ４；ｐＨ
７．２）で洗浄した菌体（菌数約３×１０８個／ｍｌ）
と、出生直後に死亡した新生仔馬から採取した無菌の非
腺胃部組織片（大きさ：１ｃｍ×１ｃｍ）とを試験管の
中で混合し、３７℃、３０分間培養した後、非腺胃部組
織片を緩衝液で洗浄した。次いで、該非腺胃部組織片か
ら胃粘膜上皮細胞を掻き取り、ギムザ染色し、顕微鏡下
で一つの胃粘膜上皮細胞に付着した菌数を測定した。ま
た、このような付着性に対する宿主特異性を調べるため
に無菌ラットの非腺胃部組織片を用いて、前記と同様に
一つの胃粘膜上皮細胞に付着した菌数を測定した。ま
た、本菌株の他に６種のラクトバチルス属菌株も同様の
方法で測定した。表１に胃粘膜上皮細胞に対する菌の付
着性を示した。
１で得られた培養液を１，５００×Ｇで遠心分離し、菌
体を回収し、緩衝液（組成：０．８％ＮａＣｌ；０．１
２１％Ｋ２ＨＰＯ４；０．０３４％ＫＨ ２ＰＯ４；ｐＨ
７．２）で洗浄した菌体（菌数約３×１０８個／ｍｌ）
と、出生直後に死亡した新生仔馬から採取した無菌の非
腺胃部組織片（大きさ：１ｃｍ×１ｃｍ）とを試験管の
中で混合し、３７℃、３０分間培養した後、非腺胃部組
織片を緩衝液で洗浄した。次いで、該非腺胃部組織片か
ら胃粘膜上皮細胞を掻き取り、ギムザ染色し、顕微鏡下
で一つの胃粘膜上皮細胞に付着した菌数を測定した。ま
た、このような付着性に対する宿主特異性を調べるため
に無菌ラットの非腺胃部組織片を用いて、前記と同様に
一つの胃粘膜上皮細胞に付着した菌数を測定した。ま
た、本菌株の他に６種のラクトバチルス属菌株も同様の
方法で測定した。表１に胃粘膜上皮細胞に対する菌の付
着性を示した。
【００２９】
【表１】
【００３０】その結果、本菌ラクトバチルス イクイ Ｙ
ＩＴ ０４８３（Ｈ−１１６）株は、馬の胃粘膜上皮細
胞に対する良好な付着性を示した。また本菌（Ｈ−１１
６）株は、ラットの胃粘膜上皮細胞に付着せず、このよ
うな胃粘膜上皮細胞に対する菌の付着性は宿主特異性が
あることが示された。
ＩＴ ０４８３（Ｈ−１１６）株は、馬の胃粘膜上皮細
胞に対する良好な付着性を示した。また本菌（Ｈ−１１
６）株は、ラットの胃粘膜上皮細胞に付着せず、このよ
うな胃粘膜上皮細胞に対する菌の付着性は宿主特異性が
あることが示された。
【００３１】［実施例３］
（抗生物質耐性試験）表２に示した各抗生物質を濃度が
１００、１０、１、０．１および０μｇ／ｍｌとなるよ
うにそれぞれ添加してＭＲＳ寒天培地（Difco Laborato
ries社製）を作製した。この抗生物質含有ＭＲＳ寒天培
地に、実施例１で得られたラクトバチルス イクイ ＹＩ
Ｔ ０４８３株の培養液をそれぞれ１０μｌずつ接種
し、嫌気条件下で、３７℃、４８時間塗抹培養した。増
殖した菌を肉眼で判定し、各抗生物質に対する最小発育
濃度（μｇ／ｍｌ）を求め、表２に示した。
１００、１０、１、０．１および０μｇ／ｍｌとなるよ
うにそれぞれ添加してＭＲＳ寒天培地（Difco Laborato
ries社製）を作製した。この抗生物質含有ＭＲＳ寒天培
地に、実施例１で得られたラクトバチルス イクイ ＹＩ
Ｔ ０４８３株の培養液をそれぞれ１０μｌずつ接種
し、嫌気条件下で、３７℃、４８時間塗抹培養した。増
殖した菌を肉眼で判定し、各抗生物質に対する最小発育
濃度（μｇ／ｍｌ）を求め、表２に示した。
【００３２】
【表２】
【００３３】［実施例４］
（飼料添加物製法）飼料添加用の凍結乾燥菌末を以下の
ように製造した。実施例１により得られた培養液を、１
０Ｎ水酸化ナトリウムでｐＨ６．８から７．０に調整し
た。１，５００×Ｇで遠心して上清を除去後、分散媒
（組成：１０％プロテアーゼ処理スキムミルク、０．５
％グルタミン酸ナトリウム、０．５％アスコルビン酸）
を７％の割合で添加して均一化した。−３０度、２時間
の予備凍結の後、常法に従い、凍結乾燥処理をした。凍
結乾燥後の重量を測定し、等量の乾燥でんぷん（日本薬
局方）を加えて保存した。
ように製造した。実施例１により得られた培養液を、１
０Ｎ水酸化ナトリウムでｐＨ６．８から７．０に調整し
た。１，５００×Ｇで遠心して上清を除去後、分散媒
（組成：１０％プロテアーゼ処理スキムミルク、０．５
％グルタミン酸ナトリウム、０．５％アスコルビン酸）
を７％の割合で添加して均一化した。−３０度、２時間
の予備凍結の後、常法に従い、凍結乾燥処理をした。凍
結乾燥後の重量を測定し、等量の乾燥でんぷん（日本薬
局方）を加えて保存した。
【００３４】［実施例５］
（早期腸内フローラ形成促進効果）出生後２４時間内の
１６頭の仔馬に、実施例４の飼料添加物（ラクトバチル
スイクイ ＹＩＴ ０４８３株凍結乾燥菌体１ｇ（菌数は
約１×１０１０））を経口投与した。出生後３、７、１
４、３０、６０日毎に糞便を採取し、希釈液を加えて均
一化した後、さらに適宜希釈し、ＬＢＳ寒天培地（乳酸
桿菌選択培地、Becton Dickinson社製）に接種し、嫌気
条件下で３７℃、３日間培養し、増殖したコロニー数と
希釈率から糞便中の乳酸桿菌数を算出した。コントロー
ルとして実施例４の飼料添加物を投与していない２７頭
の仔馬からも同様に糞便を採取し、培養して乳酸桿菌数
を算出した。投与後経過日数ごとに、菌体の検出率およ
び糞便１ｇ当たりの平均菌数を表３に示した。なお。検
出率（％）は、（乳酸桿菌が検出された仔馬数）／（調
べた全ての仔馬数）×１００から算出したものである。
１６頭の仔馬に、実施例４の飼料添加物（ラクトバチル
スイクイ ＹＩＴ ０４８３株凍結乾燥菌体１ｇ（菌数は
約１×１０１０））を経口投与した。出生後３、７、１
４、３０、６０日毎に糞便を採取し、希釈液を加えて均
一化した後、さらに適宜希釈し、ＬＢＳ寒天培地（乳酸
桿菌選択培地、Becton Dickinson社製）に接種し、嫌気
条件下で３７℃、３日間培養し、増殖したコロニー数と
希釈率から糞便中の乳酸桿菌数を算出した。コントロー
ルとして実施例４の飼料添加物を投与していない２７頭
の仔馬からも同様に糞便を採取し、培養して乳酸桿菌数
を算出した。投与後経過日数ごとに、菌体の検出率およ
び糞便１ｇ当たりの平均菌数を表３に示した。なお。検
出率（％）は、（乳酸桿菌が検出された仔馬数）／（調
べた全ての仔馬数）×１００から算出したものである。
【００３５】
【表３】
【００３６】コントロール群では、全ての仔馬の腸内に
乳酸桿菌が定着するのに２週間を要したが、本菌投与群
では３日後の検査で全ての仔馬の腸内に乳酸桿菌の定着
が検出され、その菌数も高かったことから出生直後に早
期腸内フローラ形成促進効果が確認された。
乳酸桿菌が定着するのに２週間を要したが、本菌投与群
では３日後の検査で全ての仔馬の腸内に乳酸桿菌の定着
が検出され、その菌数も高かったことから出生直後に早
期腸内フローラ形成促進効果が確認された。
【００３７】（下痢の発生予防効果）また、上記の試験
において、出生６０日目までの下痢の発生を観察した。
コントロール群では１２頭に延べ５８回の下痢が発生し
たが、本菌投与群では２頭に延べ４回見られただけで、
有意な下痢予防効果が観察された。
において、出生６０日目までの下痢の発生を観察した。
コントロール群では１２頭に延べ５８回の下痢が発生し
たが、本菌投与群では２頭に延べ４回見られただけで、
有意な下痢予防効果が観察された。
【００３８】
【発明の効果】本発明によれば、例えば馬の胃粘膜上皮
細胞に対する良好な付着性および定着性、下痢の発生予
防効果、早期腸内フローラ形成促進効果、および各種抗
生物質耐性を有するラクトバチルス（Lactobacillus）
属に属する微生物、およびその微生物を含有する飼料添
加物が提供される。
細胞に対する良好な付着性および定着性、下痢の発生予
防効果、早期腸内フローラ形成促進効果、および各種抗
生物質耐性を有するラクトバチルス（Lactobacillus）
属に属する微生物、およびその微生物を含有する飼料添
加物が提供される。
【００３９】
【配列表】
SEQUENCE LISTING
<110> 株式会社ヤクルト本社 (YAKULT HONSHA CO.,LTD)
<120> ラクトバチルス属微生物および飼料添加物
<130>
<160> 1
<210> 1
<211> 1369
<212> DNA
<213> Lactobacillus equi
<400> 1
tgagtggcga acgggtgagt aacacgtggg taacctgccc taaagagggg gataacactt 60
ggaaacaggt gctaataccg catatctctt agaaccgcat ggttctggga tgaaaggtgg 120
cgtaagctat cactttagga tggacccgcg gcgtattagc ttgttggtgg ggtaatggcc 180
taccaaggcg atgatacgta gccgaactga gaggttgatc ggccacattg ggactgagac 240
acggcccaaa ctcctacggg aggcagcagt agggaatctt ccacaatgga cgcaagtctg 300
atggagcaac gccgcgtgaa tgaagaaggc cttcgggtcg taaaattctg ttgttagaga 360
agaacatgca ggagagtaac tgttcttgta ttgacggtat ctaaccagaa agccacggct 420
aactacgtgc cagcagccgc ggtaatacgt aggtggcaag cgttgtccgg atttattggg 480
cgtaaaggga acgcaggcgg ttttttaagt ctgatgtgaa agccttcggc tcaaccgaag 540
aattgcattg gaaactggaa gacttgagtg cagaagagga gagtggaact ccatgtgtag 600
cggtggaatg cgtaaatata tggaagaaca ccagtggcga aagcggctct ctggtctgta 660
actgacgctg aggttcgaaa gcgtgggtag caaacaggat tagataccct ggtagtccac 720
gccgtaaacg atgaatacta agtgttggag ggtttccgcc cttcagtgct gcagctaacg 780
caataagtat tccgcctggg gagtacggcc gcaaggctga aactcaaagg aattgacggg 840
ggcccgcaca agcggtggag catgtggttt aattcgaagc aacgcgaaga accttaccag 900
gtcttgacat cttttgacca tctgagagat cagattttcc cttcggggac aaaatgacag 960
gtggtgcatg gctgtcgtca gctcgtgtcg tgagatgttg ggttaagtcc cgcaacgagc 1020
gcaacccttg ttgtcagttg ccagcattaa gttgggcact ctggcgagac tgccggtgac 1080
aaaccggagg aaggtgggga cgacgtcaag tcatcatgcc ccttatgacc tgggctacac 1140
acgtgctaca atggacggta caacgagtcg ctaacccgcg agggtacgct aatctcttaa 1200
agccgttctc agttcggatt gtaggctgca actcgcctac atgaagtcgg aatcgctagt 1260
aatcgcgaat cagcatgtcg cggtgaatac gttcccgggc cttgtacaca ccgcccgtca 1320
caccatgaga gtttgtaaca cccaaagccg gtggggtaac cttttagga 1369
【図１】本発明の微生物をＭＲＳ寒天培地で３７℃、２
日間培養した時の生育状態を示した図である。
日間培養した時の生育状態を示した図である。
【図２】既知のラクトバチルス属微生物と本発明の微生
物との関係を示した系統樹の図である。
物との関係を示した系統樹の図である。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(72)発明者 結城 功勝
東京都港区東新橋１丁目１番19号 株式会
社ヤクルト本社内
(72)発明者 角 有希子
東京都港区東新橋１丁目１番19号 株式会
社ヤクルト本社内
(72)発明者 渡辺 幸一
東京都港区東新橋１丁目１番19号 株式会
社ヤクルト本社内
Ｆターム(参考） 2B150 AA01 AB03 AC06 AD04 AD07
AD16 DD15 DD22
4B024 AA11 CA11 HA14
4B065 AA30 AC05 AC10 BA25 CA43
Claims (3)
- 【請求項１】 配列表の配列番号１に示す１６ｓｒＲＮ
Ａ遺伝子の塩基配列を相同性９７％以上で含み、且つ以
下の（イ）および（ロ）の化学分類学的性質を有するラ
クトバチルス（Lactobacillus）属に属する微生物： （イ）ＧＣ含量が３８〜４０ｍｏｌ％、（ロ）近縁菌種
の基準株とのＤＮＡ−ＤＮＡハイブリダイゼーションに
より同定されない。 - 【請求項２】 前記微生物が、ラクトバチルス イクイ
（Lactobacillus equi）ＹＩＴ ０４８３株（寄託番号
ＦＥＲＭ Ｐ−１８６７７号）である請求項１記載の微
生物。 - 【請求項３】 請求項１または２記載の微生物の培養物
および／または該微生物菌体を有効成分として含有する
ことを特徴とする飼料添加物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002034336A JP3908049B2 (ja) | 2002-02-12 | 2002-02-12 | ラクトバチルス属微生物および飼料添加物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002034336A JP3908049B2 (ja) | 2002-02-12 | 2002-02-12 | ラクトバチルス属微生物および飼料添加物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003235569A true JP2003235569A (ja) | 2003-08-26 |
| JP3908049B2 JP3908049B2 (ja) | 2007-04-25 |
Family
ID=27776870
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2002034336A Expired - Fee Related JP3908049B2 (ja) | 2002-02-12 | 2002-02-12 | ラクトバチルス属微生物および飼料添加物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3908049B2 (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006040816A1 (ja) * | 2004-10-13 | 2006-04-20 | Kabushiki Kaisha Yakult Honsha | 飼料用添加剤及びそれを含む飼料 |
| JP2008048683A (ja) * | 2006-08-25 | 2008-03-06 | Hokkaido | 動物用生菌剤、飼料組成物、及びこれらの使用方法 |
| JP2008195635A (ja) * | 2007-02-09 | 2008-08-28 | Crossfield Bio Inc | 馬用乳酸菌製剤 |
| JP2009100692A (ja) * | 2007-10-24 | 2009-05-14 | Crossfield Bio Inc | 新規なラクトバチルス属微生物および哺乳動物用乳酸菌製剤 |
| JP2010041940A (ja) * | 2008-08-11 | 2010-02-25 | Crossfield Bio Inc | 新属シャーペア（Ｓｈａｒｐｅａ）属に属する微生物および微生物製剤並びに経口組成物 |
| WO2018043706A1 (ja) | 2016-09-02 | 2018-03-08 | 富士フイルム株式会社 | 家畜用飼料又は家畜用サプリメント、ラクトバチルス属細菌の増殖促進剤、並びにラクトバチルス属細菌の増殖促進方法 |
| JP2019514420A (ja) * | 2016-05-17 | 2019-06-06 | コリア フード リサーチ インスティチュートＫｏｒｅａ Ｆｏｏｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ | ラクトバチルス属ｋｃｃｍ １１８２６ｐ菌株を用いた高リン酸血症予防及び晩成腎臓疾患治療用の薬学組成物及び健康機能性食品 |
-
2002
- 2002-02-12 JP JP2002034336A patent/JP3908049B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| EP1808081A4 (en) * | 2004-10-13 | 2009-01-21 | Yakult Honsha Kk | ADDITIVE TO FEEDSTUFFS AND THESE INGREDIENTS |
| US7736883B2 (en) | 2004-10-13 | 2010-06-15 | Kabushiki Kaisha Yakult Honsha | Additive for feeds and feed containing the same |
| JP2008048683A (ja) * | 2006-08-25 | 2008-03-06 | Hokkaido | 動物用生菌剤、飼料組成物、及びこれらの使用方法 |
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| JP2010041940A (ja) * | 2008-08-11 | 2010-02-25 | Crossfield Bio Inc | 新属シャーペア（Ｓｈａｒｐｅａ）属に属する微生物および微生物製剤並びに経口組成物 |
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| WO2018043706A1 (ja) | 2016-09-02 | 2018-03-08 | 富士フイルム株式会社 | 家畜用飼料又は家畜用サプリメント、ラクトバチルス属細菌の増殖促進剤、並びにラクトバチルス属細菌の増殖促進方法 |
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