JP2020198794A

JP2020198794A - 培養モールド、振とう培養用容器、培養システム、共培養方法、受精卵及び子宮内膜細胞

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Publication number: JP2020198794A
Application number: JP2019106725A
Authority: JP
Inventors: 次郎大野; Jiro Ono
Original assignee: Tissue Bynet Corp
Current assignee: Tissue Bynet Corp
Priority date: 2019-06-07
Filing date: 2019-06-07
Publication date: 2020-12-17

Abstract

【課題】本発明は、簡単かつ安価に細胞培養を行うことができる培養モールド、振とう培養用容器、培養システム、共培養方法、受精卵及び子宮内膜細胞を提供することを目的とする。【解決手段】本発明に係る培養モールド、振とう培養用容器及び培養システムの代表的な構成は、複数の孔を備え、下側に配置された第１のプレート部材と、複数の孔を備え、前記第１のプレート部材の上側に配置された第２のプレート部材と、前記第１のプレート部材の下部に着脱可能であり、複数の線状部材を備えた第１の支持体と、前記第２のプレート部材の上部又は下部に着脱可能であり、複数の線状部材を備えた第２の支持体と、を有し、前記複数の孔と前記第１の支持体は、培養する被培養物を配置する複数のキャビティーを形成し、前記第２の支持体は、前記キャビティー内に前記被培養物を留めるように前記キャビティーを覆い、前記複数の線状部材は、前記複数の線状部材の間から前記被培養物が漏れ出ないように配置されていることを特徴とする。【選択図】図１

Description

本発明は、培養モールド、振とう培養用容器、培養システム、共培養方法、受精卵及び子宮内膜細胞に関するものである。

従来の培養モールド、振とう培養用容器、培養システム、共培養方法、受精卵及び子宮内膜細胞に関するものとして、特許文献１〜特許文献４、非特許文献１がある。特許文献１(特開平９−２８７２１)には、ウシの精子を卵管上皮細胞と共培養することで卵管上皮細胞から産出される因子により体外受精能を向上することが開示されている。特許文献２（特許6436284）には、脂肪組織由来幹細胞と卵子との共培養が開示されている。特許文献３（特許4186043）には、細胞凝集体との共培養による分化誘導が開示されている。特許文献４（WO2007/052653）には、子宮内膜細胞と受精卵の共培養が開示されている。非特許文献１には、特定のサイトカインが受精卵の生育向上に有用であることを開示されている。

特開平９−２８７２１特許6436284 特許4186043 WO2007/052653（特願2007-542759）

Female Tract Cytokines and Developmental Programming in Embryos、Cell Signaling During Mammalian Early Embryo Development, Advances in Experimental Medicine and Biology 843, DOI 10.1007/978-1-4939-2480-6_7

しかしながら、上記特許文献１〜４、非特許文献１では、簡単かつ安価に細胞培養を行うことが困難であり、簡単かつ安価に受精卵の品質向上及び着床率を向上させることが困難である。

そこで本発明は、簡単かつ安価に細胞培養を行うことができ、簡単かつ安価に受精卵の品質向上及び着床率を向上させることができる培養モールド、振とう培養用容器、培養システム、共培養方法、受精卵及び子宮内膜細胞を提供することを目的とする。

上記課題を解決するために本発明に係る培養モールド、振とう培養用容器及び培養システムの代表的な構成は、複数の孔を備え、下側に配置された第１のプレート部材と、複数の孔を備え、前記第１のプレート部材の上側に配置された第２のプレート部材と、前記第１のプレート部材の下部に着脱可能であり、複数の線状部材を備えた第１の支持体と、前記第２のプレート部材の上部又は下部に着脱可能であり、複数の線状部材を備えた第２の支持体（網状、櫛歯状等）と、を有し、前記複数の孔と前記第１の支持体は、培養する被培養物（組織片、細胞、前記細胞凝集体、３次元細胞構造体、受精卵、原始卵胞の少なくともいずれか１つ）を配置する複数のキャビティーを形成し、前記第２の支持体は、前記キャビティー内に前記被培養物を留めるように前記キャビティーを覆い、前記複数の線状部材は、前記複数の線状部材の間から前記被培養物が漏れ出ないように配置されていることを特徴とする。

上記課題を解決するために本発明に係る共培養方法、受精卵、子宮内膜細胞の代表的な構成は、細胞を凝集させた細胞凝集体から作製される３次元細胞構造体と受精卵とを共培養するステップを含むことを特徴とする。

本発明によれば、簡単かつ安価に細胞培養を行うことができ、簡単かつ安価に受精卵の品質向上及び着床率を向上させることができる。

（ａ）第１実施形態における培養システムの側面図である。（ｂ）（ｃ）振とう時の第１実施形態における培養システムの側面図である。第１実施形態における培養システムの構成図である。（ａ）、（ｃ）、（ｄ）第１実施形態における培養モールドの斜視図である。（ｂ）第１実施形態における培養モールドの構成図である。第１実施形態における子宮内膜細胞を凝集させた細胞凝集体から３次元細胞構造体を作製するフローチャートである。第１実施形態における３次元細胞構造体作製プロセスの試験結果を示す図である。（ａ）キャビティーに子宮内膜細胞を凝集させた細胞凝集体を投入した状態を示す図である。（ｂ）細胞凝集体ＣＡ同士が融合し、３次元細胞構造体ＣＳが作製された状態を示す図である。（ａ）第１実施形態における３次元細胞構造体と受精卵とを別のキャビティー内で共培養する培養モールドの斜視図である。（ｂ）第１実施形態における３次元細胞構造体と受精卵とを別のキャビティー内で共培養する培養モールドの部分側面図である。（ｃ）第１実施形態における３次元細胞構造体と受精卵とを同じキャビティー内で共培養する培養モールドの斜視図である。（ｂ）第１実施形態における３次元細胞構造体と受精卵とを同じキャビティー内で共培養する培養モールドの部分側面図である。（ａ）第２実施形態における培養システムの側面図である。（ｂ）（ｃ）振とう時の第二実施形態における培養システムの側面図である。第２実施形態における培養システムの構成図である。（ａ）第３実施形態における培養システムの側面図である。（ｂ）（ｃ）振とう時の第３実施形態における培養システムの側面図である。第３実施形態における培養システムの構成図である。（ａ）他の実施形態における培養容器の側面図である。（ｂ）〜（ｆ）他の実施形態における変形例の培養容器の側面図である。

［第１実施形態］
本発明に係る培養モールド、振とう培養用容器、培養システム、共培養方法、受精卵及び子宮内膜細胞の第１実施形態について、図を用いて説明する。

（培養システム）
図１（ａ）〜図１（ｃ）、図２に示すように、本実施形態における培養システム１００は、培養モールド（ディスクモールド）１、振とう培養用容器２０を有している。

（培養モールド）
図３（ａ）〜図３（ｄ）に示すように、本実施形態の培養モールド１は、第１のプレート部材（下プレート）２、第２のプレート部材（上プレート）３、第１の支持体（下ネット）４、第２の支持体（上ネット）５を有している。

下プレート２は、複数の孔２ａを備え、上プレート３の下側に配置されている。上プレート３は、複数の孔３ａを備え、下プレート２の上側に配置されている。

下ネット４は、下プレート２の下部に着脱可能であり、複数の線状部材４ａを備えている。複数の孔２ａと下ネット４は、培養する被培養物を配置する複数のキャビティーＣを形成している。被培養物は、組織片、細胞、前記細胞凝集体、３次元細胞構造体、受精卵、原始卵胞の少なくともいずれか１つであればよい。線状部材４ａは、線状部材４ａの間から被培養物が漏れ出ないように配置されている。

上ネット５は、上プレート３の上部又は下部に着脱可能であり、複数の線状部材５ａを備えている。上ネット５は、キャビティーＣ内に被培養物を留めるようにキャビティーＣを覆う。

ネット４、５は、櫛歯状となっており、線状部材４ａ、５ａの長手方向（矢印Ｘ方向）の一端に枠部４ｂ、５ｂを有している。枠部４ｂ、５ｂは、ネット４、５から取り外し可能である。ネット４、５は、プレート２、３に対して長手方向（矢印Ｘ方向）に取り外し可能に配置されている。

なお、複数の孔２ａ、３ａ（複数のキャビティーＣ）の形状、数は、限定されるものではない。図１（ａ）〜図１（ｃ）、図２に示す９つの円形、図３（ａ）に示す４つの四角形、図３（ｃ）に示す２５個の円形、図３（ｄ）に示す２つの四角形と１０個の円形とのミックス以外であっても良い。

また、本実施形態では、ネット４、５を櫛歯状としたが、本発明は櫛歯状に限定されるものではなく、被培養物が漏れ出すことがなく、培養液（培地）Ｌが還流可能な形状であればよく、網状等の形状でもよい。

また、複数の線状部材４ａ、５ａは、ネット４、５に、溶解性部材で取り付けてもよい。溶解性部材を溶かすことで、線状部材４ａ、５ａを簡単に取り外すことができる。

（振とう培養用容器）
図１（ａ）〜図１（ｃ）に示すように、振とう培養用容器２０は、第１底面２１、第２底面２２、側面２３、側壁２４を有している。また、図２に示すように、振とう培養用容器２０は、皿部２０ａと蓋部２０ｂとからなる。振とう培養用容器２０は、図１（ａ）〜図１（ｃ）、図２に示すようなシャーレに限定されず、フラスコ、ボトル等の形状であってもよい。

第２底面２２は、第１底面２１より高い位置にある。側面２３は、第１底面２１から第２底面２２と連続する。なお、側面２３の形状は、図１（ａ）〜図１（ｃ）では第１底面２１、第２底面２２に対して斜めに傾斜した形状となっているが、本発明はかかる形状に限定されるものではない。例えば、側面２３の形状は、振とう培養用容器２０内に入れた培地ＬがキャビティーＣ内をスムーズに流れるようなカーブ面であっても良い。また、第１底面２１から垂直に立ち上がった形状であってもよい。

側壁２４は、第１底面２１及び第２底面２２の周りに立設され、振とう培養用容器２０内に培地Ｌを保持可能になっている。

固定部２５は、皿部２０ａをふたする蓋部２０ｂに設けられている。なお、図（ａ）〜図１（ｃ）では、固定部２５は省略している。固定部２５は、複数のキャビティーＣが第２底面２２から第１底面２１の上部に突出する状態で、培養モールド１を第２底面２２に押圧することで、培養モールド１を固定する。なお、固定部は、上記の固定方法に限定するものではなく、第２底面２２や側壁２４に培養モールド１と係合する固定部を設けてもよい。

（３次元細胞構造体の作製手法）
３次元細胞構造体の作製手法は、細胞培養プロセス、細胞凝集体作製プロセス、３次元細胞構造体培養プロセスの３つのプロセスで行われる。

細胞培養プロセスは、以下のように行われる。最初に、ヒトや動物の子宮内膜の組織片から子宮内膜細胞を採集する。採集した子宮内膜細胞をディッシュ上で培地を用いて培養すると子宮内膜細胞がディッシュ底面に接着したまま増殖する（外植片培養）。増殖した子宮内膜細胞を剥離し、より多くのディッシュに播種することで細胞数を増やす。

細胞凝集体作製プロセスは、子宮内膜細胞を、子宮内膜細胞が何かに接着できない環境下において培養して行われる。これにより、子宮内膜細胞同士が接着を始め細胞凝集体が作製される。子宮内膜細胞が何かに接着できない環境として、底面を非接着コーティングされたプレートなどがある。プレートの底面の形状を窪みなどの大きさで制御することにより、細胞凝集体のサイズを制御することができる。

３次元細胞構造体培養プロセスは、特許６２５６８５３、特許６４３９２２３に記載されている。簡単に説明すると、まず、細胞凝集体を、細胞凝集体の大きさより細かい隙間の網状・櫛歯状の支持体で囲まれたキャビディーに投入する。細胞凝集体は物理的には支持体及びプレートにより所望の形状に形成されたキャビティー内に保持される。網状・櫛歯状の支持体には多数の開口部分がありそこから培地が細胞凝集体に接することができる。振とう培養用容器を振とうさせることにより培地がより効果的に細胞凝集体に接し、良好な培養環境となる。細胞凝集体は自らコラーゲンなどの細胞外物質を産出し、細胞凝集体同士が融合をはじめ、数日から数週間の期間で所望の形状の３次元細胞構造体が作製される。

また、３次元細胞構造体培養プロセスは、以下のように、本実施形態の培養システム１００を用いて行うこともできる。図４（ａ）〜図４（ｆ）は、子宮内膜細胞ＥＣを凝集させた細胞凝集体ＣＡから３次元細胞構造体ＣＳを作製するフローチャートである。

図４（ａ）、図４（ｂ）に示すように、下プレート２の下側（下面）に下ネット４を取り付ける。

図４（ｃ）、図５（ａ）に示すように、キャビティーＣに、子宮内膜細胞ＥＣを凝集させた細胞凝集体ＣＡを投入する。細胞凝集体ＣＡの投入は、手作業でも良いが、自動ディスペンス方式で行うことにより、大量生産が容易になる。

図４（ｄ）に示すように、下プレート２と下ネット４の上部に、上プレート３と上ネット５を取り付ける。これにより、キャビティーＣをキャップし、キャビティーＣ内に投入した子宮内膜細胞ＥＣがキャビティーＣから出ないようにする。

図４（ｄ）の状態の培養モールド１を用いて、図１（ａ）〜図１（ｃ）に示すように、下ネット４、上ネット５の隙間を通して、複数の孔２ａ、３ａへ培地Ｌを循環させることで、栄養素の供給と老廃物の除去を効率的に行うことができる。そして、細胞凝集体ＣＡ同士が融合をはじめ、図４（ｅ）、図５（ｂ）に示すように、細胞凝集体ＣＡ同士が融合し、３次元細胞構造体ＣＳが作製される。

枠部４ｂ、５ｂを取り外した後、ネット４、５を線状部材４ａ、５ａの長手方向（矢印Ｘ方向）に引き抜く。これにより、ネット４、５を引き抜く際に、ネット４、５が形成された３次元細胞構造体ＣＳに引っかかることがなく、３次元細胞構造体ＣＳの損傷を抑制できる。

図４（ｆ）に示すように、上プレート３、上ネット５を取り外した後、作製された３次元細胞構造体ＣＳを取り出す。

（共培養方法）
図６（ａ）、図６（ｂ）に示すように、受精卵ＦＥを３次元細胞構造体ＣＳとは別のキャビティーＣ内に設置する。なお、受精卵ＦＥと３次元細胞構造体ＣＳを同じキャビティーＣ内に設置し、３次元細胞構造体ＣＳと受精卵ＦＥが接触するように配置してもよい。例えば、図６（ｃ）、図６（ｄ）に示すように、３次元細胞構造体ＣＳの上に受精卵ＦＥを乗せてもよい。３次元細胞構造体ＣＳと受精卵ＦＥが接触させることで、接触の物理現象からも培養促進のシグナルを受け取り、３次元細胞構造体ＣＳと受精卵ＦＥの品質向上及び着床率の向上を図ることができる。また、子宮内膜細胞の上に受精卵を乗せた状態で共培養することにより、受精卵を子宮内膜細胞でベッドのように保護することができる。

下プレート２と下ネット４の上部に、上プレート３と上ネット５を取り付ける。これにより、キャビティーＣをキャップし、キャビティーＣ内に投入した受精卵ＦＥと３次元細胞構造体ＣＳがキャビティーＣから出ないようにする。

図１（ａ）に示すように、キャビティーＣ内に受精卵ＦＥと３次元細胞構造体ＣＳを保持した培養モールド１を、振とう培養用容器２０に固定する。振とう培養用容器２０内を培地Ｌで満たす。振とう培養用容器２０を振とうさせることで、図１（ｂ）に示すように、培地Ｌが第２底面２２側から第１底面２１側に流れ、第２底面２２から突出したキャビティーＣ内を流れる。また、図１（ｃ）に示すように、培地Ｌが第１底面２１側から側面２３に流れ、ネット４、５の隙間から、側面２３により第２底面２２から突出したキャビティーＣ内を流れる。

下ネット４、上ネット５の隙間を通して、複数の孔２ａ、３ａへ培地Ｌを循環させることで、栄養素の供給と老廃物の除去を効率的に行うことができる。また、培地Ｌの流れで受精卵に物理的刺激を与えることができる。さらに、子宮内膜細胞ＥＣからなる３次元細胞構造体ＣＳから産出された受精卵生育に有用なサイトカインが、受精卵ＦＥに作用する。これにより、子宮内膜細胞と培養していない受精卵と比較して妊娠率が高い受精卵が得られる。逆に、受精卵ＦＥから産出されたサイトカインが、子宮内膜細胞ＥＣからなる３次元細胞構造体ＣＳに作用する。これにより、受精卵と培養していない子宮内膜細胞と比較して妊娠率が高い子宮内膜細胞が得られる。

なお、本実施形態では、３次元細胞構造体ＣＳと受精卵ＦＥとの共培養について説明したが、本発明はこれに限定されるものではない。例えば、組織片と受精卵、細胞と受精卵、細胞凝集体と受精卵、組織片と原始卵胞、細胞と原始卵胞、細胞凝集体と原始卵胞、３次元細胞構造体と原始卵胞であっても良い。また、凝集して細胞凝集体を作製する途中の細胞は、サイトカインの一種であるGM-CSF（Granulocyte Macrophage colony-stimulating Factor：顆粒球単球コロニー刺激因子）をリッチに産出する。このため、凝集して細胞凝集体を作製する途中の細胞と受精卵とを共培養することで、後述する効果（受精卵の品質を向上させること及び着床率）を高めることができる。

（効果）
本実施形態の培養モールド１は、従来の培養モールドに比べて、部材が少なく、低コストである。下ネット４と上ネット５との間隔を製造する３次元細胞構造体に合わせて設定しておくことで、大量生産が可能であり、特許6256853のように、支持体の積層が不要である。また、本実施形態の培養システム１００（培養モールド１、振とう培養用容器２０）は、構造がシンプルで、簡単、安価に培養できる。

本実施形態の培養方法は、手法（工程）がシンプルで、簡単、安価に培養できる。このため、作業者のスキルが培養の成否に影響することを低減できる。従って、不妊治療の成功確率が、作業者の熟練度や作業スキルに依存するという課題の解決の一助となる。

子宮内膜細胞を凝集させた細胞凝集体と受精卵との共培養により、受精卵の品質を向上させること及び着床率を向上させることができる。

子宮内膜細胞ＥＣを凝集させた細胞凝集体ＣＡ、受精卵ＦＥは、それぞれサイトカインを放出し、相互作用により、妊娠率が高まる効果が得られる。具体的には、細胞凝集体ＣＡの放出するサイトカインにより、受精卵ＦＥのグレードがアップする。また、受精卵ＦＥの放出するサイトカインにより、細胞凝集体ＣＡが受精卵ＦＥを着床しやすい状態へ変化する。

また、子宮内膜細胞、受精卵を、動物の子宮内膜細胞、受精卵とすることで、畜産業の発展に寄与することができる。また、子宮内膜細胞、受精卵を、ヒト子宮内膜細胞、ヒト受精卵とすることにより、社会問題となっている不妊治療や少子化の問題を解決するための一助となることが期待できる。

［第２実施形態］
次に本発明に係る培養モールド、振とう培養用容器、培養システム、共培養方法、受精卵及び子宮内膜細胞の第２実施形態について図を用いて説明する。上記第１実施形態と説明の重複する部分については、同一の符号を付して説明を省略する。図７（ａ）は本実施形態における培養システムの側面図である。図７（ｂ）図７（ｃ）は振とう時の本実施形態における培養システムの側面図である。図８は本実施形態における培養システムの構成図である。

図７、図８に示すように、本実施形態の培養システム２００は、上記第１実施形態の培養システム１００の振とう培養用容器２０に変えて、振とう培養用容器１２０としたものである。振とう培養用容器１２０は、上記第１実施形態の振とう培養用容器２０の第１底面２１、第２底面２２、側面２３で、第２底面２２に凹部１２１を形成したものである。固定部２５は、キャビティーＣが凹部１２１の上部に配置されるように培養モールド１を第２底面２２へ押圧する。なお、振とう培養用容器１２０は、シャーレに限定されず、フラスコ、ボトル等の形状であってもよい。

本実施形態においても、振とう培養用容器１２０を振とうさせることで、図７（ｂ）、図７（ｃ）に示すように、培地Ｌが、凹部１２１の上方に配置されたキャビティーＣ内を流れる。これにより、上記第１実施形態と同様に、栄養素の供給と老廃物の除去を効率的に行うことができ、培地Ｌの流れで受精卵に物理的刺激を与えることができ、簡単、安価に培養できる。

［第３実施形態］
次に本発明に係る培養モールド、振とう培養用容器、培養システム、共培養方法、受精卵及び子宮内膜細胞の第３実施形態について図を用いて説明する。上記第１実施形態と説明の重複する部分については、同一の符号を付して説明を省略する。図９（ａ）は本実施形態における培養システムの側面図である。図９（ｂ）、図９（ｃ）は振とう時の本実施形態における培養システムの側面図である。図１０は本実施形態における培養システムの構成図である。

図９、図１０に示すように、第３実施形態の培養システム３００は、上記第１実施形態の培養システム１００の振とう培養用容器２０に変えて、振とう培養用容器１３０としたものである。振とう培養用容器１３０は、上記第１実施形態の振とう培養用容器２０の側面２３を無くし、１つの底面１３１のみとし、固定部２５に変えて保持部材１３３を設けたものである。保持部材１３３は、培養モールド１の一端を保持し、培養モールド１の長手方向が底面１３１に対して４５°以上９０°以下の角度となるように保持する。なお、振とう培養用容器１２０は、シャーレに限定されず、フラスコ、ボトル等の形状であってもよい。

本実施形態においても、振とう培養用容器１３０を振とうさせることで、図９（ｂ）、図９（ｃ）に示すように、培地Ｌが、キャビティーＣ内を流れる。これにより、上記第１実施形態と同様に、栄養素の供給と老廃物の除去を効率的に行うことができ、培地Ｌの流れで受精卵に物理的刺激を与えることができ、簡単、安価に培養できる。

［他の実施形態］
次に本発明に係る培養モールド、振とう培養用容器、培養システム、共培養方法、受精卵及び子宮内膜細胞の他の実施形態について図を用いて説明する。上記第１実施形態と説明の重複する部分については、同一の符号を付して説明を省略する。図１１（ａ）は本実施形態における培養容器の側面図である。図１１（ｂ）〜図１１（ｆ）は本実施形態における変形例の培養容器の側面図である。

図１１（ａ）に示すように、本実施形態の培養容器４００は、容器本体４０１、凹部４０２、支持体４０３を有している。容器本体４０１は、皿状の形状であり、培地Ｌを入れることができる。凹部４０２は、容器本体４０１の底部に設けられている。支持体４０３は、凹部４０２を覆う複数の線状部材４ａを備え、網状や櫛歯状に形成されている。線状部材４ａは、線状部材４ａの間から被培養物が漏れ出ることがなく、培地Ｌが還流可能なように配置されている。

図１１（ｂ）〜（ｆ）は、図１１（ａ）の培養容器４００の変形例である。図１１（ｂ）に示す培養容器４１０は、図１１（ａ）の培養容器４００に、ポンプ４０４、側溝４０５を設けたものである。側溝４０５はポンプ４０４と凹部４０２を連通し、ポンプ４０４から噴出される培地Ｌを被培養物へ還流させる。

図１１（ｃ）に示す培養容器４２０は、図１１（ａ）の培養容器４００に、ポンプ４０４を設けたものである。ポンプ４０４は、培地Ｌを被培養物へ直接送り込めるように配置されている。

図１１（ｄ）に示す培養容器４３０は、図１１（ａ）の培養容器４００の四角形の凹部４０２を半円形状にしたものである。図１１（ｅ）に示す培養容器４４０は、図１１（ｂ）の培養容器４００の四角形の凹部４０２を半円形状にしたものである。図１１（ｆ）に示す培養容器４５０は、図１１（ｂ）の培養容器４００の四角形の凹部４０２を半円形状にしたものである。

図１１（ａ）〜（ｆ）のいずれの培養容器においても、凹部４０２に配置された被培養物は、容器本体４０１（凹部４０２）の下側から倒置顕微鏡で簡単に観察できる。

Ｃ …キャビティー
ＣＡ …細胞凝集体
ＣＳ …３次元細胞構造体
ＥＣ …子宮内膜細胞
ＦＥ …受精卵
Ｌ …培地
１ …培養モールド
２ …下プレート（第１のプレート部材）
２ａ …孔
３ …上プレート（第２のプレート部材）
３ａ …孔
４ …下ネット（第１の支持体）
４ａ …線状部材
４ｂ …枠部
５…上ネット（第２の支持体）
５ａ …線状部材
５ｂ …枠部
２０、１２０、１３０ …振とう培養用容器
２０ａ …皿部
２０ｂ …蓋部
２１ …第１底面、２２ …第２底面、２３ …側面、２４ …側壁、２５ …固定部
１００、２００、３００…培養システム
１２１ …凹部
１３１ …底面
１３３ …保持部材
４００、４１０、４２０、４３０ …培養容器
４０１ …容器本体
４０２ …凹部
４０３ …支持体
４０４ …ポンプ

Claims

（培養モールド）
複数の孔を備え、下側に配置された第１のプレート部材と、
複数の孔を備え、前記第１のプレート部材の上側に配置された第２のプレート部材と、
前記第１のプレート部材の下部に着脱可能であり、複数の線状部材を備えた第１の支持体と、
前記第２のプレート部材の上部又は下部に着脱可能であり、複数の線状部材を備えた第２の支持体と、を有し、
前記複数の孔と前記第１の支持体は、培養する被培養物を配置する複数のキャビティーを形成し、
前記第２の支持体は、前記キャビティー内に前記被培養物を留めるように前記キャビティーを覆い、
前記複数の線状部材は、前記複数の線状部材の間から前記被培養物が漏れ出ないように配置されている、培養モールド。
前記複数の線状部材は、前記支持体に、溶解性部材で取り付けられている、請求項１に記載の培養モールド。
前記複数の線状部材は櫛歯状に配置されており、
前記支持体は前記複数の線状部材の長手方向の一端に枠部を有し、
前記支持体は前記長手方向に取り外し可能に配置されており、
前記枠部は前記支持体から取り外し可能である、請求項１に記載の培養モールド。
第１底面と、
前記第１底面２１より高い位置にある第２底面と、
前記第１底面から前記第２底面に連続する側面と、
前記第１底面及び前記第２底面の周りに立設された側壁と、
前記第２底面に設けられており、前記複数のキャビティーが前記第２底面から前記第１底面の上部に突出するように請求項１〜３のいずれか１項に記載の培養モールドを固定する固定部と、を有する振とう培養用容器。
前記第１底面、前記第２底面、前記側面は、前記第２底面に凹部を形成し、
前記固定部は、前記キャビティーが前記凹部の上部に配置されるように前記培養モールドを前記第２底面へ押圧する請求項４に記載の振とう培養用容器。
底面と、
前記底面の周りに立設された側壁と、
請求項１〜３のいずれか１項に記載の培養モールドの一端を保持し、前記培養モールドの長手方向が前記底面に対して４５°以上９０°以下の角度となるように保持する保持部材と、を有する振とう培養用容器。
凹部と、
前記凹部に配置した被培養物を覆う複数の線状部材を備えた支持体と、
を有する振とう培養用容器。
請求項１〜３のいずれか１項に記載の培養モールドと、
請求項４〜７のいずれか１項に記載の振とう培養用容器と、を有し、
前記振とう培養用容器を振とうして培養する培養システム。
以下のステップ（１）を含む、共培養方法：
（１）細胞を凝集させた細胞凝集体から作製される３次元細胞構造体と受精卵とを共培養するステップ。
以下のステップ（１）を含む、共培養方法であって、
（１）凝集して細胞凝集体を作製する途中の細胞と受精卵とを共培養するステップ。
前記細胞と前記受精卵が接触した状態で共培養される、請求項９又は１０に記載の共培養方法。
前記細胞の上に前記受精卵を乗せた状態で培養される、請求項９又は１０に記載の方法。
前記細胞は、ヒト子宮内膜細胞であり、
前記受精卵は、ヒト受精卵である、請求項９又は１０に記載の共培養方法。
請求項９〜１３のいずれか１項に記載の方法で培養した受精卵であって、子宮内膜細胞と培養していない受精卵と比較して妊娠率が高い受精卵。
請求項９〜１３のいずれか１項に記載の方法で培養した子宮内膜細胞であって、受精卵と培養していない子宮内膜細胞と比較して妊娠率が高い子宮内膜細胞。