JP2004129655A

JP2004129655A - 新規な一塩基多型を含むＨＮＦ−１α遺伝子の変異体及びこれによりコードされる蛋白質の変異体

Info

Publication number: JP2004129655A
Application number: JP2003318201A
Authority: JP
Inventors: Yeon-Su Lee; 李　娟　受; Sung-Young Jeong; 鄭　成　榮; Kyu-Jeung Ahn; 安　奎　定; Byung-Jun Kim; 金　秉　俊; Sook-Young Kim; 金　淑　榮; Mi-Kyung Kim; 金　美　▲きょう▼
Original assignee: Samsung Electronics Co Ltd
Current assignee: Samsung Electronics Co Ltd
Priority date: 2002-09-16
Filing date: 2003-09-10
Publication date: 2004-04-30
Also published as: EP1398389A3; US20040132060A1; EP1690949A1; CN1495191A; EP1398389A2; KR20040024783A

Abstract

【課題】ヒトＨＮＦ−１α遺伝子の新しい一塩基多型を含むポリヌクレオチドまたは核酸断片を提供する。
【解決手段】１６９９番目のアデニン（Ａ）を有する特定の配列の多型性部位または２９番目のチミン（Ｔ）を有する特定の配列の多型性部位を含み、前記複数の特定配列のヌクレオチド配列由来の１０以上の連続ヌクレオチドを含む核酸断片または前記断片と相補性を有する核酸断片。本発明の核酸断片は、青年の成人発症型糖尿病（ＭＯＤＹ）の診断方法に効果的に利用できる。また、本発明の対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドは、ＭＯＤＹの診断のプローブまたはプライマーとして利用できる。また、本発明のヒトＨＮＦ−１αポリペプチド変異体またはその断片は、ＭＯＤＹの診断に効果的に利用できる。また、本発明の蛋白質の分析方法は、ペプチド配列分析を通じてＭＯＤＹの診断に効率的に利用できる。
【選択図】　　　　　　なし

Description

　本発明は、配列番号１の１６９９番目のヌクレオチドがアデニン（Ａ）である多型性部位または配列番号３の２９番ヌクレオチドがチミン（Ｔ）である多型性部位を含み、配列番号１または３の配列の１０以上の連続ヌクレオチドを含む核酸断片または前記断片と相補性を有する核酸断片及び前記多型性部位を含む蛋白質変異体に関する。

　従来、医療分野では発症または発症の可能性を診断するために、多様な遺伝子の変異の分析方法が広範に使われてきた。前記方法は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）のような核酸増幅方法を利用して遺伝子を増幅させる段階、及びヌクレオチド配列分析、ハイブリダイゼーション、一本鎖ＤＮＡ高次構造多型（ＳＳＣＰ：ｓｉｎｇｌｅ　ｓｔｒａｎｄ　ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）分析を利用して前記増幅した遺伝子のヌクレオチド配列を分析する段階を含む方法を含む。例えば、乳癌と関連があることが知られているＢＲＣＡ遺伝子に対する遺伝子検査には、ＰＣＲ及びヌクレオチド配列分析が商業的に行われている。

　ＭＯＤＹ３遺伝子は、ＩＩ型糖尿病の１０〜３０％またはそれ以上を示す、青年の成人発症型糖尿病（ＭＯＤＹ；Ｍａｔｕｒｉｔｙ　Ｏｎｓｅｔ　Ｄｉａｂｅｔｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｙｏｕｎｇ）を誘発させる遺伝子のうち一つである（特許文献１、２、非特許文献１、２参照）。

　しかしながら、現在まで、韓国で報告されたＭＯＤＹ３遺伝子の突然変異は、数件（例えば、非特許文献３）に過ぎず、これらのうち以前に報告されていない新しい突然変異に関する報告はなかった。

　したがって、疾病の診断及び発症のメカニズムの研究及び治療薬の開発などの分野で以前に報告されていない新しい突然変異に関する研究が要求されている。特に、民族および地理に特異的に現れるＭＯＤＹ３遺伝子の突然変異をスクリーニングする必要性がますます要求されている。
米国特許第６，１８７，５３３号明細書国際公開第９８／１１２５４号パンフレットＹａｍａｄａ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｄｉａｂｅｔｅｓ　４８：６４５，　１９９７Ｙｏｓｈｉｕｃｈｉ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｈｕｍａｎ　ｍｕｔａｔｉｏｎ　１８：３４５，　２００１Ｋｉｍ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｋｏｒｅａｎ　Ｄｉａｂｅｔｅｓ　Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，　２３：７９３，　１９９９

　本発明の目的は、新規な突然変異部位を含む１０以上の連続したヌクレオチドを含む核酸断片及び前記断片と相補性を有する核酸断片を提供することである。

　また、本発明の他の目的は、新規な突然変異部位を含む核酸の全部または一部とハイブリッド形成する対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドを提供することである。

　また、本発明のさらなる他の目的は、新規な突然変異部位を含む核酸のヌクレオチド配列を決定する段階を含む核酸の分析方法を提供することである。

　また、本発明のさらに別の目的は、前記新規な核酸突然変異を含む核酸に相当するアミノ酸の突然変異を有する１０以上の連続したアミノ酸を含むアミノ酸配列を有するヒトＨＮＦ−１αポリペプチド変異体またはその断片を提供することである。

　本発明のさらに別の目的は、前記新規な核酸突然変異を含む核酸に相当するアミノ酸の突然変異を決定する段階を含む蛋白質の分析方法を提供することである。

　上記諸目的は、１６９９番目のアデニン（Ａ）を有する配列番号１の多型性部位または２９番目のチミン（Ｔ）を有する配列番号３の多型性部位を含み、配列番号１または３のヌクレオチド配列由来の１０以上の連続ヌクレオチドを含む核酸断片または前記断片と相補性を有する核酸断片によって達成される。

　また、上記諸目的は、本発明の核酸断片または前記断片と相補性を有する核酸断片とハイブリッド形成する対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドによっても達成される。

　上記諸目的は、配列番号１の１６９９番目または配列番号３の２９番目の位置に多型性部位を有するヌクレオチドを決定する段階を含むことを特徴とする核酸の分析方法によっても達成される。

　さらに、上記諸目的は、配列番号２の５６７番目のアミノ酸の多型性部位を含み、配列番号２のアミノ酸配列由来の１０以上の連続アミノ酸を含む、ヒトＨＮＦ−１αポリペプチドの変異体またはその断片によって達成される。

　上記諸目的は、配列番号２の５６７番目のアミノ酸配列を決定する段階を含むことを特徴とする蛋白質の分析方法によっても達成される。

　本発明の核酸断片は、ＭＯＤＹの診断方法のプローブまたはプライマーとして有効に利用できる。

　本発明の対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドは、ＭＯＤＹの診断のプローブまたはプライマーとして利用できる。

　本発明のヒトＨＮＦ−１αポリペプチドの変異体または断片は、ＭＯＤＹの診断のプローブまたはプライマーとして有効に利用できる。

　また、本発明の蛋白質の分析方法は、ペプチド配列分析を通じてＭＯＤＹの診断に有効に利用できる。

　第一の態様によると、本発明の核酸断片は、１６９９番目の位置にアデニン（Ａ）を有する配列番号１の多型性部位、または２９番目の位置にチミン（Ｔ）を有する配列番号３の多型性部位を含み、配列番号１または３の配列に開示された１０以上の連続したヌクレオチドまたは前記配列と相補性を有する核酸断片を含むことを特徴とする。

　具体的には、本発明の核酸断片は、配列番号１の１６９９番目の位置にヌクレオチドＡの多型性部位を含み、配列番号１の配列に開示された１０以上の連続したヌクレオチドを含むものであればいずれも含まれ、ＨＮＦ−１α遺伝子それ自体をも包含する。望ましくは、前記配列番号１の配列に開示された１０〜１００、より望ましくは１０〜５０のものであり、最も望ましくは１０〜２０の連続したヌクレオチドまたは当該配列と相補性を有するヌクレオチドである。多型性部位の位置は、特に制限されるものではなく、上記核酸断片のいずれの部位に位置していてもよい。配列番号１は、ヒトＨＮＦ−１αの塩基配列及びそれから推定されるアミノ酸配列である。

　また、本発明の核酸断片は、配列番号３の２９番目の位置にヌクレオチドＴの多型性部位を含み、配列番号３の配列に開示された１０以上の連続したヌクレオチドを含むものであれば、いずれも含まれる。望ましくは、前記配列番号３の配列に開示された１０〜１００、より望ましくは１０〜５０のものであり、最も望ましくは１０〜２０の連続したヌクレオチドまたは当該配列と相補性を有するヌクレオチドである。多型性部位の位置は、特に制限されるものではなく、上記核酸断片のいずれの部位に位置していてもよい。配列番号３は、ヒトＨＮＦ−１αのエクソン８およびエクソン９間に位置するイントロン８の配列に相当する。

　また、核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはＰＮＡであり、一本鎖または二本鎖の形態であってもよい。このような核酸断片は、天然または合成されたものであってもよい。

　本発明において、"多型"とは、遺伝学的に決定された集団内で２以上の別のゲノム配列または対立遺伝子の発生を意味する。"多型性マーカーまたは部位"は、変異がおきる位置である。望ましいマーカーは、選択された集団で、１％以上、より望ましくは１０％〜２０％の発生頻度を示す２つ以上の対立遺伝子を有する。多型性部位は一塩基対（すなわち、一塩基多型）であってもよい。

　また、第二の態様において、本発明の対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドは、配列番号１の１６９９番目のヌクレオチドがＡである多型性部位または配列番号３の２９番目のヌクレオチドがＴである多型性部位を含み、配列番号１または３の配列またはこれらのいずれかの配列と相補性を有する配列の核酸断片とハイブリッド形成することを特徴とする。

　本発明において、"対立遺伝子特異的"とは、各対立遺伝子に特異的にハイブリッド形成することを意味する。例えば、配列番号１の１６９９番ヌクレオチドがＡである一塩基多型（ＳＮＰ）を特異的に同定するために、ハイブリダイゼーションが行なわれる。ここで、"ハイブリダイゼーション"または"ハイブリッド形成"は、当該分野におけるのと同様の条件下で行なわれるが、一般的に、ストリンジェントな条件下で、例えば、１Ｍ以下の塩濃度及び少なくとも１５℃以上の温度の条件下で、行われる。例えば、５×ＳＳＰＥ（７５０ｍＭ　ＮａＣｌ，５０ｍＭ　リン酸ナトリウム，５ｍＭ　ＥＤＴＡ，ｐＨ７．４）及び２５〜３０℃の条件が、対立遺伝子特異的プローブのハイブリダイゼーションに適している。

　本発明において、対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドは、プローブでありうる。ここで、"プローブ"とは、ハイブリダイゼーション用プローブを意味し、すなわち、核酸の相補性ストランドに配列特異的に結合できるオリゴヌクレオチドを意味する。このようなプローブにとしては、特に制限されず、公知のプローブがあるが、たとえば、Ｎｉｅｌｓｅｎｅｔ　ａｌ．，　Ｓｃｉｅｎｃｅ　２５４，　１４９７−１５００　（１９９１）に記載されるペプチド核酸がある。本発明のプローブは、対立遺伝子特異的プローブであって、同種の二成分由来の核酸断片中に多型性部位が存在するため、一成分由来のＤＮＡ断片にはハイブリッド形成するが、他方の成分由来の断片にはハイブリッド形成しない。この場合、ハイブリダイゼーション条件は、対立遺伝子間のハイブリダイゼーションのストリンジェンシー（ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ　ｓｔｒｉｎｇｅｎｃｙ）で有意に異なるため、対立遺伝子のうち一つにのみハイブリッド形成するように十分にストリンジェントな条件でなければならない。本発明のプローブは、中央部位（すなわち、１５ヌクレオチドよりなるプローブであれば、７番目の位置が、また、１６ヌクレオチドよりなるプローブであれば、８または９番目の位置）が、前記配列の多型性部位と整列されることが望ましい。このようにすることによって対立遺伝子間でハイブリッド形成の有意な差が生じうる。本発明によるプローブは、対立遺伝子を検出するための診断方法等に使われうる。前記診断方法としては、サザンブロットのような核酸のハイブリダイゼーションに基づいた検出方法があり、ＤＮＡチップを特定の核酸を検出するのに使用する場合には、プローブを、ＤＮＡチップの基板にあらかじめ固定化した形態で提供されてもよい。

　本発明において、対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドは、プライマーでありうる。ここで、"プライマー"とは、適当な条件（例えば、４種のヌクレオチドトリホスフェート、ＤＮＡまたはＲＮＡポリメラーゼまたは逆転写酵素のようなポリメラーゼを含む緩衝条件）下で、適当な温度で、鋳型からのＤＮＡ合成（ｔｅｍｐｌａｔｅ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ　ＤＮＡ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）の開始点として作用できる一本鎖オリゴヌクレオチドを意味する。プライマーの適切な長さは、使用目的によって変わるが、通常、１５ないし３０ヌクレオチドである。通常、短いプライマー分子は、鋳型と安定したハイブリッドを形成するためにはさらに低い温度を必要とする。プライマー配列は、鋳型と完全に相補的である必要はないが、鋳型とハイブリッド形成するのに十分に相補的でなければならない。プライマーは、その３’末端が、配列番号１の１６９９番目のヌクレオチドがＡである多型性部位または配列番号３の２９番目のヌクレオチドがＴである多型性部位と整列されることが望ましい。プライマーは、多型性部位を含む標的ＤＮＡとハイブリッド形成して、プライマーが完全な相同性を示す対立遺伝子の増幅を開始する。このプライマーは、反対部位でハイブリッド形成する第２プライマーと対をなして使われる。増幅反応によって、二つのプライマーから増幅産物が得られ、これは特異的な対立遺伝子形態が存在するということを意味する。

　第三の態様によると、本発明の核酸の分析方法は、配列番号１の１６９９番目の多型性部位または配列番号３の２９番目の多型性部位でのヌクレオチド配列を決定する段階を含むことを特徴とする。このような方法は、まずサンプルからゲノムＤＮＡまたはＲＮＡのような核酸を単離する段階、及びこのようにして単離された核酸の配列を決定し、配列番号１の１６９９番目の多型性部位または配列番号３の２９番目の多型性部位でのヌクレオチド配列を決定する段階を含む。この分析の結果、配列番号１の多型性部位でのヌクレオチド配列がグアニン（Ｇ）以外のヌクレオチド、好ましくはアデニン（Ａ）である、または配列番号３の多型性部位での配列がシトシン（Ｃ）以外のヌクレオチド、好ましくはチミン（Ｔ）である場合には、青年の成人発症型糖尿病（ＭＯＤＹ）の危険性が高いと判断される。ここで、ヌクレオチド配列の決定には、当該分野において通常使われる方法、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ，　Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ，　２^ｎｄ　Ｅｄ．　ＣＳＨＰ，　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　１９８９に記載されるジデオキシ法などの公知の方法が使われても、あるいは自動化した機器を使用してもよい。

　第四の態様によると、本発明のヒトＨＮＦ−１αポリペプチドの変異体または断片は、配列番号２の５６７番目のアミノ酸がバリン（Ｖａｌ）以外のアミノ酸、望ましくはイソロイシン（Ｉｌｅ）である多型性部位を含み、配列番号２のアミノ酸配列由来の１０以上の連続したアミノ酸を含むことを特徴とする。配列番号２に示されるように、本発明のヒトＨＮＦ−１αポリペプチドの変異体または断片は、５６７番目の位置に、バリン（Ｖａｌ）の代わりに、イソロイシン（Ｉｌｅ）を有する配列番号２のアミノ酸配列由来であることが望ましい。

　第五の態様によると、本発明の蛋白質の分析方法は、配列番号２の５６７番目のアミノ酸を決定する段階を含むことを特徴とする。前記アミノ酸配列を決定する方法は、特に制限されず、当該分野において通常使われる方法、例えば、Ｎ末端またはＣ末端の塩基配列決定方法によってまたはＭＳ／ＭＳ、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦのような機器を使用して行なわれる。この際、配列番号２の５６７番目のアミノ酸がバリン（Ｖａｌ）以外のアミノ酸、望ましくはイソロイシン（Ｉｌｅ）である際には、青年の成人発症型糖尿病（ＭＯＤＹ）を誘発する可能性が高いと判断される。

　以下、本発明を、実施例を通じてより詳細に説明する。しかしながら、これらの実施例は、本発明を例示的に説明するためのものであって、本発明の範囲がこれら実施例に限定されることではない。

　本実施例では、臨床学的にＭＯＤＹを有していると推定される患者９７人から血液試料を採取して、ゲノムＤＮＡを単離した後、ＭＯＤＹ３遺伝子の１０個のエクソン及びイントロン部分を増幅して、塩基配列分析を実施することによって、ＭＯＤＹ３遺伝子の変異を検出した。

　実施例１：ヒトＨＮＦ−１α遺伝子の１０個のエクソンＤＮＡの増幅
　９７名の各患者から血液を採取して、これよりＱＩＡＧＥＮプラスミドミディキット（ＱＩＡＧＥＮ　ｐｌａｓｍｉｄ　ｍｉｄｉ　ｋｉｔ）（ＱＩＡＧＥＮ；ドイツ）を使用してゲノムＤＮＡを単離した後、１０個のＭＯＤＹ３エクソンを、表１に示される組成を有するＰＣＲ反応溶液を利用して増幅した。この際、ＰＣＲ増幅条件は、初期変性５分（９５℃）、変性３０秒（９５℃）／アニーリング１５秒（６２℃）／伸長３０秒（７２℃）３０回、最終伸長３分（７２℃）を３０サイクル繰り返した。この際使用したプライマーの配列を、下記表２に示す。

　下記表２に列挙されたプライマーのうち、順方向プライマーにはＴ７プロモータ配列（配列番号２４）を付加し、逆方向プライマーにはＴ３プロモータ配列（配列番号２５）を５’末端に付加した。

　増幅したそれぞれの産物を、ＱＩＡｑｕｉｃｋキット（ＱＩＡｑｕｉｃｋ　ｋｉｔ）を使用して精製した。このように精製された各産物は、塩基配列分析用の鋳型として使用した。

　実施例２：ＭＯＤＹ３遺伝子のヌクレオチド配列分析
　実施例１に記載の方法と同様にして精製された１０個のＭＯＤＹ３エクソンに対するそれぞれのプライマーを使用して、ＡＢＩ　ＰＲＩＳＭ　ＢｉｇＤｙｅ　ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ　ｃｙｃｌｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｒｅａｄｙ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ，米国）方法によって、ヌクレオチド配列分析ＰＣＲを行なった後、得られた産物をアルコール沈殿させた。アルコール沈殿後にホルムアミドに懸濁させて９５℃で５分間煮沸した後、４℃の氷に直ちに浸漬し、ＡＢＩ　ＰＲＩＳＭ　３７００　Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ，米国）で配列分析を行なった。

　実施例３：ＭＯＤＹ３遺伝子の変異の検出のための分析
　実施例２において配列分析により得られたＤＮＡ配列を、ＮＣＢＩのデータベースにあるヌクレオチド配列と比較して、ＤＮＡｓｔａｒプログラム（ＤＮＡＳＴＡＲ，Ｉｎｃ，米国）を利用して、遺伝子の変異を分析した。この際、一般的なＩＩ型糖尿病と診断された９７人の患者から採取された血液から分離したＤＮＡサンプルを増幅した、ＭＯＤＹ３遺伝子の１０個のエクソン配列を使用した。

　その結果、９７人の患者のうち、４人の患者において突然変異が見つかり、そのうち１人の患者から新規な突然変異が見つかった。すなわち、この患者のＭＯＤＹ３遺伝子のエクソン９の１６９９番目のヌクレオチドＧがＡに変更されていることが分かった（図１）。また、この変更により、ＭＯＤＹ３遺伝子によってコードされるアミノ酸配列の５６７番目のバリン（Ｖａｌ）がイソロイシン（Ｉｌｅ）に変更されていると推定された（配列番号２及び図１を参照）。

　実施例４：ＭＯＤＹ３遺伝子のイントロン部分のヌクレオチド配列分析
　実施例１〜３に記載したのと同様の方法を使用して、ＨＮＦ−１αのイントロン部分のヌクレオチド配列を分析した。分析の結果、１人の患者から新しい突然変異が見つかった。すなわち、この患者では、ＨＮＦ−１αのエクソン８とエクソン９との間に位置するイントロン８の２９番目のヌクレオチドＣがＴに変更されていることが分かった（図２）。

　糖尿病患者のうちＭＯＤＹ患者は、ＭＯＤＹ患者は全糖尿病患者の１０％を占めるヨーロッパに比して韓国では比較的少ないが、これは、ＭＯＤＹ遺伝子の分布が民族及び地域の特性によって異なるためであると推測される。ゆえに、ＭＯＤＹ患者の分布に関するより詳細な研究が行わねばならない。

　本発明の核酸断片は、ＭＯＤＹ患者に特異的な一塩基多型を含んでいるので、個体から採取されたＤＮＡ試料からＭＯＤＹの発症の有無またはＭＯＤＹにかかる危険性の高い個体を検出するのに有効に使用できる。

　本発明の対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドは、個体から採取されたＤＮＡ試料を分析する際のプローブまたはプライマーとして有効に使用でき、また前記ＤＮＡ試料からＭＯＤＹ患者または発病可能性の高い個体とそうでない個体とのＤＮＡを定量的に区別できるように増幅させるのに有効に使用できる。

　本発明のヒトＨＮＦ−１αポリペプチドの変異体またはその断片は、ＭＯＤＹ患者または発病可能性の高い個体に特異的な抗体を開発するのに有効に使用できる。

　また、本発明の蛋白質の分析方法は、個体から採取された蛋白質試料からＭＯＤＹ疾病の存否または発生可能性の高い個体とそうでない個体とを区別するのに有効に使用できる。

本発明のＨＮＦ−１αの突然変異ヌクレオチドが含まれた部分を含むゲノムＤＮＡ部分を示す図面である。本発明のＨＮＦ−１αの突然変異ヌクレオチドが含まれたイントロン８を含むゲノムＤＮＡ部分を示す図面である。

Claims

　１６９９番目にアデニン（Ａ）を有する配列番号１の多型性部位または２９番目にチミン（Ｔ）を有する配列番号３の多型性部位を含み、配列番号１または３のヌクレオチド配列由来の１０以上の連続ヌクレオチドを含む核酸断片または前記断片と相補性を有する核酸断片。
　前記断片は、１０〜１００の連続ヌクレオチドを含む、請求項１に記載の核酸断片または前記断片と相補性を有する核酸断片。
　請求項１または２に記載の核酸断片または前記断片と相補性を有する核酸断片とハイブリッド形成する対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチド。
　前記オリゴヌクレオチドはプローブである、請求項３に記載の対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチド。
　前記オリゴヌクレオチドはプライマーである、請求項３に記載の対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチド。
　前記プライマーの３’末端が前記核酸断片の多型性部位と整列される、請求項５に記載の対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチド。
　配列番号１の１６９９番目または配列番号３の２９番目の位置に多型性部位を有するヌクレオチドを決定する段階を含むことを特徴とする核酸の分析方法。
　前記１６９９番目に多型性部位を有するヌクレオチドがアデニン（Ａ）である、または前記２９番目に多型性部位を有するヌクレオチドがチミン（Ｔ）である際には、青年の成人発症型糖尿病（ＭＯＤＹ）を誘発する可能性が高いと判断される、請求項７に記載の核酸の分析方法。
　配列番号２の５６７番目にアミノ酸の多型性部位を含み、配列番号２のアミノ酸配列由来の１０以上の連続アミノ酸を含む、ヒトＨＮＦ−１αポリペプチドの変異体またはその断片。
　前記５６７番目のアミノ酸はイソロイシンである、請求項９に記載のヒトＨＮＦ−１αポリペプチドの変異体またはその断片。
　配列番号２の５６７番目のアミノ酸配列を決定する段階を含むことを特徴とする蛋白質の分析方法。
　前記５６７番目のアミノ酸がイソロイシンである際には、青年の成人発症型糖尿病（ＭＯＤＹ）を誘発する可能性が高いと判断される、請求項１１に記載の蛋白質の分析方法。