JP2003245341A - 癒着防止膜 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】胸膜、心膜、脳硬膜、漿膜などの生体内膜状組
織および各種臓器などの欠損部または切断面への補填、
補綴用膜として用いられ、長期間にわたって十分な癒着
防止効果を発揮し、副作用もほとんどなく、しかも生体
適合性、生体内分解・吸収性が良く、縫合固定が可能な
機械的強度を同時に満足する改良されたコラーゲン含有
癒着防止膜の提供。 【解決手段】コラーゲン繊維からなる不織布層とコラー
ゲンからなるスポンジ層を有する積層膜状物の表面に、
コラーゲンとヒアルロン酸の混合物を含む被覆層を設け
ることにより、癒着防止効果が長期間維持される癒着防
止膜。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、組織再生誘導及び
促進作用を有するコラーゲン含有癒着防止膜に関する。
本発明の癒着防止膜は、生体適合性が良好であり、生体
内で長期間安定に癒着防止効果を発揮し、縫合可能であ
るため、例えば胸膜、心膜、脳硬膜、漿膜などの生体内
膜状組織および各種臓器などの欠損部または切断面への
補填、補綴用膜として用いられる。

【０００２】

【従来の技術】各種の外科手術においては、患部の切
除、および損傷部位の修復等を行うことが多く、特に
肺、心臓、肝臓、脳、消化器官、胆嚢などの各種臓器を
対象とする場合には、その切断面や欠損部などに、該臓
器の組織を覆っている膜状物を補填または補綴しなけれ
ば、その臓器の根本的な機能を損なう場合が多い。これ
らの処置を不完全に行うと、臓器の機能不全により死亡
するか、もしくは生命の危機を逃れても、予後が大変悪
くなる傾向が良く観うけられる。またこれらの補綴、補
填部位での縫合固定が不良であると、該処置を行った臓
器自身の機能はかろうじて維持できたとしても、これら
の臓器から滲出または漏出した体液、消化液、内容物な
どにより感染したり、他臓器への攻撃、浸食を引き起こ
して生命の危機を招くこともある。

【０００３】さらに、これら補綴または補填した膜状物
と臓器との癒着が高頻度に発生するケースがあり、その
結果として、経時的に臓器の機能不全を誘発する事もあ
る。このような各種の問題点を解決する目的で、臓器ま
たは該臓器の組織を覆う膜状物または癒着防止膜が、様
々な材料により開発されている。

【０００４】癒着を防止する機構として、最も単純かつ
効果的である方法は、損傷または欠損等により傷ついた
組織と、この組織に物理的に接触が可能である別の組織
とを隔壁により接触させないことである。しかし、これ
を合成繊維等で行う場合、生体適合性の不足から、過度
の石灰化、異物反応、炎症反応などの様々な不都合が生
じてくる。また、隔壁として生体適合性材料を用いた場
合であっても、材料自身が、損傷または欠損した組織
と、それに対応する別組織との癒着を媒介してしまって
はならない。これらの条件を満足するものとしては、ヒ
アルロン酸やゼラチンなどが挙げられる。両者は共に粘
性のある水溶性の液体として取り扱うことが可能であ
り、様々な加工方法により、ゲルとして利用することが
可能である。

【０００５】これらの材料は主に動物等の生体より抽出
・精製されるものであるから、生体適合性が良好であ
り、既に医薬品をはじめ、様々な医療分野で実用化が成
されている。例えば、ヒアルロン酸を利用する癒着防止
膜、医用材料等は特許文献１、特許文献２、特許文献
３、特許文献４、特許文献５、特許文献６、特許文献
７、特許文献８、特許文献９、特許文献１０などに記載
されている。

【０００６】

【先行技術文献】

【特許文献１】特開平６−７３１０３号公報

【特許文献２】特公平７−３０１２４号公報

【特許文献３】登録特許第２６７０９９６号公報

【特許文献４】特開平８−３３３４０２号公報

【特許文献５】特開昭６１−２３４８６４号公報

【特許文献６】登録特許第２６４８３０８号公報

【特許文献７】特開平８−１５７３７８号公報

【特許文献８】特開平９−２９６００５号公報

【特許文献９】特開平７−１０２００２号公報

【特許文献１０】特表平７−５０９３８６号公報

【０００７】特許文献１１には、動物由来コラーゲンの
みを利用した医療用膜を改良した膜として、架橋したコ
ラーゲン繊維からなる不織布層の少なくとも一面が、コ
ラーゲン被膜で覆われた医療用コラーゲン膜が記載され
ている。特許文献１２には、コラーゲン繊維の不織布上
にゼラチンまたはヒアルロン酸を単独で癒着防止膜に利
用した技術が記載されている。特許文献１３には、コラ
ーゲン繊維の不織布層とコラーゲンのスポンジ層の上に
ゼラチンまたはヒアルロン酸の被覆層を有する癒着防止
膜が記載されている。

【０００８】

【特許文献１１】特開２０００−９３４９７号公報

【特許文献１２】特開２０００−２７１２０７号公報

【特許文献１３】特開２０００−２１０３７６号公報

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら上記した
技術は生体適合性、生体内分解・吸収性、物理的・機械
的強度、取り扱いの容易さ、長期間の癒着防止効果など
の点において十分満足できるものではない。長期間にわ
たって十分な癒着防止効果を発揮し、副作用もほとんど
なく、しかも生体適合性、生体内分解・吸収性が良く、
縫合固定が可能な機械的強度を同時に満足する改良され
た医用材料が求められている。

【００１０】

【課題を解決するための手段】上記課題を解決するため
に、種々鋭意検討を行った結果、本発明者らはコラーゲ
ン繊維からなる不織布層とコラーゲンからなるスポンジ
層とを有する積層膜状物の表面に、コラーゲンとヒアル
ロン酸の混合物を含む被覆層を設けることにより、有意
に耐分解性が向上した癒着防止層を構築することを可能
とし、癒着防止効果が長期間維持される癒着防止膜が得
られることを見出し、本発明に到達した。

【００１１】すなわち、本発明は、（１） コラーゲン
繊維からなる不織布層とコラーゲンからなるスポンジ層
とを有する積層膜状物の表面に、コラーゲンとヒアルロ
ン酸との混合物を含む被覆層を有してなる癒着防止膜、
（２） コラーゲンとヒアルロン酸との混合物を含む被
覆層がスポンジ状もしくはフィルム状である上記１記載
の癒着防止膜、（３） コラーゲンとヒアルロン酸との
混合物を含む被覆層がコラーゲンとヒアルロン酸との混
合物を架橋反応に付してなる層である上記１記載の癒着
防止膜、（４） コラーゲンとヒアルロン酸との混合物
を含む被覆層の厚さが約５０μｍ〜２０ｍｍである上記
１記載の癒着防止膜、（５） 癒着防止膜を構成するコ
ラーゲンが酵素可溶化コラーゲン、酸可溶化コラーゲ
ン、アルカリ可溶化コラーゲンまたは中性可溶化コラー
ゲンである上記１記載の癒着防止膜、（６） 癒着防止
膜を構成するコラーゲンの一部もしくは全部が架橋され
ている上記１記載の癒着防止膜、（７） コラーゲン繊
維からなる不織布層が（１）コラーゲンまたは（２）コ
ラーゲンとヒアルロン酸との混合物でコラーゲン繊維が
互いに接合された不織布層である上記１記載の癒着防止
膜、（８） コラーゲン繊維からなる不織布層の厚さが
約５０μｍ〜１０ｍｍ、コラーゲンからなるスポンジ層
の厚さが５０μｍ〜２０ｍｍであり、コラーゲンとヒア
ルロン酸との混合物を含む被覆層の厚さが約５０μｍ〜
２０ｍｍである上記１記載の癒着防止膜、（９） コラ
ーゲン繊維からなる不織布層が、コラーゲン繊維からな
る不織布を１〜６枚積層させたものである、上記１記載
の癒着防止膜、（１０） コラーゲン繊維の直径が約１
０〜１，０００μｍ、コラーゲン繊維からなる不織布層
の嵩密度が約５×１０^−４〜５０ｇ/ｃｍ^３である上記
１記載の癒着防止膜、および（１１） 膜全体の厚さが
約１５０μｍ〜５０ｍｍである上記１記載の癒着防止膜
に関する。

【００１２】

【発明の実施の形態】本発明において、コラーゲン繊維
からなる不織布層とは、コラーゲン繊維からなる２次あ
るいは３次構造を有する構造物であり、コラーゲン繊維
空隙の一部または全部が気体、液体、固体などで満たさ
れていてもよく、コラーゲン繊維の外周面の一部または
全部が固体または液体で覆われていてもよい。コラーゲ
ン繊維はコラーゲンまたはコラーゲンとヒアルロン
酸との混合物等のバインダーで互いに接合されていても
よい。またコラーゲン繊維を構成するコラーゲンは、そ
の一部もしくは全部が架橋されていてもよい。また、コ
ラーゲン繊維を構成するコラーゲンやコラーゲンとヒア
ルロン酸との混合物におけるコラーゲンは、酸可溶化コ
ラーゲンを用いた場合、アルカリ金属（例、ナトリウ
ム、カリウム等）、アルカリ土類金属（例、マグネシウ
ム、カルシウム等）等の塩として用いてもよく、アルカ
リ可溶化コラーゲンを用いた場合、無機酸（例、塩酸、
硫酸、硝酸、等）、有機酸（例、酢酸、クエン酸等）と
の塩として用いてもよい。ヒアルロン酸は、アルカリ金
属（例、ナトリウム、カリウム等）、アルカリ土類金属
（例、マグネシウム、カルシウム等）等の塩として用い
てもよい。

【００１３】コラーゲン繊維の直径は通常、約１０〜
１，０００μｍ、好ましくは約２０〜２５０μｍであ
る。コラーゲン繊維からなる不織布層は通常、１〜６
枚、好ましくは２〜４枚のコラーゲン不織布が積層され
たものである。コラーゲン繊維からなる不織布層の嵩密
度は、通常、約５×１０^−４〜５０ｇ/ｃｍ^３、好まし
くは約０．０５〜５０ｇ/ｃｍ^３である。厚さは通常、
約５０μｍ〜１０ｍｍ、好ましくは、約０.２〜２ｍｍ
である。

【００１４】コラーゲンからなるスポンジ層とは、コラ
ーゲンを含有し、通常、スポンジ状などの形態を有する
層状物である。コラーゲンは、酸可溶化コラーゲンを用
いる場合、アルカリ金属（例、ナトリウム、カリウム
等）、アルカリ土類金属（例、マグネシウム、カルシウ
ム等）等の塩としてもよい。アルカリ可溶化コラーゲン
を用いる場合、無機酸（例、塩酸、硫酸、硝酸等）、有
機酸（例、酢酸、クエン酸等）との塩としてもよい。ま
た、コラーゲンは架橋反応処理されていてもよい。コラ
ーゲン繊維からなる不織布層とコラーゲンからなるスポ
ンジ層とを有する積層膜状物を作成するため、コラーゲ
ン、ヒアルロン酸、コラーゲンとヒアルロン酸との混合
物を含む水溶液などをコラーゲンからなるスポンジ層と
コラーゲン繊維からなる不織布層との接着される面に塗
布し、コラーゲン繊維からなる不織布層とコラーゲンか
らなるスポンジ層とを接着してもよい。コラーゲンから
なるスポンジ層の厚さは、通常、約５０μｍ〜２０ｍｍ
であり、好ましくは、約０．１〜１ｍｍである。コラー
ゲンからなるスポンジ層はコラーゲン繊維からなる不織
布層の片面または両面のいずれに積層されていてもよ
く、コラーゲン繊維からなる不織布層が複数枚の不織布
で構成されている場合は、不織布間に積層されていても
よい。

【００１５】コラーゲンとヒアルロン酸との混合物を含
む被覆層とは、コラーゲンとヒアルロン酸を含有し、通
常、スポンジ状もしくはフィルム状などの形態を有する
層状物である。コラーゲンとヒアルロン酸との混合物
は、酸可溶化コラーゲンを用いる場合、アルカリ金属
（例、ナトリウム、カリウム等）、アルカリ土類金属
（例、マグネシウム、カルシウム等）等の塩としてもよ
い。アルカリ可溶化コラーゲンを用いる場合、無機酸
（例、塩酸、硫酸、硝酸等）、有機酸（例、酢酸、クエ
ン酸等）との塩としてもよい。コラーゲンとヒアルロン
酸の混合比率（重量比）は約１：１００から約１００：
１の範囲が用いられ、好ましくは約３：７から約７：３
の範囲であり、さらに好ましくは約１：１である。コラ
ーゲンとヒアルロン酸との混合物は架橋反応処理されて
いてもよい。コラーゲンとヒアルロン酸との混合物を含
む被覆層とコラーゲン繊維からなる不織布層とコラーゲ
ンからなるスポンジ層とを有する積層膜状物とを接着さ
せるため、コラーゲン、ヒアルロン酸、コラーゲンとヒ
アルロン酸との混合物を含む水溶液などを、被覆層と積
層膜状物との接着される面に塗布してもよい。コラーゲ
ンとヒアルロン酸との混合物を含む被覆層の厚さは、通
常、約５０μｍ〜２０ｍｍであり、好ましくは、約０．
１〜１ｍｍである。該被覆層は、積層膜状物の片面また
は両面のいずれに積層されていてもよい。

【００１６】本発明の癒着防止膜は、コラーゲン繊維か
らなる不織布層、コラーゲンからなるスポンジ層、およ
びコラーゲンとヒアルロン酸との混合物を含む被覆層を
積層させた、積層構造を有する。本発明の癒着防止膜の
全体の厚さは、通常、約１５０μｍ〜５０ｍｍであり、
好ましくは約０．５〜９ｍｍである。本発明の癒着防止
膜は十分に縫合可能な膜強度を主にコラーゲン繊維から
なる不織布層が担当し、組織再生の誘導・促進を主にコ
ラーゲンからなるスポンジ層が担当し、生体適合性と周
囲組織との癒着防止効果をコラーゲンとヒアルロン酸と
の混合物を含む被覆層が発揮する。

【００１７】本発明の癒着防止膜は、コラーゲンおよび
ヒアルロン酸が生体由来材料であり、生体適合性が非常
に優れているだけでなく、移植された生体内では徐々に
分解・吸収され、最終的には全て分解・吸収されること
となる。特にコラーゲン繊維からなる不織布層は、生体
内欠損部位等の組織再生が完了するまでの間、補填、補
綴、シールする足場として存在し、縫合固定の一定期
間、その膜強度を維持した後に、全て分解・吸収され
る。また、最外層のコラーゲンとヒアルロン酸との混合
物を含む被覆層は、その粘性と徐放作用により、損傷ま
たは欠損部位の組織と周囲組織との癒着を防止する。な
お、この癒着を防止する期間は、損傷または欠損部位の
組織が、自然状態で周囲組織との癒着が起こらない程度
まで再生・治癒するまでの期間持続する。これらの癒着
防止効果を発揮しつつ、徐々に体内で分解・吸収され、
最終的にはこれらコラーゲンとヒアルロン酸との混合物
を含む被覆層も消失する。

【００１８】本発明の癒着防止膜の製造方法を以下に記
載する。本発明において使用される代表的なコラーゲン
の原料としては、例えば酵素可溶化コラーゲン、酸可溶
化コラーゲン、アルカリ可溶化コラーゲンまたは中性可
溶化コラーゲンなどが挙げられる。これらの可溶化コラ
ーゲンとは、溶媒に溶解できるよう処理が施されたコラ
ーゲンである。例えば、酸可溶化コラーゲン、アルカリ
可溶化コラーゲン、酵素可溶化コラーゲン、中性可溶化
コラーゲン等の可溶化コラーゲンが挙げられる。特に可
溶化処理と同時にコラーゲンの抗原決定基であるテロペ
プタイドの除去処理が施されている、アテロコラーゲン
が好適である。これらコラーゲンの可溶化方法について
は、特公昭４６−１５００３号公報、特公昭４３−２５
９８３９号公報、特公昭４３−２７５１３号公報等に記
載されている。またコラーゲンの由来については、ウ
シ、ブタ、鳥類、魚類、ウサギ、ヒツジ、ネズミ、ヒト
等の動物種の皮膚、腱、骨、軟骨、臓器等から抽出され
るものである。コラーゲンのタイプとしてはＩ型、III
型等の分類可能なタイプのうちいずれかに限定されるも
のではないが、取り扱い上の観点から、Ｉ型が特に好適
である。

【００１９】酸可溶化コラーゲンを用いる場合、コラー
ゲンは凝固後、水中で炭酸アルカリ金属（例、炭酸ナト
リウム、炭酸カリウム等）、炭酸水素アルカリ金属
（例、炭酸水素ナトリウム等）、水酸化アルカリ金属
（例、水酸化ナトリウム等）などにより中和した塩とし
て用いてもよい。また、アルカリ可溶化コラーゲンを用
いる場合、コラーゲンは凝固後、水中で無機酸（例、塩
酸、硫酸、硝酸等）、有機酸（例、酢酸、クエン酸等）
などにより中和した塩として用いてもよい（以下の場合
も同様）。

【００２０】ヒアルロン酸は動物由来、微生物由来のど
ちらでも良いが、医療用グレードの物が特に好適であ
る。ヒアルロン酸はアルカリ金属（例、ナトリウム、カ
リウム等）等の塩として用いてもよい。また、コラーゲ
ンを可溶化させる溶媒については、コラーゲンを可溶化
できる溶媒であれば、特に限定されないが、好ましく
は、水、中性塩（例、塩化ナトリウム、リン酸水素ナト
リウム等）の水溶液、希鉱酸（例、希塩酸、希硝酸
等）、親水性有機溶媒（例、エチルアルコール、エチレ
ングリコールなどの１価ないし多価アルコール類）を含
んでいてもよい。取り扱い上、水が好適である。

【００２１】コラーゲン繊維からなる不織布は、常法
（例えば、特開２０００−９３４９７に記載の方法）に
従ってコラーゲン水溶液から連続紡糸してコラーゲン糸
を得、不織布状に加工することにより好適に製造され
る。本発明に用いられるコラーゲン水溶液の濃度は、使
用するコラーゲンの種類により任意であり、紡糸可能で
あればどの様な濃度でも構わないが、通常は約０．１重
量％〜２０重量％、このうち湿式紡糸では約１重量％〜
１０重量％程度が特に好適である。また、紡糸時のコラ
ーゲンの吐出速度は、紡糸可能である範囲であれば任意
である。

【００２２】紡糸の際、コラーゲン溶液の吐出に用いる
装置は、汎用のギアポンプ、ディスペンサー、各種押し
出し装置等、何を用いても良いが、均一な紡糸を行うた
めには脈動が少なく安定してコラーゲン溶液を定量吐出
できる装置が良い。また、紡糸を行う際の口金の孔径サ
イズは紡糸さえ可能であれば、特に限定はされないが、
あまりに大きな孔径ではバインダー処理による繊維状物
から膜状物にする操作が困難となり、また極度に細径で
あると膜強度の向上が難しくなるので、通常、約１０μ
ｍ〜１０００μｍ、好ましくは約５０μｍ〜７００μｍ
の範囲が用いられる。さらに口金の孔数は単数でも複数
でも良い。口金の形状も特に限定はされず、紡糸可能で
あれば、例えばスリット状、各種形状などの物を用いて
も良い。さらに口金の孔長に関しては、これも紡糸可能
であれば特に限定はされないが、可溶化コラーゲン分子
中のコラーゲン分子を、少しでも多く配向させる目的に
おいて、可能な限り長い方が好ましい。

【００２３】湿式紡糸で用いられる凝固浴としては、一
般的にコラーゲンを凝固させうる溶媒、懸濁液、乳濁液
もしくは溶液であれが特に限定はされないが、無機塩類
水溶液、無機塩類含有有機溶媒、アルコール類、ケトン
類またはこれらの任意の組み合わせが用いられる。無機
塩類水溶液としては、硫酸ナトリウム、塩化ナトリウ
ム、硫酸アンモニウム、塩化カルシウム、塩化マグネシ
ウムなどの水溶液、特に塩化ナトリウム、硫酸ナトリウ
ム、硫酸アンモニウムなどの水溶液が好ましい。これら
の無機塩類をアルコール、アセトンに溶解／分散させた
無機塩類含有有機溶媒等を用いてもよく、この場合特に
塩化ナトリウムのエタノール溶解／分散溶液が好まし
い。アルコール類としては、メタノール、エタノール、
イソプロパノール、アミルアルコール、ペンタノール、
ヘキサノールなどの炭素数１から６のアルコール類やエ
チレングリコールなどのグリコール類、好ましくはエタ
ノールが挙げられる。ケトン類としてはアセトン、メチ
ルエチルケトンなどが挙げられる。

【００２４】上記凝固浴はコラーゲンの凝固のためだけ
ではなく、後述する各種架橋剤との組み合わせにより、
コラーゲンの凝固と架橋処理を同時に実施できる加工方
法も有効である。たとえば、エタノールとグルタルアル
デヒドを混和した溶液を、凝固処理と架橋処理を兼ね備
えた凝固浴として使用した場合、両者の工程を一度に行
うことができ、紡糸されたコラーゲン糸はそのまま架橋
処理される。これらの同時処理は、工程の合理化だけで
はなく、希薄なコラーゲン溶液による紡糸や細径の糸を
紡糸する際に非常に有効である。

【００２５】上記の不織布層の形成方法において、特に
好適な具体例を以下に記す。コラーゲン吐出用口金の孔
径がφ２００μｍ程度で、孔長１５〜２０ｍｍ程度のも
のを使用し、脈動なくコラーゲン溶液をディスペンサー
等で吐出させ、約９９．５容量％エタノール凝固浴中へ
湿式紡糸すことが望ましい。約９９．５容量％エタノー
ル凝固浴中にコラーゲンを押し出す際には、吐出口金を
随時移動させ、紡糸された糸が任意の方向より交差し得
る状態で連続的に押し出し、糸を多重多層状態にした後
に凝固液を除去して再度エタノールで洗浄し、減圧乾燥
する事により、非常に良好な綿状の繊維状物を簡便に得
ることができる。この方法は、紡糸と不織布化が同時に
実施できるので、工程の簡素化、短縮化、経済性の面で
特に有効である。

【００２６】この例は代表的なものであり、繊維状物が
得られさえすれば 、これに限定されるものではなく、
例えば前述のコラーゲン繊維ステープルを利用しても良
いし、凝固浴の種類、凝固浴と架橋剤の混合浴の利用、
また乾燥方法等を変更し、さらにそれらの組み合わせを
変更してもよい。

【００２７】一方、コラーゲン水溶液から間欠吐出によ
る非連続紡糸、又は通常の連続紡糸を行った後に得られ
る糸を切断処置することにより、連続、非連続紡糸のい
ずれの場合においても短いステープル状の繊維状物が得
られる。これらを適当な大きさの容器に均一に分散させ
た状態で、減圧乾燥、自然乾燥などの方法により乾燥さ
せた不織布（繊維状物）を製造することも可能である。

【００２８】上記方法で得られた不織布は十分な縫合強
度を獲得するために、必要によりさらに架橋処理を施し
てもよい。この架橋処理により、特に湿潤時における物
理的な強度が向上し、縫合に必要な強度が十分に確保で
きる。また、生体内に移植された際に分解・吸収される
時間を、未架橋の場合に比較して飛躍的に遅延させる為
でもある。この架橋処理により、生体の欠損部を補填ま
たは補綴し、欠損による臓器・組織等の機能不全を防止
し、しかも創傷面の修復および組織の再生を完了するま
での期間、体内で必要な膜強度を維持したまま残存する
ことが可能となる。

【００２９】この架橋方法には、大別して物理的架橋方
法と化学的架橋方法が存在する。物理的架橋処理法とし
ては、γ線照射、紫外線照射、電子線照射、プラズマ照
射、熱脱水架橋処理などがあげられる。このうち熱脱水
架橋処理が好ましい。熱脱水架橋処理では、コラーゲン
単糸が巻き取られた状態で減圧下加熱処理することによ
り物理的に架橋処理される。この架橋処理では、架橋温
度と架橋時間により生体適合性と分解吸収性をコントロ
ールすることが可能である。物理的架橋と化学的架橋は
それぞれ単独で行ってもよいし、併用してもよく、また
併用する場合にはその順番は問わない。化学的架橋反応
に用いる架橋剤としては、コラーゲンとの架橋反応が可
能であれば如何なる架橋剤でも使用可能であり、例えば
アルデヒド類、エポキシ類、カルボジイミド類、イソシ
アネート類などが挙げられる。アルデヒド類としてはホ
ルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、グリオキサル、
ジアルデヒドデンプン等、エポキシ類としてはグリセロ
ールジグリシジルエーテル等、カルボジイミド類として
は水溶性カルボジイミド等、イソシアネート類としては
ヘキサメチレンジイソシアネート等が挙げられる。好ま
しくはグルタルアルデヒドである。コラーゲン単糸の架
橋は、通常、架橋剤の溶液中にコラーゲン単糸を浸漬す
ることにより行われる。架橋剤溶液の溶媒は特に限定さ
れないが、水やエタノール等が好適であり、特にエタノ
ールが最適である。架橋剤溶液の濃度と浸漬時間によ
り、分解吸収性と生体適合性をコントロールすることが
可能である。架橋剤がグルタルアルデヒドである場合、
溶液の濃度は、通常約０.００１容量％〜２５容量％、
好ましくは、約０．０１容量％〜１．０容量％である。

【００３０】上記の方法により得られるコラーゲン繊維
からなる不織布層はその物理的強度を向上させる目的
で、バインダー処理を施してもよい。バインダー処理と
は、不織布層に、（１）コラーゲンまたは（２）コラー
ゲンとヒアルロン酸との混合物の水溶液などを含浸させ
た後、自然乾燥、送風下乾燥、減圧乾燥、低温下乾燥な
どの適当な乾燥方法で乾燥を行い、不織布層の繊維同士
を結合させる処理である。このバインダー処理により得
られる不織布層は、未処理の不織布層よりもはるかに物
理的強度が向上し、従って縫合強度も格段に向上する。
要求される物理的強度の程度により、この含浸・乾燥の
工程を１回〜数１０回以上繰り返しても差し支えない。

【００３１】ただし、バインダー処理を行う際には、コ
ラーゲン繊維のみからなる、不織布層に架橋処理が施さ
れていない場合、（１）コラーゲンまたは（２）コラー
ゲンとヒアルロン酸との混合物の水溶液等に含浸した時
点で不織布層自身が溶解してしまう場合がある。従っ
て、前述の方法等で、前もって架橋処理を施しておくの
が望ましい。なお、バインダー処理法としては、（１）
コラーゲン水溶液または（２）コラーゲンとヒアルロン
酸との混合物の水溶液に不織布層を含浸する方法の他
に、適当な容器または型中に不織布層とともにコラーゲ
ンまたはコラーゲンとヒアルロン酸との混合物を流延ま
たは充填する方法や、不織布層にコラーゲン溶液または
コラーゲンとヒアルロン酸との混合物の溶液を直接塗布
する方法もある。

【００３２】本発明では、スポンジ層を利用したバイン
ダー処理方法を用いてもよい。例えば、あらかじめスポ
ンジ状に乾燥しておいたコラーゲン層で不織布層を挟ん
で得た膜状物、もしくは該スポンジ層と不織布層を同時
に圧縮し、不織布層を該スポンジ層に埋入させた膜状物
を、希薄なコラーゲンまたはその上記した塩基塩又は酸
付加塩の溶液または水の存在下で、常圧もしくは減圧下
に置くことにより、スポンジ層のコラーゲンを溶解さ
せ、不織布層に溶液を十分に浸透させてから、各種乾燥
法で乾燥させる方法等が用いられる。このスポンジ層を
利用したバインダー処理方法は、不織布層の繊維同士を
結合させるために、実際に使用されるコラーゲン量に対
して、水分などの溶媒成分が非常に少量で済む。従って
後工程で乾燥を行う際に短時間で終了する上、乾燥時に
おける収縮、変形などが非常に少ないという大きなメリ
ットがある。また、通常の含浸工程では、含浸用コラー
ゲン溶液中の実質コラーゲン量は、実用的溶液粘度の関
係から、数％程度が限界であり、残り９０％以上は水分
等の溶媒成分となる。したがって、含浸・乾燥の操作に
時間を要し、この操作自体を反復する必要があるが、操
作が非常に簡便であるというメリットがある。無論、こ
れらの方法は代表的な例示であり、不織布層または圧縮
された不織布層の繊維同士をコラーゲンを用いて接合さ
せる方法であれば、どのような方法でも良く、上記代表
例には特に限定されない。また、バインダー処理には、
上記コラーゲン水溶液の他、ヒアルロン酸溶液、コラー
ゲンとヒアルロン酸との混合物の水溶液なども使用でき
る。

【００３３】ついで上記方法により得られるコラーゲン
繊維からなる不織布層に、コラーゲンからなるスポンジ
層およびコラーゲンとヒアルロン酸との混合物を含む被
覆層を形成させてもよい。該形成方法は常法に従い、凍
結乾燥などの方法により容易に実施可能である。形成す
る製造工程上の順序・方法等については特に限定されな
い。具体的な製法としては、例えば、コラーゲン繊維か
らなる不織布層とコラーゲンからなるスポンジ層および
コラーゲンとヒアルロン酸との混合物を含むスポンジ状
もしくはフィルム状の被覆層を積層するか、またはコラ
ーゲンからなるスポンジ層およびコラーゲンとヒアルロ
ン酸との混合物を含むスポンジ状の被覆層を独自に作製
して、その後に、該被覆層、スポンジ層、およびコラー
ゲン繊維からなる不織布層を、コラーゲン、ヒアルロン
酸、またはコラーゲンとヒアルロン酸との混合物の水溶
液などを用いて接着する方法がある。また、コラーゲン
繊維からなる不織布層を、コラーゲンの水溶液に浸漬さ
せた後に一度凍結し、再度、同様にコラーゲンとヒアル
ロン酸との混合物を含む水溶液に浸漬させ、これらを凍
結して一体化した後に凍結乾燥することにより、同時に
コラーゲン繊維からなる不織布層とコラーゲンからなる
スポンジ層およびコラーゲンとヒアルロン酸との混合物
を含む被覆層の３種の層を有する癒着防止膜を得る方法
などがある。

【００３４】また、容器中に充填したコラーゲン溶液お
よびコラーゲンとヒアルロン酸の混合物からなる溶液中
にコラーゲン不織布を浸漬させた後に、フリーザーで凍
結し、さらに凍結乾燥してコラーゲンからなるスポンジ
層およびコラーゲンとヒアルロン酸の混合物からなるス
ポンジ層中にコラーゲン不織布が含有されている状態に
成型することも可能である。しかし、これらは本発明の
加工方法の一例を示したに過ぎず、これらの加工の目的
はコラーゲンからなるスポンジ層およびコラーゲンとヒ
アルロン酸の混合物からなるスポンジ状もしくはフィル
ム状の被覆層とコラーゲン繊維からなる不織布層が生体
内移植時に簡単に剥離・分離すること無く、一体化され
ることが目的であり、これが達成されるのであれば、ど
のような加工順序、方法を用いても構わない。

【００３５】コラーゲンからなるスポンジ層およびコラ
ーゲンとヒアルロン酸との混合物を含むスポンジ状の被
覆層の作製については、コラーゲン溶液またはコラーゲ
ンとヒアルロン酸との混合物を含む水溶液を容器に流
延、または所望の厚さとなるまで充填し、汎用フリーザ
ー等で十分に凍結した後、凍結乾燥機で乾燥することに
より、均一なスポンジ層が得られる。この時、コラーゲ
ンからなるスポンジ層またはコラーゲンとヒアルロン酸
の混合物からなるスポンジ層に形成される微細な多孔の
孔径は、コラーゲン溶液またはコラーゲンとヒアルロン
酸の混合物からなる溶液の濃度とその溶媒、凍結時の温
度と凍結時間などにより変化する。

【００３６】コラーゲンからなるスポンジ層およびコラ
ーゲンとヒアルロン酸との混合物を含むスポンジ状の被
覆層における各種原料の総量およびスポンジ状の被覆層
の厚さについては、対象となる部位の癒着防止効果、損
傷・切断部位の修復、組織再生の誘導などにおける支障
を来さないように、約１〜４週間程度、スポンジ層が体
内で残存している程度が望ましい。このコラーゲンとヒ
アルロン酸の混合物からなるスポンジ状の被覆層の厚
さ、およびスポンジ層の形成に使用される総原料量は、
生体内に移植された場合の分解・吸収時間、組織再生の
誘導への影響を考慮して、任意にコントロールすること
が可能である。スポンジ層の厚さは各々、具体的には約
５０μｍ〜２０ｍｍ、好ましくは１００〜１０００μｍ
であり、特に乾燥終了時の厚さが１〜１０ｍｍであり、
これらを圧縮して使用する場合において、１００μｍ〜
１ｍｍの厚さとなることが好ましい。これらの状況を考
慮して、コラーゲン水溶液およびコラーゲンとヒアルロ
ン酸との混合物を含む溶液の濃度範囲は、０.１〜６０
重量％、好ましくは０.５〜１０重量％であることが望
ましい。また凍結温度は−２００〜−１０℃、好ましく
は汎用のフリーザーまたはディープフリーザーで設定可
能である−８０〜−１０℃であることが好ましい。ま
た、凍結乾燥機は安定して乾燥が可能であれば特に限定
はされない。

【００３７】さらに、コラーゲン水溶液およびコラーゲ
ンとヒアルロン酸との混合物を含む水溶液の容器への充
填量は、仕上がりスポンジの厚さが、約５０μｍ〜２０
ｍｍ、好ましくは１０〜１０００μｍ程度になるように
充填すれば良い。これらの値は、使用する目的に応じて
随時変更が可能であり、これらの例示に限定されない。

【００３８】癒着防止効果を発揮するコラーゲンとヒア
ルロン酸との混合物を含む被覆層は、スポンジの形状の
みには限定されず、例えば、通常の流延方式などにより
得られるフィルム状などの形状に加工されていても良
い。また、癒着防止効果を付与するためにコラーゲンと
ヒアルロン酸との混合物を含む被覆層を形成する場合に
は、目的に応じて膜の片面または両面、あるいは一部分
または全面被覆など様々な形態が選択可能であり、コラ
ーゲンとヒアルロン酸との混合物を含む被覆層の形成方
法、または、その部位については特に限定されるもので
は無く、任意の組み合わせが可能である。

【００３９】上記の各種架橋方法により、架橋処理を施
される対象としては、膜を構成する不織布層、コラーゲ
ンからなるスポンジ層、コラーゲンとヒアルロン酸との
混合物を含む被覆層、およびこれらが一体化され積層化
された癒着防止膜の一部または全部が対象となる。ま
た、架橋の順序、架橋方法の組み合わせは任意であり、
特に限定されない。しかし、最も好ましくは、コラーゲ
ン繊維からなる不織布層においてグルタルアルデヒドな
どのアルデヒト類を用いて架橋を施し、しかる後にコラ
ーゲンからなるスポンジ層およびコラーゲンとヒアルロ
ン酸との混合物を含む被覆層を形成し、これと一体化さ
せ、最後に熱脱水架橋を施す。これらの方法において
は、コラーゲンの紡糸、不織布化の工程において、エタ
ノール等の凝固剤と、グルタルアルデヒドに代表される
架橋剤類を混合し、紡糸と架橋の工程を一度に行う方法
なども含まれる。酸可溶化コラーゲンは、そのまま癒着
防止膜の材料として生体に使用すれば、周囲の体液等を
酸性化してしまう場合がある。これを避けるため、水溶
液中で炭酸アルカリ金属（例、炭酸ナトリウム、炭酸カ
リウム等）、炭酸水素アルカリ金属（例、炭酸水素ナト
リウム等）、水酸化アルカリ金属（例、水酸化ナトリウ
ム等）などにより中和した塩として用いてもよい。ま
た、アルカリ可溶化コラーゲンは、無機酸（例、希塩
酸、希硝酸等）、有機酸（例、酢酸、クエン酸等）など
により中和した塩として用いてもよい（以下の場合も同
様）。酸（希塩酸、希硝酸、酢酸等）で中和して用いて
もよい。中性可溶化コラーゲンはそのまま用いてもよ
い。

【００４０】本発明の癒着防止膜は、縫合強度、生体適
合性、生体内分解・吸収性、組織再生の促進・誘導の点
において優れた癒着防止膜である。コラーゲン繊維から
なる不織布層において、バインダー処理を行う場合に
は、これにより形成される層をも熱脱水架橋することが
良い。しかし、これはあくまでも一例であって、例え
ば、全ての層を熱脱水架橋により処理しても、何ら問題
は無く、また、滅菌と架橋を兼ねて、例えばγ線を照射
しても良い。

【００４１】上記方法により得られる不織布層とコラー
ゲンからなるスポンジ層およびコラーゲンとヒアルロン
酸との混合物を含む被覆層を有する癒着防止膜は、さら
に圧縮成形することが可能である。コラーゲンからなる
スポンジ層およびコラーゲンとヒアルロン酸との混合物
を含む被覆層を単独で圧縮した後に、圧縮されていない
不織布層と組み合わせて一体化しても良い。特に好まし
くは、製膜の最終工程において不織布層とコラーゲンか
らなるスポンジ層およびコラーゲンとヒアルロン酸との
混合物を含む被覆層が一体化されているものを同時に圧
縮することである。これは圧縮することにより膜厚が減
少し、薄膜化されることで、手術現場において実際に癒
着防止膜を使用する際に、縫合における縫合針の貫通
性、任意の形状への切断等の取り扱いが特に向上し、移
植手術等がより円滑に行える。圧縮の方法は汎用のプレ
ス機で行うことが可能であるが、医療用途を目的とする
ことから、十分に丈夫な滅菌済みの包装材、例えばアル
ミパック、高強度樹脂包装材等により無菌的に包装され
た状態で圧縮されることが望ましい。また、癒着防止膜
を圧縮する圧力に関しては、膜本体を破壊しない範囲に
おいて特に制限はされないが、通常、１０〜１０００ｋ
ｇｆ/ｃｍ２ であることが望ましい。

【００４２】本発明の癒着防止膜は、生体適合性が良好
であり、副作用がほとんどなく生体内で長期間安定に癒
着防止効果を発揮し、しかも縫合可能であるため、例え
ば胸膜、心膜、脳硬膜、漿膜などの生体内膜状組織およ
び各種臓器などの欠損部または切断面への補填、補綴用
膜として用いられる。本発明の癒着防止膜は自体公知の
方法により、人間や動物に安全に使用できる。

【００４３】

【実施例】以下に実施例、実験例を示して本発明を詳細
に説明する。以下、本発明を実施例を用いて詳細に説明
する。本発明の実施例で使用するコラーゲンはアテロ化
した酸可溶化コラーゲンであるブタ由来Ｉ型混合コラー
ゲン粉末（日本ハム株式会社製、SOFDタイプ、Lot No.0
102226）を用い、ヒアルロン酸はヒルネート注キット
（菱山製薬株式会社製）を用いた。

【００４４】（実施例１） 癒着防止膜（３層状）の作
製 （１）コラーゲン繊維からなる不織布層の作製 酸可溶化コラーゲン７重量％水溶液１５０ｍＬを９９.
５容量％エタノール（和光純薬製、特級）３Ｌ凝固浴中
に押し出し脱水凝固後、得られたコラーゲン糸を、特開
２０００−９３４９７に記載の方法に従って積層させコ
ラーゲン不織布を得た。次に、得られたコラーゲン不織
布をクリーンベンチ内で風乾させた後に、そのままバキ
ュームドライオーブン（EYELA社製：VOS-300VD型）中に
て高真空下（１torr以下）、１２０℃、２４時間の条件
で、熱脱水架橋反応を施した。架橋反応終了後、架橋さ
れたコラーゲン不織布の糸間の隙間を埋めるために、バ
インダー処理として、コラーゲン１重量％水溶液をコラ
ーゲン不織布に塗り込んだあと、乾燥を行った。塗り込
み操作と乾燥操作を３回繰り返すことによって、コラー
ゲン繊維からなる不織布層を得た。その後、バキューム
ドライオーブン（EYELA社製：VOS-300VD型）中にて高真
空下（１torr以下）、１２０℃で１２時間加熱し、塗り
込んだコラーゲンに熱脱水架橋反応を施した。架橋反応
後、コラーゲン膜状物を０．１Ｎ水酸化ナトリウム水溶
液中に３０分間浸して中和処理を行った後、水酸化ナト
リウム水溶液中から取出した。コラーゲン繊維からなる
不織布層表面に残存した水酸化ナトリウムを蒸留水によ
り洗浄し、クリーンベンチ内で風乾した。

【００４５】（２）コラーゲンとヒアルロン酸の混合物
を含むスポンジ状の被覆層、およびコラーゲンからなる
スポンジ層の作製 ヒアルロン酸１重量％水溶液と等量のコラーゲン１重量
％水溶液を混合し、コラーゲンとヒアルロン酸との等量
混合物２５０ｍＬを得た。酸性状態にある該混合物を
０．１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液で中和した後、直方体
状に空間を有する金属製の器（縦１１ｃｍ、横１１ｃ
ｍ）の中に充填し、-２０℃で一夜凍結した。該凍結物
を凍結乾燥機（EYELA社製：FDU-830型）にて減圧下（１
torr以下）で約２４時間凍結乾燥して、コラーゲンとヒ
アルロン酸との混合物を含むスポンジ状の被覆層を得
た。コラーゲンからなるスポンジ層も同様の手法を用い
て、コラーゲン１重量％水溶液２５０ｍＬから作製し
た。

【００４６】（３）上記（２）で得られたコラーゲンか
らなるスポンジ層を圧縮機（井内盛栄堂社製：１５ｔプ
レス機）にて１００ｋｇｆ/ｃｍ^２の圧力で圧縮したの
ち、これと上記（１）で得られたコラーゲン繊維からな
る不織布層とをコラーゲン１重量％水溶液で接着して二
層構造物を得た。上記（２）で得られたコラーゲンとヒ
アルロン酸との混合物を含むスポンジ状の被覆層をコラ
ーゲンからなるスポンジ層の圧縮操作と同様に圧縮した
後、これを該二層構造物のコラーゲン繊維からなる不織
布層の上に、コラーゲンとヒアルロン酸との混合物を含
む溶液で接着した。このようにして、コラーゲン繊維か
らなる不織布層の一方の面にコラーゲンからなるスポン
ジ層、反対側の面にコラーゲンとヒアルロン酸との混合
物を含むスポンジ状の被覆層の３種類の層からなる積層
構造を有する癒着防止膜を得た。その後、癒着防止膜の
コラーゲンおよびヒアルロン酸を前述の架橋反応処理と
同様にバキュームドライオーブン（EYELA社製：VOS-300
VD型）中にて高真空下（１torr以下）、１１０℃で２４
時間加熱し、熱脱水架橋反応を行った。このようにし
て、癒着防止層として外層にコラーゲンとヒアルロン酸
との混合物を含むスポンジ状の被覆層が、もう一方の外
層に細胞の接着・成長する足場、組織再生誘導の促進を
担うコラーゲンからなるスポンジ層、中心層に縫合固定
に耐えうる強度を維持するためのコラーゲン繊維からな
る不織布層の３種類の層を有する厚さ約３ｍｍの癒着防
止膜を得た。

【００４７】（実施例２） 癒着防止膜（５層状）の作
製 実施例１と同様の手法を用いてコラーゲン繊維からなる
不織布層、圧縮されたコラーゲンからなるスポンジ層２
枚、圧縮されたコラーゲンとヒアルロン酸との混合物を
含むスポンジ状の被覆層２枚を各々作製した。コラーゲ
ンからなるスポンジ層をコラーゲン繊維からなる不織布
層の両表面に実施例１同様に接着し、積層構造物を得
た。さらに、該積層構造物の両表面にコラーゲンとヒア
ルロン酸との混合物を含むスポンジ状の被覆層を実施例
１同様に接着し、熱脱水架橋処理をバキュームドライオ
ーブン（EYELA社製：VOS-300VD型）中にて高真空下（１
torr以下）、１１０℃、２４時間の条件で施した。この
ようにして、中心に縫合に耐えうる強度を担うコラーゲ
ン繊維からなる不織布層、その両表面に組織の再生・誘
導促進を担うコラーゲンからなるスポンジ層、さらに外
層に癒着防止能を発揮するコラーゲンとヒアルロン酸の
混合物を含むスポンジ状の被覆層を有する合計５層構造
からなる厚さ約５ｍｍの癒着防止膜を得た。

【００４８】（実施例３） 癒着防止膜（４層状）の作
製 実施例１と同様の手法を用いてコラーゲン繊維からなる
不織布層、圧縮されたコラーゲンからなるスポンジ層２
枚、および圧縮されたコラーゲンとヒアルロン酸の混合
物を含むスポンジ状の被覆層１枚を各々作製した。コラ
ーゲンからなるスポンジ層をコラーゲン繊維からなる不
織布層の両面に実施例１と同様に接着し、３層積層構造
物を得た。さらに、該積層構造物の一方の面にコラーゲ
ンとヒアルロン酸の混合物を含むスポンジ状の被覆層を
実施例１と同様に接着し、熱脱水架橋処理をバキューム
ドライオーブン（EYELA社製：VOS-300VD型）中にて高真
空下（１torr以下）、１１０℃、２４時間の条件で施し
た。このようにして、中心に縫合に耐えうる強度を担う
コラーゲン繊維からなる不織布層、その両表面に組織の
再生・誘導促進を担うコラーゲンからなるスポンジ層、
該積層構造物の一方の面に、癒着防止能を発揮するコラ
ーゲンとヒアルロン酸の混合物を含むスポンジ状の被覆
層を有した、合計４層構造からなる厚さ約４ｍｍの癒着
防止膜を得た。

【００４９】（実施例４） スポンジ作製と不織布への
貼付 実施例１と同様にコラーゲン繊維からなる不織布層を作
製した後、コラーゲン１重量％溶液２５０ｍＬ（溶液
Ａ）、およびコラーゲン１重量％溶液とヒアルロン酸１
重量％水溶液との等量混合物からなる水溶液２５０ｍＬ
（溶液Ｂ）を調製し、０．１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液
で中和処理した。次に、図１のように金属製の平板１の
上にコラーゲン繊維からなる不織布層２を置き、その上
に液漏れ防止用のポリフッ化エチレン系繊維ゴム製パッ
キン３をのせて、上部に開口部４１を有する形状の金属
製の充填容器４を被せ、しっかりと固定した（図１）。
続いて充填容器４（縦１５ｃｍ、横１５ｃｍ）の最上部
の開口部４１から充填容器４中に溶液Ａを充填し、-２
０℃で１２時間凍結した。該凍結物を凍結乾燥機（EYEL
A社製：FDU-830型）にて減圧下（１torr以下）で約２４
時間凍結乾燥して、コラーゲン繊維からなる不織布層の
上にコラーゲンからなるスポンジ層を作製・接着した二
層構造物を得た。該二層構造物を圧縮機（井内盛栄堂社
製：１５ｔプレス機）にて１００ｋｇｆ/ｃｍ^２の圧力
で圧縮した。次に溶液Ａを充填した側とは反対側の不織
布層に同様にして溶液Ｂを充填し溶液Ａと同様にスポン
ジ層を作製・接着し、圧縮した。このようにして、スポ
ンジ層の作製と不織布層への接着を同時に行い、コラー
ゲン繊維からなる不織布層の上にコラーゲンからなるス
ポンジ層、コラーゲンとヒアルロン酸の混合物を含むス
ポンジ状の被覆層を有した３層構造物が得られた。

【００５０】（実施例５） 癒着防止膜（５層状）の作
製 （１）架橋反応後、コラーゲン繊維からなる不織布層を
7.5%炭酸水素ナトリウム水溶液中に３０分浸して中和処
理を行った後、炭酸水素ナトリウム水溶液中から取出
し、不織布層表面に残存した炭酸水素ナトリウムを蒸留
水により洗浄し、クリーンベンチ内で風乾する操作以外
は、実施例１と同様にしてコラーゲン繊維からなる不織
布層を得た。 （２）別途、実施例１と同様にしてコラーゲンとヒアル
ロン酸との混合物を含むスポンジ状の被覆層、およびコ
ラーゲンからなるスポンジ層を各々２枚作製した。 （３）次にコラーゲン不織布からなる膜状物の両面に該
スポンジ状の被覆層を実施例１と同様の手法を用いて接
着し、熱脱水架橋を施すことで、中心に縫合に耐えうる
強度を担うコラーゲン繊維からなる不織布層、その両表
面に組織の再生・誘導促進を担うコラーゲンからなるス
ポンジ層、さらに外層に癒着防止能を発揮するコラーゲ
ンとヒアルロン酸の混合物を含むスポンジ状の被覆層を
有する合計５層構造からなる厚さ約５ｍｍの癒着防止膜
を得た。

【００５１】（実施例６） 癒着防止膜（５層状）の作
製 （１）実施例５と同様にして、コラーゲン繊維からなる
不織布層を作製した。 （２）別途、以下の手順でコラーゲンとヒアルロン酸の
混合物を含むスポンジ状の被覆層、およびコラーゲンか
らなるスポンジ層を各々２枚作製した。 コラーゲン１重量％水溶液１２５ｍＬとヒアルロン酸１
重量％水溶液１２５ｍＬを調製し、混合した後に１Ｎ
ＨＮＯ_３を用いてｐＨ１．５に調整した。混合物を−２
０℃にて２４時間凍結し、室温にて融解することで、コ
ラーゲンとヒアルロン酸の混合物からなるゲル状物を得
た。得られたゲル状物をリン酸緩衝液中に３０分間浸し
て中和し、次に滅菌蒸留水中で洗浄を３０分間行い、洗
浄を合計３回行った。中和されたゲル状物を実施例１と
同様の手順にて凍結乾燥をすることで、コラーゲンとヒ
アルロン酸の混合物を含むスポンジ状の被覆層を得た。
コラーゲンからなるスポンジ層は実施例１と同様の手法
を用いて、コラーゲン１重量％水溶液２５０ｍＬから作
製した。

【００５２】（３）その他の操作は実施例と同様にして
行い、中心に縫合に耐えうる強度を担うコラーゲン繊維
からなる不織布層、その両表面に組織の再生・誘導促進
を担うコラーゲンからなるスポンジ層、さらに外層に癒
着防止能を発揮するコラーゲンとヒアルロン酸の混合物
を含むスポンジ状の被覆層を有する合計５層構造からな
る厚さ約５ｍｍの癒着防止膜を得た。

【００５３】（実施例７） 癒着防止膜（５層状）の作
製 （１）実施例５と同様にして、コラーゲン繊維からなる
不織布層を作製した。

【００５４】（２）別途、コラーゲンからなるスポンジ
層は実施例１と同様の手法を用いて２枚作製した。ま
た、以下の手順でコラーゲンとヒアルロン酸との混合物
を含むフィルム状の被覆層を作製した。ヒアルロン酸１
重量％水溶液と等量のコラーゲン１重量％水溶液を混合
し、ヒアルロン酸とコラーゲンとの等量混合物約１２５
ｍＬを得た。酸性状態にある該混合物を０．１Ｎ水酸化
ナトリウム水溶液で中和した後、上部に開口部を有する
充填容器中に充填しクリーンベンチ内で風乾すること
で、コラーゲンとヒアルロン酸との混合物を含むフィル
ム状の被覆層を１枚作製した。同様にして、もう１枚の
コラーゲンとヒアルロン酸との混合物を含むフィルム状
の被覆層を作成した。

【００５５】（３）コラーゲンからなるスポンジ層を圧
縮機（井内盛栄堂社製：１５ｔプレス機）にて１００ｋ
ｇｆ/ｃｍ^２の圧力で圧縮したのち、これを上記（１）
で得られたコラーゲン繊維からなる不織布層の両面にコ
ラーゲン１重量％水溶液で接着して三層構造物を得た。
上記（２）で得られたコラーゲンとヒアルロン酸の混合
物を含むフィルム状の被覆層を該三層構造物の外層に、
コラーゲンとヒアルロン酸との混合物を含む溶液で接着
した。その後、各層および接着に用いたコラーゲンおよ
びコラーゲンとヒアルロン酸との混合物を前述の架橋反
応処理と同様にバキュームドライオーブン（EYELA社
製：VOS-300VD型）中にて高真空下（１torr以下）、１
１０℃で２４時間加熱し、熱脱水架橋反応を行った。こ
のようにして、癒着防止層として最外層にコラーゲンと
ヒアルロン酸との混合物を含むフィルム状の被覆層、そ
の内層に細胞の接着・成長する足場、組織再生誘導の促
進を担うコラーゲンからなるスポンジ層が圧縮された
層、中心層に縫合固定に耐えうる強度を維持するための
コラーゲン繊維からなる不織布層の３種類の層を有する
厚さ約５ｍｍの５層積層構造からなる癒着防止膜を得
た。

【００５６】（実験例１） 耐分解性試験 試料１〜３としてコラーゲンとヒアルロン酸の混合比を
変えた（３：７、５：５、７：３）スポンジ状の被覆層
を有する癒着防止膜を実施例１と同様に作製した。試料
は１ｃｍ×１ｃｍ平方に切断して試験に使用した。比較
試料としてヒアルロン酸からなるスポンジ状の被覆層を
有する癒着防止膜を作製し、試料１〜３同様に切断して
試験に使用した。各々の試料にはバキュームドライオー
ブン（EYELA社製：VOS-300VD型）中にて高真空下（１to
rr以下）、１１０℃、２４時間の条件で、熱脱水架橋を
施した。各試料を注射用蒸留水１０ｍＬ中で３７℃恒温
漕にて定温保存し、経時的変化を３０分、２４時間、３
日後の３点で被覆層の面積を測定し、その減少率により
分解の度合いを観察し、耐分解性を表１に示す評価基準
によって評価した。評価結果を表２に示す。

【００５７】

【表１】耐分解性スコアリング

【００５８】

【表２】耐分解性試験

【００５９】表２から明らかなように、比較試料（ヒア
ルロン酸単独）は１日後には完全溶解していた。実際に
は３０分〜１時間以内に完全溶解してしまった。また、
ヒアルロン酸の比率が高い試料３は、３日後には完全分
解していた。試料１、２は３日後にもその形状を維持し
つつ残存している事が観察された。また、３日後の試料
２については用手的に調べたところ、ヒアルロン酸特有
の粘性が保持されていることが確認できた。このことか
ら、ヒアルロン酸とコラーゲンを混合することで、飛躍
的に耐分解性が向上することが確認された。

【００６０】（実験例２） 埋植試験 実施例１で得られた癒着防止膜を、ウサギ（ｎ＝8）の
背部筋肉内に埋植して、その組織反応を肉眼と光学顕微
鏡により観察し、生体適合性を評価した。埋植試料は、
実施例１で得られた癒着防止膜を１.５ｍｍ×１０ｍｍ
の大きさに切断して使用した。また、比較試料として
は、高密度ポリエチレンプレートを試料と同じ大きさに
切断して使用した。なお、比較試料はEOG滅菌を行って
使用した。試料膜は２５ｋＧｙのγ線を照射して滅菌し
た後に埋植試験に使用した。埋植はまず、ウサギ（体重
約２.５ｋｇ〜３.０ｋｇ）に通常の吸入麻酔を行い、次
に無菌的にウサギ背部脊髄を挟んで左に比較試料、右に
間隔を置いて、試料二種類を各々埋植した。埋植方法
は、滅菌した１５ゲージの注射針を用いて皮膚表面に対
して約３０゜の角度より刺入して、注射針内に充填して
おいた試料膜および比較試料を押し出して、ウサギ筋肉
内に埋植した。この後、埋植１週間後の４羽、さらに４
週間後に４羽を観察対象として使用した。各観察時間に
おいて、ウサギ４羽のうち２羽については、麻酔下で試
料埋植部位を切開し、埋植部分と周辺組織の観察を炎症
反応を中心に目視による観察を行った。

【００６１】これらの観察結果より、いずれの観察時間
において、また、全てのウサギにおいて、試料膜は比較
試料に対して顕著な炎症反応等を示さず、本発明により
得られる癒着防止膜の生体適合性が良好であることが分
かった。なお、埋植後４週間経過した場合においては、
試料膜の一部が分解・吸収されていることが見受けられ
た。

【００６２】（実験例３） 癒着防止作用試験 実施例１により得られた、コラーゲンとヒアルロン酸と
の混合物からなるスポンジ状の被覆層を有する癒着防止
膜（以下試料１）を、ウサギ（ｎ＝８）の腹壁欠損部
（１ｃｍ平方）および腸漿膜をメスで剥離した部分に埋
植・縫合固定した。埋植後１週間後、６週間後に開腹し
て癒着防止膜の残存量から耐分解性、癒着の程度から癒
着防止効果を観察した。この時、欠損部のみの箇所（以
下比較１）、ヒアルロン酸スポンジからなる被覆層を有
する癒着防止膜（以下比較２）を比較試料として比較評
価を行った。

【００６３】試料１と比較２を比較した結果、１週間後
における残存量に関しては、試料１では被覆層が残存し
ていたが、比較２ではヒアルロン酸からなる被覆層は全
て分解・吸収されてしまっていた。６週間後では、試料
１に関しても被覆層だけでなく癒着防止膜自体が分解・
吸収されていた。このことからも、コラーゲンとヒアル
ロン酸を混合することで耐分解性が向上したことが判明
した。すなわち、癒着防止効果の持続性が向上すること
は明らかである。

【００６４】また癒着防止効果については、表３に示す
判断基準に基づき評価を行った。評価結果を表４に示
す。

【００６５】

【表３】癒着の程度判別基準

【００６６】

【表４】癒着防止効果の評価結果

【００６７】表４から明らかなように、６週間後におい
て試料１では等級分類２以上の癒着を認めた例が無かっ
たのに対して、比較１は等級４以上、比較２では等級３
以上の癒着を認めた。以上より、本発明の癒着防止膜が
有効な癒着防止効果を有し、かつ高い耐分解性を有する
ことが明らかとなった。以上のことから、本発明の癒着
防止膜はその表面にコラーゲンとヒアルロン酸との混合
物を含む被覆層を有することにより、癒着防止効果、耐
分解性において優れることは明白である。

【００６８】

【本発明の効果】本発明の癒着防止膜は、縫合強度、生
体適合性、癒着防止性能を合わせ持つ。特に、コラーゲ
ンとヒアルロン酸との混合物を含む癒着防止層は高い耐
分解性を有し、癒着防止効果の継続時間を飛躍的に延ば
すものである。よって、手術などにおける生体内の損傷
部位もしくは出血部位、またはそれらと正常部位との癒
着を防止することができる縫合可能な人工生体膜として
非常に有用である。

【図面の簡単な説明】

【図１】 本発明の実施例４の説明図である。

【符号の説明】

１． 平板 ２． コラーゲン繊維からなる不織布層 ３． パッキン ４． 充填容器 ４１．開口部

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Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 コラーゲン繊維からなる不織布層とコラ
   ーゲンからなるスポンジ層とを有する積層膜状物の表面
   に、コラーゲンとヒアルロン酸との混合物を含む被覆層
   を有してなる癒着防止膜。
2. 【請求項２】 コラーゲンとヒアルロン酸との混合物を
   含む被覆層がスポンジ状もしくはフィルム状である請求
   項１記載の癒着防止膜。
3. 【請求項３】 コラーゲンとヒアルロン酸との混合物を
   含む被覆層がコラーゲンとヒアルロン酸との混合物を架
   橋反応に付してなる層である請求項１記載の癒着防止
   膜。
4. 【請求項４】 コラーゲンとヒアルロン酸との混合物を
   含む被覆層の厚さが約５０μｍ〜２０ｍｍである請求項
   １記載の癒着防止膜。
5. 【請求項５】 癒着防止膜を構成するコラーゲンが、酵
   素可溶化コラーゲン、酸可溶化コラーゲン、アルカリ可
   溶化コラーゲンまたは中性可溶化コラーゲンである請求
   項１記載の癒着防止膜。
6. 【請求項６】 癒着防止膜を構成するコラーゲンの一部
   もしくは全部が架橋されている請求項１記載の癒着防止
   膜。
7. 【請求項７】 コラーゲン繊維からなる不織布層が
   （１）コラーゲンまたは（２）コラーゲンとヒアルロン
   酸との混合物でコラーゲン繊維が互いに接合された不織
   布の層である請求項１記載の癒着防止膜。
8. 【請求項８】 コラーゲン繊維からなる不織布層の厚さ
   が５０μｍ〜１０ｍｍであり、コラーゲンからなるスポ
   ンジ層の厚さが５０μｍ〜２０ｍｍであり、コラーゲン
   とヒアルロン酸の混合物を含む被覆層の厚さが５０μｍ
   〜２０ｍｍである請求項１記載の癒着防止膜。
9. 【請求項９】 コラーゲン繊維からなる不織布層が、コ
   ラーゲン繊維からなる不織布を１〜６枚積層させたもの
   である、請求項１記載の癒着防止膜。
10. 【請求項１０】 コラーゲン繊維の直径が約１０〜１，
    ０００μｍ、コラーゲン繊維からなる不織布層の嵩密度
    が約５×１０^−４〜５０ｇ／ｃｍ^３である請求項１記載
    の癒着防止膜。
11. 【請求項１１】 膜全体の厚さが約１５０μｍ〜５０ｍ
    ｍである請求項１記載の癒着防止膜。