JP2003246795A

JP2003246795A - 新規なワカメペプチド、ｌ−イソロイシル−ｌ−チロシンおよび血圧降下剤

Info

Publication number: JP2003246795A
Application number: JP2002100621A
Authority: JP
Inventors: Kunio Suetsuna; 邦男末綱
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2002-02-25
Filing date: 2002-02-25
Publication date: 2003-09-02

Abstract

(57)【要約】【目的】ワカメのプロテアーゼＳアマノおよびプロレザ
ーＦＧ−分解液から、アンジオテンシン変換酵素阻害作
用を有し、血圧降下作用を有する新規なワカメペプチ
ド、Ｌ−イソロイシル−Ｌ−チロシンを提供する。【構成】ワカメをプロテアーゼ等で分解処理し、新規な
アンジオテンシン変換酵素阻害作用を有するジペプチド
はＬ−イソロイシル−Ｌ−チロシンであり、この新規な
ワカメペプチドは生体内での血圧降下作用を有し、毒性
も極めて低い。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、医薬品として有用性を
有するＬ−イソロイシル−Ｌ−チロシンで示されるジペ
プチド構造を有する新規なワカメペプチドならびにその
新規なワカメペプチドを有効成分とする血圧降下剤に関
する。

【０００２】

【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】近年、
海藻由来の食品たんぱく質の酵素分解中にアンジオテン
シン変換酵素（ＡＣＥ）阻害ペプチド等の薬理活性ペプ
チドが本発明者によって報告されてきた。すなわち、海
苔たんぱく質由来のＡＣＥ阻害ペプチドとしてＩｌｅ−
Ｔｙｒ；Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ；Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｔ
ｙｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ；Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ等「マ
リンバイオテクノロジー、６巻、１６３頁、１９９８
年」が、ヒジキたんぱく質由来のＡＣＥ阻害ペプチドと
してＧｌｙ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ；Ｓｅｒ−Ｖａｌ−Ｔｙ
ｒ；Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ等「日本水産学会
誌、６４巻、８６２頁、１９９８年」が報告されてきて
いる。微藻類由来としては、クロレラ・スピルリナたん
ぱく質由来のＡＣＥ阻害ペプチドとしてＩｌｅ−Ｖａｌ
−Ｖａｌ−Ｇｌｕ；Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ；Ｐｈｅ−
Ａｌａ−Ｌｅｕ，Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ，Ｖａｌ−Ｖ
ａｌ−Ｐｒｏ−Ａｌａ，Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｇｌｕ；Ｉｌ
ｅ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ，Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｐｈｅ
等「マリンバイオテクノロジー、３巻、３０５頁、２０
０１年」が報告されてきている。又、ニンニク抽出物か
らはＳｅｒ−Ｔｙｒ；Ｇｌｙ−Ｔｙｒ；Ｐｈｅ−Ｔｙ
ｒ；Ａｓｎ−Ｔｙｒ；Ｓｅｒ−Ｐｈｅ；Ｇｌｙ−Ｐｈ
ｅ；Ａｓｎ−Ｐｈｅ等「ジャーナル・ニュートリショナ
ル・バイケミストリー、９巻、４１５頁、１９９８年」
が報告されてきている。更には，ワカメたんぱく質由来
のＡＣＥ阻害ペプチドとしてＡｌａ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−
Ｌｙｓ；Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ；Ｌｙｓ−Ｐ
ｈｅ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ；Ｔｙｒ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｌｅ
ｕ等「ジャーナル・ニュートリショナル・バイケミスト
リー、１１巻、４５０頁、２０００年」が報告されてき
ている。ところで、レニン−アンジオテンシン系が生体
の水・電解質及び血液の調節に重要な役割を果たしてい
ることはよく知られている。このレニン−アンジオテン
シン系にはアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）が存在
し、アンジオテンシンＩはＡＣＥによってアンジオテン
シンＩＩに変換される。アンジオテンシンＩＩは強力な
昇圧物質で、血管、副腎皮質のみならず中枢神経系なら
びに末梢神経系に働いて血圧上昇を促す。又、ＡＣＥは
生体内降圧物質であるブラジキニンを分解し、不活性化
する作用を有し、昇圧系に関与している。従って、ＡＣ
Ｅの活性を阻害することによって血圧を降下させること
が可能であり、又、そのことは臨床的に高血圧の予防、
治療に有効であると考えられている。この目的のためプ
ロリン誘導体であるカプトリルが合成され、その降圧作
用が確認されて以来、カプトリルの構造研究に基づく種
々のＡＣＥ阻害剤の合成研究が盛んに行われ、最近では
マレイン酸エナラブリルやアラセブリル等の物質が、次
々と臨床の場に供されている。現在、ＡＣＥ阻害剤は本
態性高血圧症、病候性高血圧症を問わず、又、軽症、重
症を問わず、幅広く用いられ、高血圧症の第一次選択の
治療薬中に加えられ、多く優れた点を有することが見出
されている。一方、ＡＣＥ阻害物質の作用機序として
は、アンジオテンシンＩＩの産生抑制によるアルドステ
ロンやバソプレッシンの分泌抑制、又、腎動脈収縮の解
除によるナトリウムや水の排泄促進が考えられている。
更に、ＡＣＥ阻害剤については、それがカリクレン−キ
ニン系の不活性化を抑制し、プロスタグランジン系を賦
活させることにより末梢血管拡張やナトリウム及び水の
排泄を更に促進させると考えられており、心不全の悪循
環を断つ上で合目的な治療薬として期待されている。Ａ
ＣＥ阻害物質としては、上記の合成品の他に天然物又は
天然物由来の物質として蛇毒由来のブラジキニン増強因
子（Ｃ末端がＰｒｏ）［Ｓ．Ｈ．Ｆｅｒｒｅｉａｅｔ
ａｌ：Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，９，３５８３（１
９７０）］、ゼラチンのコラゲナーゼ消化物由来、６種
類のペプチド（いずれもＣ末端がＡｌａ−Ｈｙｐ）
［Ｇ．Ｏｓｈｉｍａｅｔａｌ：Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉ
ｏｐｈｓ．Ａｃｔａ，５６６，１２８（１９７９）］、
牛カゼインのトリプシン消化物由来のペプチド（Ｃ末端
がＧｌｙ−Ｌｙｓ）［Ｓ．Ｍａｒｕｙａｍａｅｔａ
ｌ．：Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，４６，１３
９３（１９８３）］等に始まり本発明者等のイワシ筋肉
由来の５種のヘクサペウチド（いずれもＣ末端から２番
目又は３番目がＰｒｏ、Ｎ末端がＬｅｕ）［特許第２０
４６４８３号］、海苔たんぱく質由来のテトラペプチド
（Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｌａ）［特許第２６７８
１８０号］、朝鮮人参たんぱく質由来のペンタペプチド
（Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｙ）［特許第
２９２０８２９号］、クロレラたんぱく質由来のペンタ
ペプチド（Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｌａ）
及び３種のワカメたんぱく質由来のテトラペプチド（Ｔ
ｙｒ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ，Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙ
ｒ−Ｔｙｒ，Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ）［特許
第３１０８９２０号］等が挙げられ、いずれもＡＣＥ阻
害剤となり得ることが開示されている。先に述べたよう
に、ＡＣＥ阻害剤としてのワカメたんぱく質由来のワカ
メペプチドに関する提案は本発明者によって多くの提案
「特願２００１−１１３２９５号、特願２００１−１１
８９１４号、特願２００１−２２８７５４号、特願２０
０１−３５５３６８号」がなされているが、ワカメペプ
チドの中で、規則性を持ったアミノ酸配列を有するジペ
プチドのＡＣＥ阻害作用（試験管内薬理効果）並びに経
口投与による降圧効果（生体内薬理効果）は不明であ
り、発見されて以来未だ医薬品としての開発が進んでい
るとの報告はない。（式中、アミノ酸残基を表す各記号
は、アミノ酸化学において慣用の表示法によるものであ
る。）

【０００３】

【課題を解決するための手段】本発明者は、褐藻コンブ
目（Ｌａｍｉｎａｒｉａｌｅｓ）の海藻種に属するワカ
メの蛋白質分解酵素の分解液から薬理作用を有する物質
を検索し、新規なワカメペプチドが強いアンジオテンシ
ン変換酵素阻害作用を有することを見出した。そして、
新規なワカメペプチドを医薬として実用化するための研
究を鋭意行った。その結果、この新規なワカメペプチド
が血圧降下作用を有し、天然物由来のアンジオテンシン
変換酵素阻害剤としての有用性を見出した。本発明は係
る知見に基づくものである。本発明に係る新規なワカメ
ペプチドは、Ｌ−イソロイシル−Ｌ−チロシンで示され
るジペプチド構造を有し、常温における性状は白色の粉
末である。

【０００４】本発明による新規なワカメペプチドは、化
学的に合成する方法またはワカメのたんぱく質分解酵素
の分解液から分離精製する方法を挙げることができる。
本発明に係る新規なワカメペプチドを化学的に合成する
場合には、液相法または固相法等の通常のペプチド合成
方法によって行うことができるが、好ましくは、固相法
によってポリマー性の固相支持体へＬ−イソロイシル−
Ｌ−チロシンのカルボキシル末端側（Ｃ末端）アミノ酸
に対応したＬ体のチロシンを順次ペプチド結合によって
結合して行くのが良い。そして、そのようにして得られ
た合成ジペプチドは、トリフルオロメタンスルホン酸、
フッ化水素等を用いてポロマー性の固相支持体から切断
した後、アミノ酸側鎖の保護基を除去し、逆相系のカラ
ムを用いた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）な
どを用いた通常の方法で精製することができる。

【０００５】上記したように、本発明に係る新規なワカ
メペプチドは、ワカメのたんぱく質分解酵素の分解液か
ら分離精製することができるが、その場合には、例えば
以下のようにして行うことができる。上記の新規なワカ
メペプチドを含有しているワカメのたんぱく質部分を用
いて加水分解する。加水分解は常法に従って行う。例え
ば、プロテアーゼＳアマノ、プロレザーＦＧ−１等のタ
ンパク質分解酵素で加水分解する場合は、ワカメを必要
とあれば更に加水分解した後、酵素の至適温度まで加温
しｐＨを至適値（ｐＨ８．０、ｐＨ１０．０）に調整し
酵素を加えてインキュベートする。次いで必要に応じ中
和した後、酵素を失活させて加水分解液を得る。その加
水分解物を濾紙及び／又はセライト等を用いて濾過する
ことによって不溶性成分を除去し、その得られた濾液を
セロファンなどの半透膜を用いて適当な溶媒（例えば、
水、トリス−塩酸緩衝液、リン酸緩衝液の中性の緩衝液
等）中で十分に透析し、その濾液中の成分で半透膜を通
過した成分を含む溶液を強酸性陽イオン交換樹脂（例え
ば、ダウケミカル社製のＤｏｗｅｘ５０Ｗ等）にかけ、
その吸着溶出分画からアンジオテンシン変換酵素（ＡＣ
Ｅ）阻害活性を有する成分を含有する分画を得、得られ
たＡＣＥ阻害活性画分をゲル濾過（例えば、ファルマシ
ア社製のＳｅｐｈａｄｅｘＧ−２５等）によって分画
し、得られたＡＣＥ阻害活性画分を陽イオン交換ゲル濾
過（例えば、ファルマシア社製のＳＰ−Ｓｅｐｈａｄｅ
ｘＣ−２５等）によって分画し、これらクロマトグラ
フィー精製により得られたＡＣＥ阻害活性画分を、更に
逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって
分画する。

【０００６】本発明に係る新規なワカメペプチドの製法
において用いる褐藻類としては、本発明の目的を達成で
きる限りいかなる褐藻類を用いても良いが、好ましくは
ワカメを用いるのが良い。以上のようにして得られた本
発明に係る新規なワカメペプチドは、静脈内へ繰り返し
投与を行った場合、抗体産生を惹起せず、アナフィラキ
シーショックを起こさせない。又、本発明に係る新規な
ワカメペプチドはＬ−アミノ酸のみの配列構造からな
り、投与後、生体内のプロテアーゼにより徐々に分解さ
れる為、毒性は極めて低く、安全性は極めて高い（ＬＤ
_５０＞５０００ｍｇ／ｋｇ；ラット経口投与）。本発明
に係る新規なワカメペプチドは、通常用いられる賦形剤
等の添加物を用いて注射剤、錠剤、カプセル剤、顆粒
剤、散剤等に調製することができる。投与方法として
は、通常は、ＡＣＥを有している哺乳類（例えば、ヒ
ト、イヌ、ラット等）に注射すること、あるいは経口投
与することがあげられる。投与量は、例えば、動物体１
ｋｇ当りこのワカメペプチドを０．０１〜１０ｍｇの量
である。投与回数は、通常１日１〜４回程度であるが、
投与経路によって、適宜、調製することができる。

【０００７】上記の各種製剤において用いられる賦形
剤、結合剤、潤沢剤の種類は、特に限定されず、通常の
注射剤、散剤、顆粒剤、錠剤あるいはカプセル剤に用い
られるものを使用することができる。錠剤、カプセル
剤、顆粒剤、散剤に用いる添加物としては、下記のもの
をあげることができる。賦形剤としては、結晶セルロー
ス等の糖類、マンニトール等の糖アルコール類、デンプ
ン類、無水リン酸カルシウム等；結合剤としては澱粉
類、ヒドロキシプロピルメチルセルローズ等；崩壊剤と
してはカルボキシメチルセルロース及びそのカリウム塩
類；潤滑剤としてはステアリン酸及びその塩類、タル
ク、ワックス類を挙げることができる。又、製剤の調整
にあたっては必要に応じメントール、クエン酸及びその
塩類、香料等の矯臭剤を用いることができる。注射用の
無菌組成物は、常法により、本発明に係る新規なペプチ
ドを、注射用水、生理食塩水及びキシリトールやマンニ
トール等の糖アルコール注射液、プロピレングリコール
やポリエチレングリコール等のグリコールに溶解または
懸濁させて注射剤とすることができる。この際、緩衝
液、防腐剤、酸化防止剤等を必要に応じて添加すること
ができる。本発明に係る新規なワカメペプチドを含有す
る製剤は凍結乾燥品又は乾燥粉末の形とし、用時、通常
の溶解剤、例えば水又は生理食塩液に溶解して用いるこ
ともできる。

【０００８】本発明に係る新規なワカメペプチドは優れ
たアンジオテンシン変換酵素阻害作用を有し、血圧降下
作用、ブラジキニン不活化抑制作用を示す。従って、本
態性高血圧、腎性高血圧、副腎性高血圧等の高血圧症の
予防、治療剤、これらうっ血性心不全に対する臓器循環
の正常化と長期予後の改善（延命効果）作用を有し、心
不全の治療剤として有用である。

【０００９】

【実施例】以下に実施例として、製造例および試験例を
記載し、本発明を更に詳細に説明する。製造例１徳島県鳴門市大毛島地区において、１９９８年１月から
６月にかけて採集した天然産ワカメを十分洗浄して供試
料とした。採集されたワカメ葉状部２．４ｋｇを細かく
刻み、０．５Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．９）２４Ｌ
を加え攪拌（３７℃、３６時間）後、グラスフィルター
（Ｇ−３）で吸引ろ過した。ろ過したペースト液を廃棄
し、得られた沈殿物に脱イオン水を加えてホモジナイズ
後、凍結乾燥してワカメ由来のたんぱく質とした。この
ワカメ由来のたんぱく質粉末の一般分析の結果は、水分
２．８ｇ／１００ｇ、たんぱく質７４．１ｇ／１００
ｇ、脂質２．１ｇ／１００ｇ、糖質１０．４ｇ／１００
ｇ／、繊維９．１ｇ／１００ｇ、灰分１．５ｇ／１００
ｇであった。上記調製したワカメ由来のたんぱく質粉末
１０ｇに脱イオン水２５０ｍＬを加えて作成したたんぱ
く質液に、天野製薬製プロテアーゼＳアマノあるいはプ
ロレザーＦＧ−１各々３００ｍｇ添加後、プロテアーゼ
Ｓアマノ添加たんぱく質液のｐＨを８．０に、又、プロ
レザーＦＧ−１添加たんぱく質液のｐＨを１０．０に調
整後、６５℃で５時間撹拌しながら酵素分解を行った。
分解反応液を直ちに限外濾過膜（アミコン社製、ＹＭ１
０型；分画分子量約１万）に通過させた通過液を、Ｄｏ
ｗｅｘ５０Ｗ×４［Ｈ^＋］カラム（φ４．０×５５ｃ
ｍ）に加えた。そのカラムを脱イオン水で十分洗滌した
後、２規定のアンモニウム水２Ｌを用いて溶出した。減
圧濃縮によりアンモニアを除去した後、濃縮液を予め脱
イオン水で緩衝化したＳｅｐｈａｄｅｘＧ−２５（φ
１．６×１１３ｃｍ）に負荷し、流速１２ｍＬ／ｈｒ、
各分画量５．７ｍιでゲル濾過を行った。ゲル濾過クロ
マトグラフィー後、ＡＣＥ阻害活性の高い画分を集め減
圧濃縮後、予め、脱イオン水で緩衝化したＳＰ−Ｓｅｐ
ｈａｄｅｘＣ−２５［Ｈ^＋］カラム（φ１．８×４０ｃ
ｍ）に負荷し、脱イオン水５００ｍＬから１．５％塩化
ナトリウム５００ｍιの濃度勾配法を行い、流速７０ｍ
Ｌ／ｈｒ、各分画量１０ｍＬでクロマトグラフィーを行
った。クロマトグラフィー後、ＡＣＥ阻害活性の高かっ
た画分を集めて凍結乾燥して精製ペプチド粉末を得た。
この精製ペプチド粉末２０ｍｇを６０μＬの脱イオン水
に溶解した後、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬ
Ｃ）を行った。カラムとしては野村化学社製Ｄｅｖｅｌ
ｏｓｉｌＯＤＳ−５（４．５ＥｍｍＩＤ×２５ｃｍ
Ｌ）を使用し、移動相としては０．０５％トリフルオロ
酢酸（以下、ＴＦＡと略記する。）から２５％アセトニ
トリル／０．０５％ＴＦＡの濃度勾配法を行い、流速
１．０ｍＬ／ｍｉｎ、検出波長２２０ｎｍでＨＰＬＣを
行い、プロテアーゼＳアマノ添加たんぱく質液由来のペ
プチドフラグメントとして溶出時間３４．５分に、又、
プロレザーＦＧ−１添加たんぱく質液由来のペプチドフ
ラグメントとして溶出時間４０．７分に、各々ＡＣＥ阻
害活性の高いペプチドフラグメントを得た。このように
して得られたＡＣＥ阻害作用を有するペプチドのアミノ
酸配列は、アプライドバイオシステム（ＡＢＩ）社製の
プロテインシークエンサー４７７Ａ型を用いて決定され
た。その結果、Ｌ−イソロイシル−Ｌ−チロシンで示さ
れるジペプチド構造を有するワカメペプチドであること
が確認された。常温における性状は白色の粉末である。
尚、本発明に係るジペプチドすなわち新規なワカメペプ
チドをＡＣＥ阻害剤として、例えば錠剤に製剤する場合
には、常法に従って、例えば次のように処理すればよ
い：ワカメペプチド１１ｇ、乳糖６７ｇ、コーン
スターチ３８ｇ、ステアリン酸マグネシウム１．３ｇ
を原料とし、先ず、及び２１ｇのコーンスターチを
混和し、１２ｇのコーンスターチから作ったペーストと
ともに顆粒化し、この顆粒に８ｇのコーンスターチと
とを加え、得られた混合物を圧縮錠剤機で打錠し、錠剤
１０００個を製造する。

【００１０】製造例２本例は、合成法による製造例である。Ｌ−イソロイシル−Ｌ−チロシンの合成法アプライドバイオシステム社製のペプチド自動合成装置
４３０Ａ型を用いた固相法によって当該ジペプチドを合
成した。固相担体としては、スチレンジビニルベンゼン
共重合体（ポリスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹
脂を使用した。まず、当該ジペプチドのアミノ酸配列に
従って、常法どおり、そのＣ末端側のチロシンからクロ
ロメチル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。この
時のアミノ酸は、ｔ−ブトキシカルボニル（以下、ｔ−
Ｂｏｃと略記する。）基で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ
酸を使用した。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチ
オールとチオアニソールからなる混合液に懸濁し、室温
で１０分間撹拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、
更に１０分間撹拌した。この混合液にトリフルオロメタ
ンスルホン酸を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、無
水エーテルを加えてその生成物を沈澱させて分離し、そ
の沈澱物を無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾
燥した。このようにして得られた未精製の合成ペプチド
は蒸留水又はメタノールに溶解した後、逆相系のカラム
Ｃ_１８（５μｍ）を用いたＨＰＬＣにより精製した。移
動相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）
０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使用し、
（Ａ）液が６５分間で８３％→４０．５％の濃度勾配法
により流速２０．１ｍＬ／ｍｉｎでクロマトグラフィー
を行った。紫外部波長２２１ｎｍで検出し、最大の吸収
を示した溶出画分を分取し、これを凍結乾燥することに
よって目的とする合成ジペプチドを得た。

【００１１】この合成ジペプチドをマススペクトル分
析、アミノ酸分析及びアミノ酸配列決定機で、アミノ酸
組成がＬ−イソロイシル−Ｌ−チロシンで示されるジペ
プチド構造を有するワカメペプチドであることが確認さ
れた。合成によって得られた本発明係るジペプチドすな
わち新規なワカメペプチドは、以下に示す試験によって
薬理効果が確認された。

【００１２】試験例１（アンジオテンシン変換酵素阻害活性測定法）ＡＣＥ
（シグマ社製、酵素番号ＥＣ３．４．１５．１）２．５
ｍＵ、合成基質Ｈｉｐｐｕｒｙｌ−Ｌ−ｈｉｓｔｉｄｙ
ｌ−Ｌ−ｌｅｕｃｉｎｅ（ペプチド研究所製）１２．５
ｍＭを用いＬｉｅｂｅｒｍａｎの測定法を改良した山本
等の方法［日胸疾会誌，１８巻，２９７−３０２頁（１
９８９年）］に準じて測定した。すなわち、生成した馬
尿酸を酢酸エチルにて抽出し２２５ｎｍの吸光度で測定
した。被検液での吸光度をＥｓ、被検液の代わりに緩衝
液を加えた時の値をＥｃ、予め反応停止液を加えて反応
させた時の値をＥｂとして次式から阻害率を求めた。阻害率（％）＝（Ｅｃ−Ｅｓ）／（Ｅｃ−Ｅｂ）×１０
０ＡＣＥ阻害剤の阻害活性ＩＣ_５０値は、ＡＣＥの酵素活
性を５０％（阻害率）阻害するために必要な試料の濃度
（Ｍ）で示した。本発明に係るジペプチド；Ｌ−イソロ
イシル−Ｌ−チロシンの牛肺血清のアンジオテンシン変
換酵素に対する阻害活性（ＩＣ_５０値）は２．６５μＭ
である。

【００１３】試験例２（高血圧自然発症ラットへ投与時の降圧効果）実験動物
は日本チャールズ・リバー社より１５週齢雄性高血圧自
然発症ラット（以下、ＳＨＲと略記する。）を購入し、
１週間の予備飼育後、収縮期血圧が１６０ｍｍＨｇ以上
（体重２８０〜３３０ｇ）の動物６匹１群として用い
た。ラットは、室温２３±２℃、湿度５５±１０％およ
び１２時間明暗（午前６時〜午後６時点灯）に調整され
た飼育室でステンレスワイヤー製ラット用個別ゲージに
１匹ずつ収容し飼育した。飼料はオリエンタル酵母社製
ＭＦ粉末飼料を、飲水は自家揚水（水道水質基準適合）
をそれぞれ自由に摂取させた。血圧は非観血的尾動脈血
圧測定装置（理研開発社製、ＰＳ−１００型）を用いｔ
ａｉｌ−ｃｕｆｆ法により、投与前を０時間とし、投与
後２７時間までと、投与後９週目までの期間で、ＳＨＲ
尾動脈の収縮期血圧（ｍｍＨｇ、上値）、平均血圧（ｍ
ｍＨｇ）及び拡張期血圧（ｍｍＨｇ、下値）の測定を一
定時間毎に各５回づつ行い、得られた測定値の最高値と
最低値を棄却し、３回の平均値をもって各時間の測定値
とした。本発明に係る合成ジペプチド；Ｌ−イソロイシ
ル−Ｌ−チロシン１０ｍｇ／ｋｇをＳＨＲに２７時間ま
で経口投与した時の各血圧値（ｍｍＨｇ）についての結
果は、図１に示すとおりである。又、本発明に係る合成
ジペプチド；Ｌ−イソロイシル−Ｌ−チロシン１０ｍｇ
／ｋｇをＳＨＲに９週間まで経口投与した時の各血圧値
（ｍｍＨｇ）についての結果は、図２に示すとおりであ
る。これらの試験の結果、本発明係るジペプチドすなわ
ち新規なワカメペプチドは、アンジオテンシン変換酵素
阻害活性を有し、ｉｎｖｉｖｏ（生体内）においても
有意な血圧降下作用を示すことが確認された。従って、
本発明係るジペプチドすなわち新規なワカメペプチドは
高血圧症の治療又は予防薬として有用である。尚、本発
明係るジペプチドすなわちＬ−イソロイシル−Ｌ−チロ
シンは、構造的にそのアミノ酸配列を部分構造とするペ
プチドにおいて、構造中に採用することもできる。

【００１４】

【図面の簡単な説明】

【図１】製造例２で得られたワカメペプチド（合成ジペ
プチド；Ｌ−イソロイシル−Ｌ−チロシン）１０ｍｇ／
ｋｇを、ＳＨＲに２７時間まで経口投与した場合の収縮
期血圧値、平均血圧値及び拡張期血圧値（ｍｍＨｇ）の
変化を示す図である。

【図２】製造例２で得られたワカメペプチド（合成ジペ
プチド；Ｌ−イソロイシル−Ｌ−チロシン）１０ｍｇ／
ｋｇを、ＳＨＲに９週間まで経口投与した場合の収縮期
血圧値、平均血圧値及び拡張期血圧値（ｍｍＨｇ）の変
化を示す図である。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】Ｌ−イソロイシル−Ｌ−チロシンで
示されるジペプチド構造を有する新規なワカメペプチ
ド。
【請求項２】Ｌ−イソロイシル−Ｌ−チロシンで
示されるジペプチド構造を有する新規なワカメペプチド
を有効成分として含有することを特徴とする血圧降下
剤。