JP2017505331A - 安定なペプチド製剤、および調製のための方法 - Google Patents

Abstract

非経口注射用の安定な製剤、ならびにその使用および調製のための方法が開示され、該製剤は、部分的揮発性緩衝剤、揮発性緩衝剤、強酸、もしくは強塩基またはそれらの任意の組み合わせを含む水性組成物から前もって乾燥されているペプチドまたはその塩、ならびに、非プロトン性極性溶媒を含み、乾燥した該ペプチドまたはその塩は、該ペプチドの最適な安定性および溶解性に対応する第一のイオン化プロファイルを有し、乾燥した該ペプチドまたはその塩は、非プロトン性極性溶媒中で再構成されており、かつ該非プロトン性極性溶媒中で第二のイオン化プロファイルを有し、該第一のイオン化プロファイルおよび該第二のイオン化プロファイルは、互いに1pH単位以内であるなど実質的に同一である。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、2014年2月6日提出の米国特許仮出願第61/936,675号の恩典を主張し、その内容は参照により本出願に組み入れられる。

I. 発明の分野
本発明は、薬学的製剤に関し、より詳細には改善された安定性を有するペプチドの薬学的製剤に関し、かつ、様々な疾患、状態、および障害を処置するためにそのような薬学的製剤を使用する方法に関する。

II. 関連技術の記載
糖尿病は現代社会における重大な健康問題である。インスリンはI型およびII型糖尿病両方のための決定的な処置である。過去20年にわたる研究により、インスリンの使用による糖の厳重な代謝的管理が、1型および2型糖尿病患者で合併症の発生率を下げるだけでなく、その発生を遅らせることが明らかにされている。残念ながら、厳重な糖管理を達成するのに必要な集中的インスリン療法は、低血糖すなわち「低い血中糖質」を発生するリスクの著しい上昇も伴う。

低血糖の症状は患者によって大きく変動するが、典型的には振戦、動悸、被刺激性、不安、神経質、空腹、頻脈、頭痛、および蒼白が含まれる。症状は典型的には、いったん血漿中の糖が正常レベルに回復すると治まる。低血糖が戻らなければ、血漿中の糖のさらなる低下が、中枢神経系における糖の枯渇、ならびに集中困難、不明瞭言語、かすみ目、体温低下、行動の変化、およびもし処置しなければ意識喪失、発作、および死亡の可能性などの関連する神経糖欠乏症状を引き起こすこともある。

一般に、低血糖は以下のとおり、軽度から中等度の低血糖としてまたは重度低血糖として定義することができる。
軽度から中等度の低血糖： 症状の重症度にかかわらず患者が自己処置できる症状発現、または血糖値が70mg/dL（3.9mmol/L）未満である任意の無症候性血糖測定値。
重度低血糖： 患者が自己処置できないため外部の援助が必要である低血糖の症状発現として実用的には定義される。典型的には、神経糖欠乏症状および認知障害は約50mg/dL（2.8mmol/L）の血糖値から始まる。

軽度から中等度の低血糖のほとんどの症状発現は、グルコース錠または食物（ジュース、ソフトドリンク、または甘いスナック）などの速効性炭水化物を摂取することにより、比較的容易に自己処置することができる。重度低血糖は、定義によれば、自己処置できず、したがって外部の介入が必要である。患者が嚥下可能であり、協力的であれば、ゲル剤またはハチミツもしくはゼリーなどの製品を頬の中に入れて使用することが適切である。患者が嚥下不可能な場合、グルカゴンを皮下または筋肉内注射により用いて、重度低血糖を処置する。

グルカゴンは、29アミノ酸長でありかつ膵臓のα細胞によって分泌される、天然ペプチドホルモンである。グルカゴンの主な機能は、ほとんどが肝臓によって仲介される、グリコーゲン分解および糖新生の両方を通じてグルコース産生を維持することである。グルカゴンはインスリンに対する主要な逆調節ホルモンであり、糖尿病患者における重度低血糖の第一選択の処置として用いられる。

緊急の状況で重度低血糖を処置するためのグルカゴン救急薬剤を作製するために、多くの試みがなされてきた。今のところ、Eli Lilly（Glucagon Emergency Kit）およびNovo Nordisk（GlucaGen(登録商標) HypoKit）製の、米国内で現在入手可能な2つのグルカゴンキットがある。いずれの製品も凍結乾燥したグルカゴンのバイアルと水性希釈剤をあらかじめ充填したシリンジを組み合わせている。凍結乾燥したグルカゴンは、緊急の状況で使用が難しい複雑な手技を用いて再構成しなければならない。これらの製品は、グルカゴンが水に難溶性であるため、大量の注射を供給することにもなる。最近、より安定なグルカゴン類似体を作製するため、および/または粉末注射によるグルカゴンの送達を改善するために、水溶液中のグルカゴンの安定性を改善する試みがなされている。

いくらかの進歩があったが、緊急の状況で重度低血糖を処置するための、扱いやすいグルカゴン救急薬剤がいまだに必要である。そのようなグルカゴン救急薬剤は糖尿病患者および/またはその介護者が常時携帯する必要があり、したがって、非冷蔵温度（25〜30℃）で長期間（＞2年）安定である必要があると考えられる。理想的には、それは一般の人々にとって投与が簡単であり、低血糖患者に投与する前に過剰な処理/再構成を要求しない必要もあると考えられる。グルカゴン救急薬剤は、0℃〜30℃の範囲の温度を含む広範囲の温度で機能的である必要もあると考えられる。

そのような必要性および他の必要性に応えるために、本発明は、軽度、中等度、または重度の低血糖を処置するために安定なグルカゴン救急製剤ならびにこの安定なグルカゴン製剤を使用する方法を提供する。都合のよいことに、長期保存および/または長時間にわたる送達を可能にするために、グルカゴンは本発明の製剤中で安定化される。したがって、本発明のグルカゴン製剤は、非冷蔵温度（例えば、25から30℃などの室温）で長期間安定であり、投与するのに再構成の必要がなく簡単であり、0から30℃または0から-30℃、好ましくは0から30℃の範囲の温度を含む、広範囲の温度で機能的である。

特に、本発明の製剤化技術はプラットフォーム製剤化技術であり、したがって、グルカゴンのように水性環境で安定性および溶解性が低いか、または限られている、多くの治療ペプチドを送達するために広く適用可能である。特に、DMSO、NMP、酢酸エチル、またはそれらの混合物などの非プロトン性極性溶媒によるペプチドの高濃度の非水性溶液への製剤化は、重要なクラスのペプチド治療薬のための価値ある送達プラットフォームである。加えて、本発明の製剤化技術は、同一溶液中の2つまたはそれ以上のペプチドの送達にも広く適用可能であり、それにより併用薬物送達製剤の調製を可能にする。

本発明の1つの局面において、非経口注射用の安定な製剤が開示される。または、皮膚への局所適用などによる経皮送達を用いることができる。製剤は、（a）部分的揮発性緩衝剤、揮発性緩衝剤、強酸、もしくは強塩基またはそれらの任意の組み合わせを含む水性組成物から前もって乾燥されているペプチドまたはその塩であって、乾燥したペプチドまたはその塩が、ペプチドの最適な安定性および溶解性に対応する第一のイオン化プロファイルを有する、ペプチドまたはその塩；および、乾燥したペプチドまたはその塩が、非プロトン性極性溶媒中で再構成されており、かつ非プロトン性極性溶媒中で第二のイオン化プロファイルを有する、非プロトン性極性溶媒を含み、第一のイオン化プロファイルおよび第二のイオン化プロファイルは、互いに1pH単位以内であるなど実質的に同一である。乾燥ペプチドのイオン化状態を測定するための1つの非限定的な方法は、乾燥したペプチドを非緩衝化水中で再構成する段階、および、再構成されたペプチドのpHをpH紙または較正したpH電極などのpH指示器で測定する段階を含む。非プロトン性極性溶媒中で再構成されているペプチドのイオン化状態を測定するための1つの非限定的な方法は、少なくとも20％の水を非プロトン性極性溶媒に加える段階、および、pHをpH指示器で測定する段階を含む。ペプチドまたはその塩は、前述の乾燥段階の前にペプチドが水性組成物中に存在する場合、第三のイオン化プロファイルを有し得る。第三のイオン化プロファイルは、第一のイオン化プロファイルまたは第二のイオン化プロファイルと少なくとも1pH単位異なり得る（例えば、水性組成物は、水性組成物のpHがその乾燥中に対イオンもしくは緩衝剤構成要素または両方の損失を補償するように製剤化されることができる）。または、第三のイオン化プロファイルは、第一のイオン化プロファイルまたは第二のイオン化プロファイルと互いに1pH単位以内であるなど実質的に同一であり得る。該乾燥段階前の水性組成物中のペプチドのイオン化状態を測定するための1つの非限定的な方法は、水溶液のpHをpH指示器で測定することである。いくつかの特定の局面において、水性組成物は、該水性組成物の乾燥中に第三のイオン化プロファイルが第一のイオン化プロファイルへとシフトするように製剤化されている。乾燥したペプチドは、非プロトン性極性溶媒中に部分的または完全に可溶化されることができる。完全な可溶化は、乾燥したペプチドを非プロトン性極性溶媒に、該ペプチドの溶解性の限界まで加えることにより得られる。部分的可溶化のために、ペプチドのある割合が非プロトン性極性溶媒中に可溶化されかつある割合が該非プロトン性極性溶媒中に懸濁または分散されるように、懸濁液およびペーストが形成されることができる。水性組成物は部分的揮発性緩衝剤を含み得、その非限定的な例には酢酸ナトリウムもしくはリン酸アンモニウムまたはそれらの組み合わせが含まれる。水性組成物は揮発性緩衝剤を含み得、その非限定的な例には、酢酸アンモニウム、ギ酸アンモニウム、炭酸アンモニウム、炭酸水素アンモニウム、酢酸ピリジン、ギ酸ピリジン、もしくは酢酸トリエチルアンモニウムまたはそれらの組み合わせが含まれる。水性組成物は強酸を含み得、その非限定的な例には塩酸が含まれる。水性組成物は強塩基を含み得、その非限定的な例には、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム、もしくは水酸化カルシウムまたはそれらの組み合わせが含まれる。特定の局面において、水性組成物はいかなる緩衝剤も含まないか、または不揮発性緩衝剤を含まない。または、水性組成物は異なる緩衝剤の混合物を含み得る。1つの非限定的な局面において、混合物には、不揮発性緩衝剤の混合物、部分的揮発性緩衝剤の混合物、揮発性緩衝剤の混合物、不揮発性緩衝剤および部分的揮発性緩衝剤の混合物、不揮発性緩衝剤および揮発性緩衝剤の混合物、部分的揮発性緩衝剤および揮発性緩衝剤の混合物、または不揮発性緩衝剤、部分的揮発性緩衝剤、ならびに揮発性緩衝剤の混合物が含まれ得る。乾燥段階は、凍結乾燥、噴霧乾燥、脱水、薄膜凍結、噴霧凍結乾燥、またはそれらの任意の組み合わせによって実施され得る。製剤の水分または水含有量は15％、10％、5％、1％、またはそれ未満より低いことができる。非プロトン性極性溶媒の非限定的な例には、ジメチルスルホキシド（DMSO）、n-メチルピロリドン（NMP）、酢酸エチル、ジメチルホルムアミド（DMF）、炭酸プロピレン、またはそれらの混合物が含まれる。製剤は、製剤の凝固点を降下させる共溶媒（例えば、エタノール、プロピレングリコール、グリセロール、およびそれらの混合物）をさらに含むことができる。製剤は、安定化賦形剤（例えば、糖質、デンプン、またはそれらの混合物）をさらに含むことができる。好ましい局面において、製剤中のペプチドはグルカゴンまたはその塩である。ペプチドがグルカゴンまたはその塩である場合に、第一のイオン化プロファイルまたは第二のイオン化プロファイルは、約2〜3のpH範囲を有する水溶液中に可溶化された場合のグルカゴンのイオン化プロファイルに対応し得る。第三のイオン化プロファイルは、約2〜3のpH範囲を有する水溶液中に可溶化された場合のグルカゴンのイオン化プロファイルに対応し得るか、あるいは3超、または3〜14超、または3〜10超、または3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、もしくは14超、またはその中の任意の範囲のpH範囲を有する水溶液中に可溶化された場合のグルカゴンのイオン化プロファイルに対応し得る。または、第三のイオン化プロファイルは、2未満、または2〜0未満、または2〜1もしくは1もしくは0未満、またはその中の任意の範囲のpH範囲を有する水溶液中に可溶化された場合のグルカゴンのイオン化プロファイルに対応し得る。また、第一のイオン化プロファイルは、乾燥したペプチドまたはその塩を極性非プロトン性溶媒中で再構成する前に、該乾燥したペプチドまたはその塩を有機溶媒と有機相緩衝剤とを含む有機溶媒系中で再構成することにより維持することができる。乾燥したペプチドまたはその塩は、有機溶媒系を極性非プロトン性溶媒と混合することにより極性非プロトン性溶媒中で再構成することができる。有機溶媒系は極性非プロトン性溶媒から、当技術分野において公知の分離法によって分離することができる。有機溶媒系は、実質的に無水（例えば、1重量％未満、0.5重量％未満、もしくは0.1重量％未満の水）または無水であり得る。安定な製剤は、シリンジ、ペン型注射装置、オートインジェクター装置、またはポンプ装置に含まれ得る。グルカゴン以外のペプチドを用いることもでき、その非限定的な例には、プラムリンチド、インスリン、リュープロリド、LHRHアゴニスト、副甲状腺ホルモン（PTH）、アミリン、ボツリヌス毒素、ヘマタイド、アミロイドペプチド、コレシスチキニン（cholecystikinin）、コノトキシン、胃抑制ペプチド、インスリン様成長因子、成長ホルモン放出因子、抗菌因子、グラチラマー、グルカゴン様ペプチド-1（GLP-1）、GLP-1アゴニスト、エキセナチド、その類似体、およびそれらの混合物が含まれる。さらに、製剤は少なくとも2、3、4個、またはそれ以上の異なるペプチドを含むことができ、各ペプチドはその最適な安定性および溶解性に対応するイオン化プロファイルを有する。いくつかの態様において、安定な製剤を少なくとも第二、第三、第四、および/もしくは第五のペプチドまたはその塩と同時製剤化することができる。第二、第三、第四、もしくは第五のペプチドまたはその塩はそれぞれ、互いに異なり得、かつ第一のペプチドと異なり得る。第二、第三、第四、もしくは第五のペプチドまたはその塩は、第二、第三、第四、または第五の水溶液または組成物から乾燥されることができ、乾燥した第二、第三、第四、または第五のペプチドはそれぞれ、第二、第三、第四、または第五のペプチドを第二、第三、第四、または第五の水溶液または組成物に溶解した場合の第二、第三、第四、または第五のペプチドのイオン化プロファイルとほぼ等しいイオン化プロファイルを有する。該第二、第三、第四、または第五の水溶液または組成物のpHは、第二、第三、第四、または第五のペプチドに最適な安定性および溶解性のpHとほぼ等しいものであり得る。第二、第三、第四、または第五のペプチドは、非プロトン性極性溶媒中に部分的または完全に可溶化されることができる。

さらに別の局面において、本発明の製剤を、（a）ペプチドまたはその塩と部分的揮発性緩衝剤、揮発性緩衝剤、強酸、もしくは強塩基またはそれらの任意の組み合わせとを含む水性組成物を、乾燥したペプチド粉末になるまで乾燥させる段階であって、乾燥したペプチド粉末が、ペプチドの最適な安定性および溶解性に対応する第一のイオン化プロファイルを有する、段階；ならびに（b）乾燥したペプチド粉末を非プロトン性極性溶媒中で再構成する段階であって、再構成された乾燥したペプチド粉末が、非プロトン性極性溶媒中で第二のイオン化プロファイルを有し、第一のイオン化プロファイルおよび第二のイオン化プロファイルが、互いに1pH単位以内であるなど実質的に同一である、段階によって作製することができる。ペプチドまたはその塩は、乾燥前の水性組成物中で第三のイオン化プロファイルを有し得、第三のイオン化プロファイルは、第一のイオン化プロファイルまたは第二のイオン化プロファイルと少なくとも1pH単位異なる。水性組成物が乾燥されると第三のイオン化プロファイルが第一のイオン化プロファイルへとシフトするように、水性組成物は製剤化されている。ペプチドまたはその塩は、乾燥前の水性組成物中で第三のイオン化プロファイルを有し得、第三のイオン化プロファイルは第一のイオン化プロファイルまたは第二のイオン化プロファイルと互いに1pH単位以内であるなど実質的に同一である。水性組成物が乾燥されると該水性組成物のpHが対イオンもしくは緩衝剤構成要素または両方の損失を補償するように、水性組成物は製剤化されることができる。ペプチドまたはその塩はグルカゴンであり得、水性組成物は乾燥前に約2〜3のpH範囲を有し得、かつ第一のイオン化プロファイルもしくは第二のイオン化プロファイルまたは両方のイオン化プロファイルは、該水性組成物中に可溶化された場合のグルカゴンのイオン化プロファイルに対応する。第三のイオン化プロファイルは、水性組成物中に可溶化された場合のグルカゴンのイオン化プロファイルに対応し得る。水性組成物は乾燥前に3〜7超のpH範囲を有し得、かつ第一のイオン化プロファイルもしくは第二のイオン化プロファイルまたは両方のイオン化プロファイルは、約2〜3のpH範囲を有する水性組成物中に可溶化された場合のグルカゴンのイオン化プロファイルに対応する。いくつかの場合に、および段階（b）の前に、乾燥したペプチド粉末は、有機溶媒と有機相緩衝剤とを含む有機溶媒系中で再構成されることができ、有機相緩衝剤のpHは、ペプチド粉末がその第一のイオン化プロファイルを維持するように、またはペプチド粉末のイオン化プロファイルがその第一のイオン化プロファイルに再調整されるように設定される。二相系が得られるように有機溶媒系は非プロトン性極性溶媒と組み合わせられることまたは混合されることができ、第一の相は極性非プロトン性溶媒と懸濁されたもしくは部分的に懸濁された乾燥したペプチド粉末の少なくとも一部とを含みかつ第二の相は有機溶媒と有機緩衝剤とを有する有機溶媒系を含む。有機溶媒系は、実質的に無水であり得るか、または無水であり得る。有機溶媒の非限定的な例には、ヘキサン、ヘプタン、ドデカン、ヘキサデカン、エチルエーテル、イソプロピルエーテル、ブチルエーテル、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、トルエン、ピリジン、アセトン、2-ペンタノン、2-ヘプタニン（2-heptanine）、またはそれらの任意の組み合わせが含まれる。有機相緩衝剤の非限定的な例には、トリフェニル酢酸、トリイソオクチルアミン、またはそれらの任意の組み合わせが含まれる。

また開示されるのは、（a）ペプチドの最適な安定性および溶解性に対応する第一のイオン化プロファイルを有し、該第一のイオン化プロファイルが、有機溶媒および有機相緩衝剤を含む有機溶媒系により設定されている、ペプチドまたはその塩；ならびに（b）ペプチドまたはその塩を含み、ペプチドまたはその塩が非プロトン性極性溶媒中で第二のイオン化プロファイルを有する、非プロトン性極性溶媒を含み、第一のイオン化プロファイルおよび第二のイオン化プロファイルが、互いに1pH単位以内であるなど実質的に同一である、非経口注射用または経皮投与用の安定な製剤である。（a）からのペプチドまたはその塩は、部分的揮発性緩衝剤、揮発性緩衝剤、強酸、強塩基、もしくは不揮発性緩衝剤またはそれらの任意の組み合わせを含む水性組成物から前もって乾燥されていてもよい。安定な製剤は少なくとも二相を含み得、第一の相は、ペプチドまたはその塩を含む非プロトン性極性溶媒を含み、かつ第二の相は有機溶媒系を含む。有機溶媒系は、実質的に無水であり得るか、または無水であり得る。有機溶媒の非限定的な例には、ヘキサン、ヘプタン、ドデカン、ヘキサデカン、エチルエーテル、イソプロピルエーテル、ブチルエーテル、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、トルエン、ピリジン、アセトン、2-ペンタノン、2-ヘプタニン、またはそれらの任意の組み合わせが含まれる。有機相緩衝剤の非限定的な例には、トリフェニル酢酸、トリイソオクチルアミン、またはそれらの任意の組み合わせが含まれる。安定な製剤は、シリンジ、ペン型注射装置、オートインジェクター装置、またはポンプ装置に含まれ得る。さらに、製剤は第二のペプチドまたはその塩（または第三もしくは第四もしくは第五もしくはそれ以上のペプチド）を含み得る。さらなるペプチドは第一のペプチドと異なり得る。第二のもの（ならびに第三、第四、第五、またはそれ以上のペプチド）は、第二のペプチドの最適な安定性および溶解性に対応する第三のイオン化プロファイルを有し得、該第三のイオン化プロファイルは、第二の有機溶媒と第二の有機相緩衝剤とを含む第二の有機溶媒系により設定されている。

別の局面において、（a）有機溶媒、有機相緩衝剤を含む有機溶媒系と、ペプチドの最適な安定性および溶解性に対応する第一のイオン化プロファイルを有するペプチドまたはその塩とを含む、第一の組成物；ならびに（b）ペプチドまたはその塩を部分的または完全に可溶化することができかつ第一のイオン化プロファイルを維持することができる非プロトン性極性溶媒を含む、第二の組成物を含む、キットが開示される。第一の組成物および第二の組成物はそれぞれ第一の容器および第二の容器に含まれ得る。ペプチドまたはその塩は、部分的揮発性緩衝剤、揮発性緩衝剤、強酸、強塩基、もしくは不揮発性緩衝剤またはそれらの任意の組み合わせを含む水性組成物から前もって乾燥されているようなものであり得る。第一のイオン化プロファイルは、水溶液から該ペプチドまたはその塩を乾燥させることによって得ることができる。第一のイオン化プロファイルは、第一の組成物から得ることができる。ペプチドまたはその塩は有機溶媒系中に懸濁されることまたは部分的に懸濁されることができる。第一の組成物は、実質的に無水であり得るか、または無水であり得る。

別の局面において、（a）ペプチドが、乾燥（例えば、凍結乾燥による）されるとペプチド含有粉末を生成するようにpHが調節されている水溶液から、粉末になるまで乾燥されており、粉末中のペプチドのイオン化状態が、水溶液中のペプチドのイオン化状態とほぼ等しく、該水溶液のpHが、ペプチドに最適な安定性および溶解性のpHとほぼ等しい、ペプチドまたはその塩；ならびに（b）ペプチドが、非プロトン性極性溶媒中でいったん再構成されると、粉末中のペプチドのイオン化状態とほぼ等しいイオン化状態を維持する、非プロトン性極性溶媒を含む、非経口注射用の安定な製剤が開示される。

さらに別の局面において、本発明は、（a）第一のペプチドが水溶液から乾燥されており、かつ、乾燥した第一のペプチドが、水溶液中に溶解している場合のペプチドのイオン化プロファイルとほぼ等しいイオン化プロファイルを有し、該水溶液のpHが、第一のペプチドに最適な安定性および溶解性のpHとほぼ等しい、第一のペプチドまたはその塩；（b）第二のペプチドが第二の水溶液から乾燥されており、乾燥した第二のペプチドが、水溶液中に溶解している場合のペプチドのイオン化プロファイルとほぼ等しいイオン化プロファイルを有し、該水溶液のpHが、第二のペプチドに最適な安定性および溶解性のpHとほぼ等しい、第二のペプチドまたはその塩；ならびに（c）非プロトン性極性溶媒を含む、非経口注射用の安定な製剤を提供する。製剤の水分または水含有量は、15％、10％、5％、1％、またはそれ未満より低いことができる。第一のペプチドは、非プロトン性極性溶媒中での再構成後、第一のペプチド粉末のイオン化プロファイルとほぼ等しい第一のイオン化プロファイルを維持し、かつ乾燥した第二のペプチドは、非プロトン性極性溶媒中での再構成後、第二のペプチド粉末のイオン化プロファイルとほぼ等しい第二のイオン化プロファイルを維持する。第三、第四、第五、またはそれ以上のペプチドも、第一および第二のペプチドと同時製剤化することができる。各ペプチドは異なっていてもよい（例えば、第一のものは第二、第三、第四、および第五のペプチドと異なっていてもよく、第二のものは第三、第四、および第五のペプチドと異なっていてもよく、他も同様である）。また、第一のペプチドと同時製剤化したさらなるペプチドは、非プロトン性極性溶媒中に部分的または完全に可溶化されることができる。

さらに別の局面において、本発明は、ペプチドまたはその塩（例えば、その塩酸塩または酢酸塩）；および非プロトン性極性溶媒を含み、製剤の水分含有量が15、10、5、1％、またはそれ未満より低い、非経口注射用の安定な製剤を提供する。

本明細書に記載の安定な製剤は、水性環境中で限られたまたは乏しい安定性または溶解性を有する任意のペプチドの非経口注射のために有用である。したがって、いくつかの態様において、ペプチド（もしくは第一のペプチドおよび第二のペプチドのそれぞれ）またはその塩は、グルカゴン、プラムリンチド、インスリン、リュープロリド、LHRHアゴニスト、副甲状腺ホルモン（PTH）、アミリン、ボツリヌス毒素、ヘマタイド、アミロイドペプチド、コレシスチキニン、コノトキシン、胃抑制ペプチド、インスリン様成長因子、成長ホルモン放出因子、抗菌因子、グラチラマー、グルカゴン様ペプチド-1（GLP-1）、GLP-1アゴニスト、エキセナチド、その類似体、およびそれらの混合物からなる群より選択される。好ましい態様において、ペプチドはグルカゴンまたはグルカゴン類似体またはグルカゴンペプチド様物質である。別の態様において、ペプチドは副甲状腺ホルモンである。さらに別の態様において、ペプチドはリュープロリドである。さらに別の態様において、ペプチドはグラチラマーである。さらに別の局面において、第一のペプチドはプラムリンチドであり、第二のペプチドはインスリンである。さらに別の態様において、第一のペプチドはグルカゴンであり、第二のペプチドはエキセナチドである。

ある特定の局面において、ペプチド（または、製剤が2つまたはそれ以上のペプチドを含む態様において、ペプチドのそれぞれ）は、水溶液に溶解され、乾燥ペプチド粉末になるまで乾燥され、次いで非プロトン性極性溶媒中で再構成されることができる。水溶液からペプチドが乾燥されるこの水溶液のpHは、乾燥（例えば、凍結乾燥による）後に粉末中のペプチドが、水溶液中のペプチドのイオン化状態とほぼ等しいイオン化状態を有し、該水溶液のpHが、ペプチドに最適な安定性および溶解性のpHとほぼ等しくなるように、調節することができる。水溶液からペプチドが乾燥されるこの水溶液は1つまたは複数の緩衝剤を含んでいてもよく、緩衝剤は不揮発性緩衝剤、部分的揮発性緩衝剤、揮発性緩衝剤、またはそれらの混合物であってもよい。

水溶液が不揮発性緩衝剤を含む場合、水溶液中のペプチドのイオン化状態は粉末中のペプチドのイオン化状態とほぼ等しくてもよい（すなわち、「ほぼ等しい」とは、pHXの水溶液から乾燥したペプチドのイオン化プロファイルが水溶液中のペプチドのイオン化プロファイルに対応し、該水溶液のpHとpHXとの間の差が1pH単位以内（または1pH単位）であることを意味する）。適切な不揮発性緩衝剤には、グリシン緩衝剤、クエン酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、およびそれらの混合物が含まれるが、それらに限定されるわけではない。1つの好ましい態様において、不揮発性緩衝剤はグリシン緩衝剤である。別の好ましい態様において、不揮発性緩衝剤はクエン酸緩衝剤およびリン酸緩衝剤の混合物である。製剤が2つまたはそれ以上のペプチドを含む、いくつかの態様において、第一の不揮発性緩衝剤および第二の不揮発性緩衝剤は同一である。製剤が2つまたはそれ以上のペプチドを含む、いくつかの態様において、第一の不揮発性緩衝剤および第二の不揮発性緩衝剤は異なる。水溶液が部分的揮発性緩衝剤または揮発性緩衝剤を含む場合、水溶液中のペプチドのイオン化状態は粉末中のペプチドのおよそのイオン化状態に等しくなくてもよい（すなわち、「等しくない」とは、pHXの水溶液から乾燥したペプチドのイオン化プロファイルが水溶液中のペプチドのイオン化プロファイルに対応し、該水溶液のpHとpHXとの間の差が1pH単位よりも大きいことを意味する）。製剤が2つまたはそれ以上のペプチドを含む、いくつかの態様において、第一の緩衝剤および第二の緩衝剤は同一である。製剤が2つまたはそれ以上のペプチドを含む、いくつかの態様において、第一の緩衝剤および第二の緩衝剤は異なる。水溶液からペプチドが乾燥されるこの水溶液が緩衝剤を含まずかつpHが強酸および/または強塩基（例えば、HClおよび/またはNaOH）を用いて調節される場合、粉末中のペプチドのイオン化状態は、水溶液からペプチドが乾燥されたこの水溶液中のペプチドのイオン化状態とほぼ等しいこともあるかまたはほぼ等しくないこともある。したがって、水溶液からペプチドが乾燥されるこの水溶液の構成要素に応じて、粉末中のペプチドのイオン化状態は、水溶液からペプチドが乾燥されたこの水溶液中のペプチドのイオン化状態とほぼ等しいこともあるかまたはほぼ等しくないこともある。

さらに他の態様において、有機溶媒（例えば、ヘキサン、ヘプタン）中での乾燥したペプチドの再構成後に、有機相緩衝剤（十分に疎水性でありイオン化型でも有機相に可溶性である化合物から調製）の使用によってペプチドのイオン化状態を調節してもよい。そのような化合物の非限定的には、Blackwood, et al, 1994（Blackwood, et al. (1994) 'Organic phase buffers' control biocatalyst activity independent of initial aqueous pH, Biochimica et Biophysica Acta, Volume 1206, pages 161 - 165）に記載され、参照により本明細書に組み入れられる、トリフェニル酢酸およびトリイソオクチルアミンが含まれる。有機溶媒は、DMSOなどの非プロトン性極性溶媒で置き換えることができ、ペプチドは非プロトン性極性溶媒中に分配してもよく、有機相緩衝剤はより疎水性の有機溶媒中に分配してもよい。そのような態様において、粉末中のペプチドのイオン化状態は、水溶液中のペプチドのイオン化状態とほぼ等しくなくてもよく、該水溶液のpHはペプチドに最適な安定性および溶解性のpHとほぼ等しい。有機溶媒（例えば、ヘキサン、ヘプタン）中での再構成後、ペプチドのイオン化状態は、水溶液のpHが有機相緩衝剤の使用によってペプチドに最適な安定性および溶解性のpHとほぼ等しい該水溶液中のペプチドのイオン化状態とほぼ等しくなるように、有機相緩衝剤を用いて調節されてもよい。

本発明のいくつかの製剤において、ペプチドを安定化賦形剤と混合し、次いで乾燥ペプチド粉末になるまで乾燥させる。適切な安定化賦形剤には、糖質、デンプン、およびそれらの混合物が含まれるが、それらに限定されるわけではない。いくつかの態様において、糖質はトレハロースである。いくつかの態様において、デンプンはヒドロキシエチルデンプン（HES）である。いくつかの態様において、安定化賦形剤は製剤中に、約1％（w/v）から約60％（w/v）、約1％（w/v）から約50％（w/v）、約1％（w/v）から約40％（w/v）、約1％（w/v）から約30％（w/v）、約1％（w/v）から約20％（w/v）、約5％（w/v）から約60％（w/v）、約5％（w/v）から約50％（w/v）、約5％（w/v）から約40％（w/v）、約5％（w/v）から約30％（w/v）、約5％（w/v）から約20％（w/v）、約10％（w/v）から約60％（w/v）、約10％（w/v）から約50％（w/v）、約10％（w/v）から約40％（w/v）、約10％（w/v）から約30％（w/v）、または約10％（w/v）から約20％（w/v）の範囲の量で存在する。製剤が2つのペプチドを含む、いくつかの態様において、第一の水溶液中の第一のペプチドおよび第二の水溶液中の第二のペプチドはいずれも安定化賦形剤をさらに含み、第一の水溶液中に第一のペプチドと共に含まれる安定化賦形剤、および第二の水溶液中に第二のペプチドと共に含まれる安定化賦形剤は同一である。製剤が2つのペプチドを含む、他の態様において、第一の水溶液中の第一のペプチドおよび第二の水溶液中の第二のペプチドはいずれも安定化賦形剤をさらに含み、第一の水溶液中に第一のペプチドと共に含まれる安定化賦形剤、および第二の水溶液中に第二のペプチドと共に含まれる安定化賦形剤は異なる。

いったん前述の賦形剤を含む可能性のある1つまたは複数のペプチドが粉末になるまで乾燥されると、乾燥したペプチド粉末は非プロトン性極性溶媒中に溶解または再構成される。非プロトン性極性溶媒の例には、下記が含まれるが、それらに限定されるわけではない：ジメチルスルホキシド（DMSO）、ジメチルホルムアミド（DMF）、酢酸エチル、n-メチルピロリドン（NMP）、ジメチルアセトアミド（DMA）、炭酸プロピレン、およびそれらの混合物。ジメチルスルホキシド（DMSO）、n-メチルピロリドン（NMP）、酢酸エチル、ならびに、DMSO、NMP、および酢酸エチルのうちの1つまたは複数の混合物が特に好ましい非プロトン性極性溶媒である。好ましい態様において、非プロトン性極性溶媒はDMSOである。別の好ましい態様において、非プロトン性極性溶媒はDMSOおよびNMPの混合物である。さらに別の好ましい態様において、非プロトン性極性溶媒はDMSOおよび酢酸エチルの混合物である。

いくつかの態様において、非プロトン性極性溶媒（例えば、ジメチルスルホキシド（DMSO）、ジメチルホルムアミド（DMF）、酢酸エチル、n-メチルピロリドン（NMP）、ジメチルアセトアミド（DMA）、炭酸プロピレン、またはそれらの混合物）および製剤の凝固点を降下させる共溶媒の混合物中で1つまたは複数のペプチドを再構成する。いくつかの態様において、共溶媒は製剤の凝固点を、少なくとも約5℃、少なくとも約10℃、少なくとも約15℃、または少なくとも約20℃降下させる。いくつかの態様において、共溶媒は製剤の凝固点を、約3℃まで、約2℃まで、約1℃まで、または約0℃もしくはそれ未満まで降下させる。いくつかの態様において、共溶媒は極性プロトン性溶媒である。好ましい態様において、共溶媒はエタノール、プロピレングリコール（PG）、グリセロール、およびそれらの混合物より選択される。いくつかの態様において、共溶媒は、製剤中に約10％（w/v）から約50％（w/v）、約10％（w/v）から約40％（w/v）、約10％（w/v）から約30％（w/v）、約10％（w/v）から約25％（w/v）、約15％（w/v）から約50％（w/v）、約15％（w/v）から約40％（w/v）、約15％（w/v）から約30％（w/v）、または約15％（w/v）から約25％（w/v）の範囲の量で存在する。

水溶液からペプチドが乾燥されるこの水溶液のpHは、粉末中のペプチドが水溶液中のペプチドのイオン化プロファイルとほぼ等しいイオン化プロファイルを有する粉末を生じるように選択されることができ、該水溶液のpHはペプチドに最適な安定性および溶解性のpHとほぼ等しい。このペプチド粉末を非プロトン性極性溶媒（例えば、DMSO）中で再構成する場合、ペプチドのイオン化プロファイルは粉末中のペプチドのイオン化状態とほぼ等しい。したがって、好ましい態様において、製剤中のペプチドのイオン化状態は水溶液中のペプチドのイオン化状態とほぼ等しいべきであり、pHは、最適な安定性、最大の溶解性、および最小の分解を確実にするように、約2.0から約3.0である。他の態様において、製剤中のペプチドのイオン化状態は水溶液中のペプチドのイオン化状態とほぼ等しいべきであり、該水溶液のpHは、最適の安定性、最大の溶解性、および最小の分解を確実にするように、約3.0から約5.0である。他の態様において、製剤中のペプチドのイオン化状態は水溶液中のペプチドのイオン化状態とほぼ等しいべきであり、該水溶液のpHは、最適の安定性、最大の溶解性、および最小の分解を確実にするように、約4.0から約5.0である。さらに他の態様において、製剤中のペプチドのイオン化状態は水溶液中のペプチドのイオン化状態とほぼ等しいべきであり、該水溶液のpHは、最適の安定性、最大の溶解性、および最小の分解を確実にするように、約4.0から約6.0である。さらに他の態様において、製剤中のペプチドのイオン化状態は水溶液中のペプチドのイオン化状態とほぼ等しいべきであり、該水溶液のpHは、最適の安定性、最大の溶解性、および最小の分解を確実にするように、約6.0から約8.0である。製剤が2つのペプチドを含む、いくつかの態様において、製剤中の第一のペプチドのイオン化状態は水溶液中のペプチドのイオン化状態とほぼ等しいべきであり、該水溶液のpHは、最適の安定性、最大の溶解性、および最小の分解を確実にするように、約4.0から約6.0であり、かつ第二のペプチドのイオン化状態は水溶液中のペプチドのイオン化状態とほぼ等しいべきであり、該水溶液のpHは、最適の安定性、最大の溶解性、および最小の分解を確実にするように、約1.5から約2.5、または約6.0から約8.0である。製剤が2つのペプチドを含む、いくつかの態様において、製剤中の第一のペプチドのイオン化状態は水溶液中のペプチドのイオン化状態とほぼ等しいべきであり、該水溶液のpHは、最適の安定性、最大の溶解性、および最小の分解を確実にするように、約3.0から約5.0であり、かつ第二のペプチドのイオン化状態は水溶液中のペプチドのイオン化状態とほぼ等しいべきであり、該水溶液のpHは、最適の安定性、最大の溶解性、および最小の分解を確実にするように、約1.5から約2.5、または約6.0から約8.0である。製剤が2つのペプチドを含む、他の態様において、第一のペプチドのイオン化状態は水溶液中のペプチドのイオン化状態とほぼ等しいべきであり、該水溶液のpHは、最適の安定性、最大の溶解性、および最小の分解を確実にするように、約2.0から約3.0であり、かつ第二のペプチドのイオン化状態は水溶液中のペプチドのイオン化状態とほぼ等しいべきであり、該水溶液のpHは、最適の安定性、最大の溶解性、および最小の分解を確実にするように、約4.0から約5.0である。当業者には、安定性が最適であり、溶解性が最大であり、かつ分解が最小であるペプチドを得るための最適pHをいかにして決定するかは容易に明らかであろう。

1つまたは複数のペプチドの任意の適切な投薬量を本発明の安定な製剤に製剤化することができる。一般に、ペプチド（または、2つまたはそれ以上のペプチドを含む態様においては、各ペプチド）は製剤中に、約0.5mg/mLから約100mg/mLの範囲の量で存在する。いくつかの態様において、ペプチドは製剤中に、約10mg/mLから約60mg/mLの範囲の量で存在する。他の態様において、ペプチドは製剤中に、約20mg/mLから約50mg/mLの範囲の量で存在する。さらに他の態様において、ペプチドは製剤中に、約5mg/mLから約15mg/mLの範囲の量で存在する。さらに他の態様において、ペプチドは製剤中に、約0.5mg/mLから約2mg/mLの範囲の量で存在する。さらに他の態様において、ペプチドは製剤中に、約1mg/mLから約50mg/mLの範囲の量で存在する。ここでも、当業者には、ペプチド投薬量は用いるペプチドおよび処置する疾患、障害、または状態に応じて変動しうることが容易に明らかであろう。

いくつかの態様において、本発明の製剤は抗酸化剤をさらに含む。他の態様において、製剤はキレート剤をさらに含む。さらに他の態様において、本発明の製剤は保存剤をさらに含む。

別の局面において、本発明は、疾患、状態、または障害を処置、軽減、または防止するのに有効な量の本明細書に記載の安定なペプチド製剤を対象に投与することにより処置、軽減、または防止しうる疾患、状態、または障害を処置する方法を提供する。いくつかの態様において、疾患、状態、または障害は低血糖である。疾患、状態、または障害が低血糖である、いくつかの態様において、方法は、低血糖を処置するのに有効な量の本発明の安定なグルカゴン製剤を投与する段階を含む。いくつかの態様において、疾患、状態、または障害は糖尿病である。疾患、状態、または障害が糖尿病である、いくつかの態様において、方法は、糖尿病を処置するのに有効な量の本発明の安定なインスリンおよびプラムリンチド製剤を投与する段階を含む。他の局面において、疾患、状態、または障害は先天性過インスリン症、インスリノーマ、または過剰なレベルのインスリンが低血糖を誘発し得る任意の他の障害である。

さらに別の局面において、本発明は、水溶液からペプチドを乾燥ペプチド粉末になるまで乾燥させる段階であって、粉末中のペプチドが、水溶液中のペプチドのイオン化プロファイルとほぼ等しいイオン化プロファイルを有し、該水溶液のpHが、ペプチドに最適な安定性および溶解性のpHとほぼ等しい、段階；ならびに、乾燥ペプチド粉末を非プロトン性極性溶媒を用いて再構成し、それにより安定な製剤を作製する段階であって、安定な製剤の水分含有量が5％未満である、段階を含む、非経口注射用の安定な製剤を作製するための方法を提供する。いくつかの態様において、乾燥したペプチド粉末は、水溶液からペプチドが乾燥されたこの水溶液中のペプチドのイオン化プロファイルとほぼ等しいイオン化プロファイルを有し、かつ、乾燥したペプチドは、それを非プロトン性極性溶媒中で再構成した場合、水溶液からペプチドが乾燥されたこの水溶液中のペプチドのイオン化プロファイルとほぼ等しいイオン化プロファイルを維持する。他の態様において、乾燥したペプチド粉末は、水溶液からペプチドが乾燥されたこの水溶液中のペプチドのイオン化プロファイルとほぼ等しくないイオン化プロファイルを有し、かつ乾燥したペプチドは、それを非プロトン性極性溶媒中で再構成した場合、イオン化プロファイルを維持する。

さらに別の局面において、本発明は、ペプチドが粉末になるまで乾燥されており、粉末中のペプチドが、水溶液中のペプチドのイオン化プロファイルとほぼ等しいイオン化プロファイルを有し、該水溶液のpHが、ペプチドに最適な安定性および溶解性のpHとほぼ等しい、1つまたは複数のペプチドまたはその塩と、非プロトン性極性溶媒とを含む安定な製剤であって、製剤の水分含有量が5％未満であり、かつ乾燥したペプチドが、それを非プロトン性極性溶媒中で再構成した場合、水溶液中のペプチドのイオン化プロファイルとほぼ等しいイオン化プロファイルを維持し、該水溶液のpHが、ペプチドに最適な安定性および溶解性のpHとほぼ等しい、製剤；ならびに、安定な製剤を対象に投与するためのシリンジを含む、疾患、状態、または障害を処置するためのキットを提供する。

いくつかの態様において、キットは低血糖を処置するためであり、安定な製剤は本明細書に記載のグルカゴン製剤を含む。いくつかの態様において、キットは糖尿病を処置するためであり、安定な製剤は本明細書に記載のインスリンおよびプラムリンチド製剤を含む。いくつかの態様において、シリンジは、ペン型注射装置、オートインジェクター装置、またはポンプの一部である。いくつかの態様において、シリンジは安定な製剤をあらかじめ充填されている。いくつかの態様において、キットは説明書をさらに含み、説明書は、それを必要としている対象を処置するための安定な製剤の投与を指示している。

組成物の投与前に、患者は軽度または中等度の低血糖を有し得る。いくつかの場合に、患者は、重度の低血糖を有し得る（例えば、外部の援助を必要とする（例えば、医師もしくは看護師などの医療提供者、またはポンプ（例えば、2ホルモン（bi-hormonal）ポンプ）などの機械的装置）ような、自己で処置または投与ができない）か、あるいは、70、60、50、40、30、20、10、5、もしくは0mg/dL未満の血糖レベルを有すると診断され得る、または0〜10mg/dL、10〜20mg/dL、20〜30mg/dL、30〜40mg/dL、40〜50mg/dL、50〜60mg/dL、もしくは60〜70mg/dLの間の血糖レベルを有すると診断され得る、または5〜70mg/dL、5〜60mg/dL、5〜50mg/dL、5〜40mg/dL、5〜30mg/dL、5〜20mg/dL、もしくは5〜10mg/dLの間の血糖レベルを有すると診断され得る、または10〜70mg/dL、10〜60mg/dL、10〜50mg/dL、10〜40mg/dL、もしくは10〜30mg/dLの間の血糖レベルを有すると診断され得る、または20〜70mg/dL、20〜60mg/dL、20〜50mg/dL、もしくは20〜40mg/dLの血糖レベルを有すると診断され得る、または30〜70mg/dL、30〜60mg/dL、もしくは30〜50mg/dLの血糖レベルを有すると診断され得る。または、およびある特定の場合に、患者は50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、または200（またはその中の任意の範囲もしくは整数）の血糖レベル、その周辺の血糖レベル、またはそれよりも高い血糖レベルを有し得、かつまた切迫低血糖の徴候またはある特定の期間内（例えば、30、25、20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1分以内）に血糖レベルが70、60、もしくは50mg/dL未満に低下するという徴候も有し得る。そのような徴候は、血糖レベルの低下傾向（例えば、血糖モニタリング装置により）ならびにこの低下傾向の速度または軌道を特定することにより、判定することができる。いずれの場合（例えば、患者が低血糖と診断されるか、または低血糖を発生するリスクが高い）にも、患者への組成物の投与は、組成物投与の1〜20、1〜15、1〜10、1〜5分以内または1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20分以内に、血糖レベルを維持するかまたは血糖レベルを50mg/dL〜180mg/dL超のレベルまで増加させる結果を患者にもたらし得る。特定の局面において、患者は、組成物の投与前に、10mg/dLから40mg/dL未満の間の血糖レベルを有すると診断され得る。別の場合に、患者の血糖レベルは、グルコースモニタリング装置に基づき、50mg/dL〜70mg/dLの間であり、前述の様式で低下に向かう傾向があると判定し得る。特定の局面において、患者の血糖レベルは、組成物の投与後1〜10分または1〜5分以内に50mg/dL〜180mg/dL超であり得る。

非経口投与に加えて、本発明の製剤は、皮膚への局所適用などにより、経皮送達することができる。局所適用」とは、組成物をケラチン組織の表面上に適用または塗布することを意味する。「ケラチン組織」は、哺乳動物の最外側の保護被覆物として配置されるケラチン含有層を含み、唇、皮膚、および毛髪が含まれるが、それらに限定されるわけではない。例として、局所適用には、組成物を皮膚上に直接塗布すること、または組成物を基体（例えば、包帯または皮膚パッチ）上に載せ、基体を皮膚に適用することが含まれ得るが、それらに限定されるわけではない。

ペプチドの「最適な安定性および溶解性」とは、ペプチドの溶解性が高く（溶解性対pHプロファイルにおいて最大もしくはほぼ最大にあるか、または生成物の必要条件に適している）、その分解が他のpH環境に比べて最小である、pH環境を意味する。特に、ペプチドは最適な安定性および溶解性の複数のpHを有することもある。当業者であれば、文献を参照することにより、または検定を実施することにより、所与のペプチドの最適な安定性および溶解性を容易に確認することができる。

「電荷プロファイル」、「電荷状態」、「イオン化状態」、および「イオン化プロファイル」は交換可能に用いてもよく、ペプチドのイオノゲン基のイオン化状態（すなわち、プロトン化および/または脱プロトン化による）を意味する。

「治療用物質」は、ペプチド化合物をその薬学的に許容される塩と一緒に含む。有用な塩は、当業者には公知であり、かつ、無機酸、有機酸、無機塩基、または有機塩基との塩を含む。本発明において有用な治療用物質は、単独または他の薬学的賦形剤もしくは不活性成分との組み合わせのいずれであろうと、ヒトまたは動物への投与後に所望の効果、有益な効果、および多くの場合は薬理学的効果に影響をおよぼすペプチド化合物である。

「ペプチド」、「ポリペプチド」、および「ペプチド化合物」とは、アミド（CONH）連結によって共に結合された、最大約100アミノ酸残基またはより好ましくは最大約80アミノ酸残基のポリマーを意味する。本明細書に開示する任意のペプチド化合物の類似体、誘導体、アゴニスト、アンタゴニスト、および薬学的に許容される塩がこれらの用語に含まれる。この用語は、D-アミノ酸、D-立体配置もしくはL-立体配置における改変アミノ酸、誘導体化アミノ酸、もしくは天然アミノ酸、および/またはペプトミメチック（peptomimetic）単位をそれらの構造の一部として有する、ペプチドおよびペプチド化合物も含む。

「患者」、「対象」、または「個体」とは、哺乳動物（例えば、ヒト、霊長類、イヌ、ネコ、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、またはモルモット）を意味する。

「阻害すること」もしくは「軽減すること」またはこれらの用語の任意の変種は、所望の結果を得るための任意の測定可能な減少または完全な阻害を含む。

「有効な」もしくは「処置すること」もしくは「予防すること」またはこれらの用語の任意の変種は、所望の結果、予期される結果、または所期の結果を達成するのに十分であることを意味する。

「単相溶液」とは、特定の物質が溶媒中に完全に溶解しており、かつ溶液が光学的に透明であると記載しうるようにもはや目に見える微粒子状物質がない、溶媒にまたは溶媒系（例えば、2つまたはそれ以上の溶媒の混合物）に溶解した粉末から調製した溶液を意味する。

「緩衝剤」とは、他の酸および/または塩基の添加後に溶液のpHの急速または顕著な変化を防止する、弱酸または塩基を意味する。緩衝化剤を水に加えると、緩衝化溶液が生成する。例えば、緩衝溶液は、弱酸およびその共役塩基の両方または弱塩基およびその共役酸の両方を含有し得る。一般的な化学的使用において、pH緩衝剤は、溶液が少量のH⁺およびOH^-イオンの添加後にpHの大きい変化に抵抗することを可能にする、物質または物質の混合物である。一般的な緩衝剤混合物は、2つの物質、すなわち共役酸（プロトン供与体）および共役塩基（プロトン受容体）を含有する。一緒になって、2つの種（共役酸および共役塩基の共役酸-塩基対）は、H⁺およびOH^-イオンの溶液への添加を部分的に吸収することにより、溶液のpHの大きい変化に抵抗する。

「不揮発性緩衝剤」とは、緩衝剤構成要素が十分に揮発性ではなくそれらが乾燥中（例えば、凍結乾燥中）に組成物から除去され得る、緩衝剤を意味する。リン酸ナトリウムは不揮発性緩衝剤の1つの非限定的な例である。

「部分的揮発性緩衝剤」とは、緩衝剤構成要素の1つが十分に揮発性でありそれが乾燥中（例えば、凍結乾燥中）に組成物から除去され得る、緩衝剤を意味する。リン酸アンモニウムは部分的揮発性緩衝剤の1つの非限定的な例である。

「揮発性緩衝剤」とは、乾燥中（例えば、凍結乾燥中）に組成物から除去し得るような、緩衝剤構成要素の両方が十分に揮発性である緩衝剤を意味する。ギ酸アンモニウムは揮発性緩衝剤の1つの非限定的な例である。

「有機相緩衝剤」とは、緩衝剤のイオン化型でも有機相（例えば、ヘキサン、ヘプタン）に可溶性であり、隣接する水相中に分配することができないような、十分に疎水性の弱酸/塩基およびそれらの共役塩基/酸を意味する。

ペプチドの「等電点」（pI）は、ペプチドの全正味電荷がゼロであるpH値に対応する。それらの一次構造に関して、それらの変動する組成により、ペプチドは変動する等電点を有し得る。ペプチドには、多くの荷電基（例えば、プロトン化または脱プロトン化されているイオノゲン基）があり得、等電点において、すべてのこれらの電荷の正味の合計はゼロであり、すなわち、負電荷の数は正電荷の数と釣り合う。等電点よりも高いpHでは、ペプチドの全正味電荷は負となり、等電点よりも低いpH値では、ペプチドの全正味電荷は正となる。ペプチドの等電点を決定するには、等電点電気泳動法などの実験的方法、および等電点を計算アルゴリズムによりペプチドのアミノ酸配列から推定しうる理論的方法を含む、当技術分野において公知の複数の方法がある。

「再構成された」とは、薬学的組成物に言及する場合、活性薬学的成分を含む固体材料への適切な非水性溶媒の添加によって生成された組成物を意味する。再構成のための薬学的組成物は、典型的には、許容される貯蔵寿命の液体組成物を生成することができない場合に適用される。再構成された薬学的組成物の例は、生物適合性の非プロトン性極性溶媒（例えば、DMSO）を凍結乾燥した組成物に加えた場合に生じる溶液である。

「一次構造」とは、ペプチド/ポリペプチド鎖を含むアミノ酸残基の直鎖配列を意味する。

「類縁体」および「類似体」とは、ペプチドに言及する場合、ペプチドの1つもしくは複数のアミノ酸残基が他のアミノ酸残基で置換されている、または1つもしくは複数のアミノ酸残基がペプチドから除去されている、または1つもしくは複数のアミノ酸残基がペプチドに付加されているか、あるいはそのような改変の任意の組み合わせの改変ペプチドを意味する。そのようなアミノ酸残基の付加、除去、または置換は、ペプチドのN-末端および/またはペプチドのC-末端を含む、ペプチドを含む一次構造に沿った任意の点または複数の点で起こり得る。

「誘導体」とは、親ペプチドに関して、少なくとも1つの置換基が親ペプチドまたはその類縁体に存在しない、化学的に改変された親ペプチドまたはその類縁体を意味する。1つのそのような非限定的な例は、共有結合的に改変されている親ペプチドである。典型的な改変はアミド、炭水化物、アルキル基、アシル基、エステル、ペグ化などである。

「非水性溶媒」とは水ではない溶媒を意味する。

「非プロトン性極性溶媒」とは、酸性水素を含有せずかつ水素結合供与体として作用しない、極性溶媒を意味する。非プロトン性極性溶媒の例には、ジメチルスルホキシド（DMSO）、ジメチルホルムアミド（DMF）、酢酸エチル、n-メチルピロリドン（NMP）、ジメチルアセトアミド（DMA）、および炭酸プロピレンが含まれるが、それらに限定されるわけではない。非プロトン性極性溶媒という用語は、2つまたはそれ以上の非プロトン性極性溶媒の混合物、例えば、ジメチルスルホキシド（DMSO）、ジメチルホルムアミド（DMF）、酢酸エチル、n-メチルピロリドン（NMP）、ジメチルアセトアミド（DMA）、および炭酸プロピレンの2つまたはそれ以上の混合物も含む。

「非経口注射」とは、ヒトなどの動物の皮膚または粘膜の1層または複数層の下への注射または該1層または複数層を通過する注射による、小分子薬物の投与を意味する。標準的な非経口注射は、動物の、例えばヒト患者の皮下、筋肉内、または皮内領域内に行われる。ほとんどの治療用物質を送達するために必要とされる0.1〜3.0cc（mL）の注射量に対応するために、浅い皮膚部位に比べて、組織が容易に拡がるため、これらの深い部位を標的とする。

「バイオアベイラビリティ」とは、ペプチド化合物などの治療用物質が製剤から吸収される程度を意味する。

「全身性」は、ペプチド化合物などの治療用物質の対象への送達または投与に関して、治療用物質が、対象の血漿中に生物学的に意味のあるレベルで検出可能であることを意味する。

「制御放出」とは、約1時間またはそれより長い期間、好ましくは12時間またはそれより長い期間にわたり血液（例えば、血漿）濃度が治療的範囲内であるが毒性濃度未満に維持されるような速度での治療用物質の放出を意味する。

「薬学的に許容される担体」とは、本発明の薬物化合物を動物またはヒトなどの哺乳動物に送達するための薬学的に許容される溶媒、懸濁化剤、またはビヒクルを意味する。

「薬学的に許容される」成分、賦形剤、または構成要素は、過度の有害副作用（毒性、刺激、およびアレルギー反応など）なしで妥当な損益比に見合った、ヒトおよび/または動物による使用に適したものである。

「化学的安定性」とは、ペプチドまたはその塩などの治療用物質に言及する場合、酸化または加水分解などの化学的経路によって生じる許容されるパーセンテージの分解産物が生成することを意味する。特に、生成物の所期の保存温度（例えば、室温）で1年間の保存；または30℃/60％相対湿度で1年間の生成物の保存；もしくは40℃/75％相対湿度で1ヶ月、好ましくは3ヶ月の生成物の保存の後、分解産物の生成が約20％以下の場合に、製剤は化学的に安定であると考えられる。いくつかの態様において、化学的に安定な製剤は、生成物を所期の保存温度で長期間保存した後に生成した、20％未満、15％未満、10％未満、5％未満、4％未満、3％未満、2％未満、または1％未満の分解産物を有する。

「物理的安定性」とは、ペプチドまたはその塩などの治療用物質に言及する場合、許容されるパーセンテージの凝集物（例えば、二量体、三量体、およびそれよりも大きい形態）が生成することを意味する。特に、生成物の所期の保存温度（例えば、室温）で1年間の保存；または30℃/60％相対湿度で1年間の生成物の保存；もしくは40℃/75％相対湿度で1ヶ月、好ましくは3ヶ月の生成物の保存の後、凝集物の生成が約15％以下の場合に、製剤は物理的に安定であると考えられる。いくつかの態様において、物理的に安定な製剤は、生成物を所期の保存温度で長期間保存した後に生成した、15％未満、10％未満、5％未満、4％未満、3％未満、2％未満、または1％未満の凝集物を有する。

「安定な製剤」とは、室温で2ヶ月の保存後に、少なくとも約65％の化学的および物理的に安定なペプチドまたはその塩などの治療用物質が残っていることを意味する。特に好ましい製剤は、これらの保存条件下で、少なくとも約80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、または99％の化学的および物理的に安定な治療用物質が残っているものである。特に好ましい安定な製剤は、滅菌放射線照射（例えば、ガンマ線、ベータ線、または電子線）後に分解を示さないものである。

「約」または「およそ」という用語は、当業者には理解されるとおり、近似していると定義され、1つの非限定的な態様において、これらの用語は10％以内、好ましくは5％以内、より好ましくは1％以内、および最も好ましくは0.5％以内であると定義される。さらに、「実質的に非水性」とは、5重量％、4重量％、3重量％、2重量％、1重量％、もしくはそれ未満より低い水、または5体積％、4体積％、3体積％、2体積％、1体積％、もしくはそれ未満より低い水を意味する。

特許請求の範囲および/または本明細書において「含む」という用語と共に用いられる場合、「1つ(a)」または「1つ(an)」という単語の使用は、「1」を意味し得るが、「1つまたは複数」、「少なくとも1つ」、および「1つまたはそれ以上」の意味とも一致する。

「含む（comprising）」（ならびに「含む（comprise）」および「含む（comprises）」などの含む（comprising）の任意の形態）、「有する（having）」（ならびに「有する（have）」および「有する（has）」などの有する（having）の任意の形態）、「含む（including）」（ならびに「含む（includes）」および「含む（include）」などの含む（including）の任意の形態）または「含む（containing）」（ならびに「含有する（contains）」および「含有する（contain）」などの含有する（containing）の任意の形態）という単語は、包括的または無制限であり、かつ、さらなる列挙していない要素または方法段階を除外しない。

組成物およびそれらの使用のための方法は、本明細書の全体を通して開示される任意の成分または段階を「含む」、「本質的に〜からなる」、または「〜からなる」ことができる。「本質的に〜からなる」という移行句に関して、1つの非限定的な局面において、本明細書において開示する製剤および方法の基礎的および新規特徴は、該製剤中のペプチドまたはその塩の安定性および溶解性を含む。したがって、製剤中のペプチドまたはその塩の安定性および溶解性を実質的に変え得る成分は、請求項が「本質的に〜からなる」という移行句を用いる場合には、該製剤から除外されることになる。

本発明の他の目的、特徴、および利点は、当業者には、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかになるであろう。

以下の図面は本明細書の一部を形成し、本発明のある特定の局面をさらに示すために含まれる。これらの図面のうちの1つまたは複数を、本明細書において提供する具体的態様の詳細な説明と組み合わせて参照することにより、本発明はより良く理解され得る。
本発明の組成物を作製するために用い得る様々な段階の模式図である。

詳細な説明
理論に縛られたくはないが、乾燥中のペプチドにおける最適な安定性および溶解性のイオン化プロファイルを確立し（ペプチドのイオノゲン基が固体状態（すなわち、粉末として）でこの最適な安定性および溶解性のイオン化状態を有するように）、続いて非プロトン性極性溶媒（これはペプチドのイオン化状態を変えることなく、ペプチドを可溶化する）中で再構成することにより、非プロトン性極性溶媒中のペプチドのイオン化プロファイルは、最適な安定性および溶解性のものであり、高濃度で耐熱性の製剤の調製を可能にすると考えられる。したがって、粉末としてのペプチドのイオン化プロファイルは、ペプチド粉末を非プロトン性極性溶媒中で再構成した場合に変化しないと考えられる。

水溶液において、水溶液中のペプチド分子の安定性および溶解性が最大となる、最適なpHが存在し得る。溶液のpHがペプチドの等電点（pI）と等しい場合、ペプチドは全正味電荷を有さないことになる。等電点よりも高いpHでは、ペプチドの全正味電荷は負となり、等電点よりも低いpH値では、ペプチドの全正味電荷は正となる。同一の符号（すなわち、正-正、負-負）の全正味電荷を有する分子間の比較的長距離の静電反発は、しばしば凝集の原因となり、フィブリル化および沈澱による物理的分解を引き起こし得る、より短距離の疎水性相互作用を防止することができる。

溶液中のペプチドの安定性および溶解性は、それらが溶解している水溶液のpHがペプチドの等電点から離れて設定されるにつれて増大し得る。これに関する例は、中性pH（グルカゴン分子のpIとほぼ等しい）では限られた溶解性を有するが酸性溶液中およびアルカリ性溶液中では高い溶解性を有する、ペプチドグルカゴンで見られる。

ペプチドを含有する水溶液を粉末になるまで（例えば、凍結乾燥により）乾燥させる場合、ペプチド上のイオノゲン基はイオン化され得る。したがって、水溶液のpHがペプチドに最適な安定性および溶解性のpHとほぼ等しい水溶液中のペプチドのイオン化状態と粉末中のペプチドのイオン化プロファイルがほぼ等しくなるように、乾燥中に粉末中のペプチドに最適なイオン化状態を付与することが可能である。

粉末中のペプチドのイオノゲン基によって得られたイオン化プロファイルは、粉末がDMSOなどの非プロトン性極性溶媒中で再構成された場合にそのままであることになる。非プロトン性極性溶媒は交換可能なプロトンを有さないため、乾燥したペプチドは非プロトン性極性溶媒中で再構成されると、再構成された製剤はペプチドの最適なイオン化状態の溶解性および安定性の特徴を維持し得る。したがって、粉末中のペプチドのイオン化状態は、非プロトン性極性溶媒中のペプチドの溶解性および安定性に影響する。

したがって、粉末中のペプチドのイオン化プロファイルが、水溶液のpHがペプチドに最適な安定性および溶解性のpHとほぼ等しい水溶液中のペプチドのイオン化プロファイルとほぼ等しい、ペプチド粉末を調製することが可能である。このペプチド粉末を非プロトン性極性溶媒中で再構成すると、得られた製剤中のペプチドのイオン化プロファイルは、水溶液のpHがペプチドに最適な安定性および溶解性のpHとほぼ等しい水溶液中のペプチドのイオン化プロファイルとほぼ等しくなる。

I. 序論
ペプチドは、脱アミド、酸化、加水分解、ジスルフィド相互変換、およびラセミ化を含む、いくつかの異なるメカニズムを介して分解され得る。さらに、水は可塑剤として作用し、タンパク質分子の変性および不可逆的分子凝集を促進する。したがって、ある期間にわたり周囲温度または生理的温度で安定なペプチド製剤を提供するために、非水性または実質的に非水性のペプチド製剤が一般に必要とされている。

乾燥粉末製剤への水性ペプチド製剤の変形は、薬学的ペプチド製剤の安定性を高めるための1つの方法である。例えば、ペプチド製剤は、噴霧乾燥、凍結乾燥もしくはフリーズドライ、脱水、噴霧凍結乾燥、またはそれらの任意の組み合わせを含む、様々な技術を用いて乾燥されることができる。そのような技術によって得られた乾燥粉末ペプチド製剤は、ある期間にわたり周囲温度でまたは生理的温度でさえも、安定性の有意な増大を示す。

本発明は部分的には、まず1つまたは複数のペプチド（例えば、グルカゴンペプチド）を、ペプチドを含有する水溶液から乾燥ペプチド粉末になるまで凍結乾燥させることにより、安定なペプチド製剤（例えば、安定なグルカゴンレスキュー製剤）が容易に調製され得るとの驚くべき発見に基づいている。乾燥したペプチド分子は、乾燥工程中にそれらに与えられた規定されたイオン化プロファイルを有することになる。このイオン化状態は、水溶液からペプチドが乾燥されたこの水溶液中のペプチドのイオン化状態とほぼ等しくてもよい（すなわち、「ほぼ等しい」とは、pHXの水溶液から乾燥したペプチドのイオン化プロファイルが水溶液中のペプチドのイオン化プロファイルに対応し、該水溶液のpHとpHXとの間の差は1pH単位以内（または1pH単位）であることを意味する）。粉末中のペプチドのイオン化状態が、その中でペプチドを乾燥した水溶液中のペプチドのイオン化状態と異なる（すなわち、pHXの水溶液から乾燥したペプチドのイオン化プロファイルが水溶液中のペプチドのイオン化プロファイルに対応し、該水溶液のpHとpHXとの間の差が1pH単位よりも大きい場合）かどうかは、ペプチド自体に、水溶液の構成要素（例えば、賦形剤）に、および/またはペプチド粉末を調製するために用いた乾燥法に依存し得る。

非限定的な例として、不揮発性緩衝剤を含有する水溶液からペプチドを乾燥させる場合、粉末中のペプチドのイオン化状態は、水溶液からペプチドが乾燥されたこの水溶液中のペプチドのものとほぼ等しくてもよい。しかし、ペプチドを部分的揮発性緩衝剤または揮発性緩衝剤を含有する水溶液から乾燥させる場合、粉末中のペプチドのイオン化状態は、水溶液からペプチドが乾燥されたこの水溶液中のペプチドのイオン化状態とほぼ等しくなくてもよい。加えて、ペプチドを、乾燥前にpHが強酸および/または強塩基（例えば、HCl、NaOH）を用いて調節されている非緩衝化溶液から乾燥させる場合、粉末中のペプチドのイオン化状態は、水溶液からペプチドが乾燥されたこの水溶液中のペプチドのイオン化と異なってもよい。

乾燥ペプチドのイオン化状態または非プロトン性極性溶媒中のペプチドのイオン化状態を測定するための方法は、当技術分野において公知である。1つの周知で認められている方法において、ペプチドのイオン化状態を、乾燥したペプチドを非緩衝化水中で再構成し、再構成したペプチドのpHをpH紙または較正したpH電極などのpH指示器で測定することにより、得ることができる。または、ペプチドのイオン化状態は、非プロトン性極性溶媒（例えば、DMSO）中で再構成したペプチドについて、少なくとも20％の水を非プロトン性極性溶媒（例えば、DMSO）に加え、pHをpH指示器で測定することにより判定することができる。例えば、Baughman and Kreevoy, ''Determination of Acidity in 80% Dimethyl Sulfoxide-20% Water,'' Journal of Physical Chemistry, 78(4): 421-23 (1974)参照。非プロトン性極性溶媒-水溶液中のpHの測定は、わずかな補正（すなわち、上記のBaughman and Kreevoyによれば、0.2pH単位以下）を必要とし得る。または、分光学的技術を用いて、所与のペプチドのイオン化状態を測定することもできる。

いくつかの態様において、ペプチドを非プロトン性極性溶媒中で再構成した際に、そのイオン化プロファイルが、水溶液からペプチドが乾燥されるこの水溶液中のペプチドのpHの1pH単位以内である場合に、乾燥したペプチドは、水溶液からペプチドが乾燥されるこの水溶液中のペプチドのイオン化プロファイルとほぼ等しいイオン化プロファイルを有する（したがって、例えば、pH3.0の水溶液から乾燥したペプチドは、ペプチドのイオン化プロファイルを、乾燥後の粉末中で測定した際、または該粉末の非プロトン性極性溶媒中での再構成後に測定した際に、それがpH2.0〜4.0の水溶液中のペプチドのイオン化プロファイルに対応する場合には、水溶液からペプチドが乾燥されたこの水溶液中のペプチドのイオン化プロファイルとほぼ等しいイオン化プロファイルを有すると言われている）。いくつかの態様において、ペプチドを非プロトン性極性溶媒中で再構成した際に、そのイオン化プロファイルが、水溶液からペプチドが乾燥されるこの水溶液中のペプチドのpHの1pH単位以内ではない場合に、乾燥したペプチドは、水溶液からペプチドを乾燥されるこの水溶液中のペプチドのイオン化プロファイルとほぼ等しくない（かまたは有意に異なる）イオン化プロファイルを有する（したがって、例えば、pH3.0の水溶液から乾燥したペプチドは、ペプチドのイオン化プロファイルを、乾燥後の粉末中で測定した際、または該粉末の非プロトン性極性溶媒中での再構成後に測定した際に、それがpH2.0〜4.0の水溶液中のペプチドのイオン化プロファイルに対応しない場合には、水溶液からペプチドが乾燥されるこの水溶液中のペプチドのイオン化プロファイルとほぼ等しくない（かまたは有意に異なる）イオン化プロファイルを有すると言われている）。

いくつかの態様において、ペプチドを非プロトン性極性溶媒中で再構成した際に、そのイオン化プロファイルが、水溶液からペプチドが乾燥されるこの水溶液中のペプチドのpHのpH単位の半分以内である場合に、乾燥したペプチドは、水溶液からペプチドが乾燥されるこの水溶液中のペプチドのイオン化プロファイルとほぼ等しいイオン化プロファイルを有する（したがって、例えば、pH3.0の水溶液から乾燥したペプチドは、ペプチドのイオン化プロファイルを、乾燥後の粉末中で測定した際、または該粉末の非プロトン性極性溶媒中での再構成後に測定した際に、それがpH2.5〜3.5の水溶液中のペプチドのイオン化プロファイルに対応する場合には、水溶液からペプチドが乾燥されたこの水溶液中のペプチドのイオン化プロファイルとほぼ等しいイオン化プロファイルを有すると言われている）。いくつかの態様において、ペプチドを非プロトン性極性溶媒中で再構成した際に、そのイオン化プロファイルが、水溶液からペプチドが乾燥されるこの水溶液中のペプチドのpHのpH単位の半分以内ではない場合に、乾燥したペプチドは、水溶液からペプチドが乾燥されるこの水溶液中のペプチドのイオン化プロファイルとほぼ等しくない（かまたは有意に異なる）イオン化プロファイルを有する（したがって、例えば、pH3.0の水溶液から乾燥したペプチドは、ペプチドのイオン化プロファイルを、乾燥後の粉末中で測定した際、または該粉末の非プロトン性極性溶媒中での再構成後に測定した際に、それがpH2.5〜3.5の水溶液中のペプチドのイオン化プロファイルに対応しない場合には、水溶液からペプチドが乾燥されるこの水溶液中のペプチドのイオン化プロファイルとほぼ等しくない（かまたは有意に異なる）イオン化プロファイルを有すると言われている）。

いくつかの態様において、ペプチドを非プロトン性極性溶媒中で再構成した際に、そのイオン化プロファイルが、水溶液からペプチドが乾燥されるこの水溶液中のペプチドのpHの1pH単位以内ではない場合に、乾燥したペプチドは、水溶液からペプチドが乾燥されるこの水溶液中のペプチドのイオン化プロファイルとほぼ等しくないイオン化プロファイルを有する。1つの非限定的な例において、揮発性緩衝剤で緩衝化し、約4から約5に調節したpHを有する、ペプチドグルカゴンの水溶液を、粉末になるまで乾燥させ、粉末中のグルカゴンペプチドのイオン化プロファイルは、水溶液中のグルカゴンペプチドのイオン化プロファイルとほぼ等しく、該水溶液のpHは、最適の安定性、最大の溶解性、および最小の分解を確実にするように、約2.0〜約3.0である。乾燥したグルカゴンペプチド粉末を非プロトン性極性溶媒（例えば、DMSO）中で再構成する場合、非プロトン性極性溶媒中のグルカゴンペプチドのイオン化プロファイルは、粉末中のグルカゴンペプチドのイオン化プロファイルとほぼ等しい。

いったん乾燥させると、結果として生じるペプチド粉末を、例えばフリーズドライしたグルカゴンを、非プロトン性極性溶媒に溶解し、それにより安定な製剤を形成し、製剤の水分または水含有量は15％、10％、5％、1％、0.5％、0.25％、0.15％未満、または0.1％未満である。乾燥したペプチドは、非プロトン性極性溶媒中で再構成された場合、その規定されたイオン化プロファイルを維持し、すなわち、非プロトン性極性溶媒中で再構成された場合のペプチドのイオン化プロファイルは、乾燥したペプチドのイオン化プロファイルとほぼ等しい。都合のよいことに、いったん調製すると、製剤（例えば、グルカゴン製剤）は、長期間安定であり、再構成の必要なくすぐに使え、かつ広範囲の温度で機能的である。

特に、本発明の製剤化技術は製剤化プラットフォーム技術であり、製剤化プラットフォーム技術は、グルカゴンのように水性環境で安定性および溶解性が低いかまたは限られている、多くの他のペプチドを送達するために広く適用可能である。非プロトン性極性溶媒（例えば、DMSO、NMP、酢酸エチル、またはそれらの混合物）による高濃度の非水性溶液へのペプチドの製剤化は、重要な治療用物質−治療用ペプチド群の貴重な送達プラットフォームである。本明細書に記載の安定な製剤は、ペプチド薬物の均一な送達を有利に促進し、かつ、凝集、酸化、および加水分解に関連する分解経路に対するさらなる貯蔵安定性を提供する。

ある特定の好ましい態様において、本明細書に記載の安定な製剤は、ペプチド薬物を長期間、例えば、使用前に治療用物質の許容できないレベルの物理的および化学的分解を起こすことなく製剤の所望の貯蔵寿命を提供するのに十分な期間、安定な形で保存する。注射用製剤の所望の性質は、それらが非水性でありかつペプチドに関して非反応性であることである。そのような態様において、注射用製剤を注射装置自体に直接保存することも可能である。

本発明の安定な注射用製剤は、治療用ペプチドの所望の送達用量（例えば、薬物療法に必要な用量）を含有し、好ましくは少量である。例えば、いくつかの態様において、ペプチド（例えば、グルカゴン）の治療的用量を含む注射用製剤は、少なくとも約1.0マイクロリットル（充填器具の機能の下限）、より好ましくは約10ミリリットルから約250マイクロリットルの量を有する。ペプチドの治療的用量の少量での送達は、ある特定の好ましい態様において、治療用ペプチド（例えば、グルカゴン）の用量を、本発明に従っての注射に適した非プロトン性極性溶媒中の安定な形で濃縮することにより達成される。

さらに、本発明の安定な製剤は、注射前に希釈の必要がない投与に適している。多くの現在使用可能な治療用ペプチドおよびワクチン製品は、貯蔵中の安定性を促進するために固形微粒子の形で生成される。これらの製剤は注射前に滅菌水、リン酸緩衝溶液、または等張食塩水で希釈される。これに対し、本発明のある特定の好ましい態様において、治療用ペプチドは、注射用の製剤を調製するために薬学産業によって日常的に用いられる粒子調製加工技術（例えば、噴霧乾燥、凍結乾燥など）を用いて濃縮する。好ましい態様において、ペプチド薬物の治療的投薬量は、まず残留水分含有量がほとんどない乾燥した粉末になるまでフリーズドライしたペプチド（および任意で、安定化賦形剤などの追加の成分）を溶解することによって得られる。いったん調製すれば、乾燥したペプチド粉末を、DMSO、NMP、酢酸エチル、またはこれらの溶媒のブレンドなどの非プロトン性極性溶媒中に溶解する。したがって、本発明の目標に従い、少量の本発明の安定な製剤は、ほとんどの再構成製品によって必要されるとおり、まず注射前に製剤を希釈することなく、動物（例えば、ヒト患者）に注射、注入、またはそうでなければ投与される。したがって、好ましい態様において、少量の本発明の製剤は、まず希釈、または再構成、または冷蔵することなく投与可能である。

II. 乾燥したペプチドの再構成
本発明の安定な製剤において、いったんペプチド（および任意の構成要素）を粉末になるまで乾燥させると、または、製剤が2つまたはそれ以上のペプチドを含む場合、いったん各ペプチド（それぞれ任意で、任意の構成要素も含む）を粉末になるまで乾燥させると、乾燥したペプチド粉末は非プロトン性極性溶媒中に溶解または再構成される。いくつかの態様において、非プロトン性極性溶媒は、ジメチルスルホキシド（DMSO）、ジメチルホルムアミド（DMF）、酢酸エチル、n-メチルピロリドン（NMP）、ジメチルアセトアミド（DMA）、炭酸プロピレン、およびそれらの混合物より選択される。いくつかの態様において、非プロトン性極性溶媒は、ジメチルスルホキシド（DMSO）、ジメチルホルムアミド（DMF）、酢酸エチル、n-メチルピロリドン（NMP）、ジメチルアセトアミド（DMA）、および炭酸プロピレンの2つまたはそれ以上の混合物である。ジメチルスルホキシド（DMSO）、酢酸エチル、およびn-メチルピロリドン（NMP）が特に好ましい非プロトン性極性溶媒であり、そのそれぞれは生体適合性溶媒である。いくつかの態様において、非プロトン性極性溶媒はジメチルスルホキシド（DMSO）である。他の態様において、非プロトン性極性溶媒はn-メチルピロリドン（NMP）である。他の態様において、非プロトン性極性溶媒はジメチルスルホキシド（DMSO）およびn-メチルピロリドン（NMP）の混合物である。さらに他の態様において、非プロトン性極性溶媒はジメチルスルホキシド（DMSO）および酢酸エチルの混合物である。いくつかの態様において、乾燥したペプチド粉末は、「ニート」であるすなわち共溶媒を含有しない非プロトン性極性溶媒中で、再構成される。いくつかの態様において、乾燥したペプチド粉末は、非プロトン性極性溶媒を含みかつ共溶媒として水を含有しない溶液中で、再構成される。

いくつかの態様において、本発明の製剤は、製剤の凝固点を降下させる少なくとも1つの共溶媒をさらに含む。共溶媒は極性プロトン性溶媒である。いくつかの態様において、共溶媒は、エタノール、プロピレングリコール（PG）、グリセロール、およびそれらの混合物より選択される。いくつかの態様において、共溶媒はエタノールまたはプロピレングリコール（PG）である。共溶媒は、製剤中に約10％（w/v）から約50％（w/v）の範囲、例えば、約10％、約15％、約20％、約25％、約30％、約35％、約40％、約45％、または約50％（w/v）の量で存在し得る。いくつかの態様において、共溶媒は、製剤中に約10％（w/v）から約50％（w/v）、約10％（w/v）から約40％（w/v）、約10％（w/v）から約30％（w/v）、約10％（w/v）から約25％（w/v）、約15％（w/v）から約50％（w/v）、約15％（w/v）から約40％（w/v）、約15％（w/v）から約30％（w/v）、または約15％（w/v）から約25％（w/v）の範囲の量で存在する。いくつかの態様において、少なくとも1つの共溶媒は製剤の凝固点を、共溶媒を含まないがそれ以外の点は全く同じ製剤と比べて、少なくとも5℃、少なくとも10℃、少なくとも15℃、少なくとも20℃またはそれ以上降下させる。いくつかの態様において、少なくとも1つの共溶媒は、製剤の凝固点を約3℃まで、約2℃まで、約1℃まで、または約0℃以下まで降下させる。

III. 安定化賦形剤
ある特定の好ましい態様において、本明細書に記載の製剤は、その中に組み込まれたペプチドの安定性を確保するために、さらに安定化してもよい。いくつかの態様において、注射用製剤の安定性を、ペプチドの乾燥前に、1つまたは複数の安定化剤または安定化賦形剤を製剤に含めることによって増強する。他の態様において、注射用製剤の安定性を、乾燥したペプチドを安定化剤または安定化賦形剤と共に非プロトン性極性溶媒中で再構成することによって増強する。

いくつかの態様において、安定化賦形剤は凍結保護物質である。トレハロースなどの凍結保護物質の添加は、本発明のペプチド製剤を凍結-解凍サイクルに伴う不安定性から保護する。凍結保護物質のトレハロースの添加は、凍結したペプチド製剤の高速解凍も促進する。この高速解凍の性質は、特に、本発明のペプチド製剤が凍結されておりかつ素早く投与される必要がある、重度の低血糖の発現などの救急の医学的状況において、驚くほど有利である。したがって、本発明の別の局面において、安定な製剤は、改善された凍結-解凍安定性、高い解凍速度、および/または高い解凍プロファイルを有する。

いくつかの態様において、安定化賦形剤は、糖質、デンプン、糖アルコール、およびそれらの混合物より選択される。安定化賦形剤のための適切な糖質の例には、トレハロース、グルコース、スクロースなどが含まれるが、それらに限定されるわけではない。安定化賦形剤のための適切なデンプンの例には、ヒドロキシエチルデンプン（HES）が含まれるが、それらに限定されるわけではない。安定化賦形剤のための適切な糖アルコールの例には、マンニトールおよびソルビトールが含まれるが、それらに限定されるわけではない。いくつかの態様において、少なくとも1つの安定化賦形剤（例えば、糖質、デンプン、糖アルコール、またはそれらの混合物）は、凍結-解凍工程中のペプチドの安定性を増強させること、製剤の解凍速度を高めること、または製剤の解凍プロファイルを高めることが可能である。

いくつかの態様において、安定化賦形剤は、製剤中に約1％（w/v）〜約60％（w/v）、約1％（w/v）〜約50％（w/v）、約1％（w/v）〜約40％（w/v）、約1％（w/v）〜約30％（w/v）、約1％（w/v）〜約20％（w/v）、約5％（w/v）〜約60％（w/v）、約5％（w/v）〜約50％（w/v）、約5％（w/v）〜約40％（w/v）、約5％（w/v）〜約30％（w/v）、約5％（w/v）〜約20％（w/v）、約10％（w/v）〜約60％（w/v）、約10％（w/v）〜約50％（w/v）、約10％（w/v）〜約40％（w/v）、約10％（w/v）〜約30％（w/v）、または約10％（w/v）〜約20％（w/v）の範囲の量で存在する。いくつかの態様において、安定化賦形剤は製剤中に約1％、約5％、約10％、約15％、約20％、約25％、約30％、約35％、約40％、約45％、約50％、約55％、または約60％（w/v）の量で存在する。

2つまたはそれ以上のペプチドを含む製剤において、いくつかの態様において、安定化賦形剤を含む混合物中で各ペプチドを乾燥させる。ペプチドおよび安定化賦形剤の混合物は各ペプチドで同一であってもよいか、または各ペプチドを乾燥させるために用いる安定化賦形剤は異なっていてもよい。他の態様において、いくつかであるがすべてではないペプチドを、安定化賦形剤を含む混合物中で乾燥させ、その一方で他のペプチドを安定化賦形剤の非存在下の水溶液から乾燥させてもよい。

いくつかの態様において、製剤は、例えば、抗酸化剤、キレート剤、および保存剤を含む、追加の安定化剤をさらに含む。適切な抗酸化剤の例には、アスコルビン酸、システイン、メチオニン、モノチオグリセロール、チオ硫酸ナトリウム、サルファイト、BHT、BHA、パルミチン酸アスコルビル、没食子酸プロピル、N-アセチル-L-システイン（NAC）、およびビタミンEが含まれるが、それらに限定されるわけではない。適切なキレート剤の例には、EDTA、酒石酸およびその塩、グリセリン、ならびにクエン酸およびその塩が含まれるが、それらに限定されるわけではない。適切な保存剤の例には、ベンジルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、およびそれらの混合物が含まれるが、それらに限定されるわけではない。

いくつかの態様において、製剤は安定化ポリオールをさらに含む。そのような製剤および材料は、例えば、米国特許第6,290,991号および同第6,331,310号に記載されており、そのそれぞれの内容は参照により本明細書に組み入れられる。

IV. 安定なペプチド製剤を作製する方法
さらに別の局面において、本発明は、水性ペプチド溶液からペプチドを乾燥ペプチド粉末になるまで乾燥させる段階であって、粉末中のペプチドが、水溶液中のペプチドのイオン化プロファイルとほぼ等しいイオン化プロファイルを有し、該水溶液のpHが、ペプチドに最適な安定性および溶解性のpHとほぼ等しい、段階；ならびに、乾燥ペプチド粉末を非プロトン性極性溶媒を用いて再構成し、それにより安定な製剤を作製する段階を含む、非経口注射用の安定な製剤を作製するための方法を提供する。いくつかの態様において、乾燥したペプチド粉末は、水溶液からペプチドが乾燥されたこの水溶液中のペプチドのイオン化プロファイルとほぼ等しいイオン化プロファイルを有し、かつ、ペプチドは、乾燥したペプチド粉末を非プロトン性極性溶媒中で再構成した場合、水溶液からペプチドが乾燥されたこの水溶液中のペプチドのイオン化プロファイルとほぼ等しいイオン化プロファイルを維持する。他の態様において、乾燥したペプチド粉末は、水溶液からペプチドが乾燥されたこの水溶液中のペプチドのイオン化プロファイルと等しくないイオン化プロファイルを有し、かつ乾燥したペプチドは、乾燥したペプチドを非プロトン性極性溶媒中で再構成した場合、イオン化プロファイルを維持する。

安定なペプチド製剤を作製するための方法は、水性環境で安定性または溶解性が限られているかまたは低い、任意のペプチドを製剤化するために用い得る、プラットフォーム製剤化方法である。本発明の製剤において用いるのに適したペプチド（またはその塩）には、グルカゴン、インスリン、ロイプロリド、黄体形成ホルモン放出ホルモン（LHRH）アゴニスト、プラムリンチド、副甲状腺ホルモン（PTH）、アミリン、ボツリヌス毒素、コノトキシン、ヘマタイド、アミロイドペプチド、コレシスチキニン、胃抑制ペプチド、インスリン様成長因子、成長ホルモン放出因子、抗菌因子、グラチラマー、グルカゴン様ペプチド-1（GLP-1）、GLP-1アゴニスト、エキセナチド、およびその類似体が含まれるが、それらに限定されるわけではない。好ましい態様において、ペプチドはグルカゴンまたはグルカゴン類似体またはペプチド様物質である。別の態様において、ペプチドは副甲状腺 ホルモンである。さらに別の態様において、ペプチドはロイプロリドである。さらに別の態様において、ペプチドはグラチラマーである。

さらに、本発明の技術を、基礎疾患状態に関わらず、すべての型のペプチドに適用することができる。例として、本発明の安定な製剤は、1つ、2つ、3つ、4つ、またはそれ以上のペプチドまたはその塩、類似体、および/もしくは混合物を含み得る。本発明の製剤において用いるのに適したペプチド（ならびにその塩）には、グルカゴン、プラムリンチド、インスリン、ロイプロリド、黄体形成ホルモン放出ホルモン（LHRH）アゴニスト、副甲状腺ホルモン（PTH）、アミリン、ボツリヌス毒素、ヘマタイド、アミロイドペプチド、コレシスチキニン、胃抑制ペプチド、インスリン様成長因子、成長ホルモン放出因子、抗菌因子、グラチラマー、グルカゴン様ペプチド-1（GLP-1）、GLP-1アゴニスト、エキセナチド、その類似体、およびそれらの混合物が含まれるが、それらに限定されるわけではない。いくつかの態様において、ペプチドは塩酸塩または酢酸塩である。ここでも、前述のもの以外のペプチドは本発明の文脈において有用でもあるため企図される。

いくつかの態様において、2つ、3つ、4つ、またはそれ以上のペプチドを安定な製剤に製剤化する。2つまたはそれ以上のペプチドを安定な製剤に製剤化する態様において、各ペプチドは別々に乾燥ペプチド粉末になるまで水溶液から乾燥され、かつ各乾燥したペプチド粉末は、水溶液中のペプチドのイオン化プロファイルとほぼ等しいイオン化プロファイルを有し、該水溶液のpHはペプチドに最適な安定性および溶解性のpHとほぼ等しい。2つまたはそれ以上の乾燥したペプチド粉末を非プロトン性極性溶媒を用いて再構成し、かつ、各乾燥したペプチド粉末は、水溶液中のペプチドのイオン化状態とほぼ等しいペプチドのイオン化状態を維持し、該水溶液のpHはそのペプチドに最適な安定性および溶解性のpHとほぼ等しい（すなわち、乾燥した第一のペプチドは、それを非プロトン性極性溶媒中で再構成した場合、第一のイオン化プロファイルを維持し、かつ乾燥した第二のペプチドは、それを非プロトン性極性溶媒中で再構成した場合、第二のイオン化プロファイルを維持する）。

上で説明したとおり、ペプチドが水溶液中に可溶化されている場合、乾燥したペプチドが、水溶液中のペプチドのイオン化プロファイルとほぼ等しいイオン化プロファイルを有し、該水溶液のpHが、ペプチドに最適な安定性および溶解性のpHとほぼ等しくなるように、水溶液のpHは調節される。いったん乾燥させると、ペプチドは安定性が最大/分解が最小となるイオン化プロファイルを有することになり、非プロトン性極性溶媒中で溶解または再構成した場合、そのイオン化プロファイルを保持することになる。したがって、1つの態様において、製剤中のペプチドのイオン化状態は水溶液中のペプチドのイオン化状態とほぼ等しいべきであり、該水溶液のpHは約2〜約3である。別の態様において、製剤中のペプチドのイオン化状態は水溶液中のペプチドのイオン化状態とほぼ等しいべきであり、該水溶液のpHは約4〜約6である。さらに別の態様において、製剤中のペプチドのイオン化状態は水溶液中のペプチドのイオン化状態とほぼ等しいべきであり、該水溶液のpHは約4〜約5である。さらに別の態様において、製剤中のペプチドのイオン化状態は水溶液中のペプチドのイオン化状態とほぼ等しいべきであり、該水溶液のpHは約6〜8、8〜10、または10〜12である。

いったんペプチド（および任意で、乾燥前にペプチド含有水溶液に加える、安定化賦形剤などの他の構成要素）を粉末になるまで乾燥させると、乾燥したペプチド粉末は本明細書に記載の非プロトン性極性溶媒（例えば、ジメチルスルホキシド（DMSO）、n-メチルピロリドン（NMP）、酢酸エチル、およびそれらの混合物）中で溶解または再構成される。いくつかの態様において、非プロトン性極性溶媒はジメチルスルホキシド（DMSO）である。他の態様において、非プロトン性極性溶媒はn-メチルピロリドン（NMP）である。さらなる態様において、非プロトン性極性溶媒はDMSOおよびNMPの混合物である。

いくつかの態様において、乾燥したペプチド粉末を再構成する段階は、乾燥したペプチドを非プロトン性極性溶媒および製剤の凝固点を降下させる共溶媒を含む混合物を用いて希釈または再構成する段階を含む。いくつかの態様において、共溶媒は、エタノール、プロピレングリコール、グリセロール、およびそれらの混合物より選択される。いくつかの態様において、共溶媒は、製剤中に約10％（w/v）から約50％（w/v）の範囲、例えば、約10％、約15％、約20％、約25％、約30％、約35％、約40％、約45％、または約50％（w/v）の量で存在する。

前述の方法において、ペプチド化合物の水溶液（任意で賦形剤を含有する）からの乾燥は、噴霧乾燥技術、フリーズドライ技術、または凍結乾燥技術を用いて行われる。噴霧乾燥技術は当業者には周知である。噴霧乾燥は、1つまたは複数の溶質（例えば、治療用物質、賦形剤）を含有する溶液を回転盤ノズル、または他の装置から噴霧し、続いて液滴から溶媒を蒸発させる段階を含む。得られる粉末の性質は、初期溶質濃度、生じる液滴のサイズ分布、および溶質除去の速度を含む、パラメーターを処理するいくつかの変数の関数である。生じる粒子は、溶媒除去の速度および条件に応じて、結晶および/またはアモルファス固体からなる一次粒子の凝集物を含みうる。

タンパク質、オリゴペプチド、高分子量多糖、および核酸などの生体高分子の超微細粉末を調製するための噴霧乾燥方法は、例えば、米国特許第6,051,256号に記載されている。フリーズドライ法は当技術分野において周知であり、例えば、米国特許第4,608,764号および米国特許第4,848,094号に記載されている。噴霧-フリーズドライ方法は、例えば、米国特許第5,208,998号に記載されている。他の噴霧乾燥技術は、例えば、米国特許第6,253,463号；同第6,001,336号；同第5,260,306号；およびPCT国際公報番号WO91/16882およびWO96/09814に記載されている。

凍結乾燥技術は当業者には周知である。凍結乾燥は、生成物が凍結状態にある間（減圧下での氷の昇華）に減圧下（緩やかな加熱により乾燥）で行う脱水技術である。これらの条件は生成物を安定化し、酸化および他の分解プロセスを最小化する。フリーズドライの条件は、プロセスを低温で実行することを可能にし、したがって熱に不安定な生成物を保存することができる。フリーズドライの段階は、予備処理、凍結、一次乾燥、および二次乾燥を含む。予備処理は、凍結前に生成物を処理する任意の方法を含む。これは、生成物を濃縮すること、製剤の修正（すなわち、安定性を高めるためおよび/または加工を改善するための構成要素の追加）、高蒸気圧溶媒を減少させること、または表面積を増大させることを含みうる。予備処理の方法は、凍結濃縮、液相濃縮、および特に生成物の外観を保存するため、または反応性生成物に凍結保護を提供するために製剤化することを含み、例えば、米国特許第6,199,297号に記載されている。「標準的」凍結乾燥条件は、例えば、米国特許第5,031,336号、および''Freeze Drying of Pharmaceuticals'' (DeLuca, Patrick P., J. Vac. Sci. TechnoL, Vol. 14, No. 1, January/February 1977)；ならびに''The Lyophilization of Pharmaceuticals: A Literature Review'' (Williams, N. A., and G. P. Polli, Journal of Parenteral Science and Technology, Vol. 38, No. 2, March/April 1984)に記載されている。

ある特定の好ましい態様において、治療用物質製剤のガラス転移温度（T_g）よりも高温で凍結乾燥サイクルを部分的に実施して、残留水分を含有する高密度のケークを形成する塊の崩壊を誘導する。他の態様において、粒子の完全な乾燥を達成するために、凍結乾燥サイクルをガラス転移温度よりも低温で行って崩壊を避ける。

V. 治療法
別の局面において、本発明は、疾患、状態、または障害を処置、軽減、または防止するのに有効な量の本明細書に記載の安定な製剤を対象に投与することにより、疾患、または状態を処置する方法を提供する。いくつかの態様において、本発明の安定な製剤で処置する疾患、状態、または障害は糖尿病状態である。糖尿病状態の例には、1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病、前糖尿病、高血糖、低血糖、および代謝症候群が含まれるが、それらに限定されるわけではない。いくつかの態様において、疾患、状態、または障害は低血糖である。いくつかの態様において、疾患、状態、または障害は糖尿病である。

いくつかの態様において、本発明の治療法は、低血糖を処置するのに有効な量の本明細書に記載の安定な製剤を、低血糖を有する対象に投与することにより、低血糖を処置する段階を含む。いくつかの態様において、対象にグルカゴンを含む安定な製剤を投与する。

いくつかの態様において、本発明の治療法は、糖尿病を処置するのに有効な量の本明細書に記載の安定な製剤を、糖尿病を有する対象に投与することにより、糖尿病を処置する段階を含む。いくつかの態様において、対象にインスリンを含む安定な製剤を投与する。いくつかの態様において、対象にプラムリンチドを含む安定な製剤を投与する。いくつかの態様において、対象にインスリンおよびプラムリンチドを含む安定な製剤を投与する。いくつかの態様において、対象にエキセナチドを含む安定な製剤を投与する。いくつかの態様において、対象にグルカゴンおよびエキセナチドを含む安定な製剤を投与する。

疾患、状態、障害（例えば糖尿病状態、例えば低血糖または糖尿病）を処置するために投与する本明細書に記載のペプチド薬物の投薬量は、当業者によって実行される投薬レジメンおよび計画レジメンに従う。本発明の方法において用いるすべての薬理学的作用物質の適切な投薬量についての一般的指標は、Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 11th Edition, 2006、上記、およびPhysicians' Desk Reference (PDR)、例えば、65th (2011)または66th (2012) Eds., PDR Network, LLCに示されており、これらはそれぞれ参照により本明細書に組み入れられる。本明細書に記載の疾患、状態、または障害を処置するためのペプチド薬物の適切な投薬量は、組成物の製剤、患者の反応、状態の重症度、対象の体重、および処方する医師の判断を含むいくつかの因子に応じて変動することになる。記載の製剤の有効用量は、ペプチド薬物の医学的に有効な量を送達する。投薬量は、個々の患者の必要に応じて、経時的に増量または減量することができる。

有効な量または用量の決定は、特に本明細書において提供する詳細な開示に照らせば、十分に当業者の能力の範囲内である。一般に、これらの用量を送達するための製剤は、1つ、2つ、3つ、4つ、またはそれ以上のペプチドまたはペプチド類似体（ペプチド類似体が明白に除外されないかぎり、総称して「ペプチド」）を含有してもよく、各ペプチドは製剤中に約0.1mg/mLからペプチドの溶解性限度までの濃度で存在する。この濃度は好ましくは約1mg/mLから約100mg/mL、例えば、約1mg/mL、約5mg/mL、約10mg/mL、約15mg/mL、約20mg/mL、約25mg/mL、約30mg/mL、約35mg/mL、約40mg/mL、約45mg/mL、約50mg/mL、約55mg/mL、約60mg/mL、約65mg/mL、約70mg/mL、約75mg/mL、約80mg/mL、約85mg/mL、約90mg/mL、約95mg/mL、または約100mg/mLである。

本発明の製剤は、皮下投与、皮内投与、または筋肉内投与（例えば、注射または注入による）用でありうる。いくつかの態様において、製剤を皮下投与する。製剤は、組成物を皮膚に局所適用すること（例えば、組成物を皮膚上に塗布すること、または組成物を皮膚パッチ上に載せて皮膚パッチを皮膚に接着すること）などにより、経皮送達することもできる。

本開示の製剤を、任意の適切な装置を用いて注入または注射により投与することができる。例えば、本発明の製剤をシリンジ、ペン型注射装置、オートインジェクター装置、またはポンプ装置に入れてもよい。いくつかの態様において、注射装置は多用量インジェクターポンプ装置または多用量オートインジェクター装置である。ペプチド薬物を送達するために、オートインジェクターなどの注射装置の始動後、製剤が針から容易に流出しうるような様式で、製剤を装置に入れる。適切なペン型/オートインジェクター装置には、Becton-Dickenson、Swedish Healthcare Limited（SHL Group）、YpsoMed Ag製などのペン型/オートインジェクション装置が含まれるが、それらに限定されるわけではない。適切なポンプ装置には、Tandem Diabetes Care, Inc.、Delsys Pharmaceuticals製などのポンプ装置が含まれるが、それらに限定されるわけではない。

いくつかの態様において、バイアル、カートリッジ、またはあらかじめ充填したシリンジ中での投与の準備ができている本発明の製剤が提供される。

別の局面において、本発明は、製剤のペプチドで処置しうる任意の疾患、状態、または障害の処置用の医薬を製剤化するための、本明細書に記載の安定な製剤の使用を提供する。いくつかの態様において、糖尿病状態、例えば、1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病、前糖尿病、高血糖、低血糖、または代謝症候群の処置用の医薬を製剤化するために、安定な製剤を用いる。

いくつかの態様において、低血糖の処置用の医薬を製剤化するために、安定な製剤を用いる。いくつかの態様において、安定な製剤はグルカゴンまたはその塩（例えば、酢酸グルカゴン）を含む。いくつかの態様において、安定な製剤はグルカゴンおよびエキセナチドを含む。

いくつかの態様において、糖尿病の処置用の医薬を製剤化するために、安定な製剤を用いる。いくつかの態様において、安定な製剤はインスリンを含む。いくつかの態様において、安定な製剤はエキセナチドを含む。いくつかの態様において、安定な製剤はプラムリンチドを含む。いくつかの態様において、安定な製剤はインスリンおよびプラムリンチドを含む。

VI. キット
別の局面において、本発明は、本明細書に記載の疾患、状態、または障害を処置するためのキットを提供する。いくつかの態様において、キットは、ペプチドが不揮発性緩衝剤中で乾燥されており、かつ乾燥したペプチドが不揮発性緩衝剤中のペプチドのpHとほぼ等しいpH記憶を有する、1つ、2つ、3つ、4つ、またはそれ以上のペプチドまたはその塩と、非プロトン性極性溶媒とを含む安定な製剤であって、製剤の水分含有量が5％未満であり、かつ乾燥したペプチドが、乾燥したペプチドを非プロトン性極性溶媒中で再構成した場合、不揮発性緩衝剤中のペプチドのpHとほぼ等しいpH記憶を維持している、製剤；ならびに、安定な製剤を対象に投与するためのシリンジを含む。

いくつかの態様において、キットは、対象の低血糖を処置する際に用いるための、本明細書に記載の安定なグルカゴン製剤を含む。いくつかの態様において、キットは、グルカゴンが不揮発性緩衝剤中で乾燥されており、かつ乾燥したグルカゴンが、グリシン緩衝剤、クエン酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、およびそれらの混合物より選択される不揮発性緩衝剤中のグルカゴンのpHとほぼ等しいpH記憶を有し、乾燥したグルカゴンのpH記憶が約2.0〜約3.0である、グルカゴンまたはその塩（例えば、酢酸グルカゴン）；ならびにジメチルスルホキシド（DMSO）、n-メチルピロリドン（NMP）、酢酸エチル、およびそれらの混合物より選択される非プロトン性極性溶媒を含む、グルカゴン製剤であって、製剤の水分含有量が1％未満であり、かつ乾燥したグルカゴンが、それを非プロトン性極性溶媒中で再構成した場合、不揮発性緩衝剤中のグルカゴンのpHとほぼ等しいpH記憶を維持している、グルカゴン製剤を含む。いくつかの態様において、グルカゴン製剤は、製剤の凝固点を降下させる共溶媒をさらに含み、共溶媒は、エタノール、プロピレングリコール、グリセロール、およびそれらの混合物より選択される。いくつかの態様において、グルカゴン製剤は、糖質、デンプン、およびそれらの混合物より選択される安定化賦形剤をさらに含む。いくつかの態様において、グルカゴンは製剤中に約1mg/mL〜約50mg/mLの範囲の量で存在する。

いくつかの態様において、キットは、対象の糖尿病を処置する際に用いるための、本明細書に記載の安定なインスリンおよびプラムリンチド製剤を含む。いくつかの態様において、キットは、インスリンが、グリシン緩衝剤、クエン酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、およびそれらの混合物より選択される第一の不揮発性緩衝剤中で乾燥されており、かつ乾燥したインスリンが、第一の不揮発性緩衝剤中のインスリンのpHとほぼ等しい第一のpH記憶を有し、第一のpH記憶が、約1.5〜約2.5、または約6.0〜約8.0である、インスリン；プラムリンチドが、グリシン緩衝剤、クエン酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、およびそれらの混合物より選択される第二の不揮発性緩衝剤中で乾燥されており、かつ乾燥したプラムリンチドが、第二の不揮発性緩衝剤中のプラムリンチドのpHとほぼ等しい第二のpH記憶を有し、第二のpH記憶が約3.0〜約5.0、または約4.0〜約6.0である、プラムリンチド；ならびにジメチルスルホキシド（DMSO）、n-メチルピロリドン（NMP）、酢酸エチル、およびそれらの混合物より選択される非プロトン性極性溶媒を含む、インスリンおよびプラムリンチド製剤であって、製剤の水分含有量が1％未満であり、乾燥したインスリンが、それを非プロトン性極性溶媒中で再構成した場合、第一の不揮発性緩衝剤中のインスリンのpHとほぼ等しい第一のpH記憶を維持し、かつ乾燥したプラムリンチドが、それを非プロトン性極性溶媒中で再構成した場合、第二の不揮発性緩衝剤中のプラムリンチドのpHとほぼ等しい第二のpH記憶を維持している、インスリンおよびプラムリンチド製剤を含む。いくつかの態様において、インスリンおよびプラムリンチド製剤は製剤の凝固点を降下させる共溶媒をさらに含み、共溶媒は、エタノール、プロピレングリコール、グリセロール、およびそれらの混合物より選択される。いくつかの態様において、第一の不揮発性緩衝剤中のインスリンおよび第二の不揮発性緩衝剤中のプラムリンチドの一方または両方は、糖質、デンプン、およびそれらの混合物より選択される安定化賦形剤をさらに含む。いくつかの態様において、第一の不揮発性緩衝剤および第二の不揮発性緩衝剤は同一である。いくつかの態様において、第一の不揮発性緩衝剤および第二の不揮発性緩衝剤は異なる。いくつかの態様において、インスリンおよびプラムリンチドはそれぞれ製剤中に約1mg/mL〜約50mg/mLの範囲の量で存在する。いくつかの態様において、第一のpH記憶は約1.5〜約2.5である。いくつかの態様において、第一のpH記憶は約6.0〜約8.0である。いくつかの態様において、第二のpH記憶は約3.0〜約5.0である。いくつかの態様において、第二のpH記憶は約4.0〜約6.0である。いくつかの態様において、第一のpH記憶は約1.5〜約2.5であり、第二のpH記憶は約3.0〜約5.0である。

いくつかの態様において、キットは、ペン型注射装置、オートインジェクター装置、またはポンプの一部であるシリンジを含む。いくつかの態様において、シリンジは安定な製剤をあらかじめ充填されている。いくつかの態様において、キットは説明書をさらに含み、説明書は、それを必要としている対象（例えば、低血糖または糖尿病を有する対象）を処置するための安定な製剤の投与を指示している。

別の場合に、キットは、（a）有機溶媒、有機相緩衝剤を含む有機溶媒系と、ペプチドの最適な安定性および溶解性に対応する第一のイオン化プロファイルを有するペプチドまたはその塩とを含む、第一の組成物；ならびに、（b）ペプチドまたはその塩を部分的または完全に可溶化することができかつ第一のイオン化プロファイルを維持することができる非プロトン性極性溶媒を含む、第二の組成物を含みうる。第一の組成物および第二の組成物はそれぞれ第一の容器および第二の容器に含まれ得る。または、両方の組成物が、1つの容器内にあるが、必要に応じて除去またはそうでなければ改変されて両方の組成物を互いに接触させることができる分離片によって分離されているように、キットは設計されることができる。キットは、両方の容器の内容物を混合するための、または、ペプチドまたはその塩が非プロトン性極性溶媒中に可溶化されている非プロトン性極性溶媒を相の一方が含む二相系を得るように、分離片を破断もしくは除去するための、説明書を含み得る。他の相は有機溶媒系を含み得る。キットは、二相を分離するため、およびペプチドまたはその塩を有する非プロトン性極性溶媒を患者に注射するための器具を含み得る。

本発明を具体的な実施例によってさらに詳細に記載する。以下の実施例は例示のために示し、いかなる方法によっても本発明を限定する意図はない。当業者であれば、変更または改変しても本質的に同一の結果を生じうる、様々な非決定的パラメーターを容易に認識するであろう。

実施例1
（酢酸緩衝剤におけるペプチドpH記憶）
酢酸プラムリンチド（ヒトホルモンであるアミリンの37アミノ酸の合成類縁体）を、5％（w/v）トレハロースを含有しかつ10mM酢酸を用いて緩衝化された水溶液（pH4.0）に溶解した。プラムリンチド塩の添加後、溶液のpHを1.0N HClで4.0に再調節した。水溶液中の酢酸プラムリンチドの最終濃度は0.9mg/mLであった。溶液を凍結乾燥により粉末になるまで乾燥させた。乾燥後、ペプチド粉末のpHを、非緩衝化水を用いて元の（凍結乾燥前）濃度（0.9mg/mL）まで再構成することにより評価した。再構成した試料（N=3）のpHは4.1から4.2の間であることが判明した。

試料溶液（N=3）を、凍結乾燥した粉末をニートDMSO中、0.9mg/mL酢酸プラムリンチドの濃度まで直接可溶化することにより調製した。極性非プロトン性溶媒中の製剤安定性を試験するために、試料（N=3）を密封ガラスバイアル中、40℃で6週間保存した。6週間の保存後、試料溶液（N=3）は澄明であり、沈澱および目に見える凝集物はなく、T=6週における残存プラムリンチド濃度は、RP-HPLCにより評価して、初期測定（T=0週）の99.6％であると判明した。

実施例2
（仮想例）
実施例1で調製した酢酸プラムリンチド製剤に加えて、本発明の製剤を様々なやり方で調製することができる。図1は、2つのそのような工程の非限定的な例を提供する。水性組成物を用いる第一の工程は、以下の段階を含み得る。
段階1： ペプチドまたはその塩などの治療用物質を選択する。該物質が水溶液中で最適な安定性および溶解性を有するように最適なイオン化状態が該物質に付与される、その等電点およびpHを判定する。
段階2： 前記溶液中で所望のpHを付与する構成要素を含む水溶液に治療用物質を加える。該構成要素は、部分的揮発性緩衝剤、揮発性緩衝剤、強酸、もしくは強塩基またはそれらの組み合わせを、所望のpHを確立するのに十分な量で含む。構成要素は不揮発性緩衝剤も含み得る。水溶液のpHは、治療用物質の最適な安定性および溶解性のpHとほぼ等しい（すなわち、1pH単位以内である）ものであり得る。または、水溶液のpHは、治療用物質の最適な安定性および溶解性のpHより少なくとも1pH単位高いものであり得る。いずれの場合にも、水溶液は、乾燥されるとpHが比較的一定のままであるように、または乾燥されると溶液のpHが最適pHの範囲内に入るように変化するように、設計することができる。
段階3： 水溶液を乾燥段階（例えば、凍結乾燥または噴霧乾燥）に供して、前記治療用物質の乾燥したまたは粉末化した形態を生じる。該治療用物質の乾燥したまたは粉末化した形態は、水溶液中で該物質の最適な安定性および溶解性に対応するイオン化プロファイルを有することになる。
段階4： 再構成された治療用物質も、乾燥した該物質のイオン化プロファイルとほぼ等しいイオン化プロファイルを有するように、乾燥した治療用物質または粉末を非プロトン性極性溶媒中で再構成する。特に、この結果は、段階2の水溶液中の初期pHが治療用物質の最適なpHの範囲内または範囲外のいずれであるかに関わらず、得ることができる。

非水性組成物を用いる第二の工程は、以下の段階を含み得る。
段階1： ペプチドまたはその塩などの治療用物質を選択する。該治療用物質が水溶液中で最適な安定性および溶解性を有するように最適なイオン化状態が該物質に付与される、その等電点およびpHを判定する。望まれる場合には、前記工程1の段階3からの乾燥した治療用物質を用いることができる。しかし、該物質は乾燥しなければならないわけでも、またはこの工程の段階3において前述の様式で乾燥しなければならないわけでもない（図1参照）。
段階2： 有機溶媒と有機相緩衝剤とを含む有機溶媒系に治療用物質を加える。有機溶媒系のpHは、該物質を水溶液に入れることにより測定して、治療用物質の最適な安定性および溶解性のpHとほぼ等しい（すなわち、1pH単位以内である）ものであり得る。好ましい局面において、治療用物質は有機溶媒系中に懸濁されるかまたは部分的に懸濁される。
段階3： 有機溶媒系に非プロトン性極性溶媒を、溶媒交換により二相系を得るのに十分な量で加える。第一の相は極性非プロトン性溶媒と可溶化した形態の治療用物質の少なくとも一部とを含み、第二の相は有機溶媒と有機緩衝剤とを有する有機溶媒系を含む。有機溶媒系は実質的に無水である。有機溶媒系は極性非プロトン性溶媒から、当技術分野において公知の分離法によって除去されることができる。

加えて、1つの製剤が、少なくとも2つの異なるペプチド、または少なくとも3つの異なるペプチド、または少なくとも4つの異なるペプチド、または少なくとも5つの異なるペプチド、またはそれ以上を含むように、共製剤は調製されることができる。追加のペプチドはそれぞれ前述の2つの工程のいずれかによって調製されることができる。

本明細書において開示および特許請求する組成物および/または方法はすべて、本開示に照らせば、過度の実験を行うことなく作製および実行することができる。本発明の組成物および方法をいくつかの態様に関して記載してきたが、当業者であれば、本発明の概念、精神、および範囲から逸脱することなく、本明細書に記載の組成物および方法ならびに方法の段階または一連の段階に変動を適用し得ることが明白であろう。より具体的には、化学的および生理学的の両方に関連するある特定の作用物質を本明細書に記載の作用物質の代わりに用い得る一方で、同一または類似の結果が得られることが明らかであろう。当業者には明白なすべてのそのような類似の代用物および改変物は、添付の特許請求の範囲によって規定される、本発明の精神、範囲、および概念の範囲内であると考えられる。

Claims (66)

1. （a）部分的揮発性緩衝剤、揮発性緩衝剤、強酸、もしくは強塩基またはそれらの任意の組み合わせを含む水性組成物から前もって乾燥されているペプチドまたはその塩であって、乾燥した該ペプチドまたはその塩が、該ペプチドの最適な安定性および溶解性に対応する第一のイオン化プロファイルを有する、ペプチドまたはその塩；ならびに
   （b）乾燥した該ペプチドまたはその塩が、非プロトン性極性溶媒中で再構成されており、かつ該非プロトン性極性溶媒中で第二のイオン化プロファイルを有する、非プロトン性極性溶媒
   を含み、
   該第一のイオン化プロファイルおよび該第二のイオン化プロファイルが、互いに1pH単位以内であるなど実質的に同一である、
   非経口注射用の安定な製剤。
2. 前記ペプチドまたはその塩が、乾燥前の前記水性組成物中で第三のイオン化プロファイルを有し、該第三のイオン化プロファイルが、前記第一のイオン化プロファイルまたは前記第二のイオン化プロファイルと少なくとも1pH単位異なる、請求項1に記載の安定な製剤。
3. 前記水性組成物が乾燥されると前記第三のイオン化プロファイルが前記第一のイオン化プロファイルへとシフトするように、該水性組成物が製剤化されている、請求項2に記載の安定な製剤。
4. 前記ペプチドまたはその塩が、乾燥前の前記水性組成物中で第三のイオン化プロファイルを有し、該第三のイオン化プロファイルが、前記第一のイオン化プロファイルまたは前記第二のイオン化プロファイルと互いに1pH単位以内であるなど実質的に同一である、請求項1に記載の安定な製剤。
5. 前記水性組成物が乾燥されると該水性組成物のpHが対イオンもしくは緩衝剤構成要素または両方の損失を補償するように、該水性組成物が製剤化されている、請求項4に記載の安定な製剤。
6. 前記乾燥したペプチドが、前記非プロトン性極性溶媒中に部分的または完全に可溶化されており、好ましくは該非プロトン性極性溶媒中に完全に可溶化されている、請求項1〜5のいずれか一項に記載の安定な製剤。
7. 前記乾燥したペプチドが、前記非プロトン性極性溶媒中に部分的または完全に懸濁されている、請求項1〜5のいずれか一項に記載の安定な製剤。
8. 前記水性組成物が、酢酸ナトリウムもしくはリン酸アンモニウムまたはそれらの任意の組み合わせなどの部分的揮発性緩衝剤を含む、請求項1〜7のいずれか一項に記載の安定な製剤。
9. 前記水性組成物が、酢酸アンモニウム、ギ酸アンモニウム、炭酸アンモニウム、炭酸水素アンモニウム、酢酸ピリジン、ギ酸ピリジン、もしくは酢酸トリエチルアンモニウムまたはそれらの任意の組み合わせなどの揮発性緩衝剤を含む、請求項1〜8のいずれか一項に記載の安定な製剤。
10. 前記水性組成物が強酸、例えば塩酸を含む、請求項1〜9のいずれか一項に記載の安定な製剤。
11. 前記水性組成物が、強塩基、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム、もしくは水酸化カルシウムまたはそれらの組み合わせを含む、請求項1〜10のいずれか一項に記載の安定な製剤。
12. 前記水性組成物が緩衝剤を含まない、請求項10または11に記載の安定な製剤。
13. 前記水性組成物が不揮発性緩衝剤を含まない、請求項1〜12のいずれか一項に記載の安定な製剤。
14. 前記水性組成物が、異なる緩衝剤の混合物を含む、請求項1〜12のいずれか一項に記載の安定な製剤。
15. 前記異なる緩衝剤の混合物が、不揮発性緩衝剤の混合物、部分的揮発性緩衝剤の混合物、揮発性緩衝剤の混合物、不揮発性緩衝剤および部分的揮発性緩衝剤の混合物、不揮発性緩衝剤および揮発性緩衝剤の混合物、部分的揮発性緩衝剤および揮発性緩衝剤の混合物、または不揮発性緩衝剤、部分的揮発性緩衝剤、および揮発性緩衝剤の混合物を含む、請求項14に記載の安定な製剤。
16. グリシン緩衝剤、クエン酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、またはそれらの混合物などの不揮発性緩衝剤をさらに含む、請求項1〜12または14および15のいずれか一項に記載の安定な製剤。
17. 前記乾燥が、凍結乾燥、噴霧乾燥、脱水、薄膜凍結、噴霧凍結乾燥、またはそれらの任意の組み合わせによって実施される、請求項1〜16のいずれか一項に記載の安定な製剤。
18. 前記製剤の水分含有量が、15％未満、もしくは10％未満、もしくは5％未満、もしくは1％未満であるか、または無水である、請求項1〜17のいずれか一項に記載の安定な製剤。
19. 前記非プロトン性極性溶媒が、ジメチルスルホキシド（DMSO）、n-メチルピロリドン（NMP）、酢酸エチル、ジメチルホルムアミド（DMF）、炭酸プロピレン、またはそれらの混合物より選択される、請求項1〜18のいずれか一項に記載の安定な製剤。
20. 前記製剤の凝固点を降下させる共溶媒をさらに含み、該共溶媒が、エタノール、プロピレングリコール、グリセロール、およびそれらの混合物より選択される、請求項1〜19のいずれか一項に記載の安定な製剤。
21. 糖質、デンプン、およびそれらの混合物より選択される安定化賦形剤をさらに含む、請求項1〜20のいずれか一項に記載の安定な製剤。
22. 前記安定化賦形剤がトレハロースである、請求項21に記載の安定な製剤。
23. 前記ペプチドまたはその塩がグルカゴンである、請求項1〜22のいずれか一項に記載の安定な製剤。
24. 前記第一のイオン化プロファイルもしくは前記第二のイオン化プロファイルまたは両方のイオン化プロファイルが、約2〜3のpH範囲を有する水溶液中に可溶化された場合のグルカゴンのイオン化プロファイルに対応する、請求項23に記載の安定な製剤。
25. 前記第三のイオン化プロファイルが、約2〜3のpH範囲を有する水溶液中に可溶化された場合のグルカゴンのイオン化プロファイルに対応する、請求項23または24に記載の安定な製剤。
26. 前記第三のイオン化プロファイルが、3超または2未満のpH範囲を有する水溶液中に可溶化された場合のグルカゴンのイオン化プロファイルに対応する、請求項23または24に記載の安定な製剤。
27. 前記ペプチドまたはその塩が、プラムリンチド、インスリン、リュープロリド、LHRHアゴニスト、副甲状腺ホルモン（PTH）、アミリン、ボツリヌス毒素、ヘマタイド、アミロイドペプチド、コレシスチキニン（cholecystikinin）、コノトキシン、胃抑制ペプチド、インスリン様成長因子、成長ホルモン放出因子、抗菌因子、グラチラマー、グルカゴン様ペプチド-1（GLP-1）、GLP-1アゴニスト、エキセナチド、その類似体、およびそれらの混合物からなる群より選択される、請求項1〜26のいずれか一項に記載の安定な製剤。
28. 前記乾燥したペプチドまたはその塩を極性非プロトン性溶媒中で再構成する前に、該乾燥したペプチドまたはその塩を、有機溶媒と有機相緩衝剤とを含む有機溶媒系中で再構成することにより、前記第一のイオン化プロファイルが維持されている、請求項1〜27のいずれか一項に記載の安定な製剤。
29. 前記有機溶媒系を前記極性非プロトン性溶媒と混合しかつ任意で該極性非プロトン性溶媒を該有機溶媒系から分離することにより、前記乾燥したペプチドまたはその塩が該極性非プロトン性溶媒中で再構成されている、請求項28に記載の安定な製剤。
30. 前記有機溶媒系が実質的に無水である、請求項28または29に記載の安定な製剤。
31. シリンジ、ペン型注射装置、オートインジェクター装置、またはポンプ装置に含まれる、請求項1〜30のいずれか一項に記載の安定な製剤。
32. 第二のペプチドまたはその塩をさらに含む、請求項1〜31のいずれか一項に記載の安定な製剤。
33. 前記第二のペプチドまたはその塩が、第二の水性組成物から乾燥されており、かつ、乾燥した該第二のペプチドが、該第二のペプチドを該第二の水性組成物に溶解した場合の該第二のペプチドのイオン化プロファイルとほぼ等しいイオン化プロファイルを有し、該第二の水性組成物のpHが、該第二のペプチドに最適な安定性および溶解性のpHとほぼ等しい、請求項32に記載の安定な製剤。
34. 前記第二のペプチドが前記非プロトン性極性溶媒中に部分的または完全に可溶化されている、請求項32または33に記載の安定な製剤。
35. （a）ペプチドまたはその塩と部分的揮発性緩衝剤、揮発性緩衝剤、強酸、もしくは強塩基またはそれらの任意の組み合わせとを含む水性組成物を、乾燥したペプチド粉末になるまで乾燥させる段階であって、該乾燥したペプチド粉末が、該ペプチドの最適な安定性および溶解性に対応する第一のイオン化プロファイルを有する、段階；ならびに
    （b）該乾燥したペプチド粉末を非プロトン性極性溶媒中で再構成する段階であって、再構成された該乾燥したペプチド粉末が、該非プロトン性極性溶媒中で第二のイオン化プロファイルを有する、段階
    を含み、
    該第一のイオン化プロファイルおよび該第二のイオン化プロファイルが、互いに1pH単位以内であるなど実質的に同一である、
    非経口注射用の請求項1〜34のいずれか一項に記載の安定な製剤のいずれか1つを作製する方法。
36. 前記ペプチドまたはその塩が、乾燥前の前記水性組成物中で第三のイオン化プロファイルを有し、該第三のイオン化プロファイルが、前記第一のイオン化プロファイルまたは前記第二のイオン化プロファイルと少なくとも1pH単位異なる、請求項35に記載の方法。
37. 前記水性組成物が乾燥されると前記第三のイオン化プロファイルが前記第一のイオン化プロファイルへとシフトするように、前記水性組成物が製剤化される、請求項36に記載の方法。
38. 前記ペプチドまたはその塩が、乾燥前の前記水性組成物中で第三のイオン化プロファイルを有し、該第三のイオン化プロファイルが、前記第一のイオン化プロファイルまたは前記第二のイオン化プロファイルと互いに1pH単位以内であるなど実質的に同一である、請求項35に記載の方法。
39. 前記水性組成物が乾燥されると該水性組成物のpHが対イオンもしくは緩衝剤構成要素または両方の損失を補償するように、該水性組成物が製剤化される、請求項38に記載の方法。
40. 前記ペプチドまたはその塩がグルカゴンである、請求項35〜39のいずれか一項に記載の方法。
41. 前記水性組成物が乾燥前に約2〜3のpH範囲を有し、かつ前記第一のイオン化プロファイルもしくは前記第二のイオン化プロファイルまたは両方のイオン化プロファイルが、該水性組成物中に可溶化された場合のグルカゴンのイオン化プロファイルに対応する、請求項40に記載の方法。
42. 前記第三のイオン化プロファイルが、前記水性組成物中に可溶化された場合のグルカゴンのイオン化プロファイルに対応する、請求項41に記載の方法。
43. 前記水性組成物が、乾燥前に3〜7超のpH範囲を有し、かつ前記第一のイオン化プロファイルもしくは前記第二のイオン化プロファイルまたは両方のイオン化プロファイルが、約2〜3のpH範囲を有する水性組成物中に可溶化された場合のグルカゴンのイオン化プロファイルに対応する、請求項40に記載の方法。
44. 段階（b）の前に、前記乾燥したペプチド粉末が、有機溶媒と有機相緩衝剤とを含む有機溶媒系中で再構成され、該ペプチド粉末がその第一のイオン化プロファイルを維持するようにまたは該ペプチド粉末のイオン化プロファイルがその第一のイオン化プロファイルに再調整されるように該有機相緩衝剤のpHが設定される、請求項35〜43のいずれか一項に記載の方法。
45. 前記ペプチド粉末が前記有機溶媒系中に懸濁されるかまたは部分的に懸濁される、請求項44に記載の方法。
46. 二相系が得られるように前記有機溶媒系が前記非プロトン性極性溶媒と組み合わせられるかまたは混合され、第一の相が、該極性非プロトン性溶媒と、懸濁されたもしくは部分的に懸濁された前記乾燥したペプチド粉末の少なくとも一部とを含み、かつ第二の相が、前記有機溶媒と前記有機緩衝剤とを有する該有機溶媒系を含む、請求項44または45に記載の方法。
47. 前記有機溶媒系が実質的に無水である、請求項44〜46のいずれか一項に記載の方法。
48. 前記有機溶媒が、ヘキサン、ヘプタン、ドデカン、ヘキサデカン、エチルエーテル、イソプロピルエーテル、ブチルエーテル、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、トルエン、ピリジン、アセトン、2-ペンタノン、2-ヘプタニン（2-heptanine）、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項44〜47のいずれか一項に記載の方法。
49. 前記有機相緩衝剤が、トリフェニル酢酸、トリイソオクチルアミン、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項44〜48のいずれか一項に記載の方法。
50. 前記安定な製剤が、シリンジ、ペン型注射装置、オートインジェクター装置、またはポンプ装置に含まれる、請求項35〜49のいずれか一項に記載の方法。
51. 請求項1〜34に記載の安定な製剤のいずれか1つを対象に非経口投与する段階を含む、該安定な製剤を該対象に投与するための方法。
52. それを必要としている対象に、請求項1〜34に記載の安定な製剤のいずれか1つを、低血糖を処置するのに有効な量で非経口投与する段階を含む、低血糖を処置するための方法。
53. それを必要としている対象に、請求項1〜34に記載の安定な製剤のいずれか1つを、糖尿病を処置するのに有効な量で非経口投与する段階を含む、糖尿病を処置するための方法。
54. （a）ペプチドの最適な安定性および溶解性に対応する第一のイオン化プロファイルを有し、該第一のイオン化プロファイルが、有機溶媒と有機相緩衝剤とを含む有機溶媒系により設定されている、該ペプチドまたはその塩；ならびに
    （b）該ペプチドまたはその塩を含み、該ペプチドまたはその塩が非プロトン性極性溶媒中で第二のイオン化プロファイルを有する、該非プロトン性極性溶媒
    を含み、
    該第一のイオン化プロファイルおよび該第二のイオン化プロファイルが、互いに1pH単位以内であるなど実質的に同一である、
    非経口注射用の安定な製剤。
55. （a）からのペプチドまたはその塩が、部分的揮発性緩衝剤、揮発性緩衝剤、強酸、強塩基、もしくは不揮発性緩衝剤またはそれらの任意の組み合わせを含む水性組成物から前もって乾燥されている、請求項54に記載の安定な製剤。
56. 少なくとも二相を含み、第一の相が、前記ペプチドまたはその塩を含む前記非プロトン性極性溶媒を含み、かつ第二の相が前記有機溶媒系を含む、請求項54または55に記載の安定な製剤。
57. シリンジ、ペン型注射装置、オートインジェクター装置、またはポンプ装置に含まれる、請求項54〜56のいずれか一項に記載の安定な製剤。
58. 第二のペプチドまたはその塩をさらに含む、請求項54〜56のいずれか一項に記載の安定な製剤。
59. 前記第二のペプチドまたはその塩が、該第二のペプチドの最適な安定性および溶解性に対応する第三のイオン化プロファイルを有し、該第三のイオン化プロファイルが、第二の有機溶媒と第二の有機相緩衝剤とを含む第二の有機溶媒系により設定されている、請求項58に記載の安定な製剤。
60. （a）有機溶媒、有機相緩衝剤を含む有機溶媒系と、ペプチドの最適な安定性および溶解性に対応する第一のイオン化プロファイルを有する該ペプチドまたはその塩とを含む、第一の組成物；ならびに
    （b）該ペプチドまたはその塩を部分的または完全に可溶化することができかつ該第一のイオン化プロファイルを維持することができる非プロトン性極性溶媒を含む、第二の組成物
    を含む、キット。
61. 前記第一の組成物および前記第二の組成物がそれぞれ第一の容器および第二の容器に含まれる、請求項60に記載のキット。
62. 前記ペプチドまたはその塩が、部分的揮発性緩衝剤、揮発性緩衝剤、強酸、強塩基、もしくは不揮発性緩衝剤またはそれらの任意の組み合わせを含む水性組成物から前もって乾燥されている、請求項60または61に記載のキット。
63. 前記第一のイオン化プロファイルが、水溶液から前記ペプチドまたはその塩を乾燥させることによって得られる、請求項62に記載のキット。
64. 前記第一のイオン化プロファイルが前記第一の組成物から得られる、請求項60〜63のいずれか一項に記載のキット。
65. 前記ペプチドまたはその塩が前記有機溶媒系中に懸濁されているかまたは部分的に懸濁されている、請求項60〜64のいずれか一項に記載のキット。
66. 前記第一の組成物が実質的に無水である、請求項60〜65のいずれか一項に記載のキット。

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