JP2017001995A - 凍結乾燥製剤 - Google Patents

Abstract

【課題】保存安定性が優れ、水への再構成時間が短い凍結乾燥製剤を提供すること。【解決手段】ボルテゾミブと、アルギニンと、酸および／またはその塩とを含む凍結乾燥製剤。【選択図】なし

Description

本発明は、凍結乾燥製剤に関する。詳しくは、本発明は、ボルテゾミブを含有する安定で容易に再構成される凍結乾燥製剤に関する。

ボルテゾミブは、下式：
で表され、プロテアソームを選択的かつ可逆的に阻害して抗腫瘍作用を発揮する分子標的薬としてミレニアム・ファーマシューティカルズによって開発された抗悪性腫瘍剤である（特許文献１）。ボルテゾミブは２００３年に米国で多発性骨髄腫の適応で承認され、その後、日本、英国、ドイツをはじめ世界１００ケ国以上で承認されて、ベルケイド（登録商標）の販売名で現在販売されている。

ボルテゾミブは、アルキルボロン酸の構造を有するために安定性に問題があり、また水への溶解性も高くないとの問題がある。そこで、従来より、安定であり水に容易に再構成されるボルテゾミブの凍結乾燥製剤の研究がなされている。
特許文献２には、ボルテゾミブをマンニトールと共に凍結乾燥することで凍結乾燥した化合物を製造する方法、同製造方法で得られる組成物、および同製造方法で得られるボルテゾミブのマンニトールエステルが記載されている。アルキルボロン酸はアルコール共存下、エステルとの平衡状態を取り、水が少なくなればエステルになり、水が多くなるとエステルが加水分解されてアルキルボロン酸がフリー化されるとの性質を有している。特許文献２の発明はこの性質を利用したものであり、市販のベルケイド（登録商標）凍結乾燥製剤に応用されている。しかし、後述の試験例からも分かる通り、特許文献２で得られる凍結乾燥製剤は、保存安定性および水への再構成時間の点で十分に満足できるものではない。
特許文献３には、シクロデキストリンを添加することを特徴とする、ボルテゾミブまたはその誘導体の凍結乾燥製剤が開示されている。実施例１８にはボルテゾミブの凍結乾燥製剤の保存安定性として、４０℃／７５％ＲＨで６月間後のＨＰＬＣの純度が８９．３％まで低下したことが記載されている。

特許文献４には、ボルテゾミブとトロメタミンを含む凍結乾燥製剤が開示されている。表２〜５には凍結乾燥製剤の保存安定性および再構成時間が記載されており、実施例ＩＶの凍結乾燥製剤は、４０℃／７５％ＲＨで２月間後で総類縁物質が２．９８％と非常に増加しており、最初の製剤の再構成時間は４８秒であった。
特許文献５には、ボルテゾミブにグリシン、ホウ酸またはデキストリンを加えた凍結乾燥製剤が記載されている。［００６６］には、グリシンとホウ酸を添加した凍結乾燥製剤では、５５℃で３週間後の保存安定性試験で不純物Ａ、ＢとＣの合計が０．８〜１．２１％であったことが記載されている。また、表５には、グリシンを含む凍結乾燥製剤の再構成時間が３０〜３００秒であったことが記載されている。特許文献５には、アルギニンについては記載されていない。
特許文献６には、ボルテゾミブとアミノ酸を含む凍結乾燥製剤が開示されている。アミノ酸としては、水酸基またはメルカプト基を有するアミノ酸が好ましいと記載され、実施例にはセリン、スレオニンまたはシステインを含む凍結乾燥製剤が好ましい例として記載されている。他方、グリシン、フェニルアラニンまたはチロシンを含むものは、溶液ができないか、凍結乾燥後の再構成ができないことが記載されている。特許文献６には、アルギニンについては記載されていない。
以上の通り、従来知られているボルテゾミブの凍結乾燥製剤は、保存安定性および水への再構成時間において、依然として十分ではなかった。

特許第３７１７９３４号 特許第４１６２４９１号 特表２０１２−５２２７９５ 特許第５６８９８１６号 ＷＯ２０１２／０４７８４５ ＣＮ１０３１４２５０９

本発明が解決しようとする課題は、従来知られているボルテゾミブの凍結乾燥製剤の問題を解決して、保存安定性が優れ、水への再構成時間が短い凍結乾燥製剤を提供することにある。

本発明者らは、鋭意検討した結果、意外にも、ボルテゾミブにアルギニンと酸および／またはその塩とを加えて凍結乾燥して得られた製剤は、安定性が極めて向上し、また水への再構成も容易に進行することを見出して、本発明を完成させるに至った。
即ち本発明は、以下の通りである。

［１］ ボルテゾミブと、アルギニンと、酸および／またはその塩とを含む凍結乾燥製剤。
［２］ 前記酸がクエン酸である、［１］に記載の凍結乾燥製剤。
［３］ ボルテゾミブとアルギニンの重量比が１：３〜１：１５である、［１］または［２］に記載の凍結乾燥製剤。
［４］ ボルテゾミブ３ｍｇあたり２．５ｍＬの生理食塩水に溶解したとき、その溶液のｐＨが３．５〜７である、［１］〜［３］のいずれかに記載の凍結乾燥製剤。
［５］ アルギニンと酸および／またはその塩との重量比が１：０．３〜１：１である、［１］〜［４］のいずれかに記載の凍結乾燥製剤。
［６］ ボルテゾミブと、アルギニンと、酸および／またはその塩とを含む溶液を凍結乾燥する工程を含む、凍結乾燥製剤の製造方法。

本発明の凍結乾燥製剤は、保存安定性が優れており、水への再構成時間が短い。

以下、本発明を詳細に説明する。
１．凍結乾燥製剤
本発明の凍結乾燥製剤は、ボルテゾミブと、アルギニンと、酸および／またはその塩とを含む凍結乾燥製剤である。
「アルギニン」としては、Ｌ体、Ｄ体、ラセミ体のいずれのものでも用いることができるが、好ましくはＬ体が挙げられる。また、アルギニンは塩の形態であっても良い。当該塩としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩等が挙げられる。また、アルギニンおよびその塩には、それらの水和物も含まれる。
アルギニンの添加量としては、ボルテゾミブとアルギニンの重量比が、例えば１：３〜１：１５となる量が挙げられ、好ましくは１：５〜１：１０となる量が挙げられ、より好ましくは１：６〜１：９となる量が挙げられる。アルギニンを添加することで、ボルテゾミブの保存安定性が向上し、水への再構成時間が短くなる。

「酸」としては、例えば、クエン酸、シュウ酸、コハク酸、リンゴ酸、乳酸、マロン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、アスコルビン酸、酸性アミノ酸（グルタミン酸、システイン、アスパラギン酸等）、酢酸、ギ酸等の有機酸、および塩酸、硫酸、リン酸、硝酸、亜硫酸等の無機酸が挙げられる。好ましい酸としては、有機酸が挙げられ、例えばクエン酸、シュウ酸、コハク酸、リンゴ酸、乳酸、マロン酸等が挙げられる。「酸」の塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等のアルカリ土類塩、アミン塩、塩基性アミノ酸の塩等が挙げられる。また、酸およびその塩には、それらの水和物も含まれる。
酸の含有量としては、例えば、クエン酸で示せば、アルギニンと酸および／またはその塩との重量比が、例えば１：０．３〜１：１となる量が挙げられ、好ましくは１：０．４〜１：０．９となる量が挙げられ、より好ましくは１：０．４５〜１：０．８となる量が挙げられる。酸を添加することで、アルギニンの塩基性を中和して、後述の適切なｐＨにすると共に、ボルテゾミブの保存安定性が向上し、水への再構成時間が短くなる。

本発明の凍結乾燥製剤は、ボルテゾミブ３ｍｇあたり２．５ｍＬの生理食塩水に溶解して調製される注射剤のｐＨが、例えば３．５〜７であるものが好ましい。より好ましいｐＨは４〜７である。
上記のｐＨに調整するために、さらに「ｐＨ調整剤」を添加することもできる。当該ｐＨ調整剤としては、例えば、上記の酸、および水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の水酸化アルカリ、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等の炭酸アルカリ、水酸化マグネシウム、水酸化カルシウム等の水酸化アルカリ土類、アミン、塩基性アミノ酸等が挙げられる。
本発明の凍結乾燥製剤には、必要に応じて、さらに等張化剤、添加剤または界面活性剤等を加えることもできる。
等張化剤または添加剤としては、例えば、塩化ナトリウム、マンニトール、ラクトース、スクロース、グリシン、マルトース、トレハロース、シクロデキストリン、デキストラン、イノシトール、ソルビトール、アルブミン、ラクトビオン酸カルシウム等が挙げられる。
界面活性剤としては、例えば、ポリビニルピロリドン、ポリソルベート、ソルビタンエステル、ポリエチレングリコールエーテル、飽和ポリグリコール化グリセリド、ポリエチレングリコールの脂肪酸エステル、ポリエチレン／プロピレングリコール共重合体、ポリエチレングリコールステアラート、ｄ−α−トコフェリルポリエチレングリコールスクシナート等が挙げられる。

２．凍結乾燥製剤の製造
本発明の凍結乾燥製剤は、例えば以下のようにして製造することができる。
ボルテゾミブを適量の有機溶媒に溶解させる。他方、アルギニンと酸および／またはその塩とを水に溶解させる。得られた２つの溶液を混合して、混合溶液の容量を水で一定量に調整した後、滅菌ろ過をして、一定量のボルテゾミブとなるようにバイアルに充填して、凍結乾燥を行うことで、本発明の凍結乾燥製剤を得る。
ボルテゾミブを溶解させる有機溶媒としては、例えば、水と混和性があり、凍結乾燥で除去される有機溶媒が挙げられる。具体的には、ｔ−ブタノール、メタノール、エタノール、２−プロパノール等のアルコール、アセトニトリル、１，４−ジオキサン、テトラヒドロフラン等のエーテル、アセトン、２−ブタノン、メチルイソブチルケトン等のケトン等が挙げられる。好ましい有機溶媒としては、例えばアルコールが挙げられ、より好ましくはｔ−ブタノール、メタノール、エタノール、２−プロパノール等が挙げられる。有機溶媒の使用量としては、ボルテゾミブが溶解するに十分な量であって、その後の凍結乾燥に過剰な負担をかけない程度の量が挙げられる。具体的な有機溶媒の量としては、ボルテゾミブ３ｍｇに対して、例えば０．０３〜３ｍＬが挙げられ、好ましくは、０．１〜１ｍＬが挙げられる。
ボルテゾミブの有機溶媒への溶解は、例えば１０〜３０℃で行われ、好ましくは１５〜２５℃で行われる。

アルギニンと酸および／またはその塩を溶解させる水としては、医療に用いられる水が挙げられ、例えば、注射用水が用いられる。当該水の量としては、アルギニンと酸および／またはその塩の合計１重量部に対して、例えば５〜５０重量部が挙げられ、好ましくは１０〜３０重量部が挙げられる。アルギニンと酸および／またはその塩の溶解は、例えば１０〜３０℃で行われ、好ましくは１５〜２５℃で行われる。

上記２つの溶液を混合して、混合溶液の容量を水で一定量に調整した後、好適には滅菌ろ過を行う。滅菌ろ過は、無菌ろ過膜を用いて、例えば０．２２ミクロンフィルターを用いて実施することができる。
続いて、滅菌ろ過された溶液を一定量のボルテゾミブとなるようにバイアルに充填して、凍結乾燥を行う。凍結乾燥は、例えば、−２５〜−５０℃で凍結させて、減圧下、乾燥することができる。圧力としては、例えば、真空度３〜１０Ｐａ等が挙げられる。

３．凍結乾燥製剤の保存安定性／再構成時間
以下の構造式で示される不純物が、製剤の保存安定性試験中で増加が確認された。
本明細書の試験例では、上記の不純物Ａ、Ｂ、ＤおよびＥの増加に注目して、凍結乾燥製剤の安定性を評価した。本発明の凍結乾燥製剤では、上記の不純物の増加が低く抑えられる。また、本発明の凍結乾燥製剤では、水への再構成時間が短く、例えば１５秒以下であり、より好ましい凍結乾燥製剤では約５秒である。

４．凍結乾燥製剤の適用
本発明の凍結乾燥製剤は、例えば多発性骨髄腫の治療に用いられる。例えば、静脈内投与するための注射液を調製する場合は、ボルテゾミブ３ｍｇを含有するバイアルに、生理食塩水３．０ｍＬを加えて溶解させて、患者に適用する。例えば、皮下投与するための注射液を調製する場合は、ボルテゾミブ３ｍｇを含有するバイアルに、生理食塩水１．２ｍＬを加えて溶解させて、患者に適用する。

以下、本発明を実施例、比較例および試験例によりさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに何ら限定されるものではない。
＜試験方法＞
（１）再溶解性試験
調製したばかりの凍結乾燥製剤を含有するバイアルに、生理食塩水１．２ｍＬを加えて振り混ぜて、凍結乾燥製剤の粉末のすべてが溶解するまでの時間（再構成時間）を計測する。
（２）凍結乾燥製剤から調製した注射剤のｐＨ
調製したばかりの凍結乾燥製剤を含有するバイアルに、生理食塩水２．５ｍＬを加えてすべてが溶解した際の溶液のｐＨを測定する。

（３）保存安定性試験
密栓されたバイアルに充填された凍結乾燥製剤を、７０℃で９日間、または６０℃で３週間、保存する。その後、バイアルに生理食塩水１．５ｍＬおよびアセトニトリル１．５ｍＬを加えてすべてを溶解させて、試料溶液とする。
調製された溶液の安定性は、下記のようにして確認した。各試料溶液の各類縁物質および総類縁物質量をＨＰＬＣ法で測定した。ＨＰＬＣ法の条件は次の通りである。
検出器：紫外吸光光度計（測定波長：２７０ｎｍ）
カラム：内径４．６ｍｍ、長さ２５ｃｍのステンレス管に５μｍの液体クロマトグラフィー用オクタデシルシリル化シリカゲルを充填した。
カラム温度：３０℃付近の一定温度
移動相流量：毎分１．０ｍＬ
サンプル注入量：２０μＬ
移動相：溶液ＡおよびＢから構成される。
溶液Ａ：水７５０ｍＬにアセトニトリル２５０ｍＬおよびギ酸１ｍＬを加えて混和する。
溶液Ｂ：水２００ｍＬにアセトニトリル８００ｍＬおよびギ酸１ｍＬを加えて混和する。
移動相の送液：溶液Ａおよび溶液Ｂの混合比を次のように変えて濃度勾配制御する。
各検体のピーク面積を自動積分法により測定し、面積百分率法によりそれらの量を求め，各類縁物質量及び総類縁物質を求めた。なお、総類縁物質とは、不純物Ａ、不純物Ｂ、不純物Ｄ、不純物Ｅを含むすべての不純物を合わせたものである。

実施例１
凍結乾燥製剤の調製
ボルテゾミブ６０ｍｇをｔ−ブタノール１０．８ｍＬに５０℃で溶解させた。Ｌ−アルギニン４００ｍｇ、クエン酸水和物２５６ｍｇおよびクエン酸ナトリウム水和物９６ｍｇを注射用水１３．２ｍｇに室温で溶解させた。得られた２つの溶液を混合して、混合溶液の容量を１２ｍＬになるように、注射用水で調整した。
得られた溶液を無菌ろ過膜（０．２２ミクロンフィルター）を用いて滅菌ろ過して、１．２０ｍＬづつバイアルに充填した。その後、バイアルを凍結乾燥機に入れて、凍結乾燥処理を施した。乾燥終了後、窒素を用いて、圧力を戻し、バイアルを密封することで、凍結乾燥製剤を得た。

比較例１〜３
凍結乾燥製剤の調製
表２に記載の成分を記載の量用いて、比較例１〜３の凍結乾燥製剤を、実施例１と同様にして調製した。なお、比較例１の製剤は、特許文献２に記載の製剤であり、市販されているベルケイド（登録商標）の製剤に相当するものである。

試験例１
凍結乾燥製剤の溶解性および得られた注射剤のｐＨ
実施例１および比較例１〜３の凍結乾燥製剤について、その溶解性と得られた注射剤のｐＨを測定した。その結果を表３に示す。
実施例１の凍結乾燥製剤は、比較例１の凍結乾燥製剤よりも、速やかに溶解した。また、比較例２および３の凍結乾燥製剤は、生理食塩水には溶解しなかった。

試験例２
凍結乾燥製剤の保存安定性
実施例１および比較例１〜３の凍結乾燥製剤について、７０℃で９日間および６０℃で３週間の保存安定性の試験を行った。その結果を表４に示す。
実施例１の凍結乾燥製剤は、比較例１〜３の凍結乾燥製剤よりも、総類縁物質の増加量が少なく、保存安定性が向上していた。

実施例２〜７
アルギニンの含有量の変化
ボルテゾミブ１重量部に対して表５に記載のアルギニンの量を用いて、実施例２〜７の凍結乾燥製剤を実施例１と同様にして調製した。

試験例３
凍結乾燥製剤の溶解性および得られた注射剤のｐＨ
実施例２〜７の凍結乾燥製剤について、その溶解性と得られた注射剤のｐＨを測定した。その結果を表６に示す。
実施例２〜７の凍結乾燥製剤は、比較例１の凍結乾燥製剤よりも、速やかに溶解した。特に、実施例４および５の凍結乾燥製剤は、より早く溶解した。

試験例４
凍結乾燥製剤の保存安定性
実施例２〜７の凍結乾燥製剤について、７０℃で９日間の保存安定性の試験を行った。その結果を表７に示す。
７０℃９日後の総類縁物質の量から、初期の総類縁物質の量を差し引いた、総類縁物質の増加量は、実施例３〜７の凍結乾燥製剤ではいずれも、比較例１の凍結乾燥製剤の７０℃９日後の総類縁物質の増加量よりも少なく、保存安定性がより優れていた。また、実施例２の凍結乾燥製剤の総類縁物質の増加量は、比較例１の凍結乾燥製剤と同等であった。
試験例３および４の結果から、アルギニンの含有量としては、ボルテゾミブ１重量部に対して、少なくとも３〜１５重量部であることが好ましく、より好ましくは５〜１０重量部であり、さらに好ましくは６〜９重量部であることが分かる。

実施例８〜１４
クエン酸の含有量の変化
アルギニン１重量部に対して表８に記載のクエン酸の量を用いて、実施例８〜１４の凍結乾燥製剤を実施例１と同様にして調製した。

試験例５
凍結乾燥製剤の溶解性および得られた注射剤のｐＨ
実施例８〜１４の凍結乾燥製剤について、その溶解性と得られた注射剤のｐＨを測定した。その結果を表９に示す。
実施例８〜１４の凍結乾燥製剤はすべて、比較例１の凍結乾燥製剤よりも、速やかに溶解した。特に、実施例１０〜１２の凍結乾燥製剤は、より早く溶解した。

試験例６
凍結乾燥製剤の保存安定性
実施例８〜１４の凍結乾燥製剤について、７０℃で９日間の保存安定性の試験を行った。その結果を表１０に示す。
７０℃９日後の総類縁物質の量から、初期の総類縁物質の量を差し引いた、総類縁物質の増加量は、実施例１０〜１４の凍結乾燥製剤ではいずれも、比較例１の凍結乾燥製剤の７０℃９日後の総類縁物質の増加量よりも少なく、保存安定性がより優れていた。
試験例５および６の結果から、ボルテゾミブ３ｍｇあたり２．５ｍＬの生理食塩水に溶解したときの、注射剤のｐＨは、好ましくは３．５〜７であり、特に好ましくは４〜７であることが分かる。また、クエン酸の含有量としては、アルギニン１重量部に対して、少なくとも０．３〜１重量部であることが好ましく、より好ましくは０．４〜０．９重量部であり、さらに好ましくは０．４５〜０．８重量部であることが分かる。

本発明によって、保存安定性が優れ、水への再構成時間が短い凍結乾燥製剤が提供される。

Claims (6)

1. ボルテゾミブと、アルギニンと、酸および／またはその塩とを含む凍結乾燥製剤。
2. 前記酸がクエン酸である、請求項１に記載の凍結乾燥製剤。
3. ボルテゾミブとアルギニンの重量比が１：３〜１：１５である、請求項１または２に記載の凍結乾燥製剤。
4. ボルテゾミブ３ｍｇあたり２．５ｍＬの生理食塩水に溶解したとき、その溶液のｐＨが３．５〜７である、請求項１〜３のいずれかに記載の凍結乾燥製剤。
5. アルギニンと酸および／またはその塩との重量比が１：０．３〜１：１である、請求項１〜４のいずれかに記載の凍結乾燥製剤。
6. ボルテゾミブと、アルギニンと、酸および／またはその塩とを含む溶液を凍結乾燥する工程を含む、凍結乾燥製剤の製造方法。