JP2018521969A - 医薬用共結晶及びその用途 - Google Patents

Abstract

本発明は、カルボプラチンと１，２−シス−シクロブタンジカルボキシレートの共結晶、及びその医薬用途に関する。本発明の共結晶は、がんの治療及び／又は予防、並びにウイルス感染の治療及び／又は予防に使用されることができる。
【選択図】図１

Description

本発明は、１，２−シス−シクロブタンジカルボキシレートとカルボプラチンの共結晶及びその医薬的用途に関する。本発明の共結晶は、がん及びウイルス感染のような疾患の治療及び／又は予防に使用されることができる。

シスプラチンは、その抗腫瘍効果がシス−ジクロロジアミノプラチンに対して発見されて以来、抗腫瘍薬として臨床医学において幅広く使用されてきた（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ他，Ｎａｔｕｒｅ，１９６５，２０５：６９８；Ｎａｔｕｒｅ，１９７２，２２２：３８５）。シスプラチンは、泌尿生殖器がん、鼻咽腔がん、頭部がん、及び肺がんなどのがんにおいて治療効果を示すが、これらの薬はまた、深刻な副作用に導く。腎臓毒性、神経毒性、耳毒性、吐き気、及び嘔吐のような望ましくない作用は、シスプラチンの投与量及び長期間使用に対するかなりの制約である。

カルボプラチンは、プラチンアナログの第二世代抗腫瘍薬の一つであるが、シスプラチンと比較して低い毒性のため世界中で認められ、使用されている。不幸にも、カルボプラチンは、骨髄機能抑制のような多数の副作用をなお生じる。さらに、カルボプラチンは、限定された範囲のがんに対してのみ使用されることができる。それゆえ、毒性が少なく、小さい薬剤耐性しか起こさず、多用性を与える、経口的に活性なカルボプラチンアナログ化合物に対する探索が継続している。

医薬的な共結晶化は、新しい機能材料を作るために結晶工学での二種以上の純粋化合物の共結晶化によって多大な学術的、工業的、及び治療的関心を引き付けている。特に、医薬的な共結晶は、ターゲット分子又はイオンが活性医薬成分（ＡＰＩ）であり、かつそれが水素結合によって共結晶形成体に結合する「共結晶」として規定される（Ａｌｍａｒｓｓｏｎ Ｍ． ａｎｄ Ｚａｗｏｒｏｔｋｏ Ｊ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２００４：１８８９）。医薬的な共結晶は、ノニオン性超分子錯体であり、ＡＰＩの化学組成を変更せずに医薬開発において溶解性、安定性、及び生物学的利用能のような生理化学的な特性の問題を改良するために使用されることができる。

結果として、共結晶化技術でシスプラチン、カルボプラチン、及び他のプラチンの生理化学的及び治療的特性を改良することが望ましい。ある場合には、プラチンＡＰＩの基本構造を変える必要はないが、溶解性、安定性、透過性、及び生物学的利用能のような特性が改良されるだろう。例えば、共結晶が特定の使用環境において治療効果的であり、かつ長い時間期間にわたってレベルを維持することができるように、共結晶化でプラチンＡＰＩの生物学的利用能を有意に強めることが可能であるだろう。

カルボプラチンのために好適な共結晶形成体のスクリーニングを通して、１，２−シス−シクロブタンジカルボキシレートが、本発明において適切な共結晶形成体として見出された。それは、高められた溶解性、安定性及び生物学的利用能、及び医薬用途における多用性のような考えられる目的に効果的に合致するものである。

本発明は、カルボプラチン及び１，２−シス−シクロブタンジカルボキシレートの共結晶（以下において、その共結晶は、ＣＢＣＢＰとして言及されることができる）、及びそれを製造及び使用する方法に関する。ある実施形態では、共結晶は、以下の式（Ｉ）の構造を有する。

ある実施形態では、ＣＢＣＢＰは、（ｉ）共結晶形成体としての１，２−シス−シクロブタンジカルボキシレート；及び（ｉｉ）共結晶形成体及び活性医薬成分（ＡＰＩ）としてのカルボプラチンを含む。ＣＢＣＢＰが形成されると、そこではＡＰＩ（カルボプラチン）及び共結晶形成体１，２−シス−シクロブタンジカルボキシレートが水素結合によって一緒に結合されている。他の非共有相互作用もまた、存在しうる。

一つの側面では、本発明は、医薬用途において治療効果的であるために十分なレベルの生物学的利用能を持つカルボプラチンベースの共結晶を提供し、ある実施形態では、そのレベルは、長期間にわたって維持されることができる。

別の側面では、本発明は、医薬に使用するため、例えばがん及びウイルス感染（それらに限定されない）のような疾患の予防又は治療のためのＣＢＣＢＰに関する。ある実施形態は、ヒトのような対象におけるがん又はウイルス感染の予防又は治療のための医薬を製造する際のＣＢＣＢＰの使用に関する。ある実施形態は、ヒトのような対象におけるがん及びウイルス感染を、ＣＢＣＢＰを含む医薬組成物で予防又は治療する方法に関する。ある実施形態では、がんは、がん細胞をＣＢＣＢＰと接触することによって治療される。ある実施形態では、ウイルス感染は、感染された細胞をＣＢＣＢＰと接触することによって治療される。

一つの側面では、本発明は、カルボプラチン、１，２−シス−シクロブタンジカルボキシレート、及び少量の溶媒を微粉砕（ｍｉｌｌｉｎｇ）又は粉砕（ｇｒｉｎｄｉｎｇ）することによってＣＢＣＢＰを共結晶にする方法に関する。ある実施形態では、（ｉ）カルボプラチンと１，２−シス−シクロブタンジカルボキシレートを適当な比率で適切な溶媒中に与え、（ｉｉ）ある時間期間、その混合物をスラリー状にするか又は攪拌し、そして（ｉｉｉ）それによって形成された共結晶を単離することを含む、共結晶の製造方法が提供される。

別の側面では、本発明は、有効量のＣＢＣＢＰを含む医薬組成物、及びがん及びウイルス感染を予防又は治療するためのかかる組成物の使用に関する。ある実施形態では、医薬組成物は、追加の治療薬又はアジュバントなしでＣＢＣＢＰを含む。ある他の実施形態では、ＣＢＣＢＰを含む医薬組成物は、少なくとも一種の追加の治療薬又はアジュバントをさらに含む。例えば、治療薬又はアジュバントは、葉酸、補酵素Ｑ１０、クルクミン、グルタチオン（ＧＳＨ）、アロエ、オリザノール、５−フルオロウラシル、ボルテゾミブ、及びそれらの組み合わせを含むことができるが、それらに限定されない。

さらに別の側面では、対象に投与される医薬組成物中のＣＢＣＢＰの量は、約０．００５〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００５〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００５〜５ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００５〜２．５ｍｇ／ｋｇ体重、０．０１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０１〜５ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０１〜２．５ｍｇ／ｋｇ体重、０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．１〜５ｍｇ／ｋｇ体重、又は約０．１〜２．５ｍｇ／ｋｇ体重であることができる。ＣＢＣＢＰの好ましい量は、治療される特定の疾患、及び対象の特定の状態に依存する。

一つの側面では、本発明は、本発明の医薬組成物を対象に投与することを含む、対象の疾患をその必要性により予防又は治療することに関する。特に、疾患は、がん又はウイルス感染であることができる。

ある実施形態では、ＣＢＣＢＰは、膀胱がん、非小細胞肺がん、子宮頸がん、肛門がん、膵臓がん、頭頸部がんを含む扁平上皮がん、腎細胞がん、皮膚がん、メラノーマ、卵巣がん、小細胞肺がん、子宮内膜がん、グリア芽腫、星状細胞腫、乏突起膠腫、上皮細胞腫、神経線維肉腫、髄膜腫、消化管間質腫瘍、乳がん、肺がん、大腸がん、甲状腺がん、骨肉腫、胃がん、口腔がん、口腔咽頭がん、胃がん、腎臓がん、肝臓がん、前立腺がん、食道がん、精巣がん、婦人科がん、結腸がん、脳腫瘍、白血病（ｌｅｕｋｅｍｉａ）、リンパ腫、白血病（ｌｅｕｃｏｃｙｔｈｅｍｉａ）、及び多発性骨髄腫（それらに限定されない）のようながんを予防又は治療するために使用されることができる。特に、ＣＢＣＢＰは、前立腺がん、腎臓がん、又は白血病（ｌｅｕｃｏｃｙｔｈｅｍｉａ）を予防又は治療するために使用されることができる。

ある実施形態では、ＣＢＣＢＰは、アデノウイルス、単純ヘルペスウイルス、ヒトパピローマウイルス、ＶＩＴＡＭＩＮ Ｋ ウイルス、天然痘ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、パルボウイルスＢ１９、ヒトアストロウイルス、ノーウォークウイルス、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）、重症急性呼吸器症候群ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、黄熱病ウイルス、デングウイルス、ウエストナイルウイルス、ＴＢＥウイルス、風疹ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、インフルエンザウイルス、ラッサ熱ウイルス（ＬＡＳＶ）、クリミアコンゴ出血熱ウイルス、ハンターンウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、狂犬病ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ）、ロタウイルス、オルビウイルス、コルチウイルス、バンナウイルス（それらに限定されない）のようなウイルスによるウイルス感染を予防又は治療するために使用されることができる。ウイルス感染に対するＣＢＣＢＰの効果は、ＤＮＡ又はＲＮＡ複製プロセスを妨げるプラチン錯体の能力に関連されうる。

別の側面では、本発明による医薬組成物の投与は、目的組織が経路を介して利用可能である限り、いかなる一般的な経路を介することができる。好適な経路は、口、頬、吸入噴霧、舌下腺、直腸、経皮、膣、経粘膜、局所、鼻、腸；筋肉内、皮下、髄内、髄腔内、直接脳室内、同所性、皮内、腹腔内、静脈内、関節内、胸骨内、滑液内、肝臓内、病巣内、頭蓋内、腹腔内、鼻腔内、又は眼球内を含む非経口送出、又は他の送出方式を含むことができる。好ましい送出経路は、治療される特定の疾患、及び対象の特定の状態に依存する。

図１は、ＰＣ−３前立腺がん細胞株におけるＣＢＣＢＰ及び対照化学薬品ドセタキセルとシスプラチンのＩＣ_５０を示す。

図２は、ＬＮＣａＰ前立腺がん細胞株におけるＣＢＣＢＰ及び対照化学薬品ドセタキセルとシスプラチンのＩＣ_５０を示す。

図３は、胎児肝細胞ＨＬ−７００２におけるＣＢＣＢＰ及び対照化学薬品ドセタキセルとシスプラチンのＩＣ_５０を示す。

図４は、ヒト胎児由来腎臓細胞株ＨＥＫ２９３におけるＣＢＣＢＰ及び対照化学薬品ドセタキセルとシスプラチンのＩＣ_５０を示す。

図５は、Ａ４９８腎臓がん細胞株におけるＣＢＣＢＰ及び対照化学薬品カルボプラチン及び５−ＦＵのＩＣ_５０を示す。

図６は、ＡＣＨＮ腎臓がん細胞株におけるＣＢＣＢＰ及び対照化学薬品カルボプラチン及び５−ＦＵのＩＣ_５０を示す。

図７は、胎児肝細胞ＨＬ−７００２におけるＣＢＣＢＰ及び対照化学薬品カルボプラチン及び５−ＦＵのＩＣ_５０を示す。

図８は、ヒト胎児由来腎臓細胞株ＨＥＫ２９３におけるＣＢＣＢＰ及び対照化学薬品カルボプラチン及び５−ＦＵのＩＣ_５０を示す。

図９は、ＣＢＣＢＰの形態ＡのＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す。

図１０は、冷却乾燥によって形成されたＣＢＣＢＰ試料のＴＧＡ／ＤＳＣを示す（試料ＩＤ：８０５７０３−９９−Ｈ）。

図１１は、共結晶形成体の様々な比率（酸に対するカルボプラチンの比率）でＣＢＣＢＰの形態ＡのＸＲＰＤを示す。

図１２は、冷却乾燥によって作られたＣＢＣＢＰ試料のＸＲＰＤを示す（酸：１，２−シス−シクロブタンジカルボキシレート；８０５７０３−９９−Ａ；粗共結晶；８０５７０３−９９Ｂ：水で洗浄；８０５７０３−９９−Ｈ；エタノール／ヘプタンで洗浄）。

図１３は、ＣＢＣＢＰ試料のシミュレートされた実験（８０７６０３−２３−Ａ１）ＸＲＰＤパターンを示す。

図１４は、ＣＢＣＢＰ試料の単結晶（８０７６０４−１０−Ａ３）の画像を示す。

図１５は、ＣＢＣＢＰの化学構造を示す。

図１６は、ＣＢＣＢＰの単結晶の三次元構造を示す。

図１７は、ＣＢＣＢＰの単結晶（５０％確率）の有機化学（ＯＲＴＥＰ）図の示された用語を示す。

図１８は、ＣＢＣＢＰの単結晶の単位胞を示す。

図１９は、ＣＢＣＢＰの単結晶の水素結合を示す（Ｈ原子は明瞭のために省略される）。

図２０は、ＣＢＣＢＰの単結晶の結晶充填を示す（Ｈ原子は明瞭のために省略される）。

図２１は、ＣＢＣＢＰ試料のＳＥＭ（走査電子顕微鏡）結果を示す。

図２２は、ＣＢＣＢＰ試料のＳＥＭ結果を示す。

図２３は、ＣＢＣＢＰ試料のＳＥＭ結果を示す。

特定の実施形態の以下の記述は、本来的に例示のためだけにすぎず、いかなる点でも本発明やその適用や用途を制限することを意図しない。本明細書中、範囲は、その範囲内にあるそれぞれのかつ全ての値を記述するための簡略システムとして使用される。範囲内のいかなる値も、この範囲の境界として選択されることができる。本明細書中の定義と引用された参考文献中の定義が相反する場合は、本明細書中の定義が優先される。別途定義されない限り、本明細書中で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明の属する技術分野の当業者によって一般的に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書中で言及される全ての特許及び文献は、それらの全体を参照によって本明細書に組み入れられる。

用語「有効量」又は「治療有効量」は、意図される用途を達成する（これは、疾患を予防又は治療することを含むが、これらに限定されない）のに十分な、本明細書中に記述される化合物又は化合物の組み合わせの量を意味する。治療有効量は、意図される用途（インビトロ又はインビボ）、治療される対象及び疾患状態（例えば、対象の体重、年齢及び性別）、疾患状態の重症度、投与形態などに応じて変化することがあり得、当業者によって容易に決定されることができる。この用語はまた、標的細胞及び／又は組織において特定の反応（例えば、細胞増殖の減少及び／又は組織の形態学的変化）を誘導する用量にも当てはまる。特定の用量は、選択された特定の化合物、後に続く投与療法、化合物が他の化合物との組み合わせで投与されるかどうか、投与のタイミング、投与される組織、及び化合物が担持される物理的送達システムに応じて変化することがあり得る。

本明細書では、治療「効果」は、治療的な利益及び／又は予防的な利益を包含する。予防効果（例えば、「予防」、「防止」及び「発展の確率を減少させる」などの用語）は、疾患もしくは症状の開始の前に医薬を投与することによって、疾患もしくは症状の出現を遅延させるかもしくは排除すること、疾患もしくは症状の徴候の開始を遅延させるかもしくは排除すること、疾患もしくは症状の進行を遅くするか、中止させるか、もしくは逆転させること、又はそれらのいかなる組み合わせも含む。治療効果（例えば、「治療」及び「処置」などの用語）は、疾患もしくは症状の開始の後に医薬を投与することによって、疾患もしくは症状の出現を減少させるかもしくは排除すること、疾患もしくは症状の徴候を減少させるかもしくは排除すること、疾患もしくは症状の進行を遅くするか、中止させるか、もしくは逆転させること、又はそれらのいかなる組み合わせを含む。

本明細書では、「対象」は、ヒト又は非ヒト動物を意味する。ある実施形態では、対象は哺乳動物である。ある実施形態では、対象はヒトである。

範囲が本明細書中で例えば物理的又は化学的特性（分子量や化学式など）を記述するために使用される場合、範囲の全ての組み合わせ及び副組み合わせ、並びにその中の特定の実施形態を含むことを意図される。数値又は数値範囲に言及する場合、用語「約」は、言及される数値又は数値範囲が、実験的な変動性の範囲内の（又は統計学的な実験誤差の範囲内の）近似であることを意味する。従って、数値又は数値範囲は、変動しうる。変動は、通常、言及されている数値又は数値範囲の０％〜１５％であり、それは、０％〜１０％を含み、０％〜５％を含む。用語「含む」（及び「有する」又は「含有する」などの関連用語）は、記述された特徴「からなる」又はこれらの特徴「から本質的になる」いかなる組成物又は方法、プロセスの実施形態などの実施形態を含む。

本発明で使用される化合物は、これらの化合物の結晶形及び非結晶形も含み、例えば多形、擬似多形、溶媒和物、水和物、非溶媒和多形（無水物を含む）、配座多形、及び化合物の非結晶形、並びにそれらの混合物を含む。「結晶形」及び「多形」は、化合物の全ての結晶形及び非結晶形も含むことを意図され、特定の結晶形又は非結晶形が言及されない限り、例えば多形、擬似多形、溶媒和物、水和物、非溶媒和多形（無水物を含む）、配座多形、及び化合物の非結晶形、並びにそれらの混合物を含む。

本発明は、１，２−シス−シクロブタンジカルボキシレート及びカルボプラチンを含む共結晶に関する。ある実施形態では、本発明の共結晶は、ＣＢＣＢＰとして示され、以下の式（Ｉ）の構造を有する：

ある実施形態では、本発明の共結晶は、（ｉ）共結晶形成体としての１，２−シス−シクロブタンジカルボキシレート；及び（ｉｉ）共結晶形成体及び活性医薬成分（ＡＰＩ）としてのカルボプラチンを含む。一つの実施形態では、カルボプラチン及び１，２−シス−シクロブタンジカルボキシレートが１：１の比率で結合される。

ここで記載されるように、本発明の共結晶の固体状態は、あらゆる結晶性多形形態、又はそれらの混合物である。ある実施形態では、本発明の共結晶の固体状態は、図９のＸ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）に示されるように、形態Ａである。ある実施形態では、共結晶の固体状態は、ＸＲＰＤ分析において５．５〜７．５の主ピークを有し、それは、１，２−シス−シクロブタンジカルボキシレート又はカルボプラチンのいずれのパターンとも有意に異なる。本発明におけるＣＢＣＢＰの共結晶の形態Ａはまた、単結晶特性化及び他の決定法によって確認された。一つの実施形態では、本発明の共結晶は、表３に示されたデータと実質的に同様の特性及び構造を有する。本発明の共結晶の非晶質形態及び他の形態は、異なる結晶化工程によって得られることができる。

本発明のカルボプラチンベースの共結晶（例えばＣＢＣＢＰ）は、医薬用途において治療的に有効であるために十分なレベルの生物学的利用能を示し、長期間にわたって対象においてそのレベルを維持する。

ＣＢＣＢＰは、（ｉ）カルボプラチンと１，２−シス−シクロブタンジカルボキシレートを適当な比で適切な溶媒中に与え；（ｉｉ）その混合物をある時間期間スラリー化又は攪拌し；そして（ｉｉｉ）それによって形成された共結晶を単離することを含む方法によって製造されることができる。この方法の特定の条件は、最適な純度、品質、及び／又は生理化学特性を確保するために調整されることができる。ある実施形態では、適当な比は、１：０．１〜１：２０，１：０．２〜１：２０，１：０．３〜１：２０，１：０．４〜１：２０，１：０．５〜１：２０，１：０．６〜１：２０，１：０．７〜１：２０；１：０．８〜１：２０，１：０．９〜１：２０，１：１〜１：１．２０，１：２〜１：２０，１：３〜１：２０，１：４〜１：２０，１：５〜１：２０，１：６〜１：１８，１：７〜１：１５，１：８〜１：１３，１：９〜１：１２、又は１：１０〜１：１１のモル比である。一つの実施形態では、適当な比は、約１：１１（モル比）である。ある実施形態では、混合物をスラリー化又は攪拌するための時間期間は、０．１〜２４時間、０．２〜１２時間、０．２５〜６時間、０．３〜２時間、０．４〜１時間、又は０．５〜１時間の範囲であることができる。一つの実施形態では、混合物をスラリー化又は攪拌するための時間期間は、約０．５時間であることができる。ある実施形態では、共結晶化合物は、乾燥、濾過、遠心分離、ピペット吸引、又はそれらの組み合わせによって得られることができる。一つの実施形態では、共結晶化合物は、遠心分離によって得られることができる。

本発明は、共結晶ＣＢＣＢＰの医薬用途、及び対象の疾患をその必要において治療又は予防する方法に関する。ある実施形態では、前記方法は、ＣＢＣＢＰの治療有効量を含む医薬組成物を対象に投与することを含む。

ある実施形態では、本発明のカルボプラチンベースの共結晶（例えばＣＢＣＢＰ）は、有利な治療特性を示す。例えば、ある実施形態では、ＣＢＣＢＰは、カルボプラチン又は他の公知の薬剤と比較してがん又はウイルス感染細胞を殺すのにより有効的であることができる。他の実施形態では、ＣＢＣＢＰは、カルボプラチン又は他の公知の薬剤と比較してがん又はウイルス感染細胞を殺すのに有効性に劣るか、又は実質的に同様の効果を有することができるが、健康又は正常細胞に対する毒性が少なく、その結果、正味の健康への利益をもたらすことができる。例えば、がん細胞又はウイルス感染細胞の治療において公知のプラチンアナログと比較すると、ＣＢＣＢＰは、シスプラチン及びカルボプラチンより毒性が少なく、ずっと安定している。一つの実施形態では、ＣＢＣＢＰの有利な効果は、少ない副作用であることができる。ある実施形態では、ＣＢＣＢＰは、例えばカルボプラチンと比較して医薬用途における良好な融通性を示すことができる。

ある実施形態では、本発明のカルボプラチンベースの共結晶（例えばＣＢＣＢＰ）は、有利な生理化学特性を示す。例えば、ある実施形態では、ＣＢＣＢＰは、高い溶解性、安定性、生物学的利用能を持つことができる。例えば、カルボプラチンと比較すると、ＣＢＣＢＰは、ずっと安定しており、様々な投与量の固体形態において安定であることができる。一方、ＣＢＣＢＰの水溶解性（〜３０ｍｇ／ｍＬ）は、カルボプラチン（１８ｍｇ／ｍＬ）よりずっと高く、配合及び投与の有意に高い可能性を与える。

ある実施形態では、ＰＣ−３細胞の数を減少するためのＣＢＣＢＰのＩＣ_５０は、約１７．６１３μＭである。別の実施形態では、ＬＮＣａＰ細胞の数を減少するためのＣＢＣＢＰのＩＣ_５０は、約１９．６４６μＭである。さらに別の実施形態では、ＣＢＣＢＰは、同様条件においてシスプラチンよりずっと高いＩＣ_５０（例えば約１０倍）でＨＬ−７００２細胞に対する最小の毒性を示す。さらに別の実施形態では、ＣＢＣＢＰは、ＨＥＫ２９３細胞に対して毒性を示さない。ある実施形態では、ＣＢＣＢＰは、ＰＣ−３細胞の数を減少するための約１７．６１３μＭのＩＣ_５０、ＬＮＣａＰ細胞の数を減少するための約１９．６４６μＭのＩＣ_５０、ＨＫ−７００２細胞の数を減少するための約２０．５１μＭのＩＣ_５０、及びＨＥＫ２９３細胞に対する毒性なしを示す。

ある実施形態では、Ａ４９８細胞の数を減少するためのＣＢＣＢＰのＩＣ_５０は、約１８．３５７μＭである。別の実施形態では、ＡＣＨＮ細胞の数を減少するためのＣＢＣＢＰのＩＣ_５０は、約１１．６４７μＭである。別の実施形態では、ＣＢＣＢＰは、約３５１μＭのＩＣ_５０でＨＬ−７００２細胞に対する最小の毒性しか示さない。さらに別の実施形態では、ＣＢＣＢＰは、約１２０４μＭのＩＣ_５０でＨＥＫ２９３細胞に対して最小の毒性しか示さない。一つの実施形態では、ＣＢＣＢＰは、Ａ４９８細胞の数を減少するための約１８．３５７μＭのＩＣ_５０、ＡＣＨＮ細胞の数を減少するための約１１．６４７μＭのＩＣ_５０、及びそれぞれ約３５１μＭ及び１２０４μＭのＩＣ_５０でＨＬ−７００２及びＨＥＫ２９３細胞に対する最小の毒性を示す。

ある実施形態では、ハンターンウイルスを抑制するためのＣＢＣＢＰのＩＣ_５０は、約３３．６８４μｇ／ｍＬである。別の実施形態では、肝炎Ｂウイルス（ＨＢｓＡｇ）の表面抗原の分泌を抑制するためのＣＢＣＢＰのＩＣ_５０は、約３６．３０３μｇ／ｍｌである。さらに別の実施形態では、肝炎ウイルス蛋白質（ＨＢｅＡｇ）の外膜抗原の分泌を抑制するためのＣＢＣＢＰのＩＣ_５０は、約６７．３１１μｇ／ｍｌである。一つの実施形態では、ＣＢＣＢＰは、ハンターンウイルスを抑制するための約３３．６８４μｇ／ｍＬのＩＣ_５０、ＨＢｓＡｇの分泌を抑制するための約３６．３０３μｇ／ｍＬのＩＣ_５０、及びＨＢｅＡｇの分泌を抑制するための約６７．３１１μｇ／ｍｌのＩＣ_５０を示す。

ある実施形態では、医薬組成物は、ＣＢＣＢＰからなることができる。ある実施形態では、医薬組成物は、ＣＢＣＢＰと、少なくとも一種の追加の治療薬又はアジュバントを含むことができる。追加の治療薬又はアジュバントは、葉酸、補酵素Ｑ１０、クルクミン、グルタチオン（ＧＳＨ）、アロエ、オリザノール、５−フルオロウラシル、ボルテゾミブ、又はそれらの組み合わせから選択されることができるが、これらに限定されない。治療されるべき特定の疾患に応じて、追加の治療薬又はアジュバントは、公知の医薬を含むことができる。ある実施形態では、追加の治療薬又はアジュバントは、疾患を治療又は予防するために臨床的に既に許容されている医薬を含むことができる。

ある実施形態では、医薬組成物は、ＣＢＣＢＰと、医薬的に許容可能な担体又は賦形剤を含むことができる。「医薬的に許容可能な担体」又は「医薬的に許容可能な賦形剤」は、いかなるそして全ての溶媒、分散媒体、コーティング、抗細菌及び抗真菌剤、等張及び吸収遅延剤、及び不活性成分を含むことを意図される。活性医薬成分のためのかかる医薬的に許容可能な担体又は医薬的に許容可能な賦形剤の使用は、当該技術分野では周知である。いかなる従来の医薬的に許容可能な担体又は医薬的に許容可能な賦形剤も、活性医薬成分と適合性がない限り、本発明の治療組成物におけるその使用が想定される。他の医薬などの追加の活性医薬成分は、記述された組成物及び方法の中に組み込まれることもできる。

さらに別の側面では、対象に投与される医薬組成物中のＣＢＣＢＰの量は、約０．００５〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００５〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００５〜５ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００５〜２．５ｍｇ／ｋｇ体重、０．０１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０１〜５ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０１〜２．５ｍｇ／ｋｇ体重、０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．１〜５ｍｇ／ｋｇ体重、又は約０．１〜２．５ｍｇ／ｋｇ体重である。ＣＢＣＢＰの量は、特に治療される特定の疾患、及び対象の特定の状態に依存する。

さらに別の側面では、ＣＢＣＢＰを含む医薬組成物の投与は、少なくとも１，２，３，４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，２１，２８，３５，４２，４９，５６，６３，７０，７７，８４，９１、又は９８日間続くことができる。一つの実施形態では、ＣＢＣＢＰを含む医薬組成物の投与は、少なくとも一週間続くことができる。一つの実施形態では、ＣＢＣＢＰを含む医薬組成物の投与は、少なくとも二週間続くことができる。投与期間は、治療される特定の疾患、及び対象の特定の状態に依存する。

本発明は、様々な側面及び実施形態において、様々な疾患を予防又は治療するためのＣＢＣＢＰの使用、及びＣＢＣＢＰを含む医薬組成物を投与することによってこれらの疾患を予防又は治療するための方法を含む。治療又は予防される疾患は、がん及びウイルス感染を含むが、これらに限定されない。

ある実施形態では、疾患は、がんである。ある実施形態では、がんは、膀胱がん、非小細胞肺がん、子宮頸がん、肛門がん、膵臓がん、頭頸部がんを含む扁平上皮がん、腎細胞がん、皮膚がん、メラノーマ、卵巣がん、小細胞肺がん、子宮内膜がん、グリア芽腫、星状細胞腫、乏突起膠腫、上皮細胞腫、神経線維肉腫、髄膜腫、消化管間質腫瘍、乳がん、肺がん、大腸がん、甲状腺がん、骨肉腫、胃がん、口腔がん、口腔咽頭がん、胃がん、腎臓がん、肝臓がん、前立腺がん、食道がん、精巣がん、婦人科がん、結腸がん、脳腫瘍、白血病（ｌｅｕｋｅｍｉａ）、リンパ腫、白血病（ｌｅｕｃｏｃｙｔｈｅｍｉａ）、及び多発性骨髄腫から選択される。

ある実施形態では、ＣＢＣＢＰを含む医薬組成物は、前立腺がん、腎臓がん、又は白血病（ｌｅｕｃｏｃｙｔｈｅｍｉａ）を予防又は治療するために使用されることができる。一つの実施形態では、がんを予防又は治療するためのＣＢＣＢＰの治療有効量は、約０．０１〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態では、がんを予防又は治療するためのＣＢＣＢＰの治療有効量は、約０．０１〜約５ｍｇ／ｋｇ体重である。

ある実施形態では、疾患は、ウイルス感染である。ある実施形態では、ウイルスは、ＤＮＡウイルス又はＲＮＡウイルスである。例えば、ある実施形態では、ウイルスは、アデノウイルス、単純ヘルペスウイルス、ヒトパピローマウイルス、ＶＩＴＡＭＩＮ Ｋ ウイルス、天然痘ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、パルボウイルスＢ１９のようなＤＮＡウイルスであることができるが、これらに限定されない。他の実施形態では、ウイルスは、ヒトアストロウイルス、ノーウォークウイルス、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）、重症急性呼吸器症候群ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、黄熱病ウイルス、デングウイルス、ウエストナイルウイルス、ＴＢＥウイルス、風疹ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、インフルエンザウイルス、ラッサ熱ウイルス（ＬＡＳＶ）、クリミアコンゴ出血熱ウイルス、ハンターンウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、狂犬病ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ）、ロタウイルス、オルビウイルス、コルチウイルス、バンナウイルスのようなＲＮＡウイルスであることができるが、これらに限定されない。

ある実施形態では、ＣＢＣＢＰを含む医薬組成物は、ＨＢＶ，ＨＣＶ，ＨＩＶ、又はハンターンウイルスによって起こされるウイルス感染を予防又は治療するために使用されることができる。一つの実施形態では、ウイルス感染を予防又は治療するためのＣＢＣＢＰの治療有効量は、約０．０１〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態では、がんを予防又は治療するためのＣＢＣＢＰの治療有効量は、約０．０１〜約５ｍｇ／ｋｇ体重である。

ある実施形態では、本発明は、必要性のある対象における前立腺がん、腎臓がん、又は白血病の徴候を治療、予防、減少又は緩和するか、及び／又は前立腺がん、腎臓がん、又は白血病の進行を遅延させるかもしくは中止させる方法を提供し、前記方法は、ＣＢＣＢＰを含む医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む。一つの実施形態では、医薬組成物は、ＣＢＣＢＰからなる。ある実施形態では、医薬組成物は、少なくとも一種の追加の治療薬又はアジュバントをさらに含む。特定の実施形態では、追加の治療薬又はアジュバントは、葉酸、補酵素Ｑ１０、クルクミン、グルタチオン（ＧＳＨ）、アロエ、オリザノール、５−フルオロウラシル、及びボルテゾミブから選択されることができる。一つの実施形態では、医薬組成物は、ＣＢＣＢＰと、医薬的に許容可能な担体又は賦形剤を含む。

ある実施形態では、本発明は、必要性のある対象におけるＨＢＶ，ＨＣＶ，ＨＩＶ、又はハンターンウイルスによって起こされるウイルス感染の徴候を治療、予防、減少又は緩和するか、及び／又はＨＢＶ，ＨＣＶ，ＨＩＶ、又はハンターンウイルスによって起こされるウイルス感染の進行を遅延させるかもしくは中止させる方法を提供し、前記方法は、ＣＢＣＢＰを含む医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む。一つの実施形態では、医薬組成物は、ＣＢＣＢＰからなる。ある実施形態では、医薬組成物は、少なくとも一種の追加の治療薬又はアジュバントをさらに含む。一実施形態では、追加の治療薬又はアジュバントは、葉酸、補酵素Ｑ１０、クルクミン、グルタチオン（ＧＳＨ）、アロエ、オリザノール、５−フルオロウラシル、及びボルテゾミブから選択されることができる。ある実施形態では、医薬組成物は、ＣＢＣＢＰと、医薬的に許容可能な担体又は賦形剤を含む。

ある実施形態では、前立腺がん、腎臓がん、又は白血病の予防又は治療のために、ＣＢＣＢＰを含む医薬組成物は、点滴、注射によって、又は経口ルートで投与される。ある実施形態では、前立腺がん、腎臓がん、又は白血病の予防又は治療のために、ＣＢＣＢＰを含む医薬組成物は、少なくとも１，２、又は３週間投与される。

ある実施形態では、ＨＢＶ，ＨＣＶ，ＨＩＶ、又はハンターンウイルスによって起こされるウイルス感染の予防又は治療のために、ＣＢＣＢＰを含む医薬組成物は、点滴、注射によって、又は経口ルートで投与される。一つの実施形態では、ＨＢＶ，ＨＣＶ，ＨＩＶ、又はハンターンウイルスによって起こされるウイルス感染の予防又は治療のために、ＣＢＣＢＰを含む医薬組成物は、少なくとも１，２、又は３週間投与される。

以下の実施例は、本発明の様々な実施形態を示し、本発明の範囲を制限することを意図されない。

特定の疾患に対するＣＢＣＢＰの効果は、インビボ及びインビトロ研究から得られた結果によって証明されることができる。さらに、ＣＢＣＢＰの製造方法及びＣＢＣＢＰの生理化学特性もまた、記載される。

前立腺がん細胞に対するＣＢＣＢＰの効果
共結晶ＣＢＣＢＰは、ドセタキセル（前立腺がん患者を治療する際に広く使用される薬剤）と比較して前立腺がんの治療において試験された。

ＰＣ−３細胞は、骨への転移を有する進行した前立腺がん患者由来の細胞株であり、前立腺小細胞がんのような前立腺がんの特徴を持つ。ＰＣ−３細胞は、段階的な濃度の薬剤（ＣＢＣＢＰ、ドセタキセル、又はシスプラチン）で処理され、細胞生存性が、Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．からのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６ ＡＱｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙで評価された。細胞増殖抑制率の指数が、陰性対照に対する治療群のＯＤ４９０データを比較することによって得られた。薬剤反応率ＩＣ_５０がＳＰＳＳ １６．０システムで計算された。結果は、図１に示される。

ＣＢＣＢＰは、ドセタキセルと比較すると細胞の数を減少する優れた効果を示した。特に、ＣＢＣＢＰのＩＣ_５０は、１７．６１３μＭであったが、ドセタキセル及びシスプラチンのＩＣ_５０は、それぞれ４９．９２４μＭ及び２．４８９μＭであった（図１）。

ＬＮＣａＰ細胞は、リンパ節転移を有する進行した前立腺がん患者由来の細胞株である。ＬＮＣａＰ細胞は、段階的な濃度の薬剤（ＣＢＣＢＰ、ドセタキセル、又はシスプラチン）で処理され、細胞生存性が、Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．からのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６ ＡＱｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙで評価された。細胞増殖抑制率の指数が、陰性対照に対する治療群のＯＤ４９０データを比較することによって得られた。薬剤反応率ＩＣ_５０がＳＰＳＳ １６．０システムで計算された。結果は、図２に示される。

ＬＮＣａＰ細胞に対して、ＣＢＣＢＰのＩＣ_５０は、１９．６４６μＭであり、ドセタキセル及びシスプラチンのＩＣ_５０は、それぞれ４．０３４μＭ及び２．２４５μＭであった（図２）。

ＨＬ−７００２細胞は、不死化ヒト胎児肝細胞株である。ＨＬ−７００２細胞は、段階的な濃度の薬剤（ＣＢＣＢＰ、ドセタキセル、又はシスプラチン）で処理され、細胞生存性が、Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ、米国）からのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６ ＡＱｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙで評価された。細胞増殖抑制率の指数が、陰性対照に対する治療群のＯＤ４９０データを比較することによって得られた。薬剤反応率ＩＣ_５０がＳＰＳＳ １６．０システムで計算された。結果は、図３に示される。

ＨＬ−７００２細胞に対して、ＣＢＣＢＰは、最小の毒性（同様の条件でドセタキセルの約１／２１６及びシスプラチンの約１／１０）を持つことが検出された。ＣＢＣＢＰのＩＣ_５０は、２０．５１μＭであり、ドセタキセル及びシスプラチンのＩＣ_５０は、それぞれ０．０９５μＭ及び２．００８μＭであった（図３）。

ＨＥＫ２９３細胞は、不死化ヒト胎児腎臓細胞株である。ＨＥＫ２９３細胞は、段階的な濃度の薬剤（ＣＢＣＢＰ、ドセタキセル、又はシスプラチン）で処理され、細胞生存性が、Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．からのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６ ＡＱｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙで評価された。細胞増殖抑制率の指数が、陰性対照に対する治療群のＯＤ４９０データを比較することによって得られた。薬剤反応率ＩＣ_５０がＳＰＳＳ １６．０システムで計算された。結果は、図４に示される。

ＨＥＫ２９３に対して、ＣＢＣＢＰの毒性は、検出されなかったが、ドセタキセル及びシスプラチンは、強い毒性を示した。ドセタキセル及びシスプラチンのＩＣ_５０は、それぞれ１．７４１μＭ及び６．８９９μＭであった（図４）。

方法：
細胞培養：前立腺がん細胞株ＬＮＣａＰ及びＰＣ−３は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から購入された。胎児肝細胞ＨＬ−７００２及びヒト胚腎臓細胞ＨＥＫ３９３は、ＡＴＣＣから購入された。細胞は、ＲＰＭＩ＋５％胎児ウシ血清（ＦＢＳ）で培養された。

薬剤治療及び細胞生存性（ＭＴＳ）分析：細胞（１０^５／１００ｍＬ／ウエル）は、９６ウエルプレートで培養され、０．０１〜３００μＭの段階的な濃度で薬剤（例えばＣＢＣＢＰ）で処理された。溶媒で処理された細胞は、陰性対照として使用され、シスプラチン及びドセタキセルは、陽性対照として使用された。細胞は、毎日監視され、細胞生存性は、製造者の指示に従ってＰｒｏｍｅｇａ ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６ ＡＱｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙで評価された。細胞生存性は、バイオスペクトロメータ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で読むＯＤ４９０で監視された。

データ分析：ＯＤ４９０読み取りデータは、溶菌緩衝液の添加後の１時間から４時間で毎時間収集された。細胞増殖抑制率の指数が、陰性対照に対する治療群のＯＤ４９０データを比較することによって得られた。薬剤反応率ＩＣ_５０がＳＰＳＳ １６．０システムで計算された。

腎臓がん細胞に対するＣＢＣＢＰの効果
共結晶ＣＢＣＢＰは、フルオロウラシル（５−ＦＵ）（腎臓がん患者を治療する際に広く使用される薬剤）と比較して腎臓がんの治療で試験された。

Ａ４９８細胞は、腎臓がん細胞株である。Ａ４９８細胞は、段階的な濃度で薬剤（ＣＢＣＢＰ，５−ＦＵ、又はシスプラチン）で処理され、細胞生存性は、Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．からのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６ ＡＱｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙで評価された。細胞増殖抑制率の指数が、陰性対照に対する治療群のＯＤ_４９０データを比較することによって得られた。薬剤反応率ＩＣ_５０がＳＰＳＳ １６．０システムで計算された。結果は、図５に示される。

Ａ４９８細胞に対して、ＣＢＣＢＰによる細胞の数を減少する効果は、５−ＦＵと同等である。ＣＢＣＢＰのＩＣ_５０は、１８．３５７μＭであり、カルボプラチン及び５−ＦＵのＩＣ_５０は、それぞれ１４．６５６μＭ及び１８．１６４μＭであった（図５）。

ＡＣＨＮ細胞は、腎臓がん細胞株である。ＡＣＨＮ細胞は、段階的な濃度で薬剤（ＣＢＣＢＰ，５−ＦＵ、又はシスプラチン）で処理され、細胞生存性は、Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．からのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６ ＡＱｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙで評価された。細胞増殖抑制率の指数が、陰性対照に対する治療群のＯＤ_４９０データを比較することによって得られた。薬剤反応率ＩＣ_５０がＳＰＳＳ １６．０システムで計算された。結果は、図６に示される。

ＡＣＨＮ細胞に対して、ＣＢＣＢＰによる細胞の数を減少する効果は、カルボプラチンと同等である。ＣＢＣＢＰのＩＣ_５０は、１１．６４７μＭであり、カルボプラチン及び５−ＦＵのＩＣ_５０は、それぞれ１１．０３４μＭ及び６．４５４μＭであった（図６）。

ＨＬ−７００２肝細胞株細胞は、段階的な濃度の薬剤（ＣＢＣＢＰ，５−ＦＵ、又はシスプラチン）で処理され、細胞生存性は、Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．からのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６ ＡＱｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙで評価された。細胞増殖抑制率の指数が、陰性対照に対する治療群のＯＤ_４９０データを比較することによって得られた。薬剤反応率ＩＣ_５０がＳＰＳＳ １６．０システムで計算された。結果は、図７に示される。

ＨＬ−７００２細胞に対して、ＣＢＣＢＰの最小の毒性しか検出されなかった。同様の条件では、ＣＢＣＢＰの毒性は、カルボプラチンのそれの約１／１０であり、５−ＦＵのそれの約１／８であった。ＣＢＣＢＰのＩＣ_５０は、３５１μＭであり、カルボプラチン及び５−ＦＵのＩＣ_５０は、それぞれ３４μＭ及び４５μＭであった（図７）。

ＨＥＫ２９３腎臓細胞株細胞は、段階的な濃度の薬剤（ＣＢＣＢＰ，５−ＦＵ、又はシスプラチン）で処理され、細胞生存性は、Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．からのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６ ＡＱｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙで評価された。細胞増殖抑制率の指数が、陰性対照に対する治療群のＯＤ_４９０データを比較することによって得られた。薬剤反応率ＩＣ_５０がＳＰＳＳ １６．０システムで計算された。結果は、図８に示される。

ＨＥＫ２９３に対して、ＣＢＣＢＰの最小の毒性しか検出されなかった。同様の条件では、ＣＢＣＢＰの毒性は、カルボプラチンのそれの約１／５であり、５−ＦＵのそれの約１／４であった。ＣＢＣＢＰのＩＣ_５０は、１２０４μＭであり、カルボプラチン及び５−ＦＵのＩＣ_５０は、それぞれ２３７μＭ及び３５６μＭであった（図８）。

方法：
細胞培養：腎臓がん細胞株Ａ４９８及びＡＣＨＮは、Ｔｏｎｇｍａｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ （中国、上海）から購入された。胎児肝細胞ＨＬ−７００２及びヒト胚腎臓細胞ＨＥＫ３９３は、ＡＴＣＣから購入された。細胞は、ＲＰＭＩ＋５％胎児ウシ血清（ＦＢＳ）で培養された。

薬剤治療及び細胞生存性（ＭＴＳ）分析：細胞（１０^５／１００ｍＬ／ウエル）は、９６ウエルプレートで培養され、０．０１〜３００μＭの段階的な濃度で薬剤（例えばＣＢＣＢＰ）で処理された。溶媒で処理された細胞は、陰性対照として使用され、カルボプラチン及び５−ＦＵは、陽性対照として使用された。細胞は、毎日監視され、細胞生存性は、製造者の指示に従ってＰｒｏｍｅｇａ ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６ ＡＱｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）で評価された。細胞生存性は、バイオスペクトロメータ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で読むＯＤ４９０で監視された。

データ分析：ＯＤ４９０読み取りデータは、溶菌緩衝液の添加後の１時間から４時間で毎時間収集された。細胞増殖抑制率の指数が、陰性対照に対する治療群のＯＤ４９０データを比較することによって得られた。薬剤反応率ＩＣ_５０がＳＰＳＳ １６．０システムで計算された。

ウイルス感染に対するＣＢＣＢＰの効果
ＣＢＣＢＰは、ＤＮＡウイルス、ＲＮＡウイルス、及びレトロウイルスでの感染を減少するために効果的である。ハンターンウイルス（ＨＴＮＶ）及びＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）に対するＣＢＣＢＰの効果が調査された。ＣＢＣＢＰは、正常細胞に対する低い毒性及び抗ウイルス剤としての適度な活性を示すことを見出した。予備的な研究は、追加の治療薬又はアジュバントが活性を促進しかつ毒性を低下する際に必須であり、追加の治療薬又はアジュバントが葉酸、補酵素Ｑ１０、クルクミン、グルタチオン（ＧＳＨ）、アロエ、オリザノール、５−フルオロウラシル、ボルテゾミブ、又はそれらの組み合わせであることができることを示した。

ＶｅｒｏＥ６細胞に対するＣＢＣＢＰの抗ＨＴＮＶ効果
ＨＴＮＶに感染したＶｅｒｏＥ６は、ＣＢＣＢＰで処理された。感染細胞の百分率割合は、各視野における全ての細胞とウイルス感染細胞を比較することによって計算され、ＩＣ_５０は、回帰式に従って計算された。ＣＢＣＢＰのＩＣ_５０は、３３．６８４μｇ／ｍｌである。結果は、表１に示される。

ＶｅｒｏＥ６細胞に対するＣＢＣＢＰのＩＣ_５０は、三つの化学薬品の細胞毒性及び抗ＨＮＴＶの効果と比較することによって５８．３６７μｇ／ｍＬである。全ての試験された化学薬品は、用量と効果の関係で有意な抗ＨＮＴＶ効果を示した。

ＨｅｐＧ２．２．１５細胞によって分泌されたＨＢＶ抗原に対するＣＢＣＢＰの効果
化学処理されたＨｅｐＧ２．２．１５細胞におけるＨｂｓＡｇ及びＨｂｅＡｇのレベルは、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）によって検出された。表２に示されるように、ＨｅｐＧ２．２．１５細胞によって分泌されたＨＢｓＡｇレベルに対するＣＢＣＢＰの効果は、ＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇに対する抑制を示した。

ＣＢＣＢＰの製造
ＣＢＣＢＰは、共結晶形成体としてのカルボプラチン及び１，２−シスシクロブタンジカルボキシレートから形成された。包括的な共結晶スクリーニングは、スラリー／攪拌、加熱及び冷却、回転式蒸発、凍結乾燥、冷却、及び蒸発によって実施された。一つの共結晶が得られ、共結晶形態Ａと名付けられた。

単結晶構造分析によれば、ＣＢＣＢＰは、１：１のモル比のカルボプラチンとシス−シクロブタン−１，２−ジカルボン酸からなる。結果として、共結晶が製造され、その構造は、形態Ａとして示された。一方、その単結晶が得られ、特徴づけられた。形態Ａは、Ｘ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）（図９）、熱重量分析（ＴＧＡ）、及び示差走査熱量測定（ＤＳＣ）（図１０）によって特徴づけられた。単結晶の分析は、形態Ａが１：１の比のカルボプラチンと１，２−シス−シクロブタンジカルボキシレートの共結晶であることを示した。形態ＡのＸＲＰＤは、図９に示される。ＴＧＡは、１５０℃に加熱するとき、重量損失が６．４％であることを示し、一方ＤＳＣは、４６．４℃及び１７４．５℃で明らかな吸収を示した。

冷却及び凍結乾燥法は、共結晶形態Ａを製造するためにスケールアップされた。出発材料のモル比及びリンス法は、最適化された。数百ミリグラムの共結晶が得られた。

図１１に示されるように、異なる比率の共結晶形成体は、異なる品質の形態Ａの形成に導く（方法Ａ）。カルボプラチンと１，２−シス−シクロブタンジカルボキシレートの好ましい比は、１：１１である。ＣＢＣＢＰが冷却乾燥法（方法Ｂ）によって製造されたとき、水及びエタノール／ヘプタンでの洗浄は、高品質共結晶を得るために重要である。

特に、ＣＢＣＢＰは、方法Ａで製造された：１２０．０ｍｇのカルボプラチン、５１２．４ｍｇの１，２−シス−シクロブタンジカルボキシレート、及び０．５ｍＬの蒸留水を約３０℃で０．５時間攪拌し、次いで得られた溶液を５℃で一晩冷却し、混合物を遠心分離で処理し、約３０ｍｇの結晶化合物を得た。収率は、約１８％であった。

得られた生成物をＸＲＰＤ，ＤＳＣ／ＴＧＡ、及びプロトン核磁気共鳴（Ｈ−ＮＭＲ）によって分析した。さらに、得られたＣＢＣＢＰを走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）で観察した（図２１、図２２、及び図２３）。

ＣＢＣＢＰはまた、方法Ｂで製造された：５５５．８ｍｇのカルボプラチン、４９４ｍｇの１，２−シス−シクロブタンジカルボキシレート、及び０．１ｍＬの蒸留水を約３０℃で０．５時間攪拌し、次いで得られた溶液を０．４５μｍフィルターで濾過し、溶液を冷却によって乾燥した。冷却乾燥の結果として、約７７０ｍｇの粗共結晶を得た。粗結晶をエタノール及びヘプタンで処理し、４４８ｍｇの純結晶を得、５℃で一晩冷却した。得られた化合物をＸＲＰＤ，ＤＳＣ／ＴＧＡ，Ｈ−ＮＭＲ、及びＳＥＭによって分析し、この化合物が方法Ａの得られた生成物と同じであることを見出した。

ＣＢＣＢＰの特性決定
単結晶形態の分析は、ＣＢＣＢＰの化学構造を明らかにした。図１５及び図１６に示されるように、１：１の比のカルボプラチンと１，２−シス−シクロブタンジカルボキシレートが共結晶中に存在することが明らかになった。

ＣＢＣＢＰの好適な単結晶は、播種で４℃の水における遅い蒸発によって得られた。これらの単結晶の一つを使用して構造決定が実施され、結果は、図１７、図１８、図１９、及び図２０に示される。構造は、１：１の共結晶を確認した。シクロブタン−１，２−ジカルボン酸は、シス異性体である。カルボプラチン及びシス−シクロブタン−１，２−ジカルボン酸は、水素結合に関与する（Ｎ−Ｈ・・・Ｏ，Ｏ−Ｈ・・・Ｏ、及びＯ−Ｈ・・・Ｎ）。結晶ａｂ面に沿った二次元構造は、分子間水素結合によって形成される。

カルボプラチンシス−シクロブタン−１，２−ジカルボン酸共結晶の結晶構造は、単結晶（８０７６０４−１０−Ａ３）から収集された一組の回折データを使用してうまく決定された。結晶データ及び構造精密化は、表３に示される。

ＣＢＣＢＰの絶対構造は、図１５に示される。図１６は、ＣＢＣＢＰの分子構造を示す。シクロブタン−１，２−ジカルボン酸は、シス構造（図１６）であることが確認された。結晶構造のＯＲＴＥＰ図は、図１７に示される。一つの酸素原子は、二つの位置（Ｏ５及びＯ５′）で０．５対０．５の比で秩序を乱されている。結晶構造は、図１８に示される一つの単位において四つのカルボプラチン及び四つのシス−シクロブタン−１，２−ジカルボン酸分子を有する１：１共結晶を確認した。

構造において、カルボプラチン及びシス−シクロブタン−１，２−ジカルボン酸は、水素結合に関与する（Ｎ−Ｈ・・・Ｏ，Ｏ−Ｈ・・・Ｏ、及びＯ−Ｈ・・・Ｎ）。水素結合相互作用は、図１９に示される。結晶ａｂ面に沿った二次元構造は、図２０に示される結晶充填によって示されるように分子間水素結合を通して形成される。単結晶構造から計算された理論的ＸＲＰＤパターンは、図１３に示されるように実験のもの（８０７６０３−２３−Ａ１）と良く一致する。

分析方法
Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）：偏光顕微鏡写真は、室温（ＲＴ）で撮影された。Ｘ線強度データは、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＰＥＸ ＩＩ ＣＣＤ回折計（ＭｏＫα放射線、λ＝０．７１０７３Å）を使用して２９６（２）Ｋで収集された。ＸＲＰＤパターンは、ＲＴでＰａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｅｍｐｙｒｅａｎシステムによって収集された。Ｆ２に対して直接法構造解、差分フーリエ計算、及び完全行列最小二乗精密化が、ＳＨＥＬＸＴＬ及びＯＬＥＸ２で実施された（Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ Ａ，６４：１１２−１２２，２００８；及びＤｏｌｏｍａｎｏｖ，Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔ．４２，３３９−３４１，２００９；及びＢｒａｎｄｅｎｂｕｒｇ，ＤＩＡＭＯＮＤ，１９９９，Ｃｒｙｓｔａｌ Ｉｍｐａｃｔ ＧｂＲ，Ｂｏｎｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ参照）。分子グラフィックスは、Ｂｒａｎｄｅｎｂｕｒｇ，Ｋ．ＤＩＡＭＯＮＤ，１９９９，Ｃｒｙｓｔａｌ Ｉｍｐａｃｔ ＧｂＲ，Ｂｏｎｎ，Ｇｅｒｍａｎｙに従って作られた。

分析機器：Ｐａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｅｍｐｙｒｅａｎ。Ｘ線粉末回折は、結晶材料のサンプルをＳｉ単結晶低バックグラウンドホルダー上に装着して、顕微鏡スライドの助けを借りてサンプルを薄層に広げることによって行なわれた。２θ位置は、Ｐａｎａｌｙｔｉｃａｌ ６４０ Ｓｉ粉末標準に対して校正された。４５ｋＶ及び４０ｍＡで作動する銅の長精密焦点管によって生成されたＸ線でサンプルは照射された。Ｋα１の波長は１．５４０５８９オングストロームであり、Ｋα２の波長は、１．５４４４２６オングストロームであった（Ｋα２／Ｋα１の強度比は、０．５０）。視準されたＸ線源は、プログラムされた１０ｍｍの発散スリットの組を通過させられ、反射された放射線は、５．５ｍｍの散乱防止スリットを通して指向された。サンプルは、シータ−シータモードで３°〜４０°の２シータの範囲にわたって０．０１３°の２シータ増分あたり１６．３秒間露光された（連続走査モード）。作動時間は、３分５７秒であった。機器は、ＲＴＭＳ検出器（Ｘ′Ｃｅｌｅｒａｔｏｒ）を備えていた。制御及びデータ取得は、データ収集ソフトウェアを使用して作動するＤｅｌｌ Ｏｐｔｉｐｌｅｘ ７８０ ＸＰによって行なわれた。

Ｘ線粉末回折の業界の熟練者は、ピークの相対強度が、例えば３０ミクロンより上の大きさの粒子によって影響を受けることがあること、及び非一元アスペクト比は、サンプルの分析に影響を与えることがあることを認識するだろう。また、Ｘ線粉末回折の業界の熟練者は、反射の位置が、サンプルが回折計中に位置する正確な高さ、及び回折計のゼロ校正によって影響を受けることがあることも認識するだろう。サンプルの表面平滑性も、限定された影響を有することがある。従って、示される回折パターンのデータは、絶対値に限定されることを意図されない。

示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
ＤＳＣは、サンプルの温度を上昇させるために必要な熱の量の差を測定するための熱分析方法として使用された。参照は、温度の関数として測定された。ＤＳＣの一般的なプロセスは、公知である。以下の実施例で使用された特定の機器及び条件は、以下の通りである：
分析機器：ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｑ２０００ ＤＳＣ；
加熱速度：１０℃／分；及び
パージガス：窒素。

５．３ 熱重量分析（ＴＧＡ）
ＴＧＡは、（一定の加熱速度での）上昇する温度の関数としての、又は（一定の温度及び／又は一定の質量損失での）時間の関数としての、サンプルの物理的及び化学的特性の変化を測定するために使用された。ＴＧＡの一般的なプロセスは、公知である。以下の実施例で使用された特定の機器及び条件は、以下の通りである：
分析機器：ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｑ５０００ ＴＧＡ；
加熱速度：１０℃／分；及び
パージガス：窒素。

ＣＢＣＢＰを含むサンプル医薬組成物及び投与
本発明の水性又は固体医薬組成物は、少なくとも一種の追加の治療薬又はアジュバントの適切な量を有して又は有さずに、有効量のＣＢＣＢＰを含む。ＣＢＣＢＰ、並びに治療薬又はアジュバントは、医薬的に許容可能な担体又は水性媒体中に溶解又は分散されることができる。

治療される特定のがんに依存して、本発明による医薬組成物の投与は、ターゲット組織に経路を介して到達できる限りいかなる一般的な経路を介することができる。例えば、医薬組成物は、点滴、注射、又は経口経路によって投与されることができる。

多数の医薬組成物が製造された：
医薬組成物サンプルＡ：７０ｇのＣＢＣＢＰを予め処理された生理食塩水又は５％の水性グルコース（水中）に溶解し、溶液の最終体積を５．０Ｌに調整した。次いで、溶液を０．２２μｍフィルターで濾過し、アンプル瓶にそれぞれ５０ｍＬで分散した。

医薬組成物サンプルＢ：７０ｇのＣＢＣＢＰ及び２０ｇのグルタチオン（ＧＳＨ）を予め処理された生理食塩水又は５％の水性グルコース（水中）に溶解し、溶液の最終体積を５．０Ｌに調整した。次いで、溶液を０．２２μｍフィルターで濾過し、アンプル瓶にそれぞれ５０ｍＬで分散した。

医薬組成物サンプルＣ：７０ｇのＣＢＣＢＰ、２０ｇのグルタチオン（ＧＳＨ）、１４００ｇのクルクミン、及び２０ｇの補酵素Ｑ１０を均一に混合した。混合物を均一に１４０００個のカプセルに分配した。

Claims (36)

1. １，２−シス−シクロブタンジカルボキシレート及びカルボプラチンを含む共結晶。
2. 以下の式（Ｉ）の構造を有する、請求項１に記載の共結晶：
   
3. 以下のものを含む、請求項１に記載の共結晶：
   （ｉ）共結晶形成体としての１，２−シス−シクロブタンジカルボキシレート；及び
   （ｉｉ）共結晶形成体及び活性医薬成分（ＡＰＩ）としてのカルボプラチン。
4. カルボプラチンと１，２−シス−シクロブタンジカルボキシレートが１：１の比で結合される、請求項１に記載の共結晶。
5. 共結晶の固体状態があらゆる結晶性多形形態である、請求項１〜４のいずれかに記載の共結晶。
6. 共結晶の固体状態が形態Ａである、請求項１〜５のいずれかに記載の共結晶。
7. 共結晶が図９に示されるＸＲＤＰを有する、請求項１〜６のいずれかに記載の共結晶。
8. 共結晶の固体状態が非晶質形態に作られている、請求項１〜４のいずれかに記載の共結晶。
9. 共結晶が、ＰＣ−３細胞の数を減少するための約１７．６１３μＭのＩＣ_５０、ＬＮＣａＰ細胞の数を減少するための約１９．６４６μＭのＩＣ_５０、ＨＬ−７００２細胞の数を減少するための同条件のシスプラチンより約１０倍を超えて高いＩＣ_５０、又はＨＥＫ２９３細胞に対する無毒性を有する、請求項１〜８のいずれかに記載の共結晶。
10. 共結晶が、ＰＣ−３細胞の数を減少するための約１７．６１３μＭのＩＣ_５０、ＬＮＣａＰ細胞の数を減少するための約１９．６４６μＭのＩＣ_５０、ＨＬ−７００２細胞の数を減少するための同条件のシスプラチンより約１０倍を超えて高いＩＣ_５０、及びＨＥＫ２９３細胞に対する無毒性を有する、請求項１〜８のいずれかに記載の共結晶。
11. 共結晶が、Ａ４９８細胞の数を減少するための約１８．３５７μＭのＩＣ_５０、ＡＣＨＮ細胞の数を減少するための約１１．６４７μＭのＩＣ_５０、ＨＬ−７００２細胞の数を減少するための約３５１μＭのＩＣ_５０、又はＨＥＫ２９３細胞の数を減少するための約１２０４μＭのＩＣ_５０を有する、請求項１〜８のいずれかに記載の共結晶。
12. 共結晶が、Ａ４９８細胞の数を減少するための約１８．３５７μＭのＩＣ_５０、ＡＣＨＮ細胞の数を減少するための約１１．６４７μＭのＩＣ_５０、ＨＬ−７００２細胞の数を減少するための約３５１μＭのＩＣ_５０、及びＨＥＫ２９３細胞の数を減少するための約１２０４μＭのＩＣ_５０を有する、請求項１〜８のいずれかに記載の共結晶。
13. 共結晶が、ハンターンウイルスを抑制するための約３３．６８４μｇ／ｍＬのＩＣ_５０、ＨＢｓＡｇの分泌を抑制するための約３６．３０３μｇ／ｍＬのＩＣ_５０、又はＨＢｅＡｇの分泌を抑制するための約６７．３１１μｇ／ｍｌのＩＣ_５０を有する、請求項１〜７のいずれかに記載の共結晶。
14. 共結晶が、ハンターンウイルスを抑制するための約３３．６８４μｇ／ｍＬのＩＣ_５０、ＨＢｓＡｇの分泌を抑制するための約３６．３０３μｇ／ｍＬのＩＣ_５０、及びＨＢｅＡｇの分泌を抑制するための約６７．３１１μｇ／ｍｌのＩＣ_５０を有する、請求項１〜７のいずれかに記載の共結晶。
15. 請求項１〜１４のいずれかに記載の共結晶を含む医薬組成物。
16. 少なくとも一種の治療薬又はアジュバントをさらに含む、請求項１５に記載の医薬組成物。
17. 治療薬又はアジュバントが、葉酸、補酵素Ｑ１０、クルクミン、グルタチオン（ＧＳＨ）、アロエ、オリザノール、５−フルオロウラシル、及びボルテゾミブからなる群から選択される、請求項１６に記載の医薬組成物。
18. 対象の疾患をその必要において治療する方法であって、その方法が、請求項１５〜１７のいずれかに記載の医薬組成物を対象に投与することを含み、共結晶が、医薬組成物中に治療有効量で存在する、方法。
19. 疾患ががんである、請求項１８に記載の方法。
20. がんが、膀胱がん、非小細胞肺がん、子宮頸がん、肛門がん、膵臓がん、頭頸部がんを含む扁平上皮がん、腎細胞がん、皮膚がん、メラノーマ、卵巣がん、小細胞肺がん、子宮内膜がん、グリア芽腫、星状細胞腫、乏突起膠腫、上皮細胞腫、神経線維肉腫、髄膜腫、消化管間質腫瘍、乳がん、肺がん、大腸がん、甲状腺がん、骨肉腫、胃がん、口腔がん、口腔咽頭がん、胃がん、腎臓がん、肝臓がん、前立腺がん、食道がん、精巣がん、婦人科がん、結腸がん、脳腫瘍、白血病（ｌｅｕｋｅｍｉａ）、リンパ腫、白血病（ｌｅｕｃｏｃｙｔｈｅｍｉａ）、及び多発性骨髄腫から選択される、請求項１９に記載の方法。
21. がんが、前立腺がん、腎臓がん、及び白血病（ｌｅｕｃｏｃｙｔｈｅｍｉａ）からなる群から選択される、請求項１９に記載の方法。
22. がんが前立腺がんである、請求項１９に記載の方法。
23. がんが腎臓がんである、請求項１９に記載の方法。
24. 疾患がウイルス感染である、請求項１９に記載の方法。
25. ウイルスがＤＮＡウイルス又はＲＮＡウイルスである、請求項２４に記載の方法。
26. ウイルスが、アデノウイルス、単純ヘルペスウイルス、ヒトパピローマウイルス、ＶＩＴＡＭＩＮ Ｋ ウイルス、天然痘ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、パルボウイルスＢ１９、ヒトアストロウイルス、ノーウォークウイルス、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）、重症急性呼吸器症候群ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、黄熱病ウイルス、デングウイルス、ウエストナイルウイルス、ＴＢＥウイルス、風疹ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、インフルエンザウイルス、ラッサ熱ウイルス（ＬＡＳＶ）、クリミアコンゴ出血熱ウイルス、ハンターンウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、狂犬病ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ）、ロタウイルス、オルビウイルス、コルチウイルス、及びバンナウイルスからなる群から選択される、請求項２４に記載の方法。
27. ウイルスが、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、又はハンターンウイルスである、請求項２４に記載の方法。
28. ウイルスが、ハンターンウイルスである、請求項２４に記載の方法。
29. 共結晶の治療有効量が約０．０１〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重である、請求項１８〜２８のいずれかに記載の方法。
30. 共結晶の治療有効量が約０．０１〜約５ｍｇ／ｋｇ体重である、請求項１８〜２８のいずれかに記載の方法。
31. 医薬組成物が、医薬的に許容可能な担体又は水性媒体に溶解又は分散された有効量のＣＢＣＢＰ及び医薬的に許容可能な量の少なくとも一種の治療薬又はアジュバントを含む水性組成物である、請求項１８〜３０のいずれかに記載の方法。
32. 医薬組成物が、口、頬、吸入噴霧、舌下腺、直腸、経皮、膣、経粘膜、局所、鼻、筋肉内、皮下、髄内、髄腔内、脳室内、同所性、皮内、腹腔内、静脈内、関節内、胸骨内、滑液内、肝臓内、病巣内、頭蓋内、鼻腔内、又は眼球内の経路によって投与される、請求項１８〜３１のいずれかに記載の方法。
33. 医薬組成物が、点滴、注射又は経口経路によって投与される、請求項１８〜３２のいずれかに記載の方法。
34. （ｉ）カルボプラチンと１，２−シス−シクロブタンジカルボキシレートをある比率で溶媒中に与え、（ｉｉ）ある時間期間、その混合物をスラリー状にするか又は攪拌し、そして（ｉｉｉ）工程（ｉｉ）で形成された共結晶を単離することを含む、共結晶の製造方法。
35. 比率がモルで約１：１１である、請求項３４に記載の方法。
36. 時間期間が約０．５時間である、請求項３４に記載の方法。