JP2017506263A

JP2017506263A - 新規な６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン誘導体化合物

Info

Publication number: JP2017506263A
Application number: JP2016570147A
Authority: JP
Inventors: サクライ、セルジオ・ルイズ; トーザリム、カルロス・エデュアルド・ダ・コスタ; トレド、ファビアノ・トラバンカ; ソーサ、ブルーノ・アルトゥル・デ
Original assignee: バイオラブ・サヌス・ファーマセウティカ・エルティーディーエー．
Priority date: 2014-02-24
Filing date: 2015-02-24
Publication date: 2017-03-02
Anticipated expiration: 2035-02-24
Also published as: PL3133072T3; EP3133072A1; HUE044993T2; JP6636463B2; IL247330B; CL2016002125A1; AU2015221431A1; TR201910896T4; WO2015123748A1; CA2940225C; KR20160116028A; BR112016019609B1; MX2016010912A; EP3133072B1; AR099523A1; EP3133072A4; PT3133072T; BR112016019609A2; AU2015221431B2; KR102408431B1

Abstract

本発明は、新規な６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン誘導体、またはこれらの混合物に関する。本発明は、有効量の本発明の前記新規化合物の１つを含む、医薬組成物、前記化合物および／または誘導体のホスホジエステラーゼ酵素阻害剤としての使用、勃起障害、組織弛緩により治療できる障害および／または症状、ならびにホスホジエステラーゼ阻害剤、より具体的にはＰＤＥ−５阻害剤で治療できる障害の治療での化合物および／または誘導体の使用にも関する。本発明の別の目的は、治療有効量の新規化合物の１つを含む薬剤および新規化合物を使用する治療方法を提供することである。

Description

発明の分野

本発明は、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンの新規な誘導体、（任意の比率での）これらの誘導体の混合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体；前記化合物および／またはこれらの誘導体の調製方法に関する。

本発明は、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンの前記新規化合物の誘導体、（任意の比率での）これらの誘導体の混合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体を含む、医薬組成物；前記化合物および／または誘導体を含む薬剤、ならびに化合物および／または誘導体のホスホジエステラーゼ酵素阻害剤として、より特にホスホジエステラーゼ５型（ＰＤＥ−５）阻害剤としての使用；勃起障害、組織弛緩により治療可能な障害および／または症状、ならびにホスホジエステラーゼ阻害剤、より特にＰＤＥ−５阻害剤で治療可能な障害の治療での化合物および／または誘導体の使用も包含する。

本発明は、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンから誘導される新規化合物、（任意の比率での）これらの誘導体の混合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体を用いた、勃起障害、組織弛緩により治療可能な障害および／または症状、ならびにホスホジエステラーゼ阻害剤、具体的にはＰＤＥ−５阻害剤で治療可能な障害の治療方法も開示する。

特に、本発明は、３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３０）および３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３６）と呼ばれる化合物を開示する。

発明の背景

ホスホジエステラーゼ阻害剤化合物は、勃起障害、組織弛緩により治療可能な障害および／または症状、ならびにホスホジエステラーゼ阻害剤で治療可能な他の疾患の治療および／または予防のための臨床医学で用いられる主な薬剤である。勃起障害の場合、ＰＤＥ−５阻害剤が、臨床医学で最も広範に用いられる。

性交不能症としてより一般的に知られる勃起障害は、男性の生活の質に最も影響を与える疾患の１つである。長い間、勃起障害は、効果的な治療の見込みが十分になく、男性を悩ませていた。

１９７０年代より前は、勃起障害のほぼすべての症例は、心理的原因によると考えられており、治療は、テストステロンの経験的投与または精神科医への紹介からなるものであった。１９７３年に開発された膨張式の陰茎プロテーゼなどの新しい治療の開発、および１９８０年代初期の海綿体内注射の出現は、現代の勃起障害の治療の歴史で重要な出来事であった。クエン酸シルデナフィル（バイアグラの活性成分）に基づく、経口使用からなる初の治療は、１９９８年に公開され、勃起障害の治療で重要な出来事であった。

経口治療は、男性に受け入れられやすく、ｃＧＭＰ−ＰＤＥ阻害剤、より特にＰＥＤ−５阻害剤の使用に対する臨床的研究から開発された。これらの化合物の前駆体は、血管拡張特性を有する、５−｛２−エトキシ−５−［（４−メチル−１−ピペラジニル）スルホニル］フェニル｝−１−メチル−３−プロピル−１，４−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、またはシルデナフィルであり、これは、一酸化窒素の効果を増強する。シルデナフィル分子は、ＵＳ５２５０５３４に最初に記載された。

その後、ＰＤＥ−５酵素からなる他の阻害剤化合物が開発され、多数の技術文献刊行物および特許刊行物で引用されている。公知の化合物の中には、ＵＳ３６３５１７８に最初に記載された、レビトラの活性成分であるバルデナフィル分子、ＵＳ５８５９００６に最初に記載された、シアリスの活性成分であるタダラフィル、ＵＳ８３３８４３２に最初に記載され、本発明の研究者らと同じチームにより開発された、まだ商品化されていないＢＬ−１０６化合物が挙げられる。

入手可能な研究では、ある形態の性機能障害は、男性の１０〜５２％に影響を与えることが報告されている。Ｆｅｌｄｍａｎおよびその同僚による研究では、４０〜７０歳の男性の５２％が、軽度、中程度および重度の勃起障害を有することが示された。４０〜７０歳では、軽度の勃起障害の有病率は、比較的一定を保っているが、中程度〜重度の勃起障害の有病率は、１０年ごとに増加し、すべて合わせた増加率は、４０代の４０％から７０代のほぼ７０％に増大する（ＦｅｌｄｍａｎＨＡ、ＧｏｌｄｓｔｅｉｎＩ、ＨａｔｚｉｃｈｒｉｓｔｏｕＤＧら、Ｉｍｐｏｔｅｎｃｅａｎｄｉｔｓｍｅｄｉｃａｌａｎｄｐｓｙｃｈｏｓｏｃｉａｌｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ：ｒｅｓｕｌｔｓｏｆｔｈｅＭａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓＭａｌｅＡｇｉｎｇＳｔｕｄｙ．ＪＵｒｏｌ１９９４；１５１：５４〜６１）。

さらに、研究者らは、組織弛緩化合物が、結石症（Ｋｏｒｋｅｓ，Ｆ．ら、ＪＢｒａｓＮｅｆｒｏｌ．（２００９）３１（１）：５５）、前立腺肥大症（例えば、良性前立腺肥大症、前立腺炎）（ＷＯ９９１１２７９）および尿道狭窄（ＶａｎｄｅｒＷｅｒｆら、ＢＪＵＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（２００２）９０：５８８）の治療、またはそれらの治療、処置もしくは関連の手術での補助としての治療または作用に重点を置いた、様々な組織の弛緩を促進するために用いられていたことを発見した。組織弛緩により治療可能な他の障害および／または症状は、当技術分野で公知であり、記載されている。

ＰＤＥ−５阻害剤は、ｃＧＭＰの分解を抑制し、様々な組織で一酸化窒素（ＮＯ）の効果を長引かせるために、例えば、気道および血管でＮＯ誘発弛緩を維持するために［Ｂａｒｎｅｓ，ＰＪら（１９９５）］、ならびに組織でＮＯ誘発保護を維持するために（Ｄｕｆｆｉｎ，Ｒ．ら、ＢｒＪＰｈａｒｍａｃｏｌ．（２００８）１５３（４）：６２３）用いられていた。組織でのこのような作用は、肺高血圧症（市販品ではクエン酸シルデナフィルで治療する）；気管支炎；慢性喘息；高血圧症（ＥＰ７５８６５３、ＵＳ７５６９５７２）；レイノー病（ＧｈｏｆｒａｎｉＨＡら、ＮａｔＲｅｖＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖ２００６；５：６８９）、右心不全の発症（Ｇｈｏｆｒａｎｉら（２００３）ＡＪＲＣＣＭ１６７（８）：１１３９）；神経発生および脳卒中後の機能回復（Ｚｈａｎｇら（２００２）Ｓｔｒｏｋｅ３３：２６７５〜２６８０）；冠動脈弛緩（Ｈａｌｃｏｘら（２００２）ＪＡｍＣｏｌｌＣａｒｄｉｏｌ４０：１２３２）；女性の性的興奮障害（Ｎｅｈｒａら（２００１）ＷｏｒｌｄＪＵｒｏｌ．１９（１）：１１５）；狭心症および鬱血性心不全（Ｒｅｆｆｅｌｍａｎｎら、Ｃｉｒｃ．（２００３）１０８（２）：２３９）を含むいくつかの障害、つまり、ホスホジエステラーゼ、特にＰＤＥ−５阻害剤で治療可能である障害の治療に有益であることが示されている。ＰＤＥ−５阻害剤で治療可能な他の障害は、当技術分野で公知であり、記載されている。

この枠組み内で、ホスホジエステラーゼ阻害剤化合物、より具体的にはＰＤＥ−５阻害剤の新しい代替物、勃起障害、組織弛緩により治療可能な障害および／または症状、ならびにホスホジエステラーゼ阻害剤で治療可能な他の疾患のための新しい治療を求めて、本発明の研究者らは、ＰＤＥ−５の阻害を含む、ホスホジエステラーゼ酵素の阻害活性を示す、本発明の対象である、６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンから誘導される新しい化合物を開発した。

本発明は、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンから誘導される新しい化合物、（任意の比率での）これらの誘導体の混合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体を提供することを目的とする。より具体的には、化合物は、３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３０）および３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３６）と称される化合物、ならびに／または（任意の比率での）このような化合物の混合物である。

本発明の別の側面は、勃起障害、組織弛緩により治療可能な障害および／または症状、ならびにホスホジエステラーゼ阻害剤、具体的にはＰＤＥ−５阻害剤で治療可能な障害の治癒的および／または予防的治療のための、本発明の対象である、６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンから誘導される化合物の使用である。

本発明の目的はまた、本発明の対象である、６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンから誘導される新規化合物の調製方法を提供することである。特に、３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３０）および３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２−イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３６）の化合物、ならびに／または（任意の比率での）これらの化合物の混合物の調製方法である。

さらに、本発明は、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、有効量の６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンの新しい誘導体化合物、または（任意の比率での）これらの誘導体の混合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体を含む、医薬組成物を提供することも目的とする。

特に、医薬組成物は、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３０）および３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３６）から選択される、少なくとも１種の６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンから誘導される新規化合物、または（任意の比率での）これらの誘導体の混合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体を含む。

本発明の更なる目的は、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、治療有効量の６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンの新しい誘導体からなる化合物、（任意の比率での）これらの誘導体の混合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体を含む薬剤を提供することである。特に、３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３０）および３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３６）から選択される、少なくとも１種の６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンから誘導される新規化合物；ならびに／または（任意の比率での）このような化合物の混合物を含む、薬剤である。

図１は、実施例１で得た化合物（ＢＬ−２３０）の特性に関する¹ＨＮＭＲスペクトルを示す。図２は、実施例１で得た化合物（ＢＬ−２３０）の特性に関する¹³ＣＮＭＲスペクトルを示す。図３は、実施例１で得た化合物（ＢＬ−２３０）の特性に関するＨＲＭＳスペクトルを示す。図４は、実施例２で得た化合物（ＢＬ−２３６）の特性に関する¹ＨＮＭＲスペクトルを示す。図５は、実施例２で得た化合物（ＢＬ−２３６）の特性に関する¹³ＣＮＭＲスペクトルを示す。図６は、実施例２で得た化合物（ＢＬ−２３６）の特性に関するＨＲＭＳスペクトルを示す。図７は、ウサギ海綿体におけるフェニレフリン（ＰＥ）により誘発される収縮およびＤＭＳＯ（ビヒクル−負対照）の作用のグラフを示す。図８は、ウサギ海綿体におけるフェニレフリン（ＰＥ）により誘発される収縮およびタダラフィルの弛緩作用のグラフを示す。図９は、ウサギ海綿体におけるフェニレフリン（ＰＥ）により誘発される収縮およびＢＬ−２３０化合物の弛緩作用のグラフを示す。図１０は、ウサギ海綿体におけるフェニレフリン（ＰＥ）により誘発される収縮およびＢＬ−２３６化合物の弛緩作用のグラフを示す。図１１は、ＢＬ−２３０化合物およびタダラフィルの投与後のウサギ海綿体における弛緩のパーセントの用量反応曲線グラフを示す。図１２は、ＢＬ−２３０、タダラフィルおよびＤＭＳＯ（ビヒクル）を投与したときのウサギ海綿体における弛緩のパーセントの棒グラフを示す。図１３は、ＢＬ−２３６、タダラフィルおよびＤＭＳＯ（溶媒）を投与したときのウサギ海綿体における弛緩のパーセントの棒グラフを示す。図１４は、ＢＬ−２３０化合物の存在下で観察されたホスホジエステラーゼ酵素の阻害のパーセントを示す。図１５は、ＢＬ−２３６化合物の存在下で観察されたホスホジエステラーゼ酵素の阻害のパーセントを示す。

発明の詳細な説明

本発明は、特にＰＤＥ−５の阻害のためのホスホジエステラーゼ阻害剤で治療可能な疾患、例えば、勃起障害、組織弛緩により治療可能な障害および／または症状、ならびにホスホジエステラーゼ阻害剤で治療可能な他の疾患の治療で有用な新規化合物を開示する。本発明の化合物は、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、式（Ｉ）

［式中、Ｒ¹は、芳香族基、１個以上のヘテロ原子を含有する芳香族基、フェニル基、フェノール、３−メトキシ−４−フェノール、メチレン−３，４−ジオキシフェニル、２−メトキシフェニル、３−メトキシフェニル、４−メトキシフェニル、３，４−ジメトキシフェニル、２−ハロフェニル、３−ハロフェニル、４−ハロフェニル、フリル、ピリジン、二環式芳香族、１個以上のヘテロ原子を含有する二環式芳香族であり、
Ｒ²は、アリール、ヘテロアリール、二環式アリール、ＣＨ₂（ＣＨ₂）_nＲ³、ＣＨ₂（ＣＨ₂）_nＮＲ⁴Ｒ⁵、ＣＨＲ⁶ＣＨ₂ＯＨ、ＣＨ₂ＣＨ（ＯＨ）Ｒ⁷、ＣＨ₂（ＣＨ₂）ＯＲ⁸、ＣＨ₂（ＣＨ₂）_nＳＲ⁹、カルボン酸塩、スルホン酸塩または第４級アンモニウム塩であり、
Ｒ³は、ＯＨ、ＮＨ₂、ＮＨ³⁺、Ｓ（Ｏ）Ｍｅ、ＳＯ₃Ｈ、ＣＯ₂Ｈ、Ｃｌ、カルボン酸塩、スルホン酸塩または第４級アンモニウム塩であり、
Ｒ⁴は、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、フェニル、ベンジルまたは第４級アンモニウム塩であり、
Ｒ⁵は、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、フェニル、ベンジルまたは第４級アンモニウム塩であり、
Ｒ⁶は、（Ｒ）−メチル、（Ｒ）−エチル、（Ｒ）−イソプロピル、（Ｒ）−イソブチル、（Ｒ）−フェニル、（Ｒ）−ＣＨ₂ＳＨ、（Ｒ）−ＣＨ₂ＣＨ₂ＳＣＨ₃、（Ｒ）−ベンジル、（Ｒ）−ｓｅｃ−ブチル、（Ｓ）−メチル、（Ｓ）−エチル、（Ｓ）−イソプロピル、（Ｓ）−イソブチル、（Ｓ）−フェニル、（Ｓ）−ＣＨ₂ＳＨ、（Ｓ）−ＣＨ₂ＣＨ₂ＳＣＨ₃、（Ｓ）−ベンジル、（Ｓ）−ｓｅｃ−ブチルまたはＣＨ₂ＯＨであり、
Ｒ⁷は、（Ｒ）−メチル、（Ｒ）−エチル、（Ｒ）−プロピル、（Ｒ）−イソプロピル、（Ｒ）−フェニル、（Ｒ）−ベンジル、（Ｓ）−メチル、（Ｓ）−エチル、（Ｓ）−プロピル、（Ｓ）−イソプロピル、（Ｓ）−フェニルまたは（Ｓ）−ベンジルであり、
Ｒ⁸は、Ｃ_1〜6アルキル、Ｃ_2〜6アルケニル、Ｃ_2〜6アルキニル、フェニルまたはベンジルであり、
Ｒ⁹は、Ｃ_1〜6アルキル、Ｃ_2〜6アルケニル、Ｃ_2〜6アルキニル、フェニルまたはベンジルであり、
Ｎは、０〜４の数値である］
で表される、６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンから誘導される新しい化合物、（任意の比率での）これらの誘導体の混合物を指す。

式（Ｉ）の化合物は、１つ以上のキラル中心を含有していてもよく、したがって、鏡像異性体および／またはジアステレオマーが存在していてもよい。特に、キラル中心は、式（Ｉ）の説明においてアスタリスク（*）で強調されている。したがって、本発明は、これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、式（Ｉ）の化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体も包含する。

式（Ｉ）の化合物は、２個の互変異性形態で存在していてもよく、本発明は、１個以上の互変異性形態および（任意の比率での）これらの形態の混合物を含む。

式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩は、薬学的に許容される酸を加えることにより形成される。塩の例としては、これらに限らないが、硝酸、塩酸、臭化水素酸、硫酸または硫酸水素、リン酸、リン酸水素、酢酸、安息香酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、クエン酸、酒石酸、グルコン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸およびｐ−トルエンスルホン酸の塩が挙げられる。式（Ｉ）の化合物は、塩基、例えば、ナトリウムおよびカリウム塩とともに、薬学的に許容される金属塩中、特にアルカリ金属塩中で用いられてもよい。

具体的な態様において、本発明は、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、式（Ｉ）

［式中、Ｒ¹は、メチレン−３，４−ジオキシフェニルであり、
Ｒ²は、ＣＨ₂（ＣＨ₂）_nＲ³またはＣＨＲ⁶ＣＨ₂ＯＨであり、
Ｒ³は、ＯＨであり、
Ｒ⁶は、（Ｓ）−メチルであり
Ｎは、１に等しい］
で表される、６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンから誘導される新しい化合物、（任意の比率での）これらの誘導体の混合物；任意の比率で、鏡像体過剰率を有する、これらの個々の形態および／またはラセミもしくは非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体を記載する。

より具体的な態様においては、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、
３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３０）と称される、式（ＩＩ）

および、３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３６）と称される、式（ＩＩＩ）

により表される６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンから誘導される新規化合物、または（任意の比率での）これらの誘導体の混合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体である。

本発明の別の態様において、化学構造式（ａ）で表される化合物、（Ｅ）−メチル２−（（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イルメチレン）アミノ）−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−３−オキソプロパノエート、化学構造式（ｂ）で表される、メチル２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−３−（２−クロロアセチル）−５−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，３−ジヒドロオキサゾール−４−カルボキシレート、および化学構造式（ｃ）で表される、２−アミノエタノールのアミンを用いて得ることができる、３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３０）と呼ばれる式（ＩＩ）の化合物の合成方法について言及する。

式（ＩＩ）の化合物の合成について、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中のピリジン（ＰＹ）乾燥溶液および塩化クロロアセチル溶液の存在下で化合物（ａ）を反応させることにより、化合物（ｂ）を調製する。反応を完了し、中間体（ｂ）を形成した後、これを、反応の最後で、エタノールおよび２−アミノエタノール（ｃ）を含む媒体に加え、エタノールおよび水を加える。これにより、スキーム［１］

に例示したように式（ＩＩ）の化合物が得られる。

したがって、本発明に係る３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３６）と称される式（ＩＩＩ）の化合物は、化学構造式（ａ）で表される化合物、（Ｅ）−メチル２−（（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イルメチレン）アミノ）−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−３−オキソプロパノエート、化学構造式（ｂ）で表される、メチル２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−３−（２−クロロアセチル）−５−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，３−ジヒドロオキサゾール−４−カルボキシレート、および化学構造式（ｄ）で表されるアミン、（Ｓ）−２−アミノプロパン−１−オールを用いて得ることができる。

式（ＩＩＩ）の化合物の合成について、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中のピリジン（ＰＹ）乾燥溶液および塩化クロロアセチル溶液の存在下で化合物（ａ）を反応させることにより、化合物（ｂ）を調製する。反応を完了し、中間体（ｂ）を形成した後、これを、反応の最後で、エチルアルコールおよび（Ｓ）−２−アミノプロパン−１−オール（ｄ）を含む媒体に加え、エタノールおよび水を加える。これにより、スキーム［２］

に示したように、式（ＩＩＩ）の化合物が得られる。

本発明は、医薬組成物、すなわち、適当な剤形も企図し、そこで、前記組成物は、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、有効量の１種以上の式（Ｉ）の化合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体を活性成分として含む。

本発明の組成物は、好ましくは、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、
３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３０）と称される式（ＩＩ）

および３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３６）と称される式（ＩＩＩ）

で表される新規化合物、または（任意の比率での）これらの誘導体の混合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体を活性成分として含む。

医薬組成物は、当技術分野で周知の方法で調製してもよい。適切には、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ‘ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓまたは類似の情報源を、本発明の担体化合物に適した医薬調合物を調製するために使用してもよい。

本発明の医薬組成物を、経口、局所、注射、経鼻および経直腸での手段により投与してもよい。選択される特定の様式は、組成物中に存在する化合物に依存する。

経口投与用の医薬組成物としては、これらに限らないが、粉末、顆粒、カプセル、錠剤、発泡錠、チュアブル錠、コーティング錠、丸剤、ゲル、チュアブルガム、フィルム、溶液、シロップ、エリキシル、懸濁剤、乳剤などを挙げることができる。

本発明は、治療有効量の１種以上の式（Ｉ）の化合物、ならびに／または塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステル；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体；ならびに１種以上の薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物も企図する。

特に、医薬組成物は、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、
（ａ）式（ＩＩ）で示される、３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３０）
（ｂ）式（ＩＩＩ）で示される、３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３６）
からなる群から選択される少なくとも１種の化合物、任意の比率でのこれらの混合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体；ならびに１種以上の薬学的に許容される賦形剤を活性成分として含む。

塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、ここに記載した化合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体は、勃起障害、組織弛緩により治療可能な障害および／または症状、ならびにホスホジエステラーゼ阻害剤、例えば、ＰＤＥ−５で治療可能な障害の治療および／または予防で用いられる。ＰＤＥ阻害剤で治療可能な障害は、これらの例だけに限らないが、結石症、前立腺肥大症、肺高血圧症、尿道狭窄、女性の性機能障害および／または男性の性機能障害であってよい。

さらに、本発明は、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、ここに記載した化合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体を含む、医薬組成物が、勃起障害、組織弛緩により治療可能な障害および／または症状、ならびにホスホジエステラーゼ阻害剤、例えば、ＰＤＥ−５で治療可能な障害の治療および／または予防のために用いられることを企図する。ＰＤＥ阻害剤で治療可能な障害は、これらの例だけに限らないが、結石症、前立腺肥大症、肺高血圧症、尿道狭窄、女性の性機能障害および／または男性の性機能障害であってよい。

特に、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、式（ＩＩ）で示される３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３０）および式（ＩＩＩ）で示される３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３６）の化合物、または（任意の比率での）これらの誘導体の混合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体である。

さらに、本発明は、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、有効量の少なくとも１種の６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンから誘導される新しい化合物、（任意の比率での）これらの誘導体の混合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体を投与する、ホスホジエステラーゼの活性と関連した障害の治療および／または予防方法を提供する。ＰＤＥ阻害剤で治療可能な障害は、これらの例だけに限らないが、勃起障害、結石症、前立腺肥大症、肺高血圧症、尿道狭窄、女性の性機能障害および／または男性の性機能障害であってよい。

本発明は、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、有効量の少なくとも１種の６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンから誘導される新しい化合物、（任意の比率での）これらの誘導体の混合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体を投与することによる、勃起障害、組織弛緩により治療可能な障害および／または症状、ならびにホスホジエステラーゼ阻害剤、例えば、ＰＤＥ−５で治療可能な障害の治療および／または予防方法についても開示する。

特に、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン［ＢＬ−２３０、式（ＩＩ）］および３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン［ＢＬ−２３６、式（ＩＩＩ）］の化合物、または（任意の比率での）これらの誘導体の混合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体。

［実施例］
詳細に記載された以下の実施例は、本発明を例示するものであり、本発明の保護範囲を限定するものではなく、同じ観点で様々な修正が当技術分野の専門家に示唆されると予想される。このような同等の功績は、添付の特許請求の範囲および領域内に含まれるべきである。

例１：３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３０）と称される式ＩＩの化合物の調製
機械的撹拌機、追加の漏斗およびＣａＣｌ₂を含有する乾燥管を備えた５００ｍＬのフラスコに、化合物（ａ）（１０．２０ｇ、２８．０ｍｍｏｌ）および乾燥テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）１０２ｍＬ中の乾燥ピリジン（１１．３ｍｌ）溶液を加え、これを３０分間撹拌した。この懸濁液に、乾燥ＴＨＦ３０ｍＬ中の塩化クロロアセチル（２．９ｍＬ、３６．４ｍｍｏｌ）溶液（試薬２）を約２時間かけて徐々に加えた。この添加後、反応混合物を、室温で４時間反応させることにより、中間体（ｂ）を形成した。この期間の最後に、エタノール（４２ｍＬ）および２−アミノエタノール（３９．３ｇ、６４４．０ｍｍｏｌ）として知られる化合物（ｃ）を媒体に加え、混合物を１６時間撹拌した。この期間の最後に、エタノール２５０ｍｌおよび水１００ｍｌを媒体に加えた。該系を真空蒸留にかけ、生成物が沈殿するまで、過剰な溶媒を除去した。フラスコを室温まで冷却し、次いで０〜５℃の温度で冷却した。冷却した系を、２時間撹拌しながら０〜５℃の温度で維持した。得られた懸濁液を真空ろ過し、沈殿物をエタノール１００ｍＬで洗浄した。固体を２５０ｍＬのフラスコに入れ、エタノール６０ｍＬを加え、混合物を３０分間撹拌した。この期間の後、固体をろ過し、真空乾燥することにより、式（ＩＩ）の生成物を以下のスキーム［１］に従って形成した。

スキーム［１］：化合物３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３０）の合成

この方法で得た化合物は、ＩＵＰＡＣ名３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３０）を有し、式（ＩＩ）

で示される化学構造を有し、以下の特性を有する：分子式Ｃ₂₃Ｈ₁₉Ｎ₃Ｏ₆；黄色の固体；融点２５４〜２５８℃、¹H NMR (500 MHz, (CD₃)₂SO): δ 11.87 (1s, 1H), 8.96 (1s, 1H), 7.85 (d, J = 10.0 Hz, 1H) , 7.47 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 7.18〜7.05 (m, 5H), 6.98 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 6.05 (s, 2H), 4.84-4.32 (m, 1H); 4.28 (dd, J = 30.0 Hz, J = 15.0 Hz, 2H), 3.65-3.61 (m, 2H), 3.50〜3.45 (m, 2H) (図1); ¹³C NMR (125 MHz, (CD₃)₂SO): δ159.1, 157.2, 148.8, 148.1, 148.0, 136.3, 131.5, 131.3, 125.7, 122.7, 121.8, 121.1, 120.9, 112.7, 108.8, 107.0, 105.4 , 102.8, 101.9, 90.8, 58.9, 52.9, 48.2 (図2); HRMS (EI) m/z C₂₃H₁₉N₃O₆の計算値: [433.1274]⁺ 実測値: 434.1336 [M+H]⁺ (図3).
例２：３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３６）と称される式（ＩＩＩ）の化合物の調製
機械的撹拌機、追加の漏斗およびＣａＣｌ₂を含有する乾燥管を備えた５００ｍＬのフラスコに、化合物（ａ）（１０．２０ｇ、２８．０ｍｍｏｌ）および乾燥テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）１０２ｍＬ中の乾燥ピリジン（１１．３ｍｌ）溶液を加え、これを３０分間撹拌した。この懸濁液に、乾燥ＴＨＦ３０ｍＬ中の塩化クロロアセチル（２．９ｍＬ、３６．４ｍｍｏｌ）溶液（試薬２）を約２時間かけて徐々に加えた。この添加後、反応混合物を、室温で４時間反応させることにより、中間体（ｂ）を形成した。この期間の最後に、エタノール（４２ｍＬ）および（Ｓ）−２−アミノプロパン−１−オール（４８．４ｇ、６４４．０ｍｍｏｌ）と称される化合物（ｄ）を媒体に加え、混合物を１６時間撹拌した。この時間の最後に、エタノール２５０ｍｌおよび水１００ｍｌを媒体に加えた。該系を真空蒸留にかけ、生成物が沈殿するまで、過剰な溶媒を除去した。フラスコを室温まで冷却し、次いで０〜５℃の温度で冷却した。冷却した系を、２時間撹拌しながら０〜５℃の温度で維持した。得られた懸濁液を真空ろ過し、沈殿物をエタノール１００ｍＬで洗浄した。固体を２５０ｍＬのフラスコに入れ、エタノール６０ｍＬを加え、混合物を３０分間撹拌した。この期間の後、固体をろ過し、真空乾燥することにより、式（ＩＩＩ）の生成物を以下のスキーム［２］に従って形成した。

スキーム［２］：化合物３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３６）の合成

この方法で得た化合物は、ＩＵＰＡＣ名３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３６）を有し、式（ＩＩＩ）

で示される化学構造を有し、以下の特性を有する：分子式Ｃ₂₄Ｈ₂₁Ｎ₃Ｏ₆；黄色の固体；融点２３５〜２３９℃、¹H NMR (300 MHz, (CD₃)₂SO): δ11.87 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 8.98 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 7.87 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.14〜7.06 (m, 5H), 6.98 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.4 (s, 2H) , 4.85 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.67〜4.60 (m, 1H), 4.07 (dd, J = 21.0 Hz, J = 18.0 Hz, 2H), 3.59〜3.52 (m, 1H), 3.51〜3.40 (m, 1H), 1.07 (d, J = 6.0 Hz, 3H) (図4); ¹³C NMR, 75 MHz, (CD₃)₂SO, δ159.5, 157.5, 148.8, 148.1, 148.0, 136.3, 131.6, 131.3, 125.7, 122.6, 121.8, 121.0, 120.9, 112.8, 108.8, 107.0, 105.7, 102.8, 101.9, 90.7, 61.9, 49.9, 46.5, 13.7 (図5); HRMS (EI) m/z [C₂₄H₂₁N₃O₆] +の計算値: 447.1430, 実測値: 470.1325 [M+Na]⁺ (図6).
例３：単離したウサギ海綿体におけるＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物の弛緩作用の評価
組織
この研究のために、ニュージーランド白ウサギ（２〜３．５ｋｇ）を使用して、陰茎組織を得、それを切開し、冷却したクレブス溶液に移した。この研究のために、ニュージーランド白ウサギの陰茎組織の４個の海綿体細片（ＣＣ）を使用した。

等尺性張力の記録
細片を、３７℃、７．３〜７．５のｐＨのクレブス溶液を含有する、１０ｍｌの組織インキュベーションチャンバーに置き、９５％の酸素（Ｏ₂）および５％の二酸化炭素（ＣＯ₂）の混合物で連続的に気泡を発生させた。最初の張力１０ｍＮを組織に加えた後、６０分間平衡期間をおいた。張力の変化（等尺性力）を、等尺性トランスデューサー（ＡＤＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、オーストラリア）を用いて得、これを、データ収集システムＰｏｗｅｒＬａｂ４／３０（ＣｈａｒｔＳｏｆｔｗａｒｅ、ＢＬ−２３０用バージョン７．３．７、ＡＤＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｍａ、ＵＳＡおよびＢＬ−２３６用バージョン７．０、ＡＤＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｍａ）に記録した。

データを分析すると、（ａ）図７〜１０から分かるように、１μＭのフェニレフリン（ＰＥ）は、ウサギ海綿体組織の持続的収縮を誘発することができ、（ｂ）化合物を可溶化するために使用した担体であるジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）の投与は、組織の弛緩を誘発せず（図７）、（ｃ）１μＭのタダラフィルの投与は、組織の弛緩を起こし（図８）、（Ｄ）１μＭの濃度のＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物は、同じ濃度のタダラフィルのものに類似した組織の弛緩形状を形成した（各々、図９および１０）。

ＢＬ−２３０化合物およびタダラフィル（０．００１〜１０μＭ）の累積濃度反応曲線を、１μＭのＰＥで予備収縮させたウサギ海綿体細片で得た。図１１から分かるように、ＢＬ−２３０化合物は、タダラフィル（０．００１〜１０μＭ）で観察されたものに類似した用量依存的弛緩を起こし、これはフェニレフリン収縮に起因する。さらに、図１２および１３は、ＢＬ−２３０、ＢＬ２３６化合物およびタダラフィルで観察された弛緩も例示しており、そこで、ＢＬ−２３０は、ウサギ海綿体の７８．４７％の弛緩を誘発することができ、ＢＬ−２３６は９３．０５％誘発し、タダラフィルはウサギ海綿体の約１００％の弛緩を誘発したことが観察できる（図１２および１３）。一方で、ＤＭＳＯは、約２０％というほんのわずかな弛緩を示した。

結果は、ＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物は、ウサギ海綿体組織において弛緩を起こすことを示している。

例４：式（ＩＩ）のＢＬ−２３０化合物および式（ＩＩＩ）のＢＬ−２３６化合物のホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）の阻害プロファイルを評価するためのインビトロ前臨床試験
これらの試験は、ＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物の１３種類のヒトホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）の阻害プロファイルを評価するために行われた。より具体的には、ＰＤＥ１Ｂ、ＰＤＥ２Ａ₁、ＰＤＥ３Ａ、ＰＤＥ３Ｂ、ＰＤＥ４Ａ_1A、ＰＤＥ４Ｂ₁、ＰＤＥ４Ｄ₂、ＰＤＥ５、ＰＤＥ６、ＰＤＥ７Ａ、ＰＤＥ８Ａ₁、ＰＤＥ１０Ａ₂およびＰＤＥ１１Ａ₄の阻害プロファイルである。これらの試験のために、当技術分野ですでに公知であり、標準化されている酵素による試験が行われた。

４．１：ＰＤＥ１Ｂ酵素の活性に対するＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物の作用活性
ヒトＰＤＥ１Ｂ酵素の活性に対するＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物の作用を、ｓｆ９細胞で発現するヒト組換え酵素を用いて、環状グアノシン一リン酸（ｃＧＭＰ）からの５’−グアノシン一リン酸（５’ＧＭＰ）の産生を測定することにより定量した。検出方法は、ＨＴＲＦ（登録商標）（ＨｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓＴｉｍｅＲｅｓｏｌｖｅｄＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を使用した。

試験化合物、参照化合物または水（対照）を、４４．４ｍＭのトリスヒドロキシメチルアミノメタン塩酸塩（トリス−ＨＣｌ）、５．２８ｍＭの塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ₂）、０．８８ｍＭの塩化カルシウム（ＣａＣｌ₂）、２．６４ｍＭのジチオスレイトール（ＤＴＴ）ならびに０．１９８Ｕのカルモジュリンおよび０．０４４％のポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０）（ｐＨ７．８）を含有する緩衝液中の０．０７ＵのＰＤＥ１Ｂ酵素と混合した。次いで、２４０ｎＭのｃＧＭＰ基質を加えることにより、反応を開始し、混合物を室温で３０分間インキュベートした。基礎対照測定のために、酵素を反応混合物から省いた。蛍光アクセプター（Ｄｙｅ２標識ｃＧＭＰ）および蛍光ドナー（ユーロピウムクリプテートで標識した抗ｃＧＭＰ抗体）を１ｍＭの３−イソブチル−１−メチルキサンチン（ＩＢＭＸ）の存在下で加えた。６０分後、残留ｃＧＭＰの量に対応する蛍光の移動を、マイクロプレートリーダー（ＲｕｂｙＳｔａｒ、ＢＭＧ）を用いて、λｅｘ＝３３７ｎｍ、λｅｍ＝６２０ｎｍおよびλｅｍ＝６６５ｎｍで測定した。酵素の活性を、６６５ｎｍで測定したシグナルを６２０ｎｍで測定したシグナルで割ることにより求めた（比）。結果を、対照酵素の活性の阻害のパーセントで表した。標準の阻害性参照化合物であるカルミダゾリウムを使用し、これを、いくつかの濃度で各実験において試験し、阻害曲線を得、そこからＩＣ₅₀値を計算した。

この試験のために、研究者らは、Ｂｅｎｄｅｒ［ＢＥＮＤＥＲ、ＡＴａｎｄＢｅａｖｏ，ＪＡ（２００６）．Ｃｙｃｌｉｃｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅｓ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｔｏｃｌｉｎｉｃａｌｕｓｅ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．，５８：４８８］により示された教示を基礎として使用した。

結果によれば、ＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物は、各々、ＰＤＥ１Ｂ酵素の活性を阻害しなかったことが観察された（図１４および１５）。

４．２：ＰＤＥ２Ａ ₁ 、ＰＤＥ３Ａ、ＰＤＥ４Ａ _1A 、ＰＤＥ４Ｂ ₁ 、ＰＤＥ７Ａ、ＰＤＥ８Ａ ₁ 、ＰＤＥ１０Ａ ₂ およびＰＤＥ１１Ａ ₄ 酵素の活性に対するＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物の作用活性
ヒトＰＤＥ２Ａ₁、ＰＤＥ３Ａ、ＰＤＥ４Ａ_1A、ＰＤＥ４Ｂ₁、ＰＤＥ７Ａ、ＰＤＥ８Ａ₁、ＰＤＥ１０Ａ₂およびＰＤＥ１１Ａ₄酵素の活性に対するＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物の作用を、ｓｆ９細胞で発現するヒト組換え酵素を用いて、環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）からの５’−アデノシン一リン酸（５’ＡＭＰ）の産生を測定することにより定量した。検出方法は、ＨＴＲＦ（登録商標）を使用した。

試験化合物、参照化合物または水（対照）を、４４．４ｍＭのトリスＨＣｌ、５．２８ｍＭのＭｇＣｌ₂、２．６４ｍＭのＤＴＴおよび０．０４４％のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０（ｐＨ７．８）を含有する緩衝液中の酵素（酵素およびそれらの使用量を表１に示す）と混合した。次いで、４０ｎＭのｃＡＭＰ基質を加えることにより、反応を開始し、混合物を室温で３０分間インキュベートした。基礎対照測定のために、酵素を反応混合物から省いた。蛍光アクセプター（Ｄｙｅ２標識ｃＡＭＰ）および蛍光ドナー（ユーロピウムクリプテートで標識した抗ｃＡＭＰ抗体）を１ｍＭのＩＢＭＸの存在下で加えた。６０分後、移動残留ｃＡＭＰの量に対応する蛍光を、マイクロプレートリーダー（ＲｕｂｙＳｔａｒ、ＢＭＧ）を用いて、λｅｘ＝３３７ｎｍ、λｅｍ＝６２０ｎｍおよびλｅｍ＝６６５ｎｍで測定した。酵素の活性を、６６５ｎｍで測定したシグナルを６２０ｎｍで測定したシグナルで割ることにより求めた（比）。結果を、対照酵素の活性の阻害のパーセントで表した。使用した各酵素に対して用いた標準の阻害性参照化合物を表１に記載した。これを、いくつかの濃度で各実験において試験し、阻害曲線を得、そこからＩＣ₅₀値を計算した。

この試験のために、研究者らは、Ｂｅｎｄｅｒ（ＢＥＮＤＥＲ、ＡＴａｎｄＢｅａｖｏ，ＪＡ（２００６）．Ｃｙｃｌｉｃｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅｓ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｔｏｃｌｉｎｉｃａｌｕｓｅ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．，５８：４８８［ＰＤＥ３Ａ₁およびＰＤＥ２Ａ］；Ｓａｌｄｏｕ（ＳＡＬＤＯＵ，Ｎら（１９９８）ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎＰＤＥ４ｉｓｏｆｏｒｍｓ：ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｗｉｔｈｓｕｂｓｔｒａｔｅａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，ＣｅｌｌＳｉＧｎａｌ．，１０：４２７．［ＰＤＥ４Ａ_1AおよびＰＤＥ４_B1］）；Ｓｍｉｔｈ（ＳＭＩＴＨ，ＳＪら（２００４）ＤｉｓｃｏｖｅｒｙｏｆＢＲＬ５０４８１［Ｎ，Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｎａｍｉｄｏ−４−ｍｅｔｈｙｌ−ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｅｎｅ］，ａｓｅｌｅｃｔｉｖｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ７：ｉｎｖｉｔｒｏｓｔｕｄｉｅｓｉｎｈｕｍａｎｍｏｎｏｃｙｔｅｓ，ｌｕｎｇｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ，ａｎｄＣＤ８＋Ｔ−ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ，ＭｏｌＰｈａｒｍ．，６６：１６７９．［ＰＤＥ７Ａ）］）；Ｆｉｓｈｅｒ（ＦＩＳＨＥＲ，ＤＡら（１９９８），ＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆＰＤＥ８Ａ，ａｎｏｖｅｌｈｕｍａｎｃＡＭＰ−ｓｐｅｃｉｆｉｃｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅＢｉｏｃｈｅｍ，２４６：５７０．［ＰＤＥ８Ａ₁］）；Ｓｏｄｅｒｌｉｎｇ（ＳＯＤＥＲＬＩＮＧＳＨら（１９９９），Ｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆａｄｕａｌ−ｓｕｂｓｔｒａｔｅｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅｇｅｎｅｆａｍｉｌｙ：ＰＤＥ１０Ａ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９６：７０７１［ＰＤＥ１０Ａ₂］）；およびＦａｗｃｅｔｔ（ＦＡＷＣＥＴＬら（２０００），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆａｄｉｓｔｉｎｃｔｈｕｍａｎｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅｇｅｎｅｆａｍｉｌｙ：ＰＤＥ１１Ａ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９７：３７０２．［ＰＤＥ１１Ａ₄］）により示された教示を基礎として使用した。

表１：
酵素および各々のＰＤＥ阻害剤の標準参照化合物のリスト

得られた結果によれば、ＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物は、各々、ＰＤＥ２Ａ₁、ＰＤＥ３Ａ、ＰＤＥ４Ａ_1A、ＰＤＥ４Ｂ₁、ＰＤＥ７ＡおよびＰＤＥ８Ａ₁酵素の活性を阻害しなかったことが観察された（図１４および１５）。一方で、ＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物は、各々、ＰＤＥ１１Ａ₄酵素の活性を７５％および８０％阻害した。さらに、ＢＬ−２３０化合物は、ＰＤＥ１０Ａ₂酵素の活性を３５％まで阻害できたことが観察できる。

４．３：ＰＤＥ３Ｂ酵素の活性に対するＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物の作用活性
ヒトＰＤＥ３Ｂ酵素の活性に対するＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物の作用を、ｓｆ９細胞で発現するヒト組換え酵素を用いて、ｃＡＭＰからの５’ＡＭＰの産生を測定することにより定量した。検出方法は、ＨＴＲＦ（登録商標）を使用した。

試験化合物、参照化合物または水（対照）を、５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、６ｍＭのＭｇＣｌ₂、３ｍＭのＤＴＴおよび０．０５％のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０（ｐＨ７．８）を含有する緩衝液中の０．７ＵのＰＤＥ３Ｂ酵素と混合した。次いで、４０ｎＭのｃＡＭＰ基質を加えることにより、反応を開始し、混合物を２２℃で３０分間インキュベートした。基礎対照測定のために、酵素を反応混合物から省いた。蛍光アクセプター（Ｄｙｅ２標識ｃＡＭＰ）および蛍光ドナー（ユーロピウムクリプテートで標識した抗ｃＡＭＰ抗体）を１ｍＭのＩＢＭＸの存在下で加えた。６０分後、残留ｃＡＭＰの量に対応する蛍光の移動を、マイクロプレートリーダー（ＲｕｂｙＳｔａｒ、ＢＭＧ）を用いて、λｅｘ＝３３７ｎｍ、λｅｍ＝６２０ｎｍおよびλｅｍ＝６６５ｎｍで測定した。酵素の活性を６６５ｎｍで測定したシグナルを６２０ｎｍで測定したシグナルで割ることにより求めた（比）。結果を、対照酵素の活性の阻害のパーセントで表した。標準の阻害性参照化合物であるミルリノンを使用し、これを、いくつかの濃度で各実験において試験し、阻害曲線を得、そこからＩＣ₅₀値を計算した。

この試験のために、研究者らは、Ｂｅｎｄｅｒ（ＢＥＮＤＥＲ、ＡＴおよびＢｅａｖｏ，ＪＡ（２００６）．Ｃｙｃｌｉｃｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅｓ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｔｏｃｌｉｎｉｃａｌｕｓｅ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．、５８：４８８）により示された教示を基礎として使用した。

得られた結果によれば、ＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物は、各々、ＰＤＥ３Ｂ酵素の活性を阻害しなかったことが観察された（図１４および１５）。

４．４：ＰＤＥ４Ｄ ₂ 酵素の活性に対するＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物の作用活性
ヒトＰＤＥ４Ｄ₂酵素の活性に対するＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物の作用を、ｓｆ９細胞で発現するヒト組換え酵素を用いて、ｃＡＭＰから５’ＡＭＰの産生を測定することにより定量した。検出方法は、ＨＴＲＦ（登録商標）を使用した。

試験化合物、参照化合物または水（対照）を、１．５ｍＭのＭｇＣｌ₂、０．１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を補足したハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）（Ｉｎｖｉｔｏｒｏｇｅｎ）中の０．７５ＵのＰＤＥ４Ｄ₂と混合した。次いで、４０ｎＭのｃＡＭＰ基質を加えることにより、反応を開始し、混合物を３７℃で１５分間インキュベートした。基礎対照測定のために、酵素を反応混合物から省いた。蛍光アクセプター（Ｄｙｅ２標識ｃＡＭＰ）および蛍光ドナー（ユーロピウムクリプテートで標識した抗ｃＡＭＰ抗体）を１ｍＭのＩＢＭＸの存在下で加えた。６０分後、室温にて、マイクロプレートリーダー（Ｅｎｖｉｓｉｏｎ，ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を用いて、移動残留ｃＡＭＰの量に対応する蛍光を、λｅｘ＝３３７ｎｍ、λｅｍ＝６２０ｎｍおよびλｅｍ＝６６５ｎｍで測定した。酵素の活性を、６６５ｎｍで測定したシグナルを６２０ｎｍで測定したシグナルで割ることにより求めた（比）。結果を、対照酵素の活性の阻害のパーセントで表した。標準の阻害性参照化合物であるロリプラムを使用し、これを、いくつかの濃度で各実験において試験し、阻害曲線を得、そこからＩＣ₅₀値を計算した。

この試験のために、研究者らは、Ｓａｌｄｏｕ（ＳＡＬＤＯＵ，Ｎら（１９９８）ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎＰＤＥ４ｉｓｏｆｏｒｍｓ：ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｗｉｔｈｓｕｂｓｔｒａｔｅａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌ．，１０：４２７）により示された教示を基礎として使用した。

得られた結果によれば、ＢＬ−２３０化合物はＰＤＥ４Ｄ₂酵素の活性を５５％阻害したのに対して、ＢＬ−２３６化合物はこの酵素の阻害作用を示さなかったことが分かる（図１４および１５）。

４．５：ＰＤＥ５酵素の活性に対するＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物の作用活性
ヒトＰＤＥ５酵素の活性に対するＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物の作用を、Ｃｅｒｅｐヒト血小板から単離した酵素を用いて、ｃＧＭＰからの５’ＧＭＰの産生を測定することにより定量した。検出方法は、シンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）を使用した。

試験化合物、参照化合物または水（対照）を、４０ｍＭのトリスＨＣｌ（ｐＨ７．８）、３ｍＭのＭｇＣｌ₂、１．４ｍＭのＤＴＴ、０．２１％のＢＳＡ、２００ｍＭの塩化アンモニウム（ＮＨ₄Ｃｌ）、１μＭのｃＧＭＰおよび０．１μＣｉの［³Ｈ］ｃＧＭＰを含有する緩衝液に加えた。次いで、酵素（単離の効率に応じた最終量）を加えることにより、反応を開始し、混合物を２２℃で６０分間インキュベートした。基礎対照測定のために、酵素を反応混合物から省いた。この後、ＳＰＡインキュベーションビーズを加えた。２２℃で２０分間撹拌した後、［³Ｈ］５’ＧＭＰの量をシンチレーションカウンター（Ｔｏｐｃｏｕｎｔ、Ｐａｃｋａｒｄ）で定量した。結果を、対照酵素の活性の阻害のパーセントで表した。標準の阻害性参照化合物であるジピリダモールを使用し、これを、いくつかの濃度で各実験において試験し、阻害曲線を得、そこからＩＣ₅₀値を計算した。

この試験のために、研究者らは、Ｗｅｉｓｈａａｒ（Ｗｅｉｓｈａａｒ，Ｒ．Ｅら（１９８６）、ＭｕｌｔｉｐｌｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｆｏｒｍｓｏｆｃｙｃｌｉｃｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅｉｎｃａｒｄｉａｃａｎｄｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅａｎｄｐｌａｔｅｌｅｔｓｉｎＢｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、３５：７８７）により示された教示を基礎として使用した。

得られた結果によれば、ＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物は、ＰＤＥ５の強力な阻害剤であり、ＢＬ−２３０は、９０％の阻害を示し、ＢＬ−２３６は、８６％の阻害を示したことを発見した（各々、図１４および１５）。

４．６：ＰＤＥ６酵素の活性に対するＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物の作用活性
ヒトＰＤＥ６酵素の活性に対するＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物の作用を、Ｃｅｒｅｐウシ網膜から単離した酵素を用いて、ｃＧＭＰからの５’ＧＭＰの産生を測定することにより定量した。検出方法は、シンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）を使用した。

試験化合物、参照化合物または水（対照）を、４０ｍＭのトリスＨＣｌ（ｐＨ７．８）、３ｍＭのＭｇＣｌ₂、１．４ｍＭのＤＴＴ、０．２１％のＢＳＡ、２００ｍＭのＮＨ₄Ｃｌ、２μＭのｃＧＭＰおよび０．０５μＣｉの［³Ｈ］ｃＧＭＰを含有する緩衝液に加えた。次いで、酵素（単離の効率に応じた最終量）を加えることにより、反応を開始し、混合物を２２℃で６０分間インキュベートした。基礎対照測定のために、酵素を反応混合物から省いた。この後、ＳＰＡインキュベーションビーズを加えた。２２℃で２０分間撹拌した後、［³Ｈ］５’ＧＭＰの量をシンチレーションカウンター（Ｔｏｐｃｏｕｎｔ、Ｐａｃｋａｒｄ）で定量した。結果を、対照酵素の活性の阻害のパーセントで表した。標準の阻害性参照化合物であるザプリナストを使用し、これを、いくつかの濃度で各実験において試験し、阻害曲線を得、そこからＩＣ₅₀値を計算した。

この試験のために、研究者らは、Ｂａｌｌａｒｄ（Ｂａｌｌａｒｄ，Ａ．Ｓ．ら（１９９８）ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｓｉｌｄｅｎａｆｉｌｏｎｔｈｅｒｅｌａｘａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｃｏｒｐｕｓｃａｖｅｒｎｏｓｕｍｔｉｓｓｕｅｉｎｖｉｔｒｏａｎｄｏｎｔｈｅＡｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｃｙｃｌｉｃｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅｉｓｏｚｙｍｅｓ，Ｊ．Ｕｒｏｌ．，１５９．２１６４）により示された教示を基礎として使用した。

得られた結果によれば、ＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物は、ＰＤＥ６の強力な阻害剤であり、ＢＬ−２３０は、８５％の阻害を示し、ＢＬ−２３６は、９０％の阻害を示したことを発見した（各々、図１４および１５）。

使用した試験にかかわらず、５０％超の阻害（または刺激）を示す結果は、強い作用を示している。２５〜５０％の阻害（または刺激）は、低いまたは中程度の作用を示していることが、結果から分かる。２５％未満の阻害（または刺激）の結果は、有意と見なされず、主に対照周辺のシグナルの変動に割り当てられる。

Claims

式（Ｉ）

［式中、
Ｒ¹は、芳香族基、１個以上のヘテロ原子を含有する芳香族基、フェニル基、フェノール、３−メトキシ−４−フェノール、メチレン−３，４−ジオキシフェニル、２−メトキシフェニル、３−メトキシフェニル、４−メトキシフェニル、３，４−ジメトキシフェニル、２−ハロフェニル、３−ハロフェニル、４−ハロフェニル、フリル、ピリジン、二環式芳香族、１個以上のヘテロ原子を含有する二環式芳香族であり、Ｒ²は、アリール、ヘテロアリール、二環式アリール、ＣＨ₂（ＣＨ₂）_nＲ³、ＣＨ₂（ＣＨ₂）_nＮＲ⁴Ｒ⁵、ＣＨＲ⁶ＣＨ₂ＯＨ、ＣＨ₂ＣＨ（ＯＨ）Ｒ⁷、ＣＨ₂（ＣＨ₂）ＯＲ⁸、ＣＨ₂（ＣＨ₂）_nＳＲ⁹、カルボン酸塩、スルホン酸塩または第４級アンモニウム塩であり、
Ｒ³は、ＯＨ、ＮＨ₂、ＮＨ³⁺、Ｓ（Ｏ）Ｍｅ、ＳＯ₃Ｈ、ＣＯ₂Ｈ、Ｃｌ、カルボン酸塩、スルホン酸塩または第４級アンモニウム塩であり、
Ｒ⁴は、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、フェニル、ベンジルまたは第４級アンモニウム塩であり、
Ｒ⁵は、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、フェニル、ベンジルまたは第４級アンモニウム塩であり、
Ｒ⁶は、（Ｒ）−メチル、（Ｒ）−エチル、（Ｒ）−イソプロピル、（Ｒ）−イソブチル、（Ｒ）−フェニル、（Ｒ）−ＣＨ₂ＳＨ、（Ｒ）−ＣＨ₂ＣＨ₂ＳＣＨ₃、（Ｒ）−ベンジル、（Ｒ）−ｓｅｃ−ブチル、（Ｓ）−メチル、（Ｓ）−エチル、（Ｓ）−イソプロピル、（Ｓ）−イソブチル、（Ｓ）−フェニル、（Ｓ）−ＣＨ₂ＳＨ、（Ｓ）−ＣＨ₂ＣＨ₂ＳＣＨ₃、（Ｓ）−ベンジル、（Ｓ）−ｓｅｃ−ブチルまたはＣＨ₂ＯＨであり、
Ｒ⁷は、（Ｒ）−メチル、（Ｒ）−エチル、（Ｒ）−プロピル、（Ｒ）−イソプロピル、（Ｒ）−フェニル、（Ｒ）−ベンジル、（Ｓ）−メチル、（Ｓ）−エチル、（Ｓ）−プロピル、（Ｓ）−イソプロピル、（Ｓ）−フェニルまたは（Ｓ）−ベンジルであり、
Ｒ⁸は、Ｃ_1〜6アルキル、Ｃ_2〜6アルケニル、Ｃ_2〜6アルキニル、フェニルまたはベンジルであり、
Ｒ⁹は、Ｃ_1〜6アルキル、Ｃ_2〜6アルケニル、Ｃ_2〜6アルキニル、フェニルまたはベンジルであり、
Ｎは、０〜４の数値である］
を有する、６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンから誘導される化合物、これらの誘導体の混合物、これらの塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステル；ならびにこれらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、これらの鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体。
Ｒ¹が、メチレン−３，４−ジオキシフェニルであり、Ｒ²が、ＣＨ₂（ＣＨ₂）_nＲ³またはＣＨＲ⁶ＣＨ₂ＯＨであり、Ｒ³が、ＯＨであり、Ｒ⁶が、（Ｓ）−メチルであり、Ｎが、１に等しい、請求項１に記載の化合物。
式（ＩＩ）

で表される、３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンである、請求項２に記載の化合物。
式（ＩＩＩ）

で表される、３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンである、請求項２に記載の化合物。
ホスホジエステラーゼ酵素の阻害活性を示す、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
治療有効量の１種以上の請求項１に記載の化合物および１種以上の薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、
（ａ）式（ＩＩ）の３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン、
（ｂ）式（ＩＩＩ）の３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン
からなる群から選択される少なくとも１種の化合物、または任意の比率でのこれらの混合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、前記化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体；ならびに１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を活性成分として含む、請求項６に記載の医薬組成物。
経口、局所、注射、経鼻および経直腸での投与のためである、請求項６または７に記載の医薬組成物。
ホスホジエステラーゼ酵素の阻害のための使用である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物の使用。
勃起障害、組織弛緩により治療可能な障害および／または症状、ならびにホスホジエステラーゼ阻害剤で治療可能な障害の治療および／または予防のための医薬組成物の調製のためである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物の使用。
結石症、前立腺肥大症、肺高血圧症、尿道狭窄、女性および／または男性の性機能障害の治療または予防のためである、請求項１０に記載の使用。
勃起障害、組織弛緩により治療可能な障害および／または症状、ならびにホスホジエステラーゼ阻害剤で治療可能な障害の治療のためである、請求項６〜８のいずれか一項に記載の医薬組成物の使用。
有効量の少なくとも１種の請求項１に記載の化合物を投与することを含む、ホスホジエステラーゼの活性と関連した障害の治療および／または予防方法。
勃起障害、結石症、前立腺肥大症、肺高血圧症、尿道狭窄、女性および／または男性の性機能障害の治療および／または予防のためである、請求項１３に記載の方法。
有効量の少なくとも１種の請求項１に記載の化合物を投与することを含む、勃起障害、組織弛緩により治療可能な障害および／または症状、ならびにホスホジエステラーゼ阻害剤で治療可能な障害の治療および／または予防方法。
中間体メチル２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−３−（２−クロロアセチル）−５−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，３−ジヒドロオキサゾール−４−カルボキシレート（ｂ）の形成を含み、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中の乾燥ピリジン（Ｐｙ）溶液および塩化クロロアセチル溶液の存在下での、化合物（（Ｅ）−メチル２−（（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イルメチレン）アミノ）−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−３−オキソプロパノエート（ａ）の反応により調製される、請求項３および４に記載の式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物の合成方法。
化合物（ＩＩ）の形成が、中間体（ｂ）の反応を介してエチルアルコールおよび２−アミノエタノール（ｃ）を加えることにより起こる、請求項１６に記載の合成方法。
化合物（ＩＩＩ）の形成が、エチルアルコールおよび（Ｓ）−２−アミノプロパン−１−オール（ｄ）を中間体（ｂ）の反応媒体に加えることにより起こる、請求項１６に記載の合成方法。