JP2003521902A - 卵特異的表面タンパク質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、卵母細胞内で発現させられたタンパク質と、これらのタンパク質をコードする核酸配列と、これらのタンパク質に対して発生する抗体とに関する。開示された卵母細胞タンパク質を避妊薬のターゲットとして使用する組成物および方法が提供される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 米国政府の権利 本発明は、国立保健研究所(National Institues of Health)による助成番号Ｈ
Ｄ Ｕ５４ ２９０９９に基づく米国政府支援によって為された。米国政府は本
発明における一定の権利を有する。 発明の分野 本発明は、卵・精子の結合および融合に関与し、ひいては卵表面上でエピトー
プに結合して受精能を調節する抗体を産出するのに適したターゲットをなす卵特
異的表面抗原に関する。雌動物の不妊化方法においてこのような抗原を使用する
方法が提供され、この方法は一時的な可逆避妊法に有用な抗体を生成する。 発明の背景 ヒトの避妊および動物個体集団の不妊化への免疫学的アプローチを開発するこ
とに関心が高まっている。避妊ワクチンがあれば、目下利用可能な避妊法を越え
る多くの利点が提供されることになる。ホルモン療法や、受精に抗する化学的ま
たは機械的なバリヤのような避妊法は、望ましくない副作用や、完全な効果を得
られないなどの重大な欠点を有している。例えばピルのようなホルモン療法の副
作用の一例としては癌が挙げられ、また機械的バリヤの場合には、感染しやすさ
が増大する。さらに、避妊ワクチンは、動物個体集団の受精能制御に有用になる
。この場合、頻繁に干渉する必要なしに長期間または永久的な不妊化が行われる
ことが望ましい。例えば長期間の不妊化は、ヒトの受精能制御または農業分野で
重要な家畜、例えばウシやブタの受精能を制御するのに有用となる。さらに、避
妊ワクチンは、げっ歯類動物または他の不所望な個体集団の不妊化のようなペス
ト・コントロールに有用な永久的な不妊化法に役立つことになる。

【０００２】 免疫避妊薬の開発に多くの関心が寄せられている中で、最近までは精子表面抗
原に向けられた免疫避妊薬の開発、または既知のペプチド・ホルモン、例えばヒ
ト絨毛性ゴナドトロピンや卵胞刺激ホルモンに焦点が当てられてきた。免疫避妊
ワクチンをベースとした有効な卵表面抗原の開発を阻むものの一つは、受精プロ
セスに直接的に関連することで知られる卵表面タンパク質の分子同一性に関する
知識が欠如していることである。

【０００３】 哺乳類の受精は一連の配偶子相互作用として定義することができる。この配偶
子相互作用においては、受精能獲得された精子が先ず卵丘細胞と透明帯（エッグ
・ベストメント）とを透過し、次いで、卵原形質膜（卵細胞膜）に結合し、これ
と融合しなければならない。配偶子間の最初の結合事象は、一次結合として知ら
れており、マウス・モデルでは、透明帯タンパク質ＺＰ３が精子上の受容体に結
合するときに発生する（（Mcleskey他、1998, Int. Rev. of Cytol. 177:57-113
)において検討されている）。このような結合事象はまた、先体反応を開始する
。この先体反応では、先体区画から加水分解酵素が放出され、この酵素は透明帯
に作用することにより、精子による透明帯の透過を容易にする。透明帯の透過は
二次結合として知られており、透明帯タンパク質ＺＰ２と、先体内膜の１つまた
は複数の分子とによって媒介される（SnellおよびWhite,1996, Cell 85;629-637
において検討されている）。

【０００４】 透明帯から出現すると、精子は次いで卵黄周囲腔を横切って、卵細胞膜に結合
してこれと融合する。精子・卵細胞膜の結合および融合の分子的機序はなおも完
全に解明しなければならないが、しかし最近の証拠によれば、この相互作用には
インテグリンが関与することが明らかにされている。Almeida他（1995, Cell 81
: 1095-1104)は、卵表面インテグリンα６β１に対するモノクローナル抗体で卵
母細胞を処置すると、マウスの精子・卵細胞膜結合が減じられることを見出した
。さらに、この研究者は、α６β１を発現する体細胞がマウスの精子と強い結合
力で結合するのに対し、α６またはβ１を欠いた体細胞はこのようには結合しな
いことを報告した。α６β１のために提案された精子表面リガンドはフェルチリ
ンである。フェルチリンは、ジスインテグリンとして知られるインテグリン・リ
ガンド群と同属のドメインを含有する（Blobel他,1992, Nature 356: 248-252)
。このジスインテグリンは分子のための細胞付着機能を示唆する。また、精子・
卵細胞膜の結合および融合をブロックする、フェルチリンに対するモノクローナ
ル抗体（Primakoff他、1987, J. Cell. Biol. 104:141-149)、および、フェルチ
リン・ペプチド類似物に対するモノクローナル抗体（Almeida他, 1995, Cell 81
:1095-1104; Evans他, 1995, J. Cell. Sci. 108:3267-3278）と共に、組換えフ
ェルチリンが、卵細胞膜に結合することで知られている（Evans他、1998, Dev.
Biol. 187:79-93)。

【０００５】 精子・卵の結合および融合は、多数の受容体・リガンド相互作用を必要とする
と思われ、他の卵細胞膜タンパク質は、受精プロセスに関与していると考えられ
る。実際に、精子・卵相互作用に他の卵細胞膜タンパク質を関連させる間接的な
証拠がある。ラットにおける融合に関与する、精製された精子付随タンパク質（
タンパク質ＤＥ）は、帯のないラットの卵母細胞の表面に結合する（Cohen, 199
6, biol. Reprod. 55: 200-206）。トリプシン処理につづいて、放射性ヨウ化さ
れたマウスの卵の表面から、別の推定上の卵細胞膜の精子受容体が取り出され、
この受容体は、培養後３〜６時間で卵表面に再発現する（Kellom他、1992, Mol.
Reprod. Dev. 33: 46-52）。卵表面におけるこのような９４ｋＤａタンパク質
の再発現は、トリプシン処理された卵の、精子によって透過される能力と一致す
る。

【０００６】 グロコシル−ホスファチジル・イノシトール（ＧＰＩ）固定化タンパク質は、
配偶子相互作用の上で鍵となる役割を果たす。ＧＰＩ固定化タンパク質は、共有
結合された、グリコシル化ホスファチジル・イノシトール成分を有している。こ
のグリコシル化ホスファチジル・イノシトール成分は、細胞表面の脂質二重層に
、分子のタンパク質部分を付着するために役立つ（LowおよびSaltiel, 1988, Sc
ience, 239: 268-275）。ホスファチジル・イノシトール固定部を介して細胞表
面にリンクされたタンパク質は、多種多様な細胞機能、例えばＴ細胞活性化、細
胞外マトリックスタンパク質の加水分解、細胞外刺激物の形質導入、および細胞
間付着、の各機能に関与することで知られている（LowおよびSaltiel, 1988, Sc
ience, 239: 268-275において検討されている）。ＧＰＩ固定化タンパク質は、
極めて特異的な酵素、ホスファチジル・イノシトール特異的なホスホリパーゼＣ
（ＰＩ−ＰＬＣ）で細胞を処理することにより、細胞表面から放出させることが
できる（LowおよびFinean, 1978, Bioch. biophys. Acta. 508: 565-570）。従
って無傷の（インタクトの）細胞をＰＩ−ＰＬＣで処理することは、放出された
タンパク質を特徴付けし、細胞の機能におけるＧＰＩ固定化タンパク質の役割を
調査するための有用な道具となる。

【０００７】 ハムスターの卵母細胞は、他の種、例えばマウス、ラットおよびテンジクネズ
ミ由来の帯のない卵が容易には異種精子を組み込まない中、独特である（Yanagi
machi, 1972, J. Reprod. Fertil., 28: 477-480; HanadaおよびChang, 1976, J
. Reprod. Fertil., 46:239-241;およびQuinn, 1979, 210: 497-506）。このよ
うな雑婚性に基づき、帯のない、ハムスターの卵は、精子透過検定（ＳＰＡ）に
広範囲に用いられ、これによりヒトの精子の受精能を評価する（Yanagimachi他,
1976, Biol. Reprod., 15:471-476; Rodgers, 1979; LiuおよびBaker, 1992, F
erti. Steril., 59:698-699）。このような検定の広範囲な使用にもかかわらず
、配偶子相互作用中にヒトの精子とハムスターの卵との間に発生する分子相互作
用は、広い範囲で未知のままである。しかしおそらくは、ハムスターの卵原形質
膜（卵細胞膜）には、精子・卵の結合および融合中に、ヒトの精子原形質膜上の
分子と特異的に相互作用する分子があると考えられる。

【０００８】 卵抗原に向けられた避妊ワクチンを製造しようという試みが、最近数多くなさ
れている（米国特許第５，８２０，８６３号、同第５，６４１，４８７号、同第
５，６３７，３００号、および同第４，９９６，２９７号の各明細書）。今日ま
では、その豊富さと免疫検出のしやすさとに基づき、透明帯のエピトープの識別
に焦点が絞られてきた。しかし、いくつかの種における受精能試験の結果から、
卵巣の組織変化はＺＰ３免疫化動物においてしばしば観察されることが判った。
従って、商業的な避妊薬関連企業は、避妊イムノゲンとしての透明帯タンパク質
への関心を無くした。

【０００９】 受精プロセスに直接関与する抗原を特異的にターゲットとする効果的な避妊ワ
クチンを得るためのアプローチが必要とされる。しかし今日まで、受精に必要と
される精子・卵融合段階のプロセスに直接関与する卵タンパク質に向けられたワ
クチンについての報告はない。本発明は、卵の特異的表面タンパク質に基づく避
妊組成物および方法に関する。 定義 本発明の説明および主張において、下記の定義に従って、以下の用語を使用す
る。

【００１０】 本明細書中に使用するように、「核酸」、「ＤＮＡ」および類似の用語は核酸
類似物、すなわち、リン酸ジエステル・バックボーンとは別のものを有する類似
物をも含む。例えば、バックボーンにおいてリン酸ジエステル結合を有する代わ
りにペプチド結合を有する、当業者によく知られたいわゆる「ペプチド核酸」が
、本発明の範囲内にあると考えられる。

【００１１】 「ペプチド」という用語は、３つ以上のアミノ酸配列を包含する。この場合、
アミノ酸は天然または合成（非天然）アミノ酸である。ペプチド模倣物は、以下
の変更のうちの１つまたは複数を有するペプチドである： １． ペプチジル−−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−−連鎖（結合）のうちの１つまたは複数
が、非ペプチジル連鎖、たとえば−−ＣＨ₂−カルバミン酸塩連鎖（−−ＣＨ₂Ｏ
Ｃ（Ｏ）ＮＲ−−）、ホスホン酸塩連鎖、−ＣＨ₂−スルホンアミド（−ＣＨ₂−
−Ｓ（Ｏ）₂ＮＲ−−）連鎖、尿素（−−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−−）連鎖、−ＣＨ₂ −二次アミン連鎖によって、またはアルキル化ペプチジル連鎖（−−Ｃ（Ｏ）Ｎ
Ｒ−−）によって置き換えられているペプチドであり、この場合ＲはＣ₁−Ｃ₄ア
ルキルである； ２． Ｎ末端が−−ＮＲＲ₁基、−−ＮＲＣ（Ｏ）Ｒ基、−−ＮＲＣ（Ｏ）Ｏ
Ｒ基、−−ＮＲＳ（Ｏ）₂Ｒ、−−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ基に誘導体化されている
ペプチドであり、この場合ＲおよびＲ₁は、ＲおよびＲ₁のいずれかが水素ではな
いという条件付きで、水素またはＣ₁−Ｃ₄アルキルである。

【００１２】 ３． Ｃ末端が−−Ｃ（Ｏ）Ｒ₂に誘導体化されているペプチドであり、この
場合Ｒ₂は、Ｃ₁−Ｃ₄アルコキシと、−−ＮＲ₃Ｒ₄とから成る群から選択されて
おり、この場合Ｒ₃およびＲ₄は水素とＣ₁−Ｃ₄アルキルとから成る群から個別に
選択されている。

【００１３】 天然アミノ酸残基は、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ生化学命名委員会(Biochemical Nom
enclature Commission)により以下の通り推奨されるように省略される： フェニルアラニンはＰｈｅまたはＦ；ロイシンはＬｅｕまたはＬ；イソロイシ
ンはＩｌｅまたはＩ；メチオニンはＭｅｔまたはＭ；ノルロイシンはＮｌｅ；バ
リンはＶａｔまたはＶ；セリンはＳｅｒまたはＳ；プロリンはＰｒｏまたはＰ；
トレオニンはＴｈｒまたはＴ；アラニンはＡｌａまたはＡ；チロシンはＴｙｒま
たはＹ；ヒスチジンはＨｉｓまたはＨ；グルタミンはＧｌｎまたはＱ；アスパラ
ギンはＡｓｎまたはＮ；リジンはＬｙｓまたはＫ；アスパラギン酸はＡｓｐまた
はＤ；グルタミン酸はＧｌｕまたはＥ；システインはＣｙｓまたはＣ；トリプト
ファンはＴｒｐまたはＷ；アルギニンはＡｒｇまたはＲ；グリシンはＧｌｙまた
はＧ、およびＸはアミノ酸、である。他の天然アミノ酸は一例として、４−ヒド
ロキシプロリン、５−ヒドロキシリジン等を含む。

【００１４】 合成的または非天然アミノ酸は、ｉｎ ｖｉｖｏで天然でない、しかしそれに
もかかわらず本明細書中に記載したペプチド構造に組み込むことができるアミノ
酸を意味する。その結果生じる「合成ペプチド」は、ペプチドの１つ、２つまた
は３つ以上の位置で、天然２０個の遺伝子コード化アミノ酸とは異なるアミノ酸
を含有する。例えば、トリプトファンをナフチルアラニンと置換することにより
、合成を容易にすることができる。ペプチド中に置換可能な他の合成アミノ酸の
一例としては、Ｌ−ヒドロキシプロピル、Ｌ−３，４−ジヒドロキシフェニルア
ラニル、アルファ−アミノ酸、例えばＬ−アルファ−ヒドロキシリシルおよびＤ
−アルファ−メチルアラニル、Ｌ−アルファ−メチルアラニル、ベータ−アミノ
酸、およびイソキノリルが挙げられる。Ｄアミノ酸および非天然合成アミノ酸を
ペプチド中に組み込むこともできる。他の誘導体の一例としては、天然２０個の
遺伝子コード化アミノ酸（またはＬまたはＤアミノ酸）の天然側鎖を他の側鎖で
置き換えたものが挙げられる。

【００１５】 本明細書中で使用したように、「保存性アミノ酸置換」という用語は、本明細
書中では以下の５つの群のうちの１つの群内における交換と定義される： Ｉ． 脂肪族の、非極性または僅かに極性を有する小さな残基： Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｐｒｏ，Ｇｌｙ； II． 極性を有する負電荷残基およびそのアミド： Ａｓｐ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ｇｌｎ； III. 極性を有する静電荷残基： Ｈｉｓ，Ａｒｇ，Ｌｙｓ； IV． 脂肪族の大きな非極性残基： Ｍｅｔ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，Ｃｙｓ； Ｖ． 大型の芳香族残基： Ｐｈｅ，Ｔｙｒ，Ｔｒｐ 本明細書中に使用するように、「精製」および同様の用語は、天然または自然
の環境内の分子または化合物と通常関連する汚染物質が実質的に除去された形の
、分子または化合物の分離に関する。

【００１６】 本明細書中に使用するように、「ＭＯＰ５ポリペプチド」および同様の用語は
、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２およびその生物学的に活性のフラグメントとを含んで
成るポリペプチドを意味する。

【００１７】 本明細書中に使用するように、「ＭＯＰ８ポリペプチド」および同様の用語は
、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４およびその生物学的に活性のフラグメントとを含んで
成るポリペプチドを意味する。

【００１８】 本明細書中に使用するように、卵表面ポリペプチドの「生物学的に活性のフラ
グメント」または「生体活性フラグメント」は、それぞれの天然のＭＯＰ５また
はＭＯＰ８ポリペプチドの自然リガンドのうちの少なくとも１つに特異的に結合
可能な、天然ペプチドの自然または合成部分を包含する。

【００１９】 「連動される」は、成分がそれらの通常の機能を発揮するように構成されてい
る並置を意味する。従って、コード配列に連動された調節配列またはプロモータ
は、そのコード配列の発現を引き起こすことができる。

【００２０】 本明細書中に使用するように、「製薬上許容可能なキャリヤ」は、標準的な製
薬的なキャリヤ、例えばリン酸緩衝生理食塩水、水、エマルジョン、例えば油／
水または水／油エマルジョン、および種々のタイプの保湿剤を包含する。 発明の概要 本発明は、卵表面上でエピトープに結合し、受精を調節することになる抗体を
産出するのに有用な卵原形質膜抗原に関する。本発明はさらに、卵表面抗原に対
する抗体を産出するために個体を免疫化する組成物および方法を包含する。卵上
でＴ細胞攻撃を誘発することにより、雌の動物を能動的に免疫化または不妊化す
るために、前記抗原に対する抗体を使用する方法も提供される。これらの方法は
、例えば動物個体群の不妊化のために、永久的な不妊化が所望される場合に特に
有用である。さらに、可逆避妊法に利用可能な受動的な免疫化に有用な抗体を生
成するために、卵表面抗原を使用する方法が提供される。 本発明の詳細な説明 本発明は、主として卵内に発現させられた抗原の識別に関する。これらのタン
パク質は、受精能の調節を補助するためのワクチン配合物中のイムノゲンとして
用いることができる。卵表面抗原、これらの製造方法、受精能を調節するための
これらの使用方法について、以下に詳しく説明する。 ＭＯＰ５の分離 自己免疫性早期卵巣不全(Autoimmune Premature ovarian failure)は、米国内
の女性の１％に影響を与える。この疾患は、卵巣内への白血球および抗体の侵入
が、卵巣機能の損失を招くことによって特徴付けされる。この疾患の症状の一例
としては、不妊、無月経および自己免疫性卵巣炎が挙げられる。新生児の胸腺摘
出術によって、同様の疾患をマウスに誘発することができる。従って、自己免疫
性早期卵巣不全においてターゲットにされる重要な卵母細胞抗原を識別し、ひい
ては卵母細胞機能に関して重要なタンパク質を識別するのに、胸腺摘出されたマ
ウス由来の抗血清を使用することができる。胸腺摘出されたマウス由来の血清中
の抗体は、マウス卵母細胞タンパク質の２Ｄゲルをウェスタン・ブロッティング
することによって検出されるように、限定された数の卵抗原を認識する。

【００２１】 胸腺摘出されたマウス由来の血清は、３つの異なるマウス卵母細胞タンパク質
、すなわちＭＷ〜７６，９０および１２５ｋＤＡと特異的に反応する。（胸腺摘
出されたマウス由来の血清によって認識された）ほぼ７３．５ｄＫａおよび５．
３９のｐＩのタンパク質を、マウス卵母細胞タンパク質の２Ｄゲルからコアし、
このタンパク質をＭＯＰ５と名づけた。このタンパク質をタンデム質量分析にか
け、ペプチド配列を得た。１つのペプチド（ＶＣＧＸＸＥ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ
：６）がマウスＥＳＴとマッチングし、このＥＳＴを、５’および３’ＰＣＲ
ＲＡＣＥ反応に使用するためのプライマーを設計するのに用いて、これによりＭ
ＯＰ５ ｃＤＮＡ配列をクローニングした。

【００２２】 ＭＯＰ５の核酸配列をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１として示し、推論されたアミノ
酸配列をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２として示す。ｃＤＮＡ配列は長さが２３４１ｂ
ｐであり、９９ｂｐの５’未翻訳領域と、１９９５ｂｐの読み取り枠と、２４７
ｂｐの３’未翻訳領域とを含む。ＭＯＰ５のコード域をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７
として示す。ｃＤＮＡ配列全体を、ＣＯＣ、卵巣、心臓、脳、脾臓、肺、肝臓、
小腸、腎臓、精巣から分離されたポリ−（Ａ）＋ｍＲＮＡを含有するノーザン・
ブロットをプローブするのに用いた。卵丘・卵母細胞複合体（ＣＯＣ：cumulus
oocyte complex）のレーンは、排卵された卵から分離したｍＲＮＡを表し、支持
細胞および最近排卵された卵と関連する組織を含む。ノーザン・ブロットは、Ｍ
ＯＰ５ ｍＲＮＡが卵巣内で充分に発現させられることを示している（図１参照
）。ノーザンブロットをより長く暴露すると、程度は極めて僅かになるが、ＭＯ
Ｐ５ ｍＲＮＡがやはりテスト中に発現させられることが判った。従ってＭＯＰ
５は性腺特異的遺伝子である。

【００２３】 ＭＯＰ５の推論されるアミノ酸配列は、７３．５の予測質量および５．３９の
ｐＩを有する、長さ６６４個のアミノ酸である。ＭＯＰ５のアミノ酸配列は、Ｓ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：２で示される。芽球細胞相同性調査により、ＭＯＰ５が酵素
のペプチジルアルギニン・デイミナーゼ（ＰＡＤ）族に最も類似している（４０
％同一、６０％ポジティブ、５％ギャップ）ことが明らかになる。ＰＡＤは、翻
訳後修飾酵素であり、この酵素は、カルシウムの存在において、タンパク質上の
アルギニン残基をシトルリン残基に変換する。ＰＡＤの公知の基質は例えば：フ
ィラグリン（上皮細胞）、トリコヒアリン（毛嚢の鞘タンパク質）、トリプシン
・インヒビター、ヒストンおよびプロタミン（サケ精子）である。酵素的脱イミ
ン(deimination)は、正味の電荷が減小する結果タンパク質の折畳みを展開させ
る(unfolding)ことにより、タンパク質の機能特性を変化させる。

【００２４】 ペプチジルアルギニン・デイミナーゼに対するＭＯＰ５の類似性は、ＭＯＰ５
が配偶子においてタンパク質折畳み展開機能を果たすことを意味する。ヒストン
がＰＡＤの基質なので、ＭＯＰ５は、配偶子ヒストンと特異的に相互作用してよ
く、卵と精子との融合時に精子核を脱凝縮すること(decondensing)と関連させら
れてよい。従ってＭＯＰ５のアゴニストまたはアンタゴニストを、不適切なＭＯ
Ｐ５活性から生じる受精能の問題、例えば、精子ＤＮＡを適正に脱凝縮しないと
いう問題を処理するのに用いることができる。ＭＯＰ５はまた、配偶子の生存能
力に必要な遺伝子の活性化に能動的な役割を果たすことができる。従って、タン
パク質の折畳みを展開させ、遺伝子転写を調節する上でのＭＯＰ５の役割により
、遺伝子産物の発現過剰または発現不足に関する疾患、例えば癌を治療するため
の治療法を導き出すことができる。

【００２５】 一実施例の場合、本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の配列を含んで成るポリ
ペプチドまたはその生体活性フラグメントと相互作用する薬剤、小分子、または
タンパク質のスクリーニング法を提供する。本発明は、ＭＯＰ５に結合してその
活性を調節し、ひいては治療薬または受精能のための診断マーカーとして有用な
小分子、化合物、組換えタンパク質、ペプチド、核酸または抗体などをスクリー
ニングするためのｉｎ ｖｉｖｏおよびｉｎ ｖｉｔｒｏ双方の検定を包含する
。

【００２６】 ＣＶ−１細胞にＭｏｐ５−ｐＣＤＮＡ３／Ｍｙｃプラスミドをトランスフェク
トし、組織培養細胞中に組換えＭＯＰ５を発現させた。Ｔｒｉｓ−ＥＤＴＡ緩衝
液でＣＶ−１細胞溶解物を作り、ブロッティングし、次いで抗Ｍｙｃでプローブ
したウェスタン・ブロットが、タンパク質が発現させられることを示した。

【００２７】 ＭＯＰ５は細菌細胞（ＢＬ２１細胞）内でも発現させられ、このタンパク質を
精製し、テンジクネズミにおいて抗体を形成するのに使用した。具体的には、Ｂ
Ｌ２１細菌中に発現させられたＭＯＰ５のＮ末端の半分に対して、単一特異的ポ
リクローナル抗体が生成された。抗体（１⁰Ａｂ：１：５０のテンジクネズミ血
清稀釈比；２⁰Ａｂ：１：２００の、ＦＩＴＣ標識付けされたＤ抗テンジクネズ
ミ血清稀釈比）で処理する前に、透明帯のない卵母細胞を固定し、浸透可能にし
た。ＭＯＰ５抗体がマウス卵母細胞中のタンパク質を認識することが判った。 ＭＯＰ８の分離 ほぼ６５ｋＤａおよび５．８のｐＩのタンパク質を、クーマシーで染色された
マウス卵母細胞タンパク質（透明帯を有さない卵母細胞から抽出した）の２Ｄゲ
ルからコアし、このタンパク質をＭＯＰ８と名づけた。ＭＯＰ８は、タンパク質
の抽出に先立って、透明帯を有さない無傷の卵の表面に標識付けすることにより
、表面タンパク質として識別した。ＭＯＰ８タンパク質スポットをタンデム質量
分析にかけ、ペプチド配列を得た。１つのペプチド（ＱＤＷＤＦＨＥＳＮＱＫ；
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）がマウスＥＳＴとマッチングし、このＥＳＴを、５’
および３’ＰＣＲ ＲＡＣＥ反応に使用するためのプライマーを設計するのに用
いて、これによりＭＯＰ８ ｃＤＮＡ配列をクローニングした。

【００２８】 ＭＯＰ８の核酸配列をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３として示し、推論されたアミノ
酸配列をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４として示す。ｃＤＮＡ配列は長さが２６６５ｂ
ｐであり、７５ｂｐの５’未翻訳領域と、１７９４ｂｐの読み取り枠と、７９６
ｂｐの３’未翻訳領域とを含む。ｃＤＮＡ配列全体を、ＣＯＣ、卵巣、心臓、脳
、脾臓、肺、肝臓、小腸、腎臓および精巣から分離されたポリ−（Ａ）＋ｍＲＮ
Ａを含有するノーザン・ブロットをプローブするのに用いた。ノーザン・ブロッ
トは、ＭＯＰ５ ｍＲＮＡが卵巣内にだけ充分に発現させられることを示してい
る（図２参照）。

【００２９】 ＭＯＰ５の推定されるアミノ酸配列は、６７．８ｋＤａの予測質量および５．
７のｐＩを有する長さ５９７個のアミノ酸である。ＭＯＰ５のアミノ酸配列は、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４で示される。芽球細胞相同性調査により、ＭＯＰ８がヒ
ト・サイトゾル・ホスホリパーゼＡ２ガンマ（ｃＰＬＡ２ｇ）に最も類似してい
る（５６％同一、７０％ポジティブ、５％ギャップ）ことが明らかとなる。ホス
ホリパーゼＡ２は、リン脂質のｓｎ−２脂肪アシル結合を切断し、遊離アラキド
ン酸およびリゾリン脂質を産出することで知られている。アラキドン酸は、プロ
スタグランジンおよびロイコトリエンを含むエイコサノイドとして知られる大き
な化合物群の前駆体である。これらの分子は、炎症反応を含む多種多様な機能を
媒介する。ＰＬＡの活性化を誘発するために、種々異なるタイプの原形質膜受容
体が明らかにされている。この受容体は、ヘテロトリメリックＧＴＰ結合タンパ
ク質またはチロシン・キナーゼを介して作用する多くの受容体を含む。精子・卵
相互作用にＰＬＡ２が必要とされるという重要な証拠が文献に存在する。しかし
、分子は配偶子内で予めクローニングされていない。従って、一実施例によれば
、避妊手段として、ＭＯＰ８の活性を妨害する組成物が提供される。一実施例に
よれば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４の配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４の抗原
性フラグメントを含んで成るポリペプチドを含んで成る抗原性組成物が提供され
る。一実施例の場合、この抗原性組成物は、製薬上許容可能なキャリヤと組み合
わされて、これにより避妊ワクチンを形成する。

【００３０】 卵巣組織中でのみＭＯＰ８が発現させられるので、ＭＯＰ８は新規の卵巣特異
的遺伝子であって、ヒト・サイトゾル・ホスホリパーゼＡ２ガンマの単なるマウ
ス同属体ではない。むしろＭＯＰ８は、新規の卵母細胞特異的ホスホリパーゼＡ
２イソ型であると考えられる。

【００３１】 ＭＯＰ８の読み取り枠は、（ＭＯＰ８−ｐｃＤＮＡ３／Ｍｙｃを形成するため
の）ｐｃＤＮＡ３．１／Ｍｙｃの哺乳類発現ベクター内にクローニングされてお
り、タンパク質はＣＶ−１細胞内で発現させられた。抗Ｍｙｃ抗体を使用したウ
ェスタン・ブロット分析により、ｒＭＯＰ８がペレット画分（１００，０００ｇ
）に局在することが明らかである。このことはタンパク質が膜結合型であってよ
いことを示している。

【００３２】 ＭＯＰ８は、細菌細胞（ＢＬ２１細胞）内でも発現させられ、このタンパク質
を精製した。この精製されたタンパク質は、テンジクネズミにおいて抗体を形成
することになる。具体的には、ＢＬ２１細菌中に発現させられたＭＯＰ５のＮ末
端の半分に対して、単一特異的ポリクローナル抗体が生成された。抗体（１⁰Ａ
ｂ：１：５０のテンジクネズミ血清稀釈比；２⁰Ａｂ：１：２００の、ＦＩＴＣ
標識付けされたＤ抗テンジクネズミ血清稀釈比）で処理する前に、透明帯を有さ
ない卵母細胞を固定し、浸透可能にした。ＭＯＰ５抗体がマウス卵母細胞中のタ
ンパク質を認識することが判った。

【００３３】 本発明の一実施例によれば、卵表面タンパク質、そのフラグメントまたは他の
誘導体、またはその類似物は、抗体を生成するためのイムノゲンとして使用され
る。この抗体は、免疫特異的に前記イムノゲンと結合するものである。具体的に
は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列を含
んで成るポリペプチド、またはこれらのポリペプチドの抗原性フラグメントが、
イムノゲン配合物を配合するのに使用される。

【００３４】 一実施例の場合、本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２またはＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：４のポリペプチド、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２またはＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：４の結合ドメイン含有フラグメントと相互作用する薬剤、小分子またはタ
ンパク質をスクリーニングする方法を提供する。本発明は、Ｃ１９またはＣ２３
に結合してその活性を調節し、ひいては治療薬または受精能のための診断マーカ
ーとして有用な小分子、化合物、組換えタンパク質、ペプチド、核酸または抗体
をスクリーニングするためのｉｎ ｖｉｖｏおよびｉｎ ｖｉｔｒｏ双方の検定
を包含する。

【００３５】 例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４を含んで成る
ポリペプチド、またはその生体活性フラグメントは、生理学的条件下でそれぞれ
の天然ポリペプチドに結合するリガンドを分離するのに使用することができる。
この方法は、ＭＯＰ５またはＭＯＰ８ポリペプチドを生理学的条件下で、化合物
の混合体と接触させるステップと、未結合物質および非特異的結合物質を除去す
るステップと、ＭＯＰ５またはＭＯＰ８ポリペプチドに結合され続ける化合物を
分離するステップと、を含んで成る。典型的には、ＭＯＰ５またはＭＯＰ８ポリ
ペプチドは、標準的な技術を用いて固体支持体に結合されることになり、これに
より化合物の迅速なスクリーニングを可能にする。固体支持体は、生物学的化合
物を固定化するのに用いられている表面、例えばポリスチレン、アガロース、シ
リカまたはニトロセルロースから選択することができる。一実施例では、固体表
面は、機能化されたシリカまたはアガロースのビーズを含んで成る。このような
化合物のスクリーニングは、当業者に良く知られた薬剤のライブラリおよび標準
的な技術を用いて達成することができる。

【００３６】 一実施例では、本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列、または、
１つまたは複数の保存性アミノ酸置換によってＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２とは異な
るアミノ酸配列を含んで成る精製ポリペプチドに関する。より好ましくは、この
精製ポリペプチドは、１０未満の保存性アミノ酸置換によってＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：２とは異なるアミノ酸配列を含んで成る。あるいは、ポリペプチドは、１つ
〜３つの変更によってＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２とは異なるアミノ酸配列を含んで
成ってよい。この場合変更は、単一のアミノ酸の欠失、挿入または置換から個別
に選択される。

【００３７】 本発明の別の実施例は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列、または、１
つまたは複数の保存性アミノ酸置換によってＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４とは異なる
アミノ酸配列を含んで成る精製ポリペプチドに関する。より好ましくは、この精
製ポリペプチドは、１０未満の保存性アミノ酸置換によってＳＥＱ ＩＤ ＮＯ
：４とは異なるアミノ酸配列を含んで成る。あるいは、ポリペプチドは、１つ〜
３つの変更によってＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４とは異なるアミノ酸配列を含んで成
ってよい。この場合変更は、単一アミノ酸の欠失、挿入または置換から個別に選
択される。

【００３８】 本発明の別の実施例は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
４のフラグメントを含んで成るポリペプチドを包含する。この場合、ペプチド・
フラグメントは、最小１０個のアミノ酸の長さを有しており、連続する１０個の
アミノ酸を含んで成っている。これらのアミノ酸の順序は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ
：２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４の１０個の連続するアミノ部分と同一である
。

【００３９】 本発明は、また、抗体、例えば抗イディオタイプ抗体、アンタゴニストおよび
アゴニスト、ならびに、ＭＯＰ５またはＭＯＰ８遺伝子の発現を阻害する化合物
またはヌクレオチド構造（転写因子インヒビター、アンチセンスおよびリボザイ
ム分子、または、遺伝子または調節配列の置換構造）、または、ＭＯＰ５または
ＭＯＰ８遺伝子の発現を促進する化合物またはヌクレオチド構造（例えばＣ１９
またはＣ２３コード配列が、発現制御エレメント、例えばプロモータ、プロモー
タ／エンハンサーなどと連動しているような発現構造）を包含する。ＭＯＰ５ま
たはＭＯＰ８ポリペプチドに対する抗体は、ＭＯＰ５またはＭＯＰ８の発現また
は過剰発現によって特徴付けされる状態または疾患を診断するのに用いることが
でき、または、ＭＯＰ５またはＭＯＰ８アゴニスト、アンタゴニストまたはイン
ヒビターで処置されている患者をモニターするための検定において用いることも
できる。

【００４０】 一実施例によれば、ＭＯＰ５またはＭＯＰ８に特異的に結合する抗体が提供さ
れる。具体的には、ＭＯＰ５またはＭＯＰ８ポリペプチド、またはその類似物が
、免疫特異的にそれと結合する抗体を生成するためのイムノゲンとして使用され
てよい。本発明の一実施例によれば、抗体を生成するための抗原化合物が提供さ
れる。この化合物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４を
含んで成る群から選択されたアミノ酸配列を含んで成る。生成された抗体は、標
準的なキャリヤを配合し、任意には、製薬組成物または診断組成物を調製するた
めに標識付けすることができる。ＭＯＰ５またはＭＯＰ８に対する抗体は、当業
者によく知られた方法を用いて生成することができる。

【００４１】 ＭＯＰ５およびＭＯＰ８に対して発生した抗体の一例としては、ポリクローナ
ル、モノクローナル、キメラ、単鎖、Ｆａｂフラグメント、およびＦａｂ発現ラ
イブラリが挙げられる。特定の実施例ではヒト卵表面タンパク質に対する抗体が
産出される。別の実施例では卵表面タンパク質のドメイン（例えばＰＩ−ＰＬＣ
で処置することにより解放された細胞外ドメイン）に対する抗体が産出される。
特定の実施例の場合、親水性領域として識別される卵表面タンパク質、例えばＭ
ＯＰ５またはＭＯＰ８のフラグメントが、抗体産出のためのイムノゲンとして使
用される。

【００４２】 卵表面タンパク質または誘導体またはその類似物に対するポリクローナル抗体
を産出するために、当業者にはよく知られた種々の手順が用いられてよい。特定
の実施例の場合、卵表面タンパク質またはフラグメントのエピトープに対するウ
サギのポリクローナル抗体を得ることができる。抗体産出に際しては、種々の宿
主動物、例えばウサギ、マウス、ラットなどに、天然卵表面タンパク質または合
成バージョン、またはその誘導体（例えばフラグメント）を注射することにより
これらの動物を免疫化することができる。宿主の種に応じて免疫応答を増大する
ために、種々のアジュバント、例えばフロイント（完全および不完全）アジュバ
ント、鉱物ゲル、例えば水酸化アルミニウム、界面活性剤、例えばリゾレシチン
、プルロニック・ポリオール、ポリアニオン、ペプチド、オイル・エマルジョン
、キーホール・リンペット・ヘモシアニン、ジニトロフェノールおよび潜在的に
有用なヒト・アジュバント、例えばＢＣＧ（カルメット−ゲラン菌）およびコリ
ネバクテウム・パルヴムが使用されてよい。

【００４３】 卵表面タンパク質配列またはその類似物に向けられたモノクローナル抗体の調
製のために、培養中の連続的な細胞系によって抗体分子の産出を可能にする技術
が用いられてよい。これらの技術は例えば、初めKohlerおよびMilstein(1975, N
ature 256: 495-497)によって開発されたハイブリドーマ、ならびに、トリオー
マ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術(Kozbor他, 1983, Immunology Today 4:
72)、およびヒト・モノクローナル抗体を産出するためのＥＢＶハイブリドーマ
技術（Cole他, 1985,モノクローナル抗体および癌治療（Monoclonal Antibodies
and Cancer Therapy), Alan R. Liss, Inc pp77-96）である。本発明の付加的
な実施例の場合、最近の技術(PCT/US90/02545)を利用して、無菌動物においてモ
ノクローナル抗体を産出することができる。本発明によればヒト抗体が用いられ
てよく、これらはヒト・ハイブリドーマを使用することにより（Cote他, 1983,
Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A 80:2026-2030）、または、ｉｎ ｖｉｔｒｏに
おいてＥＢＶウィルスでヒトＢ細胞を形質転換させることにより（Cole他, 1985
,モノクローナル抗体および癌治療（Monoclonal Antibodies and Cancer Therap
y), Alan R. Liss, Inc pp77-96）得ることができる。実際に、本発明によれば
、卵表面タンパク質に対して特異的な、マウス抗体分子由来の遺伝子と、適切な
生物学的活性を有するヒト抗体分子由来の遺伝子とを一緒にスプライシングする
ことにより、「キメラ抗体」の産出（Morrison他, 1984, Proc. Natl. Acad. Sc
i. U.S.A 81:6851-6855; Neuberger他, 1984, Nature 312:604-608; Takeda他,
1985, Nature 314:452-454)のために開発された技術を利用することができ；こ
のような抗体は本発明の範囲内にある。

【００４４】 本発明によれば、単鎖抗体の産出に関して説明された技術（米国特許第４，９
４６，７７８）を、卵表面タンパク質に対して特異的な単鎖抗体を産出するのに
適合することができる。本発明の付加的な実施例は、Ｆａｂ発現ライブラリの構
造に関して記載された技術（Huse他、1989, Science 246: 1275-1281)を利用す
ることにより、卵表面タンパク質、誘導体または類似物に対する所望の特異性を
有するモノクローナルＦａｂフラグメントを、迅速かつ簡単に識別することを可
能にする。

【００４５】 分子のイディオタイプを含有する抗体フラグメントを、公知の技術によって生
成することができる。例えば、このようなフラグメントは、抗体分子のペプシン
消化によって産出可能なＦ（ａｂ’）₂フラグメント；Ｆ（ａｂ’）₂フラグメン
トのジスルフィド架橋を減小することにより発生可能なＦａｂ’フラグメント；
パパインおよび還元剤で抗体分子を処置することにより発生可能なＦａｂフラグ
メント、およびＦｖフラグメントを含む。

【００４６】 抗体の産出の際には、当業者によく知られた技術、例えばＥＬＩＳＡ（酵素結
合イムノソルベント検定法）によって、所望の抗体のスクリーニングを達成する
ことができる。例えば、卵表面タンパク質の特異的ドメインを認識する抗体を選
択するために、このようなドメインを含有する卵表面タンパク質フラグメントに
結合する産出物に関して、発生したハイブリドーマを検定することができる。第
１の卵表面タンパク質同属体に特異的に結合するが、しかし、異なる卵表面タン
パク質同属体に特異的には結合しない抗体を選択するために、第１の卵表面タン
パク質同属体にポジティブに結合し、第２の卵表面タンパク質同属体には結合し
ないことに基づいて選択することができる。卵表面タンパク質のドメインに対し
て特異的な抗体も提供される。

【００４７】 本発明の卵表面タンパク質の局在化および活性に関連して、例えばこれらのタ
ンパク質を想定し、適切な生理学的サンプル中でそのレベルを診断法により測定
するために、当業者によく知られた方法で前記抗体を用いることができる。

【００４８】 ＭＯＰ５およびＭＯＰ８抗原に対して発生する抗体はまた、受精に対するワク
チン接種、不妊化、診断免疫検定、受動的な免疫治療、および抗イディオタイプ
抗体の発生における潜在的な用途を有している。例えば、抗体は、当業者に知ら
れた標準的な技術（例えば免疫アフィニティ・クロマトグラフィー、遠心分離、
沈殿など）によって分離され、診断免疫検定に使用されてよい。抗体は、処置お
よび／または疾患の経過をモニタするのに使用されてもよい。当業者によく知ら
れた上述のようなあらゆる免疫検定システムが、この目的に使用されてよい。こ
の免疫検定システムの一例としては、ラジオ免疫検定、ＥＬＩＺＡ（酵素結合イ
ムノソルベント検定法）、「サンドイッチ」免疫検定、沈降反応、ゲル拡散沈降
反応、免疫拡散検定、凝集検定、補体結合検定、免疫放射定量検定、蛍光免疫検
定、タンパク質Ａ免疫検定および免疫電気泳動検定のような技術を使用した、競
合的または非競合的検定システムが挙げられる。

【００４９】 本発明のワクチン配合物は、受動的免疫治療に使用するための抗体を産出する
のに用いることもできる。この免疫治療において、宿主の短期間保護は、異種器
官に向けて予め形成された抗体を投与することにより達成される。

【００５０】 本発明のワクチン配合物によって発生した抗体は、抗イディオタイプ抗体の産
出に用いることもできる。抗イディオタイプ抗体は次いで免疫化に使用されて、
これにより、病原微生物の最初の抗原に結合する抗体の小集団を産出することが
できる（Jerne, 1974, Ann.Immunol. (Paris) 125c:373; Jerne他 1982, EMBO J
. 1:234）。

【００５１】 本発明の別の実施例では、卵特異的表面ポリペプチド、および細胞外ドメイン
を含有するそのフラグメントは、有用な避妊ワクチンである。一実施例によれば
、組成物がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４と、ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４の抗原性フラグメントとから成る群から
選択されたアミノ酸配列を含んで成るワクチン組成物が提供される。本発明のワ
クチンは多価または一価である。多価ワクチンは、２つ以上の抗原の発現を導く
組換えウィルスから製造される。

【００５２】 本発明の１つの観点では、（個別または組み合わせの）ＭＯＰ５およびＭＯＰ
８ポリペプチドは、能動的な免疫応答を誘発するために被検体に供給される。ワ
クチンは、本発明の卵表面タンパク質機能を有する、一時的かつ可逆的なアンタ
ゴニストとして作用する。例えばこのようなワクチンは、被検体の能動的免疫化
に際して、卵原形質抗原への精子のアクセスを一時的にブロックするように抗体
応答を発生させるのに使用することもできる。本発明の１つの観点において、そ
の月のある一定の期間、例えば女性被験者の排卵中、受精をブロックするために
抗原を投与することもできる。

【００５３】 本発明の別の観点では、（個別または組み合わせの）ＭＯＰ５およびＭＯＰ８
ポリペプチドは、被検体の永久的な不妊化のためのワクチンとして使用される。
このようなワクチンは、不可逆的に不妊化させる方法として有用な、平衡(othor
itic)効果を有する、卵におけるＴ細胞媒介攻撃を引き起こすのに使用すること
ができる。Ｔ細胞特異的応答を発生させるための方法、例えば養子免疫療法は当
業者には良く知られている（例えばVaccine Design, Michael F. Powellおよび
Mark J. Newman編, Plenum Press, New York, 1995, pp847-867）。このような
技術は、単回投与のワクチン接種が望ましい獣医学的な避妊または不妊化の目的
に特に有用である。

【００５４】 適切なワクチン調製物は、注射可能物質、例えば溶液または懸濁液を含む；注
射前に液体中に溶解、懸濁するのに適した固形形状が調製されてもよい。調製物
は乳化されるか、またはリポソーム中にカプセル化されたポリペプチドであって
もよい。有効イムノゲン成分はしばしば、製薬上許容可能でありかつ適合性を有
する賦形剤および有効成分と混合される。適切な賦形剤は例えば、食塩水、デキ
ストロース、グリセロール、エタノールなど、およびこれらの組み合わせである
。さらに所望の場合には、ワクチン調製物は少量の助剤、例えば保湿または乳化
剤、ｐＨ緩衝剤、および／またはワクチンの効果を高めるアジュバントを含んで
もよい。

【００５５】 効果的なアジュバントの一例として以下のものが挙げられる：鉱物ゲル、例え
ば水酸化アルミニウム、界面活性剤、例えばリゾレシチン、プルロニック・ポリ
オール；ポリアニオン；ペプチド；オイル・エマルジョン；ミョウバン、および
ＭＤＰ；Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈ
ｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノル−ムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタ
ミン、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラ
ニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホ
スホリルオキシ）−エチルアミン、水酸化アルミニウム； アジュバントの効果は、卵表面タンパク質ポリペプチド・エピトープを含有す
るイムノゲン・ポリペプチドに向けられた抗体の誘発を測定することにより、見
極めることができる。この抗体は、ワクチン中の前記ポリペプチドの投与から生
じ、ワクチンはまた、種々のアジュバントを含んで成っている。本発明のワクチ
ンの有効用量（免疫化量）は、動物モデル実験系から導き出された投与−反応曲
線から推定されてもよい。

【００５６】 ポリペプチドは、中性または塩の形でワクチン中に配合されてよい。製薬上許
容可能な塩は（ペプチドの遊離アミノ基とともに形成された）酸添加塩を含む。
さらに酸添加塩は無機酸、例えば塩酸またはリン酸、または、有機酸、例えば酢
酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸などと共に形成されている。遊離カルボキシ
ル基と共に形成された塩は、無機塩基、例えばナトリウム、カリウム、アンモニ
ア、カルシウム、または水酸化第二鉄、および有機塩基、例えばイソプロピルア
ミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどから導き出さ
れてもよい。

【００５７】 本発明は、動物を免疫化する方法を提供し、この免疫化はその動物に本発明の
ワクチンの有効免疫化用量を投与することを含んで成る。ワクチンが投与される
患者は、好ましくは哺乳類であり、最も好ましくはヒトであるが、しかしヒト以
外の動物、例えばウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、家禽（例えばニワトリ）、ヤギ、
ネコ、イヌ、ハムスター、マウスおよびラットであってもよい。

【００５８】 本発明のワクチン配合物は、有効免疫化量の卵表面タンパク質と、製薬上許容
可能なキャリヤまたは賦形剤とを含んで成る。ワクチン調製物は、有効免疫化量
の１つまたは複数の抗原と、製薬上許容可能なキャリヤまたは賦形剤とを含んで
成る。製薬上許容可能なキャリヤは当業者によく知られており、その一例として
、食塩水、緩衝食塩水、デキストロース、水、グリセロール、滅菌等張緩衝液、
およびこれらの組み合わせが挙げられる。このような製薬上許容可能なキャリヤ
の一例は、安定化された加水分解タンパク質、ラクトースなどのような、１つま
たは複数の安定化剤を含有する生理学的に平衡状態の培養基である。このキャリ
ヤは好ましくは滅菌製である。配合物は、投与様式に適合しなければならない。

【００５９】 所望の場合には、組成物は少量の保湿または乳化剤、またはｐＨ緩衝剤を含有
することもできる。組成物は、溶液、懸濁液、エマルジョン、錠剤、丸剤、カプ
セル、徐放性配合物、または粉末であってよい。経口用配合物は、標準的なキャ
リヤ、例えば製薬的な等級のマンニトール、ラクトース、澱粉、ステアリン酸マ
グネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどを含む
ことができる。

【００６０】 一般に成分は別々に、または単位投与量の形で一緒に混合して、例えば有効成
分量を示すアンプルまたは薬袋のような、気密に密閉された容器内の凍結乾燥粉
末または無水濃縮物として供給される。組成物が注射によって投与される場合に
は、成分を投与前に混合できるように、滅菌稀釈剤のアンプルを提供することが
できる。

【００６１】 配合物に採用されるべきワクチン調整物の正確な用量は、投与経路および患者
の性質にも依存することになり、医師の判断に従って、また、標準的な臨床技術
に基づく患者の環境に従って決められなければならない。有効免疫化量は、ワク
チン調整物が投与される宿主において、抗原に対する免疫応答を産出するのに充
分な量である。

【００６２】 イムノゲンはワクチン配合物中で使用するために、リポソーム中に組み込まれ
てもよく、またはポリサッカライドおよび／または他のポリマーに複合されても
よい。組換え抗原がハプテン、すなわち、同属抗体とは選択的に反応可能である
点で抗原性であるが、しかし免疫応答を誘発できない点で免疫原性ではない分子
である場合、ハプテンはキャリヤまたは免疫原性分子に共有結合することができ
る；例えば血清アルブミンのような大きなタンパク質は、これにカップリングさ
れたハプテンに免疫原性を与えることになる。ハプテン・キャリアは、ワクチン
として使用するために配合されてよい。

【００６３】 本発明はまた、ＭＯＰ５およびＭＯＰ８ポリペプチド、生体活性フラグメント
およびその誘導体をコードする核酸配列を包含する。具体的に本発明は、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：１、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３の配列、またはその誘導体を
含んで成る核酸配列に関する。一実施例では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１またはＳ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：３の２０個の連続ヌクレオチドと同一の少なくとも２０個の
連続ヌクレオチド（すなわちハイブリダイズする可能な部分）を含んで成る精製
核酸が提供される。他の実施例では、核酸は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１またはＳ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：３の少なくとも２５個の（連続）ヌクレオチド、５０個のヌ
クレオチド、１００個のヌクレオチド、２００個のヌクレオチドを含んで成る。

【００６４】 本発明の一実施例は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１によって表されるヌクレオチド
配列またはその補体の全てまたは一部と、（本明細書中に規定した条件下）でハ
イブリダイズする核酸を含む。あるいは、本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に
よって表されるヌクレオチド配列またはその補体の全てまたは一部と、（本明細
書中に規定した条件下）でハイブリダイズする核酸を含む。ハイブリダイズする
核酸のハイブリダイズする部分の長さは、典型的には少なくとも１５個（例えば
２０，２５，３０または５０個）のヌクレオチドである。本明細書中に記載した
タイプのハイブリダイズする核酸は、例えばクローニング・プローブ、プライマ
ー（例えばＰＣＲプライマー）、または診断プローブとして使用することができ
る。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、またはそのフラグ
メントのＤＮＡ配列は、他の脊椎動物種に由来する相同遺伝子を検出するための
プローブとして使用することができる。

【００６５】 核酸デュプレックスまたはハイブリッド安定性は、融解温度またはＴｍとして
発現させられる。融解温度は、核酸デュプレックスがその成分である一本鎖ＤＮ
Ａに分離する温度である。このような融解温度は、所要の緊縮条件を規定するの
に使用される。典型的には、１％のミスマッチはＴｍを１℃だけ低下させ、ハイ
ブリダイズする反応における最終洗浄温度は、これに従って低下させられる（例
えば、＞９５％の同一性を有する２つの配列がある場合、最終洗浄温度は５℃だ
けＴｍから低下させられる）。現実には、Ｔｍの変化は１％のミスマッチ当たり
、０．５℃〜１．５℃である場合がある。

【００６６】 本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３と、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：７とから成る群から選択された配列を含んで成る核酸配列、および
、緊縮条件または高度の緊縮条件下でこれらの配列（またはそのフラグメント）
とハイブリダイズする核酸配列に関する。一実施例では、核酸配列は、長さが少
なくとも１００個のヌクレオチドであり、緊縮条件または高度の緊縮条件下で、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３とハイブリダイズする。
本発明によれば、高度の緊縮条件は、ハイブリダイゼーションを行うものとして
規定され、洗浄条件は最低−５℃Ｔｍである。緊縮条件は、５ｘ ＳＳＣ／５ｘ
デンハルト溶液／１．０％ＳＤＳにおける６８℃でのハイブリダイゼーション
、および、０．２ｘ ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳにおける６８℃での洗浄を伴うよ
うに規定される。中程度の緊縮条件は、５ｘ ＳＳＣ／５ｘ デンハルト溶液／
１．０％ＳＤＳにおける６８℃でのハイブリダイゼーション、および、３ｘ Ｓ
ＳＣ／０．１％ＳＤＳにおける４２℃での洗浄を含む。このような条件に関する
付加的な手引きは、例えばSambrook他, 1989, 「分子クローニング（Molecular
Cloning）」, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, N.Y.;およびA
usubel他編, 1995, 「分子生物学の最新プロトコル（Current Protocols in Mol
ecular Biology）」, (John Wiley & Sons, N.Y.)ユニット２．１０によって、
当業者には容易に入手できる。

【００６７】 本発明の別の実施例では、ＭＯＰ５またはＭＯＰ８ポリペプチドをコードする
核酸配列を、発現ベクター内に挿入し、ターゲット細胞上でこれらのタンパク質
の発現を向上させるために細胞をトランスフェクトするのに使用する。一実施例
によれば、ＭＯＰ５またはＭＯＰ８をコードする核酸配列、またはそのフラグメ
ントまたは誘導体は、遺伝子配列を適切な調節配列に連動させるように、真核発
現ベクター中に挿入され、組換えＭＯＰ５または組換えＭＯＰ８が真核宿主細胞
内で発現させられる。適切な真核宿主細胞およびベクターは、当業者によく知ら
れている。具体的には、ＭＯＰ５またはＭＯＰ８をコードする核酸配列は、送達
メカニズム、例えばリポソーム、ウィルスをベースとするベクターまたはマイク
ロインジェクションを用いて、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで細胞に
添加されてよい。従って本発明の１つの観点は、ＭＯＰ５またはＭＯＰ８を発現
する組換え遺伝子を含有するトランスジェニック細胞系に関する。 例１ ＭＯＰ５の分離 分析的二次元電気泳動法のために、２８５０個の卵母細胞に由来する、デター
ジェント／尿素抽出された、透明帯を有さないマウス卵母細胞タンパク質を、二
次元ゲル電気泳動（ＳＤＳ−Ｐａｇｅ）に先立って、アクリルアミド・チューブ
・ゲル内で等電点電気泳動法（ＩＥＦ）によって分離した。等電点電気泳動法は
、Protean II xi Multi-Cell装置（Bio-Rad, Richmond, CA)、または、分離用２
Ｄゲル電気泳動にも採用した大判（２３ｘ２３ｃｍ）ゲル（Investigator 2-D e
lectrophoresis System, ESA)において行った。０．１％のクーマシーＲ２５０
、４０％のメタノールおよび０．１％の酢酸を含有する溶液中で一分間染色し、
次いで、１０％の酢酸および５０％のメタノールの溶液中で３ｘ３分間脱染する
ことにより、固定化したタンパク質をビジュアル化した。胸腺除去されたマウス
由来の血清によって認識されたタンパク質として、ＭＯＰ５スポットを識別した
。

【００６８】 クーマシー染色された２−ＤゲルからＭＯＰ５スポットを摘出し、タンデム質
量分析を利用して、マイクロ・シーケンシングした。１つのペプチド（ＶＣＧＸ
ＸＥ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）がマウスＥＳＴとマッチングし、このＥＳＴを
、５’および３’ＰＣＲ ＲＡＣＥ反応に使用するためのプライマーを設計する
のに用いて、これによりＭＯＰ５ ｃＤＮＡ配列をクローニングした。ＭＯＰ５
の核酸配列をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１として示し、推論されたアミノ酸配列をＳ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：２として示す。 例２ ＭＯＰ８の分離 ヒト精子タンパク質の可溶化および電気泳動 分析的二次元電気泳動法のために、デタージェント／尿素抽出された、透明帯
を有さないマウス卵母細胞タンパク質を、二次元ゲル電気泳動（ＳＤＳ−Ｐａｇ
ｅ）に先立って、アクリルアミド・チューブ・ゲル内で等電点電気泳動法（ＩＥ
Ｆ）によって分離した。等電点電気泳動法は、Protean II xi Multi-Cell装置（
Bio-Rad, Richmond, CA)、または、分離用２Ｄゲル電気泳動にも採用した大判（
２３ｘ２３ｃｍ）ゲル（Investigator 2-D electrophoresis System, ESA)にお
いて行った。０．１％のクーマシーＲ２５０、４０％のメタノールおよび０．１
％の酢酸を含有する溶液中で一分間染色し、次いで、１０％の酢酸および５０％
のメタノールの溶液中で３ｘ３分間脱染することにより、固定化したタンパク質
をビジュアル化した。

【００６９】 ＭＯＰ８が卵表面タンパク質であるかどうかを見極めるために、収穫したばか
りの、透明帯を有さないマウス卵母細胞を、スルホ−ＮＨＳ−ＬＣビオチンでベ
クター的に標識付けし、２Ｄゲル電気泳動法によって分離した。ビオチンで標識
付けされたタンパク質スポットをアビジン−ＥＣＬによってビジュアル化し、銀
で染色した比較ゲルと比較し、これによりビオチン化タンパク質スポットを識別
した。２Ｄゲルは、ＭＯＰ８が、スルホ−ＮＨＳ−ＬＣビオチンでベクター的に
標識付けされ、従ってＭＯＰ８がおそらく精子表面上に位置することを示した。

【００７０】 ６５ｋＤａの質量および５．８のｐＩを有するＭＯＰ８スポットを、クーマシ
ー染色された２−Ｄゲルから摘出し、タンデム質量分析を利用して、マイクロ・
シーケンシングした。２１のペプチド配列を分離し、そのうちの１つのペプチド
（ＱＤＷＤＦＨＥＳＮＱＫ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）が、マウスＥＳＴ(expre
ssed sequence tag)とマッチングした。トリプシン・ペプチドを使用して行った
データベース調査分析によれば、既知のプロテインにはマッチングは生じないこ
とが明らかとなった。このＥＳＴを、５’および３’ＰＣＲ ＲＡＣＥ反応に使
用するためのプライマーを設計するのに用いて、これによりＭＯＰ８遺伝子をク
ローニングした。ＭＯＰ８の核酸配列をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３として示し、推
論されたアミノ酸配列をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４として示す。

【配列表】

【図面の簡単な説明】

【図１】 多重組織ノーザン・ブロットのコピーであり、ＭＯＰ５ ｃＤＮＡがＰ³²で放
射性同位体標識付けされ、２ｕｇのポリ−（Ａ）＋ｍＲＮＡにハイブリダイゼー
ションされ、卵巣ＲＮＡに存在するメッセージを明らかにしている。分子量マー
カーのサイズが左側に示される；レーン１〜１０は、ＣＯＣ、卵巣、心臓、脳、
脾臓、肺、肝臓、小腸、腎臓、精巣からそれぞれ分離されたポリ−（Ａ）＋ｍＲ
ＮＡを含有する。図１の下側のパネルは、正の対照としてβ−アクチンｃＤＮＡ
でプローブされた同一ブロットを示す。

【図２】 多重組織ノーザン・ブロットのコピーであり、ＭＯＰ８ ｃＤＮＡがＰ³²で放
射性同位体標識付けされ、２ｕｇのポリ−（Ａ）＋ｍＲＮＡにハイブリダイゼー
ションされ、卵巣ＲＮＡにだけ存在するメッセージを明らかにしている。分子量
マーカーのサイズが左側に示される；レーン１〜１０は、ＣＯＣ、卵巣、心臓、
脳、脾臓、肺、肝臓、小腸、腎臓、精巣からそれぞれ分離されたポリ−（Ａ）＋
ｍＲＮＡを含有する。図２の下側のパネルは、正の対照としてβ−アクチンｃＤ
ＮＡでプローブされた同一ブロットを示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｋ 16/28 Ｃ１２Ｎ 1/15 ４Ｈ０４５ Ｃ１２Ｎ 1/15 1/19 1/19 1/21 1/21 Ｃ１２Ｑ 1/02 5/10 1/68 Ｚ Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ 1/68 5/00 Ａ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｃ Ａ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ， ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，Ｋ Ｅ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ， ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，Ｓ Ｄ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ， ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 コーンロッド，スコット エー． アメリカ合衆国，バージニア 22942，ゴ ードンスビル，ハリントン ロード 2098 (72)発明者 ライト，ポール アメリカ合衆国，バージニア 22401，ス トーントン，プロスペクト ストリート 401，アパートメント イー−７ Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA31 BA58 CA04 DA01 DA02 DA05 DA11 GA01 GA11 HA08 HA11 4B063 QA05 QA18 QQ08 QQ13 QQ53 QQ79 QR08 QR14 QR32 QR42 QR56 QR77 4B065 AA01X AA57X AA87X AA91Y AB01 AB02 BA01 BA08 CA24 CA44 CA46 4C084 AA17 NA14 ZA86 ZB21 ZC41 4C085 AA03 BB11 CC07 CC08 CC21 DD62 EE01 4H045 AA10 AA11 AA30 BA09 CA40 DA50 DA75 DA86 EA26 FA72 FA73 FA74

Claims (17)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 精製ポリペプチドであって： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列； １〜１０個の保存性アミノ酸置換によって前記ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２とは異
   なるアミノ酸配列；または、 単一の変異によって前記ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２とは異なるアミノ酸配列 を含んで成り、前記単一の変異が、単一のアミノ酸の欠失、挿入または置換を意
   味することを特徴とする、精製ポリペプチド。
2. 【請求項２】 精製ポリペプチドであって： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列； １〜１０個の保存性アミノ酸置換によって前記ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４とは異
   なるアミノ酸配列；または、 単一の変異によって前記ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４とは異なるアミノ酸配列 を含んで成り、前記単一の変異が、単一のアミノ酸の欠失、挿入または置換を意
   味することを特徴とする、精製ポリペプチド。
3. 【請求項３】 精製または組換えポリペプチドであって、該ポリペプチドが
   、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４とから成る群から選択され
   たアミノ酸配列、または、１〜５個の保存性アミノ酸置換によって前記ＳＥＱ
   ＩＤ ＮＯ：２または前記ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４とは異なるアミノ酸配列を含
   んで成ることを特徴とする、精製または組換えポリペプチド。
4. 【請求項４】 核酸配列であって、該核酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１
   、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７の配列を含んで成るこ
   とを特徴とする、核酸配列。
5. 【請求項５】 核酸配列であって、該核酸配列が、緊縮条件下でＳＥＱ Ｉ
   Ｄ ＮＯ：１またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３の１００ヌクレオチド・フラグメン
   トとハイブリダイズすることを特徴とする、拡散配列。
6. 【請求項６】 トランスジェニック宿主細胞であって、該細胞が、請求項５
   に記載のヌクレオチド配列を含んで成ることを特徴とする、トランスジェニック
   宿主細胞。
7. 【請求項７】 核酸配列であって、該核酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１
   またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３の連続的な２５ｂｐ配列と同一の、２５ｂｐ核酸
   配列を含んで成ることを特徴とする、核酸配列。
8. 【請求項８】 潜在的なヒト治療薬のためのスクリーニング法であって、該
   方法が、ＭＯＰ５またはＭＯＰ８ポリペプチドを、候補化合物と接触させ；該候
   補化合物がＭＯＰ５またはＭＯＰ８ポリペプチドに選択的に結合するか否かを見
   極めることを含んで成ることを特徴とする、スクリーニング法。
9. 【請求項９】 ＭＯＰ５またはＭＯＰ８ポリペプチドが細胞の表面上で発現
   させられる、請求項８に記載の方法。
10. 【請求項１０】 抗体であって、該抗体が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のタン
    パク質に特異的に結合することを特徴とする、抗体。
11. 【請求項１１】 抗体であって、該抗体が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のタン
    パク質に特異的に結合することを特徴とする、抗体。
12. 【請求項１２】 抗原性組成物であって、該組成物が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ
    ：２とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４とから成る群から選択されたアミノ酸配列、およ
    び、前記ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２または前記ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４の抗原性フ
    ラグメントを含んで成ることを特徴とする、抗原性組成物。
13. 【請求項１３】 分離された抗体であって、該抗体が請求項１または２に記
    載の抗原性分子に対して特異的であることを特徴とする、分離された抗体。
14. 【請求項１４】 ＭＯＰ５またはＭＯＰ８の発現レベルを調節するための活
    性に関して分子をスクリーニングする方法であって、該方法が、前記分子に細胞
    を接触させ、該接触させた細胞中に存在するＭＯＰ５またはＭＯＰ８タンパク質
    またはｍＲＮＡの量を、接触させていない細胞中に存在するＭＯＰ５またはＭＯ
    Ｐ８タンパク質またはｍＲＮＡの量と比較することを含んで成ることを特徴とす
    る、分子をスクリーニングする方法。
15. 【請求項１５】 ＭＯＰ５またはＭＯＰ８タンパク質と相互作用するための
    能力に関して分子をスクリーニングする方法であって、該方法が、前記ＭＯＰ５
    またはＭＯＰ８タンパク質と分子との間で複合体形成を助成する条件下で、ＭＯ
    Ｐ５またはＭＯＰ８遺伝子配列を発現させる細胞を、１つまたは複数の分子と接
    触させ、前記ＭＯＰ５またはＭＯＰ８タンパク質に特異的に結合する分子を回収
    することを含んで成ることを特徴とする、分子をスクリーニングする方法。
16. 【請求項１６】 受精能を調節する方法であって、該方法が、ＭＯＰ５また
    はＭＯＰ８の活性を調節する分子の、治療上有効な量を被検体に投与することを
    含んで成ることを特徴とする、受精能を調節する方法。
17. 【請求項１７】 抗原性組成物であって、該組成物が、ＭＯＰ５またはＭＯ
    Ｐ８ポリペプチドと、製薬上許容可能なキャリヤとを含んで成ることを特徴とす
    る、抗原性組成物。