JP2004010488A

JP2004010488A - アレルゲンの腸管透過抑制剤

Info

Publication number: JP2004010488A
Application number: JP2002161695A
Authority: JP
Inventors: Michiko Watanabe; 渡辺　道子; Jun Watanabe; 渡辺　純; Mitsutoshi Nakajima; 中嶋　光敏
Original assignee: National Food Research Institute
Current assignee: National Food Research Institute
Priority date: 2002-06-03
Filing date: 2002-06-03
Publication date: 2004-01-15

Abstract

【課題】食物アレルギー予防に有効な、腸管透過抑制効果を有する新たな物質を提供すること。
【解決手段】トリプトファンエステル、フェニルアラニンエステルまたはチロシンエステルを有効成分とするアレルゲンの腸管透過抑制剤。２〜５個のアミノ酸からなり、少なくとも１つのトリプトファン、フェニルアラニンまたはチロシンを含むペプチドを有効成分とするアレルゲンの腸管透過抑制剤。香辛料からの抽出物を有効成分とするアレルゲンの腸管透過抑制剤。
【選択図】

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、アレルゲンの腸管透過抑制剤に関する。さらに詳しくは、アミノ酸誘導体、オリゴペプチドまたは香辛料からの抽出物を有効成分とするアレルゲンの腸管透過抑制剤に関する。
本発明の腸管透過抑制剤は、腸管でのアレルゲン物質などの透過を抑制するので、アレルギー疾患などの予防や治療に有用である。
【０００２】
【従来の技術】
食物アレルギー患者数の増加が社会問題となっている。食物アレルギーの症状は下痢、皮膚炎、喘息症状など様々である。食物アレルギーは腸管から吸収された食物由来のアレルギー原因物質（アレルゲン）により惹起される。実際、食物アレルギー患者では腸管からのアレルゲン吸収量が増加しており、このことがアレルギー発症に深く寄与していると考えられている（Ｊ．　Ａｌｌｅｒｇｙ　Ｃｌｉｎ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．　２０００　９７　９８５−９９０）。
【０００３】
腸管における物質の透過には、腸管の上皮細胞間に存在するタイト・ジャンクション（ｔｉｇｈｔ　Ｊｕｎｃｔｉｏｎ）が関与している。タイト・ジャンクションは、膜表層細胞同士を洩れなくシールし、表層細胞の周囲を鉢巻き状に取り囲んでおり、イオンなどの低分子物質は、このタイト・ジャンクションの間を通り抜けて体内に吸収される。消化されずに残った細菌、ウィルス、蛋白質などの巨大分子も腸管の上皮細胞間を通り抜けて体内に吸収される場合がある。この吸収が感染症や食物アレルギーを引き起こす原因のひとつと考えられている。
【０００４】
タイト・ジャンクションの物質に対する透過性は一定でなく、グルコース、サイトカラシンＤなどの存在は、タイト・ジャンクションの透過性を緩めるものである。さらに、β−ラクトグロブリンのようなホエー蛋白質またはその分解物は、タイト・ジャンクションの透過性を減少させることも知られている（特開平８−７３３７５号公報）。このほかに、高分子量化合物の透過性を減少させる物質は他に知られていない。一方、アレルギーに起因する疾患は、現代病と言われるほどに多く、特に、食物アレルギー予防には、腸管透過抑制効果を有する探索が欠かせない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
そこで本発明の目的は、食物アレルギー予防に有効かつ、製造、加工が容易で安全性が高い、腸管透過抑制効果を有する物質を提供することである。
【０００６】
本発明者らは、腸管上皮細胞間の物質透過を抑制する物質について鋭意検討した結果、特定のアミノ酸誘導体、オリゴペプチド及び香辛料抽出物がアレルゲンの腸管物質透過を抑制する作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
上記目的を達成するための本発明は、以下の通りである。
本発明のアレルゲンの腸管透過抑制剤は、トリプトファンエステル、フェニルアラニンエステルまたはチロシンエステルを有効成分とする。このアレルゲンの腸管透過抑制剤において、前記エステルは、炭素数１〜６の低級アルキルエステルであることが好ましい。
さらに、本発明のアレルゲンの腸管透過抑制剤は、２〜５個のアミノ酸からなり、少なくとも１つのトリプトファン、フェニルアラニンまたはチロシンを含むペプチドを有効成分とする。このアレルゲンの腸管透過抑制剤において、前記ペプチドは、ＷＳＮＳＧ、ＷＳＮ、ＷＳまたはＷＧであることが好ましい。
【０００８】
加えて本発明は、アレルゲンの腸管透過抑制剤は、香辛料からの抽出物を有効成分とする。このアレルゲンの腸管透過抑制剤において、香辛料からの抽出物は、ルテオリン−７−Ｏ−グルクロニド、ロスマリン酸、ケルセチン−３−Ｏ−グルクロニド、ルチンまたはピメントールである。
本発明の腸管透過抑制剤は、種々のアレルゲンに対して腸管透過抑制効果を有するが、特に、腸管から吸収される食物由来のアレルゲンに対して効果的である。
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明のアレルゲンの腸管透過抑制剤の有効成分である、トリプトファンエステル、フェニルアラニンエステル及びチロシンエステルを構成する低級アルキルエステルとしては、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル等を挙げることができる。但し、生体に対する安全性、生産コスト、及び腸管透過抑制効果という観点からは、エチルエステルであることが好ましい。また、同一種のエステルである場合、トリプトファンエステル、フェニルアラニンエステル及びチロシンエステルの間では、ほぼ同様の腸管透過抑制効果を有する。
【００１０】
上記アミノ酸エステルは、例えば、アミノ酸（トリプトファン、フェニルアラニン又はチロシン）を酸触媒条件下、アルカノールと反応させることにより製造することができる。アルカノールとしては、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、ペンタノール、ヘキサノール等を挙げることができる。具体的には、エチルエステルは、アミノ酸と１Ｎになるように塩化水素を吹き込んだエタノールを０．５〜２時間還流することで製造できる。還流の後、塩化水素とエタノールを溜去した残渣をそのまま用いればよい。塩化水素以外の酸を用いても良く、また、溜去を省いても良い。さらに、エタノール−ヘキサンで結晶化すること等の公知の精製方法で精製することもできる。
【００１１】
本発明の２〜５個のアミノ酸からなるアレルゲンの腸管透過抑制剤は、少なくとも１つのトリプトファン、フェニルアラニンまたはチロシンを含むオリゴペプチドを有効成分とする。このオリゴペプチドは、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンのいずれか１つまたは２つ以上を含むことができ、例えば、ＷＳＮＳＧ、ＷＳＮ、ＷＳ、ＷＧ等であることが好ましい。尚、Ｗはトリプトファン、Ｓはセリン、Ｎはアスパラギン、Ｇはグリシンである。
【００１２】
上記オリゴペプチドは、公知のアミノ酸合成方法（固相合成法）を用いて製造することができる。または、上記ペプチドを含むタンパク質を分解し、フラグメントを常法により分離回収することでも製造することができる。
【００１３】
本発明の香辛料からの抽出物を有効成分とするアレルゲンの腸管透過抑制剤における香辛料は、例えば、タイム、オールスパイス、コリアンダー、タラゴン等を挙げることができる。
さらに、香辛料からの抽出物としては、フラボノイド等を挙げることができる。
香辛料からの抽出物の具体例であるルテオリン−７−Ｏ−グルクロニド及びロスマリン酸は、それぞれ以下の化学式で表される化合物である。ルテオリン−７−Ｏ−グルクロニド及びロスマリン酸は、それぞれタイムから常法により抽出することができる。抽出法について実施例で具体的に説明する。
【００１４】
ルテオリン−７−Ｏ−グルクロニド
【化１】

【００１５】
ロスマリン酸
【化２】

【００１６】
ケルセチン−３−Ｏ−グルクロニドは、以下の化学式で表される化合物である。ケルセチン−３−Ｏ−グルクロニドは、コリアンダーから常法により抽出することができる。抽出法について実施例で具体的に説明する。
【００１７】
ケルセチン−３−Ｏ−グルクロニド
【化３】

【００１８】
ルチンは、以下の化学式で表される化合物である。ルチンは、それぞれコリアンダー及びタラゴンから常法により抽出することができる。抽出法について実施例で具体的に説明する。
【００１９】
ルチン
【化４】

【００２０】
また、ピメントールは、以下の化学式で表される化合物である。ピメントールは、オールスパイスから常法により抽出することができる。抽出法について実施例で具体的に説明する。
【００２１】
ピメントール
【化５】

【００２２】
本発明の腸管透過抑制剤を投与するに際しては、有効成分であるアミノ酸誘導体、オリゴペプチドまたは香辛料抽出物をそのままの状態で用いることもできるが、常法に従って、粉末、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、乳化剤、ドリンク剤など製剤化して用いることもできる。さらに、この腸管透過抑制剤を各種栄養剤や食品などに混ぜてアレルギーを予防することも可能である。
【００２３】
例えば、本発明の腸管透過抑制剤は、トリパルミチンからなる担体を用いたマイクロカプセルにすることが、製造の容易さ、腸管での溶出の容易さ、無味化等の観点から好ましい。さらに、前記担体に界面活性剤が含まれていてもよい。界面活性剤としては、造粒方法に応じて油性及び水性界面活性剤を用いることができる。油性界面活性剤としては、例えば、ＰＯ５００（花王社製）、水性界面活性剤としては、ＭＬ７５０（花王社製）等を挙げることができる。
【００２４】
上記マイクロカプセルは、例えば、腸管透過抑制剤、トリパルミチン及び界面活性剤の溶融物、水溶液又は水分散体をスプレイドライすることで製造することができる。また、例えば、腸管透過抑制剤及びトリパルミチンをトリパルミチン飽和ヘキサンに添加し、得られるスラリーをスプレイドライすることでも、上記マイクロカプセルを製造することができる。スプレイドライの条件は、溶融物、水溶液、水分散体又はスラリーに含まれる固形分濃度や腸管透過抑制剤の耐熱性、酸化安定性等を考慮して適宜決定される。具体的には、例えば、スプレイドライの加熱温度を約８０℃とすることができる。
【００２５】
本発明の腸管透過抑制剤の投与量は、年齢、治療効果、病態などにより異なるが、通常、一人当たり一回に体重１ｋｇ当たり約１μｇ〜１００ｍｇの範囲で、一日一回から数回投与すればよい。
【００２６】
なお、本発明の腸管透過抑制剤の効果の確認は、Ｃａｃｏ−２細胞を透過性フィルター上で約１４日間培養したものを用いて行った。詳細は実施例において説明する。
【００２７】
本発明の腸管透過抑制剤は、種々のアレルゲンに対して腸管透過抑制効果を有する。本発明の腸管透過抑制剤は、特に、腸管から吸収される食物由来のアレルゲンに対して効果的であり、食物由来のアレルゲンとしては、例えば、卵白アルブリン、オボムコイド、β−ラクトグロブリン、ＧｌｙＭＢｄ３０Ｋ（大豆アレルゲン）、アミラーゼインヒビター、ペルオキシダーゼ、低分子量グルテニン、等を挙げることができる。但し、これらに限定されるものではない。
【００２８】
【実施例】
以下、本発明を実施例によりさらに説明する。
腸管透過性試験方法
食物アレルゲンとして蛍光標識した卵白アルブミン（ＦＩＴＣ−ＯＶＡ）を、腸管モデルとしてＣａｃｏ−２細胞を透過性フィルター上で約１４日間培養したものを用いた。蛍光標識した卵白アルブミン（ＦＩＴＣ−ＯＶＡ）は、市販卵白アルブミンを常法（微アルカリ性）でフルオレッセンイソチオシアネートと反応させて結合後、流水透析、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ−１５カラムクロマトグラフィーで精製して調製した。
【００２９】
Ｃａｃｏ−２細胞の培養は以下の方法で行った。
Ｃａｃｏ−２細胞を　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ　（Ｕ．Ｓ．Ａ．）から入手し、継代数３０〜４０のものを透過試験に用いた。培養液の組成はＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｅａｇｌｅ’ｓ　ｍｅｄｉｕｍ（Ｇｉｂｃｏ，　Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，　Ｉｎｃ．，　Ｕ．Ｓ．Ａ．）にウシ胎仔血清（２０％，大日本製薬）、非必須アミノ酸溶液（１％，　Ｇｉｂｃｏ，　Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，　Ｉｎｃ．）、ペニシリン（１００　ＩＵ／ｍｌ，和光純薬）、ストレプトマイシン（１００μｇ　／ｍｌ，和光純薬）およびゲンタマイシン（５０μｇ　／ｍｌ，和光純薬）を加えたものとした。細胞を３７℃、５％ＣＯ_２、加湿条件下で培養し、３，　４日おきに継代を行った。透過試験に際しては、細胞を１２穴トランズウェル内のメンブレンフィルター（Ｎｏ．　３４６０，　Ｃｏｒｎｉｎｇ，　Ｕ．Ｓ．Ａ．）で培養した。培養液をベイサル（ｂａｓａｌ）側には１．５ｍｌ、アピカル（ａｐｉｃａｌ）側には０．５ｍｌを加え約２週間培養した。Ｍｉｌｌｉｃｅｌｌ−ＥＳＲ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ　Ｃｏ．，　Ｕ．Ｓ．Ａ．）を用いて経上皮電気抵抗　（ＴＥＥＲ）を測定し、ＴＥＥＲが　３００Ω・ｃｍ^−２以上となり単層が完成したものを透過試験に用いた。
【００３０】
透過試験前夜より試料溶液をアピカル（ａｐｉｃａｌ）側ベイサル（ｂａｓａｌ）側両方に加え、前培養した。培養後、試料共存下でＯＶＡを１ｍｇ／ｍｌの濃度でハンクス平衡塩溶液に溶解したものをアピカル（ａｐｉｃａｌ）側に添加し、３０分間培養した。３０分後ベイサル（ｂａｓａｌ）側の透過液を回収し、透過したＯＶＡ量を蛍光強度により測定した。
蛍光強度測定は、島津製作所社製の分光蛍光光度計を用いて励起波長４９５ｎｍ、蛍光波長５２０ｎｍで行った。
【００３１】
実施例１
トリプトファンエチルエステル、フェニルアラニンエチルエステル及びチロシンエチルエステルをそれぞれ以下の方法により合成した。
アミノ酸（１０ｇ）と１Ｎになるように塩化水素を吹き込んだエタノール（１００ｍｌ）を１時間還流することで製造した。還流の後、塩化水素とエタノールを溜去した残渣をそのまま用いた。
得られた各エステルのＯＶＡ透過抑制作用を、上記腸管透過性試験方法により求めた。その結果、いずれのエステルも１０^−７Ｍの濃度において、ＯＶＡの透過を顕著に抑制した。いずれのエステルも、ＯＶＡの透過を対照に対して約５０％阻害した。
【００３２】
実施例２
アミノ酸オリゴマー
ＷＧは市販品であり、ＷＳＮＳＧ、ＷＳＮ及びＷＳは、固相合成法により調製した。
得られた各アミノ酸オリゴマーのＯＶＡ透過抑制作用を、上記腸管透過性試験方法により求めた。その結果、いずれのアミノ酸オリゴマーも１０^−７Ｍの濃度において、ＯＶＡの透過を顕著に抑制した。いずれのペプチドも、ＯＶＡの透過を対照に対して約５０％阻害した。
【００３３】
実施例３
３３種の食品の５０％メタノール抽出物について上記腸管透過性試験方法によりスクリーニングを行った。その結果、オールスパイス、タイム、コリアンダー、タラゴンに強い活性が認められた。そこで、これらの食品から、以下に示す方法により抽出し、さらに抽出物から非逆相ＨＰＬＣを用いて活性成分を単離した。
【００３４】
ピメントールの抽出
オールスパイス５３７．７ｇを５０％メタノール８００ｍｌに浸漬し、吸引濾過し、濾液を減圧濃縮し、約１ｇの抽出物を得た。この抽出物を１００ｍｌの水に加え、Ｓｅｐ−Ｐａｋに吸着させ、６０％メタノール水溶液で溶出し、減圧濃縮によりメタノールを除去した。得られた溶液を以下の条件の逆相ＨＰＬＣに付し、活性成分を単離した。
【００３５】
ＨＰＬＣ条件
ファーストラン
カラム：Ｓｈｏｄｅｘ　ＲＳ　ｐａｋ　ＲＰ１８−４１５
溶媒：４０％メタノール０．１％ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）水溶液
流速：１ｍｌ／ｍｉｎ．
検出波長：２２０ｎｍ
クロマトグラムを図１に示す。
セカンドラン
カラム：Ｓｈｏｄｅｘ　ＲＳ　ｐａｋ　ＤＥ６１３
溶媒：アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ水溶液２５〜３５％（１５分）リニアグラージェント
流速：１ｍｌ／ｍｉｎ．
検出波長：２２０ｎｍ
クロマトグラムを図２に示す。
【００３６】
単離した活性成分は、ＮＭＲおよび質量分析（ＦＡＢ−ＭＳ（Ｎｅｇａｔｉｖｅ）ｍ／ｚ４９３［Ｍ−Ｈ］⁻）の結果、オールスパイスの活性成分はピメントールであった。
【００３７】
^１Ｈ　ＮＭＲ　（５００ＭＨｚ，　ＣＤ_３ＯＤ）：δ３．０１　（２Ｈ，　ｂｒ．ｄｄ，　Ｊ＝５．５，　５．６Ｈｚ，　Ｈ−Ｅ７），　３．４５　（ｍ，Ｈ−Ｇｌｃ４），　３．５０　（ｍ，　Ｈ−Ｇｌｃ３），　３．５１　（ｍ，　Ｈ−Ｇｌｃ２），　３．７２　（ｄｄｄ，　Ｊ＝２．０，　６．８，　９．２Ｈｚ，　Ｈ−Ｇｌｃ５），　３．７８　（３Ｈ，　ｓ，　Ｈ−Ｅ１０（ＯＭｅ）），　４．４４　（ｄｄ，　Ｊ＝６．８，　１１．８Ｈｚ，　Ｈ−Ｇｌｃ６ａ），　４．５８　（ｄｄ，　Ｊ＝２．０，　１１．８Ｈｚ，　Ｈ−Ｇｌｃ６ｂ）　４．７３　（ｄ，　Ｊ＝７．７Ｈｚ，　Ｈ−Ｇｌｃ１），　４．９０　（２Ｈ，ｍ，　Ｈ−Ｅ９），　５．７４　（ｍ，　Ｈ−Ｅ８），　６．４６　（ｄ，　Ｊ＝１．６Ｈｚ，　Ｈ−Ｅ３），　６．５２　（ｄ，　Ｊ＝１．６Ｈｚ，　Ｈ−Ｅ５），　７．０８　（２Ｈ，　ｓ，　Ｈ−Ｇａ２，６）．
^１３Ｃ　ＮＭＲ　（５００ＭＨｚ，　ＣＤ_３ＯＤ）：δ４０．７　（Ｃ−Ｅ７），　５６．７　（Ｃ−Ｅ１０（ＯＭｅ）　），　６４．８　（Ｃ−Ｇｌｃ６），　７１．８　（Ｃ−Ｇｌｃ４），　７４．８　（Ｃ−Ｇｌｃ２），　７５．８　（Ｃ−Ｇｌｃ５），　７７．４　（Ｃ−Ｇｌｃ３），　１０４．１　（Ｃ−Ｇｌｃ１），　１０８．５　（Ｃ−Ｅ３），　１１０．２　（Ｃ−Ｇａ２，　Ｇａ６），　１１５．６　（Ｃ−Ｅ９），　１１１．６　（Ｃ−Ｅ５），　１２１．１　（Ｃ−Ｇａ１），　１３２．６　（Ｃ−Ｅ４），　１３５．６　（Ｃ−Ｅ１），　１３９．０　（Ｃ−Ｅ８），　１４０．２　（Ｃ−Ｇａ４），　１４６．６　（Ｃ−Ｇａ３，　Ｇａ５），　１４６．７　（Ｃ−Ｅ６），　１４９．５　（Ｃ−Ｅ２），　１６８．３　（Ｃ−Ｇａ７）．
【００３８】
ルテオリン−７−Ｏ−グルクロニド及びロスマリン酸の抽出
タイムを原料として上記オールスパイスの場合と同様に抽出溶液を得、以下の条件の逆相ＨＰＬＣに付し、活性成分を単離した。
ＨＰＬＣ条件
ファーストラン
カラム：Ｓｈｏｄｅｘ　ＲＳ　ｐａｋ　ＲＰ１８−４１５
溶媒：メタノール／０．１％ＴＦＡ水溶液３０〜５０％（１５分）リニアグラージェント
流速：１ｍｌ／ｍｉｎ．
検出波長：２２０ｎｍ
クロマトグラムを図３に示す。２つの活性ピークを得た（タイム３及び４）。
タイム３及び４のセカンドラン
カラム：Ｓｈｏｄｅｘ　ＲＳ　ｐａｋ　ＤＥ６１３
溶媒：アセトニトリル／１０ｍＭ酢酸アンモニウム水溶液１０〜３０％（１５分）リニアグラージェント
流速：１ｍｌ／ｍｉｎ．
検出波長：２２０ｎｍ
クロマトグラムを図４に示す。
タイム３のサードラン
カラム：Ｓｈｏｄｅｘ　ＲＳ　ｐａｋ　ＤＥ６１３
溶媒：アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ水溶液２５〜５０％（１５分）リニアグラージェント
流速：１ｍｌ／ｍｉｎ．
検出波長：２２０ｎｍ
クロマトグラムを図５に示す。
タイム４のサードラン
カラム：Ｓｈｏｄｅｘ　ＲＳ　ｐａｋ　ＤＥ６１３
溶媒：アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ水溶液４０〜６０％（１５分）リニアグラージェント
流速：１ｍｌ／ｍｉｎ．
検出波長：２２０ｎｍ
クロマトグラムを図６に示す。
【００３９】
単離した活性成分は、ＮＭＲおよび質量分析の結果、タイム３がルテオリン−７−Ｏ−グルクロニドであり、タイム４がロスマリン酸であった。
【００４０】
ロスマリン酸（Ｒｏｓｍａｒｉｎｉｃ　ａｃｉｄ）
ＦＡＢ−ＭＳ　（ｎｅｇａｔｉｖｅ）　ｍ／ｚ　４８３　［Ｍ−Ｈ＋Ｎａ−Ｈ］⁻．
^１Ｈ　ＮＭＲ　（５００ＭＨｚ，　ＣＤ_３ＯＤ）δ２．９６　（ｄｄ，　Ｊ　＝　８．９，　１４．３Ｈｚ，　Ｈ−７’）　，　３．０９　（ｄｄ，　Ｊ＝　３．３，　１４．３Ｈｚ，　Ｈ−７’），　５．１４　（ｄｄ，　Ｊ　＝　３．３，　８．９Ｈｚ，　Ｈ−８’），　６．２６　（ｄ，　Ｊ　＝　１６．０Ｈｚ，　Ｈ−８），　６．６１　（ｄｄ，　Ｊ　＝　１．５，　８．１Ｈｚ，　Ｈ−６’），　６．６８　（ｄ，　Ｊ　＝　８．１Ｈｚ，　Ｈ−５’），　６．７５　（ｄ，　Ｊ　＝　１．５Ｈｚ，　Ｈ−２’），　６．７６　（ｄ，　Ｊ　＝　８．１Ｈｚ，　Ｈ−５），　６．９３　（ｄｄ，　Ｊ　＝　２．０，　８．１Ｈｚ，　Ｈ−６），　７．０３　（ｄ，　Ｊ　＝　２．０Ｈｚ，　Ｈ−２），　７．５２　（ｄ，　Ｊ　＝　１６．０Ｈｚ，　Ｈ−７）．
^１３Ｃ　ＮＭＲ　（５００ＭＨｚ，　ＣＤ_３ＯＤ）δ３８．３　（Ｃ−７’），　７６．３　（Ｃ−８’），　１１５．０　（Ｃ−８），　１１５．２　（Ｃ−２），　１１６．３　（Ｃ−５’），　１１６．５　（Ｃ−５），　１１７．６　（Ｃ−２’），　１２１．８　（Ｃ−６’），　１２３．１　（Ｃ−６），　１２７．８　（Ｃ−１），　１３０．１　（Ｃ−１’），　１４５．１　（Ｃ−３’），　１４６．１　（Ｃ−４’），　１４６．８　（Ｃ−３），　１４７．３　（Ｃ−７），　１４９．６　（Ｃ−４），　１６８．８　（Ｃ−９）．
これらのデータは文献値と一致していた。Ｊ．　Ａｇｒｉｃ．　Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍ．　２００１，　４９，　２−８．
【００４１】
ルテオリン−７−Ｏ−グルクロニド（Ｌｕｔｅｏｌｉｎ−７−Ｏ−ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄｅ）
ＦＡＢ−ＭＳ　（ｎｅｇａｔｉｖｅ）　ｍ／ｚ　４６１　［Ｍ−Ｈ］⁻．
^１Ｈ　ＮＭＲ　（５００ＭＨｚ，　ＣＤ_３ＯＤ）δ３．５４　（３Ｈ，　ｍ，　Ｈ−Ｇｌｃ２，　３　ａｎｄ　４），　３．８５　（ｂｒ．ｄ，　Ｊ　＝　９．１Ｈｚ，　Ｈ−Ｇｌｃ５），　５．０８　（ｄ，　Ｊ　＝　７．３Ｈｚ，　Ｈ−Ｇｌｃ１），　６．４９　（ｄ，　Ｊ　＝　２．２Ｈｚ，　Ｈ−８），６．５９　（ｓ，　Ｈ−３），　６．８２　（ｄ，　Ｊ　＝　２．２Ｈｚ，　Ｈ−６），　６．８９　（ｄ，　Ｊ　＝　８．９Ｈｚ，　Ｈ−５’），　７．３９−７．４１　（２Ｈ，　ｍ，　Ｈ−２’　ａｎｄ　６’）．
これらのデータは文献値と一致していた。Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．　２０００，　５５，　２６３−２６７．
【００４２】
ケルセチン−３−Ｏ−グルクロニドの抽出
コリアンダーを５０％メタノール水溶液で抽出した。抽出物をＳｅｐ−Ｐａｃｋに吸着させ、６０％メタノール水溶液で溶出し、溶出画分を分取ＨＰＬＣに供した。
逆相分取ＨＰＬＣの条件
ファーストラン
カラム：Ｓｈｏｄｅｘ　ＲＳ　ｐａｋ　ＲＰ　１８−４１５
溶媒：４０％メタノール０．１％ＴＦＡ水溶液
流速：１ｍｌ／ｍｉｎ．
検出波長２２０ｎｍ
クロマトグラムを図７に示す。
【００４３】
セカンドラン
カラム：Ｓｈｏｄｅｘ　ＲＳ　ｐａｋ　ＲＰ　１８−４１５
溶媒：アセトニトリル／１０ｍＭ酢酸アンモニウム水溶液
アセトニトリル濃度が１０〜３０％（１５分）リニアグラジェント
流速：１ｍｌ／ｍｉｎ．
検出波長２２０ｎｍ
クロマトグラムを図８に示す。
【００４４】
サードラン
カラム：Ｓｈｏｄｅｘ　ＲＳ　ｐａｋ　ＲＰ　１８−４１５
溶媒：アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ水溶液
アセトニトリル濃度が０〜３０％（１５分）リニアグラジェント
流速：１ｍｌ／ｍｉｎ．
検出波長２２０ｎｍ
クロマトグラムを図９に示す。
【００４５】
ケルセチン−３−Ｏ−グルクロニド（Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ−３−Ｏ−ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄｅ）
ＦＡＢ−ＭＳ　（ｎｅｇａｔｉｖｅ）　ｍ／ｚ　４７７　［Ｍ−Ｈ］⁻．
^１Ｈ　ＮＭＲ　（５００ＭＨｚ，　ＣＤ_３ＯＤ）δ３．４６−３．６４　（４Ｈ，　ｍ，　Ｈ−Ｇｌｃ２，　３，　４　ａｎｄ　５）　，　５．３０　（ｄ，　Ｊ　＝　７．６Ｈｚ，　Ｈ−Ｇｌｃ１），　６．１９　（ｂｒ．ｓ，　Ｈ−６），　６．３８　（ｂｒ．ｓ，　Ｈ−８），　６．８５　（ｄ，　Ｊ　＝８．４Ｈｚ，　Ｈ−５’），　７．４８　（ｄｄ，　Ｊ　＝　２．１，　８．４Ｈｚ，　Ｈ−６’），　７．９３　（ｂｒ．ｓ，　Ｈ−２’）．
^１３Ｃ　ＮＭＲ　（５００ＭＨｚ，　ＣＤ_３ＯＤ）　δ７３．４，　７５．６，　７７．６　ａｎｄ　７８．１　（Ｃ−Ｇｌｃ２，　３，　４　ｏｒ　５），　９４．３　（Ｃ−８），　１００．０　（Ｃ−６），　１０４．４　（Ｃ−Ｇｌｃ１），　１０３．８　（Ｃ−１０），　１１６．２　（Ｃ−５’），　１１８．１　（Ｃ−２’），　１２２．８　（Ｃ−６’），　１３５．８　（Ｃ−３），　１４５．９，　１４９．９，　１５８．５　（Ｃ−９），　１５９．２（Ｃ−２），　１６３．０　（Ｃ−５），　１６６．１　（Ｃ−７），　１７６．３　（Ｃ−Ｇｌｃ６），　１７９．５　（Ｃ−４）．
これらのデータは文献値と一致していた。Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．　１９８５，　２４，　４６５−４６７．
【００４６】
ルチンの抽出
タラゴンの乾燥葉を５０％メタノール水溶液で抽出した。抽出物をＳｅｐ−Ｐａｃｋに吸着させ、６０％メタノール水溶液で溶出し、溶出画分を分取ＨＰＬＣに供した。
逆相分取ＨＰＬＣの条件
ファーストラン
カラム：Ｓｈｏｄｅｘ　ＲＳ　ｐａｋ　ＲＰ　１８−４１５
溶媒：メタノール／０．１％ＴＦＡ水溶液
メタノール濃度が３０〜７０％（１５分）リニアグラジェント
流速：１ｍｌ／ｍｉｎ．
検出波長２２０ｎｍ
クロマトグラムを図１０に示す。
【００４７】
タラゴン３は水で結晶化したので少量を取り、水に溶かしてＨＰＬＣでチェックした。
分析条件
カラム：Ｓｈｏｄｅｘ　ＲＳ　ｐａｋ　ＲＰ　１８−４１５
溶媒：アセトニトリル　／１０ｍＭ酢酸アンモニウム水溶液
アセトニトリル濃度が０〜３０％（１５分）リニアグラジェント
流速：１ｍｌ／ｍｉｎ．
検出波長２２０ｎｍ
クロマトグラムを図１１に示す。
【００４８】
ルチン（Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ−３−Ｏ−（６−Ｏ−ｒｈａｍｎｏｓｙｌ）−ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ　（ｒｕｔｉｎ））
ＦＡＢ−ＭＳ　（ｎｅｇａｔｉｖｅ）　ｍ／ｚ　４９９　［Ｍ−Ｈ＋Ｎａ−Ｈ］⁻．
^１Ｈ　ＮＭＲ　（５００ＭＨｚ，　ＣＤ_３ＯＤ）δ１．０８　（３Ｈ，　ｄ，　Ｊ　＝　６．２Ｈｚ，　Ｈ−Ｒｈａ６），　３．２２〜３．２６　（２Ｈ，　ｍ，　Ｈ−Ｇｌｃ４，　Ｒｈａ４），　３．３０　（ｂｒ．ｓ，　Ｈ−Ｇｌｃ５），　３．３５　（ｍ，　Ｈ−Ｇｌｃ６），　３．３９〜３．４５　（３Ｈ，　ｍ，　Ｈ−Ｇｌｃ２　ａｎｄ　３，　Ｒｈａ５），　３．５１　（ｂｒ．ｄ，　Ｊ　＝　９．４Ｈｚ，　Ｈ−Ｒｈａ３），　３．６１　（ｂｒ．ｓ，　Ｈ−Ｒｈａ２），　３．７６　（ｂｒ．ｄ，　Ｊ　＝　１０．５Ｈｚ，　Ｈ−Ｇｌｃ６），　４．４８　（ｂｒ．ｓ，　Ｈ−Ｒｈａ１），　５．０６　（ｄ，　Ｊ　＝　７．４Ｈｚ，　Ｈ−Ｇｌｃ１），　６．１４　（ｂｒ．ｓ，　Ｈ−６），　６．３２　（ｂｒ．ｓ，　Ｈ−８），　６．８２　（ｄ，　Ｊ　＝　８．４Ｈｚ，　Ｈ−５’），　７．５８　（ｂｒ．ｄ，　Ｊ　＝　８．４Ｈｚ，　Ｈ−６’），　７．６２　（ｂｒ．ｓ，　Ｈ−２’）．
^１３Ｃ　ＮＭＲ　（５００ＭＨｚ，　ＣＤ_３ＯＤ）δ１７．９　（Ｃ−Ｒｈａ６），　６８．６　（Ｃ−Ｇｌｃ６），　６９．７（Ｃ−Ｒｈａ５），　７１．４　（Ｃ−Ｇｌｃ４），　７２．１　（Ｃ−Ｒｈａ２），　７２．３　（Ｃ−Ｒｈａ３），　７４．０　（Ｃ−Ｒｈａ４），　７５．８　（Ｃ−Ｇｌｃ２），　７７．２　（Ｃ−Ｇｌｃ５），　７８．２　（Ｃ−Ｇｌｃ３），　９４．９　（Ｃ−８），　１００．０　（Ｃ−６），　１０２．４　（Ｃ−Ｒｈａ１），　１０４．８　（Ｃ−Ｇｌｃ１），　１０５．６　（Ｃ−１０），　１１６．１　（Ｃ−５’），　１１７．８　（Ｃ−２’），　１２３．２　（Ｃ−１’），　１２３．６　（Ｃ−６’），　１３５．７　（Ｃ−３），　１４５．８　（Ｃ−３’），　１４９．８　（Ｃ−４’），　１５８．５　（Ｃ−９），　１５９．３　（Ｃ−２），　１６２．９　（Ｃ−５），　１６６．１　（Ｃ−７），　１７９．４（Ｃ−４）．
これらのデータは文献値と一致していた。Ｊ．　Ａｇｒｉｃ．　Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍ．　１９９９，　４７，　４８８０−４８８２．
【００４９】
得られたピメントール、ルテオリン−７−Ｏ−グルクロニド及びロスマリン酸、ケルセチン−３−Ｏ−グルクロニド、ルチンのＯＶＡ透過抑制作用を、上記腸管透過性試験方法により求めた。その結果、いずれの抽出物も１０^−７Ｍの濃度において、ＯＶＡの透過を顕著に抑制した。抑制結果を表１に示す。
【００５０】
【表１】

【００５１】
参考例１
マイクロカプセルの作製
カプセル材料としてトリパルミチン（ＴＰ）３ｇ及び脂溶性界面活性剤ＰＯ−５００（ＨＬＢ４．９）（ＴＰの１％）の混合物を７０℃で融解し、４２〜４３℃にまで冷却してからシリカゲル上で乾燥したトリプトファンエチルエステル１５０μｇを加え、攪拌しながらＴＰ飽和ヘキサン（３重量）に流し込んでスラリーとし、スプレー乾燥した。マイクロカプセル化した後、１８０μｍの篩を通過する画分は口腔内でのざらつきがなかったので、カプセルはこの篩で分級した。１％ＭＬ−７５０（ＨＬＢ１４．８）で表面処理し、２００メッシュ篩で濾過した後に減圧乾燥して、３．１ｇのマイクロカプセルを得た（トリプトファンエチルエステルの回収率９０％以上）。
【図面の簡単な説明】
【図１】オールスパイス抽出物のＨＰＬＣファーストランのクロマトグラム。
【図２】オールスパイス抽出物のＨＰＬＣセカンドランのクロマトグラム。
【図３】タイム抽出物のＨＰＬＣファーストランのクロマトグラム。
【図４】タイム抽出物のＨＰＬＣセカンドランのクロマトグラム。
【図５】タイム３のＨＰＬＣサードランのクロマトグラム。
【図６】タイム４のＨＰＬＣサードランのクロマトグラム。
【図７】コリアンダー抽出物のＨＰＬＣファーストランのクロマトグラム。
【図８】コリアンダー抽出物のＨＰＬＣセカンドランのクロマトグラム。
【図９】コリアンダー抽出物のＨＰＬＣサードランのクロマトグラム。
【図１０】タラゴン抽出物のＨＰＬＣファーストランのクロマトグラム。
【図１１】タラゴン３のＨＰＬＣクロマトグラム。
【図１２】香辛料抽出物のＯＶＡ透過抑制活性を示す。

Claims

トリプトファンエステル、フェニルアラニンエステルまたはチロシンエステルを有効成分とするアレルゲンの腸管透過抑制剤。
前記エステルが炭素数１〜６の低級アルキルエステルである請求項１に記載の腸管透過抑制剤。
２〜５個のアミノ酸からなり、少なくとも１つのトリプトファン、フェニルアラニンまたはチロシンを含むペプチドを有効成分とするアレルゲンの腸管透過抑制剤。
前記ペプチドがＷＳＮＳＧ、ＷＳＮ、ＷＳまたはＷＧである請求項３に記載の腸管透過抑制剤。
香辛料からの抽出物を有効成分とするアレルゲンの腸管透過抑制剤。
香辛料からの抽出物が、ルテオリン−７−Ｏ−グルクロニド、ロスマリン酸、ケルセチン−３−Ｏ−グルクロニド、ルチンまたはピメントールである請求項５に記載の腸管透過抑制剤。
アレルゲンが食物由来である請求項１〜６のいずれか一項に記載の腸管透過抑制剤。