JP2015504875A - 放射性フッ素化方法 - Google Patents

Abstract

本発明は、放射性同位体¹⁸Ｆによる生体ターゲティング分子（ＢＴＭ）の放射性フッ素化の方法を提供する。また、¹⁸Ｆ−放射性フッ素化方法に有用な新規なコンジュゲート、並びにかかるコンジュゲート及び該方法を実施するためのカセットを含む自動合成装置の使用も提供する。
【選択図】 なし

Description

本発明は、生体ターゲティング分子（ＢＴＭ）を放射性同位体¹⁸Ｆで放射性フッ素化する方法を提供する。また、その¹⁸Ｆ−放射性フッ素化方法に有用な新規なコンジュゲート、かかるコンジュゲートの使用、及び本方法を実施するためのカセットを含む自動合成装置も提供する。

¹⁸Ｆ−フルオロアルキル置換トリアゾールを含む生成物を生じる標的ペプチドの¹⁸Ｆクリック標識がＬｉら［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，１８（６），１９８７−１９９４（２００７）］、及びＨａｕｓｎｅｒら［Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，５１（１９），５９０１−５９０４（２００８）］により報告されている。

放射化学を含む生体医学研究における「クリックケミストリー」の応用が、Ｎｗｅら［Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｔｈｅｒ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，２４（３），２８９−３０２（２００９）］により検討された。そこに注記されているように、主たる関心は、ＰＥＴ用の放射性同位体¹⁸Ｆ（及びそれよりは少ないが¹¹Ｃ）、及び^99mＴｃ又は¹¹¹ＩｎのようなＳＰＥＣＴイメージングに適した放射性金属のための「クリックによりキレート化する」アプローチにある。Ｇｌａｓｅｒ及びＲｏｂｉｎｓは放射性同位体¹⁸Ｆ及び¹¹Ｃに焦点を当ててＰＥＴ放射化学標識反応におけるクリックケミストリーの使用を検討している［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，５２，４０７−４１４（２００９）］。

国際公開第２００６／０６７３７６号は、Ｃｕ（Ｉ）触媒の存在下における、以下の式（Ｉ）の化合物と式（ＩＩ）の化合物、又は、式（ＩＩＩ）の化合物と式（ＩＶ）の化合物の反応を含み、それぞれ式（Ｖ）又は（ＶＩ）のコンジュゲートを生成することを含むベクターの標識方法を開示している。

式中、
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、及びＬ４は各々リンカー基であり、
Ｒ＊は放射性核種を含むレポーター部分である。

国際公開第２００６／０６７３７６号のＲ＊は放射性核種、例えば陽電子放出性放射性核種を含むレポーター部分である。この目的に適した陽電子放出性放射性核種は¹¹Ｃ、¹⁸Ｆ、⁷⁵Ｂｒ、⁷⁶Ｂｒ、¹²⁴Ｉ、⁸²Ｒｂ、⁶⁸Ｇａ、⁶⁴Ｃｕ及び⁶²Ｃｕを包含し、そのうち¹¹Ｃ及び¹⁸Ｆが好ましいとされている。

国際公開第２００６／１１６６２９号（Ｓｉｅｍｅｎｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ ＵＳＡ，Ｉｎｃ．）は、標的生体高分子に対する親和性を有する放射標識リガンド又は基質の製造方法を開示しており、この方法は、
（ａ）（ｉ）第１の分子構造、
（ｉｉ）脱離基、
（ｉｉｉ）クリックケミストリー反応に関与することができる第１の官能基、及び場合により、
（ｉｖ）第１の官能基と分子構造の間のリンカー
を含む第１の化合物を放射性試薬と、脱離基を放射性試薬の放射性成分で置き換えるのに充分な条件下で反応させて、第１の放射性化合物を形成し、
（ｂ）（ｉ）第２の分子構造、
（ｉｉ）第１の官能基とのクリックケミストリー反応に関与することができる第２の補足官能基
を含む第２の化合物であって、場合により第２の化合物と第２の官能基の間にリンカーを含む、第２の化合物を準備し、
（ｃ）第１の放射性化合物の第１の官能基を第２の化合物の補足官能基とクリックケミストリー反応によって反応させて放射性のリガンド又は基質を形成し、
（ｄ）放射性のリガンド又は基質を単離する
ことを含んでいる。

国際公開第２００６／１１６６２９号は、開示されている方法が放射性同位体¹²⁴Ｉ、¹⁸Ｆ、¹¹Ｃ、¹³Ｎ及び¹⁵Ｏと共に使用するのに適切であることを教示している。

国際公開第２０１０／０２６３８８号は、次式の化合物が¹⁸Ｆで標識されると有用なイメージング剤であることを教示している。

式中、
Ｒ³は、フェニル、３−フルオロフェニル、２，４−ジフルオロフェニル、３，５−ジフルオロフェニル、場合により置換されていてもよいテトラヒドロピラン、場合により置換されていてもよいジアジン、又は場合により置換されていてもよいトリアゾールであり、
Ｒ⁴は、場合により置換されていてもよいフェニル又は場合により置換されていてもよいトリアゾールであり、
Ｒがフェニルである場合、Ｒ⁴は場合により置換されていてもよいトリアゾールである。

国際公開第２０１０／０２６３８８号の好ましい化合物は［¹⁸Ｆ］−ＩＣＭＴ−１１である。

Ｓｍｉｔｈら［Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ，５１（２４），８０５７−８０６７（２００８）］は、アルキンで官能化さたイサチン前駆体からフルオロエチルアジド（¹⁸Ｆ−ＣＨ₂ＣＨ₂−Ｎ₃）を用いるクリック反応による［¹⁸Ｆ］−ＩＣＭＴ−１１の合成を記載している。

Ｇｌａｓｅｒら［Ｂｉｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ，２１，６９４５−６９４９（２０１１）］は、式のアセタールで保護されたアルキン官能化イサチン前駆体、及びフルオロエチルアジドを用いるクリック反応を用いた［¹⁸Ｆ］−ＩＣＭＴ−１１の改良放射性合成を記載している。

この反応性のジカルボニル化合物は、不要な不純物を抑制するように保護され、［¹⁸Ｆ］−ＩＣＭＴ−１１と類似であると考えられ、従って生体内でカスパーゼ−３に対する競合性阻害剤の可能性があった。

Ｓｍｉｔｈら［Ｐｏｓｔｅｒ ３５４ ｅｎｔｉｔｌｅｄ 「Ｆｕｌｌｙ Ａｕｔｏｍａｔｅｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓｗ ｏｆ ［¹⁸Ｆ］−ＩＣＭＴ−１１ ｆｏｒ Ｉｍａｇｉｎｇ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ」；１９ｔｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ ｏｎ Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，２８ｔｈ Ａｕｇｕｓｔ ｔｏ ２ｎｄ Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２０１１； Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｓ４４３］は、トシレートの［¹⁸Ｆ］−フッ素置換、その後の脱保護による［¹⁸Ｆ］−ＩＣＭＴ−１１の自動合成を記載している。

Ｓｍｉｔｈらはどのようにしてこのトシレートが得られたのか説明していない。

米国特許出願公開第２００６２６３２９３号

従って、インビボイメージングに適した放射性フッ素化生体ターゲティング分子を提供するという代わりの放射性フッ素化方法が未だに必要とされている。理想的には、この方法は自動化に適していて、放射性医薬組成物は再現可能な方法で、良好な放射化学及び化学的純度で得ることができる。

本発明は、¹⁸Ｆ−標識トリアゾール−官能化生体ターゲティング分子の製造のための別の放射性フッ素化方法を提供する。

本発明は、臨床用途に特に有用な単純化された、よりたくましい調製用の方法論を提供する。本放射性フッ素化方法は、改良された比放射能を提供し、生体内の放射性トレーサー／受容体相互作用からの信号、及び潜在的に競合する安定な不純物の存在下における低下を最大にする。本方法は自動化に容易に適応可能である。本方法は、放射性の反応体として［¹⁸Ｆ］−フッ素を用い、従って揮発性の¹⁸Ｆ−フルオロエチルアジドを製造し取り扱う必要性を回避するという利点を有する。これは、放射能が関わる合成工程を最小にすることによりオペレーターに対する放射線量を最小にし、また合成経過時間中の放射性壊変による放射能の損失を最小にする（¹⁸Ｆは１１０分の半減期を有する）ので有益である。

加えて、クリック反応工程は非放射性に行われるので、クリック触媒として用いられる銅によって生ずる可能な不純物の問題（Ｇｌａｓｅｒら［Ｂｉｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ，２１，６９４５−６９４９（２０１１）］）を、放射能に関する追加の問題を伴うことなく解決することができる。

本方法はＧｏｏｄ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ（ＧＭＰ）条件下での放射性合成を容易にし、純度プロフィールが改良されると共に放射化学収率が増大するので、単一の調製で複数の患者のスキャンが可能になる。

［¹⁸Ｆ］ＩＣＭＴ−１１の場合、本発明者らは、フルオロエチルアジド経路が、安定なイサチン類似体不純物の濃度が１４μｇ／ｍＬで、適度な比放射能（１．２ＧＢｑ／μＭｏｌ）を提供することを確立した。Ｇｌａｓｅｒらの改良方法（上掲）は、壊変補正してない合成終了時（ＥＯＳ）の放射化学収率３．０±２．６％（ｎ＝３）、比放射能２４±１９ＧＢｑ／μｍｏｌ及び安定なイサチン不純物濃度４．１±４．１μｇ／ｍＬで［¹⁸Ｆ］ＩＣＭＴ−１１を提供した。本方法は、標的を空にし無菌の分配の完了まで９０分で放射化学収率４．６±０．４ＧＢｑ（ＥＯＳで壊変補正してない放射化学収率９．３±１．７％）の［¹⁸Ｆ］ＩＣＭＴ−１１を提供する。放射化学純度は全てのバッチで合成終了時９８〜９９％であり、比放射能は６８５±２３７ＧＢｑ／μｍｏｌであった。非放射性のＩＣＭＴ−１１及び他の不純物の総量はそれぞれ０．３２±０．１１μｇ／ｍＬ及び１．０６±０．２４μｇ／ｍＬであることが示された。ＩＣＭＴ−１１前駆体は検出されなかった。これらの特徴は相俟って［¹⁸Ｆ］ＩＣＭＴ−１１への従来技術の経路と比べて有意な改良を表す。

自動合成のための装置を示す（実施例２参照）。

本発明の好ましい態様の詳細な説明
第１の態様において、本発明は、生体ターゲティング部分の¹⁸Ｆ−放射性フッ素化方法を提供する。この方法は、式（Ｉ）の化合物と式（ＩＩ）のアジドのクリック反応により、式（ＩＩＩ）のコンジュゲートを生成させ、式（ＩＩＩ）のコンジュゲートと［¹⁸Ｆ］−フッ化物の反応により、式（ＩＶ）の放射性フッ素化生成物を得ることを含む。

式中、
Ｌ¹は、存在してもしなくてもよいリンカー基であり、
ｎは、２、３又は４であり、
Ｒ¹は、Ｃ_1-4アルキル、Ｃ_1-4フルオロアルキル、又は−Ｃ₆Ｈ₄−Ｒ²であり、Ｒ²はＨ、ＣＨ₃、Ｂｒ又はＮＯ₂から選択され、
ＢＴＭは、場合により１以上の保護基により保護されていてもよい生体ターゲティング部分である。

用語「放射性フッ素化」は慣用の意味を有し、すなわち、放射標識に用いられる放射性同位体がフッ素の放射性同位体、ここでは¹⁸Ｆである放射標識プロセスを意味する。

リンカー基（Ｌ¹）が存在しない場合とは、式（Ｉ）のアルキン基が直接ＢＴＭに結合していることを意味する。例えば、アルキンが、ＢＴＭペプチド又はタンパク質のアミノ酸の側鎖に、又は直接ＢＴＭペプチドのＮ−又はＣ−末端に結合していることを意味することができる。存在する場合、各リンカー基（Ｌ¹）は好ましくは合成であり、独立に式−（Ａ）_m−の基を含み、ここで各Ａは独立に−ＣＲ₂−、−ＣＲ＝ＣＲ−、−ＣoＣ−、−ＣＲ₂ＣＯ₂−、−ＣＯ₂ＣＲ₂−，−ＮＲＣＯ−、−ＣＯＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ−、−ＳＯ₂ＮＲ−、−ＮＲＳＯ₂−、−ＣＲ₂ＯＣＲ₂−、−ＣＲ₂ＳＣＲ₂−、−ＣＲ₂ＮＲＣＲ₂−、Ｃ_4-8シクロヘテロアルキレン基、Ｃ_4-8シクロアルキレン基、Ｃ_5-12アリーレン基、若しくはＣ_3-12ヘテロアリーレン基、アミノ酸、糖又は単分散のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成ブロックであり、各Ｒは独立にＨ、Ｃ_1-4アルキル、Ｃ_2-4アルケニル、Ｃ_2-4アルキニル、Ｃ_1-4アルコキシアルキル又はＣ_1-4ヒドロキシアルキルから選択され、ｍは値１〜２０の整数である。

用語「生体ターゲティング部分」（ＢＴＭ）は、投与後、哺乳類の身体内の特定の部位に選択的に取り込まれるか又は局在化する化合物を意味する。かかる部位は、例えば、特定の疾病状態に関係するか、又はある臓器又は代謝過程がどのように機能しているかを示し得る。

用語「クリック反応」は、その通常の意味を有し、ここでは特にトリアゾール環を生成するアルキンとアジドの反応を指す。さらなる詳細は、Ｊ．Ｌａｈａｎｎ（編），Ｃｌｉｃｋ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｗｉｌｙ（２００９）にある。

用語「フルオロアルキル」は、ペルフルオロアルキル基まで含めて少なくとも１つのフッ素置換基を有するアルキル基を意味する。

用語「保護基」はその通常の意味を有しており、望ましくない化学反応を阻害又は抑制するが、分子の残りの部分を変化させない十分に温和な条件下で当の官能基から開裂され得るように充分反応性に設計されている基を指す。脱保護後目的の生成物が得られる。適切な保護基はＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔｈｅｏｄｏｒａ Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ及びＰｅｔｅｒ Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，４ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，２００７）に記載されている。

好ましい態様
Ｒ¹がフルオロアルキルである場合、好ましいかかる基は−ＣＦ₃（トリフレート）、−Ｃ₄Ｆ₉（ノナフラート）及び−ＣＨ₂ＣＦ₃（トレシレート）から選択される。Ｒ¹は好ましくは−Ｃ₆Ｈ₄ＣＨ₃（トシレート）、−ＣＨ₃（メシレート）、Ｃ₆Ｈ₄ＮＯ₂（ノシレート）及び−ＣＦ₃から選択され、最も好ましくはトシレートである。

クリック反応は好ましくはクリック触媒の存在下で行われる。用語「クリック触媒」はクリック（アルキン＋アジド）反応を触媒することが知られている触媒を意味する。適切なかかる触媒は当技術分野でクリック反応に使用することが知られている。好ましいクリック触媒はＣｕ（Ｉ）を含む。Ｃｕ（Ｉ）触媒は反応が進行するのに充分な量で、通例式（ＩＩ）のアジドに対して０．０２〜１．５モル当量のような触媒量で又は過剰に存在する。適切なＣｕ（Ｉ）触媒には、ＣｕＩ又は［Ｃｕ（ＮＣＣＨ₃）₄］［ＰＦ₆］のようなＣｕ（Ｉ）塩が包含されるが、有利には硫酸銅（ＩＩ）のようなＣｕ（ＩＩ）塩を還元剤の存在下で使用してその場でＣｕ（Ｉ）を生成させ得る。適切な還元剤としては、アスコルビン酸又はその塩、例えばアスコルビン酸ナトリウム、ヒドロキノン、金属銅、グルタチオン、システイン、Ｆｅ²⁺、又はＣｏ²⁺がある。Ｃｕ（Ｉ）はまた元素状銅粒子の表面上に本来存在しており、従って例えば粉末又は顆粒の形態の元素状の銅も触媒として使用され得る。制御された粒度の元素状銅は好ましいＣｕ（Ｉ）触媒源である。より好ましいかかる触媒は０．００１〜１ｍｍ、好ましくは０．１ｍｍ〜０．７ｍｍの範囲、より好ましくはおよそ０．４ｍｍの粒度を有する銅粉末としての元素状の銅である。或いは、０．０１〜１．０ｍｍ、好ましくは０．０５〜０．５ｍｍの範囲の直径、より好ましくは０．１ｍｍの直径のコイル状銅線を使用することができる。Ｃｕ（Ｉ）触媒は場合により、クリックケミストリーでＣｕ（Ｉ）を安定化するのに使用されるバソフェナントロリンの存在下で使用してもよい。

適切な触媒のさらなる詳細はＷｕ及びＦｏｋｉｎ［Ａｌｄｒｉｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，４０（１），７−１７（２００７）］並びにＭｅｌｄａｌ及びＴｏｒｎｏｅ［Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，１０８，２９５２−３０１５（２００８）］により記載されている。

第１の態様の方法において、式（Ｉ）の化合物は場合により、ＢＴＭを保護するための１以上の保護基で保護ＢＴＭの１以上の官能基を有していてもよい。かかる保護基上記定義の通りである。通例、異なる保護基が異なる官能基に対して使用される。本発明の方法はＢＴＭにおいて広範囲の官能基を許容する。しかしながら、ＢＴＭが遊離のチオール基を含む場合（例えば還元型システインを含有するペプチド）、かかるチオール基は第１の態様の反応を実施する前に保護するのが好ましい。同様に、銅（Ｉ）によく配位するキレート化機能性又は基は保護を必要とし得る。様々な官能基に適した保護基の導入及び除去の条件はＧｒｅｅｎｅらによるテキストブック（上掲）に記載されている。かかる保護基を使用する場合、工程（ｉｉｉ）の後に除去（すなわち脱保護）される。

ＢＴＭは合成でも天然起源でもよいが、好ましくは合成である。用語「合成」はその通常の意味を有し、すなわち天然起源、例えば哺乳類の身体から単離されたのではなく人工である。かかる化合物は、その製造及び不純物プロフィールを完全に制御することができるという利点を有する。従って、天然起源のモノクローナル抗体及びその断片は本明細書で使用する用語「合成」の範囲外である。ＢＴＭは好ましくは非タンパク性であり、すなわちタンパク質を含まない。

ＢＴＭの分子量は好ましくは１００００ダルトン以下である。より好ましくは、分子量は２００〜９０００ダルトン、最も好ましくは３００〜８０００ダルトンの範囲であり、４００〜６０００ダルトンが殊に好ましい。ＢＴＭが非ペプチドである場合、ＢＴＭの分子量は好ましくは３０００ダルトン以下、より好ましくは２００〜２５００ダルトン、最も好ましくは３００〜２０００ダルトンであり、４００〜１５００ダルトンが殊に好ましい。

生体ターゲティング部分は好ましくは、３〜８０量体ペプチド、ペプチド類似体、ペプトイド又はペプチドミメティック（線状又は環状ペプチド又はこれらの組合せであり得る）、単一のアミノ酸、酵素基質、酵素アンタゴニスト 酵素アゴニスト（部分アゴニストを含む）又は酵素阻害剤、受容体結合性化合物（受容体基質、アンタゴニスト、アゴニスト又は基質を含む）、オリゴヌクレオチド、又はオリゴ−ＤＮＡ又はオリゴ−ＲＮＡ断片を含む。より好ましくは、ＢＴＭはヌクレオシド又はニトロイミダゾールを含まない。

ＢＴＭは最も好ましくは３〜８０量体ペプチド又は酵素阻害剤である。

用語「ペプチド」は、以下に定義するようにペプチド結合（すなわち１つのアミノ酸のアミンともう１つ別のアミノ酸のカルボキシルを連結するアミド結合）により連結された２以上のアミノ酸を含む化合物を意味する。用語「ペプチドミメティック」又は「ミメティック」とは、ペプチド又はタンパク質の生物学的活性を模倣するが化学的性質がもはやペプチド性ではない、すなわち、もはやペプチド結合（すなわち、アミノ酸間のアミド結合）を含有しない生物学的に活性な化合物をいう。ここで、用語ペプチドミメティックはより広い意味で使用されており、擬似ペプチド、半ペプチド及びペプトイドのように性質がもはや完全にペプチド性ではない分子を包含する。用語「ペプチド類似体」とは、以下に記載するように１以上のアミノ酸類似体を含むペプチドをいう。「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｏｒａｇｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」，Ｔｈｉｅｍｅ（２００４）のＳｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃｓ，Ｍ．Ｇｏｏｄｍａｎら，Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ Ｖｏｌ Ｅ２２ｃも参照されたい。

用語「アミノ酸」はＬ−又はＤ−アミノ酸、アミノ酸類似体（例えばナフチルアラニン）又はアミノ酸ミメティックを意味し、これらは天然起源でも純粋に合成起源でもよく、光学的に純粋、すなわち単一のエナンチオマー、従ってキラルでもよく、又はエナンチオマーの混合物でもよい。アミノ酸に対した慣用の３文字又は１文字略記を本明細書では使用する。好ましくは、本発明のアミノ酸は光学的に純粋である。用語「アミノ酸ミメティック」は、アイソスター、すなわち天然の化合物の立体及び電子構造を模倣するように設計されている天然起源のアミノ酸の合成の類似体を意味する。かかるアイソスターは当業者に周知であり、限定されることはないがデプシペプチド、レトロインベルソペプチド、チオアミド、シクロアルカン又は１，５−二置換テトラゾールが包含される［Ｍ．Ｇｏｏｄｍａｎ，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ，２４，１３７（１９８５）参照］。放射標識チロシン、ヒスチジン、メチオニン又はプロリンのようなアミノ酸は有用な生体内イメージング剤であることが知られている。

ＢＴＭがペプチドである場合、好ましくは４〜３０量体のペプチド、最も好ましくは５〜２８量体のペプチドである。

ＢＴＭが酵素基質、酵素アンタゴニスト、酵素アゴニスト、酵素阻害剤又は受容体結合性化合物である場合、好ましくは非ペプチドであり、より好ましくは合成である。用語「非ペプチド」はペプチド結合、すなわち２つのアミノ酸残基間のアミド結合を含まない化合物を意味する。適切な酵素基質、アンタゴニスト、アゴニスト又は阻害剤には、グルコース及びフルオロデオキシグルコースのようなグルコース類似体、脂肪酸、又はエラスターゼ、アンジオテンシンＩＩ又はメタロプロテイナーゼ阻害剤がある。好ましい非ペプチドアンジオテンシンＩＩアンタゴニストはロサルタンである。適切な合成の受容体結合性化合物には、エストラジオール、エストロゲン、黄体ホルモン、プロゲステロン及びその他のステロイドホルモン、ドーパミンＤ−１又はＤ−２受容体のリガンド、又はトロパンのようなドーパミン輸送体、及びセロトニン受容体のためのリガンドがある。

ＢＴＭが酵素基質、酵素アンタゴニスト、酵素アゴニスト又は酵素阻害剤である場合、本発明の好ましいかかる生体ターゲティング分子は合成の薬物様小分子、すなわち医薬分子である。好ましいドーパミン輸送体リガンド、例えばトロパン、脂肪酸、ドーパミンＤ−２受容体リガンド、ベンズアミド、アンフェタミン、ベンジルグアニジン、イオマゼニル、ベンゾフラン（ＩＢＦ）又は馬尿酸。

ＢＴＭがペプチドである場合、好ましいかかるペプチドには以下のものがある。
・ソマトスタチン、オクトレオチド及び類似体、
・ＳＴ受容体に結合するペプチド（ここで、ＳＴは、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）その他の微生物により産生される熱安定性毒素をいう）、
・ボンベシン、
・血管作用性腸ペプチド、
・ニューロテンシン、
・ラミニン断片、例えば、ＹＩＧＳＲ、ＰＤＳＧＲ、ＩＫＶＡＶ、ＬＲＥ、及びＫＣＱＡＧＴＦＡＬＲＧＤＰＱＧ、
・白血球蓄積の標的部位に対するＮ−ホルミル走化性ペプチド、
・血小板因子４（ＰＦ４）及びその断片、
・例えば血管新生を標的とし得るＲＧＤ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）含有ペプチド［Ｒ．Ｐａｓｑｕａｌｉｎｉら．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． １９９７ Ｊｕｎ；１５（６）：５４２−６］、［Ｅ．Ｒｕｏｓｌａｈｔｉ，Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ． １９９７ Ｍａｙ；５１（５）：１４１３−７］、
・α₂−抗プラスミン、フィブロネクチン又はベータ−カゼイン、フィブリノーゲン又はトロンボスポンジンのペプチド断片。（α₂−抗プラスミン、フィブロネクチン、ベータ−カゼイン、フィブリノーゲン及びトロンボスポンジンのアミノ酸配列は、次の文献に見ることができる。ａ₂−抗プラスミン前駆体［Ｍ．Ｔｏｎｅら．，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ，１０２，１０３３（１９８７）］、ベータ−カゼイン［Ｌ．Ｈａｎｓｓｏｎら，Ｇｅｎｅ，１３９，１９３（１９９４）］、フィブロネクチン［Ａ．Ｇｕｔｍａｎら，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，２０７，１４５（１９９６）］、トロンボスポンジン−１前駆体［Ｖ．Ｄｉｘｉｔら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８３，５４４９（１９８６）］、Ｒ．Ｆ．Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５３，１９５（１９８４））。
・アンジオテンシンＩＩ Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ（Ｅ．Ｃ．Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９７９，Ｖｏｌ ２２，９，１０３８−１０４４）［Ｓａｒ、Ｉｌｅ］アンジオテンシンＩＩ：Ｓａｒ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ（Ｒ．Ｋ．Ｔｕｒｋｅｒら．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９７２，１７７，１２０３）のようなアンジオテンシンの基質又は阻害剤であるペプチド、
・アンジオテンシンＩ：Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ。

好ましいＢＴＭペプチドはＲＧＤペプチドである。より好ましいかかるＲＧＤペプチドは次式の断片を含む。

最も好ましいかかるＲＧＤペプチドは、ＢＴＭが次式（Ａ）のペプチドである場合である。

式中、Ｘ¹は−ＮＨ₂又は次式のものである。

ここで、ａは１〜１０の整数である。

式Ａで、ａは好ましくは１である。

ＢＴＭがペプチドである場合、そのペプチドの一方又は両方、好ましくは両方の末端に代謝阻害基（Ｍ^IG）が結合している。このように両方のペプチド末端が保護されていることはインビボイメージング用途にとって重要である。すなわち、そうでないと、急速な代謝が予期され、その結果としてＢＴＭペプチドに対する選択的な結合親和性が失われるからである。用語「代謝阻害基」（Ｍ^IG）は、酵素、殊にカルボキシペプチダーゼのようなペプチダーゼ、アミノ末端又はカルボキシ末端でのＢＴＭペプチドの代謝を阻害又は抑制する生体適合性の基を意味する。かかる基は特にインビボ用途で重要であって、当業者には周知であり、ペプチドアミン末端の場合次のものから適宜選択される。

Ｎ−アシル化基−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ^G、ここでアシル基−（Ｃ＝Ｏ）Ｒ^GはＣ_1-6アルキル、Ｃ_3-10アリール基から選択されるＲ^Gを有するか、又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成ブロックを含む。適切なＰＥＧ基は下記リンカー基（Ｌ¹）に対して記載するものである。好ましいかかるＰＥＧ基は式Ｂｉｏ１又はＢｉｏ２（下記）の生体修飾基である。好ましいかかるアミノ末端Ｍ^IG基はアセチル、ベンジルオキシカルボニル又はトリフルオロアセチル、最も好ましくはアセチルである。

ペプチドのカルボキシル末端に対して適切な代謝阻害基としては、カルボキサミド、ｔｅｒｔ−ブチルエステル、ベンジルエステル、シクロヘキシルエステル、アミノアルコール又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成ブロックがある。ＢＴＭペプチドのカルボキシ末端のアミノ酸残基に対して適切なＭ^IG基は、アミノ酸残基の末端アミンがＣ_1-4アルキル基、好ましくはメチル基でＮ−アルキル化されている場合である。好ましいかかるＭ^IG基はカルボキサミド又はＰＥＧであり、最も好ましいかかる基はカルボキサミドである。

ＢＴＭが酵素阻害剤である場合、好ましくはカスパーゼ−３阻害剤である。かかる阻害剤は当技術分野で公知である［Ｓｍｉｔｈら，Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ Ａｇｅｎｔｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，９，９５８−９６７（２００９）］。

好ましいカスパーゼ−３阻害剤は次式Ａのイサチン誘導体である。

式中、Ｒ³はフェニル、３−フルオロフェニル、２，４−ジフルオロフェニル、３，５−ジフルオロフェニル、テトラヒドロピラン、ジアジン又はトリアゾールから選択される基を含み、
Ｙ¹はＯ又はＯ^PGPであり、ここでＯ^PGPは保護ケトン基である。

ＢＴＭが式（Ａ）のイサチンである場合、Ｌ¹は好ましくはＣＨ₂であって、式（Ｉ）の化合物は次式ＩＡとなる。

ここで、Ｙ¹及びＲ³は式（Ａ）について定義した通りである。

式（Ａ）で、Ｒ³は好ましくは２，４−ジフルオロフェニルであり、すなわちイサチン誘導体はより好ましくは次式Ｂである。

従って、式（Ｉ）の化合物は次式（ＩＢ）となる。

式Ａ、Ｂ、ＩＡ及びＩＢで、Ｙ¹は好ましくはＯ^PGPである。好ましいかかる保護基はＹ¹が−Ｏ（ＣＨ₂）_fＯ−であるアセタールであり、ｆは２又は３である。ｆは好ましくは３である。その実施形態において、第１の態様の方法は好ましくはさらに次式（ＩＶＡ）の保護化合物の脱保護により次式（ＩＶＢ）の放射性フッ素化生成物を得ることを含む。

第１の態様の方法において、リンカー基Ｌ¹は存在するのが好ましい。Ｌ¹が１〜１０のアミノ酸残基のペプチド鎖を含む場合、アミノ酸残基は好ましくはグリシン、リジン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸又はセリンから選択される。Ｌ¹がＰＥＧ部分を含む場合、好ましくは式Ｂｉｏ１又はＢｉｏ２の単分散のＰＥＧ様構造のオリゴマー化により誘導される単位を含む。

式Ｂｉｏ１の１７−アミノ−５−オキソ−６−アザ−３，９，１２，１５−テトラオキサヘプタデカン酸
式中、ｐは１〜１０の整数である。或いは、式Ｂｉｏ２のプロピオン酸誘導体に基づくＰＥＧ様構造体を使用することができる。

式中、ｐは式Ｂｉｏ１について定義された通りであり、ｑは３〜１５の整数である。
式Ｂｉｏ２で、ｐは好ましくは１又は２であり、ｑは好ましくは５〜１２である。

リンカー基がＰＥＧ又はペプチド鎖を含まない場合、好ましいＬ¹基は２〜１０の原子、最も好ましくは２〜５の原子、殊に好ましくは２又は３の原子の−（Ａ）_m−部分を構成する結合した原子の骨格鎖を有する。市販されていないＢＴＭペプチドはＰ．Ｌｌｏｙｄ−Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｆ．Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ及びＥ．Ｇｉｒａｌｄ； Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｔｏ ｔｈｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，１９９７に記載されているように固相ペプチド合成により合成することができる。

第１の態様の工程（ＩＩ）のクリック反応は、適切な溶媒、例えばアセトニトリル、Ｃ_1-4アルキルアルコール、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、又はジメチルスルホキシド、又はこれらの任意の水性混合物中で、又は水中で行い得る。水性バッファーを４〜８、より好ましくは５〜７のｐＨ範囲で使用することができる。反応温度は好ましくは５〜１００℃、より好ましくは７５〜８５℃、最も好ましくは周囲温度（通例１５〜３７℃）である。クリック反応は、場合により、Ｍｅｌｄａｌ及びＴｏｒｎｏｅによって記載されているように［Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１０８，２９５２，Ｔａｂｌｅ １（２００８）］、有機塩基の存在下で行ってもよい。

ＢＴＭがペプチド又はタンパク質である式（Ｉ）の化合物は、ペプチド合成の標準的な方法、例えば、Ａｔｈｅｒｔｏｎ，Ｅ．及びＳｈｅｐｐａｒｄ，Ｒ．Ｃ．；Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ：Ｏｘｆｏｒｄ，１９８９に記載されているように、固相ペプチド合成によって調製することができる。式（Ｉ）の化合物におけるアルキン基の組み込みは、ペプチドのＮ又はＣ−末端の反応又はペプチド配列内に含有されるある種の他の官能基との反応によって達成することができ、その変更はベクターの結合特性に影響を及ぼさない。アルキン基は好ましくは安定なアミド結合の形成によって導入され、例えばペプチドのアミン官能基と活性化酸との反応或いはペプチドの酸官能基とアミン官能基との反応により形成され、ペプチド合成中又はその後に導入される。アルキン基を細胞、ウィルス、バクテリアのようなベクター中に組み込む方法はＨ．Ｃ．Ｋｏｌｂ及びＫ．Ｂ．Ｓｈａｒｐｌｅｓｓ，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ，Ｖｏｌ ８（２４），１１２８ Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２００３及びその引用文献に見ることができる。

アルキン誘導体はＧｌａｓｅｒ及びＡｒｓｔａｄにより記載されている［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，１８，９８９−９９３（２００７）］。また、同じ著者がアルキン基をペプチド中に導入する方法も記載している。式（ＩＢ）のアルキン官能化イサチンはＧｌａｓｅｒの方法により製造することができる［Ｂｉｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ，２１，６９４５−６９４９（２０１１）］。Ｓｍｉｔｈらはアルキン官能化イサチン前駆体の合成を提供しており、ここでイサチン化合物はカスパーゼ−３及びカスパーゼ−７に特異的である［Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，５１（２４），８０５７−８０６７（２００８）］。アルキン基でＢＴＭを官能化するためのさらなるアプローチがＮｗｅら［Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｔｈｅｒ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，２４（３），２８９−３０２（２００９）］及びＧｌａｓｅｒら［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，５２，４０７−４１４（２００９）］により記載されている。Ｄｅ Ｇｒａａｆら［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，２０（７），１２８１−１２９５（２００９）］は、アルキン側鎖を有する非天然のアミノ酸及びその後のクリックコンジュゲーションのためのペプチド又はタンパク質へのそれらの部位特異的な組み込みを記載している。実施例４（後記）は、チオールを含有するＢＴＭのチオール基と結合させてその後のクリック反応に適切なアルキン基を導入するのに使用することができる二官能性のアルキン−マレイミドを提供する。

式（ＩＩ）のアジドは、記載されているように、式Ｂｒ−（ＣＨ₂）_n−ＯＨの対応するブロモ−アルコールを対応するアジド−アルコールＮ₃−（ＣＨ₂）_n−ＯＨに変換した後トリエチルアミンの存在下でトルエンスルホニルクロリドを用いてトシレートに変換することにより得ることができる［Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．，３（２５），４０９１−４０９４（２００１）］。別の方法は下記式（反応１）に詳細を示すジトシレート化学種のアジドによるＳ_N２置換である。さらに別の方法はＰＥＧ化鎖についてＳｖｅｄｈｅｍら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００１，ｐ４４９４（反応２）に記載されている。

式中、ＤＣＭ＝ジクロロメタン、ＭｓＣｌ＝メタンスルホニルクロリド。
Ｄｅｍｋｏの方法を用いる式（ＩＩ）のＮ₃−（ＣＨ₂）_n−ＯＳＯ₂Ｒ¹アジドの合成は、容易なプロトコルと精製の容易さのために好ましい。

第１の態様の方法は、式（ＩＶ）の放射性フッ素化生成物が放射性医薬組成物として得られるように、無菌的に実施するのが好ましい。放射性医薬組成物は生体適合性の担体媒体と共に有効量の式（ＩＶ）の化合物を含む。

「生体適合性の担体媒体」は、１以上の薬学的に許容可能なアジュバント、賦形剤又は希釈剤からなる。好ましくは、組成物が生理学的に容認可能になり、すなわち毒性又は過度の不快を伴うことなく哺乳類の身体に投与することができるように、式（ＩＶ）の化合物が懸濁又は溶解される流体、殊に液体である。生体適合性の担体媒体は、適宜、無菌で発熱物質を含まない注射用の水のような注射可能な担体液体、生理的食塩水のような水溶液（有利なことに、最終の注射用生成物が等張であるか、又は低張でないように、平衡させることができる）、１以上の張度−調節性物質（例えば血漿カチオンと生体適合性の対イオンとの塩）、糖（例えばグルコース又はショ糖）、糖アルコール（例えばソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えばグリセロール）、又はその他の非イオン性ポリオール材料（例えばポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液である。生体適合性の担体媒体はまた、エタノールのような生体適合性の有機溶媒からなってもよい。かかる有機溶媒はより親油性の化合物又は製剤を可溶化するのに有用である。好ましくは、生体適合性の担体媒体は発熱物質を含まない注射用水、等張の生理的食塩水又は水性エタノール溶液である。静脈内注射用の生体適合性の担体媒体のｐＨは４．０〜１０．５の範囲が適切である。

生成物が放射性医薬組成物である場合、第１の態様の方法は、目的とする無菌で非発熱性の放射性医薬品生成物を得るために無菌の製造条件下で行う。従って、装置の重要な構成要素、殊に式（ＩＶ）の生成物と接触するあらゆる部分（例えばバイアル及び移動配管）が無菌であるのが好ましい。構成要素及び試薬は、当技術分野で公知の方法、例えば、滅菌ろ過、例えばガンマ線照射、オートクレーブ処理、乾式加熱又は化学的処理（例えばエチレンオキシド）を用いる最終滅菌によって滅菌することができる。非放射性構成要素は予め滅菌しておいて、放射性医薬品生成物に対して行う必要がある取扱い操作の数を最小にするのが好ましい。しかしながら、用心のため、少なくとも最終の滅菌ろ過工程を含むのが好ましい。

式（Ｉ）及び（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物、並びに任意のクリック触媒及びその他のかかる試薬及び溶媒は、各々、密封容器を含む適切なバイアル又は容器に入れて供給され、この密封容器は、無菌完全性及び／又は放射能安全性、並びに場合により不活性なヘッドスペースガス（例えば窒素又はアルゴン）の維持を可能にする一方で、注射器又はカニューレによる溶液の添加及び抜き出しを可能にする。好ましいかかる容器は隔膜密封バイアルであり、気密な蓋がオーバーシール（通例アルミニウム製）でクリンプされている。この蓋は、無菌完全性を維持したままでの皮下注射針による単一又は複数の穿刺に適している（例えばクリンプ式セプタム封止蓋）。かかる容器は、蓋が、所望の場合（例えば、ヘッドスペースガスを変更するか又は溶液のガスを抜くため）真空に耐えることができ、また圧力の低下のような圧力変化に耐えることができ、一方では酸素又は水蒸気のような外部の大気ガスの進入を許容することがないという追加の利点を有する。反応容器は適宜かかる容器、及びその好ましい実施形態から選択される。反応容器は好ましくは生体適合性のプラスチック（例えばＰＥＥＫ）で作成される。

第１の態様の放射性医薬組成物方法は好ましくは自動合成装置を用いて行われる。用語「自動合成装置」は、Ｓａｔｙａｍｕｒｔｈｙら［Ｃｌｉｎ．Ｐｏｓｉｔｒ．Ｉｍａｇ．，２（５），２３３−２５３（１９９９）］により記載されているように、単位操作の原理に基づいて自動化モジュールを意味する。用語「単位操作」は、複雑なプロセスが、ある範囲の材料に応用することができる一連の簡単な操作又は反応に分解されていることを意味する。かかる自動合成装置は、殊に放射性医薬品生成物が所望の場合本発明の方法にとって好ましく、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＣＴＩ Ｉｎｃ、Ｉｏｎ Ｂｅａｍ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ｓ．Ａ．（Ｃｈｅｍｉｎ ｄｕ Ｃｙｃｌｏｔｒｏｎ ３，Ｂ−１３４８ Ｌｏｕｖａｉｎ−Ｌａ−Ｎｅｕｖｅ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）、Ｒａｙｔｅｓｔ（Ｇｅｒｍａｎｙ）及びＢｉｏｓｃａｎ（ＵＳＡ）を始めとする幾つかの供給業者から市販されている［Ｓａｔｙａｍｕｒｔｈｙら、上掲］。

工業用の自動化合成装置はまた、放射性医薬品の製造の結果として生じた液体の放射性廃棄物のための適切な容器も提供する。自動合成装置は、適切に設定された放射性作業セルで使用するように設計されているので、通例放射線遮蔽を備えていない。放射性作業セルは、オペレーターを潜在的な放射線量から保護するのに適した放射線遮蔽、並びに化学的及び／又は放射性の蒸気を除去するための換気装置を提供する。

本発明の好ましい自動合成装置は、所与のバッチの放射性医薬品の製造を実施するのに必要な全ての試薬、反応容器及び装置を含む使い捨て式又は一回使用のカセットを含むものである。かかるカセットは第５の態様（下記）に記載される。このようなカセットは、自動合成装置が、単にカセットを交換することによって、交差汚染のリスクを最小にして、様々な異なる放射性医薬品を作成することができるという柔軟性を有することを意味する。カセットアプローチはまた、単純化されたセットアップ、従ってオペレーターエラーのリスクの低下、改良されたＧＭＰ（Ｇｏｏｄ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ Ｐｒａｃｔｉｃｅ）コンプライアンス、複数のトレーサー能力、生産運転間の迅速な変更、カセット及び試薬の予め実施された自動診断検査、化学試薬対実施される合成の自動化されたバーコード相互チェック、試薬の追跡可能性、単回使用、従って交差汚染のリスクがないこと、改竄及び乱用防止という利点を有する。

第２の態様において、本発明は、式（ＩＩＩ）のコンジュゲートの製造方法を提供する。

この方法は、式（Ｉ）の化合物と式（ＩＩ）のアジドのクリック反応を含む。

式中、ＢＴＭ、Ｌ¹、ｎ及びＲ¹は第１の態様（上記）で定義した通りである。

第２の態様におけるＢＴＭ、Ｌ¹、ｎ及びＲ¹の好ましい実施形態は第１の態様（上記）で定義した通りである。

或いは、式（ＩＩＩ）のコンジュゲートは、アジド−アルコールＮ₃−（ＣＨ₂）_n−ＯＨのクリック反応に続き、スルホネートエステルの形成によって製造することができよう。この経路には幾つかの不利がある。先ず、スルホネートエステルの形成はＢＴＭの存在下で行わなければならず、副反応のリスクがあり、ＢＴＭの活性が減じられ、失われる可能性がある。次に、アジド−アルコール（ｎ＝１〜４）は潜在的に爆発性である小分子の化学種である。第３に、かかるアジド−アルコール化学種は発色団を欠き、従ってＴＬＣのような一般的な有機化学実験技術によって可視化することはより困難である。このため、生成物の精製には有害な影響がある。

第３の態様において、本発明は、第１の態様において定義された式（ＩＩＩ）のコンジュゲートの、第１の態様の放射性フッ素化方法における使用を提供する。

第３の態様における式（ＩＩＩ）のコンジュゲートの好ましい実施形態は第１の態様（上記）で定義されている通りである。

第４の態様において、本発明は、第１の態様において定義された式（ＩＩ）のアジドの、第１の態様の放射性フッ素化方法、又は第２の態様の製造方法における使用を提供する。第４の態様における式（ＩＩ）のアジドの好ましい実施形態は第１の態様（上記）で定義されている通りである。

第５の態様において、本発明は、第１の態様の好ましい自動化合成装置放射性医薬組成物製造方法で使用するのに適した一回使用の無菌カセットを提供し、カセットは、
（ｉ）第１の態様で定義された式（Ｉ）の化合物及び式（ＩＩ）のアジドの別個の供給、又は
（ｉｉ）第１の態様で定義された式（ＩＩＩ）のコンジュゲート
を含む。

第５の態様における式（Ｉ）の化合物、式（ＩＩ）のアジド及び式（ＩＩＩ）のコンジュゲートの好ましい実施形態は第１の態様（上記）で定義されている通りである。第５の態様において、好ましくは式（ＩＩＩ）のコンジュゲートのＢＴＭは第１の態様で定義された式（Ａ）又は（Ｂ）のイサチン誘導体からなることはない。

用語「カセット」は、自動化合成装置（上記定義）に着脱可能かつ交換可能に嵌合するように設計された装置の１つの部品であり、合成装置の可動部品の機械的な移動がカセットの操作をカセットの外部、すなわち外から制御するようになっていることを意味する。適切なカセットは線状に並んだバルブを含んでおり、各々、逆隔膜密封バイアルの針穿刺により、又は気密な結合接合部により、試薬又はバイアルを取り付けることができる口に連結される。各バルブは、自動合成装置の対応する可動アームと接続する雌雄接合部を有する。こうして、カセットが自動合成装置に取り付けられているとき、アームの外からの回転がバルブの開閉を制御する。自動合成装置の追加の可動部品が、注射器のプランジャーチップ上に留められ、従って注射器のバレルを上下するように設計されている。

カセットは汎用性であり、通例、試薬を取り付けることができる幾つかの位置、及び試薬の注射器バイアル又はクロマトグラフィーカートリッジ（例えばＳＰＥ）の取り付けに適した幾つかの位置を有する。カセットは常に反応容器を含んでいる。かかる反応容器は体積が好ましくは１〜１０ｃｍ³、最も好ましくは２〜５ｃｍ³であり、カセットの３以上の口が接続されるように構成されていて、カセットの様々な口から試薬又は溶媒を移すことができるようになっている。好ましくは、カセットは線状に並んだ１５〜４０、最も好ましくは２０〜３０のバルブを有しており、２５が殊に好ましい。カセットのバルブは好ましくは各々同じであり、最も好ましくは３方バルブである。本発明のカセットは放射性医薬品の製造に適するように設計されており、従って医薬グレードであり、理想的には放射線分解に耐性でもある材料から製造される。

第６の態様において、本発明は、第１の態様の放射性フッ素化方法を実施するための自動合成装置の使用を提供する。第６の態様における自動合成装置、及び放射性フッ素化方法の好ましい実施形態は第１の態様（上記）で記載した通りである。第７の態様の自動合成装置は好ましくは第６の態様（上記）で説明したカセットを含む。

以下の実施例により本発明を例証する。実施例１は、アルキン官能化イサチンを用いたトシル−アジド誘導体のクリック環化による本発明の化合物２の合成を提供する。実施例２は、カセットの構成又はＦａｓｔＬａｂ（商標）自動合成装置を用いる化合物４の自動化された合成を提供する。実施例３は、本発明の化合物４の自動化された合成を提供する。実施例４は、アルキン基を導入するための、ＢＴＭのチオール基との共有結合に適した二官能性のアルキン−マレイミドの合成を提供する。

略号
ＢＰＤＳ：二ナトリウム４，４’−（１，１０−フェナントロリン−４，７−ジイル）ジベンゼンスルホネート
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＩＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＨＰＬＣ：高性能液体クロマトグラフィー
ＭｅＣＮ：アセトニトリル
ＰＡＡ：過酢酸
ＲＣＰ：放射化学純度
ＲＴ：室温
ｔ_R：保持時間。

実施例１
化合物２の合成
化合物１はＧｌａｓｅｒ［Ｂｉｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ，２１，６９４５−６９４９（２０１１）］及びＳｍｉｔｈ［Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，５１，８０５７−８０６７（２００８）］の方法により得た。トルエン−４−スルホン酸−２−アジドエチルエステルはＤｅｍｋｏ及びＳｈａｒｐｌｅｓｓ［Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．，３（２５），４０９１−４０９４（２００１）］の方法により得た。

ＤＭＦ（２ｍＬ）中の化合物１（５２ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）の溶液に、撹拌しながら、水（０．２ｍＬ）中の硫酸銅（１３ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）、続いて水（０．２ｍＬ）中のアスコルビン酸（１８ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）、次いで乾燥ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中のトルエン−４−スルホン酸−２−アジドエチルエステル（２９ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を加え、混合物をアルゴン下で撹拌し続けた。４時間後、ＴＬＣが反応の完了を示し、混合物を水（１０ｍＬ）上に注ぎ入れ、ＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出し、Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥した。クロマトグラフィー（４：１ 酢酸エチル／ヘキサン）により、第２の画分（第１の画分は未反応のトルエン−４−スルホン酸−２−アジドエチルエステル）として無色の油１が得られ、これはさらに残留する溶媒（６１ｍｇ、８０％）を除去すると白色の泡になった。
¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ₃）：δ ７．８８（ｄ、Ｊ＝１．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．８１（ｄｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．６５（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、２Ｈ）、７．６２（ｓ、１Ｈ）、７．２８（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、２Ｈ）、７．２１（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．０３−６．９６（ｍ、１Ｈ）、６．８８−６．７７（ｍ、２Ｈ）、４．９９−４．９６（ｍ、２Ｈ）、４．９２（ｓ、２Ｈ）、４．６０（ｔ、Ｊ＝５．２Ｈｚ、２Ｈ）、４．３６（ｔ、Ｊ＝５．２Ｈｚ、２Ｈ）、４．３０−４．２６（ｍ、１Ｈ）、４．０２−３．８８（ｍ、４Ｈ）、３．５３−３．４７（ｍ、１Ｈ）、３．１０−３．０３（ｍ、１Ｈ）、２．４３（ｓ、３Ｈ）、２．４１−２．３７（ｍ、１Ｈ）、２．０６−１．９３（ｍ、２Ｈ）、１．７５−１．６３（ｍ、３Ｈ）。

実施例２
化合物４の自動合成のためのカセット構造
放射性合成のための試薬を、図１に示したような小さい密封バイアル又は密封ボトルに入れた。試薬を調製し、表１に示すように配置した。これらの試薬を標準的な［¹⁸Ｆ］ＦＡＳＴｌａｂ（商標）合成マニホルド（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ）中に挿入し、シリコーンチューブを介して接続した。ｔＣ１８ Ｓｅｐ−Ｐａｋカートリッジ（Ｗａｔｅｒｓ）を２ｍＬの１：１エタノール：水で、続いて１０ｍＬの水で予備調節し、１０ｍＬの空気で乾燥した。

実施例３
化合物４の自動合成
濃縮¹⁸Ｏ水中の担体を加えてない［¹⁸Ｆ］フッ化物水溶液（１．５ｍＬ、４０ＧＢｑ〜５６ＧＢｑ）を標的のヘリウム過圧によりＴｅｆｌｏｎラインを通してサイクロトロンから直接ＦａｓｔＬａｂ（商標）合成装置に送り込んだ。活性はＷａｔｅｒｓ ＱＭＡ−カーボネートＳｅｐ−Ｐａｋ ＳＰＥカートリッジにトラップされ、［¹⁸Ｏ］Ｈ₂Ｏは後の回収のために別個のバイアルに捕獲された。７００μＬの溶離剤溶液（７．５ｍｇのＫｒｙｐｔｏｆｉｘ ２．２．２、７ｍｇの炭酸水素カリウム、５６０μＬのアセトニトリル、１４０μＬのＨ₂Ｏ）を注射器１で採り、ＣＯＣ反応器中に活性を溶離するために使用した。［¹⁸Ｆ］フッ化物溶液を真空（〜１０００ｍｂａｒ）と窒素流（１２００ｍｂａｒ）の組合せにより１２０℃の温度で８分かけて蒸発乾固させて、Ｋａｒｌ Ｆｉｓｈｅｒ滴定により測定して２５０〜３７５ｐｐｍの水を含有するフッ化物／Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ ２．２．２／カーボネート混合物を得た。

蒸発後、１ｍＬの無水アセトニトリル中の化合物２（２．８５ｍｇ、３．７５μｍｏｌ）を、中央配管接続を介して反応器中に加え、標識反応を密封反応容器中１１０℃で１２．５分行って、化合物３を７８±３％の収率（分析）で得た。アセタール保護基の除去は、１．２ｍＬの４Ｎ ＨＣｌの添加及び１１０℃で１５分の加熱によって定量的に達成された。７０℃に冷却し、１．８ｍＬの３Ｎ酢酸ナトリウムの添加によって反応溶液を中和した。

Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｕｌｔｒａｃａｒｂ ＯＤＳ（３０）２５０×１０ｍｍ（７μｍ）ＨＰＬＣカラムを流量５ｍＬ／ｍｉｎの０．０５Ｍ酢酸アンモニウムとエタノール（５８：４２ ｖ／ｖ）の均一濃度の移動相を用いて化合物４を精製した。試料の注入、生成物の単離及びデータ収集は内部のＭｕｌｔｉｓｔｒｅａｍ ＨＰＬＣシステム及び特注のソフトウェアパッケージ（Ｈａｍｍｅｒｓｍｉｔｈ Ｉｍａｎｅｔ Ｌｔｄ．，ＵＫ）を用いて行った。

調製用のＨＰＬＣ精製の後、単離生成物をＦＡＳＴｌａｂカセット中に入れた水の１００ｍＬのボトルに移して１０倍に希釈した。窒素流により均質化の後、希釈生成物をｔＣ１８ Ｓｅｐ−Ｐａｋカートリッジ（Ｗａｔｅｒｓ）にトラップした。カートリッジを窒素流中で乾燥し、生成物を２ｍＬの１：１エタノール：水混合物により、１０ｍＬの０．９％注射用生理的食塩水を含有する無菌の生成物収集バイアル中に溶離した。ヘッドスペースＧＣ残留溶媒分析の後、エタノール以外の溶媒は検出されなかった（８〜９．２％ｗ／ｖ）。

実施例４
マレイミド−アルキン二官能性リンカー（５）の合成

Ｎ−［β−マレイミドプロピルオキシ］スクシンイミドエステル（５０ｍｇ、１．２５当量）を１．０ｍＬの乾燥ＤＭＦに溶解した。３−ブチン−１−アミン塩酸塩（１６ｍｇ、１．０当量）を０．５ｍＬの乾燥ＤＭＦ及び２６μＬのＤＩＥＡに溶解した。このアミン溶液をスクシンイミドエステルに、エステル溶液を氷浴中に保ったまま滴下して加えた。混合物を０℃で１０分撹拌した。溶液を室温まで暖め、１８時間撹拌した。溶媒を真空中で蒸発させ、残渣を５ｍＬのＣＨ₂Ｃｌ₂に溶解した。有機溶液を塩水（３×５ｍＬ）で抽出し、ＭｇＳＯ₄上で乾燥した。溶媒を減圧下で除去し、粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ、ＭｅＯＨ／ＣＨ₂Ｃｌ₂）を用いて精製した。試料を最小量のＣＨ₂Ｃｌ₂（約２ｍＬ）に溶解することでグリースから生成物（５）を精製し、続いてヘキサンで三回洗浄した。生成物（５）は綿毛状の白色固体として沈殿した。生成物の特性決定は、¹Ｈ−ＮＭＲを用いて達成した。収率：８．２ｍｇ（２５％）。
¹Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ₃）：δ ２．０２（ｓ、１Ｈ）、２．４１（ｔ、Ｊ＝５Ｈｚ、２Ｈ）、２．５７（ｔ、Ｊ＝５Ｈｚ、２Ｈ）、３．４２（ｄｔ、Ｊ＝５Ｈｚ、２Ｈ）、３．８８（ｔ、Ｊ＝５Ｈｚ）、５．９０（ｂｓ、１Ｈ）、６．７３（ｓ、２Ｈ）。

Claims (18)

1. 生体ターゲティング部分の¹⁸Ｆ−放射性フッ素化方法であって、式（Ｉ）の化合物と式（ＩＩ）のアジドとのクリック反応により、式（ＩＩＩ）のコンジュゲートを得、式（ＩＩＩ）のコンジュゲートと［¹⁸Ｆ］−フッ化物との反応により、式（ＩＶ）の放射性フッ素化生成物を得ることを含む方法。
   

   

   

   

   式中、
   Ｌ¹は、存在しても存在しなくてもよいリンカー基であり、
   ｎは、２、３又は４であり、
   Ｒ¹は、Ｃ_1-4アルキル、Ｃ_1-4フルオロアルキル又は−Ｃ₆Ｈ₄−Ｒ²であり、Ｒ²はＨ、ＣＨ₃、Ｂｒ又はＮＯ₂から選択され、
   ＢＴＭは、場合により１以上の保護基で保護されていてもよい生体ターゲティング部分である。
2. Ｌ¹が式−（Ａ）_m−の基であり、式中、各Ａは独立に−ＣＲ₂−、−ＣＲ＝ＣＲ−、−ＣoＣ−、−ＣＲ₂ＣＯ₂−、−ＣＯ₂ＣＲ₂−，−ＮＲＣＯ−、−ＣＯＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ−、−ＳＯ₂ＮＲ−、−ＮＲＳＯ₂−、−ＣＲ₂ＯＣＲ₂−、−ＣＲ₂ＳＣＲ₂−、−ＣＲ₂ＮＲＣＲ₂−、Ｃ_4-8シクロヘテロアルキレン基、Ｃ_4-8シクロアルキレン基、Ｃ_5-12アリーレン基、又はＣ_3-12ヘテロアリーレン基、アミノ酸、糖又は単分散のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成ブロックであり、各Ｒは独立にＨ、Ｃ_1-4アルキル、Ｃ_2-4アルケニル、Ｃ_2-4アルキニル、Ｃ_1-4アルコキシアルキル又はＣ_1-4ヒドロキシアルキルから選択され、ｍは値１〜２０の整数である、請求項１記載の方法。
3. 工程（ｉｉ）のクリック反応を、銅を含むクリック触媒の存在下で実施する、請求項１又は請求項２記載の方法。
4. 式（Ｉ）の化合物が１以上の保護基で保護ＢＴＭの１以上の官能基を有し、保護基を工程（ｉｉｉ）の後に除去する、請求項１乃至請求項３のいずれか１項記載の方法。
5. ＢＴＭが単一のアミノ酸、３〜８０量体ペプチド、酵素基質、酵素アンタゴニスト、酵素アゴニスト、酵素阻害剤又は受容体結合性化合物である、請求項１乃至請求項４のいずれか１項記載の方法。
6. ＢＴＭがＲＧＤペプチドである、請求項５記載の方法。
7. ＢＴＭがカスパーゼ−３阻害剤である、請求項５記載の方法。
8. カスパーゼ−３阻害剤が式Ａのイサチン誘導体であり、Ｌ¹がＣＨ₂であって、式（Ｉ）の化合物が式ＩＡのものである、請求項７記載の方法。
   

   

   

   式中、
   Ｒ³は、フェニル、３−フルオロフェニル、２，４−ジフルオロフェニル、３，５−ジフルオロフェニル、テトラヒドロピラン、ジアジン又はトリアゾールから選択される基を含み、
   Ｙ¹は、Ｏ又はＯ^PGPであり、ここでＯ^PGPは保護ケトン基である。
9. イサチン誘導体が式Ｂのものであって、式（Ｉ）の化合物が式（ＩＢ）のものである、請求項８記載の方法。
   

   

   
10. Ｙ¹が−Ｏ（ＣＨ₂）_fＯ−であり、ｆが２又は３であり、方法がさらに式（ＩＶＡ）の保護化合物を脱保護して式（ＩＶＢ）の放射性フッ素化生成物を得ることを含む、請求項９記載の方法。
    

    
11. 無菌的に実施して、式（ＩＶ）、（ＩＶＡ）又は（ＩＶＢ）の放射性フッ素化生成物を放射性医薬組成物として得る、請求項１乃至請求項９のいずれか１項記載の方法。
12. 自動合成装置を用いて実施する、請求項１１記載の方法。
13. 式（ＩＩＩ）のコンジュゲートの製造方法であって、式（Ｉ）の化合物と式（ＩＩ）のアジドのクリック反応を含む、方法。
    

    

    

    式中、ＢＴＭ、Ｌ¹、ｎ及びＲ¹は請求項１乃至請求項９のいずれかで定義されている通りである。
14. 請求項１で定義されている式（ＩＩＩ）のコンジュゲートの、請求項１乃至請求項１２のいずれか１項記載の放射性フッ素化方法における使用。
15. 請求項１で定義されている式（ＩＩ）のアジドの、請求項１乃至請求項１２のいずれか１項記載の放射性フッ素化方法又は請求項１３記載の製造方法における使用。
16. 請求項１１記載の自動合成方法に使用するのに適した一回使用の無菌カセットであって、
    （ｉ）請求項１乃至請求項１０のいずれか１項記載の式（Ｉ）の化合物及び式（ＩＩ）のアジドの別々の供給器、又は
    （ｉｉ）請求項１乃至請求項１０のいずれか１項記載の式（ＩＩＩ）のコンジュゲート
    を含む、カセット。
17. 自動合成装置の、請求項１乃至請求項１１のいずれか１項記載の放射性フッ素化方法を実施するための使用。
18. 合成装置が請求項１６記載のカセットを含む、請求項１８記載の使用。

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