JP2017158567A - 抗ｓｓｘ−２ ｔ細胞受容体及び関連材料並びに使用方法 - Google Patents

Abstract

【課題】癌患者への腫瘍反応性Ｔ細胞の移植において、改良された免疫学的組成物及び方法の提供。【解決手段】滑膜肉腫Ｘブレイクポイント（ＳＳＸ）−２に対し抗原特異性を有する、単離又は精製されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、関連ポリペプチド及びタンパク質、並びに関連核酸、組換え発現ベクター、ホスト細胞、及び細胞集団。該ＴＣＲに関連する、抗体又はその抗原結合部位、及び医薬組成物。ホストにおける癌の存在を検出する方法、及びホストにおける癌を治療する又は予防する方法。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本特許出願は、参照によって組み込まれる、２０１０年９月２１日出願の米国仮特許出願第61/384,931号の利益を主張する。

電子的に提出された資料の参照による組み込み
同時に添えて提出した、コンピュータで読み取ることのできるヌクレオチド/アミノ酸配列リストは、その全体が参照により本明細書に組み込まれるものであり、以下のように特定される：２０１１年８月２２日付けの「708841ST25.TXT」と名付けられた１つの41,480バイトのＡＳＣＩＩ（テキスト）ファイル。

養子細胞療法（ＡＣＴ）は、癌患者への腫瘍反応性Ｔ細胞の移植を含む、患者への反応性Ｔ細胞の移植を伴う。養子細胞療法は、例えばメラノーマといった、いくつかの癌における腫瘍の退縮を引き起こすことに成功している。養子細胞療法の広範な適用に対する1つの障害は、抗腫瘍の潜在能力を有するヒトＴ細胞を産生することの難しさにある。養子細胞療法の良好な適用に対する別の障害は、移植されたＴ細胞が、通常の（即ち非癌性の）組織に対しても毒性を示し得ることである。従って、癌を治療するための改良された免疫学的組成物及び方法の必要性が存在する。

本発明は、滑膜肉腫Ｘブレイクポイント（ＳＳＸ）−２（配列番号：１）に対して抗原特異性を有する、単離又は精製されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を提供する。該ＴＣＲは本明細書に記載の特定のアミノ酸配列を含み得る。例えば、本発明のＴＣＲは、配列番号１３〜１８、配列番号１９及び２０、配列番号２３及び２４、又は配列番号２５及び２６のいずれか１以上のアミノ酸配列を含み得る。

本発明は、関連ポリペプチド及びタンパク質、並びに関連核酸、組換え発現ベクター、ホスト細胞、及び細胞集団をさらに提供する。本発明のＴＣＲに関連する抗体又はその抗原結合部位、及び医薬組成物が本発明によりさらに提供される。

ホストにおける癌の存在を検出する方法、及びホストにおける癌を治療又は予防する方法が、本発明によりさらに提供される。ホストにおける癌の存在を検出する本発明の方法は、（ｉ）癌細胞を含むサンプルを、本明細書に記載の本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組換え発現ベクター、ホスト細胞、ホスト細胞の集団、又は抗体若しくはその抗原結合部位のいずれかに接触させ、それによって複合体を形成させること、並びに（ｉｉ）該複合体を検出することを含み、該複合体の検出がホストにおける癌の存在の指標となる。

ホストにおける癌を治療又は予防する本発明の方法は、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質のいずれか、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質のいずれかをコードするヌクレオチド配列を含む任意の核酸若しくは組換え発現ベクター、又は本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質のいずれかをコードする組換えベクターを含む任意のホスト細胞若しくはホスト細胞の集団を、ホストにおいて癌を治療又は予防するのに有効な量で、ホストへ投与することを含む。

図１Ａは、ＳＳＸ−２ ＴＣＲで形質導入した末梢血白血球（ＰＢＬ）を、様々な濃度のＳＳＸ−２：４１〜４９（ＫＡＳＥＫＩＦＹＶ）（配列番号２）ペプチドでパルスした人間のドナーからのＴ２細胞と共培養した後に測定した、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）レベルを示す棒グラフである。 図１Ｂは、Ｔ２細胞が異なるヒトのドナーからのものであること以外は、図１Ａと同様に測定したＩＦＮ−γレベルを示す棒グラフである。 図２は、ＳＳＸ−２ ＴＣＲで形質導入したＰＢＬを、ＳＳＸ−２遺伝子を発現する２９３−Ａ２及びＣＯＳ７−Ａ２細胞、並びにＳＳＸ−２：４１〜４９ペプチドでパルスしたＴ２細胞と共培養した際に測定した、ＩＦＮ−γレベルを示す棒グラフである。 図３は、ＳＳＸ−２ ＴＣＲで形質導入したＰＢＬ（黒塗り棒グラフ）又は形質導入していない（ＵＴ）ＰＢＬ（白抜き棒グラフ）を様々な腫瘍細胞株と共培養した際に測定した、結果的なＩＦＮ−γレベルを示す棒グラフである。 図４Ａは、ＳＳＸ−２ ＴＣＲで形質導入した（黒塗り棒グラフ）又は形質導入していない（ＵＴ）（白抜き棒グラフ）ヒトドナーからのＰＢＬを種々の腫瘍細胞と共培養した後のＩＦＮ−γレベルを示す棒グラフである。 図４Ｂは、ＰＢＬが異なるヒトのドナーからのものであること以外は図４Ａと同様な、ＩＦＮ−γレベルを示す棒グラフである。 図５は、ＳＳＸ−２ ＴＣＲを形質導入したＰＢＬ及びペプチドパルスしたＴ２細胞を用いて行った共培養アッセイの結果を示す線グラフである。パルスに使用したペプチドは：ＳＳＸ−１（ＫＹＳＥＫＩＳＹＶ、配列番号３２）(─◆─)；ＳＳＸ−２（ＫＡＳＥＫＩＦＹＶ、配列番号２）（■）；ＳＳＸ−３（ＫＶＳＥＫＩＶＹＶ、配列番号８）（▲）；ＳＳＸ−４（ＫＳＳＥＫＩＶＹＶ、配列番号９）（Ｘ）；ＳＳＸ−５（ＫＡＳＥＫＩＩＹＶ、配列番号１０）（＊）；ＳＳＸ−６（ＫＦＳＥＫＩＳＣＶ、配列番号３３）（●）；ＳＳＸ−７（ＫＳＬＥＫＩＳＹＶ、配列番号３４）（｜）；ＳＳＸ−８ ＫＹＳＥＫＩＳＹＶ、配列番号３２）（-）；ＳＳＸ−９（ＫＳＳＥＫＩＩＹＶ、配列番号１１）（─）；及びＳＳＸ−１０（ＫＡＳＥＫＩＬＹＶ、配列番号１２）（−−◆−−）である。 図６Ａ及び６Ｂは、形質導入していない（ＵＴ）、又はＳＳＸ−２ ＴＣＲ（「ＳＳＸ−ＷＴ」）、コドン最適化ＳＳＸ−２ ＴＣＲ（「ＳＳＸ−ＣＯ ｏｐ」）、若しくはコドン最適化ヒト−マウスキメラＳＳＸ−２ ＴＣＲ（「ＳＳＸ−ＭＣＲ」）で形質導入した、ドナー１（Ａ）又はドナー２（Ｂ）からのＰＢＬの増殖（［^３Ｈ］−チミジン取り込みの毎分ごとのカウント（ＣＰＭ）による）を示す棒グラフである。 図７Ａ〜Ｄは、形質導入していない（◆）、又はＳＳＸ−２ ＴＣＲ（■）、コドン最適化ＳＳＸ−２ ＴＣＲ（▲）、若しくはコドン最適化ヒト−マウスキメラＳＳＸ−２ ＴＣＲ（Ｘ）で形質導入したＰＢＬと、表示されたエフェクター対ターゲット（Ｅ：Ｔ）比で共培養した際の、９３８ ｍｅｌ（ＨＬＡ−Ａ２−／ＳＳＸ−２＋）（Ａ）、ＣＯＳ−Ａ２（Ｂ）、９３８−Ａ２ ｍｅｌ（Ｃ）、ＣＯＳ−Ａ２−ＳＳＸ−２（Ｄ）の溶解パーセントを示すグラフである。 図８Ａ〜Ｄは、形質導入していない（◆）、又はＳＳＸ−２ ＴＣＲ（■）、コドン最適化ＳＳＸ−２ ＴＣＲ（▲）、若しくはコドン最適化ヒト−マウスキメラＳＳＸ−２ ＴＣＲ（Ｘ）で形質導入したＰＢＬと、表示されたエフェクター対ターゲット（Ｅ：Ｔ）比で共培養した際の、６２４ ｍｅｌ（Ａ）、１３００ ｍｅｌ（Ｂ）、ＳＫ ｍｅｌ ３７（Ｃ）、又は８８８ ｍｅｌ（Ｄ）の溶解パーセントを示す線グラフである。 図９Ａ〜９Ｅは、形質導入していない、又はＳＳＸ−２ ＴＣＲ（「ＳＳＸ−ＴＣＲ−ＷＴ」）、コドン最適化ＳＳＸ−２ ＴＣＲ（「ＳＳＸ−ＴＣＲ−コドン最適化−ＰＢＬ」）、若しくはコドン最適化ヒト−マウスキメラＳＳＸ−２ ＴＣＲ（「ＳＳＸ−２−ＴＣＲ マウス定常領域−ＰＢＬ」）で形質導入した、ＰＢＬの増殖（［^３Ｈ］−チミジン取り込みの毎分ごとのカウント（ＣＰＭ）による）を示す棒グラフである。 図１０は、ＳＳＸ−２ ＴＣＲ（「ＳＳＸ−ＷＴ」）（グレーの棒）、コドン最適化ＳＳＸ−２ ＴＣＲ（「ＳＳＸ２−Ｃｏ Ｏｐ」）（白抜きの棒）、若しくはコドン最適化ヒト−マウスキメラＳＳＸ−２ ＴＣＲ（「ＳＳＸ２−ＭＣＲ」）（黒の棒）で形質導入したＰＢＬを、様々な濃度のＳＳＸ−２：４１〜４９ペプチドでパルスしたヒトのドナーからのＴ２細胞と共培養した後に測定した、ＩＦＮ−γレベルを示す棒グラフである。 図１１は、ＳＳＸ−２ ＴＣＲで形質導入した（白抜き棒グラフ）又は形質導入していない（ＵＴ）（黒塗り棒グラフ）ヒトドナーからのＰＢＬを、様々な原発性メラノーマ細胞と共培養した後のＩＦＮ−γレベルを示す棒グラフである。 図１２は、ＳＳＸ−２ ＴＣＲで形質導入したヒトドナーからのＰＢＬを、脱メチル化剤、5-アザ-2'-デオキシシチジン（ＤＡＣ）、の非存在下（グレーの棒）又は存在下（０．１μＭ（白抜きの棒）若しくは１．０μＭ（黒の棒））で、ｍｅｌ１３００細胞と共培養した後のＩＦＮ−γレベルを示す棒グラフである。ＮＭは薬剤無しコントロールの通常培地である。

発明の詳細な説明
本発明は、滑膜肉腫Ｘブレイクポイント（ＳＳＸ）−２（ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０としても知られている）に対する抗原特異性を有する、単離又は精製されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を提供する。ＳＳＸ−２は、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−３、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＳＸ−６、ＳＳＸ−７、ＳＳＸ−８、ＳＳＸ−９、及びＳＳＸ−１０をも含む、１０の相同性の高い核タンパク質のＳＳＸファミリーのメンバーである。ＳＳＸタンパク質は、腫瘍細胞及び精巣のＭＨＣを発現しない生殖細胞でのみ発現する癌精巣抗原（ＣＴＡ）である。ＳＳＸ−２は、メラノーマ、頭部癌、頸部癌、リンパ腫、多発性骨髄腫、膵臓癌、前立腺癌、肉腫、肝細胞及び結腸癌を含む種々のヒトの癌で発現するが、これらに限定されない。ＳＳＸ−２タンパク質は、配列番号１を含み得る、配列番号１からなり得る、又は本質的に配列番号１からなり得る。

本明細書で使用される場合、用語「抗原特異性」は、ＴＣＲが高いアビディティでＳＳＸ−２に対し特異的に結合し、免疫学的に認識することができることを意味する。例えば、低濃度のＨＬＡ−Ａ２制限ＳＳＸ−２（例えば、約０．０１ｎｇ／ｍｌ〜約１ｎｇ／ｍｌ、０．０１ｎｇ／ｍｌ、０．１ｎｇ／ｍｌ、若しくは１ｎｇ／ｍｌ）との共培養で、ＴＣＲを発現しているＴ細胞が少なくとも約２００ｐｇ／ｍｌ以上（例えば、２００ｐｇ／ｍｌ以上、３００ｐｇ／ｍｌ以上、４００ｐｇ／ｍｌ以上、５００ｐｇ／ｍｌ以上、６００ｐｇ／ｍｌ以上、７００ｐｇ／ｍｌ以上）のＩＦＮ−γを分泌する場合、ＴＣＲがＳＳＸ−２に対する「抗原特異性」を有するとみなすことができる。本発明のＴＣＲは、より高濃度のＳＳＸ−２との共培養でもＩＦＮ−γを分泌し得る。

本発明の実施形態は、滑膜肉腫Ｘブレイクポイント（ＳＳＸ）−２、又はＳＳＸ−２、並びにＳＳＸ−３、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＳＸ−９、及びＳＳＸ−１０のいずれか１以上に対して抗原反応性を有する、単離又は精製されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む。

該ＴＣＲは、任意のＳＳＸ−２タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドに対する抗原特異性を有し得る。本発明の実施形態において、該ＴＣＲは、配列番号１を含む、配列番号１からなる、又は本質的に配列番号１からなる、ＳＳＸ−２タンパク質に対する抗原特異性を有する。本発明の好ましい実施形態において、該ＴＣＲは、ＫＡＳＥＫＩＦＹＶ（配列番号２）を含む、配列番号２からなる、又は本質的に配列番号２からなる、ＳＳＸ−２ペプチドに対する抗原特異性を有する。

本発明のＴＣＲはＳＳＸ−２に対する抗原特異性を有しているが、本発明のＴＣＲは、ＳＳＸ−３、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＳＸ−９、及びＳＳＸ−１０のいずれか１以上を認識することもできる。即ち、本発明のＴＣＲは、ＳＳＸ−３、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＳＸ−９、及びＳＳＸ−１０のいずれか１以上に対し結合し免疫学的に認識することができるが、ＳＳＸ−２への結合について観察されるよりも低い親和性であるため、これらのタンパク質のうちの１つに対する該ＴＣＲの結合は、ＳＳＸ−２を用いて免疫反応を誘発するのに必要な濃度よりも高い濃度のこれらのタンパク質のいずれか１つで免疫反応を誘発する。例えば、本発明のＴＣＲは、低濃度のＳＳＸ−３、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＳＸ−９、及びＳＳＸ−１０のいずれか１以上（例えば、約０．０１ｎｇ／ｍｌ〜約１ｎｇ／ｍｌ、０．０１ｎｇ／ｍｌ、０．１ｎｇ／ｍｌ、若しくは１ｎｇ／ｍｌ）との共培養で、ＴＣＲを発現しているＴ細胞が少なくとも約２００ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ−γを分泌しない（例えば、２００ｐｇ／ｍｌ未満、１００ｐｇ／ｍｌ未満を分泌する）が、より高濃度のＳＳＸ−３、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＳＸ−９、及びＳＳＸ−１０のいずれか１以上（例えば、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ、５０ｎｇ／ｍｌ、若しくは１００ｎｇ／ｍｌ）との共培養で、少なくとも約２００ｐｇ／ｍｌ以上（例えば、２００ｐｇ／ｍｌ以上、３００ｐｇ／ｍｌ以上、４００ｐｇ／ｍｌ以上、５００ｐｇ／ｍｌ以上、６００ｐｇ／ｍｌ以上、７００ｐｇ／ｍｌ以上）分泌する場合、ＳＳＸ−３、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＳＸ−９、及びＳＳＸ−１０のいずれか１以上を低いアビディティで認識するとみなすことができる。

該ＴＣＲは、ＳＳＸ−３、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＳＸ−９、及び／又はＳＳＸ−１０タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドを認識し得る。本発明の実施形態において、該ＴＣＲは、配列番号３（ＳＳＸ−３）、配列番号４（ＳＳＸ−４）、配列番号５（ＳＳＸ−５）、配列番号６（ＳＳＸ−９）、及び／又は配列番号７（ＳＳＸ−１０）を含む、これら配列からなる、又は本質的にこれら配列からなる、タンパク質を認識する。本発明の好ましい実施形態において、該ＴＣＲは、ＳＳＸ−３ペプチドＫＶＳＥＫＩＶＹＶ（配列番号８）、ＳＳＸ−４ペプチドＫＳＳＥＫＩＶＹＶ（配列番号９）、ＳＳＸ−５ペプチドＫＡＳＥＫＩＩＹＶ（配列番号１０）、ＳＳＸ−９ペプチドＫＳＳＥＫＩＩＹＶ（配列番号１１）、及び／又はＳＳＸ−１０ペプチドＫＡＳＥＫＩＬＹＶ（配列番号１２）を含む、これら配列からなる、又は本質的にこれら配列からなる、ペプチドを認識する。

本発明のＴＣＲは、ＨＬＡ−Ａ２依存的に、ＳＳＸ−２、ＳＳＸ−３、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＳＸ−９、及び／又はＳＳＸ−１０（以下、「ＳＳＸ癌抗原」）を認識することができる。本明細書で使用される場合、「ＨＬＡ−Ａ２依存的」とは、ＨＬＡ−Ａ２分子の背景においてＳＳＸ癌抗原に結合した際に、ＴＣＲが免疫反応を誘発することを意味する。

さらに、いかなる特定の理論にも縛られることなく、本発明のＴＣＲは、ＣＤ８及び／又はＣＤ４非依存的にＳＳＸ癌抗原を認識することができる。「ＣＤ８及び／又はＣＤ４非依存的」とは、本発明のＴＣＲを発現している細胞上に発現したＣＤ８若しくはＣＤ４分子、又はＣＤ８及びＣＤ４の両分子の非存在下において、或いは機能的なＣＤ８若しくはＣＤ４分子又は両分子の非存在下において、本発明のＴＣＲが、ＳＳＸ癌抗原に結合した際に免疫反応を誘発できることを意味する。従来のＴＣＲとは異なり、本発明のＴＣＲは、ＣＤ８又はＣＤ４に対する嗜好性を有しておらず、ＣＤ８又はＣＤ４分子のいずれに関しても機能し得る。

本発明のＴＣＲは、養子細胞移植に使用される場合を含む、多くの利点を提供する。例えば、特定の理論に縛られることなく、ＳＳＸ−２、ＳＳＸ−３、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＳＸ−９、及び／又はＳＳＸ−１０は、複数の種類の癌細胞で発現しているので、本発明のＴＣＲは複数の種類の癌の細胞を破壊する性能を有利に提供し、その結果、複数の種類の癌を治療する又は予防すると考えられる。さらに、特定の理論に縛られることなく、ＳＳＸタンパク質は、腫瘍細胞及び精巣のＭＨＣを発現していない生殖細胞でのみ発現する癌精巣抗原であるので、正常な非癌性細胞の破壊を最小化し又は排除し、その結果、毒性を減少させながら（例えば、最小化しながら又は排除しながら）、本発明のＴＣＲは癌細胞の破壊を有利に標的化すると考えられる。さらに、本発明のＴＣＲはＳＳＸ−２に対する抗原特異性を有する一方で、本発明のＴＣＲはＳＳＸ−３、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＳＸ−９、及びＳＳＸ−１０のいずれか１以上も有利に認識する。特定の理論に縛られることなく、複数の癌抗原を認識する性能は、本発明のＴＣＲにより破壊し得る癌細胞の数を有利に増加すると考えられる。さらに、ＳＳＸ抗原が変異体となった場合、本発明のＴＣＲはそれでも尚、１つより多くの抗原を認識することが可能である。

本発明は、ＴＣＲのα鎖、ＴＣＲのβ鎖、ＴＣＲのγ鎖、ＴＣＲのδ鎖、又はそれらの組み合わせ等の、２つのポリペプチド（即ち、ポリペプチド鎖）を含むＴＣＲを提供する。そのようなＴＣＲのポリペプチド鎖は当該技術分野で公知である。本発明のＴＣＲのポリペプチドは、該ＴＣＲがＳＳＸ−２に対する抗原特異性を有し、並びに／又はＳＳＸ−３、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＳＸ−９、及びＳＳＸ−１０のいずれか１以上を認識する限り、いかなるアミノ酸配列をも含み得る。

本発明の一実施形態において、該ＴＣＲは２つのポリペプチド鎖を含み、それらはそれぞれ、ＴＣＲの相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む可変領域を含む。好ましくは、第一のポリペプチド鎖は、配列番号１３のアミノ酸配列（α鎖のＣＤＲ１）を含むＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列（α鎖のＣＤＲ２）を含むＣＤＲ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列（α鎖のＣＤＲ３）を含むＣＤＲ３を含み、且つ、第二のポリペプチド鎖は、配列番号１６のアミノ酸配列（β鎖のＣＤＲ１）を含むＣＤＲ１、配列番号１７のアミノ酸配列（β鎖のＣＤＲ２）を含むＣＤＲ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列（β鎖のＣＤＲ３）を含むＣＤＲ３を含む。この点に関し、本発明のＴＣＲは、配列番号１３〜１５、１６〜１８、及び１３〜１８のいずれか１以上からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み得る。好ましくは、該ＴＣＲは配列番号１３〜１８のアミノ酸配列を含む。

或いは又は加えて、該ＴＣＲは、上記のＣＤＲを含むＴＣＲの可変領域のアミノ酸配列を含み得る。この点に関し、該ＴＣＲは、配列番号１９（α鎖の可変領域）若しくは２０（β鎖の可変領域）、配列番号１９及び２０の両方、配列番号３５（α鎖の可変領域の一部）若しくは３６（β鎖の可変領域の一部）、又は配列番号３５及び３６の両方のアミノ酸配列を含み得る。好ましくは、本発明のＴＣＲは配列番号１９及び２０のアミノ酸配列を含む。

或いは又は加えて、該ＴＣＲは、ＴＣＲのα鎖及びＴＣＲのβ鎖を含み得る。本発明のＴＣＲのα鎖及びβ鎖のそれぞれは、いかなるアミノ酸配列をも独立に含み得る。好ましくは、該α鎖は、上記のα鎖の可変領域を含む。この点に関し、本発明のＴＣＲは、配列番号２３のアミノ酸配列を含み得る。本発明のこの種のＴＣＲは、ＴＣＲのいかなるβ鎖とも組み合わせることができる。好ましくは、本発明のＴＣＲのβ鎖は、上記のβ鎖の可変領域を含む。この点に関し、本発明のＴＣＲは、配列番号２４のアミノ酸配列を含み得る。従って、本発明のＴＣＲは、配列番号２３若しくは２４、又は配列番号２３及び２４の両方のアミノ酸配列を含み得る。好ましくは、本発明のＴＣＲは、配列番号２３及び２４のアミノ酸配列を含む。

本発明の実施形態において、該ＴＣＲは、ヒト／マウスキメラＴＣＲを含み得る。この点に関し、該ＴＣＲは、配列番号２１（マウスのα鎖の定常領域）、配列番号２２（マウスのβ鎖の定常領域）又は配列番号２１及び２２の両方を含む、マウス定常領域を含み得る。好ましくは、該ＴＣＲは配列番号２１及び２２両方を含む。

或いは又は加えて、本発明のヒト／マウスキメラＴＣＲは、上記のＣＤＲのいずれかを含み得る。この点に関し、本発明のヒト／マウスキメラＴＣＲは、配列番号１３〜１５、１６〜１８、及び１３〜１８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み得る。好ましくは、該ヒト／マウスキメラＴＣＲは、配列番号１３〜１８のアミノ酸配列を含む。

或いは又は加えて、該ヒト／マウスキメラＴＣＲは、上記の可変領域のいずれかを含み得る。この点に関し、本発明のヒト／マウスキメラＴＣＲは、配列番号１９（α鎖の可変領域）若しくは２０（β鎖の可変領域）、配列番号１９及び２０の両方、配列番号３５（α鎖の可変領域の一部）若しくは３６（β鎖の可変領域の一部）、又は配列番号３５及び３６の両方のアミノ酸配列を含み得る。好ましくは、本発明のＴＣＲは、配列番号１９及び２０のアミノ酸配列を含む。

或いは又は加えて、該ヒト／マウスキメラＴＣＲは、ＴＣＲのα鎖及びＴＣＲのβ鎖を含み得る。本発明のヒト／マウスキメラＴＣＲのα鎖及びβ鎖のそれぞれは、任意のアミノ酸配列を独立に含み得る。好ましくは、該α鎖は、上記のα鎖の可変領域を含む。この点に関し、本発明のヒト／マウスキメラＴＣＲは、配列番号２５のアミノ酸配列を含み得る。本発明のこの種のヒト／マウスキメラＴＣＲは、ＴＣＲのいかなるβ鎖とも組み合わせることができる。好ましくは、本発明のヒト／マウスキメラＴＣＲのβ鎖は、上記のβ鎖の可変領域を含む。この点に関し、本発明のヒト／マウスキメラＴＣＲは、配列番号２６のアミノ酸配列を含み得る。従って、本発明のヒト／マウスキメラＴＣＲは、配列番号２５若しくは２６、又は配列番号２５及び２６の両方のアミノ酸配列を含み得る。好ましくは、本発明のＴＣＲは、配列番号２５及び２６のアミノ酸配列を含む。

また、本発明により、本明細書に記載の任意のＴＣＲの機能的部分を含む、単離又は精製されたポリペプチドも提供される。本明細書で使用される場合、用語「ポリペプチド」は、オリゴペプチドを含み、１以上のペプチド結合により連結した単鎖のアミノ酸のことをいう。

本発明のポリペプチドに関して、機能的部分は、該機能的部分がＳＳＸ−２に特異的に結合する、並びに／又はＳＳＸ−３、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＳＸ−９、及びＳＳＸ−１０のいずれか１以上を認識する限り、それが一部であるＴＣＲの連続したアミノ酸を含むいかなる部分でもあり得る。ＴＣＲに関して使用される場合、用語「機能的部分」は、それが一部であるＴＣＲ（元のＴＣＲ）の生物学的活性を保持している部分又は断片である、本発明のＴＣＲのいかなる部分又は断片のことをもいう。機能的部分は、例えば、ＳＳＸ−２に特異的に結合する性能、並びに／又はＳＳＸ−３、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＳＸ−９、及びＳＳＸ−１０のいずれか１以上を認識する性能（例えば、ＨＬＡ−Ａ２依存的に）を保持している、又は元のＴＣＲと同様な程度、同程度、若しくはより高い程度に、癌を検出、治療、又は予防する、ＴＣＲの部分を含む。元のＴＣＲを参照にして、該機能的部分は、例えば、元のＴＣＲの約１０％、２５％、３０％、５０％、６８％、８０％、９０％、９５％、又はより高い割合を含み得る。

該機能的部分は、該部分のアミノ若しくはカルボキシ末端、又は両末端に、元のＴＣＲのアミノ酸配列には見られない付加的なアミノ酸を含み得る。望ましくは、該付加的なアミノ酸は、例えば、ＳＳＸ−２に特異的に結合すること；ＳＳＸ−３、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＳＸ−９、及びＳＳＸ−１０のいずれか１以上を認識すること；癌を検出する、癌を治療又は予防する性能を有していること等の、該機能的部分の生物学的機能を妨げない。より望ましくは、該付加的アミノ酸は、元のＴＣＲの生物学的活性と比べ、生物学的活性を亢進する。

該ポリペプチドは、本発明のＴＣＲのα鎖及び／又はβ鎖の可変領域の、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３の１以上を含む機能的部分等の、本発明のＴＣＲのα及びβ鎖のいずれか又は両方の機能的部分を含み得る。この点に関して、該ポリペプチドは、配列番号１３（α鎖のＣＤＲ１）、１４（α鎖のＣＤＲ２）、１５（α鎖のＣＤＲ３）、１６（β鎖のＣＤＲ１）、１７（β鎖のＣＤＲ２）、１８（β鎖のＣＤＲ３）、又はこれらの組み合わせのアミノ酸配列を含む機能的部分を含み得る。好ましくは、本発明のポリペプチドは、配列番号１３〜１５、１６〜１８、又は配列番号１３〜１８の全てを含む、機能的部分を包含する。より好ましくは、該ポリペプチドは、配列番号１３〜１８のアミノ酸配列を含有する機能的部分を含む。

或いは又は加えて、本発明のポリペプチドは、例えば、上記のＣＤＲ領域の組み合わせを含む本発明のＴＣＲの可変領域を含み得る。この点に関し、該ポリペプチドは、配列番号１９（α鎖の可変領域）、２０（β鎖の可変領域）、配列番号１９及び２０の両方、配列番号３５（α鎖の可変領域の一部）若しくは３６（β鎖の可変領域の一部）、又は配列番号３５及び３６の両方のアミノ酸配列を含み得る。好ましくは、該ポリペプチドは、配列番号１９、配列番号２０のアミノ酸配列、又は配列番号１９及び２０の両方のアミノ酸配列を含む。

或いは又は加えて、本発明のポリペプチドは、本明細書に記載のＴＣＲの１つのα又はβ鎖の全長を含み得る。この点に関し、本発明のポリペプチドは、配列番号２３、２４、２５、又は２６のアミノ酸配列を含み得る。或いは、本発明のポリペプチドは、本明細書に記載のＴＣＲのα及びβ鎖を含み得る。例えば、本発明のポリペプチドは、配列番号２３及び２４の両方、又は配列番号２５及び２６の両方のアミノ酸配列を含み得る。

本発明は、本明細書に記載のポリペプチドの少なくとも１つを含む単離され又は精製されたタンパク質をさらに提供する。「タンパク質」は、１以上のポリペプチド鎖を含む分子を意味する。

本発明のタンパク質は、配列番号１９又は３５のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチド鎖、及び配列番号２０又は３６のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチド鎖を含み得る。本発明のタンパク質は、例えば、配列番号２３又は２５のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチド鎖、及び配列番号２４又は２６のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチド鎖を含み得る。この例において、本発明のタンパク質はＴＣＲであり得る。或いは、例えば、該タンパク質が配列番号２３若しくは２５、及び配列番号２４若しくは２６を含む単鎖ポリペプチドを含む場合、又は該タンパク質の第一の及び／若しくは第二のポリペプチド鎖が、例えば免疫グロブリン若しくはその一部をコードするアミノ酸配列などの、その他のアミノ酸配列をさらに含む場合、その結果、本発明のタンパク質は融合タンパク質であり得る。この点に関し、本発明は、少なくとも１つの他のポリペプチドとともに、本明細書に記載の本発明のポリペプチドの少なくとも１つを含む融合タンパク質も提供する。該他のポリペプチドは、融合タンパク質と別個のポリペプチドとして存在することができ、又は本明細書に記載の本発明のポリペプチドの１つとともにインフレームで（直列に）発現するポリペプチドとして存在することができる。該他のポリペプチドは、免疫グロブリン、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＭＨＣ分子、ＣＤ１分子（例えば、ＣＤ１ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ１ｃ、ＣＤ１ｄ）等を含むがこれらに限定されない、いかなるペプチド性若しくはタンパク質性分子、又はそれらの一部をもコードし得る。

該融合タンパク質は、本発明のポリペプチドの１以上の複製物、及び／又は他のポリペプチドの１以上の複製物を含み得る。例えば、該融合タンパク質は、１、２、３、４、５、若しくはそれより多くの本発明のポリペプチド及び／又は他のポリペプチドの複製物を含み得る。融合タンパク質を製造する適切な方法は当該技術分野において公知であり、例えば組換え法が挙げられる。例えば、Choi et al., Mol. Biotechnol. 31: 193-202 (2005)を参照されたい。

本発明のいくつかの実施形態において、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、及びタンパク質は、α鎖及びβ鎖をつないでいるリンカーペプチドを含む、単一のタンパク質として発現し得る。この点に関し、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、及びタンパク質は、配列番号３７を含有するアミノ酸配列を含むリンカーペプチドをさらに含み得る。本発明の一実施形態において、該リンカーペプチドは、配列番号３８を含むヌクレオチド配列によりコードされ得る。該リンカーペプチドは、ホスト細胞において、組換えＴＣＲ、ポリペプチド、及び／又はタンパク質の発現を有利に促進し得る。ホスト細胞による該リンカーペプチドを含むコンストラクトの発現の際に、該リンカーペプチドは切断され得、別々のα及びβ鎖をもたらし得る。

本発明のタンパク質は、本明細書に記載の本発明のポリペプチドの少なくとも１つを含む、組換え抗体であり得る。本明細書で使用される場合、「組換え抗体」は、本発明のポリペプチドの少なくとも１つ、及び抗体のポリペプチド鎖又はその一部を含む、組換え（例えば、遺伝子組換えの）タンパク質をいう。抗体のポリペプチド、又はその一部は、抗体の重鎖、軽鎖、重鎖若しくは軽鎖の可変若しくは定常領域、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又はＦｃ、Ｆａｂ、若しくはＦ（ａｂ）_２’断片等であり得る。該抗体のポリペプチド鎖、又はその一部は、別々の組換え抗体のポリペプチドとして存在し得る。或いは、該抗体のポリペプチド鎖、又はその一部は、本発明のポリペプチドとインフレームで（直列に）発現するポリペプチドとして存在し得る。該抗体のポリペプチド、又はその一部は、本明細書に記載の任意の抗体及び抗体断片を含む、いかなる抗体又はいかなる抗体断片のポリペプチドでもあり得る。

本明細書に記載の、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、及びタンパク質の機能的バリアントは、本発明の範囲に包含される。本明細書で使用される場合、用語「機能的バリアント」は、元のＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質に対し実質的な若しくは有意な配列の同一性若しくは類似性を有するＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質であって、機能的バリアントが、それがバリアントであるＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質の生物学的活性を保持しているものをいう。機能的バリアントは、例えば、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質（元のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質）のバリアントであって、元のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質と同様な程度、同程度、若しくはより高い程度、元のＴＣＲが抗原特異性を有する、又は元のポリペプチド若しくはタンパク質が特異的に結合する、ＳＳＸ−２へ特異的に結合する性能を保持しているものを包含する。或いは又は加えて、機能的バリアントは、例えば、元のポリペプチド又はタンパク質が認識するＳＳＸ−３、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＳＸ−９、及びＳＳＸ−１０のいずれか１以上を、元のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質と同様な程度、同程度、若しくはより高い程度に認識する性能を保持する、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質（元のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質）のバリアントをも包含し得る。元のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質を参照にして、該機能的バリアントは、例えば、元のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質とアミノ酸配列において、少なくとも約３０％、５０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれより高い同一性のものであり得る。

該機能的バリアントは、例えば、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有する、元のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質のアミノ酸配列を含み得る。保存的アミノ酸置換は当該技術分野において公知であり、特定の物理的及び／又は化学的特性を有する１のアミノ酸を、同じ化学的又は物理的特性を有する別のアミノ酸へ交換するアミノ酸置換を含む。例えば、保存的アミノ酸置換は、酸性アミノ酸が別の酸性アミノ酸に置換される（例えば、Ａｓｐ又はＧｌｕ）、非極性側鎖を有するアミノ酸が別の非極性側鎖を有するアミノ酸に置換される（例えば、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｔｒｐ、Ｖａｌ等）、塩基性アミノ酸が別の塩基性アミノ酸に置換される（Ｌｙｓ、Ａｒｇ等）、極性側鎖を有するアミノ酸が別の極性側鎖を有するアミノ酸に置換される（Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ等）等であり得る。

或いは又は加えて、該機能的バリアントは、少なくとも１つの非保存的アミノ酸置換を有する、元のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質のアミノ酸配列を含み得る。この場合、非保存的アミノ酸置換は、機能的バリアントの生物学的活性を妨害又は阻害しないことが好ましい。好ましくは、該非保存的アミノ酸置換は、元のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質と比較して、機能的バリアントの生物学的活性が増大するように、機能的バリアントの生物学的活性を亢進する。

該ＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質は、例えば他のアミノ酸等の、機能的バリアントの他の構成成分が実質的に機能的バリアントの生物学的活性を変更しないように、本質的に、本明細書に記載の特定のアミノ酸配列（単数又は複数）からなり得る。この点に関し、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質は、例えば、本質的に配列番号２３、２４、２５、２６、配列番号２３及び２４の両方、又は配列番号２５及び２６の両方のアミノ酸配列からなり得る。例えば、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質は、本質的に配列番号１９、２０、２１、２２、３５、３６、配列番号１９及び２０の両方、配列番号２１及び２２の両方、又は配列番号３５及び３６の両方のアミノ酸配列からもなり得る。さらに、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質は、本質的に配列番号１３（α鎖のＣＤＲ１）、１４（α鎖のＣＤＲ２）、１５（α鎖のＣＤＲ３）、１６（β鎖のＣＤＲ１）、１７（β鎖のＣＤＲ２）、１８（β鎖のＣＤＲ３）、又はこれらの任意の組み合わせ（例えば、配列番号１３〜１５、１６〜１８、若しくは１３〜１８）のアミノ酸配列からなり得る。

本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、及びタンパク質（機能的部分及び機能的バリアントを含む）は、いかなる長さでもあり得、即ち、該ＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質（又はそれらの機能的部分若しくは機能的バリアント）が、それらの生物学的活性（例えば、ＳＳＸ−２に特異的に結合する；ＳＳＸ−３、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＳＸ−９、及びＳＳＸ−１０のいずれか１以上を認識する；ホストにおいて癌を検出する；又はホストにおいて癌を治療する若しくは予防する等の性能）を保持する、いかなる数のアミノ酸をも含み得る。例えば、該ポリペプチドは、５０、７０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００又はそれより長いアミノ酸等の、５０〜５０００アミノ酸の長さであり得る。この点に関し、本発明のポリペプチドはオリゴポリペプチドも含む。

本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、及びタンパク質（機能的部分及び機能的バリアントを含む）は、１以上の天然に生じるアミノ酸の代わりに、合成アミノ酸を含み得る。そのような合成アミノ酸は当該技術分野において公知であり、例として、アミノシクロヘキサンカルボン酸、ノルロイシン、α−アミノ ｎ−デカン酸、ホモセリン、Ｓ−アセチルアミノメチル−システイン、トランス−３−及びトランス−４−ヒドロキシプロリン、４−アミノフェニルアラニン、４−ニトロフェニルアラニン、４−クロロフェニルアラニン、４−カルボキシフェニルアラニン、β−フェニルセリン β−ヒドロキシフェニルアラニン、フェニルグリシン、α−ナフチルアラニン、シクロヘキシルアラニン、シクロヘキシルグリシン、インドリン−２−カルボン酸、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸、アミノマロン酸、アミノマロン酸モノアミド、Ｎ’−ベンジル−Ｎ’−メチル−リジン、Ｎ’，Ｎ’−ジベンジルリジン、６−ヒドロキシリジン、オルニチン、α−アミノシクロペンタンカルボン酸、α−アミノシクロヘキサンカルボン酸、α−アミノシクロヘプタンカルボン酸、α−（２−アミノ−２−ノルボルナン）−カルボン酸、α，γ−ジアミノ酪酸、α，β−ジアミノプロピオン酸、ホモフェニルアラニン、及びα−ｔｅｒｔ−ブチルグリシンが挙げられる。

本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、及びタンパク質（機能的部分及び機能的バリアントを含む）は、グリコシル化、アミド化、カルボキシル化、リン酸化、エステル化、Ｎ−アシル化、例えばジスルフィド架橋を介した環化、又は酸付加塩への変換及び／若しくは任意で二量体化若しくは重合、又は共役され得る。

本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、及びタンパク質（機能的部分及び機能的バリアントを含む）が塩の形態である場合、好ましくは、該ポリペプチドは医薬上許容される塩の形である。適切な医薬上許容される酸付加塩は、塩酸、臭化水素酸、リン酸、メタリン酸、硝酸、及び硫酸等の鉱酸、並びに酒石酸、酢酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、安息香酸、グリコール酸、グルコン酸、コハク酸、及び、例えばｐ−トルエンスルホン酸などのアリールスルホン酸等の有機酸に由来するものを含む。

本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、及び／又はタンパク質（それらの機能的部分及び機能的バリアントを含む）は、当該技術分野において公知の方法により得ることができる。ポリペプチド及びタンパク質を新規に合成する適切な方法は、Chanら，Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis，Oxford University Press，Oxford,United Kingdom，2005；Peptide and Protein Drug Analysis，Reid，R．編，Marcel Dekker，Inc.，2000；Epitope Mapping，Westwoodら編，Oxford University Press，Oxford,United Kingdom，2000；及び米国特許第5,449,752号等の参照文献に記載されている。ポリペプチド及びタンパク質は、標準的な組換え法を使用し、本明細書に記載の核酸を使用して、組換えでも産生し得る。例えば、Sambrookら，Molecular Cloning: A Laboratory Manual，3 ^rd ed.，Cold Spring Harbor Press，Cold Spring Harbor，NY 2001；及びAusubelら，Current Protocols in Molecular Biology，Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons，NY，1994を参照されたい。さらに、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、及びタンパク質（それらの機能的部分及び機能的バリアントを含む）のいくつかは、植物、細菌、昆虫、例えばラット、ヒトなどの哺乳動物等の供給源から単離及び／又は精製し得る。単離及び精製の方法は、当該技術分野において周知である。或いは、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、及び／又はタンパク質（それらの機能的部分及び機能的バリアントを含む）は、Synpep（Dublin，CA）、Peptide Technologies Corp.（Gaithersburg，MD）、及びMultiple Peptide Systems（San Diego，CA）等の会社により商業的に合成され得る。この点に関し、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、及びタンパク質は、合成された、組換え体の、単離された、及び／又は精製されたものであり得る。

本発明の範囲には、例えば、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質（それらの機能的部分若しくはバリアントの任意のものを含む）、核酸、組換え発現ベクター、ホスト細胞、ホスト細胞の集団、又は抗体若しくはその抗原結合部位のいずれかを含む、バイオコンジュゲート（bioconjugate）などの複合物が含まれる。複合物は、一般に、複合物を合成する方法と同様に、当該技術分野において公知である（例えば、Hudecz, F., Methods Mol. Biol. 298: 209-223 (2005)、及びKirinら, Inorg Chem. 44(15): 5405-5415 (2005)を参照されたい）。

本発明により、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質のいずれか（それらの機能的部分及び機能的バリアントを含む）をコードするヌクレオチド配列を含む核酸がさらに提供される。

本明細書で使用される場合、「核酸」は、天然の、非天然の、又は変更したヌクレオチドを含むことができる、及び、天然の、非天然の、又は変更したヌクレオチド間結合（例えば、非修飾のオリゴヌクレオチドのヌクレオチド間に見られるリン酸ジエステルの代わりの、ホスホロアミド酸（phosphoroamidate）結合若しくはホスホロチオエート結合のような）を含むことのできる、一本鎖若しくは二本鎖であり得、合成された若しくは天然の供給源から得ることができる（例えば、単離及び／又は精製することができる）、「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」、及び「核酸分子」を含み、通常、ＤＮＡ又はＲＮＡのポリマーを意味する。該核酸は、いかなる挿入、欠失、逆位、及び／又は置換をも含んでいないことが、通常好ましい。しかしながら、本明細書で議論されているように、いくつかの例では、該核酸が１以上の挿入、欠失、逆位、及び／又は置換を含むことが適切であり得る。

好ましくは、本発明の核酸は組換え体である。本明細書で使用される場合、用語「組換え体」は、（ｉ）天然の若しくは合成の核酸セグメントを生細胞内で複製可能な核酸分子へ連結することにより生細胞の外で構築される分子、又は（ｉｉ）上記（ｉ）に記載の分子の複製によりもたらされた分子をいう。本明細書の目的のために、該複製はｉｎ ｖｉｔｒｏ複製又はｉｎ ｖｉｖｏ複製であり得る。

該核酸は、当該技術分野において公知の手順を使用して、化学合成及び／又は酵素ライゲーション反応に基づいて構築され得る。例えば、上記のSambrookら、及び上記のAusubelら、を参照されたい。例えば、核酸は天然に生じるヌクレオチド、又は分子の生物学的安定性を増大させるように、若しくはハイブリダイゼーションの際に形成した二本鎖の物理的安定性を増大させるように設計された種々の修飾型ヌクレオチド（例えば、ホスホロチオエート派生物、及びアクリジン置換ヌクレオチド）を使用して化学合成され得る。核酸を産生するために使用され得る修飾型ヌクレオチドの例として、5-フルオロウラシル、5-ブロモウラシル、5-クロロウラシル、5-ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、4-アセチルシトシン、5-(カルボキシヒドロキシメチル)ウラシル、5-カルボキシメチルアミノメチル-2-チオウリジン、5-カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、ベータ-D-ガラクトシルキューオシン（galactosylqueosine）、イノシン、N⁶-イソペンテニルアデニン、1-メチルグアニン、1-メチルイノシン、2,2-ジメチルグアニン、2-メチルアデニン、2-メチルグアニン、3-メチルシトシン、5-メチルシトシン、N⁶-置換アデニン、7-メチルグアニン、5-メチルアミノメチルウラシル、5-メトキシアミノメチル-2−チオウラシル、ベータ-Ｄ−マンノシルキューオシン（mannosylqueosine）、5'-メトキシカルボキシメチルウラシル、5-メトキシウラシル、2-メチルチオ-N⁶-イソペンテニルアデニン、ウラシル-5-オキシ酢酸（v）、ワイブトキソシン、シュードウラシル、キューオシン（queosine）、2-チオシトシン、5-メチル-2-チオウラシル、2-チオウラシル、4-チオウラシル、5-メチルウラシル、ウラシル-5-オキシ酢酸メチルエステル、3-(3-アミノ-3-N-2-カルボキシプロピル)ウラシル、及び2,6-ジアミノプリンが挙げられるがこれらに限定されない。或いは、１以上の本発明の核酸は、Macromolecular Resources（Fort Collins,CO）及びSynthegen（Houston, TX）等の会社から購入できる。

該核酸は、該ＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質、又はそれらの機能的部分若しくは機能的バリアントのいずれかをコードするいかなるヌクレオチド配列をも含み得る。例えば、該核酸は、配列番号２７（抗ＳＳＸ−２ ＴＣＲアルファ及びベータ鎖をコードする）又は配列番号２８（ヒト／マウスキメラ抗ＳＳＸ−２ ＴＣＲアルファ及びベータ鎖をコードする）を含む、これら配列からなる、又は本質的にこれら配列からなるヌクレオチド配列を含み得る。該ヌクレオチド配列は、或いは、配列番号２７又は２８に対し縮重するヌクレオチド配列を含み得る。

いくつかの実施形態において、該核酸配列は最適化し得る。特定の理論に縛られることなく、核酸配列の最適化はｍＲＮＡ転写産物の翻訳効率を増大すると考えられる。核酸配列の最適化は、元のコドンを、同一のアミノ酸をコードするが、細胞内でより容易に利用可能なｔＲＮＡにより翻訳可能な別のコドンへ置換することを伴うことができ、それ故、翻訳効率を増大する。核酸配列の最適化は、翻訳を妨害する可能性のあるｍＲＮＡの二次構造も減少することができ、それ故、翻訳効率を増大する。例えば、該最適化核酸は、配列番号２９（抗ＳＳＸ−２ ＴＣＲアルファ及びベータ鎖をコードする）、又は配列番号３０（ヒト／マウスキメラ抗ＳＳＸ−２ ＴＣＲアルファ及びベータ鎖をコードする）を含む、これら配列からなる、又は本質的にこれら配列からなるヌクレオチド配列を含み得る。該ヌクレオチド配列は、或いは、配列番号２９及び３０に対し縮重するヌクレオチド配列を含み得る。

本発明は、本明細書に記載の任意の核酸のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列、又は本明細書に記載の任意の核酸のヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む、単離又は精製された核酸をも提供する。

ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列は、好ましくは、高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズする。「高ストリンジェンシー条件」は、標的配列（本明細書に記載の任意の核酸のヌクレオチド配列）に対し、非特異的ハイブリダイゼーションよりも強く検出可能な量で、ヌクレオチド配列が特異的にハイブリダイズすることを意味する。高ストリンジェンシー条件は、正確に相補的な配列を有するポリヌクレオチド、又はわずかな散在するミスマッチのみを含むポリヌクレオチドを、ヌクレオチド配列にマッチするわずかな小領域（例えば、３〜１０塩基）を偶然に有するランダム配列から区別するであろう条件を含む。そのような相補性小領域は、１４〜１７又はより長い塩基の全長相補物よりもより容易に融解し、高ストリンジェンシーハイブリダイゼーションはそれらを容易に区別可能とする。相対的に高ストリンジェンシーな条件は、例えば、約０．０２〜０．１Ｍ ＮａＣｌ又はそれと同等のもの、約５０〜７０℃の温度により提供されるような、低塩及び／又は高温条件を含み得る。そのような高ストリンジェンシー条件は、ヌクレオチド配列とテンプレート又は標的鎖との間のミスマッチを、たとえあったとしてもほとんど許容せず、本発明の任意のＴＣＲの発現を検出するのに特に適している。ホルムアミドの量を増加して添加することにより、条件をよりストリンジェントにすることができると一般に認められている。

本発明の核酸は組換え発現ベクターに組み込むことができる。この点に関し、本発明は、本発明の任意の核酸を含む組換え発現ベクターを提供する。本明細書の目的のためには、用語「組換え発現ベクター」は、コンストラクトがｍＲＮＡ、タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、細胞内でｍＲＮＡ、タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドを発現させるのに十分な条件下で、該ベクターを細胞に接触させた場合に、ホスト細胞によるｍＲＮＡ、タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドの発現を可能にする、遺伝子操作したオリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドのコンストラクトを意味する。本発明のベクターは、全体として天然に生じたものではない。しかしながら、該ベクターの一部は天然に生じたものであり得る。本発明の組換え発現ベクターは、一本鎖又は二本鎖であり得、合成の又は一部天然の供給源から得ることができ、天然の、非天然の、又は変更したヌクレオチドを含み得る、ＤＮＡ及びＲＮＡを含むがこれらに限定されない、いかなる種類のヌクレオチドをも含み得る。該組換え発現ベクターは、天然に生じる、非天然に生じるヌクレオチド間の結合、又は両種類の結合を含み得る。好ましくは、該非天然に生じる若しくは変更したヌクレオチド、又はヌクレオチド間の結合は、該ベクターの転写又は複製を妨げない。

本発明の組換え発現ベクターは、いかなる適切な組換え発現ベクターでもあり得、任意の適切なホストを形質転換又はトランスフェクトするのに使用され得る。適切なベクターは、プラスミド及びウイルス等の、増殖及び増幅のために、又は発現若しくは双方のために設計されたものを含む。該ベクターは、pUCシリーズ（Fermentas Life Sciences）、pBluescriptシリーズ（Stratagene, LaJolla, CA）、pETシリーズ（Novagen, Madison, WI）、pGEXシリーズ（Pharmacia Biotech, Uppsala, Sweden）、及びpEXシリーズ（Clontech, Palo Alto, CA）からなる群より選択され得る。λGT10、λGT11、λZapII（Stratagene）、λEMBL4、及びλNM1149等のバクテリオファージベクターも使用され得る。植物の発現ベクターの例としては、pBI01、pBI101.2、pBI101.3、pBI121、及びpBIN19（Clontech）が挙げられる。動物の発現ベクターの例としては、pEUK-Cl、pMAM、及びpMAMneo （Clontech）が挙げられる。好ましくは、該組換え発現ベクターは、例えばレトロウイルスベクターなどの、ウイルスベクターである。

本発明の組換え発現ベクターは、例えば、上記Sambrookら及び上記Ausubelらに記載の、標準的な組換えＤＮＡ技術を使用して調製し得る。発現ベクターのコンストラクト（環状又は直鎖状である）は、原核生物の又は真核生物のホスト細胞において機能的な複製システムを含むように調製し得る。複製システムは、例えば、ColEl、2 μプラスミド、λ、SV40、ウシパピローマウイルス等に由来し得る。

望ましくは、該組換え発現ベクターは、必要に応じて、ベクターがＤＮＡ又はＲＮＡベースであるかを考慮しながら、ベクターが導入されるホストの種類（例えば、細菌、真菌、植物、又は動物）に特異的である、転写及び翻訳開始及び終結コドン等の調節配列を含む。

該組換え発現ベクターは、形質転換した又はトランスフェクトしたホストの選択を可能にする、１以上のマーカー遺伝子を含み得る。マーカー遺伝子として、例えば、抗生物質、重金属等への耐性などの殺生物剤抵抗性、原栄養性を提供するための栄養要求性ホストの相補等が挙げられる。本発明の発現ベクターについての適切なマーカー遺伝子としては、例えば、ネオマイシン／Ｇ４１８耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子、ヒスチジノール耐性遺伝子、テトラサイクリン耐性遺伝子、及びアンピシリン耐性遺伝子が挙げられる。

該組換え発現ベクターは、該ＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質（それらの機能的部分及び機能的バリアントを含む）をコードするヌクレオチド配列、又は該ＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質をコードするヌクレオチド配列に相補的な若しくはハイブリダイズするヌクレオチド配列に作動可能なように連結した、天然の又は非天然のプロモーターを含み得る。例えば、強い、弱い、誘導性、組織特異的、及び発生特異的などの、プロモーターの選択は当業者の通常の技術の範囲内である。同様に、ヌクレオチド配列をプロモーターと組み合わせることも、当業者の技術範囲内である。該プロモーターは、非ウイルスプロモーター、又は例えばサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＲＳＶプロモーターなどのウイルスプロモーター、及びマウス幹細胞ウイルスの末端反復配列に見られるプロモーターであり得る。

本発明の組換え発現ベクターは、一過性の発現、安定発現のいずれか、又は両方について設計することができる。また、該組換え発現ベクターは、恒常的な発現のため又は誘導性発現のために作製することができる。さらに、該組換え発現ベクターは、自殺遺伝子を含むように作製することができる。

本明細書で使用される場合、用語「自殺遺伝子」は、該自殺遺伝子を発現する細胞に死をもたらす遺伝子をいう。該自殺遺伝子は、該遺伝子を発現する細胞に、例えば薬剤などの剤に対する感受性を与え、該細胞が該剤に接触又は曝露した場合に、該細胞に死をもたらすような遺伝子であり得る。自殺遺伝子は当該技術分野において公知であり（例えば、Suicide Gene Therapy: Methods and Reviews, Springer, Caroline J. (Cancer Research UK Centre for Cancer Therapeutics at the Institute of Cancer Research, Sutton, Surrey, UK), Humana Press, 2004を参照されたい）、例えば、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）チミジンキナーゼ（ＴＫ）遺伝子、シトシンデアミナーゼ（cytosine daminase）、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、及びニトロレダクターゼが挙げられる。

本発明の他の実施形態は、本明細書に記載の任意の組換え発現ベクターを含むホスト細胞をさらに提供する。本明細書で使用される場合、用語「ホスト細胞」は、本発明の組換え発現ベクターを含み得る、いかなる種類の細胞をもいう。該ホスト細胞は、例えば、植物、動物、真菌、若しくは藻類などの真核細胞であり得、又は例えば、細菌若しくは原生生物などの原核細胞であり得る。該ホスト細胞は、培養した細胞、又は初代細胞（即ち、例えばヒトなどの生物から直接単離した）であり得る。該ホスト細胞は、接着細胞又は浮遊細胞（即ち、懸濁液中で増殖する細胞）であり得る。適切なホスト細胞は当該技術分野において公知であり、例えば、ＤＨ５α大腸菌細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞、サルＶＥＲＯ細胞、ＣＯＳ細胞、ＨＥＫ２９３細胞等が挙げられる。組換え発現ベクターを増幅する又は複製する目的のためには、該ホスト細胞は、好ましくは、例えばＤＨ５α細胞などの原核細胞である。組換えＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質を製造する目的のためには、該ホスト細胞は、好ましくは、哺乳類細胞である。最も好ましくは、該ホスト細胞はヒト細胞である。該ホスト細胞は、いかなる細胞種でもあり得、いかなる種類の組織からも生ずることができ、いかなる発生段階でもあり得るが、該ホスト細胞は、好ましくは、末梢血白血球（ＰＢＬ）又は末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である。より好ましくは、該ホスト細胞はＴ細胞である。

本明細書の目的のためには、該Ｔ細胞は、例えば初代Ｔ細胞などの培養したＴ細胞、又は例えばＪｕｒｋａｔ、ＳｕｐＴ１などの培養したＴ細胞株からのＴ細胞、又は哺乳動物から得たＴ細胞等の、いかなるＴ細胞でもあり得る。哺乳動物から得る場合、該Ｔ細胞は、血液、骨髄、リンパ節、胸腺、又はその他の組織若しくは体液を含むがこれらに限定されない、多くの供給源から得ることができる。Ｔ細胞は濃縮又は精製することもできる。好ましくは、該Ｔ細胞はヒトＴ細胞である。より好ましくは、該Ｔ細胞はヒトから単離したＴ細胞である。該Ｔ細胞は、ＣＤ４^＋／ＣＤ８^＋ダブルポジティブＴ細胞、例えばＴｈ_１及びＴｈ_２細胞などのＣＤ４^＋ヘルパーＴ細胞、ＣＤ８^＋ Ｔ細胞（例えば細胞傷害性Ｔ細胞）、腫瘍浸潤性細胞（ＴＩＬ）、メモリーＴ細胞、ナイーブＴ細胞等を含むがこれらに限定されない、いかなる種類のＴ細胞、及びいかなる発生段階でもあり得る。好ましくは、該Ｔ細胞はＣＤ８^＋ Ｔ細胞又はＣＤ４^＋ Ｔ細胞である。

本発明により、本明細書に記載の少なくとも１つのホスト細胞を含む細胞集団も提供される。該細胞集団は、例えば、いかなる組換え発現ベクターも含まないホスト細胞（例えばＴ細胞）などの少なくとも１つの他の細胞、又は例えば、Ｂ細胞、マクロファージ、好中球、赤血球、肝細胞、内皮細胞、上皮細胞、筋肉細胞、脳細胞等のＴ細胞以外の細胞に加えて、記載された任意の組換え発現ベクター含むホスト細胞を含む異成分からなる集団であり得る。或いは、該細胞集団は、集団が該組換え発現ベクターを含むホスト細胞を主として含む（例えば、本質的に該細胞からなる）、実質的に均一な集団であり得る。該集団は、集団の全ての細胞が該組換え発現ベクターを含むように、集団の全ての細胞が組み換え発現ベクターを含む単一のホスト細胞のクローンである、クローン細胞集団でもあり得る。本発明の一実施形態において、該細胞集団は、本明細書に記載の組換え発現ベクターを含むホスト細胞を含有するクローン集団である。

本発明は、本明細書に記載の任意のＴＣＲの機能的部分に特異的に結合する、抗体、又はその抗原結合部分をさらに提供する。好ましくは、該機能的部分は、例えば、配列番号１３（α鎖のＣＤＲ１）、１４（α鎖のＣＤＲ２）、１５（α鎖のＣＤＲ３）、１６（β鎖のＣＤＲ１）、１７（β鎖のＣＤＲ２）、１８（β鎖のＣＤＲ３）、配列番号１９、配列番号２０、配列番号３５、配列番号３６、又はこれらの組み合わせ（例えば、１３〜１５；１６〜１８；１３〜１８；１９〜２０、又は３５〜３６）のアミノ酸配列を含む機能的部分などの、癌抗原に特異的に結合する。より好ましくは、該機能的部分は、配列番号１３〜１８のアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態において、抗体又はその抗原結合部分は、６つの全てのＣＤＲ（α鎖のＣＤＲ１〜３及びβ鎖のＣＤＲ１〜３）により形成されるエピトープに結合する。該抗体は当該技術分野において公知である、いかなる種類の免疫グロブリンでもあり得る。例えば、該抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ等の任意のアイソタイプであり得る。該抗体はモノクローナル又はポリクローナルであり得る。該抗体は、例えば哺乳動物（マウス、ウサギ、ヤギ、ウマ、ニワトリ、ハムスター、ヒト等）から単離及び／又は精製した抗体などの、天然に生じた抗体であり得る。或いは、該抗体は、例えばヒト化抗体又はキメラ抗体などの、遺伝子組換え抗体であり得る。該抗体は、単量体又は重合体の形態であり得る。また、該抗体は、本発明のＴＣＲの機能的部分に対し任意のレベルの親和性又はアビディティを有し得る。望ましくは、他のペプチド又はタンパク質との交差反応が最小となるように、該抗体は本発明のＴＣＲの機能的部分に対し特異的である。

本発明のＴＣＲの任意の機能的部分への結合能について抗体を試験する方法は、当該技術分野において公知であり、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット、免疫沈降、及び競合阻害アッセイ（例えば、以下のJanewayら、及び米国特許出願公開第2002/0197266A1号明細書を参照されたい）等の、いかなる抗体−抗原結合アッセイをも含む。

抗体を作製する適切な方法は当該技術分野において公知である。例えば、標準的なハイブリドーマ法は、Kohler and Milstein, Eur. J. Immunol., 5, 511-519 (1976)、Harlow and Lane (eds.), Antibodies: A Laboratory Manual, CSH Press (1988)、及びC.A. Janeway et al. (eds.), Immunobiology, 5^thEd., Garland Publishing, New York, NY (2001)等に記載されている。或いは、EBV-ハイブリドーマ法（Haskard and Archer, J. Immunol. Methods, 74(2), 361-67 (1984)、及びRoderら, Methods Enzymol., 121, 140-67 (1986))、並びにバクテリオファージベクター発現システム（例えば、Huseら, Science, 246, 1275-81 (1989)を参照されたい）等の、他の方法が当該技術分野において公知である。さらに、非ヒト動物における抗体の作製方法が、例えば、米国特許第5,545,806号、5,569,825号、及び5,714,352号、並びに米国特許出願公開第2002/0197266 A1号などに記載されている。

さらに、ファージディスプレイが本発明の抗体を産生するのに使用され得る。この点に関し、抗体の抗原結合可変（Ｖ）領域をコードするファージライブラリーを、標準的な分子生物学及び組換えＤＮＡ技術（例えば、Sambrookら (eds.), Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 3^rd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York (2001)を参照されたい）を使用して産生することができる。望みの特異性を有する可変領域をコードするファージが、望みの抗原に特異的に結合するとして選択され、該選択された可変領域を含む、完全な又は部分的な抗体を再構成する。モノクローナル抗体の特徴を有する抗体が細胞により分泌されるように、該再構成した抗体をコードする核酸配列は、ハイブリドーマ製造に使用されるミエローマ細胞等の適切な細胞株に導入される（例えば、上記Janewayら、上記Huseら、及び米国特許第6,265,150号を参照されたい）。

抗体は、特定の重鎖及び軽鎖免疫グロブリン遺伝子についてのトランスジェニックである、トランスジェニックマウスにより製造し得る。そのような方法は当該技術分野において公知であり、例えば、米国特許第5,545,806号及び第5,569,825号、並びに上記Janewayら、などに記載される。

ヒト化抗体を産生する方法は当該技術分野において周知であり、例えば、上記Janewayら、米国特許第5,225,539号、第5,585,089号及び第5,693,761号、欧州特許第0239400 B1号、並びに英国特許第2188638号などに詳細に記載されている。ヒト化抗体は、米国特許第5,639,641号及びPedersenら, J. Mol. Biol., 235, 959-973 (1994)に記載の、抗体リサーフェイシング（resurfacing）技術を使用しても産生し得る。

本発明は、本明細書に記載の任意の抗体の抗原結合部位も提供する。該抗原結合部位は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、ｄｓＦｖ、ｓＦｖ、二重特異性抗体、及び三重特異性抗体（triabody）等の、少なくとも１つの抗原結合部位を有する、いかなる部位でもあり得る。

合成ペプチドを介して、抗体軽鎖の可変（Ｖ）領域と連結した抗体重鎖のＶ領域を含む短縮型Ｆａｂ断片からなる、単鎖可変領域断片（ｓＦｖ）抗体断片は、慣習的な組換えＤＮＡ技術を使用して産生し得る（例えば、上記Janewayらを参照されたい）。同様に、ジスルフィド−安定化可変領域断片（ｄｓＦｖ）は、組換えＤＮＡ技術により調製し得る（例えば、Reiterら, Protein Engineering, 7, 697-704 (1994)を参照されたい）。本発明の抗体断片は、しかしながら、これらの代表的な種類の抗体断片に限定されるものではない。

また、該抗体又はその抗原結合部位は、例えば、ラジオアイソトープ、フルオロフォア（例えば、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、フィコエリトリン（ＰＥ））、酵素（例えば、アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ）、及びエレメント粒子（例えば、金粒子）等の、検出可能な標識を含むように修飾し得る。

本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質（それらの機能的部分及び機能的バリアントを含む）、核酸、組換え発現ベクター、ホスト細胞（その集団を含む）、及び抗体（その抗原結合部位を含む）は、単離及び／又は精製し得る。本明細書で使用される場合、用語「単離した」は、その天然の環境から取り出されていることを意味する。本明細書で使用される場合、用語「精製した」は、純度を増大したことを意味し、ここで「純度」は相対的な用語であり、必ずしも絶対的な純度と解釈されるものではない。例えば、該純度は、少なくとも約５０％であり得、６０％、７０％若しくは８０％、９０％を超える、又は１００％であり得る。

本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質（それらの機能的部分及びバリアントを含む）、核酸、組換え発現ベクター、ホスト細胞（その集団を含む）、及び抗体（その抗原結合部位を含む）（以下、全てまとめて「本発明のＴＣＲマテリアル」という）は、医薬組成物等の組成物へ処方し得る。この点に関し、本発明は、該ＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、機能的部分、機能的バリアント、核酸、発現ベクター、ホスト細胞（その集団を含む）、及び抗体（その抗原結合部位を含む）、並びに医薬上許容される担体の任意のものを含む医薬組成物を提供する。任意の本発明のＴＣＲマテリアルを含む、本発明の医薬組成物は、例えば、ポリペプチド及び核酸、又は２つ若しくはそれより多い異なるＴＣＲなどの、１より多い本発明のＴＣＲマテリアルを含み得る。或いは、該医薬組成物は、例えば、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、シスプラチン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、メトトレキサート、パクリタキセル、リツキシマブ、ビンブラスチン、ビンクリスチンなどの化学療法剤等の他の医薬活性剤又は薬剤との組み合わせで、本発明のＴＣＲマテリアルを含み得る。

好ましくは、該担体は医薬上許容される担体である。医薬組成物に関し、該担体は、通常使用される任意のものであり得、溶解性や活性化合物（単数又は複数）との反応性の欠如等の物理化学的検討事項、及び投与の経路によってのみ限定される。例えば、ビヒクル、アジュバント、賦形剤、及び希釈剤などの、本明細書に記載の医薬上許容される担体は、当業者に周知であり、公衆に容易に利用可能である。該医薬上許容される担体は、活性剤（単数又は複数）に対し化学的に不活性であり、使用条件下で有害な副作用又は毒性を有しないものであることが好ましい。

担体の選択は、部分的には、特定の本発明のＴＣＲマテリアルにより、及び本発明のＴＣＲマテリアルを投与するのに使用される特定の方法により、決定されるであろう。従って、本発明の医薬組成物の多様な適切な製剤が存在する。経口、エアロゾル、非経口、皮下、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、及び腹腔内投与のための以下の製剤は、代表的なものであり、決して限定しているのではない。１より多い経路が、本発明のＴＣＲマテリアルを投与するのに使用可能であり、場合により、特定の経路が他の経路よりも、より迅速でより効果的な反応を提供し得る。

局所製剤は当業者に周知である。そのような製剤は、本発明の皮膚への適用に関し、特に適切である。

経口投与に適した製剤は、（ａ）水、生理食塩水、又はオレンジジュースなどの希釈剤に溶解した有効量の本発明のＴＣＲマテリアル等の液体溶液；（ｂ）それぞれ所定量の有効成分を固形物又は顆粒として含有する、カプセル、サシェ（sachet）、錠剤、ドロップ剤、及びトローチ；（ｃ）粉末；（ｄ）適当な液体中の懸濁液；並びに（ｅ）適切な乳濁液からなり得る。液体製剤は、医薬上許容される界面活性剤を添加した又は無添加のいずれかである、水及びアルコール（例えば、エタノール、ベンジルアルコール、及びポリエチレンアルコール）等の希釈剤を含み得る。カプセル形態は、例えば、界面活性剤、潤滑剤、並びに例えば乳糖、スクロース、リン酸カルシウム、及びコーンスターチなどの不活性賦形剤、を含む通常のハード又はソフト殻ゼラチン型であり得る。錠剤形態は、１以上の乳糖、スクロース、マンニトール、コーンスターチ、ポテトスターチ、アルギン酸、微結晶性セルロース、アカシア、ゼラチン、グアーガム、コロイド状二酸化ケイ素、クロスカルメロースナトリウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、及び他の賦形剤、着色剤、希釈剤、緩衝剤、崩壊剤、湿潤剤、防腐剤、香料、並びにその他の医薬上許容される賦形剤を含み得る。ドロップ剤形態は、香味料（通常、スクロース及びアカシア又はトラガカント）中の本発明のＴＣＲマテリアル、並びに当該技術分野において公知である賦形剤を含むことに加え、ゼラチン及びグリセリン、又はスクロース及びアカシア、乳濁液、ゲル等の不活性な基剤中に本発明のＴＣＲマテリアルを含むトローチを包含し得る。

本発明のＴＣＲマテリアルは、単独で又は他の適切な構成成分との組み合わせで、吸入を介して投与するためにエアロゾル製剤で製造し得る。これらのエアロゾル製剤は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素等の加圧した許容される推進剤中に含めることができる。それらは、噴霧器又は霧吹き等の非加圧製剤の医薬としても処方し得る。そのようなスプレー製剤も粘膜に噴霧するのに使用し得る。

非経口投与に適した製剤は、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、及び製剤を対象となるレシピエントの血液と等張にする溶質を含み得る、水性及び非水性の、等張で無菌の注入溶液、並びに懸濁剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤、及び防腐剤を含み得る、水性及び非水性の無菌の懸濁液を含有する。本発明のＴＣＲマテリアルは、水、生理食塩水、水性デキストロース及び関連する糖溶液、アルコール（エタノール若しくはヘキサデシルアルコール等）、グリコール（プロピレングリコール若しくはポリエチレングリコール等）、ジメチルスルホキシド、グリセロール、ケタール（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノール等）、エーテル、ポリ（エチレングリコール）４００、オイル、脂肪酸、脂肪酸エステル若しくはグリセリド、又は医薬上許容される界面活性剤（石鹸若しくは洗剤等）を添加した若しくは無添加のアセチル化脂肪酸グリセリド、懸濁剤（ペクチン等）、カルボマー、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、若しくはカルボキシメチルセルロース、又は乳化剤及びその他の医薬アジュバントを含む、無菌の液体又は液体混合物等の医薬担体中の生理学的に許容される希釈剤中において、投与し得る。

非経口製剤中に使用しうるオイルは、石油、動物油、植物油、又は合成油を含む。オイルの具体例として、落花生油、大豆油、ゴマ油、綿実油、トウモロコシ油、オリーブ油、ワセリン、及び鉱油が挙げられる。非経口製剤における使用に適した脂肪酸は、オレイン酸、ステアリン酸、及びイソステアリン酸を含む。オレイン酸エチル及びミリスチン酸イソプロピルは、適切な脂肪酸エステルの例である。

非経口製剤における使用に適した石鹸は、脂肪族アルカリ金属、アンモニウム、及びトリエタノールアミン塩を含み、適切な洗剤は、（ａ）例えば、ジメチルジアルキルアンモニウムハロゲン化物、及びアルキルピリジニウムハロゲン化物等のカチオン洗剤、（ｂ）例えば、アルキル、アリール及びオレフィンスルホン酸、アルキル、オルフェン、エーテル及びモノグリセリド硫酸、及びスルホサクシネート等のアニオン洗剤、（ｃ）例えば、脂肪族アミンオキシド、脂肪酸アルカノールアミド、及びポリオキシエチレンポリプロピレン共重合体等の非イオン性洗剤、（ｄ）例えば、アルキル−β−アミノプロピオン酸、及び２−アルキル−イミダゾリン第４級アンモニウム塩等の両性洗剤、並びに（ｅ）これらの混合物、を含む。

該非経口製剤は、通常、約０．５重量％〜約２５重量％の本発明のＴＣＲマテリアルを溶液中に含むであろう。防腐剤及び緩衝剤が使用され得る。注入部位での刺激を最小化する又は除くために、そのような組成物は、約１２〜約１７からの親水性・親油性バランス（ＨＬＢ）を有する、１以上の非イオン性界面活性剤を含み得る。そのような製剤における界面活性剤の量は、通常、約５重量％〜約１５重量％の範囲であろう。適切な界面活性剤は、プロピレングリコールを用いたプロピレンオキシドの縮合により形成される、ソルビタンオレイン酸モノエステル及び疎水性塩基を有するエチレンオキシドの高分子量付加物等のポリエチレングリコールソルビタン脂肪酸エステルを含む。該非経口製剤は、アンプル及びバイアル等の、単位用量又は複数回用量の密封した容器中に提供され得、使用前すぐに注入のために、例えば水などの無菌の液体賦形剤の添加のみを必要とする、フリーズドライ（凍結乾燥）で保存することができる。即時注入溶液及び懸濁液は、前述の無菌の粉末、顆粒、及び錠剤等から調製することができる。

注入可能な製剤は本発明に従う。注入可能な組成物のための有効な医薬担体の要件は、当業者に周知である（例えば、Pharmaceutics and Pharmacy Practice, J.B. Lippincott Company, Philadelphia, PA, Banker and Chalmers, eds., pages 238-250 (1982)、 及びASHP Handbook on Injectable Drugs, Toissel, 4th ed., pages 622-630 (1986)を参照されたい）。好ましくは、例えばＴ細胞などの細胞を投与する場合は、該細胞は注入を介して投与される。

上記の医薬組成物に加え、本発明のＴＣＲマテリアルは、シクロデキストリン包接錯体等の包接錯体、又はリポソームとして処方し得ることは、当業者に理解されるであろう。

本発明の目的のためには、投与される本発明のＴＣＲマテリアルの量又は用量は、合理的なタイムフレームに渡って被検対象又は動物において、例えば治療又は予防反応などの、効果を発揮するのに十分であろう。例えば、本発明のＴＣＲマテリアルの用量は、癌抗原に結合するのに、又は投与の時から約２時間若しくはより長い時間（例えば、１２〜２４若しくはより長時間）、癌を検出し、治療し、又は予防するのに十分であろう。特定の実施形態において、前記期間はさらに長い可能性がある。該用量は、特定の本発明のＴＣＲマテリアルの有効性及び動物（例えばヒト）の状態、並びに治療する動物（例えばヒト）の体重により決定されるであろう。

投与した用量を決定するための多くのアッセイが当該技術分野において公知である。本発明の目的のためには、それぞれ異なる用量のＴ細胞を投与した一連の哺乳動物の間で、所定用量の当該Ｔ細胞の哺乳動物への投与の際に、標的細胞が溶解した度合い、又は本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質を発現しているＴ細胞によりＩＦＮ−γが分泌された度合いを比較することを含む、アッセイが、哺乳動物に投与する開始用量を決定するために使用され得る。特定の用量の投与の際の、標的細胞が溶解した度合い、又はＩＦＮ−γが分泌された度合いは、当該技術分野において公知の方法によりアッセイすることができる。

本発明のＴＣＲマテリアルの用量は、特定の本発明のＴＣＲマテリアルの投与に付随して生じ得る、任意の有害な副作用の存在、性質、及び程度によっても決定されるであろう。通常、担当医が、年齢、体重、一般的健康状態、食事、性別、投与する本発明のＴＣＲマテリアル、投与経路、及び治療している病気の重篤度等の様々な要因を考慮しつつ、それぞれ個別の患者を治療するのに用いる本発明のＴＣＲマテリアルの用量を決定するであろう。本発明を限定することを意図しない例示目的で、本発明のＴＣＲマテリアルの用量は、約０．００１〜約１０００ｍｇ／ｋｇ治療する被検対象の体重／日、約０．０１〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日、約０．０１ｍｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ体重／日であり得る。

当業者は、本発明のＴＣＲマテリアルが、修飾を介して本発明のＴＣＲマテリアルの治療又は予防効果が増大するように、あらゆる方法で修飾され得ることを容易に理解するであろう。例えば、本発明のＴＣＲマテリアルは、直接的又はブリッジを介して間接的のいずれかにより、標的成分に結合し得る。化合物（例えば、本発明のＴＣＲマテリアル）を標的成分へ結合することの実施は、当該技術分野において公知である。例えば、Wadwaら, J. Drug Targeting 3: 111 (1995)及び米国特許第5,087,616号を参照されたい。本明細書で使用される場合、用語「標的成分」は、該標的成分が本発明のＴＣＲマテリアルの送達を、表面上に受容体を発現する細胞の集団に対して向けるように、細胞表面受容体を特異的に認識し結合するいかなる分子又は剤をもいう。標的成分は、抗体若しくはその断片、ペプチド、ホルモン、成長因子、サイトカイン、及び細胞表面受容体（例えば、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）、ＣＤ２８、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦ）、ニコチン性アセチルコリン受容体（ｎＡＣｈＲ）等）に結合する、いかなる他の天然若しくは非天然のリガンドをも含むが、これらに限定されない。本明細書で使用される場合、用語「ブリッジ」は、本発明のＴＣＲマテリアルを標的成分へ連結する、いかなる剤又は分子をもいう。当業者は、本発明のＴＣＲマテリアルの機能に必要ではない本発明のＴＣＲマテリアルの部位が、ブリッジ及び／又は標的成分が本発明のＴＣＲマテリアルへ付着した際に本発明のＴＣＲマテリアルの機能（即ち、ＳＳＸ−２へ結合する性能；ＳＳＸ−３、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＳＸ−９、及びＳＳＸ−１０のいずれか１以上を認識する；又は癌を検出、治療、または予防する）を妨害しないような、ブリッジ及び／又は標的成分を付着するための理想的な部位であることを認識する。

或いは、本発明のＴＣＲマテリアルがそれを投与した体へ放出される方法が、体内における時期及び場所に関して制御されるように、本発明のＴＣＲマテリアルはデポー形態へと修飾され得る（例えば、米国特許第4,450,150号を参照されたい）。本発明のＴＣＲマテリアルのデポー形態は、例えば、本発明のＴＣＲマテリアル、及び多孔性又は非多孔性マテリアル（ポリマー等）を含む、植え込み型組成物であり得、該本発明のＴＣＲマテリアルは、該マテリアル及び／若しくは非多孔性マテリアルの分解により封入される又は全体に拡散する。該デポーは、次いで、体内の所望の場所へ植え込まれ、本発明のＴＣＲマテリアルが所定の割合で該植込物から放出される。

本発明の実施形態において、該医薬組成物は5-アザ-2'-デオキシシチジン（ＤＡＣ）をさらに含む。特定の理論に縛られることなく、脱メチル化剤ＤＡＣは、癌細胞によるＳＳＸ−２の発現を上方制御することにより、任意の本発明のＴＣＲマテリアルによる癌細胞の認識を亢進すると考えられる。

本発明の医薬組成物、ＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組換え発現ベクター、抗体、ホスト細胞、又は細胞集団が、癌を治療する又は予防する方法に使用され得ると考えられる。特定の理論に縛られることなく、本発明のＴＣＲは、該ＴＣＲ（又は関連する本発明のポリペプチド若しくはタンパク質）が、細胞により発現された場合、ＳＳＸ−２を発現する細胞に対して免疫反応を媒介することができ、及びＳＳＸ−３、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＳＸ−９、及びＳＳＸ−１０のいずれか１以上に対しても免疫反応を媒介し得るように、ＳＳＸ−２に特異的に結合すると考えられ、及びＳＳＸ−３、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＳＸ−９、及びＳＳＸ−１０のいずれか１以上をも認識し得る。この点に関し、本発明は、本明細書に記載の任意の医薬組成物、ＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質、本明細書に記載の任意のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む任意の核酸若しくは組換え発現ベクター、本明細書に記載の任意の抗体、又は本明細書に記載の任意のＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質をコードする組換えベクターを含む任意のホスト細胞若しくは細胞集団を、ホストにおいて癌を治療又は予防するのに有効な量でホストに投与することを含む、ホストにおける癌を治療又は予防する方法を提供する。

本発明の実施形態において、ホストにおける癌を治療又は予防する方法は、ＤＡＣをホストに投与することをさらに含む。該方法は、任意の本発明の医薬組成物、ＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組換え発現ベクター、ホスト細胞、又は細胞集団をホストに投与する前に、同時に、又は後にＤＡＣを投与することを含み得る。特定の理論に縛られることなく、脱メチル化剤ＤＡＣは、癌細胞によるＳＳＸ−２の発現を上方制御することによって、任意の本発明のＴＣＲマテリアルによる癌細胞の認識を亢進すると考えられる。

本明細書で使用される場合、用語「治療する」及び「予防する」並びにこれらに由来する単語は、必ずしも１００％又は完全な治療又は予防を意味するものではない。むしろ、当業者が潜在的な利益又は治療効果を有するものとして認識する、様々な程度の治療又は防止が存在する。この点に関し、本発明の方法は、哺乳動物における癌の、いかなる量のいかなるレベルでの治療又は予防をも提供し得る。さらに、本発明の方法により提供される治療又は予防は、治療又は予防している疾患（例えば、癌）の１以上の状態又は症状の治療又は予防を含み得る。本明細書の目的のためには、「予防」は、疾患又はその症状若しくは状態の発症を遅らせることをも包含し得る。

また、ホストにおける癌の存在を検出する方法が提供される。該方法は、（ｉ）癌細胞を含むサンプルを、本明細書に記載の本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞、細胞集団、又は抗体若しくはその抗原結合部位のいずれかに接触させ、それによって複合体を形成させること、及び該複合体を検出することを含み、該複合体の検出はホストにおける癌の存在の指標となる。

ホストにおける癌を検出する本発明の方法に関して、癌細胞のサンプルは、細胞全体、その溶解物、又は細胞全体の溶解物のフラクション（例えば、核若しくは細胞質フラクション、全タンパク質フラクション、又は核酸フラクション）を含むサンプルであり得る。

本発明の検出方法の目的のためには、該接触工程は、ホストについてｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏで行うことができる。好ましくは、該接触はｉｎ ｖｉｔｒｏである。

また、該複合体の検出は、当該技術分野において公知のいかなる方法を介しても起き得る。例えば、本明細書に記載の本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組換え発現ベクター、ホスト細胞、細胞集団、又は抗体若しくはその抗原結合部位は、例えば、ラジオアイソトープ、フルオロフォア（例えば、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、フィコエリトリン（ＰＥ））、酵素（例えば、アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ）、及びエレメント粒子（例えば、金粒子）等の、検出可能な標識を用いて標識することができる。

ホスト細胞又は細胞集団を投与する、本発明の方法の目的のためには、該細胞はホストに対し同種異系の又は自己の細胞であり得る。好ましくは、該細胞はホストの自己のものである。

本発明の方法に関し、癌は、肉腫（例えば、滑膜肉腫、骨肉腫、平滑筋肉腫子宮、及び胞巣型横紋筋肉腫）、リンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫、及び非ホジキンリンパ腫）、肝細胞癌、神経膠腫、頭頸部癌、急性リンパ性癌、急性骨髄性白血病、骨癌、脳癌、乳癌、肛門、肛門管、若しくは肛門直腸の癌、眼の癌、肝内胆管の癌、関節の癌、頸部、胆嚢、若しくは胸膜の癌、鼻、鼻腔、若しくは中耳の癌、口腔癌、外陰部の癌、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性癌、大腸癌（例えば、結腸癌）、食道癌、子宮頸癌、消化管カルチノイド腫瘍、下咽頭癌、喉頭癌、肝臓癌、肺癌、悪性中皮腫、メラノーマ、多発性骨髄腫、鼻咽頭癌、卵巣癌、膵臓癌、腹膜、網、腸間膜の癌、咽頭癌、前立腺癌、直腸癌、腎臓癌、小腸癌、軟部組織癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、尿管癌、並びに膀胱癌の任意のものを含むいかなる癌でもあり得る。これらの内、肉腫（例えば、滑膜肉腫、骨肉腫、平滑筋肉腫子宮、及び胞巣型横紋筋肉腫）、肝細胞癌、神経膠腫、肝臓癌、メラノーマ、卵巣癌、膵臓癌、及び前立腺癌が好ましく治療される。

本発明の実施形態は、ホストにおける癌の治療又は予防のために、ＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組換え発現ベクター、ホスト細胞、細胞集団、抗体若しくはその抗原結合部位のいずれか、又は医薬組成物の使用を提供する。実施形態において、該使用は、ＤＡＣの使用をさらに含み得る。

本発明の方法において参照するホストは、いかなるホストでもあり得る。好ましくは、該ホストは哺乳動物である。本明細書で使用される場合、用語「哺乳動物」は、マウス及びハムスター等の齧歯目の哺乳動物、及びラビット等のウサギ目（Logomorpha）の哺乳動物を含むが、これらに限定されない、いかなる哺乳動物をもいう。該哺乳動物は、ネコ科（ネコ）及びイヌ科（イヌ）を含む食肉目からの動物であることが好ましい。該哺乳動物は、ウシ亜科（ウシ）及びイノシシ科（ブタ）を含む偶蹄目からの動物、又はウマ科（ウマ）を含む奇蹄目（Perssodactyla）の動物であることがより好ましい。該哺乳動物は霊長目、Ceboid、若しくはSimoid（サル）、又は類人猿（ヒト及び類人猿）であるのが最も好ましい。特に好ましい哺乳動物はヒトである。

以下の実施例は本発明をさらに説明するが、決して本発明の範囲を限定していると解釈されるべきではない。

実施例１
本実施例は、ＳＳＸ−２を発現するためのレトロウイルスベクターの作製を説明し、特定の細胞株におけるＳＳＸ−２の発現を示す。

ＳＳＸ−２遺伝子を発現ベクターｐＭＳＧＶ１及びｐＲＲＬＳＩＮ．ｃＰＰＴ．ＰＧＫへ挿入した。挿入したＳＳＸ−２の配列は：ATGaacggagacgacgcctttgcaaggagacccacggttggtgctcaaataccagagaagatccaaaaggccttcgatgatattgccaaatacttctctaaggaagagtgggaaaagatgaaagcctcggagaaaatcttctatgtgtatatgaagagaaagtatgaggctatgactaaactaggtttcaaggccaccctcccacctttcatgtgtaataaacgggccgaagacttccaggggaatgatttggataatgaccctaaccgtgggaatcaggttgaacgtcctcagatgactttcggcaggctccagggaatctccccgaagatcatgcccaagaagccagcagaggaaggaaatgattcggaggaagtgccagaagcatctggcccacaaaatgatgggaaagagctgtgccccccgggaaaaccaactacctctgagaagattcacgagagatctggaaatagggaggcccaagaaaaggaagagagacgcggaacagctcatcggtggagcagtcagaacacacacaacattggtcgattcagtttgtcaacttctatgggtgcagttcatggtacccccaaaacaattacacacaacagggacccaaaaggggggaacatgcctggacccacagactgcgtgagagaaaacagctggTGA（配列番号３１）であった。該ｐＲＲＬＳＩＮベクターには、ＷＰＲＥ（ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント）も挿入した。

ＳＳＸ−２の発現は、６２４．３８細胞、及び上記のＳＳＸ２ベクターで形質導入したＣＯＳ７−Ａ２細胞でも、ウェスタンブロットにより観察された。Ｈ５０８、Ｐａｎｃ２５５１、Ａ５４９、若しくはＯＶＣＡＲ３細胞、又は形質導入していないＣＯＳ７−Ａ２細胞においては、ＳＳＸ−２の発現は観察されなかった。
ＳＳＸ−２は９３８ｍｅｌ、Ｕ２５１、Ｔ５６７Ａ、ＳＫＭＥＬ２３、及びＳＫＭＥＬ３７細胞においても測定された。β−アクチンに対して基準化したＳＳＸ−２のコピー数を表１に示す。

さらなるＳＳＸ−２発現の研究を、リアルタイムＰＣＲを使用して行った。結果を表２に示す。

実施例２
本実施例は、ＳＳＸ−２特異的ＴＣＲを発現するためのレトロウイルスベクターの作製を説明する。

天然のＴ細胞クローンからのＨＬＡ−Ａ２制限ＴＣＲを、５’−ＲＡＣＥを使用して、ＳＳＸ−２に対し血清陽性であるメラノーマ患者（該患者の腫瘍はＳＳＸ−２を発現する）の腫瘍浸潤性リンパ節（ＴＩＬＮ）から単離した。

該Ｔ細胞クローンは：TRAV14/DV4*01（細菌クローン陽性数２１／２３）及びTRBV15*02-CB1（細菌クローン陽性数２３／２３）、を示した。

ＴＣＲα及びβ鎖を発現する、２ａ切断ペプチドを組み込んでいる、レトロウイルスベクターを作製した。α鎖及びβ鎖についての別々のＰＣＲ反応を行った。α鎖については、フォワードプライマーはＮｃｏＩ制限酵素部位のＡＴＧを組み込んだ。リバースプライマーは、認識配列の前に組み込まれたフューリン−ＳＧＳＧ−Ｐ２ａを有していた。β鎖のフォワードプライマーも認識配列の前にフューリン−ＳＧＳＧ−Ｐ２ａを組み込んでおり、リバースプライマーは終止コドン及びＮｏｔＩ制限酵素部位を有していた。

完了した際に、前記の別々のＰＣＲ反応物を混合し、さらなるＰＣＲを外側のプライマーを用いて行い、α鎖（TRAV14）−リンカー−β鎖（TRBV15-CB1）コンストラクトを産生した。該コンストラクトは、抗ＳＳＸ−２ ＴＣＲα及びβ鎖をコードする配列番号２７を含んでいた。

該コンストラクトを、ＮｃｏＩ及びＮｏｔＩ制限酵素部位を使用して、ｐＭＳＧＶ１レトロウイルスベクターへクローン化した。

実施例３
本実施例は、ＳＳＸ−２ ＴＣＲを用いて操作したＰＢＬが、ＳＳＸ−２ペプチド特異的反応性及びテトラマー結合を示すことを明らかにする。

ヒトドナー由来ＰＢＬを、実施例２のＳＳＸ−２ ＴＣＲベクターで形質導入し、ペプチド反応及びテトラマー結合を試験した。

テトラマー結合はＣＤ４及びＣＤ８細胞において観察された。

ＳＳＸ−２ ＴＣＲ形質導入ＰＢＬを、様々な濃度のＳＳＸ−２：４１〜４９（ＫＡＳＥＫＩＦＹＶ）ペプチドでパルスした、２人のヒトドナーからのＴ２細胞と共培養した。図１Ａ及び１Ｂは、測定された結果的なインターフェロンγレベル（ｐｇ／ｍｌ）を示す。これらのデータは、ＳＳＸ−２ ＴＣＲ形質導入ＰＢＬが、０．０１ｎｇ／ｍｌ又はそれ未満まで、ＳＳＸ−２：４１〜４９ペプチドを認識することを示す。図１Ａと１Ｂ間の違いは、ドナーの変動性に起因している可能性がある。

ＳＳＸ−２ ＴＣＲ形質導入ＰＢＬは、ＳＳＸ−２遺伝子を発現するようにレトロウイルスで操作した実施例１の細胞とも共培養した。図２は、ＳＳＸ−２遺伝子を発現している２９３−Ａ２及びＣＯＳ７−Ａ２細胞、並びにＳＳＸ−２：４１〜４９ペプチドでパルスしたＴ２細胞と、該ＰＢＬを共培養した際の、測定された結果的なインターフェロンγレベル（ｐｇ／ｍｌ）を示す。ＳＳＸ−２ ＴＣＲを形質導入してないＰＢＬはこれらの細胞に対し反応を示さなかった。

実施例４
本実施例は、実施例２のＳＳＸ−２ ＴＣＲを用いて操作したＰＢＬが腫瘍細胞株に対して反応性を示すことを明らかにする。

ＳＳＸ−２ ＴＣＲ形質導入ＰＢＬを様々な腫瘍細胞株と共培養した。図３は、測定された結果的なインターフェロンγレベル（ｐｇ／ｍｌ）を示す。これらのデータは、ＳＳＸ−２ ＴＣＲで操作したＴ細胞が、メラノーマ（624及び1300）並びに神経膠芽腫細胞株（U251）の両方において、自然に処理され提示されたＳＳＸ−２タンパク質を認識したことを示す。ＳＳＸ−２ ＴＣＲを形質導入していないＰＢＬ（ＵＴ）は、わずかな反応性を示す、又は全く反応性を示さなかった。

図４Ａ及び４Ｂ、図１１、並びに表３及び４は、実施例２のＳＳＸ−２ ＴＣＲで形質導入したヒトドナーからのＰＢＬを、様々な腫瘍細胞と共培養した場合の、さらなる結果を示す。

実施例５
本実施例は、ＳＳＸ−２ ＴＣＲで操作したＰＢＬが、他のＳＳＸタンパク質ペプチドに対し反応性を示すことを明らかにする。

共培養アッセイは、実施例２のＳＳＸ−２ ＴＣＲを形質導入したＰＢＬ及びペプチドでパルスしたＴ２細胞を用いて行った。

図５は、ＳＳＸ−２ ＴＣＲが、ＳＳＸ−２のペプチドと最も反応し、また、他のＳＳＸペプチドよりもＳＳＸ−３、−４、−５、−９、及び−１０のペプチドを認識する（より強い認識はより高いペプチド濃度で見られるが）ことを示す。

実施例６
本実施例は、コドン最適化及びマウス定常領域の導入が、ヒトＰＢＬにおいてＳＳＸ−２ ＴＣＲの発現及び機能を改善したことを明らかにする。

ヒトＰＢＬを、配列番号２７（ＳＳＸ−２ ＴＣＲ）、配列番号２９（コドン最適化ＳＳＸ−２ ＴＣＲ）、又は配列番号３０（マウス定常領域を含むコドン最適化ＳＳＸ−２ ＴＣＲ）を含むベクターで、形質導入しなかった又は形質導入した。発現はＦＡＣＳ解析で測定した。平均蛍光強度は、配列番号２７（ＳＳＸ−２ ＴＣＲ）で形質導入した細胞は６５６、配列番号２９（コドン最適化ＳＳＸ−２ ＴＣＲ）で形質導入した細胞は９１０、及び配列番号３０（マウス定常領域を含むコドン最適化ＳＳＸ−２ ＴＣＲ）で形質導入した細胞は９４９であると計測された。

その他の実験において、テトラマー結合の測定は、コドン最適化及びマウス定常領域の導入がヒトＰＢＬにおけるＳＳＸ−２ ＴＣＲの発現を改善したことを確認した。

その他の実験において、ＦＡＣＳ解析は、活性化マーカーＣＤ１３７（４−１ＢＢ）が、配列番号２７（ＳＳＸ−２ ＴＣＲ）、配列番号２９（コドン最適化ＳＳＸ−２ ＴＣＲ）、又は配列番号３０（マウス定常領域を含むコドン最適化ＳＳＸ−２ ＴＣＲ）で形質導入したヒトＰＢＬと、ＣＯＳ−Ａ２−ＳＳＸ２細胞との共培養後に上方制御されたことも明らかにした。

その他の実験は、ＣＯＳ−Ａ２−ＳＳＸ−２細胞との共培養後のＣＤ１０７ａの動員を測定することにより、ＳＳＸ−２ ＴＣＲの機能を評価した。Ｄａｙ０で、ＰＢＬをＯＫＴ３で刺激した。Ｄａｙ２で、該ＰＢＬを本実施例に記載されているように形質導入した。Ｄａｙ１５で、該ＰＢＬをＣＯＳ−Ａ２細胞又はＣＯＳ−Ａ２−ＳＳＸ−２細胞と２時間共培養した。Ｄａｙ１６で、ＣＤ１０７ａの動員をＦＡＣＳ解析により測定した。コドン最適化及びマウス定常領域の導入が、ＣＯＳ−Ａ２−ＳＳＸ−２細胞との共培養後の、ＣＤ１０７ａの動員による測定で、ＳＳＸ−２ ＴＣＲの機能を改善したという結果が示された。

ＳＳＸ−２ ＴＣＲの機能は、ＣＯＳ−Ａ２−ＳＳＸ−２細胞又は９３８−Ａ２ ｍｅｌ細胞との共培養後のＩＬ−２及びＩＦＮ−γ産生によっても測定した。ＰＢＬはＯＫＴ３で刺激し、本実施例に記載のように形質導入した。Ｄａｙ１０で、該ＰＢＬをＣＯＳ−Ａ２細胞、ＣＯＳ−Ａ２−ＳＳＸ−２細胞、９３８−Ａ２ ｍｅｌ細胞、又は９３８ｍｅｌ細胞と共培養した。Ｄａｙ１１で、ＩＬ−２及びＩＦＮ−γ産生をＦＡＣＳ解析により測定した。コドン最適化及びマウス定常領域の導入が、ＣＯＳ−Ａ２−ＳＳＸ−２細胞及び９３８−Ａ２ ｍｅｌ細胞との共培養後のＩＬ−２及びＩＦＮ−γ産生による測定で、ＳＳＸ−２ ＴＣＲの機能を改善したという結果が示された。

実施例７
本実施例は、ＳＳＸ−２ ＴＣＲ、コドン最適化ＳＳＸ−２ ＴＣＲ、又はコドン最適化ヒト−マウスキメラＳＳＸ−２ ＴＣＲを用いて操作したＰＢＬが、腫瘍細胞株に対して反応性を示すことを明らかにする。

配列番号２７（ＳＳＸ−２ ＴＣＲ）、配列番号２９（コドン最適化ＳＳＸ−２ ＴＣＲ）、又は配列番号３０（マウス定常領域を含むコドン最適化ＳＳＸ−２ ＴＣＲ）を含むベクターで、形質導入していない（ＵＴ）又は形質導入したＰＢＬを、様々な腫瘍細胞株と共培養した。表５及び６は、２人の異なるドナーからのＰＢＬについて、測定された結果的なインターフェロン−γのレベル（ｐｇ／ｍｌ）を示す。これらのデータは、複数の腫瘍細胞株において、形質導入したＴ細胞が自然に処理され提示されたＳＳＸ−２タンパク質を認識したことを示す。ＳＳＸ−２ ＴＣＲを形質導入していないＰＢＬ（ＵＴ）は、わずかな反応性を示す又は全く反応性を示さなかった。

実施例８
本実施例は、ＳＳＸ−２ ＴＣＲ、コドン最適化ＳＳＸ−２ ＴＣＲ、又はコドン最適化ヒト−マウスキメラＳＳＸ−２ ＴＣＲを用いて操作したＰＢＬが、ＳＳＸ２＋／ＨＬＡ−Ａ２＋標的細胞との共培養の際に増殖することを明らかにする。

配列番号２７（ＳＳＸ−２ ＴＣＲ）、配列番号２９（コドン最適化ＳＳＸ−２ ＴＣＲ）、又は配列番号３０（マウス定常領域を含むコドン最適化ＳＳＸ−２ ＴＣＲ）を含むベクターで形質導入していない（ＵＴ）又は形質導入した、ドナー１又はドナー２からのＰＢＬを、ＣＯＳ−Ａ２−ＳＳＸ−２細胞と共培養した。［^３Ｈ］−チミジンの取込み（ＣＰＭ）に関しての増殖を測定し、図６Ａ（ドナー１）及び６Ｂ（ドナー２）に示す。これらのデータは、ＳＳＸ−２ ＴＣＲ、コドン最適化ＳＳＸ−２ ＴＣＲ、又はマウス定常領域を含むコドン最適化ＳＳＸ−２ ＴＣＲを形質導入したＰＢＬが、ＣＯＳ−Ａ２−ＳＳＸ−２細胞との共培養に反応して増殖することを示す。

その他の実験において、本実施例に記載されるように形質導入したＰＢＬを、１３００ ｍｅｌ細胞、６２４ ｍｅｌ細胞、８８８ ｍｅｌ細胞、ＳＫ ｍｅｌ ３７細胞、又はＣＯＳ−Ａ２−ＳＳＸ−２細胞と共培養した。［^３Ｈ］−チミジンの１分当りの取込みカウント（ＣＰＭ）に関しての増殖を測定し、図９Ａ〜９Ｅに示す。これらのデータは、ＳＳＸ−２ ＴＣＲ、コドン最適化ＳＳＸ−２ ＴＣＲ、又はマウス定常領域を含むコドン最適化ＳＳＸ−２ ＴＣＲで形質導入したＰＢＬが、ＳＳＸ２＋／ＨＬＡ−Ａ２＋標的細胞との共培養に反応して増殖することを示す。

実施例９
本実施例は、ＳＳＸ−２ ＴＣＲ、コドン最適化ＳＳＸ−２ ＴＣＲ、又はコドン最適化ヒト−マウスキメラＳＳＸ−２ ＴＣＲを用いて操作したＰＢＬが、ＳＳＸ−２^＋／ＨＬＡ−Ａ２^＋標的細胞に対して特異的溶解活性を示すことを明らかにする。

配列番号２７（ＳＳＸ−２ ＴＣＲ）、配列番号２９（コドン最適化ＳＳＸ−２ ＴＣＲ）、又は配列番号３０（マウス定常領域を含むコドン最適化ＳＳＸ−２ ＴＣＲ）を含むベクターで形質導入していない（ＵＴ）又は形質導入したＰＢＬを、標的細胞、９３８ ｍｅｌ（ＨＬＡ−Ａ２−／ＳＳＸ−２＋）、ＣＯＳ−Ａ２、９３８−Ａ２ ｍｅｌ、ＣＯＳ−Ａ２−ＳＳＸ−２、６２４ ｍｅｌ、１３００ ｍｅｌ、ＳＫ ｍｅｌ ３７、又は８８８ ｍｅｌと、図７Ａ〜Ｄ及び図８Ａ〜Ｄに記載のエフェクター対標的比で共培養した。標的細胞の溶解パーセントを測定し、図７Ａ〜Ｄ及び図８Ａ〜Ｄに示す。形質導入していない細胞は、わずかな反応性〜反応性無し、を示した。これらのデータは、ＳＳＸ−２ ＴＣＲ、コドン最適化ＳＳＸ−２ ＴＣＲ、又はコドン最適化ヒト−マウスキメラＳＳＸ−２ ＴＣＲを用いて操作したＰＢＬが、ＳＳＸ−２^＋／ＨＬＡ−Ａ２^＋標的細胞に対して特異的溶解活性を示すことを明らかにする。

実施例１０
本実施例は、ＳＳＸ−２ ＴＣＲ、コドン最適化ＳＳＸ−２ ＴＣＲ、又はコドン最適化ヒト−マウスキメラＳＳＸ−２ ＴＣＲを用いて操作したＰＢＬが、ペプチドパルスしたＴ２細胞と共培養した際にサイトカインを分泌することを明らかにする。

配列番号２７（ＳＳＸ−２ ＴＣＲ）、配列番号２９（コドン最適化ＳＳＸ−２ ＴＣＲ）、又は配列番号３０（マウス定常領域を含むコドン最適化ＳＳＸ−２ ＴＣＲ）を含むベクターで形質導入していない（ＵＴ）又は形質導入したＰＢＬを、ＳＳＸ−２でパルスした、様々な濃度のＳＳＸ−２：４１〜４９（ＫＡＳＥＫＩＦＹＶ）（配列番号１）ペプチドでパルスした、Ｔ２細胞と共培養した。図１０は、測定された結果的なインターフェロンγのレベル（ｐｇ／ｍｌ）を示す。これらのデータは、ＳＳＸ−２ ＴＣＲを形質導入されたＰＢＬがＳＳＸ−２：４１〜４９ペプチドを認識することを示す。

実施例１１
本実施例は、脱メチル化剤、５−アザ−２’−デオキシシチジン（ＤＡＣ）、がＳＳＸ２−ＴＣＲで操作したＰＢＬによるｍｅｌ１３００細胞の認識を亢進することを明らかにする。

３人のドナーからのＳＳＸ−２ ＴＣＲを形質導入したＰＢＬを、ＤＡＣ無し、又は０．１μＭ若しくは１．０μＭ ＤＡＣと共に、ｍｅｌ１３００細胞と共培養した。図１２は、測定された結果的なインターフェロン−γのレベル（ｐｇ／ｍｌ）を示す。これらのデータは、ＤＡＣが、ＳＳＸ２−ＴＣＲで操作されたＰＢＬによるｍｅｌ１３００細胞の認識を亢進することを示す。

本明細書に引用される、刊行物、特許出願、及び特許を含む全ての参照は、それぞれの参照が個別に具体的に示され、参照により組み込まれ、及びその全体が本明細書中に記載されたのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。

本発明を記述することに関して（特に以下の特許請求の範囲に関して）、用語「ａ」及び「ａｎ」及び「ｔｈｅ」並びに同様の指示対象の使用は、本明細書中で指示がない場合又は明らかに文脈と矛盾する場合を除き、単数及び複数の両方を対象とすると解釈されるべきである。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」及び「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」は、特に指示の無い場合は、制約のない用語として解釈されるべきである（即ち、「を含むが、これに限定されるものではない」ということを意味する）。本明細書中の値の範囲の列挙は、本明細書中に特記のない限り、この範囲内に入る各個別の値を個々に言及する、簡単な方法としての役割を単に意図したものであり、各個別の値はそれが個々に本明細書に列挙されたかのように本明細書中に組み込まれる。本明細書中に記載される全ての方法は、本明細書中に特記のない限り、又はさもなくば文脈により明らかに矛盾しない限り、任意の適切な順序で実施され得る。本明細書中に提供される任意の全ての例、又は例示的語句（例えば、「等（ｓｕｃｈ ａｓ）」）の使用は、本発明をより明確に説明することを単に意図するにすぎず、別途特許請求されない限り、本発明の範囲を限定しない。本明細書中のいかなる語句も、特許請求されていない任意の要素を本発明の実施に必須なものとして示していると解釈されるべきではない。

本発明を実施するための本発明者らが知る最良の形態を含む、本発明の好ましい実施形態が本明細書中に記載されている。これらの好ましい実施形態のバリエーションは、前述の記載を読めば、当業者に明らかになり得る。本発明者らは、当業者が必要に応じてこのようなバリエーションを使用することを予期し、また本発明者らは、本明細書中に具体的に記載されたもの以外の方法で、本発明が実施されることを意図する。従って、本発明は、適用法により許容されるように、本明細書に添付された特許請求の範囲に列挙された対象の全ての改変物及び均等物を含む。さらに、上記要素の全ての可能なバリエーションでの上記要素の任意の組み合わせが、本明細書中に特記のない限り、又はさもなくば文脈により明らかに矛盾しない限り、本発明により包含される。

Claims (33)

1. 滑膜肉腫Ｘブレイクポイント（ＳＳＸ）−２（配列番号１）に対して抗原特異性を有する、単離又は精製されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）。
2. ＴＣＲが、ＳＳＸ−３（配列番号３）、ＳＳＸ−４（配列番号４）、ＳＳＸ−５（配列番号５）、ＳＳＸ−９（配列番号６）、及びＳＳＸ−１０ （配列番号７）のいずれか１以上も認識する、請求項１に記載のＴＣＲ。
3. ＴＣＲが、ＫＡＳＥＫＩＦＹＶ（配列番号２）を含むＳＳＸ−２ペプチドに対して抗原特異性を有する、請求項１又は２に記載のＴＣＲ。
4. ＴＣＲが、ＫＶＳＥＫＩＶＹＶ（配列番号８）、ＫＳＳＥＫＩＶＹＶ（配列番号９）、ＫＡＳＥＫＩＩＹＶ（配列番号１０）、ＫＳＳＥＫＩＩＹＶ（配列番号１１）、及びＫＡＳＥＫＩＬＹＶ（配列番号１２）のいずれか１以上を認識する、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＴＣＲ。
5. ＴＣＲが、配列番号１３〜１８を含むアミノ酸配列を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載のＴＣＲ。
6. ＴＣＲが配列番号１９及び２０を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載のＴＣＲ。
7. ＴＣＲが配列番号２１及び２２をさらに含む、請求項６に記載のＴＣＲ。
8. ＴＣＲが：
   ａ）配列番号２３及び２４、又は
   ｂ）配列番号２５及び２６
   を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載のＴＣＲ。
9. 請求項１〜８のいずれか１項に記載のＴＣＲの機能的部分を含む単離又は精製されたポリペプチドであって、該機能的部分が配列番号１３〜１８のアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
10. 該部分が配列番号１９及び２０のアミノ酸配列を含む、請求項９に記載の単離又は精製されたポリペプチド。
11. ａ）配列番号２３及び２４；又は
    ｂ）配列番号２５及び２６
    を含む、請求項１０に記載の単離又は精製されたポリペプチド。
12. 請求項９〜１１のいずれか１項に記載のポリペプチドの少なくとも１つを含む、単離又は精製されたタンパク質。
13. 配列番号１９を含む第一のポリペプチド鎖及び配列番号２０を含む第二のポリペプチド鎖を含む、請求項１２に記載の単離又は精製されたタンパク質。
14. ａ）配列番号２３を含む第一のポリペプチド鎖及び配列番号２４を含む第二のポリペプチド鎖；又は
    ｂ）配列番号２５を含む第一のポリペプチド鎖及び配列番号２６を含む第二のポリペプチド鎖
    を含む、請求項１３に記載の単離又は精製されたタンパク質。
15. タンパク質が融合タンパク質である、請求項１２〜１４のいずれか１項に記載の単離又は精製されたタンパク質。
16. タンパク質が組換え抗体である、請求項１２〜１５のいずれか１項に記載の単離又は精製されたタンパク質。
17. 請求項１〜８のいずれか１項に記載のＴＣＲ、請求項９〜１１のいずれか１項に記載のポリペプチド、又は請求項１２〜１６のいずれか１項に記載のタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、単離又は精製された核酸。
18. 核酸が配列番号２７〜３０のいずれか１つを含むヌクレオチド配列を含む、請求項１７に記載の核酸。
19. 請求項１７又は１８に記載の核酸のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含む、単離又は精製された核酸。
20. 請求項１７又は１８に記載の核酸のヌクレオチド配列にストリンジェントな条件でハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む、単離又は精製された核酸。
21. 請求項１７〜２０のいずれか１項に記載の核酸を含む、組換え発現ベクター。
22. ベクターがレトロウイルスベクターである、請求項２１に記載の組換え発現ベクター。
23. 請求項２１又は２２に記載の組換え発現ベクターを含む、単離されたホスト細胞。
24. 細胞が末梢血リンパ球（ＰＢＬ）である、請求項２３に記載の単離されたホスト細胞。
25. ＰＢＬがＣＤ８＋ Ｔ細胞又はＣＤ４＋ Ｔ細胞である、請求項２４に記載の単離されたホスト細胞。
26. 請求項２３〜２５のいずれか１項に記載の少なくとも１つのホスト細胞を含む細胞集団。
27. 請求項１〜８のいずれか１項に記載のＴＣＲの機能的部分に特異的に結合する、抗体又はその抗原結合部位であって、該機能的部分が配列番号１３〜１８のアミノ酸配列を含む、抗体又はその抗原結合部位。
28. 請求項１〜８のいずれか１項に記載のＴＣＲ、請求項９〜１１のいずれか１項に記載のポリペプチド、請求項１２〜１６のいずれか１項に記載のタンパク質、請求項１７〜２０のいずれか１項に記載の核酸、請求項２１若しくは２２に記載の組換え発現ベクター、請求項２３〜２５のいずれか１項に記載のホスト細胞、請求項２６に記載の細胞集団、又は請求項２７に記載の抗体若しくはその抗原結合部位、及び医薬上許容される担体を含む、医薬組成物。
29. （ａ）癌細胞を含むサンプルを、請求項１〜８のいずれか１項に記載のＴＣＲ、請求項９〜１１のいずれか１項に記載のポリペプチド、請求項１２〜１６のいずれか１項に記載のタンパク質、請求項１７〜２０のいずれか１項に記載の核酸、請求項２１若しくは２２に記載の組換え発現ベクター、請求項２３〜２５のいずれか１項に記載のホスト細胞、請求項２６に記載の細胞集団、又は請求項２７に記載の抗体若しくはその抗原結合部位と接触させ、それにより複合体を形成させること、及び
    （ｂ）該複合体を検出すること、
    を含む、癌の存在を検出する方法であって、該複合体の検出が癌の存在の指標となる、方法。
30. 請求項１〜８のいずれか１項に記載のＴＣＲ、請求項９〜１１のいずれか１項に記載のポリペプチド、請求項１２〜１６のいずれか１項に記載のタンパク質、請求項１７〜２０のいずれか１項に記載の核酸、請求項２１若しくは２２に記載の組換え発現ベクター、請求項２３〜２５のいずれか１項に記載のホスト細胞、請求項２６に記載の細胞集団、又は請求項２７に記載の抗体若しくはその抗原結合部位を含む、哺乳動物における癌を治療する又は予防するための医薬組成物。
31. 癌が、頭頸部癌、卵巣癌、肺癌、神経膠腫、メラノーマ、腎臓癌、リンパ腫、結腸癌、膵臓癌、乳癌、前立腺癌、滑膜肉腫、骨肉腫、平滑筋肉腫子宮、及び肝細胞癌からなる群より選択される、請求項２９に記載の方法又は請求項３０に記載の医薬組成物。
32. ホスト細胞がホストの自己の細胞である、又は細胞集団がホストの自己の細胞である、請求項２９若しくは３１に記載の方法又は請求項３０若しくは３１に記載の医薬組成物。
33. 5-アザ-2'-デオキシシチジン（ＤＡＣ）をさらに含む、請求項３０〜３２のいずれか１項に記載の医薬組成物。