JP2020142995A - 皮膚外用剤 - Google Patents
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Abstract
【課題】本発明は、ユビキノン及びペプチドを含有する皮膚外用剤において、特定の植物抽出物及び酵母エキスから選択される１種又は２種以上を併用することにより、高いたるみ改善効果を発揮する皮膚外用剤を提供することを課題とする。【解決手段】本発明は、下記（Ａ）〜（Ｃ）を含有する皮膚外用剤（Ａ）ユビキノン（Ｂ）ペプチド（Ｃ）ハス科ハス属（Nelumbo）植物抽出物、トケイソウ科トケイソウ属（Passiflora）植物抽出物、ザクロ科ザクロ属（Punica）植物抽出物及び酵母エキスから選択される１種又は２種以上を提供する。【選択図】 図１
Description
本発明は、高いたるみ改善効果を発揮する皮膚外用剤に関する。
肌のたるみは真皮の弾力性の低下、皮膚脂肪組織の支持力の低下、さらには皮膚を支える筋力の低下等により生じる。この肌老化の一つであるたるみを改善するために肌のハリ・弾力を持たせる皮膚外用剤に配合する成分の検討が行われてきた。これまでユビキノン及びペプチドがシワ防止化粧料に用いられることが知られている（特許文献１）。しかしながら、たるみ改善効果については十分に検討されていなかった。
本発明は、ユビキノン及びペプチドを含有する皮膚外用剤において、特定の植物抽出物及び酵母エキスから選択される１種又は２種以上を併用することにより、高いたるみ改善効果を発揮する皮膚外用剤を提供することを課題とする。
本発明は、
下記（Ａ）〜（Ｃ）を含有する皮膚外用剤
（Ａ）ユビキノン
（Ｂ）ペプチド
（Ｃ）ハス科ハス属（Nelumbo）植物抽出物、トケイソウ科トケイソウ属（Passiflora）植物抽出物、ザクロ科ザクロ属（Punica）植物抽出物及び酵母エキスから選択される１種又は２種以上
を提供する。
下記（Ａ）〜（Ｃ）を含有する皮膚外用剤
（Ａ）ユビキノン
（Ｂ）ペプチド
（Ｃ）ハス科ハス属（Nelumbo）植物抽出物、トケイソウ科トケイソウ属（Passiflora）植物抽出物、ザクロ科ザクロ属（Punica）植物抽出物及び酵母エキスから選択される１種又は２種以上
を提供する。
本発明は、ユビキノン及びペプチドを含有する皮膚外用剤において、特定の植物抽出物及び酵母エキスから選択される１種又は２種以上を併用することにより、高いたるみ改善効果を発揮する。
ハス抽出物はコラーゲン等の細胞外マトリックスタンパク質の産生促進に関与するTGFB1遺伝子発現促進効果、オートファゴソームの形成に関与するATG12遺伝子発現促進効果、血管の新生や安定化に関与するANGPT1遺伝子発現効果を発揮する。
クダモノトケイソウ抽出物はコラーゲン等の細胞外マトリックスタンパク質の産生促進に関与するTGFB1遺伝子発現促進効果、オートファゴソームの形成に関与するBECN1遺伝子発現促進効果，MAP1LC3A遺伝子発現促進効果，ATG7遺伝子発現促進効果，ATG12遺伝子発現促進効果、血管の新生や安定化に関与するANGPT1遺伝子発現促進効果、ユビキノンの合成に関与するUBIAD1遺伝子発現促進効果，COQ2遺伝子発現促進効果を発揮する。
ザクロ抽出物はコラーゲン等の細胞外マトリックスタンパク質の産生促進に関与するTGFB1遺伝子発現促進効果、弾性線維形成の促進に関与するLTBP4遺伝子発現促進効果、オートファゴソームの形成に関与するATG7遺伝子発現促進効果、ユビキノンの合成に関与するUBIAD1遺伝子発現効果を発揮する。
酵母エキスはコラーゲン等の細胞外マトリックスタンパク質の産生促進に関与するTGFB1遺伝子発現促進効果、オートファゴソームの形成に関与するATG7遺伝子発現促進効果、ユビキノンの合成に関与するUBIAD1遺伝子発現促進効果を発揮する。
以下本発明を実施するための形態を説明する。
本発明の皮膚外用剤は、化粧品、医薬部外品、医薬品等のいずれの用途にも用いられ得る。
本発明に用いられるユビキノンは、別名コエンザイムＱ10とも呼ばれ、生体内に存在するエネルギーを生産するためのエネルギー代謝に関わっている補酵素のひとつである。ベンゾキノン型の酸化型とヒドロキノン型の還元型があり、還元型であるユビキノールとして配合しても良い。製造方法は、合成、微生物による発酵等方法を問わず、何れのものも使用することができる。
本発明に用いられるユビキノンの配合量は０．００００１質量％〜０．３質量％が好ましく、より好ましくは０．００００１質量％〜０．１質量％である。
本発明に用いられるペプチドは、アミノ酸２〜１０個が結合したペプチド及びその誘導体である。例えば、カルノシン，アンセリン，ホモアンセリン，アラニルグルタミン，ジペプチド−２，ジペプチド−４，アセチルジペプチド−１セチル，酢酸ヘキサノイルジペプチド−３ノルロイシン，トリペプチド−１，トリペプチド−２，トリペプチド−３，トリペプチド−５，トリフルオロアセチルトリペプチド−２，パルミトイルトリペプチド−１，パルミトイルトリペプチド−５，パルミトイルトリペプチド−８，トリペプチド−１０シトルリン，グルタチオン，カプロオイルテトラペプチド−３，アセチルテトラペプチド−２，アセチルテトラペプチド−５，アセチルテトラペプチド−９，アセチルテトラペプチド−１１，アセチルテトラペプチド−１５，パルミトイルテトラペプチド-７，ペンタペプチド−３，ペンタペプチド−１８，パルミトイルペンタペプチド−４，ヘキサペプチド−２，ヘキサペプチド−３，ヘキサペプチド−９，ヘキサペプチド−１０，アセチルヘキサペプチド−１，アセチルヘキサペプチド−８，アセチルグルタミニルヘプタペプチド−１，オクタペプチド−２，ノナペプチド−１，オリゴペプチド−６，デカペプチド−２，デカペプチド−４，アセチルデカペプチド−３等を用いることができる。特にはカルノシンを用いることが好ましい。さらには、カルノシン，トリフルオロアセチルトリペプチド，パルミトイルトリペプチド及びパルミトイルテトラペプチドを併用することが好ましい。
本発明に用いられるペプチドの配合量は０．００１質量％〜１０質量％が好ましく、より好ましくは０．０１質量％〜０．１質量％である。
本発明に用いられるハス科ハス属（Nelumbo）植物の抽出物は、ハス（N.nucifera）の他、同属植物の抽出物を用いることができる。ハス（N.nucifera）は池や水田、堀等に栽培される多年生水草で、根茎は白色で長細く、先端部は肥厚している。葉は長い葉柄を持つ。抽出部位としては根，茎，葉，花，果実，種子，雄蕊，胎座，胚芽等の各部位を用いることができるが、花を用いることが好ましい。
本発明において、上記植物は生のまま抽出に供してもよいが、抽出効率を考えると、細切，乾燥，粉砕等の処理を行った後に抽出を行うことが好ましい。抽出は、抽出溶媒に浸漬して行う。抽出効率を上げるため撹拌を行う、あるいは抽出溶媒中でホモジナイズしてもよい。抽出温度としては、５℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とするのが適切である。抽出時間は抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なるが、４時間〜１４日間程度とするのが適切である。
抽出溶媒としては、例えば水、低級アルコール（メタノール，エタノール，プロパノール，イソプロパノール等）、多価アルコール（1,3-ブチレングリコール，プロピレングリコール，ジプロピレングリコール，グリセリン等）、エーテル類（エチルエーテル，プロピルエーテル等）、エステル類（酢酸エチル，酢酸ブチル等）、ケトン類（アセトン，エチルメチルケトン等）等の極性有機溶媒が挙げられ、これらより１種又は２種以上を選択して用いる。また、生理食塩水，リン酸緩衝液，リン酸緩衝生理食塩水等を用いてもよい。
上記溶媒による抽出物は、そのままでも用いることができるが、濃縮，乾固したものを水や極性溶媒に再度溶解したり、或いはそれらの皮膚生理機能向上作用を損なわない範囲で脱色，脱臭，脱塩等の精製処理を行ったり、カラムクロマトグラフィーによる分画処理を行った後に用いてもよい。また、抽出物を酸、アルカリ、酵素等を用いて加水分解したものを用いてもよい。また保存のため、精製処理の後凍結乾燥し、用時に溶媒に溶解して用いることもできる。また、リポソーム等のベシクルやマイクロカプセル等に内包させて用いることもできる。
本発明に用いられるトケイソウ科トケイソウ属（Passioflora）植物の抽出物は、クダモノトケイソウ（P.edulis）の他、同属植物の抽出物を用いることができる。クダモノトケイソウ（P.edulis）はつる性の多年草で、葉は互生で掌状であり、茎の各節に巻きひげと托葉がある。花は白色あるいは帯紫色で、果実は球形もしくは卵形で深紫色に熟す。抽出部位としては、果実，果皮，花，種子等の各部位を用いることができるが、果実を用いることが好ましい。抽出方法としては、ハス科ハス属植物の抽出物を得る際と同様である。
本発明に用いられるザクロ科ザクロ属（Punica）植物の抽出物は、ザクロ（P.granatum）の他、同属植物の抽出物を用いることができる。ザクロ（P.granatum）は小高木で分枝が多く、とげがある。葉はほぼ対生し、長楕円形をしている。抽出部位としては、果実，果皮，果汁，樹皮，花，葉等の各部位を用いることができるが、果実を用いることが好ましい。抽出方法としては、ハス科ハス属植物の抽出物を得る際と同様である。
本発明に用いられる上述の植物抽出物の配合量としては、好ましくは０．００００１質量％〜５質量％、特に０．０００１質量％〜１質量％の範囲である。この範囲であれば、製剤及び製剤中の植物の経時安定性に影響を及ぼすことが無く、より高い効果を発揮させることができる。
本発明に用いられる酵母エキスとしては、酵母の極性溶媒による抽出物、酵母を自己消化，酸加水分解又は酵素分解等により溶菌させた後ろ過したもの、あるいは前記溶菌液を乾燥し、それより極性溶媒で抽出した物を用いることができる。酵母としては、Eremascus属，Endomyces属等のEndomycetaceae科に属する酵母や、Candida属，Schizosaccharomyces属，Nadsonia属，Saccharomycodes属，Hanseniaspora属，Wickerhamia属，Saccharomyces属，Kluyveromyces属，Lodderomyces属，Wingea属，Endomycopsis属，Pichia属，Hansenula属，Pachysolen属，Citeromyces属，Debaryomyces属，Schwanniomyces属，Dekkera属，Saccharomycopsis属，Lipomyces属等のSaccharomycoideae科に属する酵母、Spermophthora属，Eremothecium属，Crebrothecium属，Ashbya属，Nematospora属，Metschnikowia属，Coccidiascus属等のSpermophthoraceae科に属する酵母等の子のう菌酵母が例示される。好ましくはCandida属である。
本発明に用いられる酵母エキスの配合量は特に限定されないが、０．０００１質量％〜１０質量％が好ましい。市販のAC YEAST CYTSOL PET（株式会社GSIクレオス製）、BETA VERA（BROOKS社製）、GluCare N（コスモファーム株式会社製）、YG-1-W（一丸ファルコス株式会社製）、アクア バイオミン 2（BROOKS社製）、イーストラップ（キリンビール株式会社製）、イーストリキッド（一丸ファルコス株式会社製）、イーストリキッド ZB（一丸ファルコス株式会社製）、イーストリキッド B（一丸ファルコス株式会社製）、イーストリキッド TRX（一丸ファルコス株式会社製）、CELLDETOX（登録商標）PX（Silab社製）、Biofactor HSP PE（Ashland社製）、ハイチオンエキス（登録商標）YH-15（株式会社興人製）、酵母抽出液BG（丸善製薬株式会社製）、チトカタライザー（BIODELL BIOCHEMICAL社製）、チトカタライザー W（BIODELL BIOCHEMICAL社製）、チトカタライザー YSC（BIODELL BIOCHEMICAL社製）、DISMUTIN（登録商標）-JPF（DSM株式会社製）等を用いることもできる。
本発明の皮膚外用剤には上述の必須成分の他に、必要に応じて通常皮膚外用剤に配合される、水性成分、油性成分、保湿剤、色素、界面活性剤、紫外線吸収剤、増粘剤、美容成分、香料、高分子物質、防菌防黴剤、アルコール類、粉体、スクラブ剤、生体由来成分等を適宜配合することができる。
本発明の皮膚外用剤は、例えば、ローション剤、乳剤、軟膏の剤型で用いることができる。また、本発明の皮膚外用剤は製造方法を問わない。
以下、実施例により本発明を具体的に説明するが、これにより本発明の範囲が限定されるものではない。なお、配合量は特に断りのない限り質量％である。
まず、使用した各成分の調製例を示す。
［ユビキノン］
ユビキノンとして、株式会社カネカ製のユビデカレノン「カネカ」（登録商標）を用いた。
ユビキノンとして、株式会社カネカ製のユビデカレノン「カネカ」（登録商標）を用いた。
［ハス抽出物］
５０％BG水溶液を用いて得られたエキスをろ過してハス抽出物とした。
５０％BG水溶液を用いて得られたエキスをろ過してハス抽出物とした。
［クダモノトケイソウ抽出物］
３０％BG水溶液を用いて得られたエキスをろ過してクダモノトケイソウ抽出物とした。
３０％BG水溶液を用いて得られたエキスをろ過してクダモノトケイソウ抽出物とした。
［ザクロ抽出物］
５０％BG水溶液を用いて得られたエキスをろ過してザクロ抽出物とした。
５０％BG水溶液を用いて得られたエキスをろ過してザクロ抽出物とした。
［酵母抽出物］
酵母抽出物として、Silab社製のCELLDETOX（登録商標）PXを用いた。
酵母抽出物として、Silab社製のCELLDETOX（登録商標）PXを用いた。
［TGFB1遺伝子発現促進作用、LTBP4遺伝子発現促進作用、BECN1遺伝子発現促進作用、MAP1LC3A遺伝子発現促進作用、ATG7遺伝子発現促進作用、ATG12遺伝子発現促進作用、ANGPT1遺伝子発現促進作用、UBIAD1遺伝子発現促進作用、COQ2遺伝子発現促進作用］
ヒト線維芽細胞を６×１０５個/ウェルとなるように６ウェルプレートに播種し、０．５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地にて一晩培養した。ユビキノン、カルノシン、植物抽出物又は酵母エキスを表１及び表２に示した濃度になるように添加した培地に交換し、３７℃、５％ CO2インキュベーター内で２４時間培養した。採取した細胞から、市販のＲＮＡ抽出キット（Quick Gene RNA Cultured Cell HC Kit S）を使用してＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡ合成後に下記のプライマーを使用してサイバーグリーン法によるリアルタイムＰＣＲにより遺伝子発現を確認した。なお、内部標準としてＧＡＰＤＨを使用した。培地に溶解した試料を表１及び表２に示した。各作用は表４〜表７にそれぞれ示した。なおｍＲＮＡ発現量は、各抽出物無添加の場合の発現量を１とした相対値で示した。
ヒト線維芽細胞を６×１０５個/ウェルとなるように６ウェルプレートに播種し、０．５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地にて一晩培養した。ユビキノン、カルノシン、植物抽出物又は酵母エキスを表１及び表２に示した濃度になるように添加した培地に交換し、３７℃、５％ CO2インキュベーター内で２４時間培養した。採取した細胞から、市販のＲＮＡ抽出キット（Quick Gene RNA Cultured Cell HC Kit S）を使用してＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡ合成後に下記のプライマーを使用してサイバーグリーン法によるリアルタイムＰＣＲにより遺伝子発現を確認した。なお、内部標準としてＧＡＰＤＨを使用した。培地に溶解した試料を表１及び表２に示した。各作用は表４〜表７にそれぞれ示した。なおｍＲＮＡ発現量は、各抽出物無添加の場合の発現量を１とした相対値で示した。
表４に示した通り、ユビキノン、カルノシン及びハス抽出物を含有する試料６を添加することにより、試料１、試料２（それぞれの有効成分量は倍量となる）を添加する場合と比較して、たるみ改善に関わる遺伝子発現量が相乗的に向上していた。
表５に示した通り、ユビキノン、カルノシン及びクダモノトケイソウ抽出物を含有する試料７を添加することにより、試料１、試料３（それぞれの有効成分量は倍量となる）を添加する場合と比較して、たるみ改善に関わる遺伝子発現量が相乗的に向上していた。
表６に示した通り、ユビキノン、カルノシン及びザクロ抽出物を含有する試料８を添加することにより、試料１、試料４（それぞれの有効成分量は倍量となる）を添加する場合と比較して、たるみ改善に関わる遺伝子発現量が相乗的に向上していた。
表７に示した通り、ユビキノン、カルノシン及び酵母エキスを含有する試料９を添加することにより、試料１、試料５（それぞれの有効成分量は倍量となる）を添加する場合と比較して、たるみ改善に関わる遺伝子発現量が相乗的に向上していた。
［ヒト線維芽細胞増殖促進作用］
ヒト線維芽細胞を２×１０4個/ウェルとなるように９６ウェルプレートに播種し、０．５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地にて一晩培養した。ユビキノン、カルノシン、植物抽出物及び酵母エキスを表８に示した濃度になるように添加した培地に交換し、３７℃、５％ CO2インキュベーター内で２４時間培養した。水溶性テトラゾリウム塩ＷＳＴ−８を発色試薬として用いて各ウェル中の生細胞数を計測した（Cell Counting Kit−８；株式会社同仁化学研究所製）。測定結果をもとに、コントロールにおける生細胞数を１００％として、各群の生細胞数（％）を算出した。なお、細胞増殖率は無添加の場合の細胞増殖数を１００とした相対値で示した。
ヒト線維芽細胞を２×１０4個/ウェルとなるように９６ウェルプレートに播種し、０．５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地にて一晩培養した。ユビキノン、カルノシン、植物抽出物及び酵母エキスを表８に示した濃度になるように添加した培地に交換し、３７℃、５％ CO2インキュベーター内で２４時間培養した。水溶性テトラゾリウム塩ＷＳＴ−８を発色試薬として用いて各ウェル中の生細胞数を計測した（Cell Counting Kit−８；株式会社同仁化学研究所製）。測定結果をもとに、コントロールにおける生細胞数を１００％として、各群の生細胞数（％）を算出した。なお、細胞増殖率は無添加の場合の細胞増殖数を１００とした相対値で示した。
表８に示した通り、試料１２を添加することにより、試料１０、試料１１（それぞれの有効成分量は倍量となる）を添加する場合と比較して、ヒト線維芽細胞の増殖率が相乗的に向上していた。
［実施例１］クリーム
（１）スクワラン １０．０（質量％）
（２）ステアリン酸 ２．０
（３）水素添加パーム核油 ０．５
（４）水素添加大豆リン脂質 ０．１
（５）セタノール ３．６
（６）親油型モノステアリン酸グリセリン ２．０
（７）グリセリン １０．０
（８）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（９）アルギニン（２０質量％水溶液） １５．０
（10）精製水 全量を１００とする量
（11）カルボキシビニルポリマー（１質量％水溶液） １５．０
（12）ユビキノン ０．０１
（13）カルノシン ０．０１
（14）トリフルオロアセチルトリペプチド ０．０１
（15）パルミトイルトリペプチド ０．０１
（16）パルミトイルテトラペプチド ０．０１
（17）ハス抽出物 ０．０１
（18）クダモノトケイソウ抽出物 ０．０１
（19）ザクロ抽出物 ０．０１
（20）酵母エキス ０．０１
製法：（１）〜（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）〜（10）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。乳化終了後、（11）を加え、冷却を開始し、４０℃にて（12）〜（20）を加え、均一に混合する。
（１）スクワラン １０．０（質量％）
（２）ステアリン酸 ２．０
（３）水素添加パーム核油 ０．５
（４）水素添加大豆リン脂質 ０．１
（５）セタノール ３．６
（６）親油型モノステアリン酸グリセリン ２．０
（７）グリセリン １０．０
（８）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（９）アルギニン（２０質量％水溶液） １５．０
（10）精製水 全量を１００とする量
（11）カルボキシビニルポリマー（１質量％水溶液） １５．０
（12）ユビキノン ０．０１
（13）カルノシン ０．０１
（14）トリフルオロアセチルトリペプチド ０．０１
（15）パルミトイルトリペプチド ０．０１
（16）パルミトイルテトラペプチド ０．０１
（17）ハス抽出物 ０．０１
（18）クダモノトケイソウ抽出物 ０．０１
（19）ザクロ抽出物 ０．０１
（20）酵母エキス ０．０１
製法：（１）〜（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）〜（10）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。乳化終了後、（11）を加え、冷却を開始し、４０℃にて（12）〜（20）を加え、均一に混合する。
Claims (1)
- 下記（Ａ）〜（Ｃ）を含有する皮膚外用剤。
（Ａ）ユビキノン
（Ｂ）ペプチド
（Ｃ）ハス科ハス属（Nelumbo）植物抽出物、トケイソウ科トケイソウ属（Passiflora）植物抽出物、ザクロ科ザクロ属（Punica）植物抽出物及び酵母エキスから選択される１種又は２種以上
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