JP2019032437A - ライトシート顕微鏡 - Google Patents

Abstract

【課題】複数の照明方向間で出射される励起光の照射平面のズレを防ぐことができるライトシート顕微鏡を提供する。【解決手段】ライトシート顕微鏡１００は、励起光を出力する光源１と、光源１からの励起光を導光する光ファイバ５ａ、５ｂと、光ファイバ５ａ、５ｂから導光された励起光をそれぞれシート状の光として、同一平面上で互いに異なる複数の方向から標本へ向けて出射する照明光学系６、７と、光源１と光ファイバ５ａ、５ｂとの間に配置され、光ファイバ５ａ、５ｂの中から光源１から出力された励起光が入射する光ファイバ５ａ、５ｂを切り替え、照明光学系６、７の中から励起光を出射する照明光学系を切り替える光切り替え手段と、を備えること特徴とする。【選択図】図１

Description

ライトシート顕微鏡に関する。

同一平面上の異なる複数の方向から標本に対して励起光を照射するライトシート顕微鏡が知られている。例えば同一平面上の二方向（複数の方向）から標本を照明することで、一方向から照明する構成において生じ得た、標本上の照明光学系から遠い領域での照明効率の低下を抑制でき、照射平面上で照明効率にばらつきが生じることを抑制することができる。また、異なる方向から標本を照明することで、散乱物質等によって標本上で励起光が照射されない領域が存在してしまう（影が発生する）ことを低減する効果も奏する。

特許文献１、２では、二方向から標本へ励起光を照射する構成が開示されている。同文献では、二方向間での照明方向の変更を、ガルバノミラーを用いて照明光学系内で光路を分岐させることで実現している。

尚、複数の方向から標本を照明する技術では、２つの方向から交互に試料を照明する準同時照明を実現するものもある。上記の特許文献１では、露光時間中に照明方向を変更している。特許文献２では、二方向それぞれから照明した際の画像を取得し、後に画像処理により一枚の画像を得る。

特表２０１３−５０６１５２号公報 米国特許出願公開第２０１１／０１１５８９５号明細書

一方、ガルバノミラーは、経年劣化や温度変化等の観察時の環境の変化に伴い、角度の変更量にズレが生じ得る。

このような照明方向を変更する機構の精度の劣化は、各方向への励起光の出射に支障を生じさせる。例えば、上記角度の変更量のズレに伴い、ガルバノミラーによる光路分岐後の照明光学系内における励起光が導光される方向が変わることにより、照明方向毎に励起光の照射平面にズレが生じてしまう。

近年、高分解能での観察を実現するために、より薄いシート光を用いた観察を行うことが望まれている。一方、標本上で薄いシート光を形成するほど、上記に挙げた励起光の照射平面のズレが与える影響は、より顕著なものとなる。

以上の実情を鑑みて、本発明では、複数の照明方向間で出射される照明光の照射平面のズレを防ぐことができるライトシート顕微鏡を提供することを目的とする。

本発明の一態様におけるライトシート顕微鏡は、光を出力する光源と、前記光源からの光を導光する複数の光ファイバと、前記複数の光ファイバから導光された光をそれぞれシート状の光として、同一平面上で互いに異なる複数の方向から標本へ向けて出射する複数の照明光学系と、前記光源と前記複数の光ファイバとの間に配置され、前記複数の光ファイバの中から前記光源から出力された光が入射する光ファイバを切り替え、前記複数の照明光学系の中から光を出射する照明光学系を切り替える光切り替え手段と、を備えること特徴とする。

本発明の他の一態様におけるライトシート顕微鏡は、光を出力する光源と、前記光源からの光を導光する複数の光ファイバと、前記複数の光ファイバから導光された光をそれぞれシート状の光として、同一平面上の複数の方向から標本へ向けて出射する複数の照明光学系と、前記複数の光ファイバのそれぞれへ入射する各光路上を、前記光源から出力された前記光が通るように前記光を分割する光分割手段と、前記光分割手段により分割された各光路上で光を通過、遮断させる光遮断機構と、を備えることを特徴とする。

本発明の他の一態様におけるライトシート顕微鏡は、光を出力する複数の光源と、前記複数の光源からの光をそれぞれシート状の光として、同一平面上の複数の方向から標本へ向けて出射する複数の照明光学系と、前記複数の照明光学系の中から光を出射する照明光学系を切り替える光切り替え手段と、を備えることを特徴とするライトシート顕微鏡。

本発明のライトシート顕微鏡によれば、複数の照明方向間で出射される照明光の照射平面のズレを防ぐことができる。

第１の実施形態におけるライトシート顕微鏡の構成を示す図 制御装置の機能構成を示す図 第２の実施形態におけるライトシート顕微鏡の構成を示す図 第３の実施形態におけるライトシート顕微鏡の構成を示す図 第４の実施形態におけるライトシート顕微鏡の構成を示す図 第４の実施形態におけるシャッタの断面図

以下、本発明の第１の実施形態におけるライトシート顕微鏡１００について説明する。図１は、ライトシート顕微鏡１００の構成を示す図である。

ライトシート顕微鏡１００は、光源１と、ガルバノミラー２と、レンズ３、４と、光ファイバ５ａ、５ｂと、照明光学系６、７と、光量計測器２５、２６と、対物レンズ１５と、ミラー１６と、蛍光フィルタ１７と、レンズ１８と、光検出器１９と、制御装置２０と、を備えている。尚、標本Ｓは培養液等とともに光透過性の容器１４へ入れられており、不図示のステージ上に固定される。

光源１は、標本Ｓへ照射するための光（励起光）を出力する光源である。

ガルバノミラー２は、光源１から出力された励起光を偏向させる。より詳しくは、ガルバノミラー２は、予め規定された角度の間で駆動することで、励起光がレンズ３あるいはレンズ４へ入射するように偏向する。即ち、ガルバノミラー２は、励起光が入射する光ファイバを、複数の光ファイバ（光ファイバ５ａ、５ｂ）の間で切り替える光偏向手段である。

光ファイバ５ａ、５ｂは、それぞれレンズ３、４を介した励起光を照明光学系６、７へ導光する。

照明光学系６は、レンズ８、ビームスプリッタ９、シリンドリカルレンズ１０を有している。レンズ８を介した励起光は、ビームスプリッタ９により反射し、光量計測器２５へ向かうものと、ビームスプリッタ９を透過し、シリンドリカルレンズ１０へ向かうものとに分割される。

シリンドリカルレンズ１０は、Z方向にのみパワーを有し、ＸＹ平面上に広がりを有したシート状の励起光（シート光）を標本Ｓへ照射する。尚、照明光軸方向に加え、シート光が広がりを有する方向を幅方向とも表記する。照明光学系６が出射するシート光の幅方向は、図１においてＹ方向に当たる。

照明光学系７は、レンズ１１、ビームスプリッタ１２、シリンドリカルレンズ１３を有している。レンズ１１、ビームスプリッタ１２、シリンドリカルレンズ１３は、それぞれ照明光学系６のレンズ８、ビームスプリッタ９、シリンドリカルレンズ１０と同様であり、照明光学系７は、照明光学系６と同種の構成要素を有している。レンズ１１を介した励起光は、ビームスプリッタ１２により反射し、光量計測器２６へ向かうものと、ビームスプリッタ１２を透過し、シリンドリカルレンズ１３へ向かうものとに分割される。

以上述べたように、ライトシート顕微鏡１００は、同一平面上の複数の方向（ここではＸ軸上の相反する二方向）から標本Ｓへ向けて、即ち同軸上で励起光（シート光）を出射する複数の照明光学系を備えた構成である。また、ガルバノミラー２は、励起光がレンズ３あるいはレンズ４へ入射するように駆動し通過する光路を切り替えることで、上述の複数の照明光学系（照明光学系６、７）の中から励起光を出射する照明光学系を切り替える光切り替え手段として機能する。

一般に、駆動により角度を変更するガルバノミラーは、経年劣化や温度変化により、駆動による角度の変更量が変わってしまう場合がある。即ち、ガルバノミラーを用いて、複数の方向間で照明方向を切り替える構成をもつ顕微鏡では、ガルバノミラーの角度の変更量が従来規定の範囲からずれることで、後段の光学系へ入射する光の方向が変わってしまう。

従来のライトシート顕微鏡の構成では、経年劣化や温度変化等による角度変化が生じることで、照明方向の変化につながってしまっていた。特にライトシート顕微鏡では、平面上に広がりを有するシート光を標本Ｓへ照射するものであるから、照明方向の変化は、照明光学系間での照射平面のズレにつながるため、観察に及ぼす影響は大きい。

本発明の第１の実施形態におけるライトシート顕微鏡１００によれば、ガルバノミラー２の後段に、複数の照明光学系（照明光学系６、７）のそれぞれへ励起光を導光する光ファイバ５ａ、光ファイバ５ｂが配置されており、光切り替え時に対応する光ファイバを介して後段の照明光学系へ励起光を導光し、標本Ｓへ出射するものである。そのため、経年劣化等でガルバノミラー２における角度の変更具合が変わり、励起光の進行方向が変わってしまっていたとしても、光ファイバから出射されるときにはその出射端面において励起光の出射方向は変わらない。即ち、励起光の進行方向にズレを生じさせ得る光切り替え手段の後段に光ファイバを設けることで、標本Ｓへの照明方向にズレが生じてしまうことを防ぐことができる。

ライトシート顕微鏡１００の構成の説明に戻る。

光量計測器２５は、ビームスプリッタ９を介して検出した励起光の光量を計測する。光量計測器２５が計測する光量は、例えば、予め設定された一定時間あたりの光量である。光量計測器２６も光量計測器２５と同様のものであり、ビームスプリッタ１２を介して検出した励起光から、同様に光量の計測を行う。即ち、ライトシート顕微鏡１００は、複数の照明光学系のそれぞれを通過する励起光の光量を計測する複数の光量計測器（光量計測器２５、２６）を備えている。

標本Ｓから発生した蛍光は、対物レンズ１５、ミラー１６、蛍光フィルタ１７、レンズ１８を介して光検出器１９にて検出される。光検出器１９としては、例えば、ＣＣＤイメージセンサ等の撮像素子が用いられる。

制御装置２０は、ライトシート顕微鏡１００が有する各構成を制御する制御用のコンピュータである。図２は、制御装置２０の機能構成を示す図である。

制御装置２０は、偏向手段制御部２１、画像処理部２２、光源制御部２３、光量情報取得部２４を有している。

偏向手段制御部２１は、光切り替え手段であるガルバノミラー２を駆動制御し、励起光を出射する照明光学系を照明光学系６、７の間で切り替える制御を実行する。偏向手段制御部２１は、不図示の入力装置（キーボード、マウス等）からの制御装置２０への入力に基づいて、制御を行うものであってもよい。

画像処理部２２は、光検出器１９が検出した蛍光の信号に基づき、画像の生成等を行う。

光源制御部２３は、光量計測器２５が計測した光量に基づいて光源１が出力する励起光の強度を変更することにより、照明光学系６、７が出射する励起光の光量を調節する。より具体的には、励起光が照明光学系６を介して標本Ｓへ照射されるようにガルバノミラー２が励起光の通過する光路を切り替えた場合に光量計測器２５が計測した光量と、励起光が照明光学系７を介して標本Ｓへ照射されるようにガルバノミラー２が励起光の通過する光路を切り替えた場合に光量計測器２６が計測した光量、の間のズレをなくすように、照明光学系６、７それぞれが励起光を出射する際の光源１が出力する励起光の強度を変更する。

また、光量情報取得部２４は、光量計測器２５、２６が計測した光量の情報を受信し、光源制御部２３へ伝達する。

上述したように、経年劣化等に起因するガルバノミラーの角度変更が生じることで、後段の光学系へ入射する光の光量自体が変わってしまい得る。即ち、各照明光学系から出射される照明強度にばらつきが生じてしまう場合がある。

一方、本実施形態のように、光量計測器２５、２６により各照明光学系内での光量を計測し、計測した光量の差が無くなるように、光源１が出力する励起光の強度を調整する構成によれば、ガルバノミラーの角度変更に起因して照明光学系間で出射光量に違いが生じてしまうような状況でも出射光量の調整を行うことができる。従って、標本Ｓへ複数の方向から照明を行う際に、照明方向間で光量にばらつきが生じてしまうことを防ぐことができる。

以上のライトシート顕微鏡１００によれば、光切り替え手段であるガルバノミラー２で角度変更が生じた場合であっても、複数の照明光学系の間で、照明方向のズレ（即ち標本Ｓ上での照射平面のズレ）や出射光量のばらつきが生じてしまうことを防ぐことができる。

また、本構成のように、複数の照明光学系がそれぞれ同種の構成要素を有するものとすれば、製造等が容易である。また、複数の照明光学系が同軸上の、相反する方向から励起光（シート光）を出射することで、散乱物質等によって標本上で励起光が照射されない領域が存在してしまう（影が発生する）ことをより大きく低減し得る。

以下、第２の実施形態におけるライトシート顕微鏡１００について説明する。図３は、ライトシート顕微鏡２００の構成を示す図である。

ライトシート顕微鏡２００は、光源３１と、フリップミラー３２ａ、３２ｂ、３２ｃと、レンズ３３、３４、３５、３６、と、光ファイバ３７ａ、３７ｂ、３７ｃ、３７ｄと、光ファイバ３７ａの後段に配置された照明光学系３８と、光ファイバ３７ｂの後段に配置された照明光学系３９と、光ファイバ３７ｃの後段に配置された不図示の照明光学系と、光ファイバ３７ｄの後段に配置された不図示の照明光学系と、対物レンズ１５と、ミラー１６と、蛍光フィルタ１７と、レンズ１８と、光検出器１９と、制御装置２０と、を備えている。照明光学系３８は、レンズ４０とシリンドリカルレンズ４１を有しており、その他の照明光学系も互いに同様の構成を有している。また、照明光学系３８、３９は、Ｘ軸上の異なる方向から標本Ｓへ励起光を照射し、光ファイバ３７ｃの後段に配置された不図示の照明光学系と、光ファイバ３７ｄの後段に配置された不図示の照明光学系は、それぞれＹ軸上の異なる方向から標本Ｓへ励起光を照射するものである。

ライトシート顕微鏡２００では、ガルバノミラーの代わりにフリップミラーの駆動によって励起光が入射する照明光学系の切り替えを行っている点と、同一平面上（ＸＹ平面上）の異なる方向から標本Ｓを照明する照明光学系を４つ備えている点がライトシート顕微鏡１００と異なっている。

光切り替え手段としてフリップミラーを使用する場合であっても、ガルバノミラーと同様、経年劣化や温度変化等で駆動する角度の変更量が変わってしまい、後段の光路での励起光の進行方向、ひいては標本Ｓへの照明方向がずれてしまう場合がある。一方で、フリップミラーによる光路切り替え後において、光ファイバを設け、後段の照明光学系へ導光するようにすれば、出射方向がずれることを防ぐことができる。また、照明光学系の数は、ライトシート顕微鏡１００では２つとしたが、特に限定されないため、本構成のように２つ以上であってもよい。

また、本構成では、図３において光量計測器を表記していないが、第１の実施形態のように、レンズとシリンドリカルレンズの間にビームスプリッタを設けて、そのビームスプリッタの反射方向に光量計測器を設ける構成としてもよい。光量計測器を設けることで、光切り替え手段であるフリップミラーの角度の変更量にズレが生じ、後段の光学系へ入射する光の光量自体が変わってしまう場合であっても、設置された光量計測器により各照明光学系を通過する光量を計測し、照明光学系間で出射する励起光の光量に差が出ないように光源の出力を調節することが可能となる。

また、光切り替え手段は、ガルバノミラーやフリップミラーの他に、光路上に挿脱されるように駆動制御されるミラーであってもよく、偏光ビームスプリッタと波長板が光路上へ挿脱される構成であってもよい。

尚、第１、２の実施形態では、光切り替え手段としてガルバノミラー、フリップミラーを用いたが、構成はこれに限定されない。例えば、位相変調素子（ＬＣＯＳ等）や音響光学素子を代わりに用いる構成としてもよい。位相変調素子や音響光学素子も温度変化により光の入出射面で結露が起きた場合等に、光学特性が劣化し得るが、後段に光ファイバを設け、シート光を出射する各照明光学系へ導光する構成とすることで、照明光学系間の出射方向、及び、強度のズレが生じることを防止することができる。

以下、第３の実施形態におけるライトシート顕微鏡３００について説明する。図４は、ライトシート顕微鏡３００の構成を示す図である。

ライトシート顕微鏡３００は、照明光学系５１、５２と、光量計測器４９、５０と、対物レンズ１５と、ミラー１６と、蛍光フィルタ１７と、レンズ１８と、光検出器１９と、制御装置２０と、を備えている。

照明光学系５１は、光源５３、光束径変更光学系５４、ビームスプリッタ５５、シリンドリカルレンズ５６、を有している。光源５３から出力された励起光は、光束径変更光学系５４により励起光の光束径の大きさが変更且つコリメートされビームスプリッタ５５へ入射し、ビームスプリッタ５５を透過したものはシリンドリカルレンズ５６を介して標本Ｓへ照射される。また、ビームスプリッタ５５で反射した励起光は、光量計測器４９へ導光される。

照明光学系５２は、照明光学系５１と同種の構成要素を有しており、光源５７、光束径変更光学系５８、ビームスプリッタ５９、シリンドリカルレンズ６０、を有しており、ビームスプリッタ５９を反射した励起光が光量計測器５０へ入射するように光量計測器５０が設置されている。つまりライトシート顕微鏡３００は、複数の光源（光源５３、５７）からの励起光をそれぞれシート状の光として、同一平面上の複数の方向から標本へ向けて出射する複数の照明光学系を備えている。

本構成では、光源制御部２３が各照明光学系が有するそれぞれの光源（光源５３、５７）の出力と停止を制御するものであり、該制御によって、励起光を出射する照明光学系を照明光学系５１、５２の間で変更している。即ち、光源制御装置である光源制御部２３が複数の照明光学系の中から励起光を出射する照明光学系を切り替える光切り替え手段として機能する。

即ちライトシート顕微鏡３００の構成では、複数の照明光学系（照明光学系５１、５２）毎に配置された光源の出力を制御することによって励起光を出射する照明光学系を切り替えることから、ガルバノミラー等の駆動する機構を有さない。そのため、本構成の制御装置２０は、偏向手段制御部２１の機能構成を有さない。

ライトシート顕微鏡３００の構成によれば、励起光の入射方向にズレを発生させる機構（ガルバノミラー等）が無く、一定の位置にある光源から出射される励起光を導光し、シリンドリカルレンズを介して標本Ｓへ照射する。従って、複数の照明光学系間で照射平面にズレが発生することがない。

また、変形例として、光源の出力と停止を制御する代わりに、各光源の後段の各光路上にＡＯＭ（音響光学変調器）を設け、ＡＯＭへ入射する励起光の強度を変調、非変調との間で切り替えるようにＡＯＭを制御してもよい。この場合、複数の照明光学系の中でいずれかの照明光学系が励起光を出射するように該照明光学系へ入射され得る励起光を非変調で透過させ、他の照明光学系へ入射され得る励起光が遮断されるようにＡＯＭで変調を行う。即ち、ＡＯＭは、複数の光源の後段の各光路上で励起光を通過、遮断させる光遮断機構として機能する。また、光源の出力を制御する代わりに、ＡＯＭの変調強度を制御することにより、照明光学系間で射出する励起光の光量に差が出ないように調節することも可能である。

以下、第４の実施形態におけるライトシート顕微鏡４００について説明する。図５は、ライトシート顕微鏡４００の構成を示す図である。

ライトシート顕微鏡４００は、光源６１と、ビームスプリッタ６２と、ミラー６３と、シャッタ６４と、レンズ６５、６６と、光ファイバ６７ａ、６７ｂと、照明光学系７６、７７と、対物レンズ１５と、ミラー１６と、蛍光フィルタ１７と、レンズ１８と、光検出器１９と、制御装置２０と、を備えている。

ビームスプリッタ６２は、例えばハーフミラーであり、後段の複数の光ファイバ（光ファイバ６７ａ、６７ｂ）のそれぞれへ入射する各光路上を光源５１から出力された励起光が通るように、励起光を分割する光分割手段である。

シャッタ６４は、ビームスプリッタ６２により分割された各光路上で励起光を通過、遮断させる役割を有する光遮断機構である。

シャッタ６４は、例えば、図６に示す形状を有する。図６は、シャッタ６４の断面図であり、スポットＡ、Ｂがそれぞれビームスプリッタ６２、レンズ６５間、ビームスプリッタ６２、レンズ６６間を通過する励起光の断面を示す。シャッタ６４は、駆動モータ等の駆動により矢印の方向に回転し、回転に応じた位置が変わることにより励起光を通過または遮断する。尚、図６は、ビームスプリッタ６２を透過した励起光を通過させている状態を示している。尚、シャッタ６４は、制御装置２０の偏向手段制御部２１により、回転が制御される。

照明光学系７６は、レンズ６８、ビームスプリッタ６９、シリンドリカルレンズ７０、を有しており、ライトシート顕微鏡１００における照明光学系６と同様の構成要素を有する。照明光学系７７についても、照明光学系７６と同様の構成要素である、レンズ７１、ビームスプリッタ７２、シリンドリカルレンズ７３、を有する。つまり、ライトシート顕微鏡４００は、複数の光ファイバ（光ファイバ６７ａ、６７ｂ）から導光された励起光をそれぞれシート状の光として、同一平面上の複数の方向から標本Ｓへ向けて出射する複数の照明光学系を備えている。

光検出器１９は、制御装置２０の光源制御部２３により、シャッタ６４の回転と同期して露光が制御される。具体的には、光源制御部２３は、図６で示されるスポットＡ、Ｂのいずれかを通過させ他方を遮断している状態となった時点で露光を開始し、シャッタ６４が回転している途中（即ち、スポットＡ、Ｂのいずれも通過させている状態）の時には露光を停止する。このような制御を行うことで、シャッタ６４が回転中の、光量や照明方向が変動しており観察に適さない状態において、撮像されることを防止できる。

以上の構成のように照明光学系の数に対応して励起光を分割する構成と、分割後励起光を選択的にいずれかの光ファイバ及び照明光学系へ導光する構成を有していてもよい。本構成のようにシャッタを回転させる構成によれば、ガルバノミラー等を含む構成と比較して安価な構成で、第１の実施形態と同様の効果を奏することができる。

上述した実施形態は、発明の理解を容易にするために具体例を示したものであり、本発明はこれらの実施形態に限定されるものではない。上述したライトシート顕微鏡は、特許請求の範囲に記載した本発明を逸脱しない範囲において、さまざまな変形、変更が可能である。

１００、２００、３００、４００ ライトシート顕微鏡
２０ 制御装置
１、３１、５３、５７、６１ 光源
２ ガルバノミラー
３、４、１０、１１、１８、３３、３４、３５、
３６、４０、６５、６６、６８、７１ レンズ
５ａ、５ｂ、３７ａ、３７ｂ、３７ｃ、
３７ｄ、６７ａ、６７ｂ 光ファイバ
６、７、３８、３９、５１、５２、７６、７７ 照明光学系
９、１２、５５、５９、６２、６９、７２ ビームスプリッタ
１０、１３、４１、４３、５６、６０、
７０、７３ シリンドリカルレンズ
１４ 容器
１５ 対物レンズ
１６ ミラー
１７ 蛍光フィルタ
１８ レンズ
１９ 光検出器
２０ 制御装置
２５、２６、４９、５０、７４、７５ 光量計測器
３２ａ、３２ｂ、３２ｃ、３２ｄ フリップミラー
５４、５８ 光束径変更光学系
６４ シャッタ

Claims (11)

1. 光を出力する光源と、
   前記光源からの光を導光する複数の光ファイバと、
   前記複数の光ファイバから導光された光をそれぞれシート状の光として、同一平面上で互いに異なる複数の方向から標本へ向けて出射する複数の照明光学系と、
   前記光源と前記複数の光ファイバとの間に配置され、前記複数の光ファイバの中から前記光源から出力された光が入射する光ファイバを切り替える光切り替え手段と、を備える
   こと特徴とするライトシート顕微鏡。
2. 請求項１に記載のライトシート顕微鏡において、
   前記光切り替え手段は、前記光源から出力された光を偏向させることで、前記複数の光ファイバの中から前記光源から出力された光が入射する光ファイバを切り替える光偏向手段である
   こと特徴とするライトシート顕微鏡。
3. 請求項２に記載のライトシート顕微鏡において、
   前記光偏向手段は、ガルバノミラーまたは音響光学素子または位相変調素子またはフリップミラーである
   ことを特徴とするライトシート顕微鏡。
4. 光を出力する光源と、
   前記光源からの光を導光する複数の光ファイバと、
   前記複数の光ファイバから導光された光をそれぞれシート状の光として、同一平面上の複数の方向から標本へ向けて出射する複数の照明光学系と、
   前記複数の光ファイバのそれぞれへつながる各光路上を、前記光源から出力された前記光が通るように前記光を分割する光分割手段と、
   前記光分割手段により分割された各光路上で光を通過、遮断させる光遮断機構と、を備える
   ことを特徴とするライトシート顕微鏡。
5. 光を出力する複数の光源と、
   前記複数の光源からの光をそれぞれシート状の光として、同一平面上の複数の方向から標本へ向けて出射する複数の照明光学系と、
   前記複数の照明光学系の中から光を出射する照明光学系を切り替える光切り替え手段と、を備える
   ことを特徴とするライトシート顕微鏡。
6. 請求項５に記載のライトシート顕微鏡において、
   前記光切り替え手段は、前記複数の光源の後段の各光路上で光を通過、遮断させる光遮断機構である
   ことを特徴とするライトシート顕微鏡。
7. 請求項５に記載のライトシート顕微鏡において、
   前記光切り替え手段は、前記複数の光源の出力と停止を制御する光源制御装置である
   ことを特徴とするライトシート顕微鏡。
8. 請求項１乃至請求項７のいずれか１項に記載のライトシート顕微鏡において、
   前記複数の照明光学系のそれぞれを通過する励起光の光量を計測する複数の光量計測器を備える
   ことを特徴とするライトシート顕微鏡。
9. 請求項８に記載のライトシート顕微鏡において、
   前記複数の光量計測器が計測した光量に基づき、前記複数の照明光学系が出射する光の光量を調節する制御装置を備える
   ことを特徴とするライトシート顕微鏡。
10. 請求項１乃至請求項９のいずれか１項に記載のライトシート顕微鏡において、
    前記複数の照明光学系は、同軸上で光を出射する少なくとも複数の照明光学系を含む
    ことを特徴とするライトシート顕微鏡。
11. 請求項１乃至請求項１０のいずれか１項に記載のライトシート顕微鏡において、
    前記複数の照明光学系は、それぞれ同種の構成要素を有する光学系である
    ことを特徴とするライトシート顕微鏡。