JP2014530181A - ＰＩ３Ｋβ阻害剤ならびにＭＥＫおよびＲＡＦ阻害剤を含むＭＡＰＫ経路阻害剤を使用する、癌を処置するための組成物および方法 - Google Patents

Abstract

本発明は、ＭＥＫ阻害剤およびＲＡＦ阻害剤を含む少なくとも１つのＭＡＰＫ経路阻害剤ならびに少なくとも１つのＰＩ３Ｋβ阻害剤を含む組成物に関し、ならびに癌の処置のためのその使用にも関する。

Description

癌処置の分野においては、より有効な方法および組成物の必要性が継続してある。本発明は概して、癌の処置のための組成物およびその使用に関するものであり、さらに詳細には、ホスホイノシチド３−キナーゼβ（ＰＩ３ＫβまたはＰＩ３Ｋベータ）の阻害剤ならびにＭＥＫ（ＭＡＰ２Ｋとしても公知のマイトジェン活性化プロテインキナーゼ）およびＲＡＦキナーゼ阻害剤を含む、ＭＡＰＫ（マイトジェン活性化プロテインキナーゼ）経路の阻害剤を含む組成物に関する。

ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）は、多くの細胞機能、例えば細胞周期、細胞運動性およびアポトーシスに関与するシグナル伝達分子である。ＰＩ３Ｋは、ＰＤＫ１およびＡＫＴ（ＰＫＢとしても公知）のようなセリン／トレオニンキナーゼを含む幾つかの標的タンパク質を活性化する第２メッセンジャー分子を産生する脂質キナーゼである。ＰＩ３Ｋは３つのクラスに分けられ、クラスＩは、ＰＩ３Ｋアルファ、ＰＩ３Ｋベータ、ＰＩ３ＫデルタおよびＰＩ３Ｋガンマという名称の異なる４種類のＰＩ３Ｋを含む。

ＰＩ３Ｋβは、遍在的に発現されるクラスＩＡメンバであり、チロシンキナーゼ受容体によってだけでなく、Ｇタンパク質共役受容体によっても活性化される、独自の特徴を有する（Ｖａｎｈａｅｓｅｂｒｏｅｃｋ ｅｔ ａｌ．，２００１）。

２−｛２−［（２Ｓ）−２−メチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］−２−オキソエチル｝−６−（モルホリン−４−イル）ピリミジン−４（３Ｈ）−オンは、クラスＩホスホイノシチド−３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）脂質キナーゼのＰＩ３Ｋβアイソフォームの選択的阻害剤である。この化合物は、ＰＩ３Ｋβアイソフォームを６５ｎＭのＩＣ５０にて強く標的として、他のＰＩ３Ｋアイソフォームに対して選択的であり、ＰＩ３Ｋアルファ、ＰＩ３ＫデルタおよびＰＩ３Ｋガンマにそれぞれ１１８８ｎＭ、４６５ｎＭおよび＞１００００ｎＭのＩＣ５０を有する。この化合物は、ＡｋｔのならびにＡｋｔ下流エフェクタのリン酸化および活性化を阻害する。

この化合物による処置の後、例えばＰＴＥＮ欠失腫瘍細胞などの活性化ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ経路を有する腫瘍細胞は通例、ＡｋｔならびにＡｋｔ下流エフェクタのリン酸化の阻害、腫瘍細胞増殖および腫瘍細胞死誘導の阻害を介して応答する。

ＭＥＫキナーゼの阻害剤によって処置された腫瘍細胞は通例、ＥＲＫ（細胞外シグナル調節キナーゼ）のリン酸化の阻害、サイクリンＤ１の下方制御、Ｇ１期停止の誘導を介して応答し、最終的にアポトーシスを受ける。薬理学的に、ＭＥＫ阻害は、ＢＲＡＦミュータント異種移植腫瘍における腫瘍成長を完全に無効にするのに対して、Ｒａｓミュータント腫瘍は大半の場合、部分的な阻害のみ示す（Ｄ．Ｂ．Ｓｏｌｉｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２００６；４３９：３５８−３６２）。このためＭＥＫは、癌治療薬の開発にとって非常に興味深い標的であった。

ＲＡＦキナーゼの阻害剤によって処置された腫瘍細胞は通例、ＭＥＫならびにＥＲＫのリン酸化の阻害、サイクリンＤの下方制御、Ｇ１期停止の誘導を介して応答し、最終的にアポトーシスを受ける。薬理学的に、ＢＲＡＦ−Ｖ６００Ｅ阻害は、ＢＲＡＦミュータント異種移植腫瘍における腫瘍成長を完全に無効にする。このためＲＡＦは、癌治療薬の開発にとって非常に興味深い標的であった。

１Ｈ−ベンゾイミダゾール−６−カルボキサミド、５−［（４−ブロモ−２−クロロフェニル）アミノ］−４−フルオロ−Ｎ−（２−ヒドロキシエトキシ）−１−メチル（ＡＺＤ−６２４４またはセルメチニブとも呼ばれる。）は、他のキナーゼに対して高い効力および選択性を有するＭＥＫキナーゼのアロステリック阻害剤である。セルメチニブは、固形腫瘍、例えば非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、膵臓癌、結腸直腸癌、胆道癌、甲状腺癌および悪性黒色腫の潜在的処置のための経口ＭＥＫ １／２阻害剤である。

１−プロパンスルホンアミド、Ｎ−［３−［［５−（４−クロロフェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］カルボニル］−２，４−ジフルオロフェニル］（ＰＬＸ４０３２またはベムラフェニブとも呼ばれる。）は、ＲＡＦキナーゼの阻害剤である。これは、ＢＲＡＦ（Ｖ６００Ｅ）、野生型ＢＲＡＦおよびＣＲＡＦ−１の活性をそれぞれ３１、１００および４８ｎＭのＩＣ５０で阻害する。これは他の多くのキナーゼに対して選択性を示す。ＰＬＸ−４０３２は、活性化ＢＲＡＦ突然変異を含む癌の処置のために開発された、経口利用可能な小分子である。ＰＬＸ−４０３２は、ＢＲＡＦ Ｖ６００Ｅ突然変異を有する黒色腫細胞株に対して抗腫瘍効果を示しているが、野生型ＢＲＡＦには示していない。

Ｄ．Ｂ．Ｓｏｌｉｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２００６；４３９：３５８−３６２

患者に対する毒性を最小限に抑えながら、細胞増殖および腫瘍成長を阻害するのにより有効な癌療法に対する必要性が残されている。当分野で従来より用いられているＭＥＫ、またはＲＡＦ阻害剤の投薬量を実質的に増量することなく、または維持もしくは減量さえして、より高い効率をもたらす他の標的化療法と組み合わせて使用するＭＥＫまたはＲＡＦ阻害剤療法に対して、特に必要性がある。

詳細には本願は、ＰＩ３Ｋβ選択的阻害剤と、ＭＥＫおよびＲＡＦ阻害剤を含む、ＭＡＰＫ経路のモジュレータとの組合せに関するものである。

詳細には本願は、ＰＩ３Ｋβ選択的阻害剤と、ＭＥＫ阻害剤またはＲＡＦ阻害剤との組合せに関するものである。

詳細には本願は、ＰＩ３Ｋβ選択的阻害剤と、ＭＥＫ阻害剤との組合せに関するものである。

詳細には本願は、ＰＩ３Ｋβ選択的阻害剤と、ＲＡＦ阻害剤との組合せに関するものである。

従って、本発明は、
少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物

または医薬として許容されるその塩および
少なくとも１つのＭＡＰＫ経路阻害剤
を含む、医薬組合せに関する。

一実施形態によれば、本発明の医薬組合せにおいて、ＭＡＰＫ経路阻害剤は、ＭＥＫキナーゼおよびＲＡＦキナーゼの阻害剤から成る群より選ばれる。

一実施形態によれば、本発明の医薬組合せにおいて、ＭＡＰＫ経路阻害剤は、ＭＥＫキナーゼおよびＲＡＦキナーゼの一方または両方の阻害剤である。

本発明は、ＭＡＰＫ経路阻害剤がＭＥＫ阻害剤である、上で定義した医薬組合せにも関する。

一実施形態によれば、ＭＡＰＫ経路阻害剤はＲＡＦ阻害剤である。

一実施形態によれば、ＭＡＰＫ経路阻害剤はＢＲＡＦ阻害剤である。

一実施形態によれば、上で定義した式（Ｉ）の化合物は、ＰＩ３Ｋ阻害剤、特にＰＩ３Ｋβ阻害剤である。

一態様において、多種多様の癌の処置における組成物およびその使用が提供される。

特定の実施形態において、ＭＥＫ阻害剤およびＲＡＦ阻害剤を含むＭＡＰＫ経路阻害剤ならびに上で定義した以下の構造式（Ｉ）を有する化合物を含む組成物が提供される。

特定の一実施形態において、ＭＥＫ阻害剤およびＲＡＦ阻害剤を含むＭＡＰＫ経路阻害剤ならびにＰＩ３Ｋβ阻害剤を含む組成物であって、ＰＩ３Ｋβ阻害剤が上記の構造式（Ｉ）を有する組成物が提供される

特定の実施形態において、ＭＥＫ阻害剤またはＲＡＦ阻害剤およびＰＩ３Ｋβ阻害剤を含む組成物であって、ＰＩ３Ｋβ阻害剤が上で定義した式（Ｉ）を有する組成物が提供される。

特定の実施形態において、ＭＥＫ阻害剤およびＰＩ３Ｋβ阻害剤を含む組成物であって、ＰＩ３Ｋβ阻害剤が上で定義した式（Ｉ）を有する組成物が提供される。

特定の実施形態において、ＲＡＦ阻害剤およびＰＩ３Ｋβ阻害剤を含む組成物であって、ＰＩ３Ｋβ阻害剤が上で定義した式（Ｉ）を有する組成物が提供される。

特定の実施形態において、ＢＲＡＦ阻害剤およびＰＩ３Ｋβ阻害剤を含む組成物であって、ＰＩ３Ｋβ阻害剤が上で定義した式（Ｉ）を有する組成物が提供される。

上の組成物において、ＭＥＫ阻害剤およびＲＡＦ阻害剤を含む、このようなＭＡＰＫ経路阻害剤は、当業者に公知の阻害剤の中から選ぶことができ、次に例えば以下の中から選ぶことができる：
ｉ）ＭＥＫ阻害剤：ＡＺＤ６２４４、ＲＯ４９８７６５５、ＲＯ５１２６７６６、ＴＡＫ−７３３、ＭＳＣ１９３６３６９Ｂ（ＡＳ７０３０２６）、ＧＳＫ１１２０２１２、ＢＡＹ８６−９７６６、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、ＰＤ３２５９０１、ＡＲＲＹ−４３８１６２、ＣＩ１０４０、Ｅ６２０１、ＡＲＲＹ３００
ｉｉ）ＲＡＦおよび／またはＢＲＡＦ選択的阻害剤：ＰＬＸ４０３２、ＧＳＫ２１１８４３６、ソラフェニブ（ＢＡＹ−４３−９００６）、ＢＭＳ−９０８６６２（ＸＬ−２８１）、ＲＡＦ２６５、ＲＧ−７２５６（ＲＯ５２１２０５４、ＰＬＸ３６０３）、ＲＯ５１２６７６６、ＡＲＱ−７３６、Ｅ−３８１０、ＤＣＣ−２０３６。

具体的な一実施形態によれば、本発明の医薬組合せにおいて、ＭＡＰＫ経路阻害剤は
化合物（２ａ）

または医薬として許容されるその塩および
化合物（２ｂ）

または医薬として許容されるその塩
から成る群より選ばれる。

特定の実施形態において、上の式（Ｉ）を有する化合物および上の式（２ａ）の化合物を含む組成物が提供される。

特定の実施形態において、上の式（Ｉ）を有する化合物および上の式（２ｂ）の化合物を含む組成物が提供される。特定の実施形態において、上の式（Ｉ）を有するＰＩ３Ｋβ阻害剤および上の式（２ａ）を有するＭＥＫ阻害剤を含む組成物が提供される。

特定の実施形態において、上の式（Ｉ）を有するＰＩ３Ｋβ阻害剤および上の式（２ｂ）を有するＲＡＦ阻害剤を含む組成物が提供される。

本発明は、上で定義した医薬組合せであって、ＭＡＰＫ経路阻害剤が式

の化合物（２ａ）または医薬として許容されるその塩である医薬組合せにも関する。

本発明は、上で定義した医薬組合せであって、ＭＡＰＫ経路阻害剤が式

の化合物（２ｂ）または医薬として許容されるその塩である医薬組合せにも関する。

一実施形態によれば、本発明の医薬組合せは、医薬として許容される担体をさらに含んでもよい。

一実施形態によれば、本発明の医薬組合せは、抗癌化合物から選ばれる少なくとも１つのさらなる化合物を含んでもよい。

一実施形態によれば、本発明の医薬組合せにおいて、化合物（Ｉ）は、ヒト腫瘍におけるＰＩ３Ｋβ標的阻害が可能となる投薬量を投与することができる。即ち、投薬量は、約６０−６００ｍｇ ｐｏ ｂｉｄ（経口、１日２回）または１２０−１２００ｍｇ ｐｏ ｑｄ（経口、毎日）と予測される。

一実施形態によれば、本発明の医薬組合せにおいて、ＭＡＰＫ経路阻害剤の量は、１０ｍｇ／ｋｇから２００ｍｇ／ｋｇ ｑｄまたはｂｉｄであり得る。

一実施形態によれば、本発明の医薬組合せにおいて、ＭＥＫ阻害剤の量は、約２−２００ｍｇ ｑｄまたはｂｉｄ ｐｏの投薬量で投与することができる。

一実施形態によれば、本発明の医薬組合せにおいて、ＲＡＦ阻害剤は、約６０−２００ｍｇ ｂｉｄ ｐｏの投薬量で投与することができる。

一実施形態によれば、本発明の医薬組合せにおいて、化合物（２ａ）阻害剤は、約２−２００ｍｇ ｑｄまたはｂｉｄ ｐｏの投薬量で投与することができる。

一実施形態によれば、本発明の医薬組合せにおいて、化合物（２ｂ）阻害剤は、約６０−２００ｍｇ ｂｉｄ ｐｏの投薬量で投与することができる。

本発明は、上で定義した医薬組合せを含む医薬品にも関する。

本発明は、上で定義した医薬組合せおよび医薬として許容される賦形剤を含む医薬組成物にも関する。

本発明は、上で定義した医薬組合せであって、医薬品として使用するための医薬組合せにも関する。

本発明は、上で定義した医薬組合せであって、癌の処置に使用するための医薬組合せにも関する。

一実施形態によれば、癌は、非小細胞肺癌、乳癌、膵臓癌、肝臓癌、前立腺癌、膀胱癌、子宮頸癌、甲状腺癌、結腸直腸癌、肝臓癌、筋肉癌、血液悪性腫瘍、黒色腫、子宮内膜癌および膵臓癌から成る群より選ばれる。

一実施形態によれば、癌は、いずれかの結腸直腸癌、子宮内膜癌、血液悪性腫瘍、甲状腺癌、乳癌、黒色腫、膵臓癌および前立腺癌から成る群より選ばれる。

一実施形態によれば、本発明は、式（Ｉ）の化合物の投与およびＭＡＰＫ経路阻害剤の投与による癌の処置に使用するための、上で定義した医薬組合せに関する。

一実施形態によれば、本発明は、式（Ｉ）の化合物の投与および化合物（２ａ）の投与による癌の処置に使用するための、上で定義した医薬組合せに関する。

一実施形態によれば、本発明は、式（Ｉ）の化合物の投与および化合物（２ｂ）の投与による癌の処置に使用するための、上で定義した医薬組合せに関する。

一実施形態によれば、本発明は、式（Ｉ）の化合物の投与と続いてのＭＡＰＫ経路阻害剤の投与による癌の処置に使用するための、上で定義した医薬組合せに関する。

一実施形態によれば、本発明は、ＭＡＰＫ経路阻害剤の投与と続いての式（Ｉ）の化合物の投与による癌の処置に使用するための、上で定義した医薬組合せに関する。

一実施形態によれば、本発明は、式（Ｉ）の化合物の投与と続いての化合物（２ａ）の投与による癌の処置に使用するための、上で定義した医薬組合せに関する。

一実施形態によれば、本発明は、式（Ｉ）の化合物の投与と続いての化合物（２ｂ）の投与による癌の処置に使用するための、上で定義した医薬組合せに関する。

一実施形態によれば、本発明は、化合物（２ａ）の投与と続いての式（Ｉ）の化合物の投与による癌の処置に使用するための、上で定義した医薬組合せに関する。

一実施形態によれば、本発明は、化合物（２ｂ）の投与と続いての式（Ｉ）の化合物の投与による癌の処置に使用するための、上で定義した医薬組合せに関する。

一実施形態によれば、本発明は、癌の処置に使用するための上で定義した医薬組合せであって、式（Ｉ）の化合物およびＭＡＰＫ経路阻害剤が腫瘍体積を減少させる相乗効果を生じる量である、医薬組合せに関する。

一実施形態によれば、本発明は、癌の処置に使用するための上で定義した医薬組合せであって、式（Ｉ）の化合物およびＭＡＰＫ経路阻害剤が腫瘍静止の併用効果を生じる量である、医薬組合せに関する。

一実施形態によれば、本発明は、上で定義した組合せであって、癌が：非小細胞肺癌、乳癌、膵臓癌、肝臓癌、前立腺癌、膀胱癌、子宮頸癌、甲状腺癌、結腸直腸癌、肝臓癌、筋肉癌、血液悪性腫瘍、黒色腫、子宮内膜癌および膵臓癌から成る群より選ばれる、組合せに関する。

一実施形態によれば、本発明は、上で定義した組合せであって、癌が：結腸直腸癌、子宮内膜癌、血液悪性腫瘍、甲状腺癌、乳癌、黒色腫、膵臓癌および前立腺癌から成る群より選ばれる、組合せに関する。

一実施形態によれば、本発明は、上で定義した組合せであって、式（Ｉ）の化合物の投与にＭＡＰＫ経路阻害剤の投与が続く、組合せに関する。

一実施形態によれば、本発明は、上で定義した組合せであって、ＭＡＰＫ経路阻害剤の投与に式（Ｉ）の化合物の投与が続く、組合せに関する。

一実施形態によれば、本発明は、上で定義した組合せであって、式（Ｉ）の化合物の投与に化合物（２ａ）の投与が続く、組合せに関する。

一実施形態によれば，本発明は、上で定義した組合せであって、式（Ｉ）の化合物の投与に化合物（２ｂ）の投与が続く、組合せに関する。

一実施形態によれば、本発明は、上で定義した組合せであって、化合物（２ａ）の投与に式（Ｉ）の化合物の投与が続く、組合せに関する。

一実施形態によれば，本発明は、上で定義した組合せであって、化合物（２ｂ）の投与に式（Ｉ）の化合物の投与が続く、組合せに関する。

一実施形態によれば、本発明は、上で定義した組合せであって、式（Ｉ）の化合物およびＭＡＰＫ経路阻害剤が腫瘍体積を減少させる相乗効果を生じる量である、組合せに関する。

一実施形態によれば、本発明は、上で定義した組合せであって、式（Ｉ）の化合物およびＭＡＰＫ経路阻害剤が腫瘍静止の併用効果を生じる量である、組合せに関する。

本発明は、
上で定義した少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物または医薬として許容されるその塩、および
上で定義した化合物（２ａ）または医薬として許容されるその塩および上で定義した化合物（２ｂ）または医薬として許容されるその塩から成る群より選ばれる、少なくとも１つのＭＡＰＫ経路阻害剤
を含む、癌の処置に使用するための医薬組合せにも関する。

本発明は、
上で定義した式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物または医薬として許容されるその塩および
少なくとも１つのＭＡＰＫ経路阻害剤
を含む、抗癌療法における同時、個別または連続使用のための併用製剤としての生成物にも関する。

上述したような生成物が抗癌療法での連続使用のための併用製剤である場合、式（Ｉ）の化合物が最初に、次にＭＡＰＫ経路阻害剤が投与されるか、またはＭＡＰＫが最初に、次に式（Ｉ）の化合物が投与されるかのどちらかである。

別の態様において、癌を有する患者を処置する方法であって、治療的有効量の前述の式（Ｉ）の化合物または医薬として許容されるその塩を、ＭＥＫおよびＲＡＦ阻害剤を含む、ＭＡＰＫ経路の阻害剤から選択される化合物と組み合わせて患者に投与することを含む方法が提供される。

別の態様において、癌を有する患者を処置する方法であって、治療的有効量の前述の式（Ｉ）の化合物または医薬として許容されるその塩を、ＭＥＫの阻害剤から選択される化合物と組み合わせて患者に投与することを含む方法が提供される。

別の態様において、癌を有する患者を処置する方法であって、治療的有効量の前述の式（Ｉ）の化合物または医薬として許容されるその塩を、ＲＡＦの阻害剤から選択される化合物と組み合わせて患者に投与することを含む方法が提供される。

一実施形態において、癌を有する患者を処置する方法は、ＭＥＫ阻害剤またはＲＡＦ阻害剤の投薬量およびＰＩ３Ｋβ阻害剤の投薬量を患者に投与することを含み、前記ＰＩ３Ｋβ阻害剤は上の式（Ｉ）を有する。

一実施形態において、癌を有する患者を処置する方法は、ＭＥＫ阻害剤の投薬量およびＰＩ３Ｋβ阻害剤の投薬量を患者に投与することを含み、前記ＭＥＫ阻害剤は上で定義した式（２ａ）を有し、前記ＰＩ３Ｋβ阻害剤は上で定義した式（Ｉ）を有する。

一実施形態において、癌を有する患者を処置する方法は、ＲＡＦ阻害剤の投薬量およびＰＩ３Ｋβ阻害剤の投薬量を患者に投与することを含み、前記ＲＡＦ阻害剤は上で定義した式（２ｂ）を有し、ＰＩ３Ｋβ阻害剤は上で定義した式（Ｉ）を有する。

幾つかの実施形態において、本明細書に記載する組成物および使用方法は、患者の腫瘍体積を相乗的に低減する（即ち組成物または投与量における）量において行う。さらなる実施形態において、相乗効果的組合せは、腫瘍静止または腫瘍縮退を実現する。

別の態様において、（Ａ）上で定義した式（Ｉ）による化合物または医薬として許容されるその塩、（Ｂ）上で定義した式（２ａ）および式（２ｂ）から成る群より選択される化合物または医薬として許容されるその塩、ならびに場合により（Ｃ）使用説明書を含むキットが提供される。

本発明は、
上で定義した式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物または医薬として許容されるその塩、
少なくとも１つのＭＡＰＫ経路阻害剤および
場合により、使用説明書
を含むキットにも関する。

本発明は、
上で定義した式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物または医薬として許容されるその塩、
上で定義した化合物（２ａ）または医薬として許容されるその塩および上で定義した化合物（２ｂ）または医薬として許容されるその塩から成る群より選ばれる、少なくとも１つのＭＡＰＫ経路阻害剤ならびに
場合により、使用説明書
を含むキットにも関する。

ヒト黒色腫細胞株ＵＡＣＣ−６２における、化合物（２ａ）と組み合わせた化合物（Ｉ）のインビトロ活性のアイソボログラム表示である。 ヒト黒色腫細胞株ＵＡＣＣ−６２における、化合物（２ｂ）と組み合わせた化合物（Ｉ）のインビトロ活性のアイソボログラム表示である。 ヒト黒色腫細胞株ＷＭ−２６６．４における、化合物（２ａ）と組み合わせた化合物（Ｉ）のインビトロ活性のアイソボログラム表示である。 ヒト黒色腫細胞株ＷＭ−２６６．４における、化合物（２ｂ）と組み合わせた化合物（Ｉ）のインビトロ活性のアイソボログラム表示である。 ヒト黒色腫腫瘍ＵＡＣＣ−６２保持ＳＣＩＤメスマウスに対する、化合物（２ａ）（ＡＺＤ−６２４４）（１０および２５ｍｇ／ｋｇ ｑｄ）と組み合わせた化合物（Ｉ）（１５０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）の抗腫瘍活性の評価の間の体重変化を示すプロットを提供する。 白四角形の曲線は対照に相当する；連続線の曲線は、１５０ｍｇ／ｋｇ、１日２回の化合物（Ｉ）に相当する；点線・黒三角形の曲線は、２５ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ａ）に相当する；点線・黒菱形の曲線は、１０ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ａ）に相当する；連続線・黒三角の曲線は、１５０ｍｇ／ｋｇ、１日２回の化合物（Ｉ）および２５ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ａ）の組合せに相当する；連続線・黒菱形の曲線は、１５０ｍｇ／ｋｇ、１日２回の化合物（Ｉ）および１０ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ａ）の組合せに相当する；ならびに黒三角形の曲線は、ＰＯ処置に相当する。 ヒト黒色腫腫瘍ＵＡＣＣ−６２保持ＳＣＩＤメスマウスに対する、化合物（２ａ）（ＡＺＤ−６２４４）（１０および２５ｍｇ／ｋｇ ｑｄ）と組み合わせた化合物（Ｉ）（１５０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）の抗腫瘍活性を示すプロットを提供する。 白四角形の曲線は対照に相当する；連続線の曲線は、１５０ｍｇ／ｋｇ、１日２回の化合物（Ｉ）に相当する；点線・黒三角形の曲線は、２５ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ａ）に相当する；点線・黒菱形の曲線は、１０ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ａ）に相当する；連続線・黒三角の曲線は、１５０ｍｇ／ｋｇ、１日２回の化合物（Ｉ）および２５ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ａ）の組合せに相当する；連続線・黒菱形の曲線は、１５０ｍｇ／ｋｇ、１日２回の化合物（Ｉ）および１０ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ａ）の組合せに相当する；ならびに黒三角形の曲線は、ＰＯ処置に相当する。 ヒト黒色腫腫瘍ＵＡＣＣ−６２保持ＳＣＩＤメスマウスに対する、化合物（２ｂ）（ＰＬＸ−４０３２）（５０および１００ｍｇ／ｋｇ ｑｄ）と組み合わせた化合物（Ｉ）（１５１．５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）の抗腫瘍活性の評価の間の体重変化を示すプロットを提供する。 白四角形の曲線は対照に相当する；連続線の曲線は、１５１．５ｍｇ／ｋｇ、１日２回の化合物（Ｉ）に相当する；点線・黒三角形の曲線は、１００ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ｂ）に相当する；点線・黒菱形の曲線は、５０ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ｂ）に相当する；連続線・黒三角の曲線は、１５１．５ｍｇ／ｋｇ、１日２回の化合物（Ｉ）および１００ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ｂ）の組合せに相当する；連続線・黒菱形の曲線は、１５１．５ｍｇ／ｋｇ、１日２回の化合物（Ｉ）および５０ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ｂ）の組合せに相当する；ならびに黒三角形の曲線は、ＰＯ処置に相当する。 ヒト黒色腫腫瘍ＵＡＣＣ−６２保持ＳＣＩＤメスマウスに対する、化合物（２ｂ）（ＰＬＸ−４０３２）（５０および１００ｍｇ／ｋｇ ｑｄ）と組み合わせた化合物（Ｉ）（１５１．５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）の抗腫瘍活性を示すプロットを提供する。 白四角形の曲線は対照に相当する；連続線の曲線は、１５１．５ｍｇ／ｋｇ、１日２回の化合物（Ｉ）に相当する；点線・黒三角形の曲線は、１００ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ｂ）に相当する；点線・黒菱形の曲線は、５０ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ｂ）に相当する；連続線・黒三角の曲線は、１５１．５ｍｇ／ｋｇ、１日２回の化合物（Ｉ）および１００ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ｂ）の組合せに相当する；連続線・黒菱形の曲線は、１５１．５ｍｇ／ｋｇ、１日２回の化合物（Ｉ）および５０ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ｂ）の組合せに相当する；ならびに黒三角形の曲線は、ＰＯ処置に相当する。 ヒト黒色腫腫瘍ＷＭ−２６６．４保持ＳＣＩＤメスマウスに対する、化合物（２ａ）（ＡＺＤ−６２４４）（１０および２５ｍｇ／ｋｇ ｑｄ）と組み合わせた化合物（Ｉ）（１５０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）の抗腫瘍活性の評価の間の体重変化を示すプロットを提供する。 白四角形の曲線は対照に相当する；連続線の曲線は、１５０ｍｇ／ｋｇ、１日２回の化合物（Ｉ）に相当する；点線・黒三角形の曲線は、２５ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ａ）に相当する；点線・黒菱形の曲線は、１０ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ａ）に相当する；連続線・黒三角の曲線は、１５０ｍｇ／ｋｇ、１日２回の化合物（Ｉ）および２５ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ａ）の組合せに相当する；連続線・黒菱形の曲線は、１５０ｍｇ／ｋｇ、１日２回の化合物（Ｉ）および１０ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ａ）の組合せに相当する；ならびに黒三角形の曲線は、ＰＯ処置に相当する。 ヒト黒色腫腫瘍ＷＭ−２６６．４保持ＳＣＩＤメスマウスに対する、化合物（２ａ）（ＡＺＤ−６２４４）（１０および２５ｍｇ／ｋｇ ｑｄ）と組み合わせた化合物（Ｉ）（１５０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）の抗腫瘍活性を示すプロットを提供する。 白四角形の曲線は対照に相当する；連続線の曲線は、１５０ｍｇ／ｋｇ、１日２回の化合物（Ｉ）に相当する；点線・黒三角形の曲線は、２５ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ａ）に相当する；点線・黒菱形の曲線は、１０ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ａ）に相当する；連続線・黒三角の曲線は、１５０ｍｇ／ｋｇ、１日２回の化合物（Ｉ）および２５ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ａ）の組合せに相当する；連続線・黒菱形の曲線は、１５０ｍｇ／ｋｇ、１日２回の化合物（Ｉ）および１０ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ａ）の組合せに相当する；ならびに黒三角形の曲線は、ＰＯ処置に相当する。 ヒト黒色腫腫瘍ＷＭ−２６６．４保持ＳＣＩＤメスマウスに対する、化合物（２ｂ）（ＰＬＸ−４０３２）（５０および１００ｍｇ／ｋｇ ｑｄ）と組み合わせた化合物（Ｉ）（１５０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）の抗腫瘍活性の評価の間の体重変化を示すプロットを提供する。 白四角形の曲線は対照に相当する；連続線の曲線は、１５０ｍｇ／ｋｇ、１日２回の化合物（Ｉ）に相当する；点線・黒三角形の曲線は、１００ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ｂ）に相当する；点線・黒菱形の曲線は、５０ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ｂ）に相当する；連続線・黒三角の曲線は、１５０ｍｇ／ｋｇ、１日２回の化合物（Ｉ）および１００ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ｂ）の組合せに相当する；連続線・黒菱形の曲線は、１５０ｍｇ／ｋｇ、１日２回の化合物（Ｉ）および５０ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ｂ）の組合せに相当する；ならびに黒三角形の曲線は、ＰＯ処置に相当する。 ヒト黒色腫腫瘍ＷＭ−２６６．４保持ＳＣＩＤメスマウスに対する、化合物（２ｂ）（ＰＬＸ−４０３２）（５０および１００ｍｇ／ｋｇ ｑｄ）と組み合わせた化合物（Ｉ）（１５０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）の抗腫瘍活性を示すプロットを提供する。 白四角形の曲線は対照に相当する；連続線の曲線は、１５０ｍｇ／ｋｇ、１日２回の化合物（Ｉ）に相当する；点線・黒三角形の曲線は、１００ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ｂ）に相当する；点線・黒菱形の曲線は、５０ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ｂ）に相当する；連続線・黒三角の曲線は、１５０ｍｇ／ｋｇ、１日２回の化合物（Ｉ）および１００ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ｂ）の組合せに相当する；連続線・黒菱形の曲線は、１５０ｍｇ／ｋｇ、１日２回の化合物（Ｉ）および５０ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ｂ）の組合せに相当する；ならびに黒三角形の曲線は、ＰＯ処置に相当する。 ヒト原発性結腸腫瘍ＣＲ−ＩＧＲ−０１４Ｐ保持ＳＣＩＤメスマウスに対する、化合物（２ａ）（ＡＺＤ−６２４４）（１０および２５ｍｇ／ｋｇ ｑｄ）と組み合わせた化合物（Ｉ）（１５０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）の抗腫瘍活性の評価の間の体重変化を示すプロットを提供する。 白四角形の曲線は対照に相当する；連続線の曲線は、１５０ｍｇ／ｋｇ、１日２回の化合物（Ｉ）に相当する；点線・黒三角形の曲線は、２５ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ａ）に相当する；点線・黒菱形の曲線は、１０ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ａ）に相当する；連続線・黒三角の曲線は、１５０ｍｇ／ｋｇ、１日２回の化合物（Ｉ）および２５ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ａ）の組合せに相当する；連続線・黒菱形の曲線は、１５０ｍｇ／ｋｇ、１日２回の化合物（Ｉ）および１０ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ａ）の組合せに相当する；ならびに黒三角形の曲線は、ＰＯ処置に相当する。 ヒト原発性結腸腫瘍ＣＲ−ＩＧＲ−０１４Ｐ保持ＳＣＩＤメスマウスに対する、化合物（２ａ）（ＡＺＤ−６２４４）（１０および２５ｍｇ／ｋｇ ｑｄ）と組み合わせた化合物（Ｉ）（１５０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）の抗腫瘍活性を示すプロットを提供する。 白四角形の曲線は対照に相当する；連続線の曲線は、１５０ｍｇ／ｋｇ、１日２回の化合物（Ｉ）に相当する；点線・黒三角形の曲線は、２５ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ａ）に相当する；点線・黒菱形の曲線は、１０ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ａ）に相当する；連続線・黒三角の曲線は、１５０ｍｇ／ｋｇ、１日２回の化合物（Ｉ）および２５ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ａ）の組合せに相当する；連続線・黒菱形の曲線は、１５０ｍｇ／ｋｇ、１日２回の化合物（Ｉ）および１０ｍｇ／ｋｇ、１日１回の化合物（２ａ）の組合せに相当する；ならびに黒三角形の曲線は、ＰＯ処置に相当する。

他の目的、特徴および利点は、以下の詳細な説明から明らかとなる。本発明の精神および範囲内の多様な変更および修正がこの詳細な説明から当業者に明らかとなるため、詳細な説明および具体的な実施例は、例証のために与えられているに過ぎない。さらに実施例は、本発明の原理を実証し、これが当業者に明らかに有用となる、すべての実施例への本発明の利用を具体的に示すことを期待することはできない。

一態様において、癌を有する患者を処置する方法が提供される。一実施形態において、方法は、下でさらに説明するように、治療的有効量のＭＥＫ阻害剤およびＲＡＦ阻害剤を含むＭＡＰＫ経路阻害剤ならびに治療的有効量のＰＩ３Ｋβ阻害剤を患者に投与することを含む。

一態様において、癌を有する患者を処置する方法が提供される。一実施形態において、方法は、下でさらに説明するように、治療的有効量のＭＥＫ阻害剤および治療的有効量のＰＩ３Ｋβ阻害剤を患者に投与することを含む。

一態様において、癌を有する患者を処置する方法が提供される。一実施形態において、方法は、下でさらに説明するように、治療的有効量のＲＡＦ阻害剤および治療的有効量のＰＩ３Ｋβ阻害剤を患者に投与することを含む。

一実施形態において、ＭＥＫ阻害剤は、上で定義した構造式（２ａ）を有する。

式（２ａ）によるＭＥＫ阻害剤は、本明細書で「式（２ａ）の化合物」と呼ばれ、ＡＺＤ６２４４としても公知である。本化合物の調製、特性およびＭＥＫ阻害能力は例えば、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｐａｔｅｎｔ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．ＷＯ２００３／０７７９１４に、特にこの中の実施例１０の化合物２９ｃおよび表ｐ３７で提供されている。ＷＯ２００３／０７７９１４の内容全体は、参照により本明細書に組み入れられている。式（２ａ）の化合物の中性形および塩形は、すべて本明細書で考慮する。

一実施形態において、ＲＡＦ阻害剤は、上で定義した構造式（２ｂ）を有する。

式（２ｂ）によるＲＡＦ阻害剤は、本明細書で「式（２ｂ）の化合物」と呼ばれ、ＰＬＸ４０３２としても公知である。化合物（２ｂ）の調製、特性およびＲＡＦ阻害能力は例えば、国際出願公開ＷＯ２００７／００２３２５に、特にこの中の実施例４４の化合物Ｐ−０９５６および表２ａ、２ｂ、２ｃ、２ｄ、２ｅおよび２ｈで提供されている。ＷＯ２００７／００２３２５の内容全体は、参照により本明細書に組み入れられている。式（２ｂ）の化合物の中性形および塩形は、すべて本明細書で考慮する。

一実施形態において、ＰＩ３Ｋβ阻害剤は、上で定義した構造式（Ｉ）を有する。

式（Ｉ）によるＰＩ３Ｋβ阻害剤は、本明細書で「化合物（Ｉ）」と呼ばれる。化合物（Ｉ）の調製、特性およびＰＩ３Ｋβ阻害能力は例えば、国際出願公開ＷＯ２０１１／００１１１４に、特にこの中の実施例１１７および表ｐ２１６で提供されている。ＷＯ２０１１／００１１１４の内容全体は、参照により本明細書に組み入れられている。式（Ｉ）の化合物の中性形および塩形は、すべて本明細書で考慮する。

幾つかの実施形態において、上記の化合物は、不溶媒和化することができる。一実施形態によれば、上記の化合物は固体形であることができる。他の実施形態において、方法で使用する化合物の一方または両方が溶媒和形である。当分野で公知であるように、溶媒和物は、医薬として許容される溶媒のいずれ、例えば水、エタノールなどであることができる。概して、溶媒和物が存在することまたは存在しないことは、上記のＭＥＫ阻害剤もしくはＲＡＦ阻害剤またはＰＩ３Ｋβ阻害剤の有効性に対して実質的な効果を有していない。

式（Ｉ）、式（２ａ）および式（２ｂ）の化合物はこれの中性形で描かれているが、幾つかの実施形態において、これらの化合物は、医薬として許容される塩形で使用される。塩は、当分野で公知の方法のいずれによっても、例えば参照により本明細書に組み入れられている、ＷＯ２０１１／００１１１４で詳説されている方法および塩形のいずれによっても得ることができる。

化合物の「医薬として許容される塩」は、医薬として許容され、薬理活性を保持する塩を指す。医薬として許容される塩は非毒性であることが理解される。好適な医薬として許容される塩に関する追加の情報は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９８５またはＳ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅ，ｅｔ ａｌ．，“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ，”Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，１９７７；６６、１−１９に見出され、このどちらも参照により本明細書に組み入れられている。

医薬として許容される酸付加塩の例としては、無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸によって形成されたもの、ならびに有機酸、例えば酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、３−（４−ヒドロキシシベンゾイル）安息香酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタンジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、グルコヘプトン酸、４，４’−メチレンビス−（３−ヒドロキシ−２−エン−１−カルボキシル酸）、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、第３級ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸、ｐ−トルエンスルホン酸およびサリチル酸によって形成された塩が挙げられる。

最初の１組の実施形態において、式（２ａ）のＭＥＫ阻害剤は、式（Ｉ）のＰＩ３Ｋβ阻害剤と同時に投与される。同時投与は通例、両方の化合物が患者へ正確に同じ時間に進入することを意味する。しかし同時投与は、ＭＥＫ阻害剤およびＰＩ３Ｋβ阻害剤が患者へ異なる時間に進入する可能性も含むが、時間差は十分に小さいので、第１に投与された化合物には、第２に投与された化合物の進入前に患者に効果を及ぼす時間は与えられない。このような遅延時間は通例、１分未満、より通例には、３０秒未満に相当する。

最初の１組の実施形態において、式（２ｂ）のＲＡＦ阻害剤は、式（Ｉ）のＰＩ３Ｋβ阻害剤と同時に投与される。同時投与は通例、両方の化合物が患者へ正確に同じ時間に進入することを意味する。しかし同時投与は、ＲＡＦ阻害剤およびＰＩ３Ｋβ阻害剤が患者へ異なる時間に進入する可能性も含むが、時間差は十分に小さいので、第１に投与された化合物には、第２に投与された化合物の進入前に患者に効果を及ぼす時間は与えられない。このような遅延時間は通例、１分未満、より通例には、３０秒未満に相当する。

化合物が溶解している一例において、同時投与は、化合物の組合せを含有する溶液を投与することにより実現できる。別の例において、一方がＭＥＫ阻害剤を含有し、もう一方がＰＩ３Ｋβ阻害剤を含有する、個別の溶液の同時投与を用いることができる。化合物が固体形である一例において、同時投与は、化合物の組合せを含有する組成物を投与することにより実現できる。

化合物が溶解している一例において、同時投与は、化合物の組合せを含有する溶液を投与することにより実現できる。別の例において、一方がＲＡＦ阻害剤を含有し、もう一方がＰＩ３Ｋβ阻害剤を含有する、個別の溶液の同時投与を用いることができる。化合物が固体形である一例において、同時投与は、化合物の組合せを含有する組成物を投与することにより実現できる。

一例において、本発明の化合物は、特に錠剤としての固体形であることができる。一実施形態において、化合物（Ｉ）は、特に錠剤としての固体形で投与され得る。

他の実施形態において、ＭＥＫ阻害剤およびＰＩ３Ｋβ阻害剤は同時投与されない。この点で、第１に投与される化合物には、第２に投与される化合物が投与される前に患者に効果を及ぼす時間が与えられる。概して、時間差は、第１に投与される化合物が患者においてこれの効果を完了する時間を超えて、または患者において完全にまたは実質的に排除または不活性化される時間を超えて延長されることはない。１組の実施形態において、ＭＥＫ阻害剤はＰＩ３Ｋβ阻害剤の前に投与される。別の組の実施形態において、ＰＩ３Ｋβ阻害剤はＭＥＫ阻害剤の前に投与される。非同時投与の時間差は通例、１分を超え、例えば正確には、少なくとも５分、１０分、１５分、３０分、４５分、６０分、２時間、３時間、６時間、９時間、１２時間、２４時間、３６時間もしくは４８時間、最長で５分、１０分、１５分、３０分、４５分、６０分、２時間、３時間、６時間、９時間、１２時間、２４時間、３６時間もしくは４８時間、または５分未満、１０分未満、１５分未満、３０分未満、４５分未満、６０分未満、２時間未満、３時間未満、６時間未満、９時間未満、１２時間未満、２４時間未満、３６時間未満もしくは４８時間未満、または４８時間超であることができる。

他の実施形態において、ＲＡＦ阻害剤およびＰＩ３Ｋβ阻害剤は同時投与されない。この点で、第１に投与される化合物には、第２に投与される化合物が投与される前に患者に効果を及ぼす時間が与えられる。概して、時間差は、第１に投与される化合物が患者においてこれの効果を完了する時間を超えて、または患者において完全にまたは実質的に排除または不活性化される時間を超えて延長することはない。１組の実施形態において、ＲＡＦ阻害剤はＰＩ３Ｋβ阻害剤の前に投与される。別の組の実施形態において、ＰＩ３Ｋβ阻害剤はＲＡＦ阻害剤の前に投与される。非同時投与の時間差は通例、１分を超え、例えば正確には、少なくとも５分、１０分、１５分、３０分、４５分、６０分、２時間、３時間、６時間、９時間、１２時間、２４時間、３６時間もしくは４８時間、最長で５分、１０分、１５分、３０分、４５分、６０分、２時間、３時間、６時間、９時間、１２時間、２４時間、３６時間もしくは４８時間、または５分未満、１０分未満、１５分未満、３０分未満、４５分未満、６０分未満、２時間未満、３時間未満、６時間未満、９時間未満、１２時間未満、２４時間未満、３６時間未満もしくは４８時間未満、または４８時間超であることができる。

１組の実施形態において、ＭＥＫ阻害剤およびＰＩ３Ｋβ阻害剤の一方または両方は、治療的有効（即ち治療的）量または投薬量で投与される。「治療的有効量」は、これが単独で患者に投与された場合に、癌を効果的に処置する（例えば腫瘍成長を阻害する、腫瘍成長を停止する、または腫瘍縮退を引き起こす。）、ＭＥＫ阻害剤またはＰＩ３Ｋβ阻害剤の量である。特定の対象について所与の例における「治療的有効量」を証明する量は、このような投薬量が熟練医師により「治療的有効量」と見なされたとしても、考慮中の疾患または状態が同様に処置された対象の１００％について有効でないことがある。治療的有効量に相当する化合物の量は、癌の種類、癌の病期、処置される患者の年齢および他の因子に強く依存する。概して、上で引用した裏付けとなる参考文献に示されているように、これらの化合物の治療的有効量は当分野で周知である。

１組の実施形態において、ＲＡＦ阻害剤およびＰＩ３Ｋβ阻害剤の一方または両方は、治療的有効（即ち治療的）量または投薬量で投与される。「治療的有効量」は、これが単独で患者に投与された場合に、癌を効果的に処置する（例えば腫瘍成長を阻害する、腫瘍成長を停止する、または腫瘍縮退を引き起こす。）、ＲＡＦ阻害剤またはＰＩ３Ｋβ阻害剤の量である。特定の対象について所与の例における「治療的有効量」を証明する量は、このような投薬量が熟練医師により「治療的有効量」と見なされたとしても、考慮中の疾患または状態が同様に処置された対象の１００％について有効でないことがある。治療的有効量に相当する化合物の量は、癌の種類、癌の病期、処置される患者の年齢および他の因子に強く依存する。概して、上で引用した裏付けとなる参考文献に示されているように、これらの化合物の治療的有効量は当分野で周知である。

別の組の実施形態において、ＭＥＫ阻害剤およびＰＩ３Ｋβ阻害剤の一方または両方は、治療的有効量未満の量または投薬量で投与される。治療的有効量未満の量は、これが単独で患者に投与された場合に、意図する標的の生物学的活性を経時的に完全には阻害しない、ＭＥＫ阻害剤またはＰＩ３Ｋβ阻害剤の量である。

別の組の実施形態において、ＲＡＦ阻害剤およびＰＩ３Ｋβ阻害剤の一方または両方は、治療的有効量未満の量または投薬量で投与される。治療的有効量未満の量は、これが単独で患者に投与された場合に、意図する標的の生物学的活性を経時的に完全には阻害しない、ＲＡＦ阻害剤またはＰＩ３Ｋβ阻害剤の量である。

治療的量または治療的量未満の量で投与されても、ＭＥＫ阻害剤およびＰＩ３Ｋβ阻害剤の組合せは、癌の処置に有効なはずである。ＭＥＫ阻害剤の治療的量未満の量は、ＰＩ３Ｋβ阻害剤と組合された場合に、組合せが癌の処置に有効ならば、有効量であることができる。

治療的量または治療的量未満の量で投与されても、ＲＡＦ阻害剤およびＰＩ３Ｋβ阻害剤の組合せは、癌の処置に有効なはずである。ＲＡＦ阻害剤の治療的量未満の量は、ＰＩ３Ｋβ阻害剤と組合された場合に、組合せが癌の処置に有効ならば、有効量であることができる。

幾つかの実施形態において、化合物の組合せは、癌の処置において、特に患者の腫瘍体積の低減において相乗効果（即ち相加効果を超える。）を示す。異なる実施形態において、使用される組合せおよび有効量に応じて、化合物の組合せは、腫瘍成長を阻害するか、腫瘍静止を実現するか、または実質的もしくは完全な腫瘍縮退さえ実現することができる。

幾つかの実施形態において、実施例に示すように、化合物（Ｉ）を、約１００ｍｇ／ｋｇから２００ｍｇ／ｋｇ ｐｏ １日２回の投薬量で腫瘍保持マウスに投与することができる。一方、化合物（２ａ）は、約１ｍｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇの、好ましくは１ｍｇ／ｋｇから３０ｍｇ／ｋｇ ｐｏ ｑｄの投薬量で腫瘍保持マウスに投与することができる。化合物（２ｂ）は、約１ｍｇ／ｋｇから１５０ｍｇ／ｋｇの、好ましくは１０ｍｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇ ｐｏ ｑｄの投薬量で腫瘍保持マウスに投与することができる。

幾つかの実施形態において、実施例に示すように、化合物（Ｉ）を、約１５０ｍｇ／ｋｇ ｐｏ １日２回の投薬量で腫瘍保持マウスに投与することができる。一方、化合物（２ａ）は、約１０ｍｇ／ｋｇまたは２５ｍｇ／ｋｇ ｐｏ ｑｄの投薬量で腫瘍保持マウスに投与することができる。化合物（２ｂ）は、約５０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇ ｐｏ ｑｄの投薬量で腫瘍保持マウスに投与することができる。

一実施形態によれば、実施例に示すように、化合物（Ｉ）は１日２回投与することができる。

一実施形態によれば、実施例に示すように、化合物（２ａ）および（２ｂ）は１日１回投与することができる。

本明細書で使用する場合、「約」という用語は概して、値の１０％、５％または１％を超えない考えられる変動を示す。例えば「約２５ｍｇ／ｋｇ」は概して、これの最も広い意味で、２２．５−２７．５ｍｇ／ｋｇの、即ち２５±２．５ｍｇ／ｋｇの値を示す。

ＭＥＫ阻害剤、ＲＡＦ阻害剤およびＰＩ３Ｋβ阻害剤の量は癌の有効な処置を生じるべきであるが、組み合わせた場合に、該量は好ましくは、患者にとって過度に毒性ではない（即ち、該量は好ましくは、医学的指針によって確立された毒性限界内である。）。幾つかの実施形態において、過剰な毒性を防止するため、および／またはより有効な癌の処置を提供するために、投与される総投薬量に対する制限が提供される。通例、本明細書において考慮される量は、例えば１日当たりであるが；半日および２日または３日のサイクルも本明細書において考慮される。

癌を処置するために各種の投薬計画を使用してよい。幾つかの実施形態において、１日投薬量、例えば上記の例示の投薬量のいずれかが、少なくとも３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間または１０日間にわたって、１日１回、２回、３回または４回投与される。癌の病期および重症度に応じて、より短い処置期間（例えば５日まで）が高投薬量と共に用いられてよく、またはより長い処置期間（例えば１０日以上、または数週もしくは１か月、またはこれ以上）を低投薬量と共に用いられてよい。幾つかの実施形態において、１日に１回または２回の投薬量が１日おきに投与される。幾つかの実施形態において、各投薬量はＭＥＫ阻害剤およびＰＩ３Ｋβ阻害剤の両方を含有するが、他の実施形態では、各投薬量はＭＥＫ阻害剤またはＰＩ３Ｋβ阻害剤のどちらかを含有する。また他の実施形態において、投薬量の幾つかはＭＥＫおよびＰＩ３Ｋβ阻害剤の両方を含有するが、他の投薬量はＭＥＫ阻害剤のみまたはＰＩ３Ｋβ阻害剤のみを含有する。

幾つかの実施形態において、投薬量はＲＡＦ阻害剤およびＰＩ３Ｋβ阻害剤の両方を含有するが、他の実施形態では、各投薬量はＲＡＦ阻害剤またはＰＩ３Ｋβ阻害剤のどちらかを含有する。また他の実施形態において、投薬量の幾つかはＢＲＡＦおよびＰＩ３Ｋβ阻害剤の両方を含有するが、他の投薬量はＲＡＦ阻害剤のみまたはＰＩ３Ｋβ阻害剤のみを含有する。

本発明で処置される癌の種類の例としては、限定されないが、リンパ腫、肉腫および癌腫、例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、滑液腫瘍、中皮腫、リンパ管内皮肉腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌腫、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、胃癌、食道癌、扁平上皮癌腫、基底細胞癌腫、腺癌、汗腺癌腫、脂腺癌腫、乳頭状癌腫、乳頭状腺癌腫、嚢胞腺癌腫、髄様癌腫、気管支原性癌腫、腎細胞癌腫、ヘパトーム、胆管癌腫、絨毛癌腫、セミノーマ、胎生期癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣腫瘍、肺癌腫、非小細胞肺癌腫、小細胞肺癌腫、膀胱癌腫、上皮性癌腫、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽腫、網膜芽腫；甲状腺癌、子宮内膜癌；白血病、例えば急性リンパ性白血病および急性骨髄性白血病（骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性および赤白血病）；慢性白血病（慢性骨髄性（顆粒球性）白血病および慢性リンパ球性白血病）；ならびに真性赤血球増加症、リンパ腫（ホジキン病および非ホジキン病）、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症および重鎖疾患が挙げられる。

幾つかの実施形態において、処置される癌は、非小細胞肺癌、乳癌、膵臓癌、肝臓癌、前立腺癌、膀胱癌、子宮頸癌、甲状腺癌、結腸直腸癌、肝臓癌および筋肉癌から成る群より選ばれる。他の実施形態において、癌は結腸直腸癌、子宮内膜癌、血液癌、甲状腺癌、トリプルネガティブ乳癌、前立腺または黒色腫より選択される。

本明細書で考慮する患者は、通例ヒトである。しかし、患者は癌処置が所望されるいずれかの哺乳動物であることができる。このため、本明細書に記載される方法は、ヒトおよび獣医用途の両方に適用できる。

「処置すること」または「処置」という用語は、本明細書で使用する場合、該方法が少なくとも異常な細胞増殖の軽減を有することを示す。例えば該方法は、患者において腫瘍成長の速度を低下することができるか、または腫瘍の継続した成長を防止することができるか、または腫瘍のサイズを縮小することさえできる。

別の態様において、動物において癌を予防する方法が提供される。この点において、予防は、疾患に曝露され得るか、また疾患に罹患しやすいが、疾患をまだ経験していないかもしくは疾患の症状を示していない動物において、疾患の臨床的症状を発生させないことを示す。該方法は、本明細書に記載するＭＥＫ阻害剤およびＰＩ３Ｋβ阻害剤を患者に投与することを含む。該方法は、本明細書に記載するＲＡＦ阻害剤およびＰＩ３Ｋβ阻害剤を、これが必要な患者に投与することを含む。一例において、動物において癌を予防する方法は、該動物に式（１）の化合物または医薬として許容されるその塩を、式（２ａ）および式（２ｂ）から成る群より選択される化合物または医薬として許容されるその塩と組み合わせて投与することを含む。

ＭＥＫ阻害化合物およびＰＩ３Ｋβ阻害化合物または医薬として許容されるその塩もしくは溶媒和物形は、純粋な形でまたは適切な医薬組成物中で、当分野で公知の許容される投与様式または薬剤のいずれかを介して投与することができる。化合物は例えば、経口、経鼻、非経口（静脈内、筋内または皮下）、局所、経皮、膣内、膀胱内、嚢内または直腸投与することができる。投薬形は例えば、固形、半固形、凍結乾燥散剤または液状投薬形、例えば錠剤、丸剤、軟弾性または硬ゼラチンカプセル剤、散剤、液剤、懸濁剤、坐剤、エアロゾルなど、好ましくは正確な投薬量の簡単な投与に適した単位投薬形であることができる。特定の投与経路は、経口による、特に便利な１日投薬計画が処置される疾患の重症度に従って調整できる経路である。

別の態様において、本願は、式（２ａ）のＭＥＫ阻害剤および式（Ｉ）のＰＩ３Ｋβ阻害剤を含む組成物に関する。別の態様において、本願は、式（２ｂ）のＲＡＦ阻害剤および式（Ｉ）のＰＩ３Ｋβ阻害剤を含む組成物に関する。幾つかの実施形態において、組成物は上記のＭＥＫ阻害剤およびＰＩ３Ｋβ阻害剤のみを含む。幾つかの実施形態において、組成物は上記のＲＡＦ阻害剤およびＰＩ３Ｋβ阻害剤のみを含む。他の実施形態において、組成物は、固体形のＭＥＫ阻害剤およびＰＩ３Ｋβ阻害剤ならびに場合により１つ以上の助剤（例えばアジュバント）または固体形の医薬的に活性な化合物を含む、固体の形（例えば粉剤または錠剤）である。他の実施形態において、組成物は、当分野で公知の医薬として許容される担体（即ちビヒクルまたは賦形剤）のいずれか１つまたは組合せをさらに含み、これにより液体投薬形を提供する。他の実施形態において、組成物は、固体形のＲＡＦ阻害剤およびＰＩ３Ｋβ阻害剤ならびに場合により１つ以上の助剤（例えばアジュバント）または固体形の医薬的に活性な化合物を含む、固体の形（例えば粉剤または錠剤）である。他の実施形態において、組成物は、当分野で公知の医薬として許容される担体（即ちビヒクルまたは賦形剤）のいずれか１つまたは組合せをさらに含み、これにより液体投薬形を提供する。

助剤およびアジュバント剤としては、例えば保存料、湿潤剤、懸濁化剤、甘味料、香味剤、香料、乳化剤および分配剤（ｄｉｓｐｅｎｓｉｎｇ ａｇｅｎｔ）が挙げられる。微生物の作用は概して、多様な抗菌剤および抗真菌剤、例えばパラベン類、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などによって防止される。等張剤、例えば糖、塩化ナトリウムなども含んでよい。注射可能な剤形の長期間吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えばアルミニウムモノステアレートおよびゼラチンの使用により行うことができる。助剤としては、湿潤剤、乳化剤、ｐＨ緩衝剤および酸化防止剤、例えばクエン酸、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミンオレエート、ブチル化ヒドロキシトルエンなども挙げることができる。

非経口注射に適した投薬形は、生理学的に許容される滅菌水性もしくは非水性液剤、分散剤、懸濁剤もしくは乳剤ならびに滅菌注射液剤または分散剤に再構成するための滅菌粉剤を含んでよい。好適な水性および非水性担体、希釈剤、溶媒またはビヒクルの例としては、水、エタノール、ポリオール（プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセロールなど）、これの好適な混合物、植物油（例えばオリーブ油）および注射可能な有機エステル、例えばエチルオレエートが挙げられる。適正な流動性は、例えばレシチンなどコーティングを使用することにより、分散剤の場合は必要な粒径の維持により、および界面活性剤の使用により維持され得る。

経口投与用の固形投薬形としては、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤および顆粒剤が挙げられる。このような固形投薬形において、活性化合物は、少なくとも１つの慣習的な不活性賦形剤（または担体）、例えばナトリウムシトレートもしくはジカルシウムホスフェート、または（ａ）充填剤もしくは増量剤、例えばデンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよびケイ酸、（ｂ）結合剤、例えばセルロース誘導体、デンプン、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよびアラビアゴム、（ｃ）保湿剤、例えばグリセロール、（ｄ）崩壊剤、例えば、寒天、カルシウムカーボネート、ジャガイモデンプンまたはタピオカデンプン、アルギン酸、クロスカルメロースナトリウム、複合珪酸塩（ｃｏｍｐｌｅｘ ｓｉｌｉｃａｔｅ）およびナトリウムカーボネート、（ｅ）溶解遅延剤、例えばパラフィン、（ｆ）吸収促進剤、例えば第四級アンモニウム化合物、（ｇ）湿潤剤、例えばセチルアルコールおよびグリセロールモノステアレート、マグネシウムステアレートなど、（ｈ）吸着剤、例えばカオリンおよびベントナイト、ならびに（ｉ）潤滑剤、例えばタルク、カルシウムステアレート、マグネシウムステアレート、固体ポリエチレングリコール、ナトリウムラウリルサルフェートまたはこれの混合物と混合される。カプセル剤、錠剤および丸剤の場合、投薬形は緩衝剤も含んでよい。

上記のような固形投薬形は、腸溶コーティングおよび当分野で周知の他のものなどの、コーティングおよびシェルを用いて調製することができる。これらは安定化剤を含有することができ、遅延様式で腸管の特定の部分で１つまたは複数の活性化合物を放出するような組成物であることができる。使用できる包埋組成物の例は、ポリマー物質およびロウである。活性化合物はまた、適切ならば、上述の添加剤の１つ以上を用いたマイクロカプセル封入形であることができる。

経口投与用の液体投薬形としては、医薬として許容される乳剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤が挙げられる。このような投薬形は、本明細書に記載するＭＥＫ阻害剤、ＲＡＦ阻害剤もしくはＰＩ３Ｋβ阻害剤化合物または医薬として許容されるその塩および場合により医薬的アジュバントを、担体、例えば水、食塩水、水性デキストロース、グリセロール、エタノールなど；可溶化剤および乳化剤、例えばエチルアルコール、イソプロピルアルコール、エチルカーボネート、エチルアセテート、ベンジルアルコール、ベンジルベンゾエート、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド；油、特に綿実油、ラッカセイ油、コーン胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステル；またはこれらの物質の混合物などに溶解、分散などして、これにより溶剤または懸濁剤を形成することにより製造される。

懸濁剤は、活性化合物に加えて、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天、およびトラガカントまたはこれらの物質の混合物などのような懸濁化剤を含有してよい。

直腸投与用の組成物は例えば、本明細書に記載される化合物を例えば適切な非刺激性添加剤または担体、例えばカカオバター、ポリエチレングリコールまたは坐剤用ロウと混合することにより調製できる坐剤であり、添加剤または担体は常温で固形であるが体温では液状であり、従って好適な体腔内では溶融して、体腔中で活性成分を放出する。

局所投与用の投薬形としては、例えば軟膏、散剤、スプレー剤、および吸入剤が挙げられ得る。活性成分は、滅菌条件下で生理学的に許容される担体およびいずれかの保存料、緩衝剤または必要に応じて噴霧剤と混合される。眼科用製剤、眼用軟膏、眼用散剤および眼用液剤も用いることができる。

概して、医薬として許容される組成物は、意図される投与様式に応じて、本明細書に記載する化合物またはこの医薬として許容される塩を約１重量％から約９９重量％、および医薬として許容される添加剤を９９重量％から１重量％含有する。一例において、組成物は、本明細書に記載される化合物または医薬として許容されるその塩が約５重量％から約７５重量％であり、残りは適切な医薬用賦形剤である。

このような投薬形を調製する実際の方法は公知であるか、または当業者に明らかとなる。例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄ．，（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９９０）が参照される。

幾つかの実施形態において、組成物は１つ以上の他の抗癌化合物を含まない。他の実施形態において、組成物は１つ以上の他の抗癌化合物を含む。例えば投与される組成物は、処置のために選択される種類の腫瘍のための標準治療剤を含むことができる。

別の態様において、キットが提供される。本発明のキットは、本発明の化合物または組成物を含むパッケージを含む。一実施形態において、キットは化合物（１）、または医薬として許容されるその塩ならびに化合物（２ａ）および化合物（２ｂ）から成る群より選択される化合物、または医薬として許容されるその塩を含む。

「パッケージ」という語句は、本明細書において提供される化合物または組成物を含有するいずれの容器を意味する。幾つかの実施形態において、パッケージは箱または包装紙であることができる。製剤製品をパッケージする際に使用するための包装材料は当業者に周知である。医薬用包装材料の例としては、これに限定されるわけではないが、瓶、チューブ、吸入器、ポンプ、袋、バイアル、容器、注射器、瓶ならびに選択された製剤ならびに意図する投与および処置様式に好適ないずれの包装材料も挙げられる。

キットはまた、このパッケージ内に含有されていないが、パッケージの外側に添付されている物品、例えばピペットを含有することができる。

キットは、患者に本発明の化合物または組成物を投与するための説明書を含有することができる。キットは、監督官庁、例えば米国食品医薬品局よって認可された本明細書における化合物の使用についての説明書も含むことができる。キットは、本発明の化合物についてのラベルまたは添付文書も含有することができる。パッケージおよび／またはいずれの添付文書も、これ自体監督官庁によって認可され得る。キットは、化合物をパッケージ中の固相または液相（例えば提供される緩衝剤）中に含むことができる。キットは、方法を実行するための液剤を調製するための緩衝液および１つの容器から別の容器へ液体を移すためのピペットを含むことができる。

実施例を、説明を目的として、および本発明の特定の実施形態を記載するために以下で述べる。しかし、特許請求の範囲は、本明細書に記載される実施例により決して限定されるものではない。

ヒト黒色腫細胞株ＵＡＣＣ−６２およびＷＭ−２６６．４（ＢＲＡＦミュータントおよびＰＴＥＮ欠失）における細胞増殖への阻害活性に対する、ＰＩ３Ｋβ阻害剤（化合物Ｉ）とＭＥＫ阻害剤（ここで化合物２ａ）またはＲＡＦ阻害剤（ここで化合物２ｂ）との間の相互作用を試験するために、複数のインビトロ実験を行った。

両方の細胞株に対する化合物（Ｉ）と化合物（２ａ）または化合物（２ｂ）との相互作用は、Ｒ．Ｓｔｒａｅｔｅｍａｎｓ，（Ｂｉｏｍｅｔｒｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ，４７，２００５）に記載されているようなレイ（ｒａｙ）設計手法を使用してキャラクリゼーションを行い、この手法により、混合物中の化合物の異なる有効率ｆｉであって、各レイについて一定である有効率（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ）の相乗効果を調査することができる。各組合せおよび各細胞株についての代表的な実験を以下に示す。

［実施例１］ヒト黒色腫細胞株ＵＡＣＣ−６２における、化合物（２ａ）（ＡＺＤ−６２４４）と組み合わせた化合物（Ｉ）のインビトロ活性
式（２ａ）のＭＥＫ阻害剤ＡＺＤ−６２４４と組み合わせた式（Ｉ）のＰＩ３Ｋβ選択的阻害剤の抗増殖活性を評価するために、ヒト黒色腫細胞株ＵＡＣＣ−６２（ＢＲＡＦミュータントおよびＰＴＥＮ欠失）を使用して実験を行った。インビトロ組合せ試験を行う前に、ＵＡＣＣ−６２細胞株を使用して個々の薬剤の活性を調べた。個々の薬剤を試験する目的は、これらの作用が独立していることを決定し、固定比薬物組合せアッセイの希釈設計を決定することであった。

材料および方法
ヒト黒色腫ＵＡＣＣ−６２細胞株をＮＣＩ（バッチ０５０３０００）にて購入した。ＵＡＣＣ−６２細胞を、１０％ＦＢＳおよび２ｍＭ Ｌ−グルタミンを添加したＲＰＭＩ１６４０培地中で培養した。

化合物（Ｉ）および化合物（２ａ）を３０ｍＭの濃度でＤＭＳＯに溶解させた。これらをＤＭＳＯで段階的に希釈し、１０％血清を含有する培養培地で５０倍に希釈してから、２０倍の希釈係数で細胞に添加した。試験を行った最終濃度を表１に記載したレイ設計によって定義した。ＤＭＳＯ濃度は、対照およびすべての処置ウェルにおいて０．１％であった。

表１は、実施例１の試験を行うために使用したレイ設計を示す。

ＵＡＣＣ−６２細胞を適切な培養培地中の９６ウェルプレートに２５００細胞／ウェルにて平板培養して、３７℃、５％ＣＯ_２にて６時間インキュベートした。所与の薬物比に応じて１から３０，０００ｎＭの範囲で化合物（Ｉ）の濃度を上昇させ、０．００１から１０，０００ｎＭの範囲で化合物（２ａ）の濃度を上昇させるグリッド様式で細胞を処置して、９６時間インキュベートした。細胞成長は、ＣｅｌｌｔｉｔｅｒＧｌｏ（登録商標）試薬（プロメガ）をメーカーのプロトコルに従って使用して、細胞内ＡＴＰを測定することによって評価した。簡潔には、セル・タイター・グローを各プレートに添加し、１時間インキュベートして、次にマイクロベータ発光プレートリーダで発光シグナルを読み取った。すべてのプレートを２通り実験した。すべてのアッセイを少なくとも２通り実験した。

細胞成長の阻害は、４日間にわたる化合物または化合物の組合せを用いた処置後に概算して、ビヒクル（ＤＭＳＯ）によって処置した細胞とシグナルを比較した。

成長阻害パーセンテージ（ＧＩ％）は、以下の式に従って計算した：ＧＩ％＝１００＊（１−（（Ｘ−ＢＧ）／（ＴＣ−ＢＧ））、式中、値は以下のように定義される：
Ｘ＝単独のまたは組合された化合物ＡおよびＢの存在下で細胞を含有するウェルの値
ＢＧ＝培地を有し、細胞を有さないウェルの値
ＴＣ＝ビヒクル（ＤＭＳＯ）の存在下で細胞を含有するウェルの値。

これらの測定によって、以下の統計的方法の使用にあたって潜在的な相乗効果的組合せを決定することができる：

ＳＡＳ Ｖ９．２のＮＬＭＩＸＥＤ手順を使用した汎用非線形混合モデルを利用して、各レイに濃度応答曲線を同時に適合させた。次に各レイｉおよびこれの９５％信頼区間の組合せ指数

を以下の式

を使用して概算し、式中、ＩＣ４０_ＡおよびＩＣ４０_Ｂは、単独の各化合物で４０％の阻害を得るために必要な化合物Ａおよび化合物Ｂの濃度であり、Ｃ_ＡおよびＣ_Ｂは、４０％の阻害を得るために必要な混合物における化合物Ａおよび化合物Ｂの濃度である。

相互作用指数（Ｋｉ）の信頼区間が１を含むときに相加性が結論付けられ、信頼区間上限が１未満であるときに相乗効果が結論付けられ、信頼区間下限が１より高いときに拮抗作用が結論付けられた。

アイソボログラム表示（図１）によって、レイ１からレイ５をつなぐ直線によって表される相加性状況に従って、各レイの位置を描出することができる。この線より下のレイはすべて、潜在的な相乗効果的状況に相当するのに対して、線より高いレイはすべて潜在的な拮抗作用状況に相当する。

インビトロ試験の結果
化合物（Ｉ）は単剤として、ＵＡＣＣ−６２細胞の増殖を３，６３０ｎＭのＩＣ４０で阻害した。化合物（２ａ）は単剤として、ＵＡＣＣ−６２細胞の増殖を２７ｎＭのＩＣ４０で阻害した（下の表２を参照のこと）。

表２：実施例１における各化合物単独の絶対ＩＣ４０概算値
単剤の絶対ＩＣ４０は、４−パラメータ・ロジスティック・モデルを用いて概算する。

組合せアーム（ａｒｍ）では、図１のアイソボログラム表示によって記載されるように、相乗効果は、ほぼ等効力濃度（比１／１（ｆ＝０．４３）；レイ３および比２／１（ｆ＝０．７１）；レイ４）および化合物（２ａ）が化合物（Ｉ）よりも４倍有効であるような濃度（比１／４（ｆ＝０．１９）；レイ２）にて観察され、Ｋｉはそれぞれ０．３４［０．２４−０．４４］、０．５４［０．３６−０．７３］および０．３５［０．２６−０．４４］であった（下の表３を参照のこと）。

これらのデータは、３つの独立した実験からの代表的な試験に相当する。これらの３つの試験では、相乗効果または相乗効果への傾向を伴う相加性が、０．１０から０．８０の間の有効率ｆで観察された。

表３：実施例１における相互作用のキャラクタリゼーション
Ｋ_ｉ指数により、２つの化合物の間で観察された相互作用の定義を行うことができる。

試験を行ったドメインでは、ｆが０．１９、０．４３および０．７１に等しいときに相乗作用が観察される。

［実施例２］ヒト黒色腫細胞株ＵＡＣＣ−６２における、化合物（２ｂ）と組み合わせた化合物（Ｉ）のインビトロ活性

式（２ｂ）のＲＡＦ阻害剤と組み合わせた式（Ｉ）のＰＩ３Ｋβ選択的阻害剤の抗増殖活性を評価するために、ヒト黒色腫細胞株ＵＡＣＣ−６２（ＢＲＡＦミュータントおよびＰＴＥＮ欠失）を使用して実験を行った。インビトロ組合せ試験を行う前に、ＵＡＣＣ−６２細胞株を使用して個々の薬剤の活性を調べた。個々の薬剤を試験する目的は、これらの作用が独立していることを決定し、固定比薬物組合せアッセイの希釈設計を決定することであった。

材料および方法
化合物（Ｉ）および化合物（２ｂ）の溶液を実施例１の材料および方法により、下の表４に記載したレイ設計に従って調製した。

表４：実施例２のレイ設計
レイ１：化合物（Ｉ）のみ

材料および方法は実施例１で記載したものと同じである。

インビトロ試験の結果
化合物（Ｉ）は単剤として、ＵＡＣＣ−６２細胞の増殖を１７，７００ｎＭのＩＣ４０で阻害した。化合物（２ｂ）は単剤として、ＵＡＣＣ−６２細胞の増殖を１８ｎＭのＩＣ４０で阻害した（表５）。

表５：実施例２における各化合物単独の絶対ＩＣ_４０概算値
単剤の絶対ＩＣ_４０は、４−パラメータ・ロジスティック・モデルを用いて概算する。

組合せレイでは、図２のアイソボログラムによって記載されるように、相乗効果は等効力濃度（レイ４（ｆ＝０．５０））および化合物（２ｂ）が化合物（Ｉ）よりも有効であるような濃度（比１／１０（ｆ＝０．０９）、レイ２および比１／３（ｆ＝０．２４）；レイ３）にて観察され、Ｋｉはそれぞれ０．５６［０．３０−０．８１］、０．５７［０．４０−０．７４］および０．３８［０．２５−０．５２］であった（表６）。

表６：実施例２における相互作用のキャラクタリゼーション
Ｋ_ｉ指数により、２つの化合物の間で観察された相互作用の定義を行うことができる。

試験を行ったドメインでは、ｆが０．０９、０．２４および０．５０に等しいときに相乗効果が観察される。

これらのデータは、３つの独立した実験からの代表的な試験に相当する。これらの３つの実験では、相乗効果または相乗効果への傾向を伴う相加性が、混合物における、化合物（Ｉ）および化合物（２ｂ）のすべての割合で得られた。

［実施例３］ヒト黒色腫細胞株ＷＭ−２６６−４における、化合物（２ａ）と組み合わせた化合物（Ｉ）のインビトロ活性
ＭＥＫ阻害剤化合物（２ａ）と組み合わせたＰＩ３Ｋβ選択的阻害剤化合物（Ｉ）の抗増殖活性を評価するために、ヒト黒色腫細胞株ＷＭ−２６６−４（ＢＲＡＦミュータントおよびＰＴＥＮ欠失）を使用して実験を行った。インビトロ組合せ試験を行う前に、ＷＭ−２６６−４細胞株を使用して個々の薬剤の活性を調べた。個々の薬剤を試験する目的は、これらの作用が独立していることを決定し、固定比薬物組合せアッセイの希釈設計を決定することであった。化合物（Ｉ）と化合物（２ａ）との間の相互作用のキャラクタリゼーションは、異なる薬物効力比での組合せの恩恵を評価する、レイ設計法および関連する統計解析を使用して試験した。

材料および方法
ヒト黒色腫ＷＭ−２６６−４細胞株をＡＴＣＣ（参照番号ＣＲＬ−１６７６バッチ３２７２８２６）にて購入した。ＷＭ−２６６−４細胞を、１０％ＦＢＳおよび２ｍＭ Ｌ−グルタミンを添加したＲＰＭＩ１６４０培地中で培養した。

化合物（Ｉ）および（２ａ）の希釈物を実施例１の材料および方法により、下の表７に記載したレイ設計に従って調製した。

材料および方法は実施例１で記載したものと同じである。

表７：実施例３のレイ設計提案

インビトロ試験の結果
化合物（Ｉ）は単剤として、ＷＭ−２６６−４細胞の増殖を８３４ｎＭのＩＣ４０で阻害した。化合物（２ａ）は単剤として、ＷＭ−２６６−４細胞の増殖を３３ｎＭのＩＣ４０で阻害した（表８）。

表８：実施例３における各化合物の絶対ＩＣ_４０概算値
単剤の絶対ＩＣ_４０は、４−パラメータ・ロジスティック・モデルを用いて概算する。

組合せアームでは、図３のアイソボログラム表示によって記載されるように、相乗効果は等効力濃度（比１／１（ｆ＝０．５６）：レイ３）および化合物（２ａ）が化合物（Ｉ）よりも３倍有効であるような濃度（比１／３（ｆ＝０．２９）：レイ２）にて観察され、Ｋｉはそれぞれ０．５０［０．３４−０．６６］および４３［０．３３−０．５３］であった。

相加性は、化合物（Ｉ）が化合物（２ａ）よりも４倍有効であるドメイン（レイ４（ｆ＝０．８０））にて観察され、Ｋｉは１．０１［０．５７−１．４４］であった（表９）。

表９：実施例３における相互作用のキャラクタリゼーション
組合せ指数（Ｋｉ）により、２つの化合物の間で観察された相互作用の定義を行うことができる。

試験を行ったドメインでは、ｆが０．２９および０．５６に等しいときに相乗作用が観察される。

これらのデータは、３つの独立した実験からの代表的な試験に相当する。

これらの３つの試験では、相乗効果または相乗効果への傾向を伴う相加性が、０．２８から０．５６の間の有効率ｆで観察された。

［実施例４］ヒト黒色腫細胞株ＷＭ−２６６．４における、化合物（２ｂ）と組み合わせた化合物（Ｉ）のインビトロ活性
ＲＡＦ阻害剤化合物（２ｂ）と組み合わせたＰＩ３Ｋβ選択的阻害剤化合物（Ｉ）の抗増殖活性を評価するために、ヒト黒色腫細胞株ＷＭ−２６６．４（ＢＲＡＦミュータントおよびＰＴＥＮ欠失）を使用して実験を行った。インビトロ組合せ試験を行う前に、ＷＭ−２６６．４細胞株を使用して個々の薬剤の活性を調べた。個々の薬剤を試験する目的は、これらの作用が独立していることを決定し、固定比薬物組合せアッセイの希釈設計を決定することであった。化合物（Ｉ）と化合物（２ｂ）との間の相互作用のキャラクタリゼーションは、異なる薬物効力比での組合せの恩恵を評価する、レイ設計法および関連する統計解析を使用して試験した。

材料および方法
ヒト黒色腫ＷＭ−２６６−４細胞株をＡＴＣＣ（参照番号ＣＲＬ−１６７６バッチ３２７２８２６）にて購入した。ＷＭ−２６６．４細胞を、１０％ＦＢＳおよび２ｍＭ Ｌ−グルタミンを添加したＲＰＭＩ１６４０培地中で培養した。

化合物（Ｉ）および（２ｂ）の希釈物を実施例１の材料および方法により、下の表１０に記載したレイ設計に従って調製した。

材料および方法は実施例１で記載したものと同じである。

表１０：実施例４のレイ設計

インビトロ試験の結果
化合物（Ｉ）は単剤として、ＷＭ−２６６−４細胞の増殖を６，６８８ｎＭのＩＣ４０で阻害した。化合物（２ｂ）は単剤として、ＷＭ−２６６−４細胞の増殖を３５ｎＭのＩＣ４０で阻害した（表１１）。

表１１：実施例４における各化合物単独の絶対ＩＣ_４０概算値
単剤の絶対ＩＣ_４０は、４−パラメータ・ロジスティック・モデルを用いて概算する。

組合せレイでは、図４のアイソボログラム表示によって記載されるように、相乗効果は等効力濃度（レイ４ｂｉｓ（ｆ＝０．６２））および化合物（２ｂ）が化合物（Ｉ）よりも有効であるような濃度（比１／１９（ｆ＝０．０５）：レイ２、比１／６（ｆ＝０．１４）：レイ３および比１／２（ｆ＝０．３４）：レイ４）にて観察され、Ｋｉはそれぞれ０．３６［０．１７−０．５４］、０．５５［０．４２−０．６９］、０．２８［０．１９−０．３７］および０．３３［０．２０−０．４５］であった（表１２）。

表１２：実施例４における相互作用のキャラクタリゼーション
組合せ指数（Ｋｉ）により、２つの化合物の間で観察された相互作用の定義を行うことができる。

試験を行ったドメインでは、ｆが０．０５、０．１４、０．３４および０．６２に等しいときに相乗作用が観察される。

これらのデータは、３つの独立した実験からの代表的な試験に相当する。これらの３つの試験では、相乗効果または相乗効果への傾向を伴う相加性が、０．０５から０．６２の間の有効率ｆで観察された。

インビトロ結果の概要（実施例１から４）
上のデータにより、選択的ＰＩ３Ｋβ阻害剤（化合物Ｉ）がＭＥＫ阻害剤（化合物２ａ）と、およびＲＡＦ阻害剤（化合物２ｂ）と相乗作用して、ＰＴＥＮ欠失およびＭＡＰＫ経路活性化を通じた、特にＢＲＡＦ活性化突然変異を通じたＰＩ３Ｋβ経路活性化を示す腫瘍適応症における、細胞増殖に対する阻害活性を上昇させられ得ることが示されている。

［実施例５］皮下ヒト黒色腫腫瘍ＵＡＣＣ−６２保持ＳＣＩＤメスマウスに対する、化合物（２ａ）と組み合わせた化合物（Ｉ）のインビボ活性
ＭＥＫ阻害剤化合物（２ａ）と組み合わせたＰＩ３Ｋβ選択的阻害剤化合物（Ｉ）の抗腫瘍活性を評価するために、ヒト黒色腫腫瘍ＵＡＣＣ−６２（ＢＲＡＦミュータントおよびＰＴＥＮ欠失）を保持するメスＳＣＩＤマウスを使用して実験を行った。試験において、１５０ｍｇ／ｋｇ １日２回（ｂｉｄ）の化合物（Ｉ）を、１０および２５ｍｇ／ｋｇ毎日（ｑｄ）の化合物（２ａ）と組み合わせて試験した。

材料および方法
８−１０週齢のＣＢ１７／ｌＣＲ−Ｐｒｋｄｃ重症複合型免疫不全（ＳＣＩＤ）／Ｃｒｌマウスを、米国のチャールスリバーから入手した系統からチャールスリバー・フランス（Ｄｏｍａｉｎｅ ｄｅｓ Ｏｎｃｉｎｓ，６９２１０ラルブレル、フランス）にて繁殖した。４−５週齢のヌードＮＩＨ−Ｆｏｘｎ１ ＲＮＵ／Ｃｒｌラットを米国チャールスリバー（ウィルミントン、マサチューセッツ州、米国）にて繁殖した。マウスおよびラットは、少なくとも５日間の順化時間後の処置開始時に、それぞれ１８ｇおよび１００ｇを超えていた。マウスおよびラットは、食餌（ＵＡＲ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ １１３、Ｖｉｌｌｅｍｏｉｓｓｏｎ、９１１６０ Ｅｐｉｎａｙ ｓｕｒ Ｏｒｇｅ、フランス）および滅菌水に自由に接触させた。マウスおよびラットを１２時間の明／暗サイクルで飼育した。動物保全、室温（２２℃±２℃）、相対湿度（５５％±１５％）および点灯時間を含む環境条件を実験動物科学および福祉（ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ａｎｉｍａｌ ｓｃｉｅｎｃｅｓ ａｎｄ ｗｅｌｆａｒｅ（ＬＡＳＷ））の管理者が記録し、この記録を保管した。

ヒト黒色腫ＵＡＣＣ−６２腫瘍モデルは、ＳＣＩＤメスマウス１匹につき５０％マトリゲルと混合した３×１０^６個の細胞を皮下（ＳＣ）移植することによって樹立した。

化合物（Ｉ）調合物は、ｐＨ２の水中５％の１２．５％エタノール／１２．５％ポリソルベート８０／７５％等張性グルコースに溶解させて調製した。調製物を暗所で室温（ＲＴ）にて保存した。保存溶液は化学的には７日間安定であった。マウスごとの経口（ＰＯ）投与の体積は１０ｍＬ／ｋｇであった。

化合物（２ａ）調合物は水中の０．５％ヒドロキシプロピルメチルセルロース／０．１％ポリソルベート８０で調製した。保存溶液は暗所、室温にて化学的には７日間安定であり、投与前に再懸濁させた。マウスごとのＰＯ投与の体積は１０ｍＬ／ｋｇであった。

腫瘍細胞の皮下移植のために、アルコールまたはＢｅｔａｄｉｎｅ（登録商標）溶液（Ａｌｃｙｏｎ）を使用してマウス側腹の皮膚を消毒して、腫瘍細胞の懸濁物を、２３Ｇ針を使用して０．２ｍＬの体積で片側に皮下（ＳＣ）接種した。

単剤としてまたは組み合わせて用いた化合物（Ｉ）ならびに化合物（２ａ）および化合物（２ｂ）の投薬量および投与スケジュールは、結果の項に記載し、下の表１３から１５で詳説する。

所与の実験を開始する必要がある動物をプールして、第０日に片側のみに移植した。測定可能な腫瘍に処置を投与した。固形腫瘍を所望の体積範囲まで成長させた（所望の範囲外の腫瘍を有する動物は除外した。）。次にマウスをプールして、多様な処置群および対照群に非選択的に振り分けた。処置は、結果の項および各表に示すように、ＵＡＣＣ−６２細胞腫瘍移植後第１１日に開始した。投薬量は、療法開始時の体重に基づいてｍｇ／ｋｇで表す。マウスを毎日点検して、有害な臨床反応に留意した。各マウス群を、体重最低点に達するまで、全体として毎日秤量した。次に、実験終了まで群を毎週１回から３回秤量した。腫瘍は、腫瘍が２０００ｍｍ^３に達し、試料採取のために最終的に犠死させるまで、または動物が死亡するまで（いずれか早いほう）、カリパスを用いて毎週２から３回測定した。固形腫瘍体積は、２次元腫瘍測定値から概算して、以下の式に従って計算した：
腫瘍体積（ｍｍ^３）＝長さ（ｍｍ）×幅^２（ｍｍ^２）／２

死亡日を記録した。生き残った動物は犠死させて、胸腔および腹腔を肉眼で検査した。

３日連続の１５％の体重減少（ｂｗｌ）（群の平均）、１日の間の２０％ｂｗｌまたは１０％を超える薬物による死を生じる投薬量を過剰な毒性投薬量と見なした。動物の体重は、腫瘍重量を含んでいた。

有効性の主要評価項目は、処置群と対照群との間の中央値の比（ΔＴ／ΔＣ）によって集計されたベースラインからの腫瘍体積変化である。

各処置（Ｔ）群および対照（Ｃ）群の腫瘍体積の変化は、最初の処置の日（分類日）の腫瘍体積を規定された観察日の腫瘍体積から引くことによって、各動物について毎日計算する。中央値ΔＴを処置群について計算し、中央値ΔＣを対照群について計算する。次に比ΔＴ／ΔＣを計算して、パーセンテージとして表す：
ΔＴ／ΔＣ＝（中央値デルタＴ／中央値デルタＣ）×１００

このモデルでは、ΔＴ／ΔＣが４０％より低いときに、用量を統計的に有意と見なす。

「治療的相乗効果」という用語は、所与の用量の２つの生成物の組合せが、同じ用量と見なされる単独の２つの生成物の良いほうよりも有効である場合に使用される。治療的相乗効果を試験するために、ベースラインからの順位変換された腫瘍体積の変化に対する二元分散分析の後に、各組合せを組合せに包含されている用量での両方の単剤と比較するためのダンネットの検定を行った。Ｅｖｅｒｓｔａｔ Ｖ５ソフトウェアおよびＳＡＳ ９．２ソフトウェアによって、ＳＵＮ４用のＳＡＳ ｓｙｓｔｅｍ ｒｅｌｅａｓｅ ８．２で統計解析を行った。５％未満の確率（ｐ＜０．０５）を有意と見なした。

インビボ試験の結果
療法開始時の腫瘍負荷中央値は、１２６から１４４ｍｍ^３であった。化合物（Ｉ）（１５０ｍｇ／ｋｇ／ａｄｍ）および化合物（２ａ）（２５および１０ｍｇ／ｋｇ／ａｄｍ）を単剤として、それぞれＰＯ ｂｉｄおよびｑｄで、腫瘍移植後第１１日から第２２日まで投与した。組合せ群において、表１３に示すように、化合物（Ｉ）の用量を化合物（２ａ）の各用量と組み合わせた。

単剤としてのまたは組合せて使用した化合物（Ｉ）および化合物（２ａ）は、耐容性良好であり、誘起したｂｗｌは最小限であった（図５および表１３）。

化合物（Ｉ）（１５０ｍｇ／ｋｇ、ｂｉｄ）は単剤として、著しく有意ではないΔＴ／ΔＣ＞４０％であった。化合物（２ａ）は、２５ｍｇ／ｋｇ ｑｄにて活性であり（第２２日にΔＴ／ΔＣ＝２％）、１０ｍｇ／ｋｇ ｑｄより低い用量レベルは、これらの試験条件下では活性であった（第２２日にΔＴ／ΔＣ＝３５％）（図６および表１３）。

組合せでは、２５および１０ｍｇ／ｋｇ ｑｄにおける化合物（Ｉ）および化合物（２ａ）による処置は活性であった（第２２日にどちらもΔＴ／ΔＣ＜０％を有していた。）（図６および表１３）。表１４によって示すように、グローバル解析では両方の組合せで治療的相乗効果が達成された。表１５も参照のこと。

表１３：ヒトＵＡＣＣ−６２保持ＳＣＩＤメスマウスに対する、化合物（２ａ）と組み合わせた化合物（Ｉ）の抗腫瘍活性

表１４：ヒトＵＡＣＣ−６２保持ＳＣＩＤメスマウスマウスに対する、化合物（２ａ）と組み合わせた化合物（Ｉ）の抗腫瘍活性：治療的相乗効果の決定

表１５：

［実施例６］皮下ヒト黒色腫腫瘍ＵＡＣＣ−６２保持ＳＣＩＤメスマウスに対する、化合物（２ｂ）と組み合わせた化合物（Ｉ）のインビボ活性
ＲＡＦ阻害剤化合物（２ｂ）と組み合わせたＰＩ３Ｋβ選択的阻害剤化合物（Ｉ）の抗腫瘍活性を評価するために、ヒト黒色腫腫瘍ＵＡＣＣ−６２（ＢＲＡＦミュータントおよびＰＴＥＮ欠失）を保持するメスＳＣＩＤマウスを使用して実験を行った。試験において、１５１．５ｍｇ／ｋｇ １日２回（ｂｉｄ）の化合物（Ｉ）を、５０および１００ｍｇ／ｋｇ毎日（ｑｄ）の化合物（２ｂ）と組み合わせて試験した。

材料および方法
ヒト黒色腫ＵＡＣＣ−６２腫瘍モデルは、ＳＣＩＤメスマウス１匹につき５０％マトリゲルと混合した３×１０^６個の細胞を皮下（ＳＣ）移植することによって樹立した。

化合物（Ｉ）調合物は、実施例５の材料および方法に従って調製した。

化合物（２ｂ）調合物は、ｐＨ４の水中２％の９０％クルセルで調製し、この後ボルテクシングおよび磁気撹拌した。最終溶液のｐＨは４であった（黄色懸濁物）。保存溶液は暗所、室温にて化学的には７日間安定であった。マウスごとのＰＯ投与の体積は１０ｍＬ／ｋｇであった。

単剤としてまたは組み合わせて用いた化合物（Ｉ）および化合物（２ｂ）の投薬量および投与スケジュールは、結果の項に記載し、続く表で詳説する。

処置は、結果の項および下の表１６から１８に示すように、ＵＡＣＣ−６２細胞腫瘍移植後第８日に開始した。

動物飼育、腫瘍細胞の皮下移植、試験監視、腫瘍体積、動物死および動物体重減少のためにここで使用した材料および方法は、実施例５に記載したものと同じである。

使用した有効性の主要評価項目は、実施例５で使用したものと同じである。

インビボ試験の結果
療法開始時の中央値腫瘍負荷は、１２５から１２６ｍｍ^３であった。化合物（Ｉ）（１５１．５ｍｇ／ｋｇ／ａｄｍ）および化合物（２ｂ）（１００および５０ｍｇ／ｋｇ／ａｄｍ）を単剤として、それぞれＰＯ ｂｉｄおよびｑｄで、腫瘍移植後第８日から第１５日まで投与した。組合せ群において、表１６に示すように、化合物（Ｉ）の用量を化合物（２ｂ）の各用量と組み合わせた。

単剤としてのまたは組み合わせて使用した化合物（Ｉ）および化合物（２ｂ）は、耐容性良好であり、誘起されたｂｗｌは最小限であった（図７および表１６）。

化合物（Ｉ）（１５１．５ｍｇ／ｋｇ、ｂｉｄ）は単剤として活性であった（第１５日にてΔＴ／ΔＣ＝３９）。化合物（２ｂ）は、１００ｍｇ／ｋｇ ｑｄにて活性であり（第１５日にてΔＴ／ΔＣ＝２０）、５０ｍｇ／ｋｇ ｑｄより低い用量レベルは、これらの試験条件下で活性であった（第１５日にてΔＴ／ΔＣ＝３１）（図８および表１６）。

組合せでは、１００および５０ｍｇ／ｋｇ ｑｄにおける化合物（Ｉ）および化合物（２ｂ）による処置は活性であった（それぞれ第１５日にてΔＴ／ΔＣ＝２および第１５日にてΔＴ／ΔＣ＝１１）（図８および表１６）。表１７によって示すように、グローバル解析では両方の組合せで治療的相乗効果が達成された。表１８も参照のこと。

表１６：ヒトＵＡＣＣ−６２保持ＳＣＩＤメスマウスに対する、化合物（２ｂ）と組み合わせた化合物（Ｉ）の抗腫瘍活性

表１７：ヒトＵＡＣＣ−６２保持ＳＣＩＤメスマウスに対する、化合物（２ｂ）と組み合わせた化合物（Ｉ）の抗腫瘍活性：治療的相乗効果の決定

表１８．

［実施例７］皮下ヒト黒色腫腫瘍ＷＭ−２６６．４保持ＳＣＩＤメスマウスに対する、化合物（２ａ）および（２ｂ）と組み合わせた化合物（Ｉ）のインビボ活性
ＭＥＫ阻害剤化合物（２ａ）およびＲＡＦ阻害剤化合物（２ｂ）と組み合わせたＰＩ３Ｋβ選択的阻害剤化合物（Ｉ）の抗腫瘍活性を評価するために、ヒト黒色腫腫瘍ＷＭ−２６６．４（ＢＲＡＦミュータントおよびＰＴＥＮ欠失）を保持するメスＳＣＩＤマウスを使用して実験を行った。試験において、１５０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄの化合物（Ｉ）を、１０および２５ｍｇ／ｋｇ毎日（ｑｄ）の化合物（２ａ）ならびに５０および１００ｍｇ／ｋｇ毎日（ｑｄ）と組み合わせて試験した。

材料および方法
ヒト黒色腫ＷＭ−２６６．４腫瘍モデルは、ＳＣＩＤメスマウス１匹につき５０％マトリゲルと混合した３×１０^６個の細胞を皮下（ＳＣ）移植することによって樹立した。

化合物（Ｉ）、化合物（２ａ）および化合物（２ｂ）の調合物を実施例５および６の材料および方法に従って調製した。

単剤としてまたは組み合わせて用いた化合物（Ｉ）および化合物（２ａ）および（２ｂ）の投薬量および投与スケジュールは、結果の項に記載し、下の表１９から２１で詳説する。

処置は、結果の項および各表に示すように、ＷＭ−２６６．４細胞腫瘍移植後第２１日に開始した。

動物飼育、腫瘍細胞の皮下移植、試験監視、腫瘍体積、動物死および動物体重減少のためにここで使用した材料および方法は、実施例５に記載したものと同じである。

使用した有効性の主要評価項目は、実施例５で使用したものと同じである。

インビボ試験の結果
療法開始時の中央値腫瘍負荷は、１４４ｍｍ^３であった。化合物（Ｉ）（１５０ｍｇ／ｋｇ／ａｄｍ）、化合物（２ａ）（２５および１０ｍｇ／ｋｇ／ａｄｍ）および化合物（２ｂ）（１００および５０ｍｇ／ｋｇ／ａｄｍ）を単剤として、化合物（Ｉ）は１日２回、化合物（２ａ）および（２ｂ）は毎日、腫瘍移植後第２１日から第３１日まで経口投与した。組合せ群において、表１９に示すように、化合物（Ｉ）の用量を化合物（２ａ）および化合物（２ｂ）の各用量と組み合わせた。

表１９ ヒトＷＭ−２６６．４保持ＳＣＩＤメスマウスに対する、化合物（２ａ）および（２ｂ）と組み合わせた化合物（Ｉ）の抗腫瘍活性

ヒトＷＭ−２６６．４保持ＳＣＩＤメスマウスに対する、化合物（２ａ）と組み合わせた化合物（Ｉ）の抗腫瘍活性：
単剤として、化合物（Ｉ）は、ｂｗｌが腫瘍保持対照マウスによって誘起されたものと同程度であったため、耐容性良好であったのに対して、化合物（２ａ）は対照と比較してより高いｂｗｌを誘起した。組み合わせて使用した化合物（Ｉ）および化合物（２ａ）は、耐容性であり、単独の化合物（２ａ）によって誘起されたｂｗｌと同程度のｂｗｌを誘起した（図９および上の表１９）。

化合物（Ｉ）（１５０ｍｇ／ｋｇ、ｂｉｄ）は単剤として活性であった（第３１日にてΔＴ／ΔＣ＝３６）。化合物（２ａ）は、２５ｍｇ／ｋｇ ｑｄにて活性であり（第３１日にてΔＴ／ΔＣ＝２１）、１０ｍｇ／ｋｇ ｑｄより低い用量レベルは、これらの試験条件下では活性であった（第３１日にてΔＴ／ΔＣ＝３６）（図１０および上の表１９）。

組合せでは、２５および１０ｍｇ／ｋｇ ｑｄにおける化合物（Ｉ）および化合物（２ａ）による処置は活性であった（それぞれ第３１日にてΔＴ／ΔＣ＝２および第３１日にてΔＴ／ΔＣ＝１４）（図１０および上の表１９）。下の表２０によって示すように、グローバル解析では両方の組合せで治療的相乗効果が達成された。下の表２１も参照のこと。

ヒトＷＭ−２６６．４保持ＳＣＩＤメスマウスに対する、化合物（２ｂ）と組み合わせた化合物（Ｉ）の抗腫瘍活性：
単剤として、化合物（Ｉ）および化合物（２ｂ）は、ｂｗｌが腫瘍保持対照マウスによって誘起されたものと同程度であったため、耐容性良好であった。組み合わせて使用した化合物（Ｉ）および化合物（２ｂ）は、耐容性であり、どちらかの単剤単独で誘起されたｂｗｌよりも高いｂｗを誘起した（図１１および上の表１９）。

化合物（Ｉ）（１５０ｍｇ／ｋｇ、ｂｉｄ）は単剤として活性であった（第３１日にてΔＴ／ΔＣ＝３６）。１００および５０ｍｇ／ｋｇ ｑｄにおける化合物（２ｂ）は、これらの試験条件下では統計的に有意ではなかった（第３１日にてΔＴ／ΔＣ＞４０）（図１２および上の表１９）。

組合せでは、１００および５０ｍｇ／ｋｇ ｑｄにおける化合物（Ｉ）および化合物（２ｂ）による処置は活性であった（それぞれ第３１日にてΔＴ／ΔＣ＝３０および３５）（図８および上の表１９）。下の表２０によって示すように、グローバル解析では１００ｍｇ／ｋｇ ｑｄにおける化合物（Ｉ）と化合物（２ｂ）との組合せで治療的相乗効果が達成された。下の表２１も参照のこと。

表２０：ヒトＷＭ−２６６．４保持ＳＣＩＤメスマウスに対する、化合物（２ａ）および（２ｂ）と組み合わせた化合物（Ｉ）の抗腫瘍活性：治療的相乗効果の決定

表２１

［実施例８］皮下ヒト原発性腫瘍ＣＲ−ＩＧＲ−０１４Ｐ保持ＳＣＩＤメスマウスに対する、化合物（２ａ）と組み合わせた化合物（Ｉ）のインビボ活性
ＭＥＫ阻害剤化合物（２ａ）と組み合わせたＰＩ３Ｋβ選択的阻害剤化合物（Ｉ）の抗腫瘍活性を評価するために、ヒト結腸原発性腫瘍ＣＲ−ＩＧＲ−０１４Ｐ（ＫＲＡＳミュータントＰＴＥＮ欠失）異種移植片保持メスＳＣＩＤマウスを使用して実験を行った。試験において、１５０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄの化合物（Ｉ）を、１０および２５ｍｇ／ｋｇ ｑｄの化合物（２ａ）と組み合わせて試験した。

材料および方法
ヒト原発性結腸癌腫ＣＲ−ＩＧＲ−０１４Ｐ腫瘍モデルは、腫瘍の小断片を皮下（ＳＣ）移植することによって樹立し、連続継代を使用してＳＣＩＤメスマウス内に維持した。

化合物（Ｉ）および（２ａ）の調合物は、実施例５の材料および方法に従って調製した。

単剤としてまたは組み合わせて用いた化合物（Ｉ）および（２ａ）の投薬量および投与スケジュールは、結果の項に記載し、下の表２２から２４で詳説する。

処置は、結果の項および各表に示すように、ＣＲ−ＩＧＲ−０１４Ｐ腫瘍断片移植後第２０日に開始した。

動物飼育、腫瘍細胞の皮下移植、試験監視、腫瘍体積、動物死および動物体重減少のためにここで使用した材料および方法は、実施例５に記載したものと同じである。

使用した有効性の主要評価項目は、実施例５で使用したものと同じである。

インビボ試験の結果
療法開始時の中央値腫瘍負荷は、１３９から１４４ｍｍ^３であった。化合物（Ｉ）（１５０ｍｇ／ｋｇ／ａｄｍ）および化合物（２ａ）（２５および１０ｍｇ／ｋｇ／ａｄｍ）を単剤として、それぞれＰＯで１日２回および毎日、腫瘍移植後第２０日から第３６日まで投与した。組合せ群において、下の表２２に示すように、化合物（Ｉ）の用量を化合物（２ａ）の各用量と組み合わせた。

単剤として、化合物（Ｉ）および化合物（２ａ）は耐容性良好であり、最小限のｂｗｌを誘起し、薬物を組み合わせて使用したときには高いｂｗｌが生じたが、毒性ではなかった（図１３および表２２）。

単剤として、化合物（Ｉ）（１５０ｍｇ／ｋｇ、ｂｉｄ）および化合物（２ａ）（２５および１０ｍｇ／ｋｇ ｑｄ）は、これらの試験条件下では統計的に有意ではなかった（ΔＴ／ΔＣ＞４０）（図１４および下の表２２）。

組合せでは、２５ｍｇ／ｋｇ ｑｄにおける化合物（Ｉ）および化合物（２ａ）による処置は活性であった（第３６日にてΔＴ／ΔＣ＝２８）（図１４および表２２）。表２３によって示すように、グローバル解析では２５ｍｇ／ｋｇ ｑｄにおける化合物（Ｉ）と化合物（２ａ）との組み合わせで治療的相乗効果が達成された。下の表２４も参照のこと。

表２２ ヒトＣＲ−ＩＧＲ−０１４Ｐ保持ＳＣＩＤメスマウスに対する、化合物（２ａ）と組み合わせた化合物（Ｉ）の抗腫瘍活性

表２３：ヒトＣＲ−ＩＧＲ−０１４Ｐ保持ＳＣＩＤメスマウスに対する、化合物（２ａ）と組み合わせた化合物（Ｉ）の抗腫瘍活性：治療的相乗効果の決定

表２４．

インビボ結果の概要（実施例５から８）
化合物（Ｉ）をＭＥＫ阻害剤化合物（２ａ）と、およびＲＡＦ阻害剤化合物（２ｂ）と組み合わせて、ＢＲＡＦ突然変異およびＰＴＥＮ欠失ＵＡＣＣ−６２およびＷＭ−２６６．４腫瘍モデルにおいて試験を行った場合、単剤として使用した薬物は、使用した用量にかかわらず腫瘍成長に多少の影響を有していたが、薬物の組合せははるかにより活性であり、処置期の間に持続した腫瘍静止を誘起し、治療的相乗効果が達成された。化合物（Ｉ）がＭＥＫ阻害剤である化合物（２ａ）と組合された、ＫＲａｓ突然変異およびＰＴＥＮ欠失を包含する患者由来異種移植片ＣＲ−ＩＧＲ−０１４Ｐにおいては、治療的相乗効果も示された。

まとめると、二重のＰＴＥＮ欠失およびＢＲＡＦまたはＫＲａｓ突然変異を有する異種移植片モデルにおいてＭＥＫ阻害剤およびＲＡＦ阻害剤などの標的療法と組み合わせたときに、選択的ＰＩ３Ｋβ阻害剤化合物（Ｉ）によって持続した抗腫瘍活性が生じた。

これらのインビトロおよびインビボデータによって、ＰＴＥＮ欠失およびＭＡＰＫ経路活性化を通じて、特にＢＲＡＦ活性化突然変異またはＲＡＳ突然変異を通じてＰＩ３Ｋβ経路活性化を示す様々な適応症から、腫瘍を処置するために、ＰＩ３Ｋβ阻害剤、特に化合物（Ｉ）をＭＥＫ阻害剤としてのＭＡＰＫ経路阻害剤、特に化合物（２ａ）またはＲＡＦ阻害剤としてのＭＡＰＫ経路阻害剤、特に化合物（２ｂ）と組み合わせて使用することの恩恵が裏付けられる。これらの腫瘍は、特に黒色腫ＰＴＥＮ−欠失／ＢＲＡＦミュータントであることができる。

上のデータにより、以下のことが示される：
選択的ＰＩ３Ｋβ阻害剤（化合物Ｉ）がＭＥＫ阻害剤（化合物２ａ）と、およびＲＡＦ阻害剤（化合物２ｂ）と相乗作用して、ＰＴＥＮ欠失およびＭＡＰＫ経路活性化を通じた、特にＢＲＡＦ活性化突然変異を通じたＰＩ３Ｋβ経路活性化を示す腫瘍適応症において、細胞増殖に対する阻害活性を上昇させることが可能である。

選択的ＰＩ３Ｋβ阻害剤（化合物Ｉ）がＭＥＫ阻害剤（化合物２ａ）と、およびＲＡＦ阻害剤（化合物２ｂ）と相乗作用して、ＰＴＥＮ欠失およびＭＡＰＫ経路活性化を通じた、特にＢＲＡＦ活性化突然変異を通じたＰＩ３Ｋβ経路活性化を示す腫瘍適応症において、腫瘍成長の前臨床動物モデルでさらなる毒性を誘起することなく抗腫瘍活性を上昇させることが可能である。

Claims (37)

1. 医薬組合せであって、
   式（Ｉ）の化合物
   

   

   または医薬として許容されるその塩、および
   少なくとも１つのＭＡＰＫ経路阻害剤または医薬として許容されるその塩
   を含む、医薬組合せ。
2. 請求項１に記載の医薬組合せであって、ＭＡＰＫ経路阻害剤がＭＥＫキナーゼおよびＲＡＦキナーゼの一方または両方の阻害剤である、医薬組合せ。
3. 請求項２に記載の医薬組合せであって、ＭＡＰＫ経路阻害剤がＭＥＫ阻害剤である、医薬組合せ。
4. 請求項２に記載の医薬組合せであって、ＭＡＰＫ経路阻害剤がＲＡＦ阻害剤である、医薬組合せ。
5. 請求項２に記載の医薬組合せであって、ＭＡＰＫ経路阻害剤が
   化合物（２ａ）
   

   

   または医薬として許容されるその塩、または
   化合物（２ｂ）
   

   

   または医薬として許容されるその塩
   である、医薬組合せ。
6. 請求項２に記載の医薬組合せであって、ＭＡＰＫ経路阻害剤が式
   

   

   の化合物（２ａ）または医薬として許容されるその塩である、医薬組合せ。
7. 請求項２に記載の医薬組合せであって、ＭＡＰＫ経路阻害剤が式
   

   

   の化合物（２ｂ）または医薬として許容されるその塩である、医薬組合せ。
8. 請求項１から７のいずれか一項に記載の医薬組合せであって、医薬として許容される担体をさらに含む、医薬組合せ。
9. 請求項１から７のいずれか一項に記載の医薬組合せであって、抗癌化合物から選ばれる少なくとも１つのさらなる化合物を含む、医薬組合せ。
10. 請求項１から９のいずれか一項に記載の医薬組合せを含む医薬品。
11. 請求項１から９のいずれか一項に記載の医薬組合せ、および医薬として許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
12. 請求項１から９のいずれか一項に記載の医薬組合せであって、医薬品として使用するための、医薬組合せ。
13. 請求項１から９のいずれか一項に記載の医薬組合せであって、癌の処置に使用するための、医薬組合せ。
14. 請求項１３に記載の組合せであって、癌が、非小細胞肺癌、乳癌、膵臓癌、肝臓癌、前立腺癌、膀胱癌、子宮頸癌、甲状腺癌、結腸直腸癌、肝臓癌、筋肉癌、血液悪性腫瘍、黒色腫、子宮内膜癌および膵臓癌から成る群より選ばれる、組合せ。
15. 請求項１３に記載の組合せであって、癌が、結腸直腸癌、子宮内膜癌、血液悪性腫瘍、甲状腺癌、乳癌、黒色腫、膵臓癌および前立腺癌から成る群より選ばれる、組合せ。
16. 請求項１３に記載の組合せであって、式（Ｉ）の化合物の投与に続いてＭＡＰＫ経路阻害剤を投与する、組合せ。
17. 請求項１３に記載の組合せであって、ＭＡＰＫ経路阻害剤の投与に続いて式（Ｉ）の化合物を投与する、組合せ。
18. 請求項１３に記載の組合せであって、式（Ｉ）の化合物の投与に続いて化合物（２ａ）を投与する、組合せ。
19. 請求項１３に記載の組合せであって、式（Ｉ）の化合物の投与に続いて化合物（２ｂ）を投与する、組合せ。
20. 請求項１３に記載の組合せであって、化合物（２ａ）の投与に続いて式（Ｉ）の化合物を投与する、組合せ。
21. 請求項１３に記載の組合せであって、化合物（２ｂ）の投与に続いて式（Ｉ）の化合物を投与する、組合せ。
22. 請求項１３に記載の組合せであって、式（Ｉ）の化合物およびＭＡＰＫ経路阻害剤が腫瘍体積を減少させる相乗効果を生じる量である、組合せ。
23. 請求項１３に記載の組合せであって、式（Ｉ）の化合物およびＭＡＰＫ経路阻害剤が腫瘍静止の併用効果を生じる量である、組合せ。
24. 請求項１３に記載の使用のための組合せであって、癌が、非小細胞肺癌、乳癌、膵臓癌、肝臓癌、前立腺癌、膀胱癌、子宮頸癌、甲状腺癌、結腸直腸癌、肝臓癌、筋肉癌、血液悪性腫瘍、黒色腫、子宮内膜癌および膵臓癌から成る群より選ばれる、組合せ。
25. 請求項１３に記載の使用のための組合せであって、癌が、結腸直腸癌、子宮内膜癌、血液悪性腫瘍、甲状腺癌、乳癌、黒色腫、膵臓癌および前立腺癌から成る群より選ばれる、組合せ。
26. 請求項１３に記載の使用のための組合せであって、式（Ｉ）の化合物の投与に続いてＭＡＰＫ経路阻害剤を投与する、組合せ。
27. 請求項１３に記載の使用のための組合せであって、ＭＡＰＫ経路阻害剤の投与に続いて式（Ｉ）の化合物を投与する、組合せ。
28. 請求項１３に記載の使用のための組合せであって、式（Ｉ）の化合物の投与に続いて化合物（２ａ）を投与する、組合せ。
29. 請求項１３に記載の使用のための組合せであって、式（Ｉ）の化合物の投与に続いて化合物（２ｂ）を投与する、組合せ。
30. 請求項１３に記載の使用のための組合せであって、化合物（２ａ）の投与に続いて式（Ｉ）の化合物を投与する、組合せ。
31. 請求項１３に記載の使用のための組合せであって、化合物（２ｂ）の投与に続いて式（Ｉ）の化合物を投与する、組合せ。
32. 請求項１３に記載の使用のための組合せであって、式（Ｉ）の化合物およびＭＡＰＫ経路阻害剤が腫瘍体積を減少させる相乗効果を生じる量である、組合せ。
33. 請求項１３に記載の使用のための組合せであって、式（Ｉ）の化合物およびＭＡＰＫ経路阻害剤が腫瘍静止の併用効果を生じる量である、組合せ。
34. 式（Ｉ）の化合物
    

    

    または医薬として許容されるその塩、および
    少なくとも１つのＭＡＰＫ経路阻害剤を含む、癌の処置に使用するための医薬組合せであって、
    前記ＭＡＰＫ経路阻害剤が、
    化合物（２ａ）
    

    

    または医薬として許容されるその塩、および
    化合物（２ｂ）
    

    

    または医薬として許容されるその塩
    から成る群より選ばれる、医薬組合せ。
35. 製品であって、
    式（Ｉ）の化合物
    

    

    または医薬として許容されるその塩、および
    少なくとも１つのＭＡＰＫ経路阻害剤または医薬として許容されるその塩
    を含む、抗癌療法での同時、個別または連続使用のための併用製剤としての、製品。
36. キットであって、
    少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物
    

    

    または医薬として許容されるその塩、
    少なくとも１つのＭＡＰＫ経路阻害剤または医薬として許容されるその塩、および
    場合により、使用説明書
    を含む、キット。
37. キットであって、
    少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物
    

    

    または医薬として許容されるその塩、
    少なくとも１つのＭＡＰＫ経路阻害剤、および
    場合により、使用説明書を含み、
    前記ＭＡＰＫ経路阻害剤が
    化合物（２ａ）
    

    

    または医薬として許容されるその塩、および
    化合物（２ｂ）
    

    

    または医薬として許容されるその塩
    から成る群より選ばれる、キット。

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