JP2017538441A - 抗ｔｉｍ−３抗体 - Google Patents

Abstract

抗ＴＩＭ−３抗体、ならびにこうした抗体を含む薬学的組成物、ならびにこうした抗体を用いる使用および方法、例えば癌または感染性疾患またはＴ細胞機能不全障害の治療におけるものを開示する。ＴＩＭ−３および他のターゲットに対する二重特異性抗体もまた開示し、好ましい態様は、ＴＩＭ−３およびＣＤ３に対する二重特異性抗体である。

Description

本発明は、Ｔ細胞免疫グロブリンムチン３（ＴＩＭ−３）に結合する抗体に関する。

Ｔ細胞消耗は多くの慢性感染および癌の間に生じるＴ細胞機能不全状態である。該状態は、劣ったＴ細胞エフェクター機能、阻害性受容体発現の持続、および機能するエフェクターまたは記憶Ｔ細胞のものとは異なる転写状態によって定義される。消耗は、感染および腫瘍の最適な制御を防止する（Ｅ Ｊｏｈｎ Ｗｈｅｒｒｙ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １２， ４９２−４９９（２０１１））。

Ｔ細胞消耗は、段階的および進行性のＴ細胞機能喪失によって特徴付けられる。消耗は、慢性リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス感染中によく定義され、そして一般的に、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルスおよびヒト免疫不全ウイルス感染を含む多くの慢性感染後に、ならびに腫瘍転移中に起こる、抗原持続状態下で発展する。表現型的および機能的欠陥の漸次的変化が現れる可能性があり、そしてこれらの細胞は原型エフェクター、記憶およびまたアネルギー性Ｔ細胞とは異なるため、消耗は均一に機能しなくなった状態ではない。消耗Ｔ細胞は、最も一般的には、高度慢性感染中に出現し、そして抗原刺激のレベルおよび期間は該プロセスの決定的な決定要因である（Ｙｉら， Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ａｐｒ ２０１０； １２９（４）：４７４−４８１）。

循環ヒト腫瘍特異的ＣＤ８^＋ Ｔ細胞は、細胞傷害性である可能性があり、そしてｉｎ ｖｉｖｏでサイトカインを産生する可能性があることから、自己および腫瘍特異的ヒトＣＤ８^＋ Ｔ細胞が、ペプチド、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）、およびＣｐＧでのワクチン接種などの強力な免疫療法後、または養子移入後に、機能的反応能に到達する可能性もあることが示される。末梢血と対照的に、転移由来のＴ細胞は、機能的に不全であり、異常な低サイトカイン産生および阻害性受容体ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、およびＴＩＭ−３の上方制御を示す。黒色腫組織から単離されたＴ細胞は、短期ｉｎ ｖｉｔｒｏ培養後にＩＦＮ−γ産生を回復しうるため、機能的不全は可逆性である。しかし、依然として、この機能障害が、さらなる分子経路、おそらくは動物モデルにおいて定義されるようなＴ細胞消耗またはアネルギーと似た経路を伴うかどうかを決定する必要がある（Ｂａｉｔｓｃｈら， Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ． ２０１１；１２１（６）：２３５０−２３６０）。

プログラム細胞死１（ＰＤ−１）は、ＣＤ２７９とも称され、ヒトにおいてはＰＤＣＤ１遺伝子によってコードされるＩ型膜タンパク質である。該タンパク質は２つのリガンド、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２を有する。

ＰＤ−１経路は、Ｔ細胞消耗の重要な免疫阻害仲介因子である。この経路の遮断は、Ｔ細胞活性化、拡大、ならびにエフェクター機能増進を導きうる。こうしたものとして、ＰＤ−１はＴ細胞反応を負に制御する。ＰＤ−１は、慢性疾患状態における消耗Ｔ細胞のマーカーとして同定されてきており、そしてＰＤ−１：ＰＤ−１Ｌ相互作用の遮断は、Ｔ細胞機能を部分的に回復することが示されてきている（Ｓａｋｕｉｓｈｉら， ＪＥＭ Ｖｏｌ． ２０７， Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２７， ２０１０， ｐｐ２１８７−２１９４）。

ニボルマブ（ＢＭＳ−９３６５５８）は、２０１４年７月に、日本において黒色腫の治療のために認可された抗ＰＤ−１抗体である。他の抗ＰＤ−１抗体は、ＷＯ ２０１０／０７７６３４、ＷＯ ２００６／１２１１６８に記載される。

Ｔ細胞免疫グロブリンムチン３（ＴＩＭ−３）は、消耗ＣＤ８^＋ Ｔ細胞上で上方制御されると同定された免疫制御因子である（Ｓａｋｕｉｓｈｉら， ＪＥＭ Ｖｏｌ． ２０７， Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２７， ２０１０， ｐｐ２１８７−２１９４）。ＴＩＭ−３は、元来、ＩＦＮ−γを分泌するＴｈ１およびＴｃ１細胞上で選択的に発現されるとして同定された。ＴＩＭ−３とそのリガンド、ガレクチン−９の相互作用は、ＴＩＭ−３^＋ Ｔ細胞の細胞死を誘発する。抗ＴＩＭ−３抗体は、Ｎｇｉｏｗら（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ２０１１ Ｍａｙ １５；７１（１０）：３５４０−５１）に、そしてＵＳ８，５５２，１５６に記載される。

ＴＩＭ−３およびＰＤ−１はどちらも、Ｔ細胞反応の負の制御因子として機能する可能性があり、そしてＴＩＭ−３およびＰＤ−１経路を組み合わせてターゲティングすると、いずれかの経路のみをターゲティングするよりも、腫瘍増殖制御により有効である（Ｓａｋｕｉｓｈｉら， ＪＥＭ Ｖｏｌ． ２０７， Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２７， ２０１０， ｐｐ２１８７−２１９４；およびＮｇｉｏｗら Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ２０１１ Ｍａｙ １５；７１（１０）：３５４０−５１）。

ＴＩＭ−３はまた、腫瘍細胞、特に造血起源の腫瘍細胞、例えば急性骨髄性白血病細胞の表面上で発現されうる（Ｋｉｋｕｓｈｉｇｅら， Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ ２０１０； ３：７（６）７０８−１７）。したがって、いくつかの場合、ＴＩＭ−３は特異的抗体によってターゲティング可能な腫瘍関連抗原でありうる。

ＷＯ ２０１０／０７７６３４ ＷＯ ２００６／１２１１６８ ＵＳ８，５５２，１５６

Ｅ Ｊｏｈｎ Ｗｈｅｒｒｙ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １２， ４９２−４９９（２０１１） Ｙｉら， Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ａｐｒ ２０１０； １２９（４）：４７４−４８１ Ｂａｉｔｓｃｈら， Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ． ２０１１；１２１（６）：２３５０−２３６０ Ｓａｋｕｉｓｈｉら， ＪＥＭ Ｖｏｌ． ２０７， Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２７， ２０１０， ｐｐ２１８７−２１９４ Ｎｇｉｏｗら（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ２０１１ Ｍａｙ １５；７１（１０）：３５４０−５１） Ｋｉｋｕｓｈｉｇｅら， Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ ２０１０； ３：７（６）７０８−１７

本発明は、ＴＩＭ−３に結合する抗体または抗原結合性断片に関する。重鎖および軽鎖ポリペプチドもまた開示する。抗体、抗原結合性断片およびポリペプチドは、単離および／または精製型で提供されてもよく、そして研究、療法および診断において使用するために適した組成物に配合されてもよい。

いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片またはポリペプチドは、例えばＴＩＭ−３発現細胞、例えばＴＩＭ−３発現Ｔ細胞または腫瘍細胞に対して、細胞傷害性である。いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片またはポリペプチドは、その細胞傷害性効果のため、癌を治療する際に有用である。適切な癌には、白血病、例えば急性骨髄性白血病が含まれる。

いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片またはポリペプチドは、Ｔ細胞消耗またはＴ細胞アネルギーを示すＴ細胞、例えばＣＤ８^＋ Ｔ細胞において、Ｔ細胞機能を回復させるために有効であってもよい。

本発明の１つの側面において、抗体または抗原結合性断片を提供し、抗体のアミノ酸配列は、アミノ酸配列ｉ）〜ｉｉｉ）、またはアミノ酸配列ｉｖ）〜ｖｉ）、または好ましくはアミノ酸配列ｉ）〜ｖｉ）：

あるいは配列（ｉ）〜（ｖｉ）の１またはそれより多くにおいて、１または２または３アミノ酸が別のアミノ酸で置換されているその変異体を含んでもよく、式中、Ｘ_１＝ＥまたはＤ、Ｘ_２＝ＡまたはＳ、Ｘ_３＝Ｙ、ＳまたはＡ、Ｘ_４＝Ｙ、Ａ、ＤまたはＳ、Ｘ_５＝Ｖ、Ｄ、Ｙ、ＬまたはＡ、Ｘ_６＝ＡまたはＳ、Ｘ_７＝ＡまたはＳ、Ｘ_８＝Ｙ、ＶまたはＳ、およびＺ_１＝ＶまたはＹ、Ｚ_２＝Ｓ、Ｆ、ＹまたはＤ、Ｚ_３＝Ａ、Ｄ、ＳまたはＹである。

本発明のすべての側面と関連して、ＨＣ−ＣＤＲ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号６１）である態様において、この配列は、より大きい配列ＧＧＳＦＳＧＹＹＷＳ（配列番号３０）中に含まれてもよい。

いくつかの態様において、ＬＣ−ＣＤＲ３は、ＥＡＷＤＹＹＶＡＡＧＹ（配列番号１２）、ＤＳＷＤＳＡＤＡＳＧＶ（配列番号１３）、ＤＳＷＤＹＤＹＡＡＧＶ（配列番号１４）、ＤＳＷＤＳＹＬＡＡＧＶ（配列番号１５）、ＥＳＷＤＹＤＹＡＳＧＶ（配列番号１６）、ＤＳＷＤＳＳＤＳＳＧＶ（配列番号１７）、ＥＡＷＤＳＡＹＡＡＧＳ（配列番号１８） ＤＳＷＤＡＡＬＳＡＧＶ（配列番号１９）またはＥＳＷＤＡＡＡＡＡＧＹ（配列番号２０）の１つである。

いくつかの態様において、ＨＣ−ＣＤＲ３は、ＧＹＶＡＧＳＤＡ（配列番号３２）、ＧＹＶＡＧＦＤＤ（配列番号３３）、ＧＹＶＡＧＦＤＳ（配列番号３４）、ＧＹＶＡＧＹＤＹ（配列番号３５）、ＧＹＶＡＧＳＤＡ（配列番号３６）、ＧＹＶＡＧＦＤＳ（配列番号３７）、ＧＹＹＡＧＤＤＹ（配列番号３８）、ＧＹＶＡＧＹＤＹ（配列番号３９）、またはＧＹＶＡＧＳＤＡ（配列番号４０）の１つである。

いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：

を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：

を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：

を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：

を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：

を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：

を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：

を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：

を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：

を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：

を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：

を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：

を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：

を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：

を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：

を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：

を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：

を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：

を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでもよい。
抗体は、図１または２に示すＣＤＲを取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を含んでもよい。抗体は、図１または３に示すＣＤＲを取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでもよい。

抗体は、配列番号１、１０、１１、１２または２、１０、１１、１３または３、１０、１１、１４または４、１０、１１、１５または５、１０、１１、１６または６、１０、１１、１７または７、１０、１１、１８または８、１０、１１、１９または９、１０、１１、２０の１つのアミノ酸配列、あるいは図１に示すアミノ酸配列の１つ、あるいは配列番号１、１０、１１、１２または２、１０、１１、１３または３、１０、１１、１４または４、１０、１１、１５または５、１０、１１、１６または６、１０、１１、１７または７、１０、１１、１８または８、１０、１１、１９または９、１０、１１、２０の１つに、または図１に示すＶ_Ｌ鎖アミノ酸配列のアミノ酸配列に、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、少なくとも１つの軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含んでもよい。

抗体は、配列番号２１、３０または６１、３１、３２または２２、３０または６１、３１、３３または２３、３０または６１、３１、３４または２４、３０または６１、３１、３５または２５、３０または６１、３１、３６または２６、３０または６１、３１、３７または２７、３０または６１、３１、３８または２８、３０または６１、３１、３９または２９、３０または６１、３１、４０の１つのアミノ酸配列、あるいは図２に示すアミノ酸配列の１つ、あるいは配列番号２１、３０または６１、３１、３２または２２、３０または６１、３１、３３または２３、３０または６１、３１、３４または２４、３０または６１、３１、３５または２５、３０または６１、３１、３６または２６、３０または６１、３１、３７または２７、３０または６１、３１、３８または２８、３０または６１、３１、３９または２９、３０または６１、３１、４０の１つに、または図２に示すＶ_Ｈ鎖アミノ酸配列のアミノ酸配列に、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、少なくとも１つの重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含んでもよい。

抗体は、配列番号１、１０、１１、１２または２、１０、１１、１３または３、１０、１１、１４または４、１０、１１、１５または５、１０、１１、１６または６、１０、１１、１７または７、１０、１１、１８または８、１０、１１、１９または９、１０、１１、２０の１つのアミノ酸配列、あるいは図１に示すアミノ酸配列の１つ（あるいは配列番号１、１０、１１、１２または２、１０、１１、１３または３、１０、１１、１４または４、１０、１１、１５または５、１０、１１、１６または６、１０、１１、１７または７、１０、１１、１８または８、１０、１１、１９または９、１０、１１、２０の１つに、または図１に示すＶ_Ｌ鎖アミノ酸配列のアミノ酸配列の１つに、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列）を含む少なくとも１つの軽鎖可変領域、および配列番号２１、３０または６１、３１、３２または２２、３０または６１、３１、３３または２３、３０または６１、３１、３４または２４、３０または６１、３１、３５または２５、３０または６１、３１、３６または２６、３０または６１、３１、３７または２７、３０または６１、３１、３８または２８、３０または６１、３１、３９または２９、３０または６１、３１、４０の１つのアミノ酸配列、あるいは図２に示すアミノ酸配列の１つ（あるいは配列番号２１、３０または６１、３１、３２または２２、３０または６１、３１、３３または２３、３０または６１、３１、３４または２４、３０または６１、３１、３５または２５、３０または６１、３１、３６または２６、３０または６１、３１、３７または２７、３０または６１、３１、３８または２８、３０または６１、３１、３９または２９、３０または６１、３１、４０の１つに、または図２に示すＶ_Ｈ鎖アミノ酸配列のアミノ酸配列の１つに、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列）を含む少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでもよい。

抗体は、所望によりＴＩＭ−３に結合してもよい。抗体は、所望により上述のようなアミノ酸配列構成要素を有してもよい。抗体はＩｇＧであってもよい。１つの態様において、ＴＩＭ−３に結合した本明細書に記載するような抗体または抗原結合性断片を含む、所望により単離されたｉｎ ｖｉｔｒｏ複合体を提供する。

本発明の１つの側面において、単離重鎖可変領域ポリペプチドであって、以下のＣＤＲ：

を含み、式中、Ｚ_１＝ＶまたはＹ、Ｚ_２＝Ｓ、Ｆ、ＹまたはＤ、Ｚ_３＝Ａ、Ｄ、ＳまたはＹである、前記重鎖可変領域ポリペプチドを提供する。
いくつかの態様において、ＨＣ−ＣＤＲ３は、ＧＹＶＡＧＳＤＡ（配列番号３２）、ＧＹＶＡＧＦＤＤ（配列番号３３）、ＧＹＶＡＧＦＤＳ（配列番号３４）、ＧＹＶＡＧＹＤＹ（配列番号３５）、ＧＹＶＡＧＳＤＡ（配列番号３６）、ＧＹＶＡＧＦＤＳ（配列番号３７）、ＧＹＹＡＧＤＤＹ（配列番号３８）、ＧＹＶＡＧＹＤＹ（配列番号３９）、またはＧＹＶＡＧＳＤＡ（配列番号４０）の１つである。

本発明の１つの側面において、重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体または抗原結合性断片であって：
重鎖が：
ＨＣ−ＣＤＲ１：ＧＧＳＦＳＧＹＹＷＳ（配列番号３０）またはＧＹＹＷＳ（配列番号６１）、
ＨＣ−ＣＤＲ２：ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号３１）、
ＨＣ−ＣＤＲ３：ＧＹＺ_１ＡＧＺ_２ＤＺ_３（配列番号４２）、ＧＹＶＡＧＳＤＡ（配列番号３２）、ＧＹＶＡＧＦＤＤ（配列番号３３）、ＧＹＶＡＧＦＤＳ（配列番号３４）、ＧＹＶＡＧＹＤＹ（配列番号３５）、ＧＹＶＡＧＳＤＡ（配列番号３６）、ＧＹＶＡＧＦＤＳ（配列番号３７）、ＧＹＹＡＧＤＤＹ（配列番号３８）、ＧＹＶＡＧＹＤＹ（配列番号３９）、またはＧＹＶＡＧＳＤＡ（配列番号４０）の１つ、式中、Ｚ_１＝ＶまたはＹ、Ｚ_２＝Ｓ、Ｆ、Ｙ、またはＤ、Ｚ_３＝Ａ、Ｄ、ＳまたはＹである
にそれぞれ、少なくとも８５％の全体の配列同一性を有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、ＨＣ−ＣＤＲ３を含み、そして
軽鎖が
ＬＣ−ＣＤＲ１：ＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＹＶＳ（配列番号１０）、
ＬＣ−ＣＤＲ２：ＧＮＮＷＲＰＳ（配列番号１１）、
ＬＣ−ＣＤＲ３：Ｘ_１Ｘ_２ＷＤＸ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７ＧＸ_８（配列番号４１）、ＥＡＷＤＹＹＶＡＡＧＹ（配列番号１２）、ＤＳＷＤＳＡＤＡＳＧＶ（配列番号１３）、ＤＳＷＤＹＤＹＡＡＧＶ（配列番号１４）、ＤＳＷＤＳＹＬＡＡＧＶ（配列番号１５）、ＥＳＷＤＹＤＹＡＳＧＶ（配列番号１６）、ＤＳＷＤＳＳＤＳＳＧＶ（配列番号１７）、ＥＡＷＤＳＡＹＡＡＧＳ（配列番号１８） ＤＳＷＤＡＡＬＳＡＧＶ（配列番号１９）またはＥＳＷＤＡＡＡＡＡＧＹ（配列番号２０）の１つ、式中、Ｘ_１＝ＥまたはＤ、Ｘ_２＝ＡまたはＳ、Ｘ_３＝Ｙ、ＳまたはＡ、Ｘ_４＝Ｙ、Ａ、ＤまたはＳ、Ｘ_５＝Ｖ、Ｄ、ＹまたはＬまたはＡ、Ｘ_６＝ＡまたはＳ、Ｘ_７＝ＡまたはＳ、Ｘ_８＝Ｙ、ＶまたはＳである
にそれぞれ、少なくとも８５％の全体の配列同一性を有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、ＬＣ−ＣＤＲ３を含む、前記抗体または抗原結合性断片を提供する。

いくつかの態様において、配列同一性の度合いは、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つであってもよい。

本発明の別の側面において、所望により単離された、重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体または抗原結合性断片であって：
重鎖配列が、配列番号２１〜２９（図２）の１つの重鎖配列に少なくとも８５％の配列同一性を有し、そして
軽鎖配列が、配列番号１〜９（図１）の１つの軽鎖配列に少なくとも８５％の配列同一性を有する
前記抗体または抗原結合性断片を提供する。

いくつかの態様において、配列同一性の度合いは、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つであってもよい。

いくつかの態様において、抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドは、配置ＨＣＦＲ１：ＨＣ−ＣＤＲ１：ＨＣＦＲ２：ＨＣ−ＣＤＲ２：ＨＣＦＲ３：ＨＣ−ＣＤＲ３：ＨＣＦＲ４にしたがって、ＣＤＲ間の可変領域重鎖フレームワーク配列をさらに含む。フレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列由来であってもよい。

本発明の１つの側面において、所望により本明細書に記載するような重鎖可変領域ポリペプチドと組み合わされた、単離軽鎖可変領域ポリペプチドであって、以下のＣＤＲ：

を含み、式中、Ｘ_１＝ＥまたはＤ、Ｘ_２＝ＡまたはＳ、Ｘ_３＝Ｙ、ＳまたはＡ、Ｘ_４＝Ｙ、Ａ、ＤまたはＳ、Ｘ_５＝Ｖ、Ｄ、ＹまたはＬまたはＡ、Ｘ_６＝ＡまたはＳ、Ｘ_７＝ＡまたはＳ、Ｘ_８＝ Ｙ、ＶまたはＳである、前記単離軽鎖可変領域ポリペプチドを提供する。

いくつかの態様において、ＬＣ−ＣＤＲ３は、ＥＡＷＤＹＹＶＡＡＧＹ（配列番号１２）、ＤＳＷＤＳＡＤＡＳＧＶ（配列番号１３）、ＤＳＷＤＹＤＹＡＡＧＶ（配列番号１４）、ＤＳＷＤＳＹＬＡＡＧＶ（配列番号１５）、ＥＳＷＤＹＤＹＡＳＧＶ（配列番号１６）、ＤＳＷＤＳＳＤＳＳＧＶ（配列番号１７）、ＥＡＷＤＳＡＹＡＡＧＳ（配列番号１８） ＤＳＷＤＡＡＬＳＡＧＶ（配列番号１９）またはＥＳＷＤＡＡＡＡＡＧＹ（配列番号２０）である。

いくつかの態様において、抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドは、配置ＬＣＦＲ１：ＬＣ−ＣＤＲ１：ＬＣＦＲ２：ＬＣ−ＣＤＲ２：ＬＣＦＲ３：ＬＣ−ＣＤＲ３：ＬＣＦＲ４にしたがって、ＣＤＲ間の可変領域軽鎖フレームワーク配列をさらに含む。フレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列由来であってもよい。

いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、ヒト定常領域をさらに含んでもよい。例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４の１つより選択されるものである。

いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、ネズミ定常領域をさらに含んでもよい。例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２ＢおよびＩｇＧ３の１つより選択されるものである。

本発明の別の側面において、ＴＩＭ−３に結合可能であり、そして二重特異性抗体または二重特異性抗原結合性断片である、所望により単離された、抗体または抗原結合性断片を提供する。いくつかの態様において、二重特異性抗体または二重特異性抗原結合性断片は、本明細書に記載するように、ＴＩＭ−３に結合可能な抗原結合性断片またはポリペプチドを含み、そしてさらに、別のターゲットタンパク質、例えばＴＩＭ−３以外のターゲットタンパク質に結合可能な抗原結合性ドメインを含む。いくつかの態様において、ターゲットタンパク質は細胞表面受容体である。いくつかの態様において、ターゲットタンパク質は免疫細胞、例えばＴ細胞の細胞表面上に発現される細胞表面受容体である。いくつかの態様において、別のターゲットタンパク質に結合可能な抗原結合性ドメインは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体またはその構成要素に結合可能でありうる。いくつかの態様において、抗原結合性ドメインは、ＣＤ３またはＣＤ３ポリペプチドに結合可能でありうる。いくつかの態様において、抗原結合性ドメインは、ＣＤ３ポリペプチドＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ζ、またはＣＤ３εの１またはそれより多くに結合可能でありうる。いくつかの態様において、二重特異性抗体は、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー抗体である。いくつかの態様において、ターゲットタンパク質は、ＣＤ２８ファミリーのメンバーであってもよい。いくつかの態様において、ＣＤ２８ファミリーのメンバーは、ＰＤ−１、ＬＡＧ３、ＩＣＯＳ、ＣＴＬＡ４、ＢＴＬＡまたはＣＤ２８より選択される。

本発明の別の側面において、組成物、例えば薬学的組成物または薬剤を提供する。組成物は、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片またはポリペプチド、および少なくとも１つの薬学的に許容されうるキャリアー、賦形剤、アジュバントまたは希釈剤を含んでもよい。

本発明の別の側面において、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドをコードする単離核酸を提供する。核酸は、配列番号４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０（図４）の１つの配列、あるいは遺伝暗号の結果として縮重しているコード配列を有してもよいし、あるいはこれらに少なくとも７０％、所望により、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つの同一性を有するヌクレオチド配列を有してもよい。

本発明の１つの側面において、本明細書記載の核酸を含むベクターを提供する。本発明の別の側面において、ベクターを含む宿主細胞を提供する。例えば、宿主細胞は、真核、または哺乳動物、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、またはヒトであってもよく、あるいは原核細胞、例えば大腸菌（Ｅ． ｃｏｌｉ）であってもよい。本発明の１つの側面において、本明細書に記載するような抗体または抗原結合性断片またはポリペプチドを作製するための方法であって、抗体または抗原結合性断片またはポリペプチドをコードするベクターを発現するために適切な条件下で、本明細書に記載するような宿主細胞を培養し、そして抗体または抗原結合性断片またはポリペプチドを回収する工程を含む、前記方法を提供する。

本発明の別の側面において、療法または医学的治療法において使用するための抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを提供する。本発明の別の側面において、癌またはＴ細胞機能不全障害の治療において使用するための、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを提供する。本発明の別の側面において、癌またはＴ細胞機能不全障害の治療において使用するための薬剤または薬学的組成物製造における、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドの使用を提供する。

別の側面において、ＴＩＭ−３を発現する細胞を死滅させるｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏ法であって、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを、ＴＩＭ−３を発現する（または過剰発現する）細胞に投与する工程を含む、前記方法を提供する。細胞は、癌細胞、例えば白血病または急性骨髄性白血病細胞、白血球あるいはＴ細胞であることも可能である。いくつかの態様において、急性骨髄性白血病細胞は、幹細胞であってもよく；例えばいくつかの態様において、急性骨髄性白血病細胞はＣＤ３４＋であってもよい。

本発明の別の側面において、Ｔ細胞機能を増進させる方法であって、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを、機能不全Ｔ細胞に投与する工程を含む、前記方法を提供する。方法はｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで実行可能である。

本発明の別の側面において、癌またはＴ細胞機能不全障害を治療する方法であって、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを、癌またはＴ細胞機能不全障害を患う患者に投与する工程を含む、前記方法を提供する。

本発明の別の側面において、感染性疾患を治療する方法であって、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを、感染性疾患を患う患者に投与する工程を含む、前記方法を提供する。

本発明の別の側面において、被験体において免疫反応を調節する方法であって、被験体における免疫反応が調節されるように、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを被験体に投与する工程を含む、前記方法を提供する。

本発明の別の側面において、被験体における腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であって、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドの療法的有効量を被験体に投与する工程を含む、前記方法を提供する。

本発明の別の側面において、ＴＩＭ−３を含有するかまたは含有すると推測される試料を、本明細書に記載するような抗体または抗原結合性断片と接触させ、そして抗体または抗原結合性断片およびＴＩＭ−３の複合体の形成を検出する工程を含む方法を提供する。

本発明の別の側面において、被験体における疾患または状態を診断する方法であって、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、被験体由来の試料を、本明細書に記載するような抗体または抗原結合性断片と接触させ、そして抗体または抗原結合性断片およびＴＩＭ−３の複合体の形成を検出する工程を含む、前記方法を提供する。

本発明のさらなる側面において、ＴＩＭ−３シグナル伝達の調節因子での治療のため、被験体を選択するかまたは層別化する方法であって、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、本発明記載の抗体または抗原結合性断片と、被験体由来の試料を接触させ、そして抗体または抗原結合性断片およびＴＩＭ−３の複合体の形成を検出する工程を含む、前記方法を提供する。

本発明の側面は、ＴＩＭ３シグナル伝達の調節因子、例えば抗ＴＩＭ３抗体または抗ＴＩＭ３剤での治療のため、患者を選択する方法であって、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、本明細書に記載するような抗体または抗原結合性断片と、被験体由来の試料を接触させ、そして抗体または抗原結合性断片およびＴＩＭ−３の複合体の形成を検出する工程を含む、前記方法である。

本発明のさらなる側面において、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＴＩＭ−３を検出するための本明細書に記載するような抗体または抗原結合性断片の使用を提供する。本発明の別の側面において、ｉｎ ｖｉｔｒｏ診断剤としての、本明細書に記載するような抗体または抗原結合性断片の使用を提供する。

本発明のさらなる側面において、Ｔ細胞を、本発明記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドと、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで接触させる、Ｔ細胞集団を拡大するための方法を提供する。

本発明のさらなる側面において、Ｔ細胞機能不全障害を有する被験体の治療法であって、Ｔ細胞集団を拡大させるように、本発明記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドの存在下で、被験体由来の血液試料から得たＴ細胞を培養し、拡大されたＴ細胞を収集し、そして治療の必要がある被験体に投与する工程を含む、前記方法を提供する。

本発明の方法において、抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを、本明細書に記載するような組成物として提供してもよい。
いくつかの態様において、抗体は、クローン１Ｂ９、１Ｈ９、１Ｈ１０、２Ｃ７、２Ｆ４、２Ｇ６、１Ｄ９、１Ｆ４、２Ｃ８の１つであってもよい。

ここで、付随する図に言及しながら、本発明の原理を例示する態様および実験を論じる。
抗ＴＩＭ−３抗体１Ｂ９、１Ｈ９、１Ｈ１０、２Ｃ７、２Ｆ４、２Ｇ６、１Ｄ９、１Ｆ４、２Ｃ８（ヒトＩｇＧ４）の軽鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲを下線で示し、そして別個に示す。 抗ＴＩＭ−３抗体１Ｂ９、１Ｈ９、１Ｈ１０、２Ｃ７、２Ｆ４、２Ｇ６、１Ｄ９、１Ｆ４、２Ｃ８（ヒトＩｇＧ４）の軽鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲを下線で示し、そして別個に示す。 抗ＴＩＭ−３抗体１Ｂ９、１Ｈ９、１Ｈ１０、２Ｃ７、２Ｆ４、２Ｇ６、１Ｄ９、１Ｆ４、２Ｃ８（ヒトＩｇＧ４）の軽鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲを下線で示し、そして別個に示す。 抗ＴＩＭ−３抗体クローン１Ｂ９、１Ｈ９、１Ｈ１０、２Ｃ７、２Ｆ４、２Ｇ６、１Ｄ９、１Ｆ４、２Ｃ８（ヒトＩｇＧ４）の重鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲを下線で示し、そして別個に示す。 抗ＴＩＭ−３抗体クローン１Ｂ９、１Ｈ９、１Ｈ１０、２Ｃ７、２Ｆ４、２Ｇ６、１Ｄ９、１Ｆ４、２Ｃ８（ヒトＩｇＧ４）の重鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲを下線で示し、そして別個に示す。 抗ＴＩＭ−３抗体クローン１Ｂ９、１Ｈ９、１Ｈ１０、２Ｃ７、２Ｆ４、２Ｇ６、１Ｄ９、１Ｆ４、２Ｃ８（ヒトＩｇＧ４）の重鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲを下線で示し、そして別個に示す。 抗ＴＩＭ−３抗体クローン１Ｂ９、１Ｈ９、１Ｈ１０、２Ｃ７、２Ｆ４、２Ｇ６、１Ｄ９、１Ｆ４、２Ｃ８の軽鎖および重鎖ＣＤＲ配列を示す表。 抗ＴＩＭ−３抗体クローン１Ｂ９、１Ｈ９、１Ｈ１０、２Ｃ７、２Ｆ４、２Ｇ６、１Ｄ９、１Ｆ４、２Ｃ８の軽鎖および重鎖ＣＤＲ配列を示す表。 抗ＴＩＭ−３抗体クローン１Ｂ９、１Ｈ９、１Ｈ１０、２Ｃ７、２Ｆ４、２Ｇ６、１Ｄ９、１Ｆ４、２Ｃ８（ヒトＩｇＧ４）の重鎖および軽鎖可変ドメイン配列のヌクレオチドおよびコードされるアミノ酸配列。 抗ＴＩＭ−３抗体クローン１Ｂ９、１Ｈ９、１Ｈ１０、２Ｃ７、２Ｆ４、２Ｇ６、１Ｄ９、１Ｆ４、２Ｃ８（ヒトＩｇＧ４）の重鎖および軽鎖可変ドメイン配列のヌクレオチドおよびコードされるアミノ酸配列。 抗ＴＩＭ−３抗体クローン１Ｂ９、１Ｈ９、１Ｈ１０、２Ｃ７、２Ｆ４、２Ｇ６、１Ｄ９、１Ｆ４、２Ｃ８（ヒトＩｇＧ４）の重鎖および軽鎖可変ドメイン配列のヌクレオチドおよびコードされるアミノ酸配列。 抗ＴＩＭ−３抗体クローン１Ｂ９、１Ｈ９、１Ｈ１０、２Ｃ７、２Ｆ４、２Ｇ６、１Ｄ９、１Ｆ４、２Ｃ８（ヒトＩｇＧ４）の重鎖および軽鎖可変ドメイン配列のヌクレオチドおよびコードされるアミノ酸配列。 抗ＴＩＭ−３抗体クローン１Ｂ９、１Ｈ９、１Ｈ１０、２Ｃ７、２Ｆ４、２Ｇ６、１Ｄ９、１Ｆ４、２Ｃ８（ヒトＩｇＧ４）の重鎖および軽鎖可変ドメイン配列のヌクレオチドおよびコードされるアミノ酸配列。 抗ＴＩＭ−３抗体クローン１Ｂ９、１Ｈ９、１Ｈ１０、２Ｃ７、２Ｆ４、２Ｇ６、１Ｄ９、１Ｆ４、２Ｃ８（ヒトＩｇＧ４）の重鎖および軽鎖可変ドメイン配列のヌクレオチドおよびコードされるアミノ酸配列。 抗ＴＩＭ−３抗体クローン１Ｂ９、１Ｈ９、１Ｈ１０、２Ｃ７、２Ｆ４、２Ｇ６、１Ｄ９、１Ｆ４、２Ｃ８（ヒトＩｇＧ４）の重鎖および軽鎖可変ドメイン配列のヌクレオチドおよびコードされるアミノ酸配列。 抗ＴＩＭ−３抗体クローン１Ｂ９、１Ｈ９、１Ｈ１０、２Ｃ７、２Ｆ４、２Ｇ６、１Ｄ９、１Ｆ４、２Ｃ８（ヒトＩｇＧ４）の重鎖および軽鎖可変ドメイン配列のヌクレオチドおよびコードされるアミノ酸配列。 抗ＴＩＭ−３抗体クローン１Ｂ９、１Ｈ９、１Ｈ１０、２Ｃ７、２Ｆ４、２Ｇ６、１Ｄ９、１Ｆ４、２Ｃ８（ヒトＩｇＧ４）の重鎖および軽鎖可変ドメイン配列のヌクレオチドおよびコードされるアミノ酸配列。 クローン１Ｂ９、１Ｈ９、１Ｈ１０、２Ｃ７、２Ｆ４、２Ｇ６、１Ｄ９、１Ｆ４、２Ｃ８の解離速度を示す表。 精製Ｔ細胞および急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞に対する抗ＴＩＭ−３クローン２Ｃ７−抗ＣＤ３二重特異性抗体の影響を示すチャート。ＡＭＬ細胞を精製Ｔ細胞と１：１の比で混合し、そして抗体を多様な濃度で添加した。２４時間インキュベーションした後、溶解を測定した。 ＡＭＬ生検中のＣＤ３４＋細胞（すなわちＡＭＬ幹細胞）に対する抗ＴＩＭ−３クローン２Ｃ７−抗ＣＤ３二重特異性抗体のＣＤ３４特異的死滅効果を示すチャート。選択後、ＣＤ３４＋細胞（試料＞９９％ ＣＤ３４＋純度）を１：１の比で精製Ｔ細胞と混合し、そして抗体を多様な濃度で添加した。２４時間インキュベーションした後、溶解を測定した。 タンデム一本鎖二重特異性抗体形式の模式図。

抗体
本発明記載の抗体は、好ましくは、ＴＩＭ−３（抗原）、好ましくはヒトまたはアカゲザルＴＩＭ−３に、所望により１．０ｘ１０^−６〜４．０ｘ１０^−４の範囲のＫｄ（ｓ^−１）で結合する。

本発明の任意の側面において、抗体は、好ましくは、ＴＩＭ−３（例えばヒトまたはアカゲザル）に特異的に結合する。
本発明記載の抗体は、単離型で提供されてもよい。

本発明記載の抗体は、以下の特性の少なくとも１つを示してもよい：
ａ）１ｘ１０^−６またはそれ未満、より好ましくは、≦１ｘ１０^−５、≦１ｘ１０^−４、または≦１ｘ１０^−３の１つのＫｄで、ヒトＴＩＭ−３に結合する；
ｂ）ＴＩＭ−３発現細胞、例えばＴＩＭ−３発現急性骨髄性白血病細胞に対して細胞傷害性である（抗体依存性細胞仲介性細胞傷害性、ＡＤＣＣ）；
ｃ）混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイ（例えばＢｒｏｍｅｌｏｗら Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ， ２００１ Ｊａｎ １；２４７（１−２）：１−８を参照されたい）においてＴ細胞増殖を増加させる；
ｄ）ＭＬＲアッセイにおいてインターフェロン−ガンマ産生を増加させる；または
ｅ）ＭＬＲアッセイにおいてインターロイキン−２（ＩＬ−２）分泌を増加させる。

「抗体」によって、本発明者らは、その断片または誘導体、あるいは合成抗体または合成抗体断片も含める。
モノクローナル抗体技術に関連した今日の技術を考慮すると、抗体は、大部分の抗原に対して調製可能である。抗原結合部分は、抗体の部分（例えばＦａｂ断片）または合成抗体断片（例えば一本鎖Ｆｖ断片［ＳｃＦｖ］）であってもよい。選択した抗原に対する適切なモノクローナル抗体は、既知の技術、例えば、“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ ｍａｎｕａｌ ｏｆ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ”， Ｈ Ｚｏｌａ（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ， １９８８）に、そして“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”， Ｊ Ｇ Ｒ Ｈｕｒｒｅｌｌ（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ， １９８２）に開示されるものによって調製可能である。キメラ抗体は、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら（１９８８， ８ｔｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｐａｒｔ ２， ７９２−７９９）によって論じられる。

モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、本発明の方法において有用であり、そして抗原上の単一のエピトープを特異的にターゲティングする抗体の均質な集団である。
ポリクローナル抗体は、本発明の方法において有用である。単一特異的ポリクローナル抗体が好ましい。当該技術分野に周知の方法を用いて、適切なポリクローナル抗体を調製してもよい。

ＦａｂおよびＦａｂ_２断片などの、抗体の抗原結合性断片もまた用いて／提供してもよく、遺伝子操作した抗体および抗体断片もまた用いて／提供してもよい。抗体の可変重鎖（Ｖ_Ｈ）および可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ドメインは、抗原認識に関与し、この事実は、初期のプロテアーゼ消化実験によって最初に認識された。さらなる確認は、齧歯類抗体の「ヒト化」によって見出された。齧歯類起源の可変ドメインを、ヒト起源の定常ドメインに融合させて、生じる抗体が、齧歯類親抗体の抗原特異性を保持するようにしてもよい（Ｍｏｒｒｉｓｏｎら（１９８４） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８１， ６８５１−６８５５）。

抗原特異性は可変ドメインによって与えられ、そして定常ドメインからは独立であることは、すべて１またはそれより多くの可変ドメインを含有する抗体断片の細菌発現を伴う実験から知られる。これらの分子には、Ｆａｂ様分子（Ｂｅｔｔｅｒら（１９８８） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０， １０４１）； Ｆｖ分子（Ｓｋｅｒｒａら（１９８８） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０， １０３８）； Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌパートナードメインが柔軟なオリゴペプチドを通じて連結される、一本鎖Ｆｖ（ＳｃＦｖ）分子（Ｂｉｒｄら（１９８８） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２， ４２３； Ｈｕｓｔｏｎら（１９８８） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８５， ５８７９）；ならびに単離Ｖドメインを含む単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）（Ｗａｒｄら（１９８９） Ｎａｔｕｒｅ ３４１， ５４４）が含まれる。特異的結合部位を保持する抗体断片合成に関与する技術の一般的な概説は、Ｗｉｎｔｅｒ ＆ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９９１） Ｎａｔｕｒｅ ３４９， ２９３−２９９中に見出されるはずである。

「ＳｃＦｖ分子」によって、本発明者らは、Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌパートナードメインが、例えば柔軟なオリゴペプチドによって、共有結合されている分子を意味する。
Ｆａｂ、Ｆｖ、ＳｃＦｖおよびｄＡｂ抗体断片は、すべて大腸菌において発現可能であり、そして大腸菌から分泌可能であり、したがって、多量の前記断片の容易な産生が可能になる。

全抗体、およびＦ（ａｂ’）_２断片は「二価」である。「二価」によって、本発明者らは、前記抗体およびＦ（ａｂ’）_２断片が２つの抗原結合部位を有することを意味する。対照的に、Ｆａｂ、Ｆｖ、ＳｃＦｖおよびｄＡｂ断片は一価であり、１つの抗原結合部位しか持たない。また、当該技術分野に周知であるようなファージディスプレイ技術を用いて、ＴＩＭ−３に結合する合成抗体を作製してもよい。

本発明の側面には、二重特異性抗体が２種の抗原に結合するように、例えば２つの異なる抗体の２つの異なる断片で構成された、二重特異性抗体が含まれる。抗原の一方はＴＩＭ−３であり、二重特異性抗体は、ＴＩＭ−３に結合する本明細書に記載するような断片を含む。抗体は、任意の望ましい抗原、例えば細胞傷害性細胞に結合し、腫瘍部位にこれらを補充し、そしてターゲティングするために、癌免疫療法において用いられてきているＣＤ３に対するアフィニティを有する異なる断片を含有してもよい。二重特異性抗体を調製するための技術は当該技術分野に周知であり、例えばＭｕｅｌｌｅｒ， Ｄら， （２０１０ Ｂｉｏｄｒｕｇｓ ２４ （２）： ８９−９８）、Ｗｏｚｎｉａｋ−Ｋｎｏｐｐ Ｇら， （２０１０ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ ２３ （４）： ２８９−２９７． Ｂａｅｕｅｒｌｅ， ＰＡら， （２００９ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６９ （１２）： ４９４１−４９４４）を参照されたい。

したがって、本発明は、ＴＩＭ−３に結合可能であり、そして二重特異性抗体または二重特異性抗原結合性断片である、抗体または抗原結合性断片を提供する。いくつかの態様において、二重特異性抗体または二重特異性抗原結合性断片は単離されていてもよい。

いくつかの態様において、二重特異性抗体および二重特異性抗原結合性断片は、本発明記載の抗原結合性断片またはポリペプチドを含む。いくつかの態様において、二重特異性抗体および二重特異性抗原結合性断片は、ＴＩＭ−３に結合可能な抗原結合性ドメインであって、ＴＩＭ−３に結合可能な抗原結合性ドメインが本発明記載の抗原結合性断片またはポリペプチドを含むかまたはこれらからなる、前記ドメインを含む。

いくつかの態様において、二重特異性抗体および二重特異性抗原結合性断片は、ＴＩＭ−３に結合可能な抗原結合性ドメイン、および別のターゲットタンパク質に結合可能な抗原結合性ドメインを含む。

別のターゲットタンパク質に結合可能な抗原結合性ドメインは、ＴＩＭ−３以外の別のタンパク質に結合可能であってもよい。いくつかの態様において、ターゲットタンパク質は、細胞表面受容体である。いくつかの態様において、ターゲットタンパク質は、免疫細胞細胞表面上に発現される細胞表面受容体である。いくつかの態様において、ターゲットタンパク質は、Ｔ細胞の細胞表面上で発現される細胞表面受容体である。

いくつかの態様において、別のターゲットタンパク質に結合可能な抗原結合性ドメインは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体またはその構成要素に結合可能でありうる。いくつかの態様において、抗原結合性ドメインは、ＣＤ３またはＣＤ３ポリペプチドに結合可能でありうる。いくつかの態様において、抗原結合性ドメインは、ＣＤ３ポリペプチドＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ζ、またはＣＤ３εの１またはそれより多くに結合可能でありうる。いくつかの態様において、二重特異性抗体は、ＴＩＭ−３発現細胞に対して、Ｔ細胞活性（例えば細胞傷害性活性）を向けることが可能である。いくつかの態様において、二重特異性抗体は、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー抗体である。いくつかの態様において、二重特異性抗体または断片は、ＴＩＭ−３発現細胞に対して、Ｔ細胞活性（例えば細胞傷害性活性）を向けることが可能である。すなわち、いくつかの態様において、ＴＩＭ−３発現細胞に対するＴ細胞活性（例えば細胞傷害性活性）は、二重特異性抗体または断片の存在下で増加する（例えば二重特異性抗体または断片の非存在下でのＴＩＭ−３発現細胞に対する活性に比較して）。ＴＩＭ−３発現細胞に対するＴ細胞活性は、当業者に周知の方法によって、例えばＴＩＭ−３発現細胞とＴ細胞をインキュベーションし、そして本明細書に記載するように細胞溶解を測定することによって、ｉｎ ｖｉｔｒｏで決定可能である。

いくつかの態様において、二重特異性抗体を、本発明記載のＴＩＭ−３結合性抗体または抗体断片のＶ_ＨおよびＶ_Ｌ、ならびにＣＤ３またはＣＤ３ポリペプチドに結合可能な抗体または抗体断片のＶ_ＨおよびＶ_Ｌを含む、２つの一本鎖可変断片（ｓｃＦＶ）形式の融合タンパク質として提供する。

いくつかの態様において、ＣＤ３またはＣＤ３ポリペプチドの抗原結合性ドメインは、例えば、抗ＣＤ３抗体クローンＯＫＴ３（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、クローンＣＤ３−１２（ＡｂＤ Ｓｅｒｏｔｅｃ）、クローンＵＣＨＴ１（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ） クローンＳＰ７（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｉｅｒｃｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）、クローンＳＰＶ−Ｔ３ｂ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、クローンＳ４．１（７Ｄ６）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、クローンＭＥＭ−５７（ＡｂＤ Ｓｅｒｏｔｅｃ）、クローン３７８９５（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）、クローンＣＡ−３（Ａｂｃａｍ）、クローン４Ｄ１０Ａ６（Ａｂｂｉｏｔｅｃ）、クローンＨＩＴ３ａ（Ａｂｂｉｏｔｅｃ）、クローンＬＴ３（Ｓｏｕｒｃｅ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ）、クローンＢ−Ｂ１１（ＭｙＢｉｏＳｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ）、クローン１７Ａ２（Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）、クローンＢＣ３（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、クローンＨＡＭ２５−１３５２（ＭＢＬ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）、クローンＣＡ−３（Ｂｏｓｔｅｒｂｉｏ）、クローンＲＢＴ−ＣＤ３（Ｌｉｆｅｓｐａｎ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）、Ｈａｍ２５−１１５７（Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、クローンＣＲＩＳ−７（Ｐｅｎｉｎｓｕｌａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）、クローン５Ｂ２、クローン２Ｑ１１６０（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、クローンＭ０１、クローンＢ１．１（Ａｂｎｏｖａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、クローンＥＰ４４９Ｅ（ＢｉｏＧｅｎｅｘ）、クローン６Ｂ８Ｄ１Ｇ５、クローン６Ｂ１Ｃ１２Ｆ３（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）、クローンＣＬ１２９７（Ａｔｌａｓ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）、クローンＣＣ２３（Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）、クローンＴＲ６６（Ｅｎｚｏ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、クローンＭＥＭ−９２（Ｃｅｄａｒｌａｎｅ）、クローンＥＰＲ４５１６（Ｏｒｉｇｅｎｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、クローン３Ａ１２Ｈ２（Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ Ｇｒｏｕｐ）、クローン３３−２Ａ３（ＡＬＰＣＯ）、クローンＥ２７２（Ｂｉｏｃａｒｅ Ｍｅｄｉｃａｌ）、クローンＳＰ１６２、クローンＭＲＱ−３９（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）、またはクローンＦ７．２．３８（Ｄａｋｏ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ３もしくはＣＤ３ポリペプチド結合性断片を含んでもよい。

いくつかの態様において、ターゲットタンパク質は、ＣＤ２８ファミリーのメンバーであってもよい。いくつかの態様において、ターゲットタンパク質は、ＰＤ−１（ＣＤ２７９）、ＬＡＧ３（ＣＤ２２３）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＣＴＬＡ４（ＣＤ１５２）、ＢＴＬＡ（ＣＤ２７２）またはＣＤ２８などのＣＤ２８ファミリーのメンバーであってもよい。

いくつかの特定の態様において、二重特異性抗体または二重特異性抗原結合性断片は、ＣＤ３またはＣＤ３ポリペプチドに結合可能な抗原結合性ドメイン、ならびに本明細書記載のクローン２Ｃ７のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＴＩＭ−３結合断片を含む、ＴＩＭ−３に結合可能な抗原結合性ドメインを含む。

いくつかの態様において、本発明の二重特異性抗体は、以下の特性の少なくとも１つを示しうる：
ａ）ＴＩＭ−３発現細胞、例えばＴＩＭ−３発現急性骨髄性白血病細胞の細胞死滅（例えばＴ細胞仲介性細胞死滅）を増加させるかまたは増進させる（抗体依存性細胞仲介性細胞傷害性、ＡＤＣＣ）；
ｂ）ＴＩＭ−３発現幹細胞、例えばＴＩＭ−３発現ＣＤ３４＋急性骨髄性白血病細胞の細胞死滅（例えばＴ細胞仲介性細胞死滅）を増加させるかまたは増進させる（抗体依存性細胞仲介性細胞傷害性、ＡＤＣＣ）；
いくつかの態様において、ＰＤ−１に対する抗原結合性ドメインは、例えば抗ＰＤ−１抗体クローンＪ１１６、クローンＭＩＨ４（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、クローン７Ａ１１Ｂ１（Ｒｏｃｋｌａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．）、クローン１９２１０６（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、クローンＪ１１０、クローンＪ１０５（ＭＢＬ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）、クローン１２Ａ７Ｄ７、クローン７Ａ１１Ｂ１（Ａｂｂｉｏｔｅｃ）、クローン＃９Ｘ２１（ＭｙＢｉｏＳｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ）、クローン４Ｈ４Ｄ１（Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ Ｇｒｏｕｐ）、クローンＤ３Ｗ４Ｕ、クローンＤ３Ｏ４Ｓ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、クローンＲＭＰ１−３０、クローンＲＭＰ１−１４（Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、クローンＥＨ１２．２Ｈ７（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、クローン１０Ｂ１２２７（Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）、クローンＵＭＡＢ１９８、またはクローンＵＭＡＢ１９７（Ｏｒｉｇｅｎｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＰＤ−１結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＬＡＧ３の抗原結合性ドメインは、例えば抗ＬＡＧ３抗体クローン１７Ｂ４（Ｅｎｚｏ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、クローン３３３２１０（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、またはクローン１４Ｌ６７６（Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＬＡＧ３結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＩＣＯＳの抗原結合性ドメインは、例えば抗ＩＣＯＳ抗体クローンＩＳＡ−３（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、クローンＳＰ９８（Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）、クローン１Ｇ１、クローン３Ｇ４（Ａｂｎｏｖａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、クローン６６９２２２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、クローンＴＱ０９（Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）、またはクローンＣ３９８．４Ａ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＩＣＯＳ結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＴＬＡ４の抗原結合性ドメインは、例えば抗ＣＴＬＡ４抗体クローン２Ｆ１、クローン１Ｆ４（Ａｂｎｏｖａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、クローン９Ｈ１０（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、クローンＢＮＵ３（ＧｅｎｅＴｅｘ）、クローン１Ｅ２、クローンＡＳ３２（ＬｉｆｅＳｐａｎ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）クローンＡ３．４Ｈ２．Ｈ１２（Ａｃｒｉｓ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）、クローン０６０（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）、クローンＢＵ５Ｇ３（Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）、クローンＭＩＨ８（ＭＢＬ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）、クローンＡ３．６Ｂ１０．Ｇ１、またはクローンＬ３Ｄ１０（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＴＬＡ４結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＢＴＬＡの抗原結合性ドメインは、例えば抗ＢＴＬＡ抗体クローン１Ｂ７、クローン２Ｇ８、クローン４Ｃ５（Ａｂｎｏｖａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、クローン４Ｂ８（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ−ｏｎｌｉｎｅ）、クローンＭＩＨ２６（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｉｅｒｃｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）、クローンＵＭＡＢ６１（ＯｒｉＧｅｎｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、クローン３３０１０４（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、クローン１Ｂ４（ＬｉｆｅＳｐａｎ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）、クローン４４０２０５、クローン５Ｅ７（Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＢＴＬＡ結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ２８の抗原結合性ドメインは、例えば抗ＣＤ２８抗体クローンＣＤ２８．６（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、クローンＣＤ２８．２、クローンＪＪ３１９（Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）、クローン２０４．１２、クローンＢ−２３、クローン１０Ｆ３（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｉｅｒｃｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）、クローン３７４０７（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、クローン２０４−１２（Ａｂｎｏｖａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、クローン１５Ｅ８（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、クローン２０４−１２、クローンＹＴＨ９１３．１２（ＡｂＤ Ｓｅｒｏｔｅｃ）、クローンＢ−Ｔ３（Ａｃｒｉｓ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）、クローン９Ｈ６Ｅ２（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）、クローンＣ２８／７７（ＭｙＢｉｏＳｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ）、クローンＫＯＬＴ−２（ＡＬＰＣＯ）、クローン１５２−２Ｅ１０（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、またはクローンＸＰＨ−５６（Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ２８結合性断片を含んでもよい。

本発明記載の二重特異性抗体の抗原結合性ドメインまたは二重特異性抗原結合性断片は、抗原に結合可能なポリペプチドの任意のドメインであってもよい。いくつかの態様において、抗原結合性ドメインは、ともに抗体の抗原結合性領域または抗原結合性断片を定義する少なくとも３つの軽鎖ＣＤＲ（すなわちＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２およびＬＣ−ＣＤＲ３）および３つの重鎖ＣＤＲ（すなわちＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２およびＨＣ−ＣＤＲ３）を含む。いくつかの態様において、抗原結合性ドメインは、抗体または抗原結合性断片の軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインを含んでもよい。いくつかの態様において、抗原結合性ドメインは、抗体または抗原結合性断片の軽鎖ポリペプチドおよび重鎖ポリペプチドを含んでもよい。

本発明記載の二重特異性抗体および二重特異性抗原結合性断片は、任意の適切な形式、例えば本明細書にその全体が援用されるＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ ＭＡｂｓ ２０１２， ４（２）： １８２−１９７に記載される形式で提供されてもよい。例えば、二重特異性抗体または二重特異性抗原結合性断片は、二重特異性抗体コンジュゲート（例えばＩｇＧ２、Ｆ（ａｂ’）_２またはＣｏｖＸ−Ｂｏｄｙ）、二重特異性ＩｇＧまたはＩｇＧ様分子（例えばＩｇＧ、ｓｃＦｖ_４−Ｉｇ、ＩｇＧ−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−ＩｇＧ、ＤＶＤ−Ｉｇ、ＩｇＧ−ｓＶＤ、ｓＶＤ−ＩｇＧ、２イン１−ＩｇＧ、ｍＡｂ^２、またはＴａｎｄｅｍａｂ共通ＬＣ）、非対称二重特異性ＩｇＧまたはＩｇＧ様分子（例えばｋｉｈ ＩｇＧ、ｋｉｈ ＩｇＧ共通ＬＣ、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ｋｉｈ ＩｇＧ−ｓｃＦａｂ、ｍＡｂ−Ｆｖ、電荷対（ｃｈａｒｇｅ ｐａｉｒ）またはＳＥＥＤ−ｂｏｄｙ）、小分子二重特異性抗体分子（例えばＤｉａｂｏｄｙ（Ｄｂ）、ｄｓＤｂ、ＤＡＲＴ、ｓｃＤｂ、ｔａｎｄＡｂｓ、タンデムｓｃＦｖ（ｔａＦｖ）、タンデムｄＡｂ／ＶＨＨ、三重ボディ、三重ヘッド、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、またはＦ（ａｂ’）_２−ｓｃＦｖ_２）、二重特異性ＦｃおよびＣ_Ｈ３融合タンパク質（例えばｔａＦｖ−Ｆｃ、Ｄｉ−ディアボディ、ｓｃＤｂ−Ｃ_Ｈ３、ｓｃＦｖ−Ｆｃ−ｓｃＦｖ、ＨＣＡｂ−ＶＨＨ、ｓｃＦｖ−ｋｉｈ−Ｆｃ、またはｓｃＦｖ−ｋｉｈ−Ｃ_Ｈ３）、または二重特異性融合タンパク質（例えばｓｃＦｖ_２−アルブミン、ｓｃＤｂ−アルブミン、ｔａＦｖ−毒素、ＤＮＬ−Ｆａｂ_３、ＤＮＬ−Ｆａｂ_４−ＩｇＧ、ＤＮＬ−Ｆａｂ_４−ＩｇＧ−サイトカイン_２）であってもよい。特に、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ＭＡｂｓ ２０１２， ４（２）： １８２−１９の図２を参照されたい。

当業者は、本発明記載の二重特異性抗体および二重特異性抗原結合性断片を設計し、そして調製することが可能でありうる。
二重特異性抗体を産生するための方法には、例えば還元可能ジスルフィドまたは還元不能チオエーテル結合を用いた、例えば本明細書にその全体が援用されるＳｅｇａｌおよびＢａｓｔ， ２００１． 二重特異性抗体の産生。 Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ． １４：ＩＶ：２．１３：２．１３．１−２．１３．１６に記載されるような、抗体または抗体断片の化学的架橋が含まれる。例えば、Ｎ−スクシニミジル−３−（−２−ピリジルジチオ）−プロピオネート（ＳＰＤＰ）を用いて、例えばＦａｂ断片をヒンジ領域ＳＨ基を通じて化学的に架橋して、ジスルフィド連結二重特異性Ｆ（ａｂ）_２ヘテロ二量体を生成してもよい。

二重特異性抗体を産生するための他の方法には、抗体産生ハイブリドーマを、例えばポリエチレングリコールで融合させて、例えばＤ． Ｍ．およびＢａｓｔ， Ｂ． Ｊ． ２００１． 二重特異性抗体の産生。 Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ． １４：ＩＶ：２．１３：２．１３．１−２．１３．１６に記載されるような二重特異性抗体を分泌可能なクアドローマ細胞を産生することが含まれる。

本発明記載の二重特異性抗体および二重特異性抗原結合性断片はまた、組換え的に、例えばどちらも本明細書にその全内容が援用される、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ： Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ， 第２版（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ， ２０１２）， 第４０章： Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ｄｉａｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔａｎｄｅｍ ｓｃＦｖ（Ｈｏｒｎｉｇ ａｎｄ Ｆａｒｂｅｒ−Ｓｃｈｗａｒｚ）、または Ｆｒｅｎｃｈ， 二重特異性抗体作製法， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ． Ｍｅｄ． ２０００； ４０：３３３−３３９に記載されるような、抗原結合性分子のためのポリペプチドをコードする核酸構築物からの発現によって産生可能である。

例えば、２つの抗原結合性ドメインのための軽鎖および重鎖可変ドメイン（すなわちＴＩＭ−３に結合可能な抗原結合性ドメインのための軽鎖および重鎖可変ドメイン、ならびに別のターゲットタンパク質に結合可能な抗原結合性ドメインのための軽鎖および重鎖可変ドメイン）をコードし、そして抗原結合性ドメイン間に適切なリンカーまたは二量体化ドメインをコードする配列を含むＤＮＡ構築物を、分子クローニング技術によって調製してもよい。その後、組換え二重特異性抗体を、適切な宿主細胞（例えば哺乳動物宿主細胞）において構築物を発現させる（例えばｉｎ ｖｉｔｒｏ）ことによって産生してもよく、そして次いで、発現した組換え二重特異性抗体を所望により精製してもよい。

また、本発明記載の抗体、抗原断片またはポリペプチドを用いて、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ；人工Ｔ細胞受容体とも称される）を構築してもよく、ここで受容体を組換え技術によって操作して免疫細胞に選択された特異性を移植する。例えば、モノクローナル抗体の特異性をＴ細胞上に移植してもよく、そして修飾Ｔ細胞は、疾患、例えば癌の治療に使用を見出しうる。ＣＡＲの１つの型は、本発明記載の抗体、抗原断片またはポリペプチドを含むｓｃＦｖの、適切な受容体足場の膜貫通および内部ドメインへの融合である。ＣＡＲの生成のための技術は、Ｐｕｌｅ， Ｍら（２００３ Ｃｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ ５（３）：２１１−２６）に記載される。

非修飾親抗体に比較して、抗原に対する抗体のアフィニティが改善されている修飾抗体を生成する、アフィニティ成熟プロセスによって抗体を産生してもよい。当該技術分野に知られる方法、例えばＭａｒｋｓら， Ｒｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９−７８３（１９９２）； Ｂａｒｂａｓら Ｐｒｏｃ Ｎａｔ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９１：３８０９−３８１３（１９９４）； Ｓｃｈｉｅｒら Ｇｅｎｅ １６９：１４７−１５５（１９９５）； Ｙｅｌｔｏｎら Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５５：１９９４−２００４（１９９５）； Ｊａｃｋｓｏｎら， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５４（７）：３３１ ０−１５ ９（１９９５）；およびＨａｗｋｉｎｓら， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２２６：８８９−８９６（１９９２）によって、アフィニティ成熟抗体を産生してもよい。

本発明記載の抗体は、好ましくはＴＩＭ−３に対する特異的結合を示す。ターゲット分子に特異的に結合する抗体は、好ましくは、他のターゲットに結合するよりもより高いアフィニティで、および／またはより長い期間ターゲットに結合する。１つの態様において、非関連ターゲットに対する抗体の結合の度合いは、例えばＥＬＩＳＡによってまたはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定されるような、ターゲットに対する抗体の結合の約１０％未満である。あるいは、結合特異性は、本発明の抗ＴＩＭ−３抗体が、別のターゲット分子、例えばＴＩＭ−３ファミリーの別のメンバーに対する抗体のＫｄよりも少なくとも０．１桁分（すなわち０．１ｘ１０^ｎ、式中、ｎは桁を示す整数である）高いＫｄで、ＴＩＭ−３に結合する結合アフィニティの観点から、反映されうる。これは、所望により、少なくとも０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、または２．０の１つであってもよい。

本発明記載の抗体は、好ましくは、≦１ｘ１０^−６、≦１ｘ１０^−５、≦１ｘ１０^−４、または≦１ｘ１０^−３の１つの解離定数（Ｋｄ）を有する。抗体のそのターゲットに対する結合アフィニティは、しばしば、解離定数（Ｋｄ）の観点で記載される。結合アフィニティは、当該技術分野に知られる方法によって、例えば、表面プラズモン共鳴、または抗体のＦａｂ型および抗原分子で行う放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって、測定可能である。

本発明記載の抗体は、結合する抗原の生物学的活性を阻害するかまたは減少させる「アンタゴニスト」抗体であることも可能である。ＴＩＭ−３のブロッキングは、ＴＩＭ−３によって仲介される免疫阻害シグナル伝達経路を阻害することによって、Ｔ細胞機能の回復を補助する。

いくつかの側面において、抗体は、１Ｂ９または１Ｂ９の変異体である。１Ｂ９は、以下のＣＤＲ配列を含む：

ＣＤＲ配列はＫａｂａｔ定義によって決定される。
いくつかの側面において、抗体は、１Ｈ９または１Ｈ９の変異体である。１Ｈ９は、以下のＣＤＲ配列を含む：

ＣＤＲ配列はＫａｂａｔ定義によって決定される。
いくつかの側面において、抗体は、１Ｈ１０または１Ｈ１０の変異体である。１Ｈ１０は、以下のＣＤＲ配列を含む：

ＣＤＲ配列はＫａｂａｔ定義によって決定される。
いくつかの側面において、抗体は、２Ｃ７または２Ｃ７の変異体である。２Ｃ７は、以下のＣＤＲ配列を含む：

ＣＤＲ配列はＫａｂａｔ定義によって決定される。
いくつかの側面において、抗体は、２Ｆ４または２Ｆ４の変異体である。２Ｆ４は、以下のＣＤＲ配列を含む：

ＣＤＲ配列はＫａｂａｔ定義によって決定される。
いくつかの側面において、抗体は、２Ｇ６または２Ｇ６の変異体である。２Ｇ６は、以下のＣＤＲ配列を含む：

ＣＤＲ配列はＫａｂａｔ定義によって決定される。
いくつかの側面において、抗体は、１Ｄ９または１Ｄ９の変異体である。１Ｄ９は、以下のＣＤＲ配列を含む：

ＣＤＲ配列はＫａｂａｔ定義によって決定される。
いくつかの側面において、抗体は、１Ｆ４または１Ｆ４の変異体である。１Ｆ４は、以下のＣＤＲ配列を含む：

ＣＤＲ配列はＫａｂａｔ定義によって決定される。
いくつかの側面において、抗体は、２Ｃ８または２Ｃ８の変異体である。２Ｃ８は、以下のＣＤＲ配列を含む：

ＣＤＲ配列はＫａｂａｔ定義によって決定される。
本発明記載の抗体は、クローン１Ｂ９、１Ｈ９、１Ｈ１０、２Ｃ７、２Ｆ４、２Ｇ６、１Ｄ９、１Ｆ４、２Ｃ８の１つのＣＤＲ、あるいは配列番号１および２１、２および２２、３および２３、４および２４、５および２５、６および２６、７および２７、８および２８または９および２９の１つを含んでもよい。本発明記載の抗体において、６つのＣＤＲ配列の１つまたは２つまたは３つまたは４つは多様であってもよい。変異体は、６つのＣＤＲ配列の１つまたは２つにおいて、１つまたは２つのアミノ酸置換を有してもよい。

抗ＴＩＭ−３クローンのＶ_ＨおよびＶ_Ｌ鎖のアミノ酸配列を図１および２に示す。コードヌクレオチド配列を図４に示す。
軽鎖および重鎖ＣＤＲはまた、いくつかの異なるフレームワーク領域と組み合わせて特に有用でありうる。したがって、ＬＣ−ＣＤＲ１−３またはＨＣ−ＣＤＲ１−３を有する軽鎖および／または重鎖は、代替フレームワーク領域を所持してもよい。適切なフレームワーク領域は、当該技術分野に周知であり、そして例えば、本明細書に援用されるＭ． Ｌｅｆｒａｎｃ ＆ Ｇ． Ｌｅｆｒａｎｃ （２００１） ”Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ＦａｃｔｓＢｏｏｋ”， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓに記載される。

本明細書において、抗体は、配列番号１および２１、２および２２、３および２３、４および２４、５および２５、６および２６、７および２７、８および２８または９および２９のＶ_Ｈおよび／またはＶ_Ｌアミノ酸配列の１またはそれより多く、あるいは図１および２に示すアミノ酸配列の１つに高い割合の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶ_Ｈおよび／またはＶＬ鎖を有してもよい。

例えば、本発明記載の抗体には、ＴＩＭ−３に結合し、そして配列番号１および２１、２および２２、３および２３、４および２４、５および２５、６および２６、７および２７、８および２８または９および２９の１つのＶ_Ｈ鎖アミノ酸配列に、あるいは図１および２に示すアミノ酸配列の１つに、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｈ鎖を有する抗体が含まれる。

本発明記載の抗体は、検出可能に標識されるか、または少なくとも検出可能であってもよい。例えば、抗体を、放射性原子または着色分子または蛍光分子または任意の他の方法で容易に検出可能な分子で標識してもよい。適切な検出可能分子には、蛍光タンパク質、ルシフェラーゼ、酵素基質、および放射標識が含まれる。結合部分を直接検出可能標識で標識してもよいし、または間接的に標識してもよい。例えば、結合部分は、それ自体標識されている別の抗体によって検出可能な、非標識抗体であってもよい。あるいは、第二の抗体が該抗体に結合したビオチンを有してもよく、そしてビオチンに対する標識ストレプトアビジンの結合を用いて、第一の抗体を間接的に標識する。

検出法
本明細書記載の抗体または抗原結合性断片を、ＴＩＭ−３に対する抗体または抗原結合性断片の結合を伴う方法で用いてもよい。こうした方法は、抗体または抗原結合性断片およびＴＩＭ−３の結合した複合体の検出を伴うことも可能である。こうしたものとして、１つの態様において、ＴＩＭ−３を含有するかまたは含有すると推測される試料を、本明細書に記載するような抗体または抗原結合性断片と接触させ、そして抗体または抗原結合性断片およびＴＩＭ−３の複合体の形成を検出する工程を含む方法を提供する。

サンドイッチアッセイ、例えばＥＬＩＳＡなどのイムノアッセイを含む適切な方法形式は、当該技術分野に周知である。該方法は、抗体または抗原結合性断片、またはＴＩＭ−３、あるいは両方を、検出可能標識、例えば蛍光、発光または放射標識で標識することを伴ってもよい。

この種の方法は、ＴＩＭ−３の検出およびまたは定量化を必要とする疾患または状態の診断法の基礎を提供しうる。こうした方法を、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、患者試料に対して、または患者試料のプロセシング後に行ってもよい。試料をひとたび収集したら、診断のｉｎ ｖｉｔｒｏ法が実行されるために、患者が居合わせる必要はなく、そしてしたがって、方法は、ヒトまたは動物の身体に対して行わないものであることも可能である。

こうした方法は、患者試料に存在するＴＩＭ−３の量を決定することを伴ってもよい。該方法は、診断に到達するプロセスの一部として、標準または参照値に対して、決定した量を比較する工程をさらに含んでもよい。他の診断試験を、本明細書に記載するものと組み合わせて用いて、診断または予後診断の正確さを増進するか、あるいは本明細書に記載する試験を用いることによって得られる結果を確認してもよい。

患者試料に存在するＴＩＭ−３のレベルは、患者が抗ＴＩＭ−３抗体での治療に反応しうることを示しうる。試料中の高レベルのＴＩＭ−３の存在を用いて、抗ＴＩＭ−３抗体での治療のために患者を選択することも可能である。したがって、本発明の抗体を用いて、抗ＴＩＭ−３療法を用いた治療のための患者を選択することも可能である。

ＴＩＭ−３の試料における検出を、患者におけるＴ細胞機能不全障害または癌性状態の診断、癌性状態の素因の診断の目的のために、あるいは癌性状態の予後を提供する（予言する）ために、用いてもよい。診断または予後は、存在する（以前診断された）良性または悪性であってもよい癌性状態に関連することも可能であり、推測される癌性状態に関連することも可能であり、あるいは患者における癌性状態（以前未診断であってもよい）に関してスクリーニングすることに関連することも可能である。

１つの態様において、Ｔ細胞消耗の度合いおよび疾患状態の重症度を示すために、ＣＤ８＋ Ｔ細胞上のＴＩＭ−３発現レベルを検出してもよい。いくつかの場合、Ｔ細胞または腫瘍細胞上のＴＩＭ−３発現レベルを用いて、ＴＩＭ３シグナル伝達の調節因子、例えば抗ＴＩＭ３抗体または抗ＴＩＭ３剤で治療するため、患者を選択することも可能である。

任意の組織または体液から試料を採取してもよい。試料は：ある量の血液；フィブリン塊および血球を除去した後に得られる、血液の液体部分を含んでもよい、個体の血液由来のある量の血清；組織試料または生検；あるいは前記個体から単離された細胞を含んでもよいし、またはこれらに由来してもよい。

本発明記載の方法は、好ましくはｉｎ ｖｉｔｒｏで行われる。用語「ｉｎ ｖｉｔｒｏ」は、培養中の細胞を用いた実験を含むよう意図され、一方、用語「ｉｎ ｖｉｖｏ」は、損なわれていない（ｉｎｔａｃｔ）多細胞生物を用いた実験を含むよう意図される。

療法適用
本発明記載の抗体、抗原結合性断片およびポリペプチド、ならびにこうした剤を含む組成物を、医学的治療の方法において使用するために提供してもよい。治療を、治療を必要とする疾患または状態を有する被験体に提供してもよい。疾患または状態は、癌に関連するＴ細胞機能不全障害、癌、または感染性疾患を含む、Ｔ細胞機能不全障害の１つであってもよい。

Ｔ細胞機能不全障害は、正常Ｔ細胞機能が損なわれて、例えば外因性病原体、例えば微生物、細菌およびウイルスによる感染によって生じる、あるいはある型の癌におけるもの（例えば腫瘍関連抗原の型）などのある疾患状態にある宿主によって生成される、病原性抗原に対する被験体の免疫反応の下方制御を引き起こす疾患または状態であってもよい。

Ｔ細胞機能不全障害は、Ｔ細胞消耗またはＴ細胞アネルギーを含んでもよい。Ｔ細胞消耗は、ＣＤ８^＋ Ｔ細胞が、増殖できないか、または抗原刺激に反応してＴ細胞エフェクター機能、例えば細胞傷害性およびサイトカイン（例えばＩＦＮγ）分泌を発揮できない状態を含む。消耗Ｔ細胞はまた、ＴＩＭ−３の持続上方制御によって特徴付けられることも可能であり、この場合、ＴＩＭ−３：ガレクチン９相互作用の遮断はＴ細胞消耗を逆転させ、そして抗原特異的Ｔ細胞反応を回復させることも可能である。

Ｔ細胞機能不全障害は、感染として、または感染に対する有効な免疫反応を開始することが出来ない状態として現れることも可能である。感染は、慢性、持続性、不顕性または緩慢であってもよく、そして細菌、ウイルス、真菌または寄生虫感染の結果であってもよい。こうしたものとして、細菌、ウイルスまたは真菌感染を有する患者に、治療を提供してもよい。細菌感染の例には、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）での感染が含まれる。ウイルス感染の例には、ＨＩＶ、Ｂ型肝炎またはＣ型肝炎での感染が含まれる。

Ｔ細胞機能不全障害は、癌、例えば腫瘍免疫エスケープと関連してもよい。多くのヒト腫瘍は、Ｔ細胞によって認識され、そして免疫反応を誘導可能な腫瘍関連抗原を発現する。しかし、免疫回避は一般的であり、そしてガレクチン９を含む多くの可溶性因子によって仲介されると考えられる。こうしたものとして、ＴＩＭ−３およびガレクチン９の相互作用のブロッキングは、腫瘍細胞に対するこの負の免疫制御シグナルを阻害し、そして腫瘍特異的ＣＤ８^＋ Ｔ細胞免疫を増進させることも可能である。

Ｔ細胞機能不全障害、例えばＴ細胞消耗の徴候がない場合、癌もまた、治療可能である。本発明記載の抗体は、ＴＩＭ−３発現細胞、例えばＴ細胞、例えば消耗したＴ細胞または癌細胞、例えば急性骨髄性白血病細胞に対して細胞傷害性であることも可能である。こうしたものとして、本明細書記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドは、抗体依存性細胞仲介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を伴う方法、あるいはターゲット細胞、例えばＣＡＲ細胞を死滅させるように免疫エフェクター機能を補充する任意の方法において、またはＣＤ３をターゲティングする二重特異性抗体で有用でありうる。

本発明記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドの使用は、被験体がＴＩＭ−３シグナル伝達を抑制し、そして限定された障害、回避または腫瘍免疫エスケープの誘導を伴って、有効な免疫反応を開始することを可能にする。こうした治療において、抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドは、腫瘍免疫エスケープの発展の防止を伴う癌の治療を提供可能である。

治療は、Ｔ細胞機能不全障害の防止、例えば感染の防止、あるいは癌の発展または進行の防止を目的としてもよい。こうしたものとして、抗体、抗原結合性断片およびポリペプチドを用いて、薬学的組成物または薬剤を配合して、そして被験体を疾患状態の発展に対して予防的に治療してもよい。これは、疾患状態の症状の開始前に行ってもよく、そして／または感染または癌発展のリスクがより高いと見なされる被験体に対して行ってもよい。

治療は、ワクチン、例えばＴ細胞ワクチンとの併用療法を含んでもよく、これは、同時、別個または連続療法を伴ってもよいし、あるいは単一組成物中のワクチンおよび抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドの組み合わせ投与であってもよい。この背景において、抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを、ワクチンに対するアジュバントとして提供してもよい。消耗Ｔ細胞の限定された増殖能は、Ｔ細胞免疫療法の失敗の主な理由とされてきており、そしてＴ細胞消耗をブロッキングするかまたは逆転させることが可能な剤の組み合わせは、Ｔ細胞免疫療法の有効性を改善するための潜在的な戦略である（Ｂａｒｂｅｒら， Ｎａｔｕｒｅ Ｖｏｌ ４３９， Ｎｏ．９ ｐ６８２−６８７ Ｆｅｂ ２００６）。

抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドの投与は、好ましくは、「療法的有効量」であり、これは、個体に利益を示すために十分な量である。投与する実際の量、ならびに投与速度および時間経過は、治療する疾患の性質および重症度に応じるであろう。治療の処方、例えば投薬量の決定等は、開業医および他の医師の責任の範囲内であり、そして典型的には、治療しようとする障害、個々の患者の状態、送達部位、投与法、および医師に知られる他の要因が考慮されるであろう。上述の技術およびプロトコルの例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， 第２０版， ２０００， Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ， Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ刊行に見出されうる。

薬学的に有用な組成物および薬剤の配合
本発明記載の抗体、抗原結合性断片およびポリペプチドは、臨床的使用のための薬学的組成物として配合可能であり、そして薬学的に許容されうるキャリアー、希釈剤、賦形剤またはアジュバントを含んでもよい。

本発明にしたがって、薬学的に有用な組成物の産生のためにも方法を提供し、こうした産生法は：本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを単離し；そして／または本発明に記載するような単離抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを、薬学的に許容されうるキャリアー、アジュバント、賦形剤または希釈剤と混合する工程より選択される１またはそれより多い工程を含んでもよい。

例えば、本発明のさらなる側面は、Ｔ細胞機能不全障害の治療において使用するための薬剤または薬学的組成物を配合するかまたは産生する方法であって、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを、薬学的に許容されうるキャリアー、アジュバント、賦形剤または希釈剤と混合することによって、薬学的組成物または薬剤を配合する工程を含む、前記方法に関する。

感染
感染は、いかなる感染または感染性疾患、例えば細菌、ウイルス、真菌、または寄生虫感染であってもよい。いくつかの態様において、慢性／持続性感染、例えばこうした感染がＴ細胞機能不全またはＴ細胞消耗に関連する場合の感染を治療することが特に望ましい可能性もある。

Ｔ細胞消耗が、多くの慢性感染（ウイルス、細菌および寄生虫感染を含む）中に、ならびに癌において（Ｗｈｅｒｒｙ Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ． １２， Ｎｏ．６， ｐ４９２−４９９， Ｊｕｎｅ ２０１１）生じるＴ細胞機能不全状態であることがよく確立されている。

ＴＩＭ−３発現は、慢性感染を有する患者において、重要な病因形成上の役割を果たすことが報告されてきている（例えば、Ｇｏｌｄｅｎ−Ｍａｓｏｎ Ｌ，ら， Ｊ Ｖｉｒｏｌ． ２００９；８３（１８）：９１２２−９１３０によって報告されるとおり）。

治療可能な細菌感染の例には、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）種、百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）種、コリネバクテリウム属（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｌｏｅｒａｅ）、スタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種、ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）種、エシェリキア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、クレブシエラ属（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、プロテウス属（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、エルシニア属（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）、エルウィナ属（Ｅｒｗｉｎａ）、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、リステリア属（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）種、ヘリコバクター・ピロリ、ミコバクテリア（例えば結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ））および緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）が含まれる。例えば、細菌感染は、敗血症または結核であってもよい。

Ｙａｏら（樹状細胞上のＰＤ−１は、細菌感染に対する生得的免疫を妨害する。 Ｂｌｏｏｄ １１３（２３）：５８１１−５８１８ Ｊｕｎ ４ ２００９）は、リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）による感染に対する生得的免疫反応中、ＤＣ機能の負の制御におけるＰＤ−１を確立した。Ｂｒａｈｍａｍｄａｍら（抗ＰＤ−１抗体の遅延された投与は、免疫機能不全を逆転させ、そして敗血症中の生存を改善する。 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｖｏ．８８， ｎｏ．２ ２３３−２４０， Ａｕｇｕｓｔ ２０１０）は、敗血症の２４時間後に投与された抗ＰＤ−１抗体が、リンパ球およびＤＣの敗血症誘導性枯渇を防止し、Ｂｃｌ−ｘＬを増加させ、アポトーシスをブロッキングし、そして生存を改善させることを報告した。Ｔｉｍ３：ガレクチン−９相互作用は、Ｔ細胞消耗を仲介し、そして結核菌による感染に対する生得的および獲得免疫反応を仲介すると報告されてきている（Ｊａｙａｒａｍａｎら， Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２０１２， １８８， ７０．６）。

治療可能なウイルス感染の例には、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、単純ヘルペスウイルスおよびヒトパピローマウイルスが含まれる。

慢性ウイルス感染、例えばＨＣＶ、ＨＢＶ、およびＨＩＶによって引き起こされるものは、一般的に、免疫クリアランスを逃れる機構を伴う。ＰＤ−１およびＴＩＭ−３の発現は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に対するＴ細胞反応欠損と相関すると同定されてきている（ＭｃＭａｈａｎら， Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ Ｖｏｌ． １２０， Ｎｏ． １２ ｐ４５４６−４５５７， Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２０１０）。ＭｃＭａｈａｎら（上記）は、ＨＣＶにおいて、ウイルス持続の発展に先だって、ＨＣＶ特異的ＣＴＬ上にＴＩＭ−３およびＰＤ−１の二重発現レベルがあり、予後情報を提供することを見出した。Ｂａｒｂｅｒら（Ｎａｔｕｒｅ Ｖｏｌ ４３９， Ｎｏ． ９ ｐ６８２−６８７ Ｆｅｂ ２００６）は、ＰＤ−１が慢性ウイルス感染中に上方制御されていると報告した。彼らは、ＬＣＭＶに感染したマウスにおいて、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害経路の遮断が、ＣＤ８ Ｔ細胞に対して有益な効果を有し、これらの細胞が増殖を経て、サイトカインを分泌し、感染細胞を死滅させ、そしてウイルス負荷を減少させる能力を回復させると報告した。ＰＤ−１はまた、ＨＩＶ感染においても上方制御される（Ｓａｉｄら， Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｖｏｌ． １６， Ｎｏ．４ ｐ４５２−４６０ Ａｐｒｉｌ ２０１０）。慢性ウイルス感染の動物モデルにおいて、ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１の間の相互作用をブロッキングすると、ウイルスクリアランスおよびＴ細胞機能の改善に寄与した（Ｓａｉｄら、上記）。

治療可能な真菌感染の例には、アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ）種、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）種、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）種およびヒストプラズマ属（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ）種による感染が含まれる。真菌感染は、真菌敗血症またはヒストプラズマ症であることも可能である。

Ｃｈａｎｇら（負の共刺激分子ＰＤ−１およびＣＴＬＡ−４の遮断は、原発性および続発性真菌敗血症において生存を改善する。 Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｃａｒｅ ２０１３， １７：Ｒ８５）は、抗ＰＤ１抗体が原発性および続発性真菌敗血症において生存を改善する際に非常に有効であると報告した。Ｌａｚａｒ−Ｍｏｌｎａｒら（ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ共刺激経路は、病原性真菌ヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）に対する宿主耐性に決定的な影響を及ぼす ＰＮＡＳ ｖｏｌ． １０５， ｎｏ．７， ｐ２６５８−２６６３， １９ Ｆｅｂ ２００８）は、抗ＰＤ−１抗体がヒストプラズマ・カプスラーツムに感染したマウスの生存を有意に増加させることを報告した。こうしたものとして、真菌感染を仲介する際のＴ細胞消耗の重要性がよく確立されている。治療可能な寄生虫感染の例には、プラスモジウム属種（例えば熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、ネズミマラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｙｏｅｌｉ）、卵形マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｏｖａｌｅ）、三日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｖａｘ）、またはプラスモジウム・シャバウディ・シャバウディ（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｃｈａｂａｕｄｉ ｃｈａｂａｕｄｉ））による感染が含まれる。寄生虫感染は、例えばマラリア、リーシュマニア症およびトキソプラズマ症であってもよい。

ヒトが熱帯熱マラリア原虫に感染すると、ＰＤ−１のより高い発現が生じ、そしてマウスではＴ細胞消耗が生じることが示されてきている（Ｂｕｔｌｅｒら， Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ．１３， Ｎｏ．１２， ｐ １８８−１９５ ２０１２年２月）。抗ＰＤ−Ｌ１および抗ＬＡＧ−３モノクローナル抗体を用いてｉｎ ｖｉｖｏでＰＤ−Ｌ１およびＬＡＧ−３を遮断すると、マウスにおいて、ＣＤ４^＋ Ｔ細胞機能の回復、いくつかの濾胞ヘルパーＴ細胞、胚中心Ｂ細胞および形質芽細胞の増幅、防御抗体の増進および血液段階マラリアの迅速な一掃に寄与した。これはまた、慢性感染の発展も遮断することも示された（Ｂｕｔｌｅｒら、上記）。

癌
癌は、任意の望ましくない細胞増殖（または望ましくない細胞増殖によって現れる任意の疾患）、新生物または腫瘍、あるいは望ましくない細胞増殖、新生物または腫瘍に対するリスクまたは素因の増加であることも可能である。癌は、良性または悪性であってもよく、そして原発性または続発性（転移性）であってもよい。新生物または腫瘍は、細胞の任意の異常な成長または増殖であってもよく、そして任意の組織に位置していてもよい。組織の例には、副腎、副腎髄質、肛門、虫垂、膀胱、血液、骨、骨髄、脳、乳房、盲腸、中枢神経系（脳を含むまたは除く）、小脳、子宮頸部、結腸、十二指腸、子宮内膜、上皮細胞（例えば腎上皮）、胆嚢、食道、グリア細胞、心臓、回腸、空腸、腎臓、涙腺、喉頭、肝臓、肺、リンパ、リンパ節、リンパ芽球、上顎骨、縦隔、腸間膜、子宮筋、上咽頭、網（ｏｍｅｎｔｕｍｅ）、口腔、卵巣、膵臓、耳下腺、末梢神経系、腹膜、胸膜、前立腺、唾液腺、Ｓ状結腸、皮膚、小腸、柔組織、脾臓、胃、精巣、胸腺、甲状腺、舌、扁桃腺、気管、子宮、外陰部、白血球が含まれる。

治療されうる腫瘍は、神経系または非神経系腫瘍であってもよい。神経系腫瘍は、中枢または末梢神経系のいずれから生じてもよく、例えば神経膠腫、髄芽腫、髄膜腫、神経線維腫、上衣腫、シュワン腫、神経線維肉腫、星状細胞腫および乏突起神経膠腫であってもよい。非神経系癌／腫瘍は、任意の他の非神経組織で生じてもよく、例には、黒色腫、中皮腫、リンパ腫、骨髄腫、白血病、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ホジキンリンパ腫、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、肝細胞腫、類表皮癌、前立腺癌、乳癌、肺癌、結腸癌、卵巣癌、膵臓癌、胸腺癌、ＮＳＣＬＣ、血液学的癌および肉腫が含まれる。

養子Ｔ細胞移入療法
養子Ｔ細胞移入療法は、一般的に、典型的には血液試料を抜き取り、そこから白血球を分離し、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで拡大し、そして同じ被験体または異なる被験体のいずれかに戻すことによって、白血球が被験体から除去されるプロセスを指す。治療は、典型的には、被験体において必要とされるＴ細胞集団の活性型の量／濃度を増加させることを目的とする。こうした治療は、Ｔ細胞消耗を経験している被験体において有益でありうる。

Ｔ細胞消耗機構を遮断するかまたは逆転させることが可能な抗体は、Ｔ細胞活性を増進させ、そしてＴ細胞拡大を促進する手段を提供する。
したがって、本発明のさらなる側面において、Ｔ細胞を、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで、本発明記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドと接触させる、Ｔ細胞集団を拡大するための方法を提供する。

該方法は、所望により、以下の工程：被験体から血液試料を採取する工程；血液試料からＴ細胞を単離する工程；ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏ細胞培養中でＴ細胞を培養し（ここで該細胞を抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドと接触させてもよい）、Ｔ細胞の拡大集団を収集する工程；Ｔ細胞をアジュバント、希釈剤、またはキャリアーと混合する工程；拡大Ｔ細胞を被験体に投与する工程の１またはそれより多くを含んでもよい。

したがって、本発明のいくつかの側面において、Ｔ細胞機能不全障害を有する被験体の治療法であって、治療が必要な被験体から血液試料を得て、Ｔ細胞集団が拡大されるように、本発明記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドの存在下で、血液試料から得たＴ細胞を培養し、拡大されたＴ細胞を収集し、そして拡大されたＴ細胞を、治療が必要な被験体に投与する工程を含む、前記治療法を提供する。

治療が必要な被験体からＴ細胞を得てもよく、そして単離し、そして／または精製してもよい。これらはＣＤ４^＋および／またはＣＤ８^＋ Ｔ細胞集団であってもよい。Ｔ細胞は、Ｔ細胞消耗を経験している集団に相当してもよく、そして所望によりＴＩＭ−３の上方制御された発現を有してもよい。

培養中、Ｔ細胞が望ましい細胞数に拡大することを可能にする条件下で、そしてそれに適した期間、Ｔ細胞を、抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドと接触させてもよい。適切な期間の後、Ｔ細胞を採取し、所望により濃縮してもよく、そして適切なキャリアー、アジュバントまたは希釈剤と混合し、そして被験体の体内に戻してもよい。被験体は、こうした療法の１またはそれより多い周期を経てもよい。

Ｔ細胞拡大法は、当該技術分野に周知であり、例えばＫａｌａｍａｓｚら， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ２００４ Ｓｅｐ−Ｏｃｔ； ２７（５）：４０５−１８； Ｍｏｎｔｅｓら， Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００５ Ｎｏｖ；１４２（２）：２９２−３０２； ＷｏｅｌｆｌおよびＧｒｅｅｎｂｕｒｇ Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ９ ｐ９５０−９６６ ２７ Ｍａｒｃｈ ２０１４； ＴｒｉｃｋｅｔｔおよびＫｗａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｖｏｌ． ２７５， Ｉｓｓｕｅｓ １−２， １ Ａｐｒｉｌ ２００３， ｐ２５１−２５５； Ｂｕｔｌｅｒら ＰＬｏＳＯＮＥ ７（１） １２ Ｊａｎ ２０１２に記載されるものがある。

同時または連続投与
治療しようとする状態に応じて、組成物を単独で、あるいは他の治療と組み合わせて、同時にまたは連続して投与してもよい。

本明細書において、本発明の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチド、および抗感染剤または化学療法剤（療法剤）を同時にまたは連続して投与してもよい。
いくつかの態様において、本発明の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドでの治療には、化学療法が付随してもよい。

同時投与は、抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドおよび療法剤の一緒の投与、例えば両方の剤を含有する薬学的組成物（組み合わせ調製物）、あるいは互いの直後の、そして所望により同じ投与経路を通じた、例えば同じ動脈、静脈または他の血管への投与を指す。

連続投与は、抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドまたは療法剤の１つの投与に続く、所定の時間間隔後の他の剤の別個の投与を指す。２つの剤が同じ経路で投与される必要はないが、いくつかの態様ではこれに当てはまる。時間間隔は、任意の時間間隔であってもよい。

抗感染剤
感染治療において、本発明の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを、上述のように、抗感染剤と組み合わせて投与してもよい。抗感染剤は、感染の原因となる微生物またはウイルスに対する作用を有することが知られる剤であってもよい。

適切な抗感染剤には、抗生物質（例えばペニシリン、セファロスポリン、リファマイシン、リピアルマイシン、キノロン、スルホンアミド、マクロライド、リンコサミド、テトラサイクリン、環状リポペプチド、グリシルサイクリン、オキサゾリジノン、およびリピアルマイシン）、抗ウイルス剤（例えば逆転写酵素阻害剤、インテグラーゼ阻害剤、転写因子阻害剤、アンチセンスおよびｓｉＲＮＡ剤およびプロテアーゼ阻害剤）、抗真菌剤（例えばポリエン、イミジアゾール、トリアゾール、チアゾール、アリルアミン、およびエキノキャンディン）、および抗寄生虫剤（例えば抗線虫剤、抗条虫剤、抗吸虫剤、抗アメーバ剤および抗原生動物剤）が含まれる。

化学療法
化学療法は、薬剤または電離放射線（例えばＸ線またはγ線を用いた放射療法）での癌の治療を指す。好ましい態様において、化学療法は、薬剤での治療を指す。薬剤は、化学実体、例えば小分子薬剤、抗生物質、ＤＮＡ挿入剤、タンパク質阻害剤（例えばキナーゼ阻害剤）、あるいは生物学的剤、例えば抗体、抗体断片、核酸またはペプチドアプタマー、核酸（例えばＤＮＡ、ＲＮＡ）、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質であってもよい。薬剤を、薬学的組成物または薬剤として配合してもよい。配合物は、１またはそれより多い薬剤（例えば１またはそれより多い活性剤）を１またはそれより多い薬学的に許容されうる希釈剤、賦形剤またはキャリアーと一緒に含んでもよい。

治療は、１より多い薬剤の投与を伴ってもよい。治療しようとする状態に応じて、薬剤は、単独で、あるいは他の治療と組み合わせて同時にまたは連続して投与されてもよい。例えば、化学療法は、２つの薬剤の投与を伴う併用療法であってもよく、これらの１つまたはそれより多くが、癌を治療するよう意図されてもよい。

化学療法は、１またはそれより多い投与経路、例えば非経口、静脈内注射、経口、皮下、皮内または腫瘍内経路によって投与されてもよい。
化学療法は治療措置にしたがって投与されてもよい。治療措置は、医者または医師によって準備されることが可能であり、そして治療を必要とする患者に合わせてあつらえることも可能である、化学療法投与のあらかじめ決定されたタイムテーブル、計画、スキームまたはスケジュールであってもよい。

治療措置は：患者に投与する化学療法のタイプ；各薬剤または放射線の用量；投与間の時間間隔；各治療の長さ；あるとすれば任意の治療休止日の数および性質等の１またはそれより多くを指してもよい。併用療法に関して、各薬剤をどのように投与するかを示す単一の治療措置を提供してもよい。

化学療法薬剤および生物製剤は以下から選択してもよい：
・アルキル化剤、例えばシスプラチン、カルボプラチン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、イホスファミド；
・プリンまたはピリミジン代謝拮抗剤、例えばアザチオプリンまたはメルカプトプリン；
・アルカロイドおよびテルペノイド、例えばビンカアルカロイド（例えばビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン）、ポドフィロトキシン、エトポシド、テニポシド、タキサン、例えばパクリタキセル（タキソール^ＴＭ）、ドセタキセル；
・トポイソメラーゼ阻害剤、例えばＩ型トポイソメラーゼ阻害剤、カンプトテシン、イリノテカンおよびトポテカン、またはＩＩ型トポイソメラーゼ阻害剤、アムサクリン、エトポシド、リン酸エトポシド、テニポシド；
・抗腫瘍抗生物質（例えばアントラサイクリン抗生物質）、例えばダクチノマイシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン^ＴＭ）、エピルビシン、ブレオマイシン、ラパマイシン；
・抗体に基づく剤、例えば抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＣＴＬＡ−４、抗ＬＡＧ−３、抗４−１ＢＢ、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ２７、抗ＢＬＴＡ、抗ＯＸ４０、抗ＶＥＧＦ、抗ＴＮＦα、抗ＩＬ−２、抗ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ、抗ＣＤ５２、抗ＣＤ２０、抗ＲＳＶ、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ｅｒｂＢ２）、抗ＴＮＦ受容体、抗ＥＧＦＲ抗体、モノクローナル抗体または抗体断片、例には：セツキシマブ、パニツムマブ、インフリキシマブ、バシリキシマブ、ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））、アブシキシマブ、ダクリズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズマブ、リツキシマブ（マブテラ（登録商標））、パリビズマブ、トラスツズマブ、エタネルセプト、アダリムマブ、ニモツズマブが含まれる
・ＥＧＦＲ阻害剤、例えばエルロチニブ、セツキシマブおよびゲフィチニブ
・抗血管新生剤、例えばベバシズマブ（アバスチン（登録商標））
・抗癌ワクチン、例えばシプルーセル−Ｔ（プロベンジ（登録商標））。

１つの態様において、化学療法剤は、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＣＴＬＡ−４、抗ＬＡＧ３、抗４−１ＢＢ、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ２７、抗ＢＬＴＡ、抗ＯＸ４０、抗ＶＥＧＦ、抗ＴＮＦα、抗ＩＬ−２、抗ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ、抗ＣＤ５２、抗ＣＤ２０、抗ＲＳＶ、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ｅｒｂＢ２）、抗ＴＮＦ受容体、抗ＥＧＦＲ抗体である。いくつかの態様において、化学療法剤は、免疫チェックポイント阻害剤または共刺激分子である。

さらなる化学療法薬剤は:１３−シス−レチノイン酸、２−クロロデオキシアデノシン、５−アザシチジン５−フルオロウラシル、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、アブラキサン、アキュタン（登録商標）、アクチノマイシン−Ｄ、アドリアマイシン（登録商標）、アドルシル（登録商標）、アフィニトール（登録商標）、アグリリン（登録商標）、Ａｌａ−コート（登録商標）、アルデスロイキン、アレムツズマブ、ＡＬＩＭＴＡ、アリトレチノイン、アルカバン−ＡＱ（登録商標）、アルケラン（登録商標）、オールトランスレチノイン酸、アルファインターフェロン、アルトレタミン、アメトプテリン、アミフォスチン、アミノグルテチミド、アナグレリド、アナンドロン（登録商標）、アナストロゾール、アラビノシルシトシン、アラネスプ（登録商標）、アレジア（登録商標）、アリミデックス（登録商標）、アロマシン（登録商標）、アラノン（登録商標）、亜ヒ酸、アスパラギナーゼ、ＡＴＲＡ アバスチン（登録商標）、アザシチジン、ＢＣＧ、ＢＣＮＵ、ベンダムスチン、ベバシズマス、ベキサロテン、ＢＥＸＸＡＲ（登録商標）、ビカルタミド、ＢｉＣＮＵ、ブレノキサン（登録商標）、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブスルファン、ブスルフェックス（登録商標）、カルシウムロイコボリン、カンパス（登録商標）、カンプトサル（登録商標）、カンプトテシン−１１、カペシタビン、カラック^ＴＭ、カルボプラチン、カルムスチン、カソデックス（登録商標）、ＣＣ−５０１３、ＣＣＩ−７７９、ＣＣＮＵ、ＣＤＤＰ、ＣｅｅＮＵ、セルビジン（登録商標）、セツキシマブ、クロラムブシル、シスプラチン、シトロボルム因子、クラドリビン、コルチゾン、コスメゲン（登録商標）、ＣＰＴ−１１、シクロホスファミド、シタドレン（登録商標）、シタラビン シトサール−Ｕ（登録商標）、シトキサン（登録商標）、ダコゲン、ダクチノマイシン、ダルベポエチンアルファ、ダサチニブ、ダウノマイシン、ダウノルビシン、ダウノルビシン塩酸、ダウノルビシン・リポソーマル、ダウノキソーム（登録商標）、デカドロン、デシタビン、デルタ−コルテフ（登録商標）、デルタゾン（登録商標）、デニロイキン、ディフチトックス、デポシト^ＴＭ、デキサメタゾン、酢酸デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、デキサゾン、デクスラゾキサン、ＤＨＡＤ、ＤＩＣ、ジオデックス、ドセタキセル、ドキシル（登録商標）、ドキソルビシン、ドキソルビシン・リポソーマル、ドロキシア^ＴＭ、ＤＴＩＣ、ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標）、デュラロン（登録商標）、エリガード^ＴＭ、エレンス^ＴＭ、エロキサチン^ＴＭ、エルスパー（登録商標）、エンシット（登録商標）、エピルビシン、エポエチンアルファ、エルビタックス、エルロチニブ、エルウィニアＬ−アスパラギナーゼ、エストラムスチン、エチオールエトポフォス（登録商標）、エトポシド、リン酸エトポシド、ユーレキシン（登録商標）、エベロリムス、エビスタ（登録商標）、エキセメスタン、ファスロデックス（登録商標）、フェマラ（登録商標）、フィルグラスチム、フロクスウリジン、フルダラ（登録商標）、フルダラビン、フルオロプレックス（登録商標）、フルオロウラシル、フロキシメステロン、フルタミド、フォリン酸、ＦＵＤＲ（登録商標）、フルベストラント、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゲムツヅマブ・オゾガマイシン、グリーベック^ＴＭ、グリアデル（登録商標）ウェーハ、ゴセレリン、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、ハーセプチン（登録商標）、ヘキサドロール、ヘキサレン（登録商標）、ヘキサメチルメラミン、ＨＭＭ、ヒカムチン（登録商標）、ヒドレア（登録商標）、酢酸ヒドロコルト（登録商標）、ヒドロコルチゾン、リン酸ヒドロコルチゾンナトリウム、コハク酸ヒドロコルチゾンナトリウム、リン酸ヒドロコルトン、ヒドロキシ尿素、イブリツモマブ、イブリツモマブ・チウキセタン、イダマイシン（登録商標）、イダルビシン、イフェックス（登録商標）、ＩＦＮ−アルファ、イホスファミド、ＩＬ−１１、ＩＬ−２、メシル酸イマチニブ、イミダゾールカルボキサミド、インターフェロンアルファ、インターフェロンアルファ−２ｂ（ＰＥＧコンジュゲート）、インターロイキン−２、インターロイキン−１１、イントロンＡ（登録商標）（インターフェロンアルファ−２ｂ）、イレッサ（登録商標）、イリノテカン、イソトレチノイン、イキサベピロン、イキセンプラ^ＴＭ、キドロラーゼ、ラナコート（登録商標）、ラパチニブ、Ｌ−アスパラギナーゼ、ＬＣＲ、レナリドミド、レトロゾール、ロイコボリン、ロイケラン、ロイカイン^ＴＭ、リュープロリド、リューロクリスチン、リュースタチン^ＴＭ、リポソーマルＡｒａ−Ｃ、液体プレド（登録商標）、ロムスチン、Ｌ−ＰＡＭ、Ｌ−サルコリシン、リュプロン（登録商標）、リュプロンデポ（登録商標）、マツラン（登録商標）、マキシデックス、メクロレタミン、メクロレタミン塩酸、メドラロン（登録商標）、メドロール（登録商標）、メゲース（登録商標）、メゲストロール、酢酸メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メスネックス^ＴＭ、メトトレキセート、メトトレキセートナトリウム、メチルプレドニゾロン、メチコルテン（登録商標）、マイトマイシン、マイトマイシン−Ｃ、ミトキサントロン、Ｍ−プレドニゾール（登録商標）、ＭＴＣ、ＭＴＸ、ムスターゲン（登録商標）、ムスチン、ムタマイシン（登録商標）、ミレラン（登録商標）、ミロセル^ＴＭ、ミロターグ（登録商標）、ナベルビン（登録商標）、ネララビン、ネオサール（登録商標）、ニューラスタ^ＴＭ、ニューメガ（登録商標）、ニューポゲン（登録商標）、ネキサバール（登録商標）、ニランドロン（登録商標）、ニルタミド、ニペント（登録商標）、ナイトロジェンマスタード、ノバルデックス（登録商標）、ノバントロン（登録商標）、オクトレオチド、酢酸オクトレオチド、オンコスパー（登録商標）、オンコビン（登録商標）、オンタック（登録商標）、オンキサル^ＴＭ、オプレベルキン、オラプレッド（登録商標）、オラゾン（登録商標）、オキサリプラチン、パクリタキセル、パクリタキセルタンパク質結合型、パミドロネート、パニツムマブ、パンレチン（登録商標）、パラプラチン（登録商標）、ペディアプレド（登録商標）、ＰＥＧインターフェロン、ペガスパルガーゼ、ペグフィルグラスティム、ＰＥＧ−イントロン^ＴＭ、ＰＥＧ−Ｌ−アスパラギナーゼ、ＰＥＭＥＴＲＥＸＥＤ、ペントスタチン、フェニルアラニンマスタード、プラチノール（登録商標）、プラチノール−ＡＱ（登録商標）、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレロン（登録商標）、プロカルバジン、ＰＲＯＣＲＩＴ（登録商標）、プロロイキン（登録商標）、カルムスチンインプラントプリネトール（登録商標）を含むプロリフプロスパン２０、ラロキシフェン、レブリミド（登録商標）、リューマトレックス（登録商標）、リツキサン（登録商標）、リツキシマブ、ロフェロン−Ａ（登録商標）（インターフェロンアルファ−２ａ）、リューベックス（登録商標）、ルビドマイシン塩酸、サンドスタチン（登録商標）、サンドスタチンＬＡＲ（登録商標）、サルグラモスチン、ソリュ−コルテフ（登録商標）、ソリュ−メドロール（登録商標）、ソラフェニブ、ＳＰＲＹＣＥＬ^ＴＭ、ＳＴＩ−５７１、ストレプトゾシン、ＳＵ１１２４８、スニチニブ、スーテント（登録商標）、タモキシフェン、タルセバ（登録商標）、タルグレチン（登録商標）、タキソール（登録商標）、タキソテール（登録商標）、テモダール（登録商標）、テモゾロミド、テムシロリムス、テニポシド、ＴＥＳＰＡ、サリドマイド、タロミド（登録商標）、テラシス（登録商標）、チオグアニン、チオグアニンタブロイド（登録商標）、チオホスホアミド、チオプレックス（登録商標）、チオテパ、ＴＩＣＥ（登録商標）、トポサール（登録商標）、トポテカン、トレミフェン、トリセル（登録商標）、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレアンダ（登録商標）、トレチノイン、トレキサール^ＴＭ、トリセノックス（登録商標）、ＴＳＰＡ、ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＶＣＲ、ベシチビックス^ＴＭ、ベルバン（登録商標）、ベルケード（登録商標）、ベペシド（登録商標）、ベサノイド（登録商標）、ビアデュル^ＴＭ、ビダザ（登録商標）、ビンブラスチン、硫酸ビンブラスチン、ビンカサールＰｆｓ（登録商標）、ビンクリスチン、ビノレルビン、酒石酸ビノレルビン、ＶＬＢ、ＶＭ−２６、ボリノスタット、ＶＰ−１６、ヴモン（登録商標）、キセロダ（登録商標）、ザノサール（登録商標）、ゼバリン^ＴＭ、ジネカード（登録商標）、ゾラデックス（登録商標）、ゾレドロン酸、ゾリンザ、ゾメタ（登録商標）より選択されてもよい。

投与経路
本発明の側面にしたがった抗体、抗原結合性断片、ポリペプチドおよび他の療法剤、薬剤および薬学的組成物を、限定されるわけではないが、非経口、静脈内、動脈内、筋内、皮下、皮内、腫瘍内および経口を含む、いくつかの経路による投与のために配合してもよい。抗体、抗原結合性断片、ポリペプチドおよび他の療法剤は、液体または固体型で配合可能である。ヒトまたは動物の体の選択した領域への注射による投与のため、液体配合物を配合してもよい。

投薬措置
抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドの多数回の用量を提供してもよい。用量の１つまたはそれより多くまたは各々には、別の療法剤の同時または連続投与が付随していてもよい。

多数回用量は、あらかじめ決定した時間間隔によって分かれていてもよく、これは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、または３１日、あるいは１、２、３、４、５または６ヶ月であってもよい。例えば、用量を、７、１４、２１または２８日ごとに１回投与してもよい（プラスまたはマイナス３、２、または１日）。

キット
本発明のいくつかの側面において、部分のキットを提供する。いくつかの態様において、キットは、あらかじめ決定された量の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを有する少なくとも１つの容器を有してもよい。キットは、薬剤または薬学的組成物の形で、抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを提供してもよく、そして明記する疾患または状態を治療するため、患者に投与するための使用説明書とともに提供されてもよい。抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを、腫瘍へのまたは血液への注射または注入に適切であるように配合してもよい。

いくつかの態様において、キットはさらに、あらかじめ決定した量の別の療法剤（例えば抗感染剤または化学療法剤）を有する少なくとも１つの容器を含んでもよい。こうした態様において、キットはまた、２つの薬剤または薬学的組成物が特定の疾患または状態に対する組み合わせ治療を提供するように、これらを同時にまたは別個に投与可能であるように、第二の薬剤または薬学的組成物も含んでもよい。療法剤はまた、腫瘍または血液への注射または注入に適切であるように配合してもよい。

被験体
治療しようとする被験体は、任意の動物またはヒトであってもよい。被験体は好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。被験体は、非ヒト哺乳動物であってもよいが、より好ましくはヒトである。被験体は男性または女性であってもよい。被験体は患者であってもよい。被験体は治療が必要な疾患または状態を有すると診断されていてもよいし、あるいはこうした疾患または状態を有すると推測されていてもよい。

タンパク質発現
細胞において本発明記載のポリペプチドを産生するために適した分子生物学技術は、当該技術分野に周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， ニューヨーク：Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ， １９８９に示されるものがある。

ポリペプチドはヌクレオチド配列から発現されてもよい。ヌクレオチド配列は、細胞中に存在するベクターに含有されてもよいし、または細胞のゲノム内に取り込まれていてもよい。

「ベクター」は、本明細書において、細胞内に外因性遺伝物質をトランスファーするためのビヒクルとして用いられるオリゴヌクレオチド分子（ＤＮＡまたはＲＮＡ）である。ベクターは、細胞において、遺伝物質を発現させるための発現ベクターであることも可能である。こうしたベクターには、発現しようとする遺伝子配列をコードするヌクレオチド配列に機能可能であるように連結されたプロモーター配列が含まれることも可能である。ベクターにはまた、末端コドンおよび発現エンハンサーも含まれることも可能である。当該技術分野に知られる任意の適切なベクター、プロモーター、エンハンサーおよび終結コドンを用いて、本発明記載のベクターからポリペプチドを発現させることも可能である。適切なベクターには、プラスミド、バイナリーベクター、ウイルスベクターおよび人工染色体（例えば酵母人工染色体）が含まれる。

本明細書において、用語「機能可能であるように連結される」には、選択されたヌクレオチド配列および制御ヌクレオチド配列（例えばプロモーターおよび／またはエンハンサー）が、制御配列の影響または調節下で、ヌクレオチド配列の発現を達成するような方式で、共有連結される（それによって発現カセットを形成する）状況が含まれうる。したがって、制御配列がヌクレオチド配列の転写を達成可能であるならば、制御配列は、選択されたヌクレオチド配列に、機能可能であるように連結されている。適切な場合、生じた転写物は、次いで、望ましいタンパク質またはポリペプチドに翻訳されることも可能である。

本発明記載のペプチドを産生するため、ポリペプチドの発現に適した任意の細胞が使用可能である。細胞は、原核細胞または真核細胞であることも可能である。適切な原核細胞には大腸菌が含まれる。真核細胞の例には、酵母細胞、植物細胞、昆虫細胞または哺乳動物細胞が含まれる。いくつかの場合、ある原核細胞は、真核細胞と同じ翻訳後修飾を可能にしないため、細胞は原核細胞ではない。さらに、真核細胞では非常に高い発現レベルが可能であり、そして適切なタグを用いると、真核細胞からタンパク質を精製することがより容易でありうる。培地へのタンパク質の分泌を増進させる特定のプラスミドもまた、利用可能である。

関心対象のポリペプチドを産生する方法は、ポリペプチドを発現するように修飾された細胞の培養または発酵を伴うことも可能である。培養または発酵は、栄養素、空気／酸素および／または増殖因子の適切な供給を提供されるバイオリアクター中で実行可能である。細胞から、培地／発酵ブロスを分配し、タンパク質内容物を抽出し、そして個々のタンパク質を分離して、分泌されたポリペプチドを単離することによって、分泌されたタンパク質を収集することも可能である。培養、発酵および分離技術は、当業者に周知である。

バイオリアクターには、その中で細胞を培養可能である１またはそれより多い容器が含まれる。バイオリアクター中の培養は、連続して生じてもよく、リアクター内への反応物の連続流動、およびリアクターからの培養細胞の連続流動が伴う。あるいは、培養はバッチで生じてもよい。バイオリアクターは、培養中の細胞のために最適な条件が提供されるように、ｐＨ、酸素、容器内へのおよび容器外への流速、および容器内の攪拌などの環境条件を監視し、そして調節する。

関心対象のポリペプチドを発現する細胞の培養後、好ましくはそのポリペプチドを単離する。当該技術分野に知られる、細胞培養からポリペプチド／タンパク質を分離するための任意の適切な方法が使用可能である。培養から関心対象のポリペプチド／タンパク質を単離するため、まず、関心対象のポリペプチド／タンパク質を含有する培地から、培養された細胞を分離する必要がある可能性もある。関心対象のポリペプチド／タンパク質が細胞から分泌される場合、分泌されたポリペプチド／タンパク質を含有する培地から、遠心分離によって細胞を分離することも可能である。関心対象のポリペプチド／タンパク質が細胞内に集積する場合、遠心分離前に、例えば超音波、迅速凍結融解または浸透圧溶解を用いて、細胞を破壊する必要があるであろう。遠心分離は、培養細胞を含有するペレット、または培養細胞の細胞破片、ならびに培地および関心対象のポリペプチド／タンパク質を含有する上清を生じるであろう。

次いで、他のタンパク質および非タンパク質構成要素も含有しうる上清または培地から、関心対象のポリペプチド／タンパク質を単離することが望ましい可能性もある。上清または培地からポリペプチド／タンパク質構成要素を分離するための一般的なアプローチは、沈殿による。異なる溶解度のポリペプチド／タンパク質は、硫酸アンモニウムなどの沈殿剤の異なる濃度で沈殿する。例えば、低濃度の沈殿剤では、水溶性タンパク質が抽出される。したがって、増加する濃度の沈殿剤を添加することによって、異なる溶解度のタンパク質が区別可能である。続いて、透析を用いて、分離されたタンパク質から硫酸アンモニウムを除去することも可能である。

異なるポリペプチド／タンパク質を区別するための他の方法が当該技術分野に知られ、例えばイオン交換クロマトグラフィおよびサイズクロマトグラフィがある。これらを沈殿の代替法として用いてもよいし、または沈殿に続いて行ってもよい。

関心対象のポリペプチド／タンパク質が、ひとたび培養から単離されたら、タンパク質を濃縮する必要がある可能性もある。関心対象のタンパク質を濃縮するためのいくつかの方法が当該技術分野に知られ、例えば限外濾過または凍結乾燥がある。

配列同一性
アミノ酸またはヌクレオチド配列同一性パーセントを決定する目的のための整列を、当業者に知られる多様な方式で達成してもよく、例えば公的に入手可能なコンピュータソフトウェア、例えばＣｌｕｓｔａｌＷ １．８２． Ｔ−ｃｏｆｆｅｅまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアを用いてもよい。こうしたソフトウェアを用いる場合、好ましくは、デフォルトパラメータ、例えばギャップペナルティおよび伸長ペナルティに関するものを用いる。ＣｌｕｓｔａｌＷ １．８２のデフォルトパラメータは：タンパク質ギャップ・オープンペナルティ＝１０．０、タンパク質ギャップ伸長ペナルティ＝０．２、タンパク質マトリックス＝Ｇｏｎｎｅｔ、タンパク質／ＤＮＡ ＥＮＤＧＡＰ＝−１、タンパク質／ＤＮＡ ＧＡＰＤＩＳＴ＝４である。

本発明には、記載する側面および好ましい特徴の組み合わせが含まれるが、こうした組み合わせが明らかに許容されえないかまたは明らかに回避される場合を除く。
本明細書に用いるセクション見出しは、構成上の目的のみのためであり、そして記載する主題を限定するとは意図されないものとする。

本発明の側面および態様はここで、例として、付随する図を参照しながら例示されるであろう。さらなる側面および態様は、当業者には明らかであろう。本文書に言及するすべての文書が本明細書に援用される。

本明細書全体にわたって、続く請求項を含めて、背景が別であることを必要としない限り、単語「含む」、ならびに変形、例えば「含む」および「含んでいる」は、言及する整数または工程、あるいは整数または工程群の包含を意味するが、いかなる他の整数または工程、あるいは整数または工程群も排除しないことが理解されるであろう。

本明細書および付随する請求項において、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」には、背景が明らかに別のように示さない限り、複数の指示対象が含まれることに留意しなければならない。範囲は、本明細書において、「約」１つの特定の値から、そして／または「約」別の特定の値までとして表されることも可能である。こうした範囲を示した場合、別の態様には、１つの特定の値から、そして／または他の特定の値までが含まれる。同様に、値を近似値で表した場合、先行する「約」を使用することによって、特定の値が別の態様を形成することが理解されるであろう。

抗ヒトＴＩＭ−３抗体の単離
３周期のバイオパニングプロセスにおいて、ｉｎ ｖｉｔｒｏ選択を介してヒト抗体ファージディスプレイライブラリーから、抗ＴＩＭ−３抗体を単離した。

基本的に、ストレプトアビジン−磁気ビーズを、ビオチン化ヒトＴＩＭ−３でコーティングし、そして磁気ソーティングを用いて、抗ＴＩＭ−３特異的ファージをつり上げるために、該ビーズを用いた。潜在的な抗ビオチン抗体を除去するためのいくつかの工程を、選択プロセスに付加した。

ＨＢ２１５１細胞における小規模誘導後、ＥＬＩＳＡによってＦａｂ抗体をスクリーニングした。簡潔には、ＥＬＩＳＡプレートをヒトＴｉｍ−３でコーティングし、そしてカゼイン溶液でブロッキングした。ＰＢＳ Ｔｗｅｅｎ−２０で徹底的に洗浄した後、誘導プレート由来の上清を、ＰＢＳ中の７％ミルクの存在下で、ＥＬＩＳＡプレート内にトランスファーした。室温で９０分間攪拌および徹底的に洗浄した後、ＨＲＰにカップリングしたヤギ抗ヒトＦａｂ抗体を添加した。１時間後、プレートを洗浄し、そしてＴＭＢ基質を添加した。１Ｍ ＨＣｌで反応を停止し、そして６７０ｎｍの参照で、４５０ｎｍで光学密度を測定した。＞０．１の吸光度を生じる抗体を陽性として選択した。最初のクローン性スクリーニングを、ＤＮＡフィンガープリンティングによって行い；次いで、クローン性を配列決定によって確認した。

アフィニティ成熟
ｉｎ ｖｉｔｒｏでＴＩＭ−３を中和する優れたプロファイルを示した１つのクローンをさらに操作した。その配列を生殖系列様フレームワークに復帰させた後、この抗体はＣＤＲ操作によってアフィニティ成熟を経た。特異的アフィニティ成熟抗ＴＩＭ−３抗体の選択を、ファージディスプレイによって行い、そしてＥＬＩＳＡによってスクリーニングした。

ＥＬＩＳＡ陽性クローンの中で、いくつかのリードを選択するため、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって、ＴＩＭ−３会合／解離プロファイルを分析した。簡潔には、ＦｃにカップリングしたヒトＴＩＭ−３をセンサーチップ上に固定し、そして次いで、抗体を流動としてチップ上に適用した。ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６バイオアナライザー（Ｂｉｏｒａｄ）を用いて、会合および解離速度を記録した。ＴＩＭ−３に対する迅速な／強い会合、および該タンパク質からの緩慢な解離に基づいて、９つのクローン（１Ｂ９、１Ｈ９、１Ｈ１０、２Ｃ７、２Ｆ４、２Ｇ６、１Ｄ９、１Ｆ４、２Ｃ８）を選択した（図５）。

患者由来の急性骨髄性白血病細胞の二重特異性抗ＴＩＭ−３、抗ＣＤ３抗体による特異的死滅
抗ＴＩＭ−３クローン２Ｃ７を用いて、一方でＴ細胞とエンゲージ可能であり（ＣＤ３に対する特異性）、そしてもう一方でＴＩＭ−３をターゲティング可能である、二重特異性抗体を構築した。該二重特異性抗体は、融合タンパク質として２つの一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。ｓｃＦｖの一方は、クローン２Ｃ７のＶ_ＨおよびＶ_Ｌ配列を含み（すなわち配列番号４および２４）、そしてもう一方のｓｃＦｖは、抗ＣＤ３抗体クローンのＶ_ＨおよびＶ_Ｌ配列を含む。

タンデム一本鎖二重特異性抗体の形式を図８に示す。
抗ＣＤ３を含むタンデム一本鎖二重特異性形式の抗ＴＩＭ−３クローン２Ｃ７（抗ＴＩＭ−３クローン２Ｃ７−抗ＣＤ３二重特異性抗体）を次いで試験して、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）患者生検から得たＡＭＬ細胞を死滅させる能力を評価した。

簡潔には、精製Ｔ細胞を、３ラインの化学療法治療に不応性の患者から得たＡＭＬ細胞と、１：１の比で混合した。二重特異性抗体を多様な濃度で添加し、そして混合物を２４時間インキュベーションした。インキュベーション後、ＡＭＬ細胞の溶解を測定した。

結果を図６に示す。抗ＴＩＭ−３クローン２Ｃ７抗ＣＤ３二重特異性抗体は、化学療法不応性患者由来のＡＭＬ細胞をｅｘ ｖｉｖｏで死滅させる際に強力であることが立証された。

クローン２Ｃ７−抗ＣＤ３二重特異性抗体を、次いで、ＡＭＬ幹細胞、すなわち高レベルのＣＤ３４を発現するＡＭＬ生検内の細胞に対して試験した。選択後、ＣＤ３４＋細胞（試料＞９９％ ＣＤ３４＋純度）を精製Ｔ細胞と１：１比で混合し、そして抗体を多様な濃度で添加した。２４時間インキュベーションした後、溶解を測定した。

結果を図７に示す。抗ＴＩＭ−３クローン２Ｃ７−抗ＣＤ３二重特異性抗体は、中程度から高濃度で、ＡＭＬ幹細胞をｅｘ ｖｉｖｏで死滅させる能力を示した。

Claims (57)

1. ＴＩＭ−３に結合可能であり、所望により単離されており、アミノ酸配列ｉ）〜ｖｉ）：
   を有する抗体または抗原結合性断片、あるいは配列（ｉ）〜（ｖｉ）の１またはそれより多くにおいて、１または２または３アミノ酸が別のアミノ酸で置換されているその変異体であって、式中、Ｘ_１＝ＥまたはＤ、Ｘ_２＝ＡまたはＳ、Ｘ_３＝Ｙ、ＳまたはＡ、Ｘ_４＝Ｙ、Ａ、ＤまたはＳ、Ｘ_５＝Ｖ、Ｄ、Ｙ、ＬまたはＡ、Ｘ_６＝ＡまたはＳ、Ｘ_７＝ＡまたはＳ、Ｘ_８＝Ｙ、ＶまたはＳおよびＺ_１＝ＶまたはＹ、Ｚ_２＝Ｓ、Ｆ、ＹまたはＤ、Ｚ_３＝Ａ、Ｄ、ＳまたはＹである、前記抗体または抗原結合性断片。
2. ＬＣ−ＣＤＲ３が、ＥＡＷＤＹＹＶＡＡＧＹ（配列番号１２）、ＤＳＷＤＳＡＤＡＳＧＶ（配列番号１３）、ＤＳＷＤＹＤＹＡＡＧＶ（配列番号１４）、ＤＳＷＤＳＹＬＡＡＧＶ（配列番号１５）、ＥＳＷＤＹＤＹＡＳＧＶ（配列番号１６）、ＤＳＷＤＳＳＤＳＳＧＶ（配列番号１７）、ＥＡＷＤＳＡＹＡＡＧＳ（配列番号１８） ＤＳＷＤＡＡＬＳＡＧＶ（配列番号１９）またはＥＳＷＤＡＡＡＡＡＧＹ（配列番号２０）の１つである、請求項１の抗体または抗原結合性断片。
3. ＨＣ−ＣＤＲ３が、ＧＹＶＡＧＳＤＡ（配列番号３２）、ＧＹＶＡＧＦＤＤ（配列番号３３）、ＧＹＶＡＧＦＤＳ（配列番号３４）、ＧＹＶＡＧＹＤＹ（配列番号３５）、ＧＹＶＡＧＳＤＡ（配列番号３６）、ＧＹＶＡＧＦＤＳ（配列番号３７）、ＧＹＹＡＧＤＤＹ（配列番号３８）、ＧＹＶＡＧＹＤＹ（配列番号３９）、またはＧＹＶＡＧＳＤＡ（配列番号４０）の１つである、請求項１または２の抗体または抗原結合性断片。
4. 以下のＣＤＲ：
   を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項１〜３のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
5. 以下のＣＤＲ：
   を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項１〜３のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
6. 以下のＣＤＲ：
   を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項１〜３のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
7. 以下のＣＤＲ：
   を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項１〜３のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
8. 以下のＣＤＲ：
   を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項１〜３のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
9. 以下のＣＤＲ：
   を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項１〜３のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
10. 以下のＣＤＲ：
    を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項１〜３のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
11. 以下のＣＤＲ：
    を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項１〜３のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
12. 以下のＣＤＲ：
    を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項１〜３のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
13. 以下のＣＤＲ：
    を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、請求項１〜１２の抗体または抗原結合性断片。
14. 以下のＣＤＲ：
    を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、請求項１〜１２の抗体または抗原結合性断片。
15. 以下のＣＤＲ：
    を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、請求項１〜１２の抗体または抗原結合性断片。
16. 以下のＣＤＲ：
    を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、請求項１〜１２の抗体または抗原結合性断片。
17. 以下のＣＤＲ：
    を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、請求項１〜１２の抗体または抗原結合性断片。
18. 以下のＣＤＲ：
    を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、請求項１〜１２の抗体または抗原結合性断片。
19. 以下のＣＤＲ：
    を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、請求項１〜１２の抗体または抗原結合性断片。
20. 以下のＣＤＲ：
    を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、請求項１〜１２の抗体または抗原結合性断片。
21. 以下のＣＤＲ：
    を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、請求項１〜１２の抗体または抗原結合性断片。
22. 細胞が細胞傷害性である、請求項１〜２１のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
23. 細胞が、Ｔ細胞消耗またはＴ細胞アネルギーを示すＴ細胞において、Ｔ細胞機能を回復させるために有効である、請求項１〜２２のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
24. ＴＩＭ−３に結合した、請求項１〜２３のいずれか一項記載の、抗体または抗原結合性断片を含む、所望により単離された、ｉｎ ｖｉｔｒｏ複合体。
25. 以下のＣＤＲ：
    を含み、式中、Ｘ_１＝ＥまたはＤ、Ｘ_２＝ＡまたはＳ、Ｘ_３＝Ｙ、ＳまたはＡ、Ｘ_４＝Ｙ、Ａ、ＤまたはＳ、Ｘ_５＝Ｖ、Ｄ、Ｙ、ＬまたはＡ、Ｘ_６＝ＡまたはＳ、Ｘ_７＝ＡまたはＳ、Ｘ_８＝Ｙ、ＶまたはＳである、単離軽鎖可変領域ポリペプチド。
26. ＬＣ−ＣＤＲ３が、ＥＡＷＤＹＹＶＡＡＧＹ（配列番号１２）、ＤＳＷＤＳＡＤＡＳＧＶ（配列番号１３）、ＤＳＷＤＹＤＹＡＡＧＶ（配列番号１４）、ＤＳＷＤＳＹＬＡＡＧＶ（配列番号１５）、ＥＳＷＤＹＤＹＡＳＧＶ（配列番号１６）、ＤＳＷＤＳＳＤＳＳＧＶ（配列番号１７）、ＥＡＷＤＳＡＹＡＡＧＳ（配列番号１８） ＤＳＷＤＡＡＬＳＡＧＶ（配列番号１９）またはＥＳＷＤＡＡＡＡＡＧＹ（配列番号２０）の１つである、請求項２５の単離軽鎖可変領域ポリペプチド。
27. 以下のＣＤＲ：
    を含み、式中、Ｚ_１＝ＶまたはＹ、Ｚ_２＝Ｓ、Ｆ、Ｙ、Ｄ、Ｚ_３＝Ａ、Ｄ、Ｓ、Ｙである、単離重鎖可変領域ポリペプチド。
28. ＨＣ−ＣＤＲ３が、ＧＹＶＡＧＳＤＡ（配列番号３２）、ＧＹＶＡＧＦＤＤ（配列番号３３）、ＧＹＶＡＧＦＤＳ（配列番号３４）、ＧＹＶＡＧＹＤＹ（配列番号３５）、ＧＹＶＡＧＳＤＡ（配列番号３６）、ＧＹＶＡＧＦＤＳ（配列番号３７）、ＧＹＹＡＧＤＤＹ（配列番号３８）、ＧＹＶＡＧＹＤＹ（配列番号３９）、またはＧＹＶＡＧＳＤＡ（配列番号４０）の１つである、請求項２７の単離重鎖可変領域ポリペプチド。
29. 請求項２７または２８記載の重鎖可変領域ポリペプチドと組み合わされた、請求項２５または２６の単離軽鎖可変領域ポリペプチド。
30. ＴＩＭ−３に結合可能であり、重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体または抗原結合性断片であって：
    重鎖が：それぞれ、ＧＹＹＷＳ（配列番号６１）またはＧＧＳＦＳＧＹＹＷＳ（配列番号３０）、ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号３１）、ＧＹＺ_１ＡＧＺ_２ＤＺ_３（配列番号４２）に少なくとも８５％の全体の配列同一性を有する、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、ＨＣ−ＣＤＲ３を含み、式中、Ｚ_１＝ＶまたはＹ、Ｚ_２＝Ｓ、Ｆ、Ｙ、Ｄ、Ｚ_３＝Ａ、Ｄ、Ｓ、Ｙであり、そして
    軽鎖が：それぞれ、ＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＹＶＳ（配列番号１０）、ＧＮＮＷＲＰＳ（配列番号１１）、Ｘ_１Ｘ_２ＷＤＸ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７ＧＸ_８（配列番号４１）に少なくとも８５％の全体の配列同一性を有する、ＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、ＬＣ−ＣＤＲ３を含み、式中、Ｘ_１＝ＥまたはＤ、Ｘ_２＝ＡまたはＳ、Ｘ_３＝Ｙ、ＳまたはＡ、Ｘ_４＝Ｙ、Ａ、ＤまたはＳ、Ｘ_５＝Ｖ、Ｄ、Ｙ、ＬまたはＡ、Ｘ_６＝ＡまたはＳ、Ｘ_７＝ＡまたはＳ、Ｘ_８＝Ｙ、ＶまたはＳである、前記抗体または抗原結合性断片。
31. ＴＩＭ−３に結合可能であり、所望により単離され、重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体または抗原結合性断片であって：
    重鎖配列が、配列番号２１〜２９（図２）の１つの重鎖配列に少なくとも８５％の配列同一性を有し、そして
    軽鎖配列が、配列番号１〜９（図１）の１つの軽鎖配列に少なくとも８５％の配列同一性を有する
    前記抗体または抗原結合性断片。
32. ＴＩＭ−３に結合可能であり、（ｉ）請求項１〜３１のいずれか一項に記載の抗原結合性断片またはポリペプチド、および（ｉｉ）ＴＩＭ−３以外のターゲットタンパク質に結合可能な抗原結合性ドメインを含む、二重特異性抗体または二重特異性抗原結合性断片である、所望により単離された、抗体または抗原結合性断片。
33. ＴＩＭ−３以外のターゲットタンパク質に結合可能である抗原結合性ドメインが、ＣＤ３またはＣＤ３ポリペプチドに結合可能である、請求項３２の抗体または抗原結合性断片。
34. 請求項１〜３３のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片またはポリペプチド、および少なくとも１つの薬学的に許容されうるキャリアーを含む、組成物。
35. 請求項１〜３３のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片またはポリペプチドをコードする、単離核酸。
36. 請求項３５のいずれか１つの核酸を含むベクター。
37. 請求項３６のベクターを含む宿主細胞。
38. 請求項１〜３３のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片またはポリペプチドを作製するための方法であって、抗体または抗原結合性断片またはポリペプチドをコードするベクターを発現するために適切な条件下で、請求項３７の宿主細胞を培養し、そして抗体または抗原結合性断片またはポリペプチドを回収する工程を含む、前記方法。
39. 療法または医学的治療法において使用するための、請求項１〜３３のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチド。
40. 癌またはＴ細胞機能不全障害の治療において使用するための、請求項１〜３３のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチド。
41. 癌の治療において使用するための、請求項１〜３３のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチド。
42. 感染性疾患の治療において使用するための、請求項１〜３３のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチド。
43. 癌またはＴ細胞機能不全障害の治療において使用するための薬剤製造における、請求項１〜３３のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドの使用。
44. 癌の治療において使用するための薬剤製造における、請求項１〜３３のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドの使用。
45. 感染性疾患の治療において使用するための薬剤製造における、請求項１〜３３のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドの使用。
46. 請求項１〜３３のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを、ＴＩＭ−３を発現する細胞に投与する工程を含む、ＴＩＭ−３を発現する細胞を死滅させる、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏの方法。
47. 請求項１〜３３のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを、機能不全Ｔ細胞に投与する工程を含む、Ｔ細胞機能を増進させる、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏの方法。
48. 癌またはＴ細胞機能不全障害を患う患者に、請求項１〜３３のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを投与する工程を含む、癌またはＴ細胞機能不全障害を治療する方法。
49. 癌を患う患者に、請求項１〜３３のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを投与する工程を含む、癌を治療する方法。
50. 感染性疾患を患う患者に、請求項１〜３３のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを投与する工程を含む、感染性疾患を治療する方法。
51. ＴＩＭ−３を含有するかまたは含有すると推測される試料を、請求項１〜３３のいずれか一項記載の抗体または抗原結合性断片と接触させ、そして抗体または抗原結合性断片およびＴＩＭ−３の複合体の形成を検出する工程を含む方法。
52. 被験体における疾患または状態を診断する方法であって、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、被験体由来の試料を、請求項１〜３３のいずれか一項記載の抗体または抗原結合性断片と接触させ、そして抗体または抗原結合性断片およびＴＩＭ−３の複合体の形成を検出する工程を含む、前記方法。
53. ＴＩＭ−３シグナル伝達の調節因子での治療のため、被験体を選択するかまたは層別化する方法であって、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、被験体由来の試料を、請求項１〜３３のいずれか一項記載の抗体または抗原結合性断片と接触させ、そして抗体または抗原結合性断片およびＴＩＭ−３の複合体の形成を検出する工程を含む、前記方法。
54. ｉｎ ｖｉｔｒｏでＴＩＭ−３を検出するための、請求項１〜３３のいずれか一項記載の抗体または抗原結合性断片の使用。
55. ｉｎ ｖｉｔｒｏ診断剤としての、請求項１〜３３のいずれか一項記載の抗体または抗原結合性断片の使用。
56. Ｔ細胞を、請求項１〜３３のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドと、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで接触させる、Ｔ細胞集団を拡大するための方法。
57. Ｔ細胞機能不全障害を有する被験体の治療法であって、Ｔ細胞集団を拡大させるように、請求項１〜３３のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドの存在下で、被験体由来の血液試料から得たＴ細胞を培養し、拡大されたＴ細胞を収集し、そして治療の必要がある被験体に、拡大されたＴ細胞を投与する工程を含む、前記方法。